CN108641634A - 一种用于载玻片涂层的粘附剂组合物及单面涂层工艺 - Google Patents

Abstract

一种载玻片涂层的粘附剂组合物及单面涂层工艺，组合物按质量/体积比包含：成膜剂（聚乙烯醇）0.05‑0.3%、黏合剂（羧甲基纤维素）0.02‑0.25%、水补足100%配成组分1，阳离子溶胀剂（多聚赖氨酸）0.2‑1mg/100ml、水补足100%配成组分2；单面涂层工艺包含：载玻片碱液超声清洗烘干，正面按20μl‑50μl/张的量单面喷涂组分1，35‑55℃烘干冷至室温，再按10μl‑30μl/张的量同面喷涂组分2，35‑55℃烘干真空包装。本发明解决细胞或组织在载玻片上的高粘附性、分布均匀性、高清晰度；实现单面区域性的连续、自动、稳定、均一、批量生产的喷涂工艺。使制得的病理片能耐受各类醇、试剂的反复洗涤与浸泡，易于细胞、组织等的贴壁、单层分布、不脱落，背景清晰、无杂物。

Description

一种用于载玻片涂层的粘附剂组合物及单面涂层工艺

技术领域

本发明涉及病理载玻片提高细胞或组织粘附性、高清晰度的一种粘附剂组合物及粘附剂涂层工艺，具体地说，是一种载玻片粘附剂组合物及其配制方法，以及在载玻片上的涂层工艺制备方法。

背景技术

临床病理学上，组织切片、液基薄层细胞在细胞形态学的检查中应用范围广泛，采用薄层细胞制片、组织切片等方式来达到相应病症细胞/组织学检查及临床病变辨识的应用已经越来越普遍。而在病理检查方面，对细胞薄层或组织切片与载玻片的粘附性、防脱性真正做系统及深入研究的不是很广泛、也不是很深入，但粘附载玻片或防脱载玻片的性能对薄层细胞/组织切片的检查结果又是至关重要的一环。

目前粘附载玻片的涂层液绝大部分依赖进口，订货周期长，产品效期短，价格昂贵。并且涂片方式均是采用手工浸泡的方式进行，导致生产不能连续化，产量极其有限。由于浸泡工艺中涂层液的重力、粘稠度及在玻璃上的挂壁作用，导致粘附剂在载玻片上的涂层铺设均匀性不好。随着粘附剂涂层液反复被浸泡使用，粘附剂被污染的次数越来越多，涂层后的产品前后均一性不好。浸泡法使得载玻片背面也有粘附剂涂层，在制片、染色过程中还会沾染、吸附其他组织、细胞、杂蛋白、染料等杂质，给病理片的背景带来额外的污染。

由于目前市场上应用的粘附涂层液的壁垒关系、涂层方式等原因，导致目前国内市场上病理载玻片的防脱/粘附性处理都是根据使用情况分散手工处理，生产量有限，后续处理工艺不系统、不成熟，性能不稳定，批间差较大，对样本、保存液等后续检验试剂的兼容性不好，并且涂好粘附层的病理片效期短，前后使用的差异性较大，背景杂质多，生产成本高昂，效率底下，质量不稳定。基于以上因素，病理载玻片的粘附剂性能及涂层方式不但影响生产、使用等多个层面技术人员的相应工作，也不利于病理医生对相应疾病的检查、判定及诊断，可能导致重复取样、误判、误诊等众多不便及相应问题。

发明内容

本发明的目的，在于提供一种使薄层细胞/组织切片单层、均匀、牢固粘附于特定区域内的新型病理载玻片粘附剂的组合物，克服病理片在经受后续的固定、清洗、分化、染色、脱水等复杂的处理过程中，耐受水、多种极性溶剂、带不同电荷试剂的反复漂洗、浸泡等因素而导致的样本脱落、堆积、粘附杂质、背景不清晰的缺点。

本发明的另一目的，在于提供一种粘附剂在载玻片上可均匀、指定区域涂层、连续化生产的新型涂层工艺，克服传统浸泡法涂层工艺导致粘附剂在载玻片上的涂层不均匀铺设，前后涂层产品质量不均一，手工操作，不能连续化批量生产的明显缺点。

本发明的又一目的，制成粘附力强、附着性强、兼容性强，性能稳定的载玻片粘附剂组合物，采用可量化、均一、稳定的新型涂层工艺，可批量生产出成本价格较低、性能优良稳定、兼容性强、质量均一的粘附载玻片。

为了实现上述目的，本发明的技术解决方案是：

一种用于载玻片涂层的粘附剂组合物，其特征在于包括以下质量/体积比的组分及制备方法：

成膜剂：聚乙烯醇(PVA) 0.05-0.3%

黏合剂：羧甲基纤维素（CMC） 0.02-0.25%

阳离子溶胀剂：多聚赖氨酸（PLL） 0.2-1mg/100ml

溶剂：纯化水 补足100%

上述聚乙烯醇(PVA)为分析纯试剂，粘度为（40g/L，20℃）54.0∽66.0/（mPa.s）、PH 5∽7，从国药集团化学试剂有限公司采购；羧甲基纤维素（CMC）为分析纯试剂，粘度为（2%的水溶液，25℃）400-800cP，从西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司采购；多聚赖氨酸（PLL）分析纯试剂，分子量为30000-70000，从西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司采购。

上述物料配制成粘附剂的2个组分，其中聚乙烯醇(PVA) 、羧甲基纤维素（CMC）按比例配制成“组分1”，备用，多聚赖氨酸（PLL）按比例单独配制成“组分2”备用。

上述组分1配制方法：取配制总量的80%纯化水，加入0.05-0.3%的聚乙烯醇(PVA)，迅速升温至80-90℃，搅拌使其完全溶解，冷却至60℃以下，加入0.02-0.25%的羧甲基纤维素（CMC），50-60℃下搅拌使其完全溶解，加入纯化水补足至配制总量，调节PH至6-8范围内，不低于200目筛网过滤，备用；

上述组分2配制方法：取配制总量的80%纯化水，按照0.2-1mg/100ml的比例加入多聚赖氨酸（PLL），搅拌使其完全溶解，加入纯化水补足至配制总量，调节PH至6-8范围内，不低于200目筛网过滤，备用。

一种载玻片粘附剂新型涂层工艺制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a.空白玻片清洗、烘干：将载玻片逐片插入专用架上，放入0.5%氢氧化钠溶液中浸泡并超声清洗5分钟，取出，用流动的纯化水清洗至清洗水PH值在6-7范围内，取出载玻片，沥干水分，40-70℃烘干，备用；

b.组分1喷涂：将清洗烘干后的载玻片正面朝上置入喷片架上，根据要求的涂层区域选择不同位点安放好上盖板，置入“载玻片自动喷涂机”轨道上，按照20μl-50μl/张的量将组分1涂层液均匀喷涂在每张载玻片涂层区内，立即水平放置于烘箱中，在35-55℃温度范围内烘干，自然冷却至室温备用；

c.组分2喷涂：将上述组分1喷涂完成的玻片，再置入“载玻片自动喷涂机”轨道上，按照10μl-30μl/张的量将组分2涂层液均匀喷涂在每张载玻片涂层区内，水平放置溶胀5-10分钟后，置烘箱中，35-55℃温度范围内烘干，自然冷却至室温；

d.包装：将经以上3步制备好的粘附载玻片装盒，再装真空塑料袋，真空密闭保存。

采用上述方案后，本发明具有以下优点：

a.上述成膜剂聚乙烯醇(PVA) 易成膜，膜的机械性能优良，膜的拉伸强度大，并且与亲水性的羧甲基纤维素有很好的粘结力，使得组分1成膜性很好，并且在玻璃上黏贴牢固，具有很强的机械强度与耐溶剂性，使得涂层液不易从玻璃上脱落；

b.上述黏合剂羧甲基纤维素（CMC）易成膜，膜的黏接性强，透明度高，在二次涂层液的溶胀作用下，成膜更充分，铺设更均匀，并且能够耐受各类醇、试剂的反复洗涤与浸泡，易于细胞、组织等的贴壁、不易脱落；

c.上述阳离子溶胀剂多聚赖氨酸（PLL）具有较多带正电荷的氨基可与带负电荷的细胞浆/组织相互作用，产生较强的黏合力，使得细胞或组织切片与涂层液1 更进一步的结合、黏接，再次增加了样本在载玻片上的贴壁能力，防止了在反复实验操作过程中掉片与重叠；

d.采用以上喷涂工艺，可以将粘附剂精准涂层在需要的样本区域内，并实现单面涂层，其他非样本区与载玻片背面均无粘附剂，使整张玻片受杂质污染的几率与风险大大降低，经处理与涂层的载玻片表面洁净、涂层透明度高，制得的病理片背景清晰，无杂物；

e.采用自动化喷涂设备与配套工装（自主研发）实现了连续化的批量生产，提高了粘附载玻片的生产效率；采取了定量、分次的喷涂工艺，使每张片子、每个涂层区域的涂层质量稳定、均一；喷涂液一次性使用，解决了浸泡法反复浸泡造成涂层液的污染与前后质量不均一的问题，节约了涂层液的用量；

f.以上材料均容易获得，并且都无色、无味、无毒、无污染，性质稳定，价格较低廉；生产工艺温和，不产生废液，能耗低，非常环保。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步说明本发明。

实施例1

按以下称量或量取各组分，配制成100ml溶液

成膜剂：聚乙烯醇(PVA) 0.05 g

黏合剂：羧甲基纤维素（CMC） 0.02 g

阳离子溶胀剂：多聚赖氨酸（PLL） 0.2 mg

溶剂：纯化水 补足100%

取80ml纯化水，加入0.05g的聚乙烯醇(PVA)，升温至80℃，搅拌溶解，冷却至55℃，加入0.02 g的羧甲基纤维素（CMC），55℃搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至6.2，200目筛网过滤，制得粘附剂“组分1”。取80ml纯化水，加入0.2 mg的多聚赖氨酸（PLL），搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至7.0，200目筛网过滤，制得粘附剂“组分2”。

按照粘附载玻片喷涂SOP要求，准备好清洗烘干后的300张载玻片，调节好“载玻片自动喷涂机”，按照50μl/张的量单面喷涂粘附剂“组分1”， 45℃下烘干，冷却至室温，再按照20μl /张的量同面喷涂粘附剂“组分2”，放置6分钟，35℃下烘干，冷却至室温，真空密封包装。

准备3份不同的妇科宫颈样本，3份不同的组织切片样本，每个样本用上述粘附载玻片制30张病理片（共30张/样本×6个样本=180张片子），分别选用巴氏、HE、Feulgen三种染色方法对其进行染色，每个样本每个染色方法做10张片子，每种染色方法共染色60张片子（6个不同样本×10张片子/样本）。结果表明各种样本、制片、染色方法处理后，细胞/组织样本无脱落、分布均匀；液基细胞学/组织学样本制片贴合性、浸润性均较好，细胞形态很好；染色后的病理片表面清洁度很好，低倍、高倍显微镜视野下的背景均较干净。

实施例2

按以下称量或量取各组分，配制成100ml溶液

成膜剂：聚乙烯醇(PVA) 0.10 g

黏合剂：羧甲基纤维素（CMC） 0.06 g

阳离子溶胀剂：多聚赖氨酸（PLL） 0.8 mg

溶剂：纯化水 补足100%

取80ml纯化水，加入0.10 g的聚乙烯醇(PVA)，升温至85℃，搅拌溶解，冷却至60℃，加入0.06g的羧甲基纤维素（CMC），58℃搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至7.0，200目筛网过滤，制得粘附剂“组分1”。取80ml纯化水，加入0.8 mg的多聚赖氨酸（PLL），搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至6.5，200目筛网过滤，制得粘附剂“组分2”。

按照粘附载玻片喷涂SOP要求，准备好清洗烘干后的300张载玻片，调节好“载玻片自动喷涂机”，按照20μl/张的量单面喷涂粘附剂“组分1”，35℃下烘干，冷却至室温，再按照10μl/张的量同面喷涂粘附剂“组分2”，放置5分钟，35℃下烘干，冷却至室温，真空密封包装。

准备3份不同的妇科宫颈样本，3份不同的组织切片样本，每个样本用上述粘附载玻片制30张病理片（共30张/样本×6个样本=180张片子），分别选用巴氏、HE、Feulgen三种染色方法对制得的样本进行染色，每个样本每个染色方法做10张片子，每种染色方法共染色60张片子（6个不同样本×10张片子/样本）。结果表明各种样本、制片、染色方法处理后，细胞/组织样本均无脱落、分布均匀；液基细胞学/组织学样本制片贴合性、浸润性均较好，细胞形态很好；染色后的病理片表面清洁度很好，低倍、高倍显微镜视野下的背景均很干净。

实施例3

按以下称量或量取各组分，配制成100ml溶液

成膜剂：聚乙烯醇(PVA) 0.16 g

黏合剂：羧甲基纤维素（CMC） 0.20 g

阳离子溶胀剂：多聚赖氨酸（PLL） 0.4 mg

溶剂：纯化水 补足100%

取80ml纯化水，加入0.16 g的聚乙烯醇(PVA)，升温至88℃，搅拌溶解，冷却至52℃，加入0.20 g的羧甲基纤维素（CMC），50℃下搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至6.5，200目筛网过滤，制得粘附剂“组分1”。取80ml纯化水，加入0.4 mg的多聚赖氨酸（PLL），搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至6.0，200目筛网过滤，制得粘附剂“组分2”。

按照粘附载玻片喷涂SOP要求，准备好清洗烘干后的300张载玻片，调节好“载玻片自动喷涂机”，按照40μl/张的量单面喷涂粘附剂“组分1”，40℃下烘干，冷却至室温，再按照30μl/张的量同面喷涂粘附剂“组分2”，放置8分钟，45℃下烘干，冷却至室温，真空密封包装。

准备3份不同的妇科宫颈样本，3份不同的组织切片样本，每个样本用上述粘附载玻片制30张病理片（共30张/样本×6个样本=180张片子），分别选用巴氏、HE、Feulgen三种染色方法对制得的样本进行染色，每个样本每个染色方法做10张片子，每种染色方法共染色60张片子（6个不同样本×10张片子/样本）。结果表明各种样本、制片、染色方法处理后，细胞/组织样本均无脱落、分布均匀；液基细胞学/组织学样本制片贴合性、浸润性均较好，细胞形态很好；染色后的病理片表面清洁度较好，喷涂区域有极轻微的痕迹，低倍、高倍显微镜视野下的背景均较干净。

实施例4

按以下称量或量取各组分，配制成100ml溶液

成膜剂：聚乙烯醇(PVA) 0.22 g

黏合剂：羧甲基纤维素（CMC） 0.12 g

阳离子溶胀剂：多聚赖氨酸（PLL） 1.0 mg

溶剂：纯化水 补足100%

取80ml纯化水，加入0.22 g的聚乙烯醇(PVA)，升温至82℃，搅拌溶解，冷却至56℃，加入0.12 g的羧甲基纤维素（CMC），56℃下搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至7.5，300目筛网过滤，制得粘附剂“组分1”。取80ml纯化水，加入1.0 mg的多聚赖氨酸（PLL），搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至8.0，300目筛网过滤，制得粘附剂“组分2”。

按照粘附载玻片喷涂SOP要求，准备好清洗烘干后的300张载玻片，调节好“载玻片自动喷涂机”，按照25μl/张的量单面喷涂粘附剂“组分1”，50℃下烘干，冷却至室温，再按照25μl/张的量同面喷涂粘附剂“组分2”，放置10分钟，55℃下烘干，冷却至室温，真空密封包装。

准备3份不同的妇科宫颈样本，3份不同的组织切片样本，每个样本用上述粘附载玻片制30张病理片（共30张/样本×6个样本=180张片子），分别选用巴氏、HE、Feulgen三种染色方法对制得的样本进行染色，每个样本每个染色方法做10张片子，每种染色方法共染色60张片子（6个不同样本×10张片子/样本）。结果表明各种样本、制片、染色方法处理后，细胞/组织切片样本均无脱落、分布均匀；液基细胞学/组织学样本制片贴合性、浸润性均较好，细胞形态很好；染色后的病理片表面清洁度较好，低倍、高倍显微镜视野下的背景均较干净。

实施例5

按以下称量或量取各组分，配制成100ml溶液

成膜剂：聚乙烯醇(PVA) 0.30 g

黏合剂：羧甲基纤维素（CMC） 0.25 g

阳离子溶胀剂：多聚赖氨酸（PLL） 0.6 mg

溶剂：纯化水 补足100%

取80ml纯化水，加入0.30g的聚乙烯醇(PVA)，升温至90℃，搅拌溶解，冷却至60℃，加入0.25g的羧甲基纤维素（CMC），60℃下搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至7.9，300目筛网过滤，制得粘附剂“组分1”。取80ml纯化水，加入0.6 mg的多聚赖氨酸（PLL），搅拌溶解，加纯化水补足100ml，调节PH至7.5，300目筛网过滤，制得粘附剂“组分2”。

按照粘附载玻片喷涂SOP要求，准备好清洗烘干后的300张载玻片，调节好“载玻片自动喷涂机”，按照30μl/张的量单面喷涂粘附剂“组分1”，55℃下烘干，冷却至室温，再按照30μl/张的量同面喷涂粘附剂“组分2”，放置5分钟，40℃下烘干，冷却至室温，真空密封包装即可。

准备3份不同的妇科宫颈样本，3份不同的组织切片样本，每个样本用上述粘附载玻片制30张病理片（共30张/样本×6个样本=180张片子），分别选用巴氏、HE、Feulgen三种染色方法对制得的样本进行染色，每个样本每个染色方法做10张片子，每种染色方法共染色60张片子（6个不同样本×10张片子/样本）。结果表明各种样本、制片、染色方法处理后，细胞/组织切片样本无脱落、分布均匀；液基细胞学/组织学样本制片贴合性、浸润性均较好，细胞形态很好；染色后的病理片表面清洁度较好，喷涂区域有极轻微的痕迹，低倍、高倍显微镜视野下的背景均较干净。

Claims (5)

1.一种载玻片涂层的粘附剂组合物，其特征在于按照质量/体积比包含：

成膜剂：聚乙烯醇(PVA) 0.05-0.3%

黏合剂：羧甲基纤维素（CMC） 0.02-0.25%

阳离子溶胀剂：多聚赖氨酸（PLL） 0.2-1mg/100ml

溶剂：纯化水 补足100%

上述物料配制成粘附剂的2个组分，其中聚乙烯醇(PVA) 、羧甲基纤维素（CMC）按比例配制成“组分1”；多聚赖氨酸（PLL）按比例单独配制成“组分2”，备用。

2.根据权利要求1所述的粘附剂组合物，其特征在于，还包括组分1与组分2的配制方法：

a.组分1：取配制量80%的纯化水，加入0.05-0.3%的聚乙烯醇(PVA)，迅速升温至80-90℃，搅拌溶解，冷至60℃以下，加入0.02-0.25%的羧甲基纤维素（CMC），50-60℃下搅拌溶解，加纯化水补足至配制量，调节PH至6-8范围内，不低于200目筛网过滤；

b.组分2：取配制量80%的纯化水，加入0.2-1mg/100ml的多聚赖氨酸（PLL），搅拌溶解，加纯化水补足至配制量，调节PH至6-8范围内，不低于200目筛网过滤。

3.根据权利要求1所述的粘附剂组合物，其特征还在于，所述聚乙烯醇(PVA)粘度为（40g/L，20℃）54.0-66.0/（mPa.s）、PH 5∽7；所述羧甲基纤维素（CMC）粘度为（2%的水溶液，25℃）400-800cP；所述多聚赖氨酸（PLL）分子量为30000-70000。

4.根据权利要求1所述的粘附剂组合物的单面涂层工艺，其特征在于包括以下步骤：

a.将普通载玻片逐片插入专用架上，放入0.5%氢氧化钠溶液中浸泡、超声清洗5分钟，流动纯化水清洗至清洗水PH值6-7范围内，取出，沥干水分，40-70℃烘干；

b.组分1喷涂：将清洗烘干后的载玻片正面朝上置入喷片架上，确定涂层区域，按照20μl-50μl/张的量将组分1涂层液均匀喷涂在每张载玻片涂层区内，立即水平放置于烘箱中，在35-55℃温度范围内烘干，冷却至室温；

c.组分2喷涂：将组分1喷涂、烘干、冷至室温的载玻片，按照10μl-30μl /张的量将组分2涂层液同面二次均匀喷涂在每张载玻片涂层区内，水平放置溶胀5-10分钟后，置烘箱中，35-55℃温度范围内烘干，冷却至室温；

d.将二次喷涂制备好的粘附载玻片装盒，再装真空塑料袋进行真空包装。

5.根据权利要求4所述的涂层工艺，其特征还在于，所述的涂层工艺包括采用不同组分涂层液单独、分次均匀喷涂在载玻片的指定区域内，使其非样本区、背面均无粘附剂沾染。