CN108689936A

CN108689936A - 含氮取代基的吲唑类化合物及其作为ido抑制剂的用途

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Publication number: CN108689936A
Application number: CN201710229248.9A
Authority: CN
Inventors: 王周玉; 钱珊; 李国菠; 李超; 陈杨; 王伟; 杨羚羚; 赖朋
Original assignee: Xihua University
Current assignee: Xihua University
Priority date: 2017-04-10
Filing date: 2017-04-10
Publication date: 2018-10-23
Anticipated expiration: 2037-04-10
Also published as: CN108689936B

Abstract

本发明公开了一种式(Ⅰ)所示的含氮取代基的吲唑类化合物，还公开了所述化合物的制备方法和作为IDO抑制剂的用途。本发明的化合物可以用于预防和/或治疗多种疾病，如阿尔茨海默病、白内障、细胞免疫激活相关的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌症、抑郁症或色氨酸代谢异常等。

Description

含氮取代基的吲唑类化合物及其作为IDO抑制剂的用途

技术领域

本发明涉及含氮取代基的吲唑类化合物，还涉及其制备方法和作为IDO抑制剂的用途。

背景技术

吲哚胺2,3-双加氧酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase，IDO)是催化色氨酸等吲哚胺类分子中吲哚环氧化裂解，使其按犬尿酸途径分解代谢的限速酶。

IDO在肿瘤免疫豁免及肿瘤发生过程中起着重要作用。正常情况下，IDO在体内呈低水平表达，而大多数肿瘤细胞则会组成的高表达IDO，将L-色氨酸转化为N-甲酰犬尿氨酸，降低了细胞微环境中的色氨酸浓度，使得色氨酸依赖的T细胞合成停滞于G1期，T细胞增殖受到抑制，从而抑制了机体免疫系统对肿瘤组织的杀伤作用。同时，IDO作用下色氨酸的代谢产物存在细胞毒性，可对T细胞产生直接溶解作用。

因此，抑制IDO的活性可以有效地阻止肿瘤细胞周围色氨酸的降解，促进T细胞的增殖，从而增强机体对肿瘤细胞的攻击能力。并且，IDO抑制剂还可以与化疗药物合用，降低肿瘤细胞的耐药性，从而增强常规细胞毒疗法的抗肿瘤活性。同时服用IDO抑制剂也可提高癌症病人的治疗性疫苗的疗效。

除了在肿瘤细胞耐药性方面发挥着重要作用，IDO还与多种与细胞免疫激活相关的疾病的发病机制密切相关。IDO已被证实是与细胞免疫激活相关的感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾病、艾滋病等重大疾病的靶标。同时，抑制IDO还是对于患有神经系统疾病如抑郁症，阿尔茨海默病的病人的重要治疗策略。因此，IDO抑制剂具有广阔的临床应用前景。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种化合物或其药学上可接受的盐或其溶剂合物，所述化合物的结构如式(Ⅰ)所示：

其中，

R₁选自氢、C₁～C₆烷基或羟基取代的C₁～C₆烷基；

R₂选自氢或-NH₂；

R₃选自氢、卤素、C₁～C₆烷基或C₁～C₆卤代烷基；

R₄选自氢或卤素；

R₅选自氢、-NO₂或-NH-R₆；

R₆选自氢、C₁～C₆烷基或-CH₂COR₇；

R₇选自C₁～C₆烷基、-NH-O-R₈、NH(OH)-R₉或-O-R₁₀；

R₈、R₉、R₁₀分别独立地选自C₁～C₆烷基；

其中，仅当R₂选自-NH₂时，R₅选自氢。

进一步地，R₁、R₂、R₄均为氢。

进一步地，所述羟基取代的C₁～C₆烷基为-CH₂OH。

进一步地，所述C₁～C₆卤代烷基为-CHX₂、-CH₂X或-CX₃，其中X表示卤素。

进一步地，所述C₁～C₆卤代烷基为三氟甲基。

进一步地，所述卤素选自氟、氯或溴；所述-NH-R₆选自-NHCH(CH₃)₂、-NHCH₂COCH₃、-NH-CH₂CONHOCH₃、-NHCH₂CON(OH)CH₃或-NHCH₂COOCH₂CH₃。

