CN108685960A - 一种漆树抗微生物提取物的制备方法 - Google Patents

一种漆树抗微生物提取物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种漆树抗微生物提取物的制备方法，包括以下步骤：(1)将干燥后的漆树皮粉碎后与蒸馏水混合，加入纤维素酶进行酶解，得到酶解混合物；(2)将酶解混合物进行灭酶处理后，置于亚临界萃取釜中，再加入乙醇和亚临界流体，在氮气保护下进行亚临界萃取，萃取后离心，收集上清液；(3)对上清液进行蒸发脱溶处理，得到混合提取物；(4)采用超滤膜对混合提取物进行超滤分离，收集超滤液；(5)采用纳滤膜对超滤液进行过滤，以除去小分子物质，得到漆树抗微生物提取物。该方法具有制备工艺简单、提取率高且提取物活性高等优点。

Description

一种漆树抗微生物提取物的制备方法
技术领域
本发明涉及属于医药技术领域，具体涉及一种漆树抗微生物提取物的制备方法。
背景技术
漆树是一种重要经济树种，原产中国，在中国的大部分地区均有分布.且在亚洲地区分布广泛。从其漆树皮层中割取的次生代谢产物生漆是一种优良的天然涂料，素有“涂料之王”的誉称，常用作名贵漆器的漆膜。药用价值是漆树的另一重要特征.民间本草书籍记载漆树的叶、花、根、皮、果实、干漆和木心均可人药，具有止咳、化瘀、通经、杀虫、消肿等功效。最近国内外研究发现。漆树籽加工的漆油和漆蜡具有延缓衰老、增强记忆力、降血糖等独特的食用保健功效，特别是漆树的漆树汁提取物含有丰富的黄酮类化合物，具有明确的抗肿瘤、抗炎等药理作用。但是，在医学、食品、生物等领域应用不足。植物提取物中含有生物碱、类黄酮、酚类、独特的氨基酸和多糖等化学物质具有一定的抑菌作用。植物提取物的抑菌活性作用明显，植物提取物具有无毒或低毒、广谱、对环境友好且成本低廉的优点，具有重要的研究价值。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种制备工艺简单、提取率高且提取物活性高的漆树抗微生物提取物的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种漆树抗微生物提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥后的漆树皮粉碎后与蒸馏水混合，加入纤维素酶进行酶解，得到酶解混合物；
(2)将酶解混合物进行灭酶处理后，置于亚临界萃取釜中，再加入乙醇和亚临界流体，在氮气保护下进行亚临界萃取，萃取后离心，收集上清液；
(3)对上清液进行蒸发脱溶处理，得到混合提取物；
(4)采用超滤膜对混合提取物进行超滤分离，收集超滤液；
(5)采用纳滤膜对超滤液进行过滤，以除去小分子物质，得到漆树抗微生物提取物。
优选的，所述步骤(2)中，漆树皮、亚临界流体和乙醇的用量比为1g∶20～50mL∶20～50mL。
优选的，所述亚临界萃取压力为5MPa～10MPa，萃取温度为25℃～50℃。
优选的，所述亚临界流体为丙烷、丁烷、二甲醚、四氟乙烷中的一种或几种。
优选的，所述步骤(1)中，所述纤维素酶的酶活力为30000～60000U/g。所述酶解的温度为40℃～50℃，酶解时间为0.5h～1h。
优选的，所述灭酶处理具体为：将酶解混合液在75℃～85℃下处理25min～30min。所述纤维素酶的质量为漆树皮质量的0.5wt％～1.0wt％。
优选的，所述超滤膜的分子截留量为5000u～10000u，超滤的压力控制在0.25MPa～0.35MPa。
优选的，所述纳滤膜的直径为1～10nm。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明采用纤维素酶水解后乙醇和亚临界流体萃取法对漆树皮进行处理，纤维素酶能水解结构致密的漆树皮的植物细胞壁，为复合萃取做铺垫；萃取过程中，由于使用了乙醇和亚临界流体组成的混合溶剂，增加了漆树皮植物细胞中脂溶性成分和水溶性成分提取的选择性和效率；因而能全面地将漆树皮植物细胞中的抗微生物有效成分如生物碱、类黄酮、酚类、氨基酸和多糖等萃取出。再采用超滤膜去除蛋白质及胶体物质等杂质，最后经纳滤膜去除小分子物质，即可得到漆树皮抗微生物提取物。
具体实施方式
以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
实施例1：
(1)将干燥后的漆树皮粉碎后与蒸馏水混合，加入酶活力为50000U/g、质量为漆树皮质量的0.8wt％的纤维素酶进行酶解，酶解温度为40℃，酶解时间为1h，得到酶解混合物；
(2)将酶解混合物在80℃下灭酶处理25min后，置于亚临界萃取釜中，再加入乙醇和丙烷，漆树皮、丙烷和乙醇的用量比为1g∶30mL∶30mL，在氮气保护、80MPa，25℃下进行亚临界萃取1h，萃取后离心，收集上清液；
(3)对上清液进行蒸发脱溶处理，得到混合提取物；
(4)采用分子截留量为8000u的超滤膜对混合提取物进行超滤分离，超滤的压力控制在0.25MPa，收集超滤液；
(5)采用直径为5nm的纳滤膜对超滤液进行过滤，以除去小分子物质，得到漆树抗微生物提取物。
实施例2：
(1)将干燥后的漆树皮粉碎后与蒸馏水混合，加入酶活力为50000U/g、质量为漆树皮质量的0.6wt％的纤维素酶进行酶解，酶解温度为45℃，酶解时间为1h，得到酶解混合物；
(2)将酶解混合物在80℃下灭酶处理25min后，置于亚临界萃取釜中，再加入乙醇和二甲醚，漆树皮、二甲醚和乙醇的用量比为1g∶35mL∶35mL，在氮气保护、80MPa，25℃下进行亚临界萃取1h，萃取后离心，收集上清液；
(3)对上清液进行蒸发脱溶处理，得到混合提取物；
(4)采用分子截留量为8000u的超滤膜对混合提取物进行超滤分离，超滤的压力控制在0.25MPa，收集超滤液；
(5)采用直径为5nm的纳滤膜对超滤液进行过滤，以除去小分子物质，得到漆树抗微生物提取物。
实施例3：
(1)将干燥后的漆树皮粉碎后与蒸馏水混合，加入酶活力为50000U/g、质量为漆树皮质量的0.6wt％的纤维素酶进行酶解，酶解温度为40℃，酶解时间为1h，得到酶解混合物；
(2)将酶解混合物在75℃下灭酶处理25min后，置于亚临界萃取釜中，再加入乙醇和二甲醚，漆树皮、二甲醚和乙醇的用量比为1g∶40mL∶40mL，在氮气保护、80MPa，25℃下进行亚临界萃取1h，萃取后离心，收集上清液；
(3)对上清液进行蒸发脱溶处理，得到混合提取物；
(4)采用分子截留量为8000u的超滤膜对混合提取物进行超滤分离，超滤的压力控制在0.25MPa，收集超滤液；
(5)采用直径为5nm的纳滤膜对超滤液进行过滤，以除去小分子物质，得到漆树抗微生物提取物。
漆树提取物对微生物的抑制活性
试剂：氟康唑(Fluconazole)和氯霉素(Chloroamphenicol)：上海三维制药有限公司，批号分别为20151109和20160717；细菌菌株：Staphylococcus aureus(ATCC 25923，Sa)、Bacillus sublitis(ATCC 6633，Bs)和Escherichia coli(ATCC 25922，Ec)从中国药品生物制品检定所购买；真菌菌株：Aspergillus awamori(ATCC 30368，Aa)、Asperigillusniger(ATCC 16404，An)及Penicillium oxalicum(ATCC 20851，Po)从中国药品生物制品检定所购买。
测试方法：抗菌活性测试采用文献描述的肉汤稀释法进行测试，选择甲醇提取物为待测样品。母液采用二甲亚砜进行配制，配制成2.0mg/mL的浓度，母液采用二倍法梯度稀释成6个浓度梯度。具体操作如下：0.5mL的稀释液加入到含4.4mL含稀肉汤的试管中，接着加入0.1mL的菌种悬浮液混合均匀，整个培养液的体积为5.0mL。测试的样品浓度范围为6.25到200μg/mL，阳性对照药物氯霉素和氟康唑的测试浓度范围分别为2.0-265μg/mL和1.56-256μg/mL。在37℃下培养24h，测试和计算样品的最小抑菌浓度(MIC)。
不同萃取剂萃取得到的漆树抗微生物提取物对微生物的抑制活性结果如下(表1)：
表1
样品 Sa Bs Ec Aa An Po
实施例1 25-50 25-50 50 100 100 100
实施例2 100 200 100 >200 >200 >200
实施例3 200 >200 200 >200 >200 >200
氟康唑 4.0 4.0 8.0 >200 >200 >200
氯霉素 1.56 50 1.56
氟康唑和氯霉素作为阳性对照
从表1可以看出，不同萃取剂萃取得到的漆树抗微生物提取物对微生物有较好的抑制作用，其中乙醇和丙烷萃取得到的漆树抗微生物提取物的抑菌活性最强。
以上所述，仅是本申请的较佳实施例，并非对本申请做任何形式的限制，虽然本申请以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限制本申请，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本申请技术方案的范围内，利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于技术方案范围内。

