CN108727442A - 一种柳胺酚葡萄糖醛酸化产物的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了柳胺酚葡萄糖醛酸化产物的制备方法及其在抗乙肝上的应用，包括如下步骤：(1)化合物C6和化合物C2经偶联得到化合物C7；(2)化合物C7最后脱去乙酰基得到化合物C8(成品)；(3)柳胺酚葡萄糖醛酸化产物(C8)用于制备抗乙肝药物。本发明方法简化了操作，提高了收率，大幅度降低了成本，更适合工业化放大，具有实际应用价值。

Description

一种柳胺酚葡萄糖醛酸化产物的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种柳胺酚葡萄糖醛酸化产物(化学名：(2R，3S，4R，5S，6S)-3，4，5-三羟基-6-(4-(2-甲基苯氧基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-羧酸，CAS Registry Number：281653-99-4)的制备方法及其在抗乙肝方面的应用。
背景技术
乙型病毒性肝炎(乙肝)仍是严重威胁我国人民健康的重要传染病之一，是引发我国原发性肝癌的主要因素。我国人群HBsAg携带率近7.2％，全世界约有3.5亿人遭受HBV感染。现有研究表明抑制HBV DNA的复制可以阻止乙肝病情进展、减缓甚至逆转肝纤维化和肝硬化并降低肝癌的发生率。目前国际抗HBV治疗指南推荐的核苷(酸)类似物治疗仍存在较多不良反应和较高的耐药率和病毒变异缺陷。此外，现有药物不能完全清除乙肝病人的肝细胞核内的cccDNA(covalently closed circular DNA)。而cccDNA在患者体内持续存在是慢性HBV感染难以得到治愈的主要原因。研究认为以宿主细胞中的蛋白为靶点的药物比直接作用于病毒本身药物的耐药发生率明显降低，并且以宿主细胞中的蛋白为药物靶点可以避免核苷(酸)类似物的线粒体毒性。因此，在HBV复制周期中寻找病毒-宿主细胞相互作用位点作为新的抗病毒靶标，从而开发既能清除cccDNA又能降低耐药发生率的新的抗HBV治疗方案是目前乙肝治疗及乙肝相关性肝癌防治亟需解决的关键问题，具有重要的临床意义和社会意义。
核糖核苷酸还原酶(Ribonucleotide reductase，RR)是人体细胞DNA合成和修复的关键酶，其功能是将核糖核苷酸(Ribonucleotide triphosphates，NDPs)还原为脱氧核糖核苷酸(Deoxyribonucleotide triphosphates，dNDPs)，后者进一步被激酶磷酸化为dNTPs，为DNA合成提供原料。HBV自身无编码RR酶的基因，而成年人肝脏中大部分正常肝脏细胞处于静止状态，dNTPs浓度很低。HBV(无RR基因)通过HBx蛋白抑制肝细胞调节因子x1(RFX1)与RRM2的启动子结合或激活DNA损伤通路的Chk1-E2F1途径从而激活宿主肝细胞RR酶表达和酶活性，被异常激活的RR酶可提供足量DNA合成原料，保证HBV复制和肝癌细胞增殖对DNA原料的需求，因而RR酶是乙型肝炎及相关肝癌发生发展的关键因子蛋白，是抗乙型肝炎药物的新的靶标分子。RR酶抑制剂可切断HBV DNA复制原料供给，遏制双链松弛环状分子RcDNArcDNA(relaxed circularDNA)合成，可阻止肝细胞内HBV大量复制，有望从源头上有效抑制HBVcccDNA形成，从而减轻肝组织炎性损伤、阻止肝炎发生发展和向肝癌转变。
1.核苷(酸)类似物引起的HBV变异和耐药是全球乙肝治疗史上的难题，也是攻克乙肝的重要障碍。
2.发现RR酶是乙型肝炎及相关肝癌发生发展的关键因子蛋白，是抗乙型肝炎药物的新的靶标分子，柳胺酚是RR酶的抑制剂。
3.(2R，3S，4R，5S，6S)-3，4，5-三羟基-6-(4-(2-甲基苯氧基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-羧酸结构式：
关于柳胺酚葡萄糖醛酸化产物的制备方法，国内外已经公布如下制备方法：
2000年5月顾景凯和钟大放在《高等学校化学学报》公开了柳胺酚葡萄糖醛酸化产物的一种制备方法，它是通过LC/MS法来鉴定乙氧苯柳胺在家兔体内的主要代谢产物中，发现本化合物的合成方法。
其主要代谢途径如下：
该文献提供的方法存在如下问题：
1、所得产品是经过在家兔中的代谢产物，不能进行工业化的放大。
2、所使用的量比较少，只能用于实验室研究。
3、所得产物需要进行制备，不能进行大批量的合成。
发明内容