进一步地，所述化合物选自如下化合物之一：

本发明还提供了前述化合物、或其前药、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物在制备IDO抑制剂类药物上的用途。

进一步地，所述药物是预防和/或治疗阿尔茨海默病、白内障、细胞免疫激活相关的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌症、抑郁症或色氨酸代谢异常的药物。

本发明还提供了一种药物组合物，它是前述化合物、或其前药、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

所述C₁～C₆烷基是指C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆的烷基，即具有1～6个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、己基等等。

所述前药是前述化合物的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性或甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。

所述的制剂可以包括注射剂或口服制剂。

本发明中的关键中间体和化合物进行分离和纯化，所使用的方式是有机化学中常用的分离和纯化方法。

本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用，也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于制备IDO抑制剂。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药。

本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质。

经试验证明，本发明提供的吲唑类化合物对IDO具有优异的抑制作用，可以用于预防和/或治疗多种疾病，如阿尔茨海默病、白内障、细胞免疫激活相关的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌症、抑郁症或色氨酸代谢异常等。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

本发明中，英文缩写的涵义如下所示：

DMF：Dimethylformamide，二甲基甲酰胺。

DCM：Dichloromethane，二氯甲烷。

MeOH：Methyl alcohol，甲醇。

EA：Ethyl acetate，乙酸乙酯。

PE：Petroleum ether，石油醚。

TCCA：Trichloroisocyanuric acid，三氯异氰脲酸。

具体实施方式

本发明所用的试剂和初始原料均价廉易得，购于成都科龙化学试剂公司。

实施例1化合物LWQ-121、LWQ-122、LQW-145、LQW-146、LQW-149、LQW-150、LQW-151和LQW-152的合成

合成路线如下所示：

(1)化合物LWQ-145的合成

1化合物2a的合成：

冰浴下，将KNO₃(1.146g，11.34mmol)缓慢加入到化合物1a(500mg，4.53mmol)中，加毕，移至室温搅拌12h，TLC显示原料反应完全，最后拿到白色固体50mg，收率：5.5％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ8.36(d,J＝7.9Hz,2H,),2.41(s,3H).

2化合物3a的合成：

将原料2a(200mg，1mmol)用甲醇(5mL)1,4二氧六环(2.5mL)溶解，冰浴下加入10NHCl(1mL)Fe(41.9mg，3mmol)，加毕，80℃搅拌3h，TLC显示原料反应完全。最后收到淡黄色粉末42mg，收率：60.4％。

3化合物LWQ-145的合成：

将原料3a(50mg，0.294mmol)用AcOH(10mL)溶解，0℃下加入亚硝酸钠(44.6mg，0.588mmol)的水溶液(3mL)，加毕，rt搅拌6h；TLC显示原料反应完全，最后收到橘黄色粉末18.3mg，收率：43.5％。

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO)δ13.89(s,1H,),8.55(s,1H,),8.06(dd,J＝9.1,1.6Hz,1H,),7.99(d,J＝8.4Hz,1H,)；¹³C NMR(300MHz,d₆-DMSO)δ160.92,158.49,142.0,134.8,113.25,108.73,104.44；HRMS(AP-ESI)Calcd.For C₇H₄FN₃O₂:204.0186(M+Na)+.Found:203.9987.

(2)化合物LWQ-149、化合物LWQ-150、化合物LWQ-151的合成

化合物LWQ-149、化合物LWQ-150、化合物LWQ-151的合成分别以相应原料参照化合物LWQ-145的合成方法制得。

LWQ-149:收率：75％；黄色固体；¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ14.38(s,1H,),8.67(s,1H,),8.51(s,1H,),8.31(s,1H,)；13C NMR(300MHz,d₆-DMSO)δ141.37,140.71,133.46,125.23,117.54,116.34,114.50；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₈H₄F₃N₃O₂:254.0154(M+Na)+.Found:254.1027.

LWQ-150:收率：68％；黄色固体；¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ12.46(s,1H),7.70(s,1H),7.16(s,1H),6.85(s,1H),2.36(s,3H,CH3)；¹³C NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ143.6,141.1,135.9,132.2,116.8,115.9,112.2,20.3；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₈H₇N₃O₂:200.0436(M+Na)+.Found:199.9896.

