CN108676735B - 一种含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A - Google Patents

Abstract

本发明涉及菌株领域，特别是指一种含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136‑2A。所述菌株的保藏号为CCTCC No：M2018254，保藏日期为2018年5月7日。所述巨型病毒FpgMBV1为两条dsRNA序列的病毒，两条dsRNA序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示。含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136‑2A在镰孢菌病害防治方面的应用。

Description

一种含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A

技术领域

本发明涉及菌株领域，特别是指一种含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A。

背景技术

假禾谷镰孢菌(Fusarium pseudograminearum)是引起小麦茎基腐病的优势病原菌，自二十世纪五十年代在澳大利亚发现以来，已在数十个国家被发现和报道，是一种世界性病害。在我国，假禾谷镰孢菌在2012年首次报道，目前广泛存在于河南、河北、山西、安徽、江苏、山东、陕西等黄淮麦区多个省份，发生蔓延呈现不断扩大和加重的趋势，严重危害小麦生产。

利用弱毒相关病毒对植物病原真菌致病力的抑制作用进行生物防治的应用中，栗疫菌(Cryphonectria parasitica) 中的 CHV1 最早引起人们重视。近年来，我国真菌病毒学家证实，核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum) 中的SsHADV-1 可以在寄主真菌的营养体不亲和型菌株之间扩散和复制，并引起寄主真菌的致病力衰退，具有良好的生防潜能。Fusarium graminearum hypovirus 2 (FpgMBV1/FC136-2A) 对寄主真菌的菌落形态、生长速度、孢子产量、生物产量、真菌毒素产生和致病力等方面都产生显著地抑制作用，在生物防治上有很大的应用潜力。

发明内容

本发明提出利用含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A，解决小麦受镰孢菌危害而大量减产的技术问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A，所述菌株的拉丁文名称为Fusarium pseudograminearumFC136-2A，保藏号为CCTCC No：M2018254，保藏地址：武汉市武昌珞珈山，保藏日期为2018年5月7日。

所述巨型病毒FpgMBV1为两条dsRNA序列的病毒，两条dsRNA序列分别如SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2所示。

所述的含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A在防治镰孢菌病害方面的应用。

本技术方案能产生的有益效果：

（1）发明人对不同小麦产区的假禾谷镰孢菌进行了室内苗期致病性测定和真菌病毒筛查，发现弱毒菌株FC136-2A中存在一种dsRNA病毒；该dsRNA病毒的基因组由2条dsRNA组成，分别长为8951bp（L1-dsRNA）（Genbank登录号为MH057692）和5337bp（L2-dsRNA）（Genbank登录号为MH057693）；基因组测序和分析结果表明，该病毒是一种新的巨型双RNA病毒科（Megabirnaviridae）病毒，将它命名为Fusarium pseudograminearum megabirnavirus 1，缩写为FpgMBV1。

（2）本发明要解决的技术问题是提供一种在减弱假禾谷镰孢菌致病性方面具有显著效果的假禾谷镰孢菌巨型病毒FpgMBV1。

附图说明

图1为假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A的菌落形态图。

图2为特异性引物对Fp1-1/Fp1-2的PCR扩增结果图，其中M-DNA ladder；N-negative control；1-假禾谷镰孢菌菌株FC136-1A、FC136-2A、FC136-10A、WZ2-8A。

图3为假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A接种小麦幼苗7天后的症状表现图，其中A为FC136-2A；B为不接菌对照。

图4为FC136-2A中的dsRNA电泳图谱。

图5为FpgMBV1的基因组结构示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一、假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A的分离鉴定和保存

假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A的菌落形态如图1所示。

利用特异性引物对Fp1-1/Fp1-2对假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A的菌落进行PCR扩增结果如图2所示。其中假禾谷镰孢的特异性引物为：

Fp1-1 5’-CGGGGTAGTTTCACATTTCCG-3’

Fp1-2 5’-GAGAATGTGATGACGACAATA-3’

PCR扩增反应体系为：在25 μL体系中，2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL；Fp1-1（10 μM）1 μL ，引物 Fp1-2（10 μM）1 μL；模板DNA（50 ng·μL^-1）体积为1 μL，ddH₂O补足到25 µl。反应程序：94℃ 3 min，94℃ 30 s，57℃ 30 s，72℃ 45 s，40个循环；72℃终延伸7min；16℃保存。

二、室内接种假禾谷镰孢菌FC136-2A的致病力测定

室内盆栽接菌测定:将小米培养基扩繁的病原菌和无菌土以0.2：100的比例混匀，将菌土转入营养钵中（营养钵高7 cm，口径9 cm），每个营养钵内装土200 g，然后浇适量的水，浸透后，每钵播种10粒种子（品种为AK58），盖土（约50 g），每个处理4次重复，空白对照中不接入任何病原菌。将所有的处理于25/20℃，14/10 h的条件下培养，每隔2 d浇水一次，试验期间不施肥料。