Claims (8)

1.一种漆树抗微生物提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥后的漆树皮粉碎后与蒸馏水混合，加入纤维素酶进行酶解，得到酶解混合物；
(2)将酶解混合物进行灭酶处理后，置于亚临界萃取釜中，再加入乙醇和亚临界流体，在氮气保护下进行亚临界萃取，萃取后离心，收集上清液；
(3)对上清液进行蒸发脱溶处理，得到混合提取物；
(4)采用超滤膜对混合提取物进行超滤分离，收集超滤液；
(5)采用纳滤膜对超滤液进行过滤，以除去小分子物质，得到漆树抗微生物提取物。
2.根据权利要求1所述的漆树抗微生物提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，漆树皮、亚临界流体和乙醇的用量比为1g∶20～50mL∶20～50mL。
3.根据权利要求2所述的漆树抗微生物提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述亚临界萃取压力为5MPa～10MPa，萃取温度为25℃～50℃。
4.根据权利要求3所述的漆树抗微生物提取物的制备方法，其特征在于，所述亚临界流体为丙烷、丁烷、二甲醚、四氟乙烷中的一种或几种。
5.根据权利要求1～4任一项所述的漆树抗微生物提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述纤维素酶的酶活力为30000～60000U/g。所述酶解的温度为40℃～50℃，酶解时间为0.5h～1h。
6.根据权利要求5所述的漆树抗微生物提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述灭酶处理具体为：将酶解混合液在75℃～85℃下处理25min～30min。所述纤维素酶的质量为漆树皮质量的0.5wt％～1.0wt％。
7.根据权利要求6所述的漆树抗微生物提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述超滤膜的分子截留量为5000u～10000u，超滤的压力控制在0.25MPa～0.35MPa。
8.根据权利要求7所述的漆树抗微生物提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述纳滤膜的直径为1～10nm。
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