CN108732281B - 一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法 - Google Patents

一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，采用外标法，通过调整测试条件，使流动相采用梯度洗脱，提高了测试的准确性，缩短了测试时间且准确性高于GB18932.18‑2003标准，数据可靠性高。

Description

一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法
技术领域
本发明涉及化学检测技术领域的方法，尤其涉及一种蜂蜜中羟甲基糠 醛含量的测定方法。
背景技术
蜂蜜是一种健康安全的食品，也用来作为滋补品和食品添加剂的辅料， 具有多种功效。同时，由于蜂蜜中糖分很高，尤其是总糖的含量大多在 65％以上，而其中葡萄糖、果糖占总糖含量的80～90％左右，在一定条 件下容易产生大量的羟甲基糠醛。羟甲基糠醛会对人体的一些器官产生影 响，当达到一定剂量的时候可对可对人体基因产生破坏。目前对蜂蜜中含 量的方法有比色法和GB18932.18-2003公开的液相色谱-紫外检测法，前 者是将一定浓度的蜂蜜样品进行显色，然后与比色卡进行比对，这样的方 法测定羟甲基糠醛的方法存在很大的认为误差，GB18932.18-2003公开的 液相色谱-紫外检测法虽然能用标准曲线发测出羟甲基糠醛的含量，但测 定过程中羟甲基糠醛的峰高偏低，拖尾因子偏大。
发明内容
鉴于目前蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法存在的上述不足，本发明 提供一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，能够提高测试的准确性，缩 短了测定时间且准确性高于GB18932.18-2003标准。
为达到上述目的，本发明的实施例采用如下技术方案：
一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，所述蜂蜜中羟甲基糠醛含量 的测定方法包含如下步骤：
S1：取羟甲基糠醛的标准品配置羟甲基糠醛的标准工作溶液；
S2：取定量的蜂蜜样品用水溶解，然后用甲醇和水定容得到蜂蜜样品 溶液；
S3：将S2中的蜂蜜样品溶液用滤膜过滤后得到澄清的蜂蜜样品溶液；
S4：将S3中的蜂蜜样品溶液用高效液相色谱法进行测定，用高效液相 色谱法进行测定的条件如下：
仪器：美国Agilent-1260高效液相色谱仪；
色谱柱：5μm，4.6×250mm；
流动相：甲醇和水；
流速：1mL/min；
检测波长：281-285mm；
柱温：30-40℃；
进样量：5-10μL；
所述流动相采用梯度洗脱，所述甲醇和水的体积比为10∶90-50∶50；
S5：用S4中的测定条件测试S1中的标准工作溶液，并绘制标准工作 曲线；
S6：用S4中的测定结果和S5中的标准曲线计算蜂蜜样品中的羟甲基 糠醛含量。
依照本发明的一个方面，所述梯度洗脱的洗脱时间和流动相中甲醇和 水的体积比如下：
0.00-3.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为10∶90；
3.01-7.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为30∶70；
7.01-10.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为50∶50。
优选的，所述S2中用来定容的甲醇和水的体积比为20-30∶70-80。
更优选的，所述S2中用来定容的甲醇和水的体积比为25∶75。
优选的，所述S3中的滤膜为有机微孔滤膜。
优选的，所述滤膜的孔径为0.25μm或者0.45μm。
优选的，所述检测波长为285nm。
优选的，所述进样量为10μL。
本发明实施的优点：本发明提供了一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定 方法，采用外标法测定蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，通过调整测定 条件，流动相采用梯度洗脱，提高了测定的准确性，缩短了测定时间且准 确性高于GB18932.18-2003标准，且数据可靠性高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所 需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动 的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明所述的一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法的标准 工作曲线；
图2为使用本发明所述的一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法测 定的浓度为4.0μg/mL标准工作溶液的色谱图；
