CN108721394A - 一种用于骨质疏松症的中药复方制剂及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医学技术领域,公开了一种用于骨质疏松症的中药复方制剂及制备方法,用于骨质疏松症的中药复方制剂按重量份数由骨碎补、威灵仙、当归、川芎,赤芍、延胡索、狗脊、杜仲、及甘草组成;同时公开一种制备方法。本发明采用现代细胞生物学、分子生物学的技术和方法,从分子、细胞、组织以及动物整体水平等多方面证实腰痹止痛汤调控BMP‑2/Smad通路抑制老年骨质疏松症;本发明的顺利完成将为老年骨质疏松症的防治提供新策略。
Description
技术领域
本发明属于医学技术领域,主要涉及一种用于骨质疏松症的中药复方制剂及制备方法。
背景技术
目前,业内常用的现有技术是这样的:
骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是多种原因引起的一种以骨组织含量减少,骨的微观结构退化为特征,致使骨的脆性增加、强度降低而导致易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。特别是老年糖尿病引起的骨质疏松和绝经后导致的骨质疏松成为该病最大的受害者。目前对骨质疏松的发病机理涉及多个水平、多个环节,包括成骨细胞分化、骨的微观结构退化、骨量减少等,现有的治疗方法均不能最大程度地逆转老年骨质疏松症。成骨细胞的增殖、细胞外基质合成,成熟及矿化最终成为骨细胞。由此可见,成骨细胞的增殖和分化是骨形成和维持骨量的重要环节。深入研究老年骨质疏松的调控机制,阐释成骨细胞的增值分化的分子基础,对于老年骨质疏松的临床治疗具有重大意义。
中药(Traditional Chinese Medicine,TCM)的使用在我国已经有几千年的历史,它取材于大自然,具有多靶点、全身调理、毒副作用小、物美价廉等优点,特别是近年来中药在骨质疏松症的治疗上取得了巨大的成功,受到了国内外学者的广泛关注。随着中药复发在临床使用日益增加,越来越多的学者对其骨质疏松的保护作用及机制展开了分析。
以腰痹止痛汤作为治疗骨质疏松症的新方法作用机制还不明确:腰痹止痛汤是否有促进调节雌激素分泌的功效?是否有抑制破骨细胞增殖,诱导其凋亡的功效?是否有促进成骨细胞增殖、分化及改善骨代谢的功效?是单独起作用还是兼而有之?其发挥作用的关键靶点和潜在的调节网络仍有待进一步阐明。
骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMPs)是一种多功能的转化生长因子β(TGFβ)超家族的生长因子,具有广泛的生物学活性。因此BMPs常常添加于促进骨修复和愈合的药物,通过增加BMP信号来增强骨再生。BMP-2信号通路能调控成骨细胞生命周期各个方面,这其中包括骨髓干细胞向成骨细胞分化、成骨增殖、成骨细胞矿化的活力以及其与破骨细胞的偶联。而敲除BMP2基因后的小鼠,在成骨细胞的功能以及骨骼发育方面都存在骨质减少、成骨细胞数量减少及分化和矿化明显减低的的缺陷。当BMP-2与细胞表面BMPR-II和BMPR-I复合物连接,BMPR-II就被激活,激活的BMPR-II可使BMPR-I的GS区域磷酸化,活化的BMPR-I作用于下游的Smads。BMP信号转导通路可通过经典BMP-Samd1/5/Smad8信号通路或非经典BMP-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路激活Osx转录,从而促进成骨细胞分化。
Samds蛋白家族是近年发现的新的细胞内信号传导蛋白,直接参与骨形态发生蛋白等多个成员的信号转导。Smads蛋白根据结构和功能的不同可以分为3个亚型,分别是共同介导的Smads蛋白(co-Smad)、受体调节的Smads蛋白(R-Smad)和抑制性Smads蛋白(anti-Smad)。迄今为止,在哺乳动物已经分离鉴定的Smad蛋白有9种,以Smad1-Smad9表示。其中与BMP-2信号转导有关的是分别是smad1、5、4、6。
骨质疏松可抑制BMP通路的激活,BMP通路的持续抑制可破坏内环境的稳态,促进疾病的发生、发展,进一步加重疾病对机体的危害。在老龄大鼠骨质疏松模型中,利用BMP激动剂激活BMP-2/Smad通路活性后,可显著地减轻骨质疏松及破骨细胞增殖,因此认为BMP-2/Smad通路在老年骨质疏松模型中起关键作用。腰痹止痛汤干预后BMP-2表达进而促进到成骨细胞的分化和骨细胞基质合成与分泌的效果亦明显增加,虽然腰痹止痛汤可调控BMP通路的激活,但其激活BMP-2/Smad通路发挥促进成骨分化作用的机理目前尚无相关研究。
综上所述,现有技术存在的问题是:
虽然腰痹止痛汤可调控BMP通路的激活,但其激活BMP-2/Smad通路发挥促进成骨分化作用的机理目前尚无相关研究。
解决上述技术问题的难度和意义:
腰痹止痛汤能明显改善老年性OP临床症状,促进成骨细胞分化,其机制是否与激活BMP-2/Smad信号通路有关,我们计划开展更为深入的进一步研究,目前正在开展相关研究。通过研究可以确切地知道腰痹止痛汤调控成骨细胞分化、凋亡的作用机制。为全面地揭示腰痹止痛汤治疗老年性骨质疏松的作用机制,为老年性骨质疏松的临床防治提供实验依据和理论支持。
发明内容
针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种用于骨质疏松症的中药复方制剂及制备方法。
本发明是这样实现的,一种用于骨质疏松症的中药复方制剂,所述用于骨质疏松症的中药复方制剂按重量份数由骨碎补400-600份、威灵仙300-500份、当归400-600份、川芎300-500份、赤芍400-600份、延胡索300-500份、狗脊280-380份、杜仲280-380份和甘草100-180份组成。
进一步,所述用于骨质疏松症的中药复方制剂按照重量份数由骨碎补420份、威灵仙333份、当归420份、川芎420份、赤芍420份、延胡索333份、狗脊300份、杜仲300份和甘草150份组成。
本发明的另一目的在于提供一种所述用于骨质疏松症的中药复方制剂的制备方法,所述用于骨质疏松症的中药复方制剂的制备方法包括:
按质量百分比称取药材,取部分赤芍粉碎成细粉;将剩余的赤芍及九味药材,至预先加热至沸腾的12倍量沸水中,水煎煮2次,合并煎液,滤过,减压浓缩至相对密度为1.1~1.2(50℃)的清膏;与上述细粉混匀,干燥成干膏,粉碎;
以得到的制品为药物活性成分,与药物可接受的载体混合后制得制剂,可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、咀嚼片、丸剂。
本发明的另一目的在于提供一种由所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的片剂。
本发明的另一目的在于提供一种由所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的胶囊剂。
本发明的另一目的在于提供一种由所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的颗粒剂。
本发明的另一目的在于提供一种由所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的咀嚼片。
本发明的另一目的在于提供一种由所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的丸剂。
综上所述,本发明的优点及积极效果为:
本发明引用siRNA技术沉默细胞系中BMP-2和Smad-1基因的表达,并利用BMP-2的抑制剂建立不同实验分组,采用组织化学染色、免疫荧光染色、westernblot、RT-PCR、流式细胞仪、TUNEL法测定等手段从动物在体实验与细胞离体实验两方面探讨骨质疏松中腰痹止痛汤对BMP-2/Smad通路的激活,促进成骨分化的具体机制。是一个涵盖分子、细胞、组织以及动物整体水平等多方面研究的理想的实验设计。本发明中药制剂具有补肾壮骨,活血行气。适用于骨质疏松引起的腰背部疼痛及全身疼痛。现代中药研究证实,腰痹止痛汤具有降低骨转换率、抑制骨代谢吸收、有促进骨组织形成、从而提高骨质量的作用,能有效抑制破骨细胞的增殖分化,从而达到治疗和预防骨质疏松的目的。
附图说明
图1是本发明实施例提供的骨质疏松症的动物模型构建方法流程图;
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
本发明实施例提供的用于骨质疏松症的中药复方制剂按重量份数由骨碎补400-600份、威灵仙300-500份、当归400-600份、川芎300-500份、赤芍400-600份、延胡索300-500份、狗脊280-380份、杜仲280-380份和甘草100-180份组成。
本发明实施例提供的用于骨质疏松症的中药复方制剂按照重量份数由骨碎补420份、威灵仙333份、当归420份、川芎420份、赤芍420份、延胡索333份、狗脊300份、杜仲300份和甘草150份组成。
本发明实施例提供的骨质疏松症的中药复方制剂的制备方法,所述骨质疏松症的中药复方制剂的制备方法包括:
步骤一,按质量百分比称取药材,取部分赤芍粉碎成细粉;将剩余的赤芍及九味药材,至预先加热至沸腾的12倍量沸水中,水煎煮2次,合并煎液,滤过,减压浓缩至相对密度为1.1~1.2(50℃)的清膏;与上述细粉混匀,干燥成干膏,粉碎;
步骤二,以得到的制品为药物活性成分,与药物可接受的载体混合后制得制剂,可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、咀嚼片、丸剂。
如图1所示,本发明实施例提供的骨质疏松症的动物模型构建方法包括以下步骤:
S101:选用SPF级SD雌性大鼠10周龄,分为正常组、摘除双侧卵巢模型组、假手术组;
S102:中药复方制剂连续灌胃10天,最后一次于灌药2h后,颈动脉放血,无菌分离血清,经56℃,30min灭活处理后,0.45微米微孔滤膜过滤除菌,-20℃保存备用;
S103:应用westernblot、RT-PCR、免疫荧光等技术观察相应指标的变化;
S104:在BMP-2和Smad-1mRNA上寻找符合特征的靶序列,合成两条DNA寡核苷酸链,退火后与pSilencer2.1-U6连接,连接产物转化,挑取阳性克隆,测序鉴定,将与大鼠的任何基因序列均无同源关系的DNA序列按上述方法构建重组质粒作为阴性对照,将构建的质粒转染至系MC3T3-E1细胞。
大鼠骨质疏松模型建立后于给药12周后取组织及细胞用于以下研究:PCR的方法检测各组大鼠下丘脑、肾、股骨β-catenin、Runx-2、Oc、BMP-2和Smad-1的表达mRNA表达;采用Westernblot方法检测各组大鼠下丘脑、肾、股骨胞浆及胞核中β-catenin、Runx-2、Oc、BMP-2和Smad-1的表达蛋白表达;
摘除双侧卵巢模型组和假手术组予10%水合氯醛按0.4ml/100g体重,腿部肌肉注射麻醉,麻醉10分钟后将大鼠俯卧位固定在自制的手术台,从腰部脊柱两侧纵行切开皮肤、肌肉,可见一乳白色脂肪团,用小镊子将其拉到切口外,剥离脂肪团后见深粉色卵巢组织,用手术线将其周围组织结扎,完全切除,切除双侧卵巢组织后,逐层缝合,缝合创口;其中,假手术组只予切口切开,逐层缝合,未切除卵巢组织,术后采用青霉素(80万单位:4ml生理盐水)0.4ml/250g体重肌肉注射,连续注射3天预防感染。
所述中药复方制剂为腰痹止痛汤主要成分为由以下成分构成:骨碎补、威灵仙、当归、川芎,赤芍、延胡索、狗脊、杜仲及甘草。以骨碎补、狗脊补肾强筋壮骨,当归、川芎补血活血,赤芍祛瘀止痛,延胡索活血行气祛瘀止痛。诸药合用,为标本兼治之方。诸药合用,共奏“补肾壮骨、活血祛瘀”之功效。发现:腰痹止痛汤对老年性OP具有良好的治疗作用,并可在体外促进成骨细胞的分化和骨细胞基质合成与分泌,拮抗成骨细胞凋亡;进一步实验发现,腰痹止痛汤可上调成骨细胞中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及其信号转导蛋白Smad表达(见工作基础)。这些实验结果提示,腰痹止痛汤能明显改善老年性OP临床症状,促进成骨细胞分化,其部分机制可能与激活BMP-2/Smad信号通路有关。
不同组动物模型中中药复方药剂量分别为:8mg/kg、5mg/kg和3mg/kg。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种用于骨质疏松症的中药复方制剂,其特征在于,所述用于骨质疏松症的中药复方制剂按重量份数由骨碎补400-600份、威灵仙300-500份、当归400-600份、川芎300-500份、赤芍400-600份、延胡索300-500份、狗脊280-380份、杜仲280-380份和甘草100-180份组成。
2.如权利要求1所述的用于骨质疏松症的中药复方制剂,其特征在于,所述用于骨质疏松症的中药复方制剂按照重量份数由骨碎补420份、威灵仙333份、当归420份、川芎420份、赤芍420份、延胡索333份、狗脊300份、杜仲300份和甘草150份组成。
3.一种如权利要求1所述用于骨质疏松症的中药复方制剂的制备方法,其特征在于,所述用于骨质疏松症的中药复方制剂的制备方法包括:
按质量百分比称取药材,取部分赤芍粉碎成细粉;将剩余的赤芍及九味药材,至预先加热至沸腾的12倍量沸水中,水煎煮2次,合并煎液,滤过,减压浓缩至相对密度为1.1~1.2(50℃)的清膏;与上述细粉混匀,干燥成干膏,粉碎;
以得到的制品为药物活性成分,与药物可接受的载体混合后制得制剂,可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、咀嚼片、丸剂。
4.一种由权利要求1所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的片剂。
5.一种由权利要求1所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的胶囊剂。
6.一种由权利要求1所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的颗粒剂。
7.一种由权利要求1所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的咀嚼片。
8.一种由权利要求1所述用于骨质疏松症的中药复方制剂制备的丸剂。
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CN112656871A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-04-16 | 行艳丽 | 一种治疗骨质疏松的药物及制备方法 |
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181102 |
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