CN108653256B - 一种复合纳米钻石药物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种复合纳米钻石药物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108653256B
CN108653256B CN201810585170.9A CN201810585170A CN108653256B CN 108653256 B CN108653256 B CN 108653256B CN 201810585170 A CN201810585170 A CN 201810585170A CN 108653256 B CN108653256 B CN 108653256B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mto
drug
dox
composite nano
nano
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810585170.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108653256A (zh
Inventor
李英奇
杜祥斌
赵文静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanxi University
Original Assignee
Shanxi University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanxi University filed Critical Shanxi University
Publication of CN108653256A publication Critical patent/CN108653256A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108653256B publication Critical patent/CN108653256B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/136—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline having the amino group directly attached to the aromatic ring, e.g. benzeneamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5115—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种复合纳米钻石药物及其制备方法和应用。所述药物是以纳米钻石(Nanodiamond，ND)为载体，在柠檬酸钠存在下，先后将米托蒽醌(Mitoxantrone，MTO)和阿霉素(Doxorubicin，DOX)以物理吸附的方式负载于ND表面得到复合纳米药物(ND/MTO/DOX)。通过JC‑1法检测细胞线粒体膜电位的变化情况，发现该复合纳米药物造成线粒体膜电位下降的程度最大；通过MTT法证实，MTO与DOX的协同效应，在很大程度上提高了对癌细胞的杀伤力，且该复合纳米药物具有缓释药物特性；共聚焦结果表明ND/MTO/DOX复合纳米药物主要定位于溶酶体中，且随时间延长，药物未迁移到细胞核，我们推测该体系可能造成溶酶体通透性增加，使大量水解酶释放，从而促进细胞凋亡。该复合纳米钻石药物可在制备抗肿瘤药物中应用。

Description

一种复合纳米钻石药物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及纳米药物，特别涉及一种同时负载两种抗癌药物的纳米钻石多重药物，具体是一种纳米钻石/米托蒽醌/阿霉素复合纳米钻石药物及其制备方法和应用。
背景技术
当今社会食品安全和环境污染问题日益严峻，癌症发病率逐年上升，已成为最主要的人类“杀手”之一。目前癌症治疗手段主要有：手术、放射与化学药物治疗三种常规方法。其中因化学疗法操作简单，被广泛用于临床，例如阿霉素、甲氨蝶呤与米托蒽醌等。在某种程度上，化学疗法是有效的，但其在正常组织的非特异性生物分布和对健康快速分裂细胞的影响，导致病人产生严重的毒副作用。此外，化疗药物存在溶解度差、在体内降解快速且血液循环时间短等诸多缺陷，故急需设计高效且低毒的药物靶向输送系统治疗癌症。