LWQ-151:收率：55％；白色固体；¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ12.4(s,1H,),8.71(s,1H),8.20-7.88(m,3H)；¹³C NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ140.2,138.5,130.2,126.3,117.1,116.1,113.2；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₇H₅N₃O₂:185.9681(M+Na)+.Found:185.5832.

(3)化合物LWQ-146的合成

将原料LWQ-145(46mg，0.253mmol)用乙醇(5mL)和水(2.5mL)溶解，rt下加入氯化铵(7mg，0.126mmol)和Fe(371mg，1.265mmol)，加毕，80℃搅拌4h；TLC显示原料反应完全，最后收到橘黄色粉末11mg，收率：44.5％。

¹H NMR(400MHz,DMSO,ppm):δ12.67(s,1H),8.07(s,1H),6.32(ddd,J＝9.7,1.9,0.9Hz,1H),6.13(s,2H),5.93(dd,J＝12.3,2.0Hz,1H).¹³C NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):δ160.2,145.2,143.8,127.8,109.5,93.7,87.0；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₇H₆FN₃:174.0444(M+Na)⁺.Found:173.9799.

(4)化合物LWQ-152、化合物LWQ-121、化合物LWQ-122的合成

化合物LWQ-152、化合物LWQ-121、化合物LWQ-122分别以LWQ-151、LWQ-149、LWQ-150为原料，参照化合物LWQ-146的合成方法制得。

LWQ-122:收率80％；褐色固体；¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ10.42(s,1H),8.10(s,1H),7.20(s,1H),6.58(s,1H),4.37(s,2H)；¹³C NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):δ143.9,142.5,129.1,127.8,124.1,117.2,103.5,96.8；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₈H₆F₃N₃:224.0412(M+Na)⁺.Found:224.0018.

LWQ-121:收率：80％；褐色固体；¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ12.45(s,1H),7.70(s,1H),7.15(s,1H),6.84(s,1H),4.59(s,2H),2.21(s,3H)；¹³C NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):δ143.5,142.1,135.8,127.8,110.9,107.4,100.7,21.3；HRMS(AP-ESI)Calcd.forC₇H₉N₃:174.0694(M+Na)⁺.Found:173.0655.

LWQ-152:收率：90％；褐色固体；¹H NMR(400MHz,d6-DMSO,ppm):δ12.40(s,1H),8.20(s,1H),7.78-6.60(m,3H),5.79(s,2H)；¹³C NMR(300MHz,d6-DMSO,ppm):δ143.6,142.2,127.8,127.2,113.9,105.5,100.9；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C7H7N3:156.0538(M+Na)+.Found:156.0356.

实施例2LQW-123、LQW-147、LQW-148、LWQ-221和LWQ-222的合成

合成路线如下所示：

(1)化合物LWQ-145的合成

1化合物4a的合成：

室温下，将原料TCCA(640mg，2.74mmol)缓慢加入到2d(1g，5.49mmol)的浓硫酸(25mL)溶液中，加毕，开至130℃搅拌4h；TLC显示原料反应完全，最后得到白色粉末872.6mg，收率：73.6％。

2化合物5a的合成：

将原料4a(5.9g，23.60mmol)用甲醇(10mL)1,4二氧六环(5mL)溶解，冰浴下加入10N HCl(12mL)Fe(3.96g，70.80mmol)，加毕，80℃搅拌3h，TLC显示原料反应完全。最后收到淡黄色粉末3.55g，收率：68.4％。

3化合物LWQ-147的合成：

将原料5a(3.55g，16.13mmol)用AcOH(15mL)溶解，0℃下加入亚硝酸钠(2.23g，32.26mmol)的水溶液(5mL)，加毕，rt搅拌6h；TLC显示原料反应完全，最后收到橘黄色粉末2.7g，收率：72.5％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ14.04(s,1H),8.56(s,1H),8.23(s,1H),8.13(s,1H,)；¹³C NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ140.3,133.3,133.1,130.4,118.9,118.0,114.8；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₇H₄ClN₃O₂:219.9890(M+Na)⁺.Found:219.0458.