将培养一个月的麦苗从营养钵中取出，用水冲洗干净后，按照Poole等所采用的分级标准进行病情调查，并计算发病率和病情指数。具体分级标准：

0：植株未发病；

1：地中茎明显变褐或第一叶鞘出现轻微症状；

3：第一叶鞘明显变褐，但叶鞘未变黑；

5：第一叶鞘变黑或者第二叶鞘变褐；

7：第三叶鞘出现变褐症状，或植株因发病而发育迟缓或接近死亡；

9：植株因发病而死亡。

根据计算公式：

河南省南阳市分离得到的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A病情指数为6.67，如图3所示，生物防治结果如：表1。根据表中数据可看出，在接种FC136-2A菌株后，再次接种其他的假禾谷镰孢菌菌株，是具有一定的防治效果的，其防治效果也均为正值，且都能在一定程度下降低其他菌株的病情指数，从而达成防治的目的。其中BJ331-2A与BJ346-4A、LF332-4A具有显著性差异，WZ2-8A(g)与WZ2-8A、LF343-3A、BJ346-4A、LF332-4A、LF332-3A均有显著性差异。因此，FC136-2A在生物防治方面对这些菌株是具有一定作用的。

表1室内苗期接种测定FC136-2A的生防测定结果

四、假禾谷镰孢菌弱毒菌株FC136-2A中发现真菌病毒FpgMBV1的基因组dsRNA

收集PDA培养基上培养5天的弱致病力假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A菌丝，用液氮将菌丝在研体中碾成粉末，装入灭菌离心管中。每0.2g样品中加入400 ul 2×STE，酚：氯仿：戊醇=25:24:1溶液400ul、10%SDS 92ul，室温震荡混匀10min。12000rpm离心10min，收集上清，移至新管。每600ul上清液加入114ul ETOH混匀后再加入0.04g无离子纤维素粉（CF-11），震荡混匀，冰浴30min。12000rpm离心1min，弃上清液，加入600 ul 1×STE with17%ETOH，混匀，静置3min。重复步骤4三次，12000r离心2min后弃上清液，加入600ul 1×STE，混匀震荡5min，12000rpm离心5min，将上清液移至新管。加入等体积预冷的异丙醇，-20℃下沉淀30min以上，4℃条件下12000rpm离心2.5min，弃上清液，用200ul 75%ETOH洗沉淀。12000rpm离心1min倒去残液，风干或37℃温箱内干燥10min。用25ul DEPC-H₂O溶解沉淀。加入2ul DNase I， 4ul 10×DNase I buffer和1ulRNA酶抑制剂，用DEPC-H₂O定容至40ul，小心混匀后于37℃酶解60min。取5 μL酶解后的dsRNA进行1％琼脂糖凝胶电泳。

结果显示在大约9kb和大于5kb处存在两条dsRNA片段（附图4），将其分别命名为L1-dsRNA和L2-dsRNA。

五、真菌病毒FpgMBV1的基因组dsRNA序列测定和分析

以菌株FC136-2A中所得dsRNA为模板，用随机引物Random Primer(26-mer) (5’-GACGTCCAGATCGCGAATTCNNNNNN-3’)进行反转录，反转录酶为Promega的M-MLV。 利用引物Random Primer(20-mer) (5’-GACGTCCAGATCGCGAATTC-3’)进行PCR扩增，所用的酶是莱枫生物科技有限公司（上海）的2×Taq PCR Master Mix。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳后回收500bp以上的条带，按照OMEGA公司的DNA凝胶回收试剂盒说明进行。

回收后将目的片段连接到T克隆载体pMD19-T(TaKaRa)，挑选阳性克隆送上海生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。根据已获得随机片段克隆序列，用primerpremier 5.0设计引物(包括正向、反向互补)进行PCR扩增。扩增产物与T载体的连接，转化大肠杆菌并测序。反应程序：94℃ 3 min，94℃ 30 s，（Tm-5）℃ 30 s，72℃ 3min，40个循环；72℃终延伸7 min；16℃保存。5’末端序列扩增采用经典的5’RACE克隆方法，利用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)在反转录产物cDNA的3’端加上polyC尾巴，然后利用接头引物及序列特异引物进行巢式PCR扩增。PCR产物与T载体连接，转化大肠杆菌并测序。3’末端序列扩增采用oligo RNA末端连接RACE(RLM-RACE)，在T4 RNA连接酶的作用下，将一断具有特殊修饰的寡核苷酸链(5’端磷酸化修饰，3’端氨基修饰)连接到RNA链的3’羟基末端。根据寡核苷酸链序列设计特异引物，与3’端序列特异引物一同将3’末端序列扩增出来。PCR产物与T载体连接，转化及验证测序。

使用DNAMAN软件的序列拼接功能将随机引物cDNA克隆序列、特异引物cDNA克隆序列、RACE克隆序列拼接起来，构成完整的病毒基因组序列。获得新病毒全基因组序列后，从NCBI Genbank 数据库下载+ssRNA或dsRNA 病毒各科病毒的核酸序列，利用 CLUSTAL_ X和MEGA 7.0和NCBI数据库（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）上的相关软件进行分析。

