CN108642035B - 一种硅胶固定gdh催化制备nadph的方法 - Google Patents
一种硅胶固定gdh催化制备nadph的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108642035B CN108642035B CN201810430317.7A CN201810430317A CN108642035B CN 108642035 B CN108642035 B CN 108642035B CN 201810430317 A CN201810430317 A CN 201810430317A CN 108642035 B CN108642035 B CN 108642035B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gdh
- silica gel
- immobilized
- nadph
- preparing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/36—Dinucleotides, e.g. nicotineamide-adenine dinucleotide phosphate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
- C12Y101/99—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with other acceptors (1.1.99)
- C12Y101/9901—Glucose dehydrogenase (acceptor) (1.1.99.10)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于医药化工领域,尤其涉及一种硅胶固定GDH催化制备NADPH的方法,以葡萄糖为底物,采用酶法合成NADPH,选取硅胶为载体,固定GDH后加入反应柱,以一定的流速将葡萄糖和氧化型NADP+混合液通过反应柱,实现固定化GDH制备NADPH。经实验,GDH的固载率为57%-62%,固定化GDH催化生成NADPH效率为0.53g/g-0.55g/g,与传统游离酶催化相比,固定化酶催化效率提高了60%-62%,说明固定化GDH催化制备NADPH时,具有酶催化效率高、生产成本低、产品纯度高的优点,适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于医药化工领域,尤其涉及一种硅胶固定GDH催化制备NADPH的方法。
背景技术
酶作为一种生物催化剂,具有选择性高、催化效率高、催化条件温和的优点,广泛应用于各种行业。但酶作为一种天然的高分子蛋白质,其失活快、不能重复利用的缺点限制了酶在工业中大规模的应用。在此条件下,固定化酶概念和技术得以提出和发展。
固定化酶作为一种清洁、高效、环保的新型技术,是通过吸附、包埋、交联及共价等方式将酶固定在不溶于水的载体中进行催化反应。固定化酶技术具有酶催化效率高、与产物易分离的优点,还具有一定的机械强度,可以采用搅拌或装柱的方式进行催化反应,便于连续化和自动化操作。
葡萄糖脱氢酶(GDH)催化葡萄糖生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的反应式如下:
目前,利用GDH催化制备NADPH的技术已经成熟,具有一定的工业价值,但仍存在以下问题:
①产品纯度低,尽管利用硅藻土可以吸附回收GDH,但仍会有部分酶残留于产品中,对产品的提纯造成很大的影响;
②成本昂贵,酶利用率低,生产成本昂贵,限制了其在工业中的应用。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明的目的是提供一种硅胶固定GDH催化制备NADPH的方法,其反应条件温和、生产成本低、酶催化效率高,适合工业化生产。
本发明提出了一种用于制备NADPH的催化剂,包括固定到载体上的GDH。
进一步的,所述载体包括硅胶、大孔树脂、海藻酸钠中的任意一种或多种,硅胶上GDH的固载率为:57%-62%。
本发明提出了一种制备NADPH的催化剂的制备方法,将硅胶置于GDH溶液中进行吸附固定。
进一步的,将固定了GDH的硅胶加入反应柱中,进行加压处理。
进一步的,压力为0.01MPa-0.02MPa。
进一步的,吸附固定的温度为20℃-25℃。
进一步的,吸附固定的时间为50min-60min。
进一步的,GDH溶液的质量浓度为16.7%-25%,GDH溶液是GDH用磷酸缓冲溶液稀释4-6倍得到。
进一步的,稀释GDH的磷酸缓冲浓度为0.1mol/L。
进一步的,GDH溶液中硅胶的加入量为1.37g/g-2.23g/g。
进一步的,GDH的比活力为600u/mg。
进一步的,将GDH固定到硅胶上之前,还包括对硅胶的处理步骤:将硅胶加入磷酸缓冲溶液中浸泡,然后清洗。
进一步的,磷酸缓冲溶液中硅胶的加入量为0.4g/mL-0.43g/mL。
进一步的,磷酸缓冲溶液的浓度为0.2mol/L。
进一步的,浸泡时间为10-15h。
进一步的,清洗的步骤包括:将硅胶加入到磷酸缓冲溶液中,震荡后静置,然后更换缓冲液。
进一步的,震荡和静置的时间为3min-6min。
进一步的,清洗的步骤重复3-5次。
本发明提出了一种制备NADPH的催化剂在催化葡萄糖反应中的应用。
进一步的,将葡萄糖、NADP+溶于磷酸缓冲溶液中制成混合溶液。
进一步的,将葡萄糖、NADP+溶于0.1mol/L磷酸缓冲溶液中制成混合溶液。
进一步的,上述混合溶液中,葡萄糖加入量为180g/L-220g/L、NADP+加入量为9g/L-11g/L。
进一步的,将上述混合溶液流过反应柱,催化葡萄糖反应,流经反应柱的混合溶液总量为3.83mL/cm2-4.59mL/cm2。
进一步的,催化葡萄糖的反应中,混合溶液的温度为25℃-40℃。
进一步的,反应柱流速为25mL/min-30mL/min。
进一步的,反应时间为18min-24min。
进一步的,用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾分别配置0.1mol/L和0.2mol/L的磷酸缓冲溶液,pH 6.8-7.2。