(2)化合物LWQ-221的合成

化合物LWQ-221以化合物4b为原料，参照化合物LWQ-147的合成方法制得。

收率：62％；黄色固体；¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ14.55(s,1H),8.62(s,1H,),8.30(s,1H),8.16(d,J＝3.2Hz,1H)；¹³C NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ140.9,139.4,130.2,119.8,114.4,113.5,113.2.HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₇H₄BrN₃O₂:263.9385(M+Na)⁺.Found:263.0024.

(3)化合物LWQ-148和LWQ-123的合成

将原料LWQ-147(3.4g，14.05mmol)用乙醇(20mL)和水(10mL)溶解，rt下加入氯化铵(376mg，7.02mmol)和Fe(3.9g，70.25mmol)，加毕，80℃搅拌4h；TLC显示原料反应完全，最后收到橘黄色粉末2.73g，收率：70.2％。

¹H NMR(400MHz,DMSO,ppm)δ12.75(s,1H),8.10(s,1H),6.62(s,1H),6.13(s,1H).¹³C NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):δ145.0,143.6,131.9,127.8,112.0,107.1,100.4；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₇H₆ClN₃:190.0148(M+Na)⁺.Found:190.0677.

LWQ-123的合成参照化合物LWQ-148。

收率：75％；褐色固体；¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO,ppm):δ12.75(s,1H),8.10(s,1H),6.77(s,1H),6.27(d,J＝1.3Hz,1H),6.12(s,2H)；¹³C NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):δ143.8,142.4,132.7,121.4,112.6,104.2,99.4；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₇H₆BrN₃:233.9643(M+Na)⁺.Found:233.5367.

(4)化合物LWQ-222的合成

将化合物LWQ-221(100mg,1.45mmol)，多聚甲醛(43.5mg,1.45mmol)，三乙胺(20μL,0.145mmol)置于反应器中，加热至70℃至熔融状态，保持温度反应0.5h。TLC检测反应完全。冷却至室温，柱层析纯化，最后收到橘黄色粉末102mg，收率：70.2％。

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO)δ8.65(s,1H),8.55(s,1H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),7.00(t,J＝7.6Hz,1H),5.85(d,J＝7.3Hz,2H)；¹³C NMR(300MHz,d₆-DMSO)δ141.55,140.3,132.96,121.70,121.19,118.41,116.34,72.03；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₈H₆BrN₃O₃:293.9491(M+Na)+.Found:293.0421.

实施例3化合物LQW-161的合成

合成路线如下所示：

1中间体8的合成

将化合物7(50mg,0.24mmol)、化合物丙酮(85μL,1.18mmol)溶于1.5mL二氯乙烷中，加入分子筛，置于微波反应器中。设置功率为650W，时间为540min。待反应器停止，滤去分子筛，分子筛用二氯甲烷洗涤多次。合并滤液，浓缩，粗品经柱层析纯化得白色固体化合物8(38mg,0.16mmol)，收率67％。

2化合物LWQ-161的合成

将化合物8(30mg,0.16mmol)和DMF(3μL,0.03mmol)溶于二氯甲烷中，置于0℃。Ar气保护下，加入稀释的HSiCl₃(20μL,0.19mmol)的二氯甲烷溶液。加毕，同温搅拌1h。向反应液中加入0.1mL无水甲醇淬灭剩余的三氯氢硅，升至室温。旋干反应液，残余物用EA溶解，加入饱和碳酸氢钠水溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤2次，干燥，浓缩。粗品经柱层析(PE:EA＝1：1)纯化得白色固体化合物LWQ-161(23mg,0.1mmol)，收率60％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.78(s,1H),8.21(s,1H),6.80(s,1H),6.30(d,J＝7.8Hz,1H),6.12(s,1H),3.76-3.68(m,1H),1.23(s,3H),1.22(s,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ142.57,142.22,132.82,121.98,112.54,100.73,99.44,43.63,22.60.ESI-MS:254.0215[M+H].

实施例4化合物LWQ-188的合成

将化合物7(300mg,1.42mmol)、碘化钾(20mg,0.12mmol)、碳酸钾(586mg,4.25mmol)加入反应瓶中，用10mL丙酮溶解，将溴丙酮(357μL，4.26mmol)缓慢滴入混合液中，室温下反应2h,TLC显示完全反应。旋尽丙酮，加水，用乙酸乙酯提取3次，用饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩，粗品经柱层析(PE:EA＝5:1)纯化得化合物LWQ-188为黄色固体(290mg，收率76％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.75(s,1H),7.97(s,1H),6.82(s,1H),6.51(s,1H),5.03(s,2H),2.09(s,3H).HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₁₀H₁₀BrN₃O:290.0007(M+Na)+.Found:290.0208.

实施例5化合物LWQ-189、LWQ-190和LWQ-194的合成

(1)化合物LWQ-194的合成

将化合物7(300mg,1.42mmol)、碘化钾(20mg,0.12mmol)、碳酸钾(586mg,4.25mmol)加入反应瓶中，用10mL丙酮溶解，将溴乙酸乙酯(315μL，2.83mmol)缓慢滴入混合液中，室温下反应2h,TLC显示完全反应。旋尽丙酮，加水，用乙酸乙酯提取3次，用饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩，粗品经柱层析(PE:EA＝5:1)纯化得LWQ-194为黄色固体(220mg，收率52％)。

HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₁₁H₁₂BrN₃O₂:320.0113(M+Na)+.Found:320.0421.

(2)化合物LWQ-190和化合物LWQ-189的合成

1中间体9的合成

将化合物LWQ-194(100mg,0.33mmol)加入反应瓶中，然后加入2mL乙醇和2mL水，室温搅拌下加入氢氧化钠(24mg,0.66mmol)，100℃回流30min，TLC检测反应完全，加入50μL浓盐酸，旋去乙醇和水，得到化合物9粗品，直接用于下一步反应。

2化合物LWQ-190的合成

将中间体9(51mg,0.19mmol)用3mL N,N-二甲基甲酰胺溶解，将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(43mg,0.22mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(85mg,0.22mmol)、N,N-二异丙基乙胺(124μL,0.76mmol)分别加入反应瓶中，最后将中间体9a(32mg,0.38mmol)加入混合液中，室温反应3h，TLC检测反应完全，加入大量水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩后得粗品，粗品经柱层析(DCM:MeOH＝80:1→40:1)纯化得白色固体LWQ-190 27mg，收率48％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.15(s,1H),8.08(s,1H),6.79(s,1H),6.30(d,J＝1.6Hz,1H),6.16(s,2H),5.22(s,2H),3.13(s,3H).HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₁₀H₁₁BrN₄O₂:321.0065(M+Na)+.Found:321.0311.

3化合物LWQ-189的合成

将中间体9(50mg,0.18mmol)用3mL N,N-二甲基甲酰胺溶解，将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(43mg,0.22mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(85mg,0.22mmol)、N,N-二异丙基乙胺(124μL,0.7 6mmol)分别加入反应瓶中，最后将中间体9b(32mg,0.36mmol)加入混合液中，室温反应3h，TLC检测反应完全，加入大量水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩后得粗品，粗品经柱层析(DCM:MeOH＝80:1→40:1)纯化得白色固体LWQ-189 31mg，收率56％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),8.10(s,1H),6.94(s,1H),6.31(s,1H),6.18(s,2H),4.84(s,2H),3.62(s,3H),3.36(s,9H).HRMS(AP-ESI)Calcd.for C₁₀H₁₁BrN₄O₂:321.0065(M+Na)+.Found:321.0125.

实施例6化合物LQW-193的合成

1化合物11的合成：

将原料10(1.00g,4.32mmol)用15mL AcOH溶解，0℃下加入亚硝酸钠(0.66mg,9.52mmol)的水溶液(2mL)。加毕，rt搅拌6h。TLC监测原料反应完全，旋干反应液，萃取，粗品经柱层析纯化，得到橘黄色粉末化合物2(0.5mg，2.07mmol)，收率：47.7％。2化合物LQW-193的合成：

将化合物11(0.34g,1.40mmol)用乙醇(10mL)水(5mL)溶解，室温搅拌下加入氯化铵(38mg,0.70mmol)和Fe(0.39g,7.02mmol)，加毕，升温至80℃搅拌4h；TLC显示原料反应完全，滤去反应液中的固体，滤饼用EA洗涤多次，滤液旋干，残余物加水稀释，EA萃取3次，饱和食盐水洗涤3次，干燥浓缩。粗品经柱层析(PE:EA＝1：1)得淡黄色粉末化合物LQW-193(0.15mg,0.71mmol)，收率：50.5％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.76(s,1H),7.90(s,1H),7.11(d,J＝1.1Hz,1H),6.58(d,J＝0.9Hz,1H),5.67(s,1H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ139.9,133.4,125.8,122.8,120.4,120.1,110.0.ESI-MS:211.9745[M+H].

