CN108640841B - 一种缩酚酸环醚类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种缩酚酸环醚类化合物，所述缩酚酸环醚类化合物的结构式如式1所示：
Figure DDA0001701997070000011
发明人在分离海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6‑20‑6的发酵产物时，偶然分离得到上述缩酚酸环醚类化合物。该缩酚酸环醚类化合物经实验证明，具有抑制铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母的效果，能够用于制备抗细菌剂或抗真菌剂。

Description

一种缩酚酸环醚类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种缩酚酸环醚类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
目前在临床治疗中发现病原微生物的耐药性越来越强，尤其是耐甲氧基青霉素金黄色葡萄球菌(超级耐药菌)、铜绿假单胞菌(俗称绿脓杆菌)和白色假丝酵母(俗称白色念珠菌)造成的感染越来越严重，很多传统抗生素已基本丧失疗效。
因此，需要寻找新型的抗细菌剂或抗真菌剂。
发明内容
本发明为克服上述现有技术所述的现有抗细菌药物、抗真菌药物及杀虫剂的不足，提供一种缩酚酸环醚类化合物，提供的缩酚酸环醚类化合物具有抗细菌和抗真菌的效果，能够用于制备抗细菌剂或抗真菌剂。
本发明的另一目的在于，提供上述缩酚酸环醚类化合物的制备方法。
本发明的还一目的在于，提供上述缩酚酸环醚类化合物在制备抗细菌剂或抗真菌剂中的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
一种缩酚酸环醚类化合物，所述缩酚酸环醚类化合物的结构式如式1所示：
Figure BDA0001701997050000011
发明人在分离海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6的发酵产物时，偶然分离得到上述缩酚酸环醚类化合物。该缩酚酸环醚类化合物经实验证明，具有抑制铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母的效果，能够用于制备抗细菌剂或抗真菌剂。
本发明同时保护上述缩酚酸环醚类化合物的制备方法，所述制备方法是利用海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6通过发酵、提取、分离制备得到所述缩酚酸环醚类化合物；
所述海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6于2018年03月20日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC 60337；保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所。
大连海域中的海藻分离得到Aspergillus unguis DLEP2008001，后对其孢子运用大气压低温等离子体诱变得到Aspergillus unguis 6-20-6。海洋真菌爪曲霉Aspergillusunguis DLEP2008001，于2009年10月29日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.3372，株号为DLEP2008001。
另外，所述海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6的ITS1-5.8S-ITS2 rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。
海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6的ITS1-5.8S-ITS2 rDNA序列(569bp)已向美国国家生物技术信息中心(NCBI)的GenBank基因序列数据库提交，登录号为MH071299。
所述海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6具有以下性质：接种到海水马铃薯葡萄糖培养基(海水PDA)平板上，28℃培养，菌落初期为绿色，后期为黄绿色，圆形，向四周扩展，中央凸起，背面产黄褐色色素；该菌株在海水马铃薯蔗糖液体培养基中静置发酵可产生抗乙酰胆碱酯酶、抗菌、杀虫活性物质。
海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6通过发酵能够产生上述缩酚酸环醚类化合物，通过本领域内的一般方法即可提取、分离得到该缩酚酸环醚类化合物。
优选地，所述发酵的步骤如下：
将爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6在培养基中发酵，收集菌丝体和发酵液。
进一步优选地，所述发酵的步骤如下：
将爪曲霉诱变菌株Aspergillus unguis 6-20-6在PSB培养基下发酵；28℃静置发酵15～25天；培养周期结束后加入适量硅藻土进行抽滤，分别得到菌丝体滤饼和滤液，即菌丝体和发酵液。
所述PSB培养基组成为：每升含有，土豆汁400～600mL，天然粗海盐配制的15～25g/L的海水400～600mL，蔗糖15～25g，蛋白胨3～7g；所述PSB培养基经121℃灭菌20min。
所述土豆汁的制备方法为：土豆去皮，洗净，加入去离子水，加热至煮沸30min，过滤，每200g土豆可煮500mL土豆汁，冷冻保藏。
优选地，所述发酵的温度为28℃，发酵时间为20天。
优选地，所述提取的步骤如下：
发酵结束后得到菌丝体和发酵液；发酵液经树脂吸附后，用第一有机溶剂洗脱并浓缩；菌丝体用第二有机溶剂提取并浓缩；合并浓缩物，得到粗提物。
优选地，所述树脂为大孔树脂。
优选地，所述大孔树脂为D101、NKA、XAD-7或XAD-16。
优选地，所述第一有机溶剂和第二有机溶剂分别独立选自甲醇、乙醇、丙酮或乙酸乙酯中的一种或几种。
优选地，所述提取的步骤如下：
发酵结束后得到菌丝体和发酵液；发酵液中加入大孔树脂，摇匀后转移至层析柱，放尽发酵液并水洗后，大孔树脂用第一有机溶剂洗脱，减压浓缩；菌丝体滤饼用第二有机溶剂浸泡过夜，超声、抽滤、减压浓缩，重复三次；合并浓缩产物。
进一步优选地，所述提取的步骤如下：
发酵结束后得到菌丝体和发酵液；每500mL发酵液中加入300mL NKA树脂，摇匀1h，后转移至层析柱，放尽发酵液并水洗后，树脂先用甲醇、后用丙酮分别洗3个柱体积，减压浓缩；菌丝体滤饼用甲醇:丙酮＝2:1浸泡过夜，超声30min、抽滤、减压浓缩，重复三次；合并浓缩产物。
优选地，所述分离的步骤如下：
提取结束后得到粗提物；粗提物经凝胶柱、制备液相色谱分离，收集满足条件(1)和/或条件(2)的组分，得到所述缩酚酸环醚类化合物；
条件(1)：薄层层析比移值为0.36的组分，薄层层析的薄层层析板为Merck公司生产的Silica gel 60 F254，展开剂为氯仿：甲醇＝5:1；
条件(2)：液相色谱分析下tR为2.2min的组分，所述的液相色谱为AgilentInfinity Ⅱ 1260，柱子尺寸为4.6mm×250mm，填料为EC.C18 4μm，流动相为60％MeOH-40％H2O，流速1mL/min，柱温箱30℃，检测器为DAD，检测波长210nm、254nm、280nm、320nm和365nm。
发明人通过实验发现，所述缩酚酸环醚类化合物在薄层层析板TLC上，于254nm紫外线照射下成单个黑色斑点，硫酸-茴香醛显色为橙色；薄层层析比移值为0.36，薄层层析的薄层层析板为Merck公司生产的Silica gel 60 F254，展开剂为氯仿：甲醇＝5:1。
还发现，所述缩酚酸环醚类化合物在液相色谱中的保留时间为2.2min，液相色谱为Agilent Infinity Ⅱ 1260，柱子尺寸为4.6mm×250mm，填料为EC.C184μm，流动相为60％MeOH-40％H2O，流速1mL/min，柱温箱30℃，检测器为DAD，检测波长210nm、254nm、280nm、320nm和365nm。
优选地，所述凝胶柱的凝胶为葡聚糖凝胶。所述葡聚糖凝胶为Sephadex-20。
优选地，所述凝胶柱的洗脱液为甲醇。
优选地，所述制备液相色谱的流动相为45％甲醇-55％水。
优选地，所述制备液相色谱仪为Lisure HP Plus 50D，所用层析柱为大连依利特公司生产的SinoChrom ODS-AP，15μm，20.0mm×250mm。
发明人研究发现，制备液相色谱仪为Lisure HP Plus 50D，所用层析柱为大连依利特公司生产的SinoChrom ODS-AP，15μm，20.0mm×250mm，流动相为45％甲醇-55％水，流动相的流速为5mL/min时，柱温为室温，收集保留时间为20min的组分，能够制备得到上述缩酚酸环醚类化合物。
本发明的缩酚酸环醚类化合物经生物活性测试得出，该缩酚酸环醚类化合物对白色假丝酵母Candida albicans表现出一定的抗菌活性，平均抑菌圈为：8.3±0.6mm，最小抑菌浓度(MIC)为12.8μM；同样该缩酚酸环醚类化合物对铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa也表现出一定的抗菌活性，平均抑菌圈为7.7±0.6mm，MIC为102.4μM；该缩酚酸环醚类化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌Methicillin-resistant Staphylococcusaureus表现出一定的抗菌活性，平均抑菌圈为：12.0±1.0mm，MIC为51.2μM；该缩酚酸环醚类化合物对副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus表现出一定的抗菌活性，平均抑菌圈为：9.3±0.6mm(非完全抑制)，MIC为>102.4μM；该缩酚酸环醚类化合物对卤虫幼虫的24h半致死剂量LC50为>102.4μM。总之，上述缩酚酸环醚类化合物对Candida albicans、Pseudomonasaeruginosa、Methicillin-resistant Staphylococcus aureus和Vibrioparahemolyticus均有一定抑制作用。
因此，上述缩酚酸环醚类化合物在制备抗细菌剂或抗真菌剂中的应用，也应在本发明的保护范围之内。
优选地，所述细菌为铜绿假单胞菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
优选地，所述真菌为白色假丝酵母。
本发明还保护一种抗细菌剂，所述抗细菌剂含有上述缩酚酸环醚类化合物。
本发明还保护一种抗真菌剂，所述抗真菌剂含有上述缩酚酸环醚类化合物。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供的缩酚酸环醚类化合物经实验证明，具有抑制铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母的效果，在制备抗细菌剂或抗真菌剂中具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为本发明的缩酚酸环醚类化合物的核磁共振氢谱。
图2为本发明的缩酚酸环醚类化合物的核磁共振碳谱。
图3为本发明的缩酚酸环醚类化合物的高分辨ESI质谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。
实施例中的原料均可可通过市售得到；
除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6于2018年03月20日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC 60337，株号：6-20-6；保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所。
实施例1
制备本发明所述缩酚酸环醚类化合物：
Ⅰ、发酵
将海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6接种于PSB培养基于28℃下静置培养20天，加入适量硅藻土过滤，分别收集菌丝体和发酵液。
其中，所述真菌液体培养基组成，每升含土豆汁500mL，天然粗海盐配制的20g/L的海水500mL，蔗糖20g，蛋白胨5g。
其中，土豆汁的制备方法为：土豆去皮，洗净，加入去离子水，加热至煮沸30min，过滤，每200g土豆可煮500mL土豆汁，冷冻保藏。
Ⅱ、提取
往步骤Ⅰ获得的滤液每500mL加入300mL NKA树脂，摇匀1h，后转移至层析柱，放尽发酵液并水洗后，NKA树脂先用甲醇、后用丙酮分别淋洗3个柱体积。步骤Ⅰ获得的菌丝体滤饼用甲醇:丙酮＝2:1浸泡过夜，超声30min、抽滤、减压浓缩，重复三次。浸膏合并，即为粗提物。
Ⅲ、产物分离纯化
将步骤Ⅱ获得的爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6 GDMCC 60337粗提物经Sephadex LH-20，用纯甲醇进行洗脱，流速为0.5mL/min，经薄层层析检测，分离得到若干个粗组分；含有该缩酚酸环醚类化合物的粗组分经制备液相色谱仪，流动相为45％甲醇-55％水，流速为5mL/min，柱温为室温，制备得到该缩酚酸环醚类化合物(tR＝20min)。具体的，制备液相色谱仪为Lisure HP Plus 50D，所用层析柱为大连依利特公司生产的SinoChrom ODS-AP，15μm，20.0mm×250mm。
该缩酚酸环醚类化合物在TLC(薄层层析)上，于254nm紫外线照射下成单个黑色斑点，硫酸-茴香醛显色为橙色，薄层层析比移值为0.36，薄层层析的薄层层析板为Merck公司生产的Silica gel 60 F254，展开剂为氯仿：甲醇＝5:1。
液相色谱分析下，tR＝2.2min；
所述的液相色谱为Agilent Infinity Ⅱ 1260，柱子尺寸为4.6mm×250mm，填料为EC.C184μm，流动相为60％MeOH-40％H2O，流速1mL/min，柱温箱30℃，检测器为DAD，检测波长210nm、254nm、280nm、320nm和365nm。
制备得到的缩酚酸环醚类化合物的结构式如式1所示：
Figure BDA0001701997050000061
该缩酚酸环醚类化合物的氢谱：1HNMR(500MHz,MeOD)δ6.28(1H,dd,J＝2.0,0.5Hz,H-3),6.25(1H,s,H-5’),6.19(1H,d,J＝2.4Hz,H-5),5.34(1H,dd,J＝6.8,1.3Hz,H-8’),2.59(3H,s,H-8),2.01(3H,s,H-11’),1.92(3H,s,H-10’),1.70(3H,dd,J＝6.7,0.8Hz,H-9’)，如图1所示；
该缩酚酸环醚类化合物的碳谱13C NMR(125MHz,MeOD)δ175.2(C-12’),171.3(C-7),166.9(C-4),165.9(C-6),161.8(C-4’),151.3(C-2’),148.7(C-6’),144.7(C-2),141.1(C-7’),120.6(C-8’),116.9(C-3’),116.7(C-1’),114.3(C-5’),113.5(C-3),104.5(C-1),102.2(C-5),24.6(C-8),18.8(C-10’),14.0(C-9’),9.6(C-11’)；如图2所示；
红外IRνmax(KBr)3255,1658cm-1；
紫外-可见光谱UV-Vis(MeOH)λmax(logε)217(5.88),266(5.51),305(5.27)；
熔点m.p.166.4-167.6℃；
高分辨ESI质谱HR-ESI-MS calcd exact mass(C20H19O7):371.1131；found:371.1137[M-H]-；准分子离子峰[M-H]-质荷比为m/z＝371.1137，理论计算值为m/z＝371.1131，表明吻合程度很好。
实施例2
本实施例为缩酚酸环醚类化合物的抑革兰氏阳性耐药菌活性实验。
1、金黄色葡萄球菌是非常常见的病菌，有时候它会进入人体内而引起感染。这种感染轻微的会在皮肤上长疮和丘疹，严重的则会引起肺炎或血液感染。因此金黄色葡萄球菌是新抗生素研发的重要靶标病原微生物。
2、实验方法：
使用国际标准的滤纸片法进行抗菌活性初筛，以抑菌圈直径衡量抗菌活性强弱(Clinical and Laboratory Standards Institute.2012.Performance Standards forAntimicrobial Disk Susceptibility Tests；Approved Standard.Eleventh EditionM2-A11.)；复筛使用96孔板，采用国际标准的微量肉汤稀释法(National Committee forClinical Laboratory Standards.2003.Methods for dilution antimicrobialsusceptibility tests for bacteria that grow aerobically,5th ed.Approvedstandard M7–A6.)，培养16～20h后，625nm读取OD值，测定化合物对耐甲氧基青霉素金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC值)及不同浓度下的抑菌率，培养基为标准的Muller-Hinton肉汤培养基。
抑菌率＝(OD不加药-OD加药)/(OD不加药-OD培养基)×100％
3、实验结果：
上述实施例1获得的缩酚酸环醚类化合物对耐甲氧基青霉素的金黄色葡萄球菌的抑菌圈为12.0±1.0mm，MIC值为51.2μM，具有很好抑制耐甲氧基青霉素金黄色葡萄球菌的活性。
实施例3
本实施例为缩酚酸环醚类化合物的抑革兰氏阴菌活性实验。
1、铜绿假单胞菌在自然界广泛分布，各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道都有这种菌的存在，该菌经常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等。
副溶血弧菌广泛存在于海上和海产品中，感染该菌会急性起病，腹痛、呕吐、腹泻及水样便。
2、实验方法：
使用国际标准的滤纸片法进行抗菌活性初筛，以抑菌圈直径衡量抗菌活性强弱(Clinical and Laboratory Standards Institute.2012.Performance Standards forAntimicrobial Disk Susceptibility Tests；Approved Standard.Eleventh EditionM2-A11.)；复筛使用96孔板，采用国际标准的微量肉汤稀释法(National Committee forClinical Laboratory Standards.2003.Methods for dilution antimicrobialsusceptibility tests for bacteria that grow aerobically,5th ed.Approvedstandard M7–A6.)，培养16～20h后，625nm读取OD值，测定化合物对铜绿假单孢菌和副溶血弧菌的最小抑菌浓度(MIC值)及不同浓度下的抑菌率，培养基为标准的Muller-Hinton肉汤培养基(副溶血弧菌的培养基含有1％氯化钠)。
抑菌率＝(OD不加药-OD加药)/(OD不加药-OD培养基)×100％
3、实验结果：
上述实施例1获得的该缩酚酸环醚类化合物对铜绿假单胞菌的抑菌圈为7.7±0.6mm，MIC为102.4μM，表明上述化合物具有抑制铜绿假单胞菌生长的活性；对副溶血弧菌的抑菌圈为9.3±0.6mm(非完全抑制)，MIC>102.4μM，表明上述化合物不能抑制副溶血弧菌或活性很弱。
实施例4
本实施例为缩酚酸环醚类化合物的抑真菌活性实验。
1、白色念珠菌是一种致病性真菌，通常存在于正常人的口腔、上呼吸道、肠道和阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病。为条件致病性真菌，一般会在皮肤、粘膜、内脏及中枢神经发现，该菌会引起鹅口疮、口角炎、阴道炎、肺炎、脑膜炎、肠胃炎、心内膜炎，偶尔会引起败血病。因此，白色念珠菌是抗真菌药物研发的重要靶标病原微生物。
2、实验方法：
使用国际标准的滤纸片法进行抗真菌活性初筛，以抑菌圈直径衡量抗菌活性强弱(Clinical and Laboratory Standards Institute.2012.Performance Standards forAntimicrobial Disk Susceptibility Tests；Approved Standard.Eleventh EditionM2-A11.)；复筛使用96孔板，采用国际标准的微量沙氏培养基稀释法(National Committeefor Clinical Laboratory Standards.1997.Reference methed for broth dilutionantifungal susceptibility testing of yeasts:approved standard M27-A,7thed.NCCLS,Wayne,Pa.)，培养16～20h后，625nm读取OD值，测定化合物对白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC值)及不同浓度下的抑菌率，培养基为标准的沙氏培养基。
抑菌率＝(OD不加药-OD加药)/(OD不加药-OD培养基)×100％
3、实验结果：
上述实施例1获得的该缩酚酸环醚类化合物对白色假丝酵母的抑菌圈为8.3±0.6mm，MIC值为12.8μM，具有抑制白色假丝酵母的活性。
实施例5
本实施例为缩酚酸环醚类化合物的杀虫活性实验。
1、卤虫(Artemia salina)又称盐水丰年虫，属节肢动物门、甲壳纲、无甲目、盐水丰年虫科、卤虫属，实一种具有较高经济价值的鱼类饵料生物，也是一种对于毒素较为敏感的重要实验动物，其实验室培养的2～3龄幼虫可用于评价杀虫剂的活性强弱。
2、杀虫活性实验方法：
卤虫孵化与收集：在28℃下，将冻存的卤虫卵加入一个经白炽灯1000Lux照射的梨形玻璃漏斗中(其中盛有天然粗海盐配置的海水30g/L，卵投放量为0.15g/L)，每分钟通入420mL的空气，孵育24h，之后利用卤虫趋光性的特性，停止通气，对漏斗下半部分遮光，使死亡的卤虫沉到底部，除去死亡的卤虫，后对漏斗上半部分遮光，使卤虫聚集到底部，开启阀门，用干净的烧杯收集卤虫，用开口光滑的移液枪头吸取烧杯中的卤虫幼虫进行后续实验。
卤虫生物致死法：将样品在96孔板用无水甲醇连续倍半稀释成系列浓度，真空干燥除去有机溶剂，每孔加入200μL卤虫幼虫悬液(含20～30只虫体)，并设置空白对照组，28℃培养24h后，在双目体视显微镜下计数每孔中幼虫总数及死亡数，计算每孔的校正死亡率。
校正死亡率＝(处理孔死亡率-对照死亡率)/对照组存活率×100％
以校正死亡率-浓度作图，取对数趋势线，计算半致死量LC50。
3、实验结果：
上述获得的缩酚酸环醚类化合物的半致死剂量LC50为>102.4μM，表明其不具有杀虫活性或毒性较小。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
序列表
<110> 广东海洋大学
广东海洋大学深圳研究院
<120> 一种缩酚酸环醚类化合物及其制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 569
<212> DNA
<213> 海洋真菌爪曲霉诱变株(Aspergillus unguis)
<400> 1
tccgtaggtg aacctgcgga aggatcatta ccgagtgcgg gctgcctccg ggcgcccaac 60
ctcccaccct tgaatactaa acactgttgc ttcggcgggg agccccttcc ggggggcaag 120
ccgccgggga ccactgaact tcatgcctga gagtgatgca gtctgagtct gaattataaa 180
tcagtcaaaa ctttcaacaa tggatctctt ggttccggca tcgatgaaga acgcagcgaa 240
ctgcgataag taatgtgaat tgcagaattc agtgaatcat cgagtctttg aacgcacatt 300
gcgccccctg gcattccggg gggcatgcct gtccgagcgt cattgctgcc cttcaagccc 360
ggcttgtgtg ttgggtcgtc gtcccccccg ggggacgggc ccgaaaggca gcggcggcac 420
cgtgtccggt cctcgagcgt atggggcttt gtcacccgct cgattagggc cggccgggcg 480
ccagccggcg tcatcaatct attttaccag gttgacctcg gatcaggtag ggatacccgc 540
tgaacttaag catatcaata agcggagga 569

Claims (3)

1.一种缩酚酸环醚类化合物的制备方法，其特征在于，所述缩酚酸环醚类化合物的结构式如式1所示：
Figure FDA0002838499220000011
利用海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6通过发酵、提取、分离制备得到所述缩酚酸环醚类化合物；
所述海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6于2018年03月20日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC 60337；保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所；
所述发酵的步骤如下：将爪曲霉诱变菌株Aspergillus unguis 6-20-6在PSB培养基下发酵；28℃静置发酵15～25天；培养周期结束后加入适量硅藻土进行抽滤，分别得到菌丝体滤饼和滤液，即菌丝体和发酵液；
所述提取的步骤如下：发酵结束后得到菌丝体和发酵液；每500mL发酵液中加入300mLNKA树脂，摇匀1h，后转移至层析柱，放尽发酵液并水洗后，树脂先用甲醇、后用丙酮分别洗3个柱体积，减压浓缩；菌丝体滤饼用甲醇:丙酮＝2:1浸泡过夜，超声30min、抽滤、减压浓缩，重复三次；合并浓缩产物；
所述分离的步骤如下：提取结束后得到粗提物；粗提物经凝胶柱、制备液相色谱分离，收集满足条件(1)和/或条件(2)的组分，得到所述缩酚酸环醚类化合物；
条件(1)：薄层层析比移值为0.36的组分，薄层层析的薄层层析板为Merck公司生产的Silica gel 60F254，展开剂为氯仿：甲醇＝5:1；
条件(2)：液相色谱分析下tR为2.2min的组分，所述的液相色谱为Agilent InfinityⅡ1260，柱子尺寸为4.6mm×250mm，填料为EC.C18 4μm，流动相为60％MeOH-40％H2O，流速1mL/min，柱温箱30℃，检测器为DAD，检测波长210nm、254nm、280nm、320nm和365nm。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述海洋真菌爪曲霉诱变株Aspergillus unguis 6-20-6的ITS1-5.8S-ITS2 rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。
3.缩酚酸环醚类化合物在制备抗真菌剂中的应用，其特征在于，所述缩酚酸环醚类化合物的结构式如式1所示：
Figure FDA0002838499220000021
所述真菌为白色假丝酵母。
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