借由上述方案,本发明至少具有以下优点:本发明提供一种硅胶固定GDH催化制备NADPH的方法,以硅胶为载体,固定GDH并装入反应柱,以葡萄糖和NADP+为底物制备NADPH,硅胶上GDH的固载率为57%-62%,固定化酶催化生成NADPH效率为0.53g/g-0.55g/g,与传统游离酶催化相比,固定化酶催化效率提高了60%-62%,说明固定化GDH催化制备NADPH时,具有酶催化效率高、生产成本低、产品纯度高的优点,适合工业化生产。在催化反应过程中,通过向反应柱不断的进样,实现了对酶的重复利用,酶被固定后,酶不易失活,相较于游离酶,其反应时间延长,催化效率提高。
附图说明
图1为实施例3中反应柱的结构示意图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。
实施例中NADP+由江苏美科生物科技有限公司提供,GDH由上海鼓臣生物技术有限公司提供,大孔硅胶由青岛康业鑫药用硅胶干燥剂有限公司提供。
实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1(固定化酶催化)
一种固定化酶催化制备NADPH的工艺,包括如下步骤:
1)用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾分别配置0.1mol/L和0.2mol/L的磷酸缓冲溶液(pH6.8-7.2),备用。
2)配置1.25mol/L的氢氧化钠溶液,备用。
3)将130g硅胶加入到300mL、0.2mol/L的磷酸缓冲溶液中浸泡12h;浸泡后,清洗硅胶:去除上清液,将130g浸泡后的硅胶加入300mL、0.2mol/L的新鲜磷酸缓冲溶液,震荡3min,静置2min,更换缓冲液,清洗硅胶的步骤重复4次。
4)将处理好的硅胶置于73g GDH溶液(14.6g GDH用0.1mol/L磷酸缓冲溶液稀释5倍,GDH的比活力为600u/mg)中,并在25℃下吸附固定55min,得到固定化GDH。
GDH的固载率测定:采用考马斯亮蓝法,测出固定前游离酶含量、固定后上清液游离酶含量,测出GDH的固载率为60%。
5)取200g葡萄糖和10g氧化型NADP+,用0.1mol/L磷酸缓冲溶液定容至1000mL,备用。
6)取一烧杯向其中加入580mL上述混合溶液和步骤4中固定的GDH,于37℃下保温搅拌反应,并滴加氢氧化钠溶液维持pH=7.0。
7)实验表明,当反应时间为15min时,NADPH-Na4生成量为4.008g,15min后,NADPH-Na4的合成速率显著下降。
实施例2(反应柱固定化酶催化)
一种反应柱固定化酶催化制备NADPH的工艺,包括如下步骤:
1)用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾分别配置0.1mol/L和0.2mol/L的磷酸缓冲溶液(pH6.8-7.2),备用。
2)配置1.25mol/L的氢氧化钠溶液,备用。
3)将130g硅胶加入到300mL、0.2mol/L的磷酸缓冲溶液中浸泡12h;浸泡后,清洗硅胶:去除上清液,将130g浸泡后的硅胶加入300mL、0.2mol/L的新鲜磷酸缓冲溶液,震荡3min,静置2min,更换缓冲液,清洗硅胶的步骤重复4次。
4)将处理好的硅胶置于73g GDH溶液(14.6g GDH用0.1mol/L磷酸缓冲溶液稀释5倍,GDH的比活力为600u/mg)中,并在25℃下吸附固定55min,得到固定化GDH。
GDH的固载率测定:采用考马斯亮蓝法,测出固定前游离酶含量、固定后上清液游离酶含量,算出GDH的固载率为60%。
5)将步骤4中固定的GDH加入反应柱,反应柱为玻璃材质的圆柱体,规格为:高18.5cm,内径3cm,然后用高压泵对反应柱进行加压处理,压力为0.02MPa,确保填充均匀紧实。
6)取200g葡萄糖和10g氧化型NADP+,用0.1mol/L磷酸缓冲溶液定容至1000mL,备用。
7)取580mL上述混合溶液,于37℃,以29mL/min的流速通过反应柱,并在进样口滴加氢氧化钠溶液,维持pH=7.0。
8)实验表明,当反应时间为18min时,NADPH-Na4生成量为4.737g,18min后,NADPH-Na4的合成速率显著下降。
对比例1(游离酶催化)
一种GDH催化制备NADPH的工艺,包括如下步骤:
1)用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾配置0.1mol/L的磷酸缓冲溶液,其pH为7.0,备用。
2)配置1.25mol/L的氢氧化钠溶液,备用。
3)取200g葡萄糖和10g氧化型NADP+,用0.1mol/L磷酸缓冲溶液定容至1000mL,备用。
4)取一烧杯向其中加入580mL上述混合溶液和8.76g GDH,于37℃下保温搅拌反应,并滴加氢氧化钠溶液维持pH=7.0。
5)实验表明,当反应时间为10min时,NADPH-Na4生成量为2.915g,10min后,NADPH-Na4的合成速率显著下降。具体结果见表1。
表1实施例1、2、对比例1中各时间段NADPH-Na4的生成量
反应时间20min,反应柱固定化酶催化效率为0.541g/g(酶催化效率:催化生成的NADPH-Na4质量除以参与催化反应的GDH质量),固定化酶催化效率为0.459g/g,游离酶催化效率为0.334g/g,反应柱固定化酶催化效率是固定化酶催化效率的1.18倍,是游离酶催化效率的1.62倍,因此反应柱固定化酶催化制备NADPH时,具有酶催化效率高、生产成本低、产品纯度高的优点,适合工业化生产。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (1)
1.一种反应柱固定化酶催化制备NADPH的方法,包括如下步骤:
1)用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾分别配置0.1mol/L和0.2mol/L pH 6.8-7.2的磷酸缓冲溶液,备用;
2)配置1.25mol/L的氢氧化钠溶液,备用;
3)将130g硅胶加入到300mL、0.2mol/L的磷酸缓冲溶液中浸泡12h;浸泡后,清洗硅胶:去除上清液,将130g浸泡后的硅胶加入300mL、0.2mol/L的新鲜磷酸缓冲溶液,震荡3min,静置2min,更换缓冲液,清洗硅胶的步骤重复4次;
4)将处理好的硅胶置于73g GDH溶液中,即将14.6g GDH用0.1mol/L磷酸缓冲溶液稀释5倍,GDH的比活力为600u/mg,并在25℃下吸附固定55min,得到固定化GDH;
5)将步骤4中固定的GDH加入反应柱,反应柱为玻璃材质的圆柱体,规格为:高18.5cm,内径3cm,然后用高压泵对反应柱进行加压处理,压力为0.02MPa,确保填充均匀紧实;
6)取200g葡萄糖和10g氧化型NADP+,用0.1mol/L磷酸缓冲溶液定容至1000mL,备用;
7)取580mL上述混合溶液,于37℃,以29mL/min的流速通过反应柱,并在进样口滴加氢氧化钠溶液,维持pH=7.0。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810430317.7A CN108642035B (zh) | 2018-05-08 | 2018-05-08 | 一种硅胶固定gdh催化制备nadph的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810430317.7A CN108642035B (zh) | 2018-05-08 | 2018-05-08 | 一种硅胶固定gdh催化制备nadph的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108642035A CN108642035A (zh) | 2018-10-12 |
CN108642035B true CN108642035B (zh) | 2022-03-25 |
Family
ID=63749782
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810430317.7A Active CN108642035B (zh) | 2018-05-08 | 2018-05-08 | 一种硅胶固定gdh催化制备nadph的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108642035B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109913514A (zh) * | 2019-03-12 | 2019-06-21 | 江苏理工学院 | 一种固定化酶流化床连续催化合成ats-7的方法 |
CN114438072B (zh) * | 2022-04-08 | 2022-05-31 | 山东天力药业有限公司 | 一种海藻糖的生产方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009036617A1 (fr) * | 2007-09-21 | 2009-03-26 | Bioright Worldwide Company Limited | Dispositif réactif de catalyseur solide et son procédé d'exécution |
CN109929829A (zh) * | 2019-02-15 | 2019-06-25 | 江苏理工学院 | 一种羰基还原酶的固定化方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6884607B2 (en) * | 2000-12-07 | 2005-04-26 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Process for producing optically active 4-halo-3-hydroxybutanoate |
CN1839873A (zh) * | 2001-04-30 | 2006-10-04 | 特罗姆斯多弗药剂股份有限公司及两合公司 | 药学活性尿苷酯 |
WO2006084276A2 (en) * | 2005-02-04 | 2006-08-10 | The Regents Of The University Of California | Enzyme catalyzed metallic nanoparticle synthesis |
CN1982445B (zh) * | 2005-12-16 | 2011-07-27 | 百瑞全球有限公司 | 用于制备固定化酶或固定化细胞的载体以及使用该载体的固定化方法 |
KR20090097870A (ko) * | 2006-12-15 | 2009-09-16 | 카오카부시키가이샤 | 고정화 효소를 사용한 유용 물질의 제조 방법 |
CN101294157B (zh) * | 2008-07-01 | 2012-07-04 | 北京师范大学 | 一种在多孔硅胶上固定漆酶的方法 |
CN104988133B (zh) * | 2015-06-19 | 2018-06-01 | 杭州师范大学 | 一种醛酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的包埋共固定化方法 |
CN107557412B (zh) * | 2017-10-09 | 2020-02-28 | 苏州人本药业有限公司 | 一种固定化酶催化合成nadph的方法 |
CN109913514A (zh) * | 2019-03-12 | 2019-06-21 | 江苏理工学院 | 一种固定化酶流化床连续催化合成ats-7的方法 |
-
2018
- 2018-05-08 CN CN201810430317.7A patent/CN108642035B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009036617A1 (fr) * | 2007-09-21 | 2009-03-26 | Bioright Worldwide Company Limited | Dispositif réactif de catalyseur solide et son procédé d'exécution |
CN109929829A (zh) * | 2019-02-15 | 2019-06-25 | 江苏理工学院 | 一种羰基还原酶的固定化方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
"Composite beads of silica gel,alginate and poly (aspartic acid) for the immobilization of a lipase enzyme";E.Krisch等;《eXPRESS Polymer Letter》;20190430;第13卷(第6期);第512-523页 * |