通过序列测定和拼接，获得了长为8951bp（L1-dsRNA）碱基序列如SEQ ID NO：1所示和5337bp（L2-dsRNA）碱基序列如SEQ ID NO：2所示的2条dsRNA序列（参见sequencelist），分析表明，L1-dsRNA和L2-dsRNA的GC含量分别是54.8%和56.9%，各包含两个开放阅读框（Open Reading Frame, ORF）,均为正义链编码（附图5）。L1-dsRNA中ORF1长为3639nt,编码蛋白质(1213aa)与RnMBV1的CP具有同源性，ORF2长为3432nt,编码蛋白质(1143aa)与RnMBV1的RdRp具有同源性。L2-dsRNA中ORF3长为2706nt,编码蛋白质(901aa)与海獭胶原蛋白部分序列有45%同源性，ORF2长为807nt,编码蛋白质(268aa)与已知蛋白没有同源性。L1-dsRNA的5’端UTR长1424bp，3’端UTR长320bp；L2-dsRNA的5’端UTR长1683bp，3’端UTR长109bp；两条5’端UTR中包含部分Megabirnaviridae的保守序列。根据基因序列和进化树分析，申请人明确了这两条dsRNA是巨型病毒科Megabirnaviridae的一种新病毒的基因组，申请人将其命名为Fusarium pseudograminearum megabirnavirus 1 （FpgMBV1）。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

<110> 河南农业大学

<120> 一种含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A

<160> 2

<210> 1

<211> 8951

<212> RNA

<213> 病毒（Virus）

<400> 1

gcaaaataac cgtggggagt agtctcttcg attattttgt tggattcttc tgaagggccc 60

ttccttggaa aaattcgaac cggcttgcgc cggtttgaat attttccttg gaaggggaag 120

taaatctatt tttgttacct acctggtagt gaagataggc ttcctgtgcc cggatgatgg 180

atccggacaa tggtcactga taacatcggg ggccgaattg gtcacgtctc cgggaaggag 240

acagacgacc aacatagagg atgcagatcc tcgtagaaag atccccctcc caggccgtcg 300

ttagccgttg gagtggtgag attgatctcg aaacaacgta gcacgtttcg cgtaatctca 360

ccacctcttc gagctagcat agcctggggg ggtaacgatg gatcttttta ttgtgaaccc 420

agcagtgggt ccgcaatgag cgggcaccgc tgatgaccca gaaatgggca ctcgtaagag 480

tgggctcacc gctatataaa taagagccga aacttgtaag agtacggtgt atgatctcaa 540

tctcggggag tgctacagag cacagaacca ttgagctgga caagcacgaa ggtgtgcggc 600

ctacatgcat tgggtccatc ttttctgcca cccgtagggt tggcggatag gtgagattac 660

gtgaaatgtg aggcccgcca gtttataaac ttttgagagg agccgtgctc gagcacataa 720

cggcactata aatatataaa agacaaaaaa cagagtacga acggatgaag gatctacata 780

aaattgtgaa aatgcggaag tggcagcagg cataggcgcg cttaacggcg ttagcagtcc 840

tgaagccacc atgcaccaaa aacagaccat ggcgggacgt cagccatgtg gaagtaaagt 900

tgtcccaact acgggtctca cactcttttg aatgcaaaac aaaatgctga aggagtccag 960

tgaacgccac cacacccaca ctcgagagag taggtgcgcg agggttagtg atacctgctg 1020

gaccagtcca aaaaccagcc gacagaatgc gcagctgagg taaacacagg ggtacccctg 1080

gtgagttagg ccgaagcgca ggatgacagg ccacagcgtt tgatcgctcg agcccctgga 1140

gggtgggcga tgtgttggtt agtcgcagga cggcgagacg cggacggccg atgcaccgaa 1200

aggtgtgagg taacgggaag tgggtcgaac aacccatggg ccgtagtccg tgcacagcta 1260

aacccgggag ggcatgctgg gcacggggct cgacaggaca gttaggttgc tcatgcaacc 1320

gttagcgcgc gtcggtcatg gtacgcagcc atggcttaag gtgtaaaggg ctctcgggca 1380

cgcggtcccc ttagttggtg gcactgcttg ccagcaggat tggaaaccct gccccgttac 1440

ggcggatgga gtgagtcgca acgcgaacat cacacaagtt tcgataacac aacgttttta 1500

ttcacataac aaaaatccaa aaaacgagct agccgcttca catttcacaa caacaaccat 1560

caaccgatca aagactctca gacgtgagag tttcatattt ttaaatcccc aaccaacaaa 1620

aaacgcaaac atgcagttcg gagatagcca gaaggtcgag ctcgcccgtg aggcggtgtt 1680

catgcccggt tccaaggggc acaagtatga ggaggtgaat gatgtcgaag ctctgcgacg 1740

gctgttctcc gcccttggcg acttcagcaa tgccgacatg ctcggaaaga tgaacgtgtc 1800

cgctgctctc gagcgcagcc tgcgtaacca ccaggccatt atgcagggag agcataagct 1860

gtccgtgcag gctgtgttca gccattttgc cgccaatgat gtgaatggca tcattgacac 1920

caggcctgtg ctcccactgg ccgaggtctc agaccagaaa aagctgcgtg gccacattga 1980

ggccacactg gcatcagtgc tgcgcactat gcctcaagct aacaaagaca tatggctgga 2040

ttcggtgaca ggcgtgctca atgggtacga tgatgccgga tctgacgggc atgtgcataa 2100

catcgccaga ctggtggccg gcttcatggc cgccaccgct ggcgcattgc aggctggggg 2160

agctggacga tccggtgcca gcttcttgcc cggatcggac atattgccca cattcggggc 2220

aggcttggca aacgactgga gtctggaagc actcggccag gccatccagc ctgactatga 2280

ttcgcgtgtg ggggcgtcca tcgtgatggc caaaaccatg cctgcactga accggaacca 2340

gcaggtgggt gcggtcattg tgctcagcaa tttctggcgc cagaattgcg ggtttaatga 2400

caactatttc aactccggac ggccctgcac atatgtggag ccgttttccg aggttggacg 2460

tgtcagctgc ctcatcacaa ctgaggccgc gcgtgacggt tggatgccac gcgttgctgc 2520

agcgggtgga gtgccccaac accacggggc tcatccgtat gttggcgcgc tcatggaaga 2580

tccaaactct tggatgggcg ccatcgccac atactgtggc ctcaccgaca gtgcaaagca 2640

tctgacggcg gcggccaatc tggtgctgca gctgcagggc cggttccccg agctacccct 2700

tacgtccgca tctatcccgc tggacgatac tttcagggat ctgaacttgg gtgacgaagc 2760

gtcggggcgt gttgatgagg atggcaatgc tatcaggcag ccggtgacgc tggagtcaat 2820

