CN108721254A - 一种紫杉醇-n-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种紫杉醇‑N‑琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片及其制备方法，该方法将壳聚糖脱色、脱蛋白，然后经纯化、筛选出脱乙酰程度高的脱乙酰壳聚糖。再将其反复碱化冻融，分子溶胀后，与2‑氯乙醇发生单分子亲核取代反应。将得到的羟乙基壳聚糖与丁二酸酐发生开环取代反应，反应液经透析、纯化后以DMAP/EDC为催化体系，在水相中与疏水性药物紫杉醇进行酯化反应，合成终产物紫杉醇‑N‑琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物聚合物，最后经交联反应后在聚四氟乙烯模具中干燥成膜。本发明的膜片能显著提高疏水性药物紫杉醇的溶解性，保持药效稳定性，并能在体外模拟生理环境中少量、持续、稳定释放药物紫杉醇。

Description

一种紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜 片及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片及其制备方法，特别涉及带有羧基的N-琥珀酰羟乙基壳聚糖与带有羟基的紫杉醇酯化形成高分子药物聚合物膜片。
背景技术
良性胆管瘢痕的处理一直是胆道外科领域的一大难题。尤其是近年来随着胆道外科手术的普及和腔镜技术的推广，该问题也变得更加突出而严峻。胆道是一个密闭、连续的管道系统，在结石、炎症、外伤、医源性损伤和寄生虫等情况下，可发生狭窄，胆管狭窄又加重上述病变。胆管长期梗阻常反复发生，最终导致胆汁淤积性肝硬化，甚至威胁患者的生命。如何预防和治疗胆管瘢痕狭窄已成了当今外科界所面临的棘手问题。良性胆管瘢痕形成的主要原因是瘢痕增生。瘢痕是人类创伤愈合的自然结局，任何创伤的愈合均伴有不同程度的瘢痕形成。但是瘢痕过度增生肥大或收缩异常即是一种病理现象，常可造成机体畸形和功能障碍。以往国内外对瘢痕的研究多集中在皮肤瘢痕和整形美容领域，而对胆道瘢痕的形成机制及防治措施的研究甚少。良性胆管瘢痕的确切形成机制至今仍未完全阐明。
药物缓释技术是将药物与相应的载体结合，在局部给药环境中缓慢释放，在靶点病灶的区域药物浓度达到最大，而总给药量限制到最小，达到局部治疗作用。现已有多种药物缓释系统应用于临床。间质化疗是指将抗癌药物制备成缓释药物系统，植入肿瘤组织、瘤周组织或肿瘤切除后的瘤床，在植入部位持久保持局部高药物浓度，降低系统毒副反应，实现靶点给药的目的。
瘢痕是机体修复过程中组织的有限增殖，恶性肿瘤是机体组织的无限增殖，化疗药物正是抑制机体组织细胞的过度增殖，故而考虑可用化疗药物来防治瘢痕组织的形成。在干预药物的选择中本工作使用常用化疗药紫杉醇。
紫杉醇是1992年美国FDA正式批准用于临床的新型抗肿瘤药物，目前用于多种肿瘤的化疗。紫杉醇是细胞周期特异性药物，其作用机制独特且十分复杂，现在普遍认为有以下三种机制：调控微管动力学稳定机制、诱导细胞凋亡机制及免疫调控机制。目前，有报道称研究人员通过不同的离体研究及动物实验证实紫杉醇可以有效抑制血管新生内膜形成。临床研究表明紫杉醇洗脱支架可成功降低血管管腔内再狭窄的发生。将负载紫杉醇的金属支架置入猪胆管中并进行为期1个月的观察，证明此方法安全、有效，并且可进一步应用于人胆道恶性肿瘤的治疗。实验证明，局部涂布紫杉醇可以抑制腺上皮增生，并避免全身使用的副作用，为胆管狭窄的防治提供了又一种有效措施。但是紫杉醇中远期疗效及剂量依赖性效应、毒性作用及对胆道狭窄的作用机制有待于进一步研究。
目前研究发现：壳聚糖及其衍生物具有良好的生物相容性，生物可降解性，无毒性，其代谢产物对人体无害，能被机体吸收，且具有止血、抑菌、促进组织修复、抑制结缔组织增生和减少瘢痕粘连的作用。因其良好的成膜性、极强的可塑性及来源广泛、价格便宜、工艺简单等特点，现已成为控释给药领域研究的重点。
胆管位置深在，常用治疗皮肤瘢痕的方法都很难用于胆管瘢痕，局部给药和重复给药困难，药物不能长时间停留在胆管损伤修复部位，而经T管给药或是应用药物支架，药物可被胆汁冲刷和稀释难以发挥作用，部分抑制瘢痕形成的药物可能会影响胆管愈合。
同时，现有的方法制备的紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖产率低、纯度不够，且效果稍显不足，因此如何克服现有技术的不足是目前生物医学技术领域亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种局部药物缓释膜片（药物输送系统/高分子前药）：即疏水性药物（PTX）与医用高分子载体（SHEC），形成紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖（SHEC-PTX)高分子前药及其膜片制备方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1），壳聚糖原料的纯化：
将壳聚糖加入到浓度为40g/L氢氧化钠水溶液中，于70℃下搅拌以脱色、脱蛋白，之后固液分离，取固体，得到纯化后的壳聚糖；
其中，壳聚糖的加入量与氢氧化钠水溶液的加入量比为20g：100ml；
步骤（2），筛选脱乙酰化程度高的壳聚糖：
将步骤（1）得到的纯化后的壳聚糖置于质量浓度为1%稀盐酸中搅拌至溶解，过滤，取滤液，向滤液中缓慢加入1mol/L氢氧化钠溶液至pH值为7.6-7.9，过滤，取滤渣，水洗至中性，得到乙酰化程度高的壳聚糖；
壳聚糖的质量与质量浓度为1%稀盐酸的体积比为15g：250ml；
步骤（3），碱化冻融脱乙酰壳聚糖：
将步骤（2）得到的脱乙酰化程度高的壳聚糖加入到质量浓度为50%的氢氧化钠溶液进行溶胀，溶胀得到的混合物于-20℃冷冻过夜，次日取出，室温解冻后，再次置于-20℃冷冻过夜，再次室温解冻后过滤，取滤渣，干燥，得到碱化冻融后的壳聚糖粉末；
壳聚糖的质量与50%的氢氧化钠溶液比为10g：50ml；
步骤（4），羟乙基化脱乙酰壳聚糖的制备：
将步骤（3）得到的碱化冻融后的壳聚糖粉末加入到异丙醇中，搅拌24h后，在搅拌条件下向其中滴加2-氯乙醇，滴加完毕后于65℃下搅拌48小时，过滤，取滤液，于50℃下旋蒸除去2-氯乙醇，之后将剩余的液体装入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，之后将透析过的液体于50℃下蒸发水分至饱和，冷却后，向饱和溶液中加入体积是饱和溶液体积5倍的无水乙醇，过滤，滤渣用无水乙醇冲洗，干燥，得到羟乙基化脱乙酰壳聚糖；