本发明的目的在于提供一种柳胺酚葡萄糖醛酸化产物的制备方法及其在抗乙肝方面的应用，该制备方法操作简单，产物收率高，生产成本低，适于工业化生产。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种柳胺酚葡萄糖醛酸化产物的制备方法，包括如下步骤：
(1)化合物C6和化合物C2经偶联得到化合物C7；
(2)化合物C7最后脱去乙酰基得到化合物C8(成品)。
反应式如下：
进一步，所述步骤(1)具体按照如下进行：在反应釜中加入溶剂A，依次加入化合物C6，碱，冷却到-15℃～15℃，缓慢滴加C2的溶剂A溶液，控制温度在30℃以下，保温反应1-24h，经后处理得到化合物C7。
更进一步，所述的溶剂A选自下列一种或任意几种的组合：二氯甲烷，二氯乙烷，四氢呋喃，乙腈，二氧六环，N，N二甲基甲酰胺，N，N二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷酮，二甲亚砜，优选下列之一：二氯甲烷、四氢呋喃。
更进一步，所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾，三乙胺，N，N-二异丙基乙胺，吡啶，三乙烯二胺，N-甲基吗啉，1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯，1，5-二氮杂双环壬-5-烯，优选三乙胺。
更进一步，所述化合物C6、化学物C2、碱、试剂的投料摩尔比为1∶1.0～5.0∶1.0～5.0∶2.0～20.0，优选1∶1.0～2.0∶1.0～2.0∶2.0～8.0。
更进一步，冷却至-15℃～40℃，优选-5℃～30℃。
更进一步，室温反应时间优选为0.1～24h，优选1～5h。
进一步，所述步骤(2)具体按照如下进行：将化合物C7、碱，用有机溶剂B溶解，至0～150℃充分反应，所得反应混合物经后处理得到化合物C8。
更进一步，所述的溶剂B选自下列一种或任意几种的组合：甲醇，乙醇，乙腈，四氢呋喃，二氧六环，N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲亚砜，优选甲醇，乙醇和水。
更进一步，所述的碱为氢氧化锂，碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾，N，N-二异丙基乙基胺或三乙胺，优选氢氧化锂。
更进一步，所述化合物C7、碱，溶剂B和水的投料摩尔比为1∶5.0～20.0∶1.0～30.0∶1.0～10.0，优选1∶10.0～15.0∶10.0～20.0∶5.0～8.0。
更进一步，反应温度优选0℃～150℃，更优选20℃～80℃。
更进一步，反应时间为1～48h，优选5～12h。
进一步，柳胺酚葡萄糖醛酸化产物(C8)用于制备抗乙肝药物方面的应用。
更进一步，本申请人经实验研究发现，该化合物能有效抑制RR酶的活性，并且其能作为RR酶抑制剂，可发展为肝炎的预防及治疗药物。
具体的，所述柳胺酚葡萄糖醛酸化产物(C8)用于制备防治肝炎(尤其是乙型肝炎)的药物。
本发明中，所示两个关键片段化合物C6和化合物C2是由如下图所示方法合成，用水杨酸作为起始原料，先变成水杨酰氯(化合物C2)得到片段一；另外一个片段是由对硝基苯酚(化合物C3)和乙酰溴-Alpha-D-葡萄糖酮酸甲基酯先偶联得到化合物C5，然后将硝基还原为氨基，这两个片段可以由其他已公开的专利技术或者文献方法得到。
反应方程式如下：
与现有技术相比，本发明存在如下有益效果：
a)原料便宜，成本低廉，采购非常方便；
b)每步收率都在70％以上，副产物较少，易于控制，适合工业化大生产；
c)反应所得产品会发生酯基水解的产物，乙酰基水解的产物，所得产物经过水洗，能全部去除，纯化方便，杂质易于除去；
综上，本发明方法简化了操作，提高了收率，大幅度降低了成本，更适合工业化放大，具有显著的创造性和实际应用价值。
附图说明
图1为实施例一中制备化合物C5的核磁谱图；
图2为实施例二中制备化合物C6的核磁谱图；
图3为实施例四中制备化合物C7的核磁谱图；
图4为实施例八中制备化合物C8的核磁谱图；
图5为实施例八中制备化合物C8的LC/MS谱图；
图6为实施例八中制备化合物C8的HPLC谱图；
具体实施方式
下面结合附图对本发明的实施进一步详细的描述。
实施例一
化合物C2的制备
室温下，在反应釜中加入甲苯(20L)，将水杨酸(化合物C1)(4.00kg，28.96mol，1.0eq)加入到反应釜中，加入N，N-二甲基甲酰胺(2ml)，然后缓慢滴加氯化亚砜(6.89kg，57.92mol，2.0eq)，有轻微放热现象，滴加完毕后，加热升温到50～60℃，保温反应完毕，直接浓缩，得到黄色油状物5.50kg，所得产品不用纯化，直接用于下一步。