图3为使用本发明所述的一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法测 定的蜂蜜样品的色谱图；
图4为按GB18932.18-2003标准的测定方法测定的浓度为4.0μg/mL 标准工作溶液的色谱图；
图5为按GB18932.18-2003标准的测定方法的测定的蜂蜜样品的色谱 图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进 行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没 有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的 范围。
实施例一
如图1、图2、图3、图4和图5所示，一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量 的测定方法，所述蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法中所用的试剂和仪器 如下：
水：GB/T6682规定的一级水；
甲醇：色谱纯；
羟甲基糠醛的标准品：纯度≧99％；
仪器：美国Agilent-1260高效液相色谱仪；
色谱柱：Agilent Eclipse plus C18，5μm，4.6×250mm；
所述蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法步骤如下：
步骤一：标准工作溶液的配置：称取0.020g羟甲基糠醛的标准品， 精确至0.001g，于100mL容量瓶中，用10mL甲醇溶解，并用水稀释至刻 度，配成0.20mg/mL的标准储备液，分别吸取50μL,100μL,500μL,1000 μL,2000μL和3000μL的标准储备液至100mL容量瓶中，并用甲醇：水 体积比为10∶90的混合溶液稀释至刻度，配置成浓度为0.10μg/mL，0.20 μg/mL，1.0μg/mL,2.0μg/mL，4.0μg/mL和6.0μg/mL的标准工作溶 液。
步骤二：在美国Agilent-1260高效液相色谱仪的试剂瓶中分别装入 甲醇和水，打开高效液相色谱仪的操作界面，设置流速为1mL/min，检测 波长设置为285nm，柱温设置为35℃，进样量设置为10μL，选择梯度洗 脱，并将梯度洗脱的洗脱时间和流动相中甲醇和水的体积比如下：
0.00-3.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为10∶90；
3.01-7.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为30∶70；
7.01-10.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为50∶50；
然后把步骤一中配置的标准工作溶液进行测量，所测得的峰高数据如 表1所述，并用表1中的数据绘制标准工作曲线，根据标准工作曲线得到 的含量计算公式为：y＝13.928x-0.1031，其中x表示被测溶液的浓度，y 表示峰高。
表1：
标准工作溶液 1 2 3 4 5 6
浓度(ug/ml) 0.10 0.20 1.0 2.0 4.0 6.0
峰高(mAU) 1.362 2.835 13.607 27.367 55.950 83.388
其中，浓度为6.0μg/mL的标准工作溶液的色谱图如图2所示，图中， 羟甲基糠醛的特征吸收峰的出峰时间为7.070min,峰高值为83.388mAU, 拖尾因子为0.98，拖尾因子的计算公式如下：
Figure RE-GDA0001802618730000041
其中，W0.05h表示5％峰高处的峰宽，d1为峰顶点至峰前沿之间的距 离。
实施例二
步骤一：称取5g蜂蜜样品，精确至0.01g，置于50mL烧杯中，加入 20mL水，用玻璃棒搅拌，使试样完全溶解，转移至100mL容量瓶中，并 用甲醇：水的体积比为25∶30的混合溶液稀释至刻度，得到溶解后的样品 溶液。
步骤二：将步骤二中的样品溶液用孔径为0.25μm的有机微孔滤膜进 行过滤。
步骤三：采用实施例一中步骤三所述的测定条件对上述样品溶液进行 测量，得到如图3所示的色谱图，图中，羟甲基糠醛的特征吸收峰的出峰 时间为7.080min,峰高值为41.376mAU,拖尾因子为0.97。
实施例三
步骤一：将实施例一步骤一中浓度为6.0μg/mL的标准工作溶液用 GB18932.18-2003标准中描述的方法进行测量，得到如图4所示的图谱， 图中，羟甲基糠醛的特征吸收峰的出峰时间为8.688min,峰高值为 20.818mAU,拖尾因子为0.59。
步骤二：将实施例二步骤一中的样品溶液用GB18932.18-2003标准中 描述的方法进行测量，得到如图5所示的图谱，图中，羟甲基糠醛的特征 吸收峰的出峰时间为8.692min,峰高值为10.434mAU,拖尾因子为0.95。
实施例三：
进行准确性实验，重复实施例二中的步骤二6次，分别得到样品溶液 1，样品溶液2，样品溶液3，样品溶液4，样品溶液5和样品溶液6，并 用实施例一步骤四所述的方法进行测量，并根据实施例一步骤四测得的标 准工作曲线计算各样品溶液中的羟甲基糠醛的含量，并根据含量计算误差 值，结果如表2所示：
表2：
样品溶液 1 2 3 4 5 6 M RSD％
m<sub>n</sub>(mg/kg) 27.83 28.70 27.69 28.50 27.89 28.20 28.16 1％
Figure RE-RE-GDA0001802618730000061
Figure RE-GDA0001802618730000062
其中，n为测试的次数，xn为根据标准工作曲线得到的被测样品溶液 的浓度，单位为微克每毫升(μm/mL)，m0为样品溶液所代表的蜂蜜样 品的质量，单位为克(g)，V表示样品溶液的定容体积，单位为毫升(mL)， mn表示样品溶液中羟甲基糠醛的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)。
实施例四：
进行重复性测试，在从多个场地的出产的蜂蜜样品中的随机的选取一 个样品，按实施例二步骤一中的配置方法配制样品溶液7，在同样的温度， 同一台仪器和同一人操作下对样品溶液一采用实施例一步骤四所述的方 法进行测量，并根据实施例一步骤四测得的标准工作曲线计算各样品溶液 中的羟甲基糠醛的浓度，并根据浓度按照实施例三中的方法计算mn和RSD％ 值，结果如表3所示：
样品溶液 1 2 3 4 5 6 M RSD％
m<sub>n</sub>(mg/kg) 20.51 18.98 19.91 19.2 19.35 19.91 19.64 3％
表3：
表3中mn，M和RSD％的计算方法同表2。
本发明实施的优点：本发明提供了一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定 方法，通过上述的方案，测得的同一样品的峰高值是按GB18932.18-2003 标准所述的测定方法的3.7倍，拖尾因子更接近1，准确性高，且测试过 程能在10分钟内完成，测试时间段，测试方法的准确性实验中和重复性 实验中相对标准偏差小，分别为1％和3％，测试方法可靠性高。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局 限于此，任何熟悉本领域技术的技术人员在本发明公开的技术范围内，可 轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发 明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (6)

1.一种蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，其特征在于，所述蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法包含如下步骤：
S1:取羟甲基糠醛的标准品配置羟甲基糠醛的标准工作溶液；
S2:取定量的蜂蜜样品用水溶解，然后用甲醇和水定容得到蜂蜜样品溶液；所述用来定容的甲醇和水的体积比为20-30:70-80；
S3:将S2中的蜂蜜样品溶液用滤膜过滤后得到澄清的蜂蜜样品溶液；
S4:将S3中的蜂蜜样品溶液用高效液相色谱法进行测定，用高效液相色谱法进行测定的条件如下：
仪器：美国Agilent-1260高效液相色谱仪；
色谱柱：5μm，4.6×250mm；
流动相：甲醇和水；
流速：1mL/min；
检测波长：281-285nm；
柱温：30-40℃；
进样量：5-10μL；
所述流动相采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱时间和流动相中甲醇和水的体积比如下：
0.00-3.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为10:90；
3.01-7.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为30:70；
7.01-10.00分钟：流动相中甲醇和水的体积比为50:50；
S5:用S4中的测定条件测试S1中的标准工作溶液，并绘制标准工作曲线；
S6:用S4中的测定结果和S5中的标准曲线计算蜂蜜样品中的羟甲基糠醛含量。
2.根据权利要求1所述的蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，其特征在于，所述S2中用来定容的甲醇和水的体积比为25:75。
3.根据权利要求1或2所述的蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，其特征在于，所述S3中的滤膜为有机微孔滤膜。
4.根据权利要求3所述的蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，其特征在于，所述滤膜的孔径为0.25μm或者0.45μm。
5.根据权利要求1所述的蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，其特征在于，所述检测波长为285nm。
6.根据权利要求1所述的蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法，其特征在于，所述进样量为10μL。
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