微流控分析芯片上生化反应技术研究进展;徐溢等;《化学进展》;20070524(第05期);第820-831页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108642035A (zh) | 2018-10-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108642035B (zh) | 一种硅胶固定gdh催化制备nadph的方法 | |
Ren et al. | Enzymatic characteristics of immobilized carbonic anhydrase and its applications in CO2 conversion | |
CN105624128B (zh) | 一种固定化单胺氧化酶及其在合成手性氮杂双环化合物中的应用 | |
WO2018040372A1 (zh) | 一株酵母菌及其在催化2,5-二羟甲基呋喃合成中的应用 | |
EP4310181A1 (en) | Enzyme immobilization carrier and preparation method therefor, immobilized enzyme and preparation method therefor | |
Jin et al. | Immobilization of recombinant Escherichia coli cells expressing glucose isomerase using modified diatomite as a carrier for effective production of high fructose corn syrup in packed bed reactor | |
CN114317516B (zh) | 一种用于废水处理的复合菌剂及其制备方法 | |
CN107287183A (zh) | 一种以石墨烯/氧化钛复合多孔微球为载体的固定化α‑淀粉酶的制备方法 | |
CN102925418B (zh) | 一种α-熊果苷生产过程中蔗糖磷酸化酶的回收方法 | |
CN111321133B (zh) | 一种nad+-琼脂糖复合物及其制备方法和在葡萄糖酸生产中的应用 | |
Kovaleva et al. | Inulinase immobilization on macroporous anion-exchange resins by different methods | |
MIYAWAKI et al. | Theoretical study of continuous NAD recycling by conjugated enzymes immobilized in ultrafiltration hollow fiber | |
EP4438723A1 (en) | Immobilized enzyme and use thereof in continuous production | |
CN109929829B (zh) | 一种羰基还原酶的固定化方法 | |
US20210346876A1 (en) | Organophosphorus degrading enzyme based multifunctional catalyst and preparation method and use thereof | |
CN111944789B (zh) | 一种球毛壳菌发酵生产几丁质酶的方法及其应用 | |
CN109988784B (zh) | 一种固定化甘醇酸氧化酶催化合成丙酮酸的方法 | |
Giuliano et al. | Immobilized Proteus mirabilis in poly (vinyl alcohol) cryogels for l (−)-carnitine production | |
CN111607584A (zh) | 一种树脂固定化海洋环糊精葡萄糖基转移酶的方法 | |
CN105087537A (zh) | 一种7-aca固定化酶lk118的制备及其使用方法 | |
Patel et al. | Tyrosinase reaction/chitosan adsorption: Potential for removing polymerization storage inhibitors | |
Maksimova et al. | A study of the catalytic properties of the nitrile hydratase immobilized on aluminum oxides and carbon-containing adsorbents | |
Lee et al. | Performance of column type bioreactor packed with immobilized cyclodextrin glucanotransferase for cyclodextrin production | |
Tudorascu et al. | A new process for acrylamide synthesis by enzymatic hydrolysis of acrylonitrile in disperse system | |
Wee et al. | Reusable and effective multi-biocatalyst system for transformation of glycerol to value-added dihydroxyacetone |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230329 Address after: 226400 Yangkou Chemical Industrial Park, Rudong County, Nantong City, Jiangsu Province Patentee after: NANTONG WANNIANCHANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: No. 1801, Zhongwu Avenue, Changzhou City, Jiangsu Province, 213000 Patentee before: JIANGSU University OF TECHNOLOGY |
|
TR01 | Transfer of patent right |