随着人们对肿瘤微环境的认识和近年来纳米技术的迅速发展，纳米材料已然成为科学家们的“研究宠儿”。在众多纳米材料中，由于纳米钻石(ND)生物相容性好、表面易修饰且比表面积大等诸多优点，已被广泛地用于靶向递送药物和基因。以蒽环类为主的化疗药物，如阿霉素，表柔比星，柔红霉素，可以通过静电吸附、π-π相互作用、范德华力和氢键等方式物理吸附于ND表面。纵然纳米钻石载药体系在很多方面尤于游离的药，但肿瘤仍难消除，易复发，这归因于该纳米材料体系仅仅携带一种化疗药物。因此，亟需制备可以同时携带多种抗癌药物分子且可以协同治疗肿瘤的纳米钻石新体系。
米托蒽醌(Mitoxantrone，MTO)是一种人工合成蒽环类抗肿瘤药物，是一种临床上广泛应用的抗癌药，在乳腺癌、急性白血病和淋巴瘤中表现出较高的疗效，可通过物理吸附负载到ND上。基于阿霉素和米托蒽醌的结构相似，本文以羧酸化的纳米钻石，在柠檬酸钠作用下物理吸附化疗药物米托蒽醌与阿霉素制备得到多重纳米药物，并研究了该种药物的抗肿瘤活性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种同时负载两种化疗药物的纳米钻石药物及其制备方法，以及该药物在抗肿瘤中的应用。
本发明提供的一种同时负载两种化疗药物(米托蒽醌与阿霉素)的纳米钻石药物的制备方法，包括如下步骤：
按照质量比7-10：1.5-3：1称取ND、MTO与DOX，先将ND超声分散于柠檬酸钠溶液中，30min后，加入MTO，室温搅拌0.5-1.5h，离心，用蒸馏水洗涤直至上清液为无色，收集上清液，记录液体体积，得到ND/MTO纳米药物；再将ND/MTO纳米药物超声分散于柠檬酸钠溶液中，30min后，加入DOX，室温搅拌0.5-1.5h后，离心，用蒸馏水洗涤直至上清液为无色，收集上清液，记录液体体积，所得ND/MTO/DOX复合纳米药物置于真空冷冻干燥机干燥，备用。
ND、MTO、DOX质量比优选为8.3：2：1。
柠檬酸钠溶液的浓度为1.0M。
室温搅拌时间优选1h。
上述制备的复合纳米钻石药物可以在协同抗肿瘤中应用。
与现有技术相比本发明的有益效果：本发明选用的纳米钻石材料具有生物相容性好、表面易修饰且比表面积大等诸多优点；米托蒽醌和阿霉素是两种广泛应用于临床的抗肿瘤药物，在治疗乳腺癌和淋巴瘤中表现出较高的疗效，且各自可通过物理吸附负载于ND上；鉴于阿霉素和米托蒽醌的结构相似，在柠檬酸钠作用下，便于一起通过物理吸附的方式负载于ND表面，且制备方法简单、省时。所制备的复合纳米钻石药物抗癌效果优于单一纳米钻石药物。
前期研究表明，纳米钻石载药体系被细胞摄取后，药物解离进入细胞核从而诱导细胞凋亡，而本申请所制备的ND/MTO/DOX复合纳米药物新体系则可能是通过改变溶酶体通透性的方式，使得大量的溶酶体水解酶释放，最终达到抑制肿瘤生长的目的。
通过JC-1法检测复合纳米药物对人肝癌细胞(HepG2)内线粒体膜电位变化情况，发现纳米钻石对其几乎无影响，而与游离药物对比，复合纳米药物造成线粒体的膜电位下降幅度最大，暗示着纳米钻石是优秀的载体，毒性小，且合成的复合纳米药物对癌症的治疗有较好的疗效；通过激光共聚焦结果表明ND/MTO/DOX复合纳米药物主要存在于细胞质中，且定位于溶酶体中；经MTT法检测复合纳米药物对HepG2细胞的活性，表明ND/MTO/DOX复合纳米药物具有抗癌选择性，同时利用MTO与DOX的协同效应，使复合纳米药物体系疗效优于单一纳米药物，在很大程度上提高了对癌细胞的杀伤力，且具有缓释药物特性，所以ND/MTO/DOX复合纳米钻石药物可在制备抗肿瘤药物中应用。
附图说明
图1 各种纳米颗粒的红外光谱图
图2 各种纳米颗粒的扫描电镜图
图3 JC-1染色法检测ND/MTO/DOX复合纳米药物对线粒体膜电位影响
图4 ND/MTO/DOX复合纳米药物抗癌选择性
图5 不同种类的药物对体外培养HepG2细胞活性的影响(24h)
图6 不同种类的药物对体外培养HepG2细胞活性的影响(48h)
图7 纳米钻石对体外培养HepG2细胞活性的影响(48h)
图8 ND/MTO/DOX复合纳米药物细胞内成像图
图9 ND/MTO/DOX复合纳米药物细胞内定位图
具体实施方式
以下为实施例中使用的材料：
纳米钻石(ND，元素六，直径大约140nm,Ireland)。
阿霉素(DOX)是盐酸多柔比星，分子式为C27H29NO11·HCl，分子量为579.99，山西普德药业有限公司，规格按C27H29NO11·HCl计算为10mg。
米托蒽醌(MTO)分子式为C22H30Cl2N4O6,分子量为517.4，上海生物科技有限公司，规格按C22H30Cl2N4O6·HCl计算为1g。
二水合柠檬酸钠(C6H5Na3O7·2H2O，分子量为294.10)为天津市登峰化学试剂厂。
实施例1
一种纳米钻石/米托蒽醌/阿霉素(ND/MTO/DOX)复合纳米钻石药物的制备方法，包括如下步骤：