实施例7本发明化合物对IDO蛋白的抑制活性

重组人IDO蛋白经大肠杆菌表达，镍亲合层析纯化而得。化合物对IDO抑制活性实验采用L-色氨酸作为底物。待测化合物溶解在10％DMSO溶液中配制成稀释液。取5uL稀释液加入到100μL反应体系中。100μL反应体系中含有0.5％DMSO，40nmol/L IDO，900μmol/L L-色氨酸，以及其他反应共存物(磷酸钾缓冲液、抗坏血酸、过氧化氢酶，亚甲基蓝)。反应混合物于37度下培育180分钟，再加入三氯乙酸终止反应。使用Tecan Infinite M1000酶标仪在321nm处测定产生的N-甲酰基犬尿氨酸的浓度，从而评价化合物对IDO的抑制活性。阴性对照物是以5μL的缓冲液代替IDO。临床III期的IDO抑制剂INCB024360作为阳性对照，验证本实验建立的IDO活性检测体系是否有效。

每个浓度设立三复孔。使用软件Graphpad Prism进行数据分析。在不含待测化合物的反应液中，吸光度(A_t)定义为100％活性。在不含IDO的反应液中，吸光度(A_b)定义为0％活性。对于待测化合物，活性的计算公式为：％activity＝[(A-A_b)/(A_t-A_b)]×100，其中A为含待测化合物的反应液的吸光度。抑制率的计算公式为：％inhibition＝100-％activity.

通过以上实验方法，测试了本发明中的部分化合物针对IDO的抑制活性。具体部化合物在10μM浓度下的抑制活性见表1。

其中A表示抑制率大于60％、B表示抑制率为40-59％，C表示抑制率为10-39％；D表示抑制率小于10％；阳性对照物在浓度为0.05μM时的抑制率为46％。表1本发明化合物对IDO的抑制活性

Claims

1.一种化合物或其药学上可接受的盐或其溶剂合物，所述化合物的结构如式(Ⅰ)所示：

其中，

R₁选自氢、C₁～C₆烷基或羟基取代的C₁～C₆烷基；

R₂选自氢或-NH₂；

R₃选自氢、卤素、C₁～C₆烷基或C₁～C₆卤代烷基；

R₄选自氢或卤素；

R₅选自氢、-NO₂或-NH-R₆；

R₆选自氢、C₁～C₆烷基或-CH₂COR₇；

R₇选自C₁～C₆烷基、-NH-O-R₈、NH(OH)-R₉或-O-R₁₀；

R₈、R₉、R₁₀分别独立地选自C₁～C₆烷基；

其中，仅当R₂选自-NH₂时，R₅选自氢。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：R₁、R₂、R₄均为氢。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述羟基取代的C₁～C₆烷基为-CH₂OH。

4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述C₁～C₆卤代烷基为-CHX₂、-CH₂X或-CX₃，其中X表示卤素。

5.根据权利要求4所述的化合物，其特征在于：所述C₁～C₆卤代烷基为三氟甲基。

6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其特征在于：所述卤素选自氟、氯或溴；

所述-NH-R₆选自-NHCH(CH₃)₂、-NHCH₂COCH₃、-NH-CH₂CONHOCH₃、-NHCH₂CON(OH)CH₃或-NHCH₂COOCH₂CH₃。

7.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述化合物选自如下化合物之一：

8.权利要求1-7任一项所述化合物、或其前药、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物在制备IDO抑制剂类药物上的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述药物是预防和/或治疗阿尔茨海默病、白内障、细胞免疫激活相关的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌症、抑郁症或色氨酸代谢异常的药物。

10.一种药物组合物，其特征在于：它是以权利要求1-7任一项所述的化合物、或其前药、或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。