碱化冻融后的壳聚糖粉末的质量、异丙醇的体积与2-氯乙醇的体积比为10g：100ml：100ml；
步骤（5），N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备：
将步骤（4）得到的羟乙基化脱乙酰壳聚糖加入蒸馏水中，搅拌溶解，过夜，得到浓度为1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液，之后向其中加入浓度为1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液，于40℃恒温加热反应24小时后，将反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，过滤，取滤液，于50℃下烘干，得到N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖；
1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液与1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液的体积比为5:2；
步骤（6），紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备及纯化：
将步骤（5）得到的N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖加入水中，搅拌溶解，过夜，之后向其中加入紫杉醇，搅拌至混匀后，再向其中加入DMAP和EDC，于室温下搅拌反应48小时，反应结束后，向反应液中加入交联剂BDDGE，搅拌3小时后，倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，向所得到的透析液中滴加丙三醇，搅拌30分钟，于50℃烘箱内烘干成膜，得到紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖，即紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片；
每5mL透析液中滴加1滴丙三醇；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖、水、紫杉醇、DMAP和EDC的加入量比为：3.2g：50ml：48mg：0.7mg：10.8mg；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖与交联剂BDDGE的摩尔比为20-80：1。
进一步，优选的是，步骤（1）所述的搅拌时间为2h。
进一步，优选的是，步骤（2）所述的搅拌时间为2h。
进一步，优选的是，步骤（3）所述的溶胀时间为1h。
进一步，优选的是，步骤（4）和步骤（5）所述的透析时间均为3天；步骤（6）所述的透析时间为2天；透析时，每天更换蒸馏水1次。
本发明方法将壳聚糖脱色、脱蛋白，然后经纯化、筛选出脱乙酰程度高的脱乙酰壳聚糖。再将其反复碱化冻融，分子充分溶胀后，与2-氯乙醇在异丙醇为溶剂的碱性条件下发生单分子亲核取代反应，在壳聚糖分子链上引入亲水性基团羟乙基-CH2-CH2-OH，使之化学改性并能溶于水。再将羟乙基壳聚糖在DMSO为溶剂的条件下与丁二酸酐发生开环取代反应，形成酰胺键-CO-NH-与羟乙基壳聚糖连接的活性羧基-COOH。透析、纯化后以DMAP/EDC为催化体系，在水相中与疏水性药物紫杉醇2号位羟基发生酯化反应，酯键共价结合，合成终产物紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物聚合物，最后经BDDGE交联反应后在聚四氟乙烯模具中干燥成膜。本发明将紫杉醇与医用高分子材料壳聚糖聚合成链状高分子药物化合物，并制成膜片，通过改变试剂用量、延长反应时间等方法，提高了粗产物的纯度，用共沉淀法，高产率地得到了分析纯的中间产物和目标产物，简化了实验步骤，缩短了合成周期，合成效率高。本发明的膜片能显著提高疏水性药物紫杉醇的溶解性，保持药效稳定性，并能在体外模拟生理环境中少量、持续、稳定释放药物紫杉醇。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
1、本发明制得的高分子载体（N-琥珀酰羟乙基壳聚糖）可溶于水，具有良好的理化性质及生物学性质。组织相容性好、可生物降解、无毒、代谢产物对人体无害，能被机体吸收，且具有止血、抑菌、促进组织修复、抑制结缔组织增生和减少瘢痕粘连的作用。
2本发明采用疏水性药物（紫杉醇，PTX）通过与高分子载体（N-琥珀酰羟乙基壳聚糖，SHEC）发生酯化共价结合，形成紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖（SHEC-PTX)高分子药物聚合物，并在聚四氟乙烯模具中干燥成膜。应用高效液相色谱检测，该膜片在体外水环境中，能显著提高疏水性药物紫杉醇的溶解性，保持药效稳定性，并能长期、少量、持续、稳定释放药物紫杉醇。
3、本发明膜片涉及的紫杉醇局部缓释技术，可应用于良性胆管瘢痕狭窄、肝脏、胰腺和胃肠道等腹腔恶性肿瘤的治疗中，避免紫杉醇及其助溶剂的全身毒副作用，降低胆管良性瘢痕狭窄再次手术风险，减少肿瘤化疗次数和用量，减轻患者经济负担。
4、本发明着眼于良性胆管瘢痕狭窄这一胆道外科的热点问题，应用有机化学合成的方法，发明一种实用性新型高分子疏水药物缓释膜片，其体外释放性能优良，现已通过相关理化和生物学性质的鉴定及检测。目前，关于疏水性药物紫杉醇与壳聚糖衍生物酯化后形成高分子药物聚合物，并制作成膜片，将该局部药物输送系统置入良性胆管瘢痕狭窄动物模型，预防良性胆管瘢痕狭窄形成，为临床防治良性胆管瘢痕狭窄提供新的治疗方法和思路。
5、本发明制备方法简单可靠，所得到的产品紫杉醇载药量大，可达到80μg/cm2左右，灰分含量（0.419%）低即生理灰分含量低，保证药膜质量；电导率高，说明该缓释膜片的质子载流体的浓度较高，可以增加膜片吸水率，有利曲紫杉醇药物的释放。同时，本发明产品的蛋白质含量（0.24%）极低，可以安全应用于人体。