称取1mg ND,将其超声分散于柠檬酸钠(Na3Cit，1.0M，1mL)溶液中，30min后，加入240μg MTO，室温搅拌1h，离心，用蒸馏水洗涤直至上清液为无色，收集上清液，记录液体体积，得到ND/MTO纳米药物。随后将ND/MTO纳米药物超声分散于柠檬酸钠溶液中，30min后，加入120μg DOX，室温搅拌1h后，离心，用蒸馏水洗涤直至上清液为无色，收集上清液，记录液体体积，所得纳米钻石/米托蒽醌/阿霉素(ND/MTO/DOX)复合纳米钻石药物置于真空冷冻干燥机干燥，备用。
通过测定DOX在480nm处吸光度(DOXε480nm＝11500cm-1·mol-1·L-1)，MTO在609nm处的吸光度，根据各自的标准曲线，算出上清液各自的含量，从而得出MTO与DOX在ND上各自的吸附量分别为119.2±3.0μg/mg和60.1±3.0μg/mg。
实施例2
红外光谱图表征
通过红外光谱仪，我们可以对ND/MTO/DOX复合纳米药物的表面化学性质进行表征，确定MTO与DOX是否吸附于ND表面，且ND/MTO/DOX复合纳米药物中是否含有Na3Cit。取少量干燥好的纳米颗粒与KBr混合压片，采用红外光谱仪测定各自的红外光谱图，并分析谱图。
图1为各种材料的红外光谱图。如图1(A)所示，在ND的红外光谱图中，可以看出其表面富含羧基，表明ND成功被强酸氧化处理；在ND/MTO/DOX复合纳米药物红外光谱图中，图框标记的特征吸收峰与图1(B)中Na3Cit红外谱图(图框标记)的特征吸收峰一致，说明在ND/MTO/DOX纳米药物中存在Na3Cit。同时，在ND/MTO/DOX复合纳米药物红外谱图中，不仅含有来自DOX分子中苯环的特征峰(1094cm-1：C-O收缩振动峰；1409cm-1：羟基的面内变形振动峰)，又有MTO分子中的酚羟基C-O伸缩振动峰(1214cm-1)和C＝C-H的平面外弯曲振动峰(824cm-1)，结果证实ND/MTO/DOX复合纳米药物中含有MTO、DOX与Na3Cit，该纳米药物成功制得。
实施例3
为了观察各种纳米材料的形貌，我们采用扫描电镜(SEM)对ND、ND/MTO和ND/MTO/DOX纳米药物进行表征。取少量干燥好的纳米颗粒于导电胶上，粘样，喷金，并上机检测。
图2为ND、ND/MTO和ND/MTO/DOX纳米药物的扫描电镜(SEM)图，从图中可以看出，与ND相比，ND/MTO和ND/MTO/DOX，表面明显有堆叠的“云团簇”(箭头指出)出现，且ND/MTO/DOX表面上的“云团簇”更明显。这可能因为柠檬酸钠的存在诱导MTO与DOX聚集，且ND、MTO与DOX之间存在π-π堆积现象，实验再次证明该纳米药物成功合成。
实施例4
线粒体膜电位下降是细胞早期凋亡的特征性标志，如果线粒体的跨膜电位发生崩溃，则细胞凋亡不可逆。我们采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)，可以快速且灵敏地检测到细胞的线粒体膜电位变化情况。凋亡细胞的线粒体，膜电位下降或缺失，使得荧光探针JC-1以单体形式存在，488nm激发，呈现绿荧光；而正常健康的线粒体，膜电位高，JC-1以聚合物的形式存在，则呈现红色荧光，通过检测红色荧光到绿色荧光的转变程度即可评价线粒体的膜电位下降程度。
将对数期生长的HepG2细胞(密度：1.8×105个/盘)接种于35mm培养皿中，置于培养箱(37℃，5％CO2)培养至细胞完全贴壁，弃除旧液，分别加入含ND(2.8μg/mL)，DOX(0.5μg/mL)，MTO(0.5μg/mL)，DOX+MTO(0.5μg/mL)和ND/MTO/DOX(ND：2.8μg/mL，DOX+MTO：0.5μg/mL)的培养液孵育24h后，弃除旧液，冷PBS洗涤2-3次，用胰蛋白酶收集细胞。上机前离心，用涡旋混匀配成的JC-1工作液(500μL 1×Incubation Buffer+1μLJC-1)重悬浮细胞染色，在细胞培养箱中孵育15-20min。再用1×Incubation Buffer洗涤1-2遍，除去未被吸收的JC-1以免干扰，采用流式细胞仪上机检测(激发：488nm；红色荧光发射：580/590nm；绿色荧光发射：510/527nm)。绿/红荧光强度比值代表细胞的线粒体膜电位变化趋势。
图3为各种材料对线粒体膜电位影响情况，我们采用FL1表示绿光的强度，FL2表示红光的强度，故通过比较FL1/FL2值，即可以评判药物对癌细胞早期杀伤力。由图可知，ND、DOX、MTO、MTO:DOX和ND/MTO/DOX的FL1/FL2值分别为0.06％、4.33％、33.79％、30.39％和54.41％，由此可得，ND颗粒对细胞线粒体膜电位几乎无任何影响，且与游离药相比，ND/MTO/DOX使线粒体膜电位下降的程度最大，这暗示ND是一个优秀的载体，同时合成的复合纳米药物对癌症的治疗有较好的功效。
实施例5