ggcgtgcagg aggttggttc acatgtggac cgccgagatc aagtaccgca attctgcgga 2880

caatgccgat ctgcccatcg cccatgcgca gtggcctgcc cacccctatg ttgggtggaa 2940

attcaacact gccgctgcgg ccacggcggc aggtcctgac acgttggcca acaatctggc 3000

cgatgaggtg ttcccagccg ggcacaccgc caacaacacg cgcagaacct accacaacaa 3060

gggttttgcg cgcaataccg cggctgcggc ggaagcaggt gcgcagccgg acacgactcg 3120

cacgccatgg gatgccctgc gcgggctgac cgcggatgtg cctgcagcgg atgccctcaa 3180

cgcgttggaa atagaccagt actggtacga tttctttctg aatgagaggg tggtcgatcg 3240

tgcgggcatg cgccgcgctt tagcatcgat gacgctagcg cagcgttttg atatgcttgc 3300

ctggctagca gacatcaatg tcgctggcac cacgtgggcc gcgcgctgga cggaccacgc 3360

tgatcttggg gtcacgagct tcgagctcag gaacttggac ctggctggtg gtcgctcagc 3420

atataacgac atcaggcgca tgttgcacct gaacccgcgc tttattggcg gcacgacgca 3480

tctagcgggt gtggtgccac ttgaatcgtg gtgtgggatt aaacgtgcta gacagttcat 3540

cctaggtggc ggcaaccaag caatggctga cgccgaaagc tcgcggctgg tgcggctgct 3600

gtgcaccaca aaccacggga atctggctgc tgccctcacc gggcacatgc ttgtgatgcg 3660

tgggtgtgca gatgtggcgg cggccatggc tgggctgact gaagcggccc agcttgcagt 3720

agttggcaac gttgtgacgt cgtgtgcgcc atacaacgag atcgccgatc tggtcaactc 3780

gcggtgggag cagcacactc ccactgggct gcaggacgat taccaggcct acctgggcac 3840

aatgcttgcg cgtgcaggca tttatgacgt gctgccggca ctgcagcagg agggtacgtg 3900

cctctcgttc tccgagagaa tatacatggc tccgacgtca gcggagaaca tgatggctga 3960

ggtggtacag cgtgcgctgc atccctcata tctggaagtg gttcttccag gcgttttcat 4020

cggtggaggt ctgccctcat ttaagggcat gtccgacatg tttggtgaag accataagag 4080

tgtgctcagc cgcatgaagc tgggcaaggg cctgaccata ctggagatgg ccggatatct 4140

cgaggtgctg gccgccctgg gtggcttgca ctacgataac ctggtgctgc ggacaacctt 4200

gacgctgccc gatgaggctg atccatggca gtgtgacttt gccaaggagc tgctgtcctt 4260

tgcggccaga aagagtgatc tggtgccagc atcggtgatg ggagccgtgc caaatgcatg 4320

gctgctctcg ttcagggccg tgggtgtgcg ggctctcgag cttcagacgc gcccatgcct 4380

tgtgcctgtg cgcgaccaga acgaggtcgc attctgtggg ccacagtatc gccgtactgt 4440

gtggtcgcct atataccagg cggatcgcgc tcggttgccg ttgtcccgct attgggcaac 4500

gaagaaggtg ggtcgtgaat gtggctacac attcgccata cggcagattt tgaccaccgc 4560

cgcggacagc ctgatggagg gcaacatgcg gaaggtcaag gatgcaggag catggcagac 4620

gctgcaaatg cagactgtca cggttggcaa ggtgcgtggc aacaacgatg ccatctcgga 4680

tgtgcgctca gtggcgcagg agctgggtgt gggacaggtg tggacggaga atgcgttcaa 4740

tgcggcgcgt aaagcttgga gggatgagat agtcaatcct tcaggcagtt ttgggcgtcg 4800

ttctatgcag acattctccg ggctgcagct tgacacgccc gtgccacaga acacggtgcg 4860

ttcgaggaca ctgaggacag cgggtacaat gtaccatctg tcctcaatag cattcgagtg 4920

tgtgcgtgag ctgttgcagg ccagagcaca tgtgttgagg tttaagatgc aacacatggt 4980

gacgctgctc cctgggcagt cgctcgagtt gaaagagcag gtggctcgtg gtgccgcaga 5040

gaatactggc accaaaagca tagacgaaga ggggacaatg tctgctctgt caggggtgga 5100

aggcgttgcg gatgtgcttg gcacatccac gttcacggcg caagtgcgcg ccaggctgcc 5160

cgacctacta caacgcagca ttgtcgtcaa accacaggga ttggcagacg tgtcggatag 5220

cccagcggtt gcggaggtcg cagatgcggc cgagcagtcg aaaaactaaa aggcattttc 5280

gcgtgtgacg cagtcaaatc gttgcttgat cgtagacccc agatagacat aatttcatgg 5340

gagcaatgct ttgacccgat tgtcatgaca cgctatgttg tgcctgggcc agaatcatcc 5400

gtgcaggcca cggattataa tacattcttt aacactacgg agccgacacc cggcaaattc 5460

acacgacatt tccttgagtt tttgaagact ggcgtgatct ctggtgcaat cacagatctg 5520

gcacgtgtgc gcaagtggtt cagtgaatgt ttcccaaatg cagtgccaaa ctggttgatg 5580

acggcagaga ttgatgcggg cgtgagtggg ccgtttgaga tggagaagga gctggtccgg 5640

caggcgaagc ttgcctcgga gcgtgtggtg gtgtacatgg gttcgggggg cggcaagagc 5700

acgcttggcg gtgccggcga ccatgaccgc atcttggatg cgtcaggtct caggccagag 5760