附图说明
图1为不同浓度本发明产品干预成纤维细胞48h后细胞形态图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
本发明除非另有说明，否则百分号代表质量百分数，比例为质量比。
实施例1
一种紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1），壳聚糖原料的纯化：
将壳聚糖加入到浓度为40g/L氢氧化钠水溶液中，于70℃下搅拌以脱色、脱蛋白，之后固液分离，取固体，得到纯化后的壳聚糖；
其中，壳聚糖的加入量与氢氧化钠水溶液的加入量比为20g：100ml；
步骤（2），筛选脱乙酰化程度高的壳聚糖：
将步骤（1）得到的纯化后的壳聚糖置于质量浓度为1%稀盐酸中搅拌至溶解，过滤，取滤液，向滤液中缓慢加入1mol/L氢氧化钠溶液至pH值为7.6，过滤，取滤渣，水洗至中性，得到乙酰化程度高的壳聚糖；
壳聚糖的质量与质量浓度为1%稀盐酸的体积比为15g：250ml；
步骤（3），碱化冻融脱乙酰壳聚糖：
将步骤（2）得到的脱乙酰化程度高的壳聚糖加入到质量浓度为50%的氢氧化钠溶液进行溶胀，溶胀得到的混合物于-20℃冷冻过夜，次日取出，室温解冻后，再次置于-20℃冷冻过夜，再次室温解冻后过滤，取滤渣，干燥，得到碱化冻融后的壳聚糖粉末；
壳聚糖的质量与50%的氢氧化钠溶液比为10g：50ml；
步骤（4），羟乙基化脱乙酰壳聚糖的制备：
将步骤（3）得到的碱化冻融后的壳聚糖粉末加入到异丙醇中，搅拌24h后，在搅拌条件下向其中滴加2-氯乙醇，滴加完毕后于65℃下搅拌48小时，过滤，取滤液，于50℃下旋蒸除去2-氯乙醇，之后将剩余的液体装入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，之后将透析过的液体于50℃下蒸发水分至饱和，冷却后，向饱和溶液中加入体积是饱和溶液体积5倍的无水乙醇，过滤，滤渣用无水乙醇冲洗，干燥，得到羟乙基化脱乙酰壳聚糖；
碱化冻融后的壳聚糖粉末的质量、异丙醇的体积与2-氯乙醇的体积比为10g：100ml：100ml；
步骤（5），N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备：
将步骤（4）得到的羟乙基化脱乙酰壳聚糖加入蒸馏水中，搅拌溶解，过夜，得到浓度为1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液，之后向其中加入浓度为1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液，于40℃恒温加热反应24小时后，将反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，过滤，取滤液，于50℃下烘干，得到N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖；
1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液与1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液的体积比为5:2；
步骤（6），紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备及纯化：
将步骤（5）得到的N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖加入水中，搅拌溶解，过夜，之后向其中加入紫杉醇，搅拌至混匀后，再向其中加入DMAP和EDC，于室温下搅拌反应48小时，反应结束后，向反应液中加入交联剂BDDGE，搅拌3小时后，倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，向所得到的透析液中滴加丙三醇，搅拌30分钟，于50℃烘箱内烘干成膜，得到紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖，即紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片；
每5mL透析液中滴加1滴丙三醇；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖、水、紫杉醇、DMAP和EDC的加入量比为：3.2g：50ml：48mg：0.7mg：10.8mg；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖与交联剂BDDGE的摩尔比为20：1。
实施例2
一种紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1），壳聚糖原料的纯化：
将壳聚糖加入到浓度为40g/L氢氧化钠水溶液中，于70℃下搅拌2h以脱色、脱蛋白，之后固液分离，取固体，得到纯化后的壳聚糖；
其中，壳聚糖的加入量与氢氧化钠水溶液的加入量比为20g：100ml；
步骤（2），筛选脱乙酰化程度高的壳聚糖：
将步骤（1）得到的纯化后的壳聚糖置于质量浓度为1%稀盐酸中搅拌2h，过滤，取滤液，向滤液中缓慢加入1mol/L氢氧化钠溶液至pH值为7.9，过滤，取滤渣，水洗至中性，得到乙酰化程度高的壳聚糖；
壳聚糖的质量与质量浓度为1%稀盐酸的体积比为15g：250ml；
步骤（3），碱化冻融脱乙酰壳聚糖：
将步骤（2）得到的脱乙酰化程度高的壳聚糖加入到质量浓度为50%的氢氧化钠溶液进行溶胀1h，溶胀得到的混合物于-20℃冷冻过夜，次日取出，室温解冻后，再次置于-20℃冷冻过夜，再次室温解冻后过滤，取滤渣，干燥，得到碱化冻融后的壳聚糖粉末；
壳聚糖的质量与50%的氢氧化钠溶液比为10g：50ml；
步骤（4），羟乙基化脱乙酰壳聚糖的制备：
将步骤（3）得到的碱化冻融后的壳聚糖粉末加入到异丙醇中，搅拌24h后，在搅拌条件下向其中滴加2-氯乙醇，滴加完毕后于65℃下搅拌48小时，过滤，取滤液，于50℃下旋蒸除去2-氯乙醇，之后将剩余的液体装入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，之后将透析过的液体于50℃下蒸发水分至饱和，冷却后，向饱和溶液中加入体积是饱和溶液体积5倍的无水乙醇，过滤，滤渣用无水乙醇冲洗，干燥，得到羟乙基化脱乙酰壳聚糖；