为了探求ND/MTO/DOX纳米药物的抗癌选择性，我们采用MTT法分别研究药物浓度与作用时间对HepG2癌细胞和大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC-12)两种细胞株的毒性影响差异性。将对数生长期的HepG2细胞和PC-12细胞(每孔细胞密度：5.0×103个)分别接种于96孔板，待其16h贴壁后，加入一系列含不同浓度ND/MTO/DOX纳米药物(药物总浓度：0.5、1、2和4μg/mL)的培养液200μL，以未经处理的细胞作为对照组，设置6个复孔，分别培养24h和48h后，每孔加入5mg/mL MTT(20μL)，置于培养箱4-6h后弃除旧液，随后加入150μL DMSO，振荡10min，采用酶联免疫检测仪进行测定。
图4为ND/MTO/DOX纳米药物体系作用于HepG2癌细胞和小鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC-12)两种细胞株的差异性对比图。我们发现，无论在24h(图4A)还是48h(图4B)时间段或者何种浓度下，该纳米药物对PC-12的毒性基本小于对HepG2癌细胞的毒性，且浓度越大，两者的差异性越明显。表明该纳米载药体系具有抗癌选择性，故我们将会对该纳米药物体系与HepG2癌细胞的生物效应进行深入研究。
实施例6
不同浓度ND/MTO/DOX纳米药物对人肝癌细胞(HepG2)活性的影响
为了定量探究ND/MTO/DOX纳米药物对人肝癌细胞(HepG2)活性的影响，我们通过MTT法研究了不同浓度药物以及不同处理时间对细胞生长情况的影响。具体方法如下：将对数生长期的HepG2细胞(每孔细胞密度：5.0×103个)接种于96孔板，待16h贴壁后，分别加入含不同浓度的DOX，MTO，DOX+MTO，ND/MTO，ND/DOX，ND/MTO/DOX的10％FBS/DMEM培养基配制培养液200μL，以未经处理的细胞作为对照组，设置6个复孔，分别培养24h和48h后，每孔加入5mg/mL MTT(20μL)，置于培养箱4-6h后弃除旧液，随后加入150μL DMSO，振荡10min，采用酶联免疫检测仪进行测定。
图5和图6为不同药物的IC50曲线(图5为24h，图6为48h)。如图所示，在同种浓度下，游离MTO:DOX复合药对HepG2细胞的致死率，比MTO和DOX的效果都好，证明了复合药物联合治疗的协同效应，同种情况在ND/MTO/DOX、ND/DOX和ND/MTO中得以适用，即前者比后两者的抗癌效果好；且通过对六种曲线作对比，可以发现相对三种游离的药，纳米药物体系(ND/MTO/DOX、ND/DOX和ND/MTO)曲线的斜率相对平缓，说明三种纳米药物体系对药物的释放具有缓释效果。同时，我们对纳米载体ND的生物兼容性做了测试(图7)，如图所示，在不同浓度条件下，48h，纳米载体ND对HepG2细胞活性几乎没有影响，细胞存活率都在90％以上，表明纳米载体ND生物兼容性好，可以将其作为有效药物输送的安全纳米载体。
实施例7
随后，我们通过图5与图6将各组纳米药物的IC50值进行统计，并采用组合指数CL以评估不同药物于不同时间治疗HepG2细胞的有效性。组合指数CL小于1，CL等于1和CL大于1分别表示为组合的协同作用，添加剂和拮抗作用治疗采用组合指数(CL)用于评估MTO与DOX的结合对HepG2细胞是否具有协同效应，据公式(1.1)和(1.2)计算CL值:
Dose＝Dose1+Dose2 （1.1)
其中Dose为组合中药物1和药物2抑制细胞x％的总剂量，Dose1和Dose2分别表示组合中药物1和药物2抑制细胞x％的剂量(假设两种药物按照摩尔比MTO:DOX＝2:1释放)。
Figure BDA0001689315600000061
其中Dose1和Dose2分别表示组合中药物1和药物2抑制细胞x％的剂量，而Dosex1和Dosex2分别代表相应单一药物治疗中药物1和药物2抑制x％细胞的剂量。详情见表1与表2。
表1不同种类的药物作用于HepG2细胞的IC50值(半抑制浓度)以及对应的组合指数(24h)
Figure BDA0001689315600000071
表2不同种类的药物作用于HepG2细胞的IC50值(半抑制浓度)以及对应的组合指数(48h)
Figure BDA0001689315600000072
从表1与表2中可以直观看出，不论在24h(表1)还是48h(表2)时，游离药物DOX都不如游离MTO的抗癌效果；在24h时，ND/DOX的抗癌效果比ND/MTO的抗癌效果好，这可能是由于MTO之间的π-π相互作用大于DOX之间的作用，造成MTO释放速率小于DOX，而在48h时，我们发现ND/MTO的抗癌效果更优，我们推测可能是由于随着时间延长，更利于MTO释放，其释放量足够引起细胞凋亡，从而发挥比DOX更高的疗效；同时，在24h时，与单药治疗相比，游离MTO:DOX复合药与ND/MTO/DOX复合纳米药物的组合指数CL都小于1，随着时间延长至48h，CL数值均变小，这充分表明MTO与DOX的联合用药可以增加对HepG2细胞的致死率，且随着时间的延长，这种协同效果更加显著。