tgggagaagg cacgcgcgga agcactcgtg tctgatgact ggagtcaagc caaccagtta 5820

ttgcgcgatg cggtccgcag gcagataaac acgttggatg gcccactgtt ctcgtgggcg 5880

ccagatgctg tgccgaggga gttgttcggg cgtgaggtga tagtgctcca ggacggcctg 5940

attgcagatg ataatcacga tcaggacata atggatagca accagaaggt gttggaggat 6000

gcagccaagg attatcctta cataccagtt gttcgtgcaa ccggttatgt tggcctagac 6060

gtggttgacc atgcggtagc aacgacacag ctacgtggtg tggggcgttt caattattcc 6120

cggactgtct cgcggtcctc agatgtgcag ttcggcacaa ctgatgtcat ggcataccgc 6180

tccacaatcg cgggtaatca actttccttt gtaaatatgg gcaagagtgt gtggagattg 6240

gagtgcgtca ggggtgattt gacccactat atccggagcc tgctggacgg gactggactc 6300

agtgacaggc agtgtgcgaa aatgctggat gctattttcc ctgtcactga ggtggctctg 6360

cgcgaaaggc agagggtgga cagacgtttg ctgttaaagc tagtgcggtc ggatttgcga 6420

cacggggtgg atctcaacga gattgcatcg ttcctggcga agtgtagtgg ccttggctgg 6480

caagctatgg caaaccacta tgttgcgttc aggacggcgc cgttgtttag tgcgtggttg 6540

tcggacttcg tgggggtctt cggatggcag ggaattaagg cgtacgagag taggaccaaa 6600

gcagttcatg gtcttgctcg acgtgggcgc cgagttgtgc cagtcagtgg gtcagacagt 6660

agtgtccggc ctgctgatgt gatgtacatc aactgcctga tcggaagata ctaccttgca 6720

gaggttgcca gcgatagcac agttgaggac cgtgtcgcgt attacggcca gcatgtagct 6780

tatgacagtg tagcacgtca gttcacagtc gaggcacaca agcgtatgat ggatgagttt 6840

tatcgggaac gcgctgctac agcagggcgt gtctggatgt tatcgcagtt gaatagtatg 6900

gaagatttct tgatggagta tgcctcgttc ggtgcctcag ggagcgcagg gaagggctcc 6960

ggtgtgcgat ttaacattga gcatgccgtt tcaaaaagat tatggttgtc agatttgacg 7020

gcagaggagg tcgttgagat cctgacaacc agcgaacccg gtgcccacgg ggtgacggtt 7080

gtcaagcgtg agtcaggtaa gatgaggcag ctgctgcccg cgccattgca tcactggcta 7140

gcggagaatc ttctggtcgg tgaggttgaa tctcgcattt tcggcgatat gaaggaggtt 7200

gtgatagaga agagtgccat tgaggagttg ttccagtttc atgacaggcg taagcgtgtg 7260

atggcaggag acccaattgt gtgcctggac tgggcagatt tcaatatcac acacaatctg 7320

gacgattttg ctgcctattt cttggctttg ggcagtgctg ctaaaacaca cgcgcacggt 7380

gaattcattc cggggatgga taaaggctca ttcctgcaag ctgtggcgca ctggtgtgcg 7440

agcgccgtct acaatatgaa catgcgcaac agtgccgatc cggatgcaac agaacaattg 7500

ctcaatcgtg gcttatggtc agggtggcgg acgacacagt tcttcaacac cagctataac 7560

gttgcgtaca gccgtgaagc cgctgatttc gtgaggcatc actacggtgg gactgtgaac 7620

atgagccagc acacgggtga tgatgtggtt gctttcacgg acagctgctt gacaagtatg 7680

gctctgattg caggcatgtc gtggatgaag catgagctcc aggaagccaa gcagcatatc 7740

gattcggacg tggctgaatt cttgcgcgtg gaatacggtc gtgatggcgt tgtccagggc 7800

agcctcaacc gcgctatttc ctggggtttt gtgagctcag acacacagag cccgatcatg 7860

atcagtggct tcgaacaggc agtgggaacc aatgagtcga tcaaccagat gatccgccgt 7920

ggggggagca ttgaggtgct tgaatcgtgg cggtacattg tggtccagca ttgggctacc 7980

atcaagagta tcgctgggtc agccacccca tctgccaagc tgctcaggct tgctgttgag 8040

cgtggtggct atgggtgcag cagatacggt gagttgcact ccctgctgcc agtgcacttg 8100

gggggatggc cgaacaagca ggagcacgct tcggacgcac gtgtgccgcg aaatgctgcc 8160

cgcgtgctgc ataagctgag ctcgattgcg gatgctctcg gcgcaactat ttcgaaccct 8220

gagctgctca aacaactcgt ggtcgaggac acctacggca atgactggcc gacggacgca 8280

aagaggcgac tcgacgagct gcaccgaatc cgcctgcaag gaataatatg tgagcgtaac 8340

ttgaaggtgg ctgcaatctc agaagcggag tttacctcga gagaaccact cagctcaggc 8400

gatttatcgg atgtagcacg cgccatgcag ctgatggcag actctgaagt gcctgcgcag 8460

gagccaatcg atctaaactc tacggccgat gccatccgtt caatggcgct aggctcggca 8520

aagatgggtg atcccacgat cacgatgctc aagcatggcg cagcaaagat gttgccggcc 8580

gcggtgatca agaagctgtc tggagcgggc ggacttgagt tgttatcaag gatggccgca 8640

gttgcgagcg actatattat tgatggctgt ttgagccacg agctgaatct gccgatgtcc 8700