碱化冻融后的壳聚糖粉末的质量、异丙醇的体积与2-氯乙醇的体积比为10g：100ml：100ml；
步骤（5），N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备：
将步骤（4）得到的羟乙基化脱乙酰壳聚糖加入蒸馏水中，搅拌溶解，过夜，得到浓度为1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液，之后向其中加入浓度为1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液，于40℃恒温加热反应24小时后，将反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，过滤，取滤液，于50℃下烘干，得到N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖；
1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液与1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液的体积比为5:2；
步骤（6），紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备及纯化：
将步骤（5）得到的N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖加入水中，搅拌溶解，过夜，之后向其中加入紫杉醇，搅拌至混匀后，再向其中加入DMAP和EDC，于室温下搅拌反应48小时，反应结束后，向反应液中加入交联剂BDDGE，搅拌3小时后，倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，向所得到的透析液中滴加丙三醇，搅拌30分钟，于50℃烘箱内烘干成膜，得到紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖，即紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片；
每5mL透析液中滴加1滴丙三醇；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖、水、紫杉醇、DMAP和EDC的加入量比为：3.2g：50ml：48mg：0.7mg：10.8mg；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖与交联剂BDDGE的摩尔比为80：1。
其中，步骤（4）和步骤（5）所述的透析时间均为3天；步骤（6）所述的透析时间为2天；透析时，每天更换蒸馏水1次。
实施例3
一种紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1），壳聚糖原料的纯化：
将壳聚糖加入到浓度为40g/L氢氧化钠水溶液中，于70℃下搅拌2h以脱色、脱蛋白，之后固液分离，取固体，得到纯化后的壳聚糖；
其中，壳聚糖的加入量与氢氧化钠水溶液的加入量比为20g：100ml；
步骤（2），筛选脱乙酰化程度高的壳聚糖：
将步骤（1）得到的纯化后的壳聚糖置于质量浓度为1%稀盐酸中搅拌2h，过滤，取滤液，向滤液中缓慢加入1mol/L氢氧化钠溶液至pH值为7.8，过滤，取滤渣，水洗至中性，得到乙酰化程度高的壳聚糖；
壳聚糖的质量与质量浓度为1%稀盐酸的体积比为15g：250ml；
步骤（3），碱化冻融脱乙酰壳聚糖：
将步骤（2）得到的脱乙酰化程度高的壳聚糖加入到质量浓度为50%的氢氧化钠溶液进行溶胀1h，溶胀得到的混合物于-20℃冷冻过夜，次日取出，室温解冻后，再次置于-20℃冷冻过夜，再次室温解冻后过滤，取滤渣，干燥，得到碱化冻融后的壳聚糖粉末；
壳聚糖的质量与50%的氢氧化钠溶液比为10g：50ml；
步骤（4），羟乙基化脱乙酰壳聚糖的制备：
将步骤（3）得到的碱化冻融后的壳聚糖粉末加入到异丙醇中，搅拌24h后，在搅拌条件下向其中滴加2-氯乙醇，滴加完毕后于65℃下搅拌48小时，过滤，取滤液，于50℃下旋蒸除去2-氯乙醇，之后将剩余的液体装入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，之后将透析过的液体于50℃下蒸发水分至饱和，冷却后，向饱和溶液中加入体积是饱和溶液体积5倍的无水乙醇，过滤，滤渣用无水乙醇冲洗，干燥，得到羟乙基化脱乙酰壳聚糖；
碱化冻融后的壳聚糖粉末的质量、异丙醇的体积与2-氯乙醇的体积比为10g：100ml：100ml；
步骤（5），N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备：
将步骤（4）得到的羟乙基化脱乙酰壳聚糖加入蒸馏水中，搅拌溶解，过夜，得到浓度为1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液，之后向其中加入浓度为1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液，于40℃恒温加热反应24小时后，将反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，过滤，取滤液，于50℃下烘干，得到N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖；
1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液与1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液的体积比为5:2；
步骤（6），紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备及纯化：
将步骤（5）得到的N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖加入水中，搅拌溶解，过夜，之后向其中加入紫杉醇，搅拌至混匀后，再向其中加入DMAP和EDC，于室温下搅拌反应48小时，反应结束后，向反应液中加入交联剂BDDGE，搅拌3小时后，倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，向所得到的透析液中滴加丙三醇，搅拌30分钟，于50℃烘箱内烘干成膜，得到紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖，即紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片；
每5mL透析液中滴加1滴丙三醇；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖、水、紫杉醇、DMAP和EDC的加入量比为：3.2g：50ml：48mg：0.7mg：10.8mg；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖与交联剂BDDGE的摩尔比为40：1。
其中，步骤（4）和步骤（5）所述的透析时间均为3天；步骤（6）所述的透析时间为2天；透析时，每天更换蒸馏水1次。
对于本发明产品进行检测，理化性质如表1所示。
表1
理化性质检测结果中，本发明产品水分含量（5.736%）低，有利于储存，不易变质。对于膜片类高分子化合物来讲，如若水分含量高，由于发酵产热，易引起其发霉、变色、变质等。
本发明产品灰分含量（0.419%）低即生理灰分含量低。生理灰分的测定可以控制膜片的无机杂质的量，保证药膜质量，置入体内后有利于控制局部炎症反应及保证其完全性降。
本发明产品的pH值为7.51。该缓释药膜pH值接近于人体内环境pH值，与之相适应，有利于该膜片在生物体内利用。
本发明产品的电导率（66.8μs/cm）较高，旋转粘度为7.2mPa·s。微乳是一新型理想的药物释放载体。具有透明，稳定吸收完善，靶向释药等特点，并提高药物疗效，降低毒副作用。O/W微乳指液滴分散在水中的油溶胀粒子，其电导率较高；W/O微乳指液滴分散在油中的水溶胀粒子，其电导率较低。本发明产品缓释膜溶液形成的微乳电导率较高，属于O/W微乳。较高的电导率说明该缓释膜片的质子载流体的浓度较高，可以增加膜片吸水率，有利曲紫杉醇药物的释放。
本发明产品的重金属铅含量（＜1mg/Kg）极低，符合《中华人民共和国药典》2010年版(二部)多数化学药品重金属限量规定（小于5mg/Kg），不会引起机体铅中毒。世界卫生组织（WHO）已规定人体对重金属铅的吸收基线值（即短期内可耐受一周的摄入量）为3mg，此膜片大小约3.5cm×3.5cm，重约2mg，因此人体在短期一周内摄入量极微。
本发明产品的蛋白质含量（0.24%）极低。超敏反应表现为生理功能紊乱或组织损伤的特异性免疫反应，是一种异常的、有害的病理性反应，甚至可危及生命。超敏反应是由于再次接触变应原引起的，常见的变应原就包括异体蛋白质。本发明产品蛋白质含量极低，因此引起超敏反应的几率极低，可以安全应用于人体。
高分子药物缓释膜片的体外释放试验：
1、色谱条件与释放介质
①色谱柱：Dikma-C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm)，流动相：乙腈-水-甲醇（58：37：5），流速：1ml/min，检测波长：230nm，柱温为室温，进样体积：10μl，样品分析时间10min，保留时间5min；
②储备液的配置：精密称取紫杉醇原药标准品2mg，以乙腈-水（6：4）溶液溶解并定溶于10 ml容量瓶，制成200ug/ml紫杉醇标准品储备液，4℃储存备用，每四周配一次。
③标准曲线：精确吸取上述对照品储备液用流动相分别配制浓度为0.2、0.4、10、20、30μg/ml的紫杉醇标准品系列。以紫杉醇浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。
④释放介质：采用的释放介质为含0.1%Tween80溶液的PBS溶液（0.1%Tween80，0.85%Nacl，pH7.4）。
2、样品处理
①从已制备的无交联、20：1、40：1、80：1交联的四种膜片中分别随机抽取一片（每片规格3.5×3.5cm，含紫杉醇4.2mg），每片剪取1×1cm大小各4片（各含紫杉醇343μg），分别置于15ml离心管中，各管分别加入上述PBS溶液3ml，置于37℃的恒温摇床中（120rpm）；
②于固定时间点第1d、第2d、第3d、第5d、第7d、第15 d、第30 d，将释放介质全部取出作为样品，于另试管中待用，并将各组膜片重新浸泡于新鲜的上述配方的PBS溶液中，重复上述步骤；
③于各待用试管的PBS中加入2ml二氯甲烷DCM，充分震荡5分钟，500g离心10分钟；
④弃去上层PBS，将下层富含紫杉醇的DCM吹干；
⑤待各管DCM完全挥发后，残渣分别用1ml 60：40乙腈：水（v/v)复溶，0.45μm微孔滤膜滤过后，进行常规HPLC上样检测，同时检测紫杉醇标准品；
⑥绘制紫杉醇标准曲线及紫杉醇释放曲线。
无交联剂组1cm2缓释膜片理论载药量为80μg，前5天内属于药物突释阶段，其突释峰出现较早，5天内已达高峰，此期间未连续取样。5天后随着样品不断被取出，缓释体系内的紫杉醇不断减少。前5天累积缓释药物量4.768μg，为理论载药量的6%。第7天开始缓释药膜开始大量释放，以平均0.31mg/天的速度释放药物，至第15天药物累积释放量达到高峰，至第15天时累积缓释药物量为理论载药量的10%，考虑缓释膜在中性PBS中酯键较为稳定，不易断裂而释放紫杉醇。第15天、第30天测样发现药物累积释放量呈下降趋势，至第30天时累积缓释药物量为理论载药量的12%，膜片依然完整，其88%的药物未释放。
交联比例为1:20组缓释膜片理论载药量为80μg，前5天内属于药物突释阶段。前5天累积缓释药物量为理论载药量的5.9%。第7天开始缓释药膜开始大量释放，至第7天时累积缓释药物量为理论载药量的7.8%，至第15天药物累积释放量达到高峰，累积缓释药物量为理论载药量的10%，第30天测样发现药物累积释放量呈下降趋势，其89%的药物任然未释放。
交联比例为1:40组缓释膜片理论载药量为80μg，前5天内属于药物突释阶段，前5天累积缓释药物量为理论载药量的9.2%。第7天开始缓释药膜开始大量释放，至第7天时累积缓释药物量为理论载药量的11.3%，至第15天药物累积释放量为理论载药量的13%至第30天累积缓释药物量为理论载药量的14.6%，30天开始累积释放量呈下降趋势，其余85.4%的药物任然未释放。
交联比例为1:80组缓释膜片理论载药量为80μg，前5天内属于药物突释阶段。前5天累积缓释药物量为理论载药量的9.1%。第5天开始缓释药膜开始大量释放，至第7天时累积缓释药物量为理论载药量的11%，至第15天药物累积释放量为理论载药量的13.3%、至第30天累积缓释药物量为理论载药量的15%。
各组膜片释放速率与交联比例的关系；1:20、1:40、1:80为交联剂BDDGE与羟乙基化脱乙酰壳聚糖（载体HECTS）的摩尔比，各组膜片载体HECTS含量一致，3.5cm×3.5cm大小的缓释膜，面积为12.25cm2含0.25g HECTS，故相当于1:80交联度的缓释膜，加BDDGE为1，1:40交联度的缓释膜BDDGE的含量为2倍，1:20为4倍含量的交联剂。随着交联程度的上升，高分子材料空间结构愈加稳定，相同时间点紫杉醇的释放速率随之下降。
不同浓度的膜片对人良性胆管瘢痕成纤维细胞的形态学影响
待检测物经紫外线照射灭菌后，配制成条4个浓度梯度（0μg/ml，10μg/ml，100μg/ml，1000μg/ml）。取培养至对数生长期的人良性胆管瘢痕成纤维细胞（从患者组织原代培养建立），5%胰酶消化2min，加一般培养液（含10%FBS）重悬细胞，调节细胞密度至2×104个/ml，于96孔板每孔接种100μl的细胞悬液，放入条件培养箱（37℃，5%CO2）中培养24h。吸弃各孔培养液，按实验分组要求，各孔分别加入200μl各组培养液，各组设3个复孔，对照组即为0μg/ml组。孵育48h，显微镜下观察生长情况。然后每孔加入20μl MTT溶液，继续孵育4h。吸弃各孔液体，加入DMSO 100μl，振荡后，酶标仪检测492nm波长处的OD值。计算细胞相对增殖率(relative growth rate，RGR)，并对细胞毒性进行分级评价：
RGR=OD（实验组）/OD（对照组）×l00%
不同浓度的膜片对人良性胆管瘢痕成纤维细胞的形态学影响如图1所示。
从图1中可以看出，48h后对照组细胞贴壁良好、生长旺盛、细胞密度高、胞浆透明、形态呈梭形。细胞虽仍可贴壁，形态尚正常，但细胞密度下降明显，并且随着浓度的增大，细胞间隙也增大，细胞生长受到明显抑制。原因考虑是PTX的释放，导致细胞生长被抑制。
本发明同时对比载体羟乙基化脱乙酰壳聚糖与本发明产品的对人良性胆管瘢痕成纤维细胞的形态学影响，发现：本发明产品表现出了比载体更强的细胞抑制作用，且随着浓度的增大，抑制作用越明显。而载体随浓度的增大，细胞生长无明显变化，可推测此变化时由药物释放导致，而并非载体本身的细胞毒性。
羟乙基化脱乙酰壳聚糖（HECTS）及本发明产品对成纤维细胞抑制率见表2，结果显示：与正常对照组细胞相比，羟乙基化脱乙酰壳聚糖对成纤维细胞生长有轻微抑制作用，但随浓度增大，抑制率无明显降低。而本发明产品对成纤维细胞生长均有不同程度的抑制作用，且抑制作用随浓度的增加而更加明显，浓度为100μg/ml时，其抑制率为75%；但至1000μg/ml时，其抑制率达到65%，表现出明显的细胞毒性，认为是药物PTX的对成纤维细胞周期的抑制导致。为其进一步的体内实验提供了良好的实验依据。
表2
目前，现有的紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖（SHEC-PTX）的制备工艺如下：
本发明申请人在自身公开的文献的基础上进行研究改进得到本发明技术方案，并与之前的技术方案进行如下对比：
对比例1
对比例1与实施例3的区别在于：无步骤（1）；步骤（2）的原料为市购壳聚糖（即步骤（1）所用的原料），其余都相同。
对比例2
对比例2与实施例3的区别在于：无步骤（2）；步骤（3）的原料为纯化后的壳聚糖（即步骤（1）得到的产品），其余都相同。
对比例3
对比例3与实施例3的区别在于：无步骤（1）和步骤（2）；步骤（3）的原料为市购壳聚糖（即步骤（1）所用的原料），其余都相同。
对比例4
对比例4与实施例3的区别在于：步骤（3）无再次冻融步骤；
即步骤（3）为：将步骤（2）得到的脱乙酰化程度高的壳聚糖加入到质量浓度为50%的氢氧化钠溶液进行溶胀，溶胀得到的混合物于-20℃冷冻过夜，次日取出，室温解冻后，过滤，取滤渣，干燥，得到碱化冻融后的壳聚糖粉末；
壳聚糖的质量与50%的氢氧化钠溶液比为10g：50ml；
其余都相同。
对比例5
对比例5与实施例3的区别在于：步骤（4）无将透析过的液体蒸发水分至饱和步骤；
即步骤（4）为：将步骤（3）得到的碱化冻融后的壳聚糖粉末加入到异丙醇中，搅拌24h后，在搅拌条件下向其中滴加2-氯乙醇，滴加完毕后于65℃下搅拌48小时，过滤，取滤液，于50℃下旋蒸除去2-氯乙醇，之后将剩余的液体装入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，之后向透析过的液体中加入体积是饱和溶液体积5倍的无水乙醇，过滤，滤渣用无水乙醇冲洗，干燥，得到羟乙基化脱乙酰壳聚糖；
碱化冻融后的壳聚糖粉末的质量、异丙醇的体积与2-氯乙醇的体积比为10g：100ml：100ml；
其余都相同。
对比例6
对比例6与实施例3的区别在于：步骤（6）无加入丙三醇的步骤；
即步骤（6）为：将步骤（5）得到的N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖加入水中，搅拌溶解，过夜，之后向其中加入紫杉醇，搅拌至混匀后，再向其中加入DMAP和EDC，于室温下搅拌反应48小时，反应结束后，向反应液中加入交联剂BDDGE，搅拌3小时后，倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，将所得到的透析液于50℃烘箱内烘干成膜，得到紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖，即紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖、水、紫杉醇、DMAP和EDC的加入量比为：3.2g：50ml：48mg：0.7mg：10.8mg；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖与交联剂BDDGE的摩尔比为40：1。
其余都相同。
对比例7
一种紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1），碱化冻融脱乙酰壳聚糖：
将壳聚糖加入到质量浓度为50%的氢氧化钠溶液进行溶胀1h，溶胀得到的混合物于-20℃冷冻过夜，次日取出，室温解冻后，过滤，取滤渣，干燥，得到碱化冻融后的壳聚糖粉末；
壳聚糖的质量与50%的氢氧化钠溶液比为10g：50ml；
步骤（2），羟乙基化脱乙酰壳聚糖的制备：
将步骤（1）得到的碱化冻融后的壳聚糖粉末加入到异丙醇中，搅拌24h后，在搅拌条件下向其中滴加2-氯乙醇，滴加完毕后于65℃下搅拌48小时，过滤，取滤液，于50℃下旋蒸除去2-氯乙醇，之后将剩余的液体装入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，之后向透析过的液体中加入体积是饱和溶液体积5倍的无水乙醇，过滤，滤渣用无水乙醇冲洗，干燥，得到羟乙基化脱乙酰壳聚糖；
碱化冻融后的壳聚糖粉末的质量、异丙醇的体积与2-氯乙醇的体积比为10g：100ml：100ml；
步骤（3），N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备：
将步骤（2）得到的羟乙基化脱乙酰壳聚糖加入蒸馏水中，搅拌溶解，过夜，得到浓度为1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液，之后向其中加入浓度为1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液，于40℃恒温加热反应24小时后，将反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，过滤，取滤液，于50℃下烘干，得到N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖；
1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液与1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液的体积比为5:2；
步骤（4），紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备及纯化：
将步骤（3）得到的N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖加入水中，搅拌溶解，过夜，之后向其中加入紫杉醇，搅拌至混匀后，再向其中加入DMAP和EDC，于室温下搅拌反应48小时，反应结束后，向反应液中加入交联剂BDDGE，搅拌3小时后，倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，将所得到的透析液于50℃烘箱内烘干成膜，得到紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖，即紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖、水、紫杉醇、DMAP和EDC的加入量比为：3.2g：50ml：48mg：0.7mg：10.8mg；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖与交联剂BDDGE的摩尔比为40：1。
将本发明实施例1-3产品与对比例1-7产品进行对比，结果如表2所示。
表2
从以上对比结果我们可以看出，改进后的技术方案，通过各个步骤的联合作用，最后结果无论是紫杉醇载药量，还是电导率，均有明显的提升，且大大降低了灰分和蛋白质的含量。本发明实施例效果均优于对比例效果。另外，发现对比例6产品在应用过程中易碎，不利于手术的进行和术后的恢复。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (5)

1.一种紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），壳聚糖原料的纯化：
将壳聚糖加入到浓度为40g/L氢氧化钠水溶液中，于70℃下搅拌以脱色、脱蛋白，之后固液分离，取固体，得到纯化后的壳聚糖；
其中，壳聚糖的加入量与氢氧化钠水溶液的加入量比为20g：100ml；
步骤（2），筛选脱乙酰化程度高的壳聚糖：
将步骤（1）得到的纯化后的壳聚糖置于质量浓度为1%稀盐酸中搅拌至溶解，过滤，取滤液，向滤液中缓慢加入1mol/L氢氧化钠溶液至pH值为7.6-7.9，过滤，取滤渣，水洗至中性，得到乙酰化程度高的壳聚糖；
壳聚糖的质量与质量浓度为1%稀盐酸的体积比为15g：250ml；
步骤（3），碱化冻融脱乙酰壳聚糖：
将步骤（2）得到的脱乙酰化程度高的壳聚糖加入到质量浓度为50%的氢氧化钠溶液进行溶胀，溶胀得到的混合物于-20℃冷冻过夜，次日取出，室温解冻后，再次置于-20℃冷冻过夜，再次室温解冻后过滤，取滤渣，干燥，得到碱化冻融后的壳聚糖粉末；
壳聚糖的质量与50%的氢氧化钠溶液比为10g：50ml；
步骤（4），羟乙基化脱乙酰壳聚糖的制备：
将步骤（3）得到的碱化冻融后的壳聚糖粉末加入到异丙醇中，搅拌24h后，在搅拌条件下向其中滴加2-氯乙醇，滴加完毕后于65℃下搅拌48小时，过滤，取滤液，于50℃下旋蒸除去2-氯乙醇，之后将剩余的液体装入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，之后将透析过的液体于50℃下蒸发水分至饱和，冷却后，向饱和溶液中加入体积是饱和溶液体积5倍的无水乙醇，过滤，滤渣用无水乙醇冲洗，干燥，得到羟乙基化脱乙酰壳聚糖；
碱化冻融后的壳聚糖粉末的质量、异丙醇的体积与2-氯乙醇的体积比为10g：100ml：100ml；
步骤（5），N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备：
将步骤（4）得到的羟乙基化脱乙酰壳聚糖加入蒸馏水中，搅拌溶解，过夜，得到浓度为1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液，之后向其中加入浓度为1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液，于40℃恒温加热反应24小时后，将反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，过滤，取滤液，于50℃下烘干，得到N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖；
1g/mL的羟乙基化脱乙酰壳聚糖水溶液与1.5g/mL丁二酸酐的二甲基亚砜溶液的体积比为5:2；
步骤（6），紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖的制备及纯化：
将步骤（5）得到的N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖加入水中，搅拌溶解，过夜，之后向其中加入紫杉醇，搅拌至混匀后，再向其中加入DMAP和EDC，于室温下搅拌反应48小时，反应结束后，向反应液中加入交联剂BDDGE，搅拌3小时后，倒入截留分子量为8000-14000的透析袋内蒸馏水透析以去除盐类，向所得到的透析液中滴加丙三醇，搅拌30分钟，于50℃烘箱内烘干成膜，得到紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖，即紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片；
每5mL透析液中滴加1滴丙三醇；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖、水、紫杉醇、DMAP和EDC的加入量比为：3.2g：50ml：48mg：0.7mg：10.8mg；
N-琥珀酰化羟乙基壳聚糖与交联剂BDDGE的摩尔比为20-80：1。
2.根据权利要求4所述的紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的搅拌时间为2h。
3.根据权利要求4所述的紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述的搅拌时间为2h。
4.根据权利要求4所述的紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述的溶胀时间为1h。
5.根据权利要求4所述的紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖高分子药物长效缓释膜片的制备方法，其特征在于，步骤（4）和步骤（5）所述的透析时间均为3天；步骤（6）所述的透析时间为2天；透析时，每天更换蒸馏水1次。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109734824A (zh) * 2019-01-03 2019-05-10 昆山京昆油田化学科技有限公司 一种n-琥珀酰基壳聚糖c-6选择性氧化衍生物及其制备方法和应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1519035A (zh) * 2003-09-02 2004-08-11 天津大学 壳聚糖-精氨酸缀合物抗凝血材料的制备方法
CN101780042A (zh) * 2010-03-26 2010-07-21 天津大学 一种紫杉醇纳米靶向缓释长循环脂质体及其制备方法
CN102908626A (zh) * 2012-11-07 2013-02-06 北京化工大学 冷冻干燥技术制备壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维复合膜的方法
CN104644547A (zh) * 2015-03-09 2015-05-27 北京红太阳药业有限公司 一种长效头孢噻肟钠注射剂及其制备方法
CN105343886A (zh) * 2015-10-30 2016-02-24 成都理工大学 一种抑菌性壳聚糖药物载体及其制备方法
CN106893004A (zh) * 2017-03-17 2017-06-27 广西大学 一种壳聚糖‑酚酸轭合物的制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1519035A (zh) * 2003-09-02 2004-08-11 天津大学 壳聚糖-精氨酸缀合物抗凝血材料的制备方法
CN101780042A (zh) * 2010-03-26 2010-07-21 天津大学 一种紫杉醇纳米靶向缓释长循环脂质体及其制备方法
CN102908626A (zh) * 2012-11-07 2013-02-06 北京化工大学 冷冻干燥技术制备壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维复合膜的方法
CN104644547A (zh) * 2015-03-09 2015-05-27 北京红太阳药业有限公司 一种长效头孢噻肟钠注射剂及其制备方法
CN105343886A (zh) * 2015-10-30 2016-02-24 成都理工大学 一种抑菌性壳聚糖药物载体及其制备方法
CN106893004A (zh) * 2017-03-17 2017-06-27 广西大学 一种壳聚糖‑酚酸轭合物的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TAO WANG等: "Effects of Paclitaxel-conjugated N-Succinyl-Hydroxyethyl Chitosan Film for Proliferative Cholangitis in Rabbit Biliary Stricture Model", 《CHINESE MEDICAL JOURNAL》 *
孟胜男: "《药剂学》", 31 January 2016, 北京：中国医药科技出版社 *
权静: "蟹壳制备壳聚糖的工艺研究", 《广州化工》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109734824A (zh) * 2019-01-03 2019-05-10 昆山京昆油田化学科技有限公司 一种n-琥珀酰基壳聚糖c-6选择性氧化衍生物及其制备方法和应用
CN109734824B (zh) * 2019-01-03 2021-03-19 昆山京昆油田化学科技有限公司 一种n-琥珀酰基壳聚糖c-6选择性氧化衍生物及其制备方法和应用

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