实施例8
为了研究ND/MTO/DOX纳米药物是否可以进入活细胞，我们采用氮掺杂的红色荧光纳米金刚石(FND)代替非荧光纳米钻石(ND)。将HepG2细胞(密度：2.0×105个细胞/皿)接种到底部有盖玻片的35mm培养皿上。待16h贴壁后，弃除旧液，用含FND/MTO/DOX(FMD)复合纳米药物的培养液孵育细胞15h，19h和24h。待计时结束后，用PBS洗涤细胞3次后去除游离的FMD。随后在室温下，用4％多聚甲醛固定细胞后，用Hoeschst33258染核。采用激光共聚焦显微镜获得所有图像(FND：激发543nm；DOX：激发488nm；Hoeschst3325：激发405nm)。
图8显示为用FMD处理HepG2细胞的不同时间点的共聚焦荧光图像。由图可以看出经过FMD处理后，可以观察到红色荧光和绿色荧光，且可以观察到细胞质中的一些橙黄色荧光随着时间的延长，荧光逐渐增强，这是显示红色FND纳米药物与发绿色荧光的阿霉素的共定位，随着时间延长至24h仍未发现DOX进入细胞核。
实施例9
为了进一步追踪ND/MTO/DOX复合纳米药物在细胞中的具体位置，我们采用了红色溶酶体探针。具体步骤为：将贴壁后的HepG2细胞与ND/MTO/DOX(DOX+MTO：6μg/mL)孵育15h后，用冰冷的PBS(pH 7.4)洗涤细胞2-3次，除去游离的ND/MTO/DOX。随后加入红色溶酶体探针(Lyo-Tracker探针)，继续孵育5-10min。用冰冷的PBS(pH 7.4)洗涤细胞3次后，用4％多聚甲醛固定细胞8min。最后，使用激光共聚焦显微镜观察细胞(Lyo-Tracker探针，激发：568nm)，并拍照。
图9为经ND/MTO/DOX复合纳米药物孵育细胞15h后的细胞成像图。在图9A我们分别可以观察到红色荧光和绿色荧光，且在叠加图中可以观察到细胞质中的一些橙色荧光，这是显示绿色DOX与标记为红色的溶酶体的高共定位。图9B中显示的共定位系数为0.70，一般来说，当共定位系数接近或大于0.5时，可以被认为是良好的共定位指标。因此，我们推测，ND/MTO/DOX复合纳米药物跟随细胞内吞的循环过程后，被捕获在溶酶体内，可能造成溶酶体的通透性增加，使得大量的溶酶体水解酶释放，进而促进细胞凋亡，但对于溶酶体所参与的细胞凋亡机制仍待进一步研究。

Claims (5)

1.一种纳米钻石/米托蒽醌/阿霉素(ND/MTO/DOX)复合纳米钻石药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
按照质量比8.3：2：1称取ND、MTO与DOX,先将ND超声分散于柠檬酸钠溶液中，30min后，加入MTO，室温搅拌0.5-1.5h，离心，用蒸馏水洗涤直至上清液为无色，收集上清液，记录液体体积，得到ND/MTO纳米药物；再将ND/MTO纳米药物超声分散于柠檬酸钠溶液中，30min后，加入DOX，室温搅拌0.5-1.5h后，离心，用蒸馏水洗涤直至上清液为无色，收集上清液，记录液体体积，所得ND/MTO/DOX复合纳米钻石药物置于真空冷冻干燥机干燥，备用。
2.如权利要求1所述的复合纳米钻石药物的制备方法，其特征在于，所述柠檬酸钠溶液的浓度为1.0M。
3.如权利要求1所述的复合纳米钻石药物的制备方法，其特征在于，所述室温搅拌时间为1h。
4.如权利要求1-3任一项所述方法制备得到复合纳米钻石药物。
5.如权利要求1-3任一项所述方法制备的复合纳米钻石药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
CN201810585170.9A 2018-04-17 2018-06-08 一种复合纳米钻石药物及其制备方法和应用 Active CN108653256B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2018103418667 2018-04-17
CN201810341866 2018-04-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108653256A CN108653256A (zh) 2018-10-16
CN108653256B true CN108653256B (zh) 2020-09-29

Family

ID=63775395