实施例二
化合物C5的制备
室温下，将反应釜中加入乙腈(60L)，依次加入化合物C3(3.00kg，21.57mol，1.3eq)，C4(6.60kg，16.59mol，1.0eq)，氧化银(8.28kg，33.18mol，2.2eq)，室温搅拌12h，反应完毕后，直接过滤，回收氧化银，所得滤液浓缩至干，得到黄色油状物5.40kg，摩尔收率为55.0％
EI-MS[M+1]＝456.6；
1HNMR(DMSO)，δHppm：8.249-8.272(d，J＝9.2Hz，2H)，7.222-7.245(d，J＝9.2Hz，2H)，5.890-5.910(d，J＝8.0Hz，1H)，5.477-5.525(t，J＝9.6，9.6Hz，1H)，5.159-5.202(q，J＝7.6，2.0，7.6Hz，1H)，5.080-5.159(t，J＝9.6，10.0Hz，1H)，4.768-4.792(d，J＝9.6Hz，1H)，3.636(s，3H)，2.014-2.029(m，9H)。见图1。
实施例三
化合物C6的制备
室温下，在反应釜中加入无水乙醇(27L)，依次加入化合物C7(6.60kg，16.59mol，1.0eq)，锌粉(1.72kg，36.50mol，2.2eq)，饱和氯化铵溶液(3L)，室温反应12h，反应完毕后，反应液中加入氨水(5L)，过滤，浓缩得到黄色油状物3.64kg，摩尔收率72.2％。
EI-MS[M+1]＝426.4。
1HNMR(DMSO)，8Hppm：6.679-6.700(d，J＝8.4Hz，2H)，6.480-6.502(d，J＝8.8Hz，2H)，5.410-5.458(t，J＝9.6，9.6Hz，1H)，5.316-5.336(d，J＝8.0Hz，1H)，4.972-5.035(m，2H)，4.851(s，2H)，4.585-4.610(d，J＝10.0Hz，1H)，3.640(s，3H)，2.037(s，3H)，1.995(s，3H)，1.983(s，3H)。见图2。
实施例四
化合物C7的制备
室温下，反应釜中加入二氯甲烷(36L)，然后依次加入C6(3.64kg，8.56mol，1.0eq)，三乙胺(1.31kg，12.84mol，1.5eq)，将反应液冷却至0℃～5℃，缓慢滴加C2(2.02kg，12.84mol，1.5eq)的二氯甲烷溶液，保温反应2h，反应完毕后，加入冷水淬灭反应，水层萃取两次，浓缩，用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得黄色固体3.50kg，摩尔收率75.1％。
EI-MS[M+1]＝546.6；
1HNMR(DMSO)，δHppm：11.895(s，1H)，10.378(s，1H)，7.958-7.977(d，J＝7.6Hz，1H)，6.642-6.664(d，J＝8.8Hz，2H)，7.429-7.468(t，J＝7.2，8.4Hz，1H)，6.953-7.041(m，4H)，5.634-5.654(d，J＝8.0Hz，1H)，5.467-5.515(t，J＝9.6，9.6Hz，1H)，5.050-5.128(m，2H)，4.704-4.729(d，J＝10.0Hz，1H)，4.012-4.065(dd，J＝7.2，6.8Hz，1H)，3.656(s，3H)，2.052(s，3H)，2.026(s，3H)，2.013(s，3H)。见图3。
实施例五
化合物C7的制备
室温下，反应釜中加入四氢呋喃(1L)，然后依次加入C6(100g，0.24mol，1.0eq)，三乙胺(35.6g，0.35mol，1.5eq)，将反应液冷却至0℃～5℃，缓慢滴加C2(54.80g，0.35mol，1.5eq)的四氢呋喃溶液，保温反应5h，反应完毕后，加入冷水淬灭反应，直接浓缩，二氯甲烷(100ml*2)萃取两次，水洗两次，干燥浓缩，用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得黄色固体94.10g，摩尔收率73.4％。
实施例六
化合物C7的制备
室温下，反应釜中加入二氯甲烷(1L)，然后依次加入C6(100g，0.24mol，1.0eq)，三乙胺(47.47g，0.47mol，2.0eq)，将反应液冷却至0℃～5℃，缓慢滴加C2(73.59g，0.47mol，2.0eq)的四氢呋喃溶液，保温反应1h，反应完毕后，加入冷水淬灭反应，水层萃取两次，浓缩，用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得黄色固体91.43g，摩尔收率71.3％。
实施例七
化合物C7的制备
室温下，反应釜中加入二氯甲烷(1L)，然后依次加入C6(100g，0.24mol，1.0eq)，三乙胺(47.47g，0.47mol，2.0eq)，将反应液升温至30℃，缓慢滴加C2(73.59g，0.47mol，2.0eq)的四氢呋喃溶液，保温反应1h，反应完毕后，加入冷水淬灭反应，水层萃取两次，浓缩，用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得黄色固体92.97g，摩尔收率72.5％。
实验室八
室温下，反应釜中加入二氯甲烷(500mL)和四氢呋喃(500mL)，然后依次加入C6(100g，0.24mol，1.0eq)，三乙胺(47.47g，0.47mol，2.0eq)，将反应液升温至30℃，缓慢滴加C2(73.59g，0.47mol，2.0eq)的四氢呋喃溶液，保温反应1h，反应完毕后，加入冷水淬灭反应，水层萃取两次，浓缩，用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得黄色固体90.12g，摩尔收率70.3％。
实施例九
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入甲醇(35L)，依次加入C7(3.50kg，6.42mol，1.0eq)，水(10L)，氢氧化锂(1.34kg，32.08mol，5.0eq)，室温反应5h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品2.10kg，摩尔收率80.8％。
1HNMR(DMSO)，δHppm：11.861(s，1H)，7.894-7.912(d，J＝7.2Hz，1H)，7.587-7.609(d，J＝8.8Hz，2H)，7.250-7.287(t，J＝7.2，8.4Hz，1H)，6.997-7.019(d，J＝8.8Hz，2H)，6.849-6.870(d，J＝8.4Hz，1H)，6.682-6.720(t，J＝7.6，7.6Hz，1H)，4.828-4.847(d，J＝7.6Hz，1H)，3.477-3.502(d，J＝10.0Hz，1H)，3.163-3.194(m，4H)。见图4。
EI-MS[M+1]＝406.5，见图5。
化合物C8的HPLC，见图6。
实施例十
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入乙醇(1L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，氢氧化锂(22.02g，0.92mol，5.0eq)，室温反应5h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品58.48g，摩尔收率78.7％。
实施例十一
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入乙醇(1L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，氢氧化锂(22.02g，0.92mol，5.0eq)，室温反应1h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品53.21g，摩尔收率71.6％。
实施例十二
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入甲醇(1L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，氢氧化锂(22.02g，0.92mol，5.0eq)，回流反应5h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品57.21g，摩尔收率77.0％。
实施例十三
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入N，N二甲基甲酰胺(1L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，氢氧化锂(22.02g，0.92mol，5.0eq)，室温反应5h，反应完毕后，加水。乙酸乙酯萃取，有机相水洗两次，浓缩，用乙醇打浆，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品53.20g，摩尔收率71.6％。
实施例十四
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入乙醇(1L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，氢氧化钠(36.80g，0.92mol，5.0eq)，室温反应5h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品56.24g，摩尔收率75.7％。
实施例十五
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入乙醇(1L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，碳酸钠(97.52g，0.92mol，5.0eq)，室温反应5h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品55.67g，摩尔收率74.9％。
实施例十六
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入乙醇(1L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，三乙胺(72.72g，0.72mol，4.0eq)，室温反应5h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品52.16g，摩尔收率70.2％。
实施例十七
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入二氧六环(1L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，氢氧化锂(90.72g，2.16mol，12.0eq)，室温反应12h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品57.56g，摩尔收率77.5％。
实施例十八
化合物C8的制备
室温下，在反应釜中加入乙腈(2L)，依次加入C7(100g，0.18mol，1.0eq)，水(800ml)，氢氧化钾(51.52g，0.92mol，5.0eq)，80℃反应7h，反应完毕后，直接浓缩，用乙醇打浆，萃取产品，再用石油醚和乙酸乙酯重结晶，获得产品56.45g，摩尔收率76.0％。
实施例十九
(2R，3S，4R，5S，6S)-3，4，5-三羟基-6-(4-(2-甲基苯氧基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-羧酸体外抗HBV活性实验。
1.实验材料
(1)细胞株：HepG2.2.15细胞(稳定转染HBV基因，可以稳定进行HBV基因组复制和表达)(本实验室保藏)。
(2)主要试剂：柳胺酚葡萄糖醛酸化代谢产物(LAF14，杭州和素化学技术有限公司)柳胺酚(Osalmid，北京百灵威科技有限公司)，拉米夫定(3-TC，北京百灵威科技有限公司)，乙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒(湖南圣湘生物科技有限公司)
(3)主要仪器：二氧化碳培养箱(美国Thermo Forma公司)，实时荧光定量PCR仪(美国Bio-rad公司CFX96)
2.实验方法：
(1)细胞培养：
细胞培养于DMEM高糖培养基(添加10％胎牛血清、1％青链霉素、400μg/ml的G418，2mmol/L谷氨酰胺)，置于细胞培养箱中在37℃、5％CO2环境下培养。待细胞生长到70％～80％时，用含有EDTA的胰酶消化传代。
(2)测定药物对HepG2.2.15细胞培养上清中HBVDNA的抑制作用：
将柳胺酚葡萄糖醛酸化代谢产物用去除G418的DMEM培养基配制成HepG2.2.15细胞以5*104个/mL密度铺24孔板，每孔加500uL细胞悬液。置CO2孵箱37℃培养24h后，细胞贴壁且生长良好，吸除培养液，加入含药培养基500μL/孔，每个浓度3个复孔。于培养第3、6、9天收集培养基上清检测HBVDNA含量。取5uL细胞培养上清加入5uL样本释放剂，充分混匀后室温孵育10min后加入38uL反应液、2uL酶混合液、0.2uL内标，按以下条件进行扩增：50℃2min、94℃ 5min预变性后94℃ 15s、57℃ 30s并采集信号重复40个循环。通过于标准品Ct值的比值仪器自动计算HBVDNA定量结果。
3.统计学分析：
实验数据用SPSS 13.0软件处理，结果以表示，多个样本均数的比较采用单因素方差(One-way ANOVA)分析，p＜0.05为统计学差异显著。
4.实验结果：
与空白组对照组比较，柳胺酚葡萄糖醛酸化代谢产物在10uM剂量在加药后第6、9天对HBV拷贝数有明显抑制作用(P＜0.01)，且随作用时间的延长而增强。其抑制作用较其原型柳胺酚更高，低于拉米夫定。
表1：各药物对HepG2.2.15细胞培养上清HBVDNA的影响(n＝3，)
与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***PP＜0.001
图1：
以上所述仅为本发明的具体实施例，并非对本案设计的限制，凡依本案的设计关键所做的等同变化，均落入本案的保护范围。

Claims (9)

1.一种柳胺酚葡萄糖醛酸化产物的制备方法，包括如下步骤：
(1)化合物C6和化合物C2经偶联得到化合物C7；
(2)化合物C7最后脱去乙酰基得到化合物C8(成品)。
反应式如下：
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
所述步骤(1)为在反应釜中加入溶剂A，依次加入化合物C6，碱，冷却到-15℃～30℃，缓慢滴加C2的溶剂A溶液，控制温度在30℃以下，保温反应1～24h，得到化合物C7；
所述步骤(2)为将化合物C7、碱，用溶剂B和水溶解，至0～150℃充分反应，所得反应混合物经后处理得到化合物C8。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中，所述的溶剂A选自下列一种或任意几种的组合：二氯甲烷，二氯乙烷，四氢呋喃，乙腈，二氧六环，N，N二甲基甲酰胺，N，N二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷酮，二甲亚砜；所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾，三乙胺，N，N-二异丙基乙胺，吡啶，三乙烯二胺，N-甲基吗啉，1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯或1，5-二氮杂双环壬-5-烯中的一种；
步骤(2)中，所述的溶剂B选自下列一种或任意几种的组合：甲醇，乙醇，乙腈，四氢呋喃，二氧六环，N，N-二甲基甲酰胺、N，N二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲亚砜；所述的碱为氢氧化锂，碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾，N，N-二异丙基乙基胺或三乙胺中的一种。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的溶剂A为二氯甲烷或四氢呋喃；所述的碱为三乙胺。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的溶剂B为甲醇，乙醇中的一种；所述的碱为氢氧化锂。
6.如权利要求2～5之一所述的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中，所述化合物C6、化合物C2、碱、溶剂A的投料摩尔比为1∶1.0～5.0∶1.0～5.0∶2.0～20.0。
步骤(2)中，所述化合物C7、碱，溶剂B和水的投料摩尔比为1∶3.0～20.0∶1.0～30.0∶1.0～10.0。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中，所述化合物C6、化学物C2、碱、溶剂A的投料摩尔比为1∶1.0～2.0∶1.0～2.0∶2.0～8.0。
步骤(2)中，所述化合物C7、碱，溶剂B和水的投料摩尔比为1∶4.0～15.0∶10.0～20.0∶1.0～5.0。
8.如权利要求2～5之一所述的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中，保温反应时间为1～5h。
步骤(2)中，反应温度为20℃～80℃，反应时间为5～12h。
9.柳胺酚葡萄糖醛酸化产物(C8)在抑制HBVDNA复制方面的应用。
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