actggtggag tggtgccgcc tgctctgcgc tgctatggcc acttccttgt ggattcatgc 8760

ttacgcagtg gcaggcggaa ggctcgcacg tgctgaagga ttacggcatg ctgcggcgca 8820

ggctagaagc cgtacaaatg gaattcggca aacaatttag acatgtatat gtcaacaacg 8880

ggttaatcat gatgtgatct cacctcagga cccaatgcat ttatggctgc cgccggcacc 8940

ccataaaaag c 8951

<210> 2

<211> 5337

<212> RNA

<213> 病毒（Virus）

<400> 2

gcaaaataac cgtggggagt agtctcttcg attattttgt tggattcttc tgaagggccc 60

ttccttggaa aaattcgaac cggcttgcgc cggtttgaat attttccttg gaaggggaag 120

taaatctatt tttgttacct acctggtagt gaagataggc ttcctgtgcc cggatgatgg 180

atccggacaa tggtcactga taacatcggg ggccgaattg gtcacgtctc cgggaatgag 240

acagacgacc aaggtagagg atgcccatcc tcgtagaaag atccccctcc caggccgtcc 300

ttagccgttg gagtggtgag attgatctcg aaacaacgta acacgtttcg cgtaatctca 360

ccacctcttc gagctagcat agcctggggg gtaacgatgg atctttttat tgtgaaccca 420

ggtttgggtc cgcaatgatg gggctccgct gatgacccag atatgggcac tcgtaagact 480

gggcttaccg ctatataaat atgagcccaa gcttggaaga gtacggtgta tgatctccat 540

ctcggggaat gctactgacc atttaaccat tgagctggac gagcacgaaa gtgtgcggcc 600

tacatgcttt gggtccatct tttctgccac ccgtagggtt ggcggatagg tgagattacg 660

tgaaatgtga ggcccgccag tttataaact tttgagagga gccgtgctcg agcacataac 720

ggcactataa atatataaaa gacaaaaaac agagtacgaa cggatgaagg atctacataa 780

aattgtgaaa atgcggaagt ggcagcaggc ataggcgcgc ttaacggcgt tagcagtcct 840

gaagccacca tgcaccaaaa acagaccatg gcgggacgtc agccgtgtgg aagtaaagtt 900

gtcccaacct acgggtctca cactcttttg aatgcaaaac aaaatgctga aggagtccag 960

tgaacgccac cacacccaca ctcgagagag taggtgcgcg agggttagtg atacctgctg 1020

gaccagtcca aaaaccagcc gacggtgggt ggatcagagg taaacatgcg gtgagttagg 1080

cctgacgcaa ttggcgagca caggtaaaca cgcagtgagt tagaccgaac catcaaccga 1140

caggccactt tgtttcctgc cgcgcgcccc aggtgggtgc ggtgggttgg ttagtcgcag 1200

gacggcaaga catggacggc caaggcaccg aaaggtgtga ggcaacggga agtggctaac 1260

gccatgggcc gtagtccgcc gtaagctaag tgcattgcat atgctcgcgg cggggctcga 1320

caggacggtc agcgcatgtc ggtcatggta cgcagccatg gcttaaggtg caaagggctc 1380

tcggtcgtgg ggacacaacc cacggcagca ggtgtggaaa gcctgccccg ttacggcgga 1440

tggagtgagt cgcacagcga atatcacaaa aatcgcaaag atatcaatca ttaaacatat 1500

tttactcttc ctcttgtttg tacgccgata gatgacaaat tgccatcagt ccgctgacca 1560

gctctgaagg attaacagtt ccaaccagac cttcgcacac tcgatatcac accaggacgg 1620

tagtggtatc cattttatat atatatagta tatacataca tatatacaag tacacacaca 1680

tcatggatgt caaggccgtc ccaaatgtgt ggtcctatgc cacagctgag gcatgcgaga 1740

cggaaatacg gcgtcggtat gaaggggatg cggtggagca attctttggg gccatgcaag 1800

tatgccgcac atgggaacca ctgcagggtg cggacatttg cctgtacgta ctgcgcggta 1860

tgtgtgccta cgggataggc cccggttaca agcaacaccc aggaacgggc cattatgtgg 1920

gcccgactgt gggtgggcga agtgtggctt ggggtgtccg cgatcggagc gggaagcccc 1980

ggcaggtgtc ggccgggttc atggacatga cgagtctgat ggccccgctc tctgcggctg 2040

ctgccatgat agaggcgacc catgaggaat tgttggaagc cacttgcctg gggggcttag 2100

tggcttccat tggggcagag cgtatgggcg gtgcaaagtg ggcacagttc agaagcacgc 2160

atgagccaaa ctattacaag gatgggcact actggcttga cgcgtacctg cgcagtggca 2220

tacttgatat gggtgaacag aagtttcggc ggggcgccgt ggtgcctgaa cgtggggggg 2280

gctggctgcc gcatgggatg ctggatgagg gagatcctgt catctccaga ctgtgggaaa 2340

cggttgcaga actccagttt tcctacaaag ccgatgatga agaaacatat tggcctggat 2400

atatacgtga gaaggtggag aaggccgcgg aagtggtgac ggttgcactg cgtggtggtg 2460

actcgtatgt caatgaggtt gatcgtgccg ttgaaagcaa ttttggatcg gatctgttta 2520

aagggaaacg ttttgggttg agcgatgcgg ccaagtggtg caagaccatt gcatttgctg 2580

tacaacagcg ggcgagtgac gcgtttgccg aaccaataag ggcgggtggc actgagccaa 2640

gtgaggcagg gccctcgaac gcctggaagt tcgtggcgga tggacgtctc gggtatgtgt 2700

ctgtggacga aacggcacgt gaagtggtct ttggaccgtt ggatgcaggg tttacagaag 2760

tgcaacgtgc cgggttgtca ctggcaggcg agctgagtgc gcgcgtgccg gcaggaaact 2820

ccatgttgct ctgcgaggat gatctgcgtg agcgtaacag gcgagaagca cttcgtggtc 2880

ctcccggcaa ggatggccgc gatgggcagg acgggcggga cgggcgtgac ggaagttcac 2940

ccgcaccggc gtccgttgct gcgcagctgg tgcggtcgca cctcgatgtg gtcagaggtc 3000

ctaagggaga cgcagggccc agagggctgc cgggcttgtg ggcatcatac acaattgagg 3060

aagccgatgt gtgcgcaccg gaggctgtac cggcagtggc agtggaccca gagaatcgga 3120

aagtgataat tggtcgggtg ccagggttca aggacgttgt ccaggcggcg ctgacggcat 3180

gtgctgtgaa accagaaggt ggttcgtatg cgattgttcc tcccggcgat gacattgtgc 3240

tggagagtga cgtcgcggat gcggtggcgg agtacctgcc gcggtggttg ccacaggaag 3300

accccggcta tgttacgggc cggtctgtac catcgtggtt gcccgacact gaccctggat 3360

atggtgcagt tcctagctgg ctgcctgtcg aagatcctgg gtatgtcaca ggtagggctg 3420

tgccggactg ggtgcctgac caggaccccg gatatgggag cggggtacct gactgggtgc 3480

ccaaggaaga tcctcactat gctgtggggc gcgctgtacc cacgtgggtg ccgaatgagg 3540

atccagggta ttcaagcggt cgcgtggtac cagaatgggt accggatctt gaccctgggt 3600

atctgtgctc gctgcccggc tgggtgacgg ccgatgagcc caactatgtg cgcggccgcg 3660

gtgtgccaga ctgggtacct gacgaagatc ctagttacag cacagggaga tccgtgcccg 3720

cctggcttcc aaacacggac ccagggtatc ttacggcact gcctgattgg gtggcgcagg 3780

acaagctggc caccaaggac gaggttgcca agaaacagga ttggctggag ttacgcgcat 3840

tggatgccaa cgataacccc gcggtgagat gggggactga cggacaaccg gagcatgcta 3900

gcacgctcgg gcccgcaaat ggcaggaacg tgctgtgggc gcaggtggcc acaagcgtgc 3960

gtggtagggt ggctgacacg atagtgaatc gcaatttgca ggcacagatg accgcactga 4020

ggctggcatc gctggtccag aacgatgata tgcgtctgac ggcagccgtc ttcaggaacg 4080

ggttcaccga ttcccttgcc gtggcgctgg ctccattgct ggctagtgcg gcaagggagg 4140

cagggggtga ccatccttca tggtctttca tggcacagcc ggaatgggtg tgcgccgatg 4200

cacagggctt ggaacgtgcg atggatcagg cggcgggtag tgacactagg cttgtcggcc 4260

gcctgttgct ggccgcggcc cgaacggata tggttacatt ctgttcatcc gtgctgggac 4320

aggatcgagc agacgcggcc gcatgcacat atacgctgcg cctgcaagat ttgatagcaa 4380

tgcaatagat catttcggcg tccaggacgt ggtccaggca catggatatc tcacacattg 4440

acgtcagtca tgtgcagcat gaacgtgtgt tcgactggta ccaggcctgg gtgctggaaa 4500

caatggcatc aaggagcgcg gcccggcggc agcgcgcggt gcagctgcta ggcgaagtgt 4560

gccaagcatg gcgcaaacgc aaagcaggtg gcgctgtact cgcagcggcg actcagtgga 4620

cagggctggt gcgccataac gaaggcgtta gacgtagagc tcttgggctt tgggtggcga 4680

gacaccgtga gcagaaggca gctcggcagg cagccgctgc gcacagaatt agtacatggg 4740

ggaattatgt gctgatgcat gtggggctgc ggcagtgggt gcgccagcac aggctgcgga 4800

aggcgagggc agtagaaaag ctgttgaggc ctgcggtaga acagcttgta tacccgcagc 4860

gcctcaagca ggttcgtgag cgctgccttc gggactggtg cgttcgccgg cgccaggtgt 4920

cggccacacc cgcagccgcg cctggtgtgg gcaggacgtt ggttgaggtc gctaactctg 4980

tcgcacatac gtacggcttg accagctatg aggaattggc tatggctggt gcgatgccct 5040

ggacagtgaa tgtgtctgcg cctcctggag agtacttgct gatagccgag agagctctag 5100

atgagctgca gggatgggcg gtcctggaaa aatggggcgc tgaggaggaa gctgaaaaac 5160

ttgaggaatg ggcggtgaag catgtcatca ggaaaatggc agagtcacaa gacttgtggg 5220

agggatagcc ccacgcggca aattatgccg caaagttatc cagcaaacaa cgggcaaggc 5280

gcgaggaatc tcgtcggccc aatgcattca cgtctggtgg gaaccagact gaaaagc 5337

Claims (2)

1.一种含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌（Fusarium pseudograminearum）菌株FC136-2A，其特征在于：所述菌株的保藏号为CCTCC No：M2018254，保藏日期为2018年5月7日；

所述巨型病毒FpgMBV1的基因组为两条dsRNA，两条dsRNA序列分别如SEQ ID NO：1、SEQID NO：2所示。

2.如权利要求1所述的含有巨型病毒FpgMBV1的假禾谷镰孢菌菌株FC136-2A在假禾谷镰孢菌病害防治方面的应用。

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