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810585170.9A Active CN108653256B (zh) 2018-04-17 2018-06-08 一种复合纳米钻石药物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108653256B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112023059B (zh) * 2020-06-03 2023-03-24 太原师范学院 一种pH响应型阿霉素无载体纳米药物及其制备方法和应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100305309A1 (en) * 2009-05-28 2010-12-02 Northwestern University Nanodiamond particle complexes
CN105106970B (zh) * 2015-09-16 2018-02-06 山西大学 高负载及pH可控释放阿霉素的纳米钻石药物制备和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108653256A (zh) 2018-10-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20190224238A1 (en) Tumor therapeutic drug
CN107158014A (zh) 无载体共组装肿瘤靶向抗癌纳米药物及其制备方法与应用
CN115252560B (zh) 一种基于天然产物的自组装纳米粒及其制备方法和应用
KR102053065B1 (ko) 히알루론산 및 독소루비신을 이용한 pH 감응성 항암 엑소좀 조성물
CN111544596B (zh) 一种gsh响应型纳米钻石靶向药物及其制备方法和应用
Zhang et al. Near infrared light triggered reactive oxygen species responsive nanoparticles for chemo-photodynamic combined therapy
CN106344924B (zh) 一种联合代谢阻断的纳米剂型及其耐药逆转应用
Zhang et al. Anti-tumor activity of verbascoside loaded gold nanoparticles
CN111001006A (zh) 葫芦素b和氧化响应抗肿瘤前药共载仿生纳米粒
CN112957469A (zh) pH响应性磁性纳米核壳载药体系及其构建方法和应用
CN106729746B (zh) 对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统的制备方法及其应用
CN108653256B (zh) 一种复合纳米钻石药物及其制备方法和应用
Li et al. The cellular labeling and pH-sensitive responsive-drug release of celastrol in cancer cells based on Cys-CdTe QDs
CN107375199A (zh) 一种聚合氯喹的纳米凝胶递送系统及其制备方法
CN109745326B (zh) 一种包含吉非替尼和组蛋白去乙酰酶抑制剂的药物组合物，其脂质体制剂及其制药用途
CN110623942B (zh) 一种全反式维甲酸纳米药物制剂、其制备方法及应用
Duan et al. Heparin detection based on the fluorescent turn-on probe of amino carbon quantum dots
Yang et al. Discovery of highly potent and selective 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin-glucose conjugates as potential anti-colorectal cancer agents
CN110917139A (zh) 多分枝生物素修饰的乳腺癌靶向脂质体的制备和应用
CN108159432B (zh) 一种抑制乳腺癌的靶向纳米粒子及其制备和应用
CN110840844A (zh) 生物素与葡萄糖共同修饰的乳腺癌靶向脂质体的制备和应用
CN105770912A (zh) 具有肿瘤近红外荧光显像功能的载药atp敏感脂质体及其制备方法
CN114748424B (zh) 一种脂质体递药体系及其制备方法和用途
CN111298116B (zh) 多肽载药温敏脂质体及其制备方法和应用
CN107496936A (zh) 一种两性小分子自组装靶向性纳米粒子载药系统及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant