CN108634236B - 一种超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物活性物质提取领域，提供了超低脂活性鱿鱼‑大豆混合肽口服液的制备方法，该方法包括将鱿鱼板进行超临界CO2萃取、亚临界水萃取和乙醇提取获得鱿鱼醇溶蛋白液的操作，将大豆进行超临界CO2萃取、亚临界水萃取和乙醇提取获得大豆醇溶蛋白液的操作；以及对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作。本发明提供的方法，可以高效地去除鱿鱼和大豆中的脂类和腥味物质，解决了鱿鱼和大豆的腥味和苦味带来的服用不便的问题，同时该方法还能高效地从鱿鱼和大豆中获得功能肽，该功能肽具有良好的保健作用，且易于被人体消化吸收，尤其适用于心血管疾病的病人食用。

Description

一种超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法
技术领域
本发明属于营养素补充剂领域，特别涉及一种超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法。
背景技术
随着我国远洋鱿钓业的发展，鱿鱼成为我国主要的水产加工原料之一。据报道，我国鱿鱼的年加工量约为30-40万吨。鱿鱼富含钙、磷、铁元素，利于骨骼发育和造血，能有效治疗贫血；鱿鱼同时还含有大量的牛黄酸，可抑制血液中的胆固醇含量，缓解疲劳，恢复视力，改善肝脏功能；鱿鱼所含多肽和硒有抗病毒、抗射线作用；鱿鱼还具有滋阴养胃、补虚润肤的功能。
大豆的高营养价值已被人们所公认，大豆不仅含优质植物蛋白34-42％(重量百分含量)，还含有优质脂肪(主要为不饱和脂肪酸)20-22％、优质膳食纤维18-20％、双歧因子5％、VB1、VB2、VB6、VB12、VA、VD、VE等维生素和钙、锌、镁、铁、锰、硒、磷等微量元素及有特殊营养价值的黄酮类物质，同时皂甙、磷脂等的含量亦十分丰富。但由于大豆所固有的抗营养性、致甲状腺肿大、肠胃不适恶心、胀气和豆腥苦涩味等五大副作用致使人们对大豆的加工千百年来一直处于做豆浆、豆腐、榨油等初加工阶段，而同时大豆蛋白质一次降解转化为肽的转化率低下，通常≤38％。
中国专利申请CN104982980A公开了一种调理鱿鱼蛋白重组制品的加工方法：将鱿鱼进行预处理，除酸处理，接着斩拌混合淀粉、食用油、大豆分离蛋白等辅料，从而得到鱿鱼蛋白重组制品。该鱿鱼蛋白重组制品不仅没有秘鲁鱿鱼本身的酸味，而且在很好保留了鱿鱼风味的同时，还兼具营养丰富、易于消化的优点，尤其适合儿童、老年人、大病初愈人群等消化能力较弱的人群。然而该方法依旧较为粗犷，没能有效去除各种不利的成分。
目前，虽然从鱿鱼和大豆中获得活性肽的方法有很多，但存在诸多缺点，例如不能有效去除鱿鱼和大豆中的胆固醇和腥、苦味。因此，目前的科研和实践中需要一种新方法，以将动物蛋白肽和富含黄酮类物质、皂甙、磷脂等营养物质的大豆肽结合，制备得到超脱脂的、分子量较小的、有活性的、易于吸收的鱿鱼-大豆活性肽。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法。
本发明提供了一种超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法，所述方法包括将鱿鱼板进行超临界CO2萃取、亚临界水萃取和乙醇提取获得鱿鱼醇溶蛋白液的操作，将大豆进行超临界CO2萃取、亚临界水萃取和乙醇提取获得大豆醇溶蛋白液的操作；以及对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作。
优选地，所述方法还包括：
在将鱿鱼板进行所述超临界CO2萃取之前，对所述鱿鱼板进行预处理的操作；
优选地，所述预处理包括将所述鱿鱼板进行破碎处理，打成块状，再用去离子水冲洗3-4次，然后打成浆状，从而获得所述鱿鱼鱼糜的操作；以及，
在将大豆进行所述超临界CO2萃取之前，对所述大豆进行预处理的操作；
优选地，所述预处理包括将新鲜大豆粉碎后挤压膨化得到膨化大豆物料，将膨化大豆物料与水混合得到所述膨化大豆混合液的操作；其中，所述膨化大豆物料与水的重量比为1g：(30-60)mL。
优选地，所述将鱿鱼板进行超临界CO2萃取的次数为两次，两次所述超临界CO2萃取的条件相同或不同；
优选地，在所述将鱿鱼板进行超临界CO2萃取中，所述超临界CO2萃取的条件包括：压力为10-45MPa，温度为35-60℃，时间为0.5-3h，CO2流量为15-40L/h；
所述将大豆进行超临界CO2萃取的次数为两次，两次所述超临界CO2萃取的条件相同或不同；
优选地，在所述将大豆进行超临界CO2萃取中，所述超临界CO2萃取的条件包括：压力为10-45MPa，温度为35-60℃，时间为0.5-3h，CO2流量为15-40L/h。
优选地，对经过所述超临界CO2萃取后的鱿鱼板进行所述亚临界水萃取的条件包括：温度为100-150℃，压力为0.5-40MPa，时间为2-4h，水流量为5-70L/h，料液比为1g:(30-60)mL；
对经过所述超临界CO2萃取后的大豆进行所述亚临界水萃取的条件包括：温度为100-150℃，压力为0.5-40MPa，时间为2-4h，水流量为5-70L/h，料液比为1g:(30-60)mL。
优选地，对经过所述亚临界水萃取后的鱿鱼板进行所述乙醇提取的条件包括：乙醇的浓度为60％-90％，温度为50-60℃，pH为8-9，物料与乙醇的重量比为1：(8-12)；
对经过所述亚临界水萃取后的大豆进行所述乙醇提取的条件包括：乙醇的浓度为60％-90％，温度为50-60℃，pH为8-9，物料与乙醇的重量比为1：(8-12)。
优选地，对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作使用双酶进行；
优选地，所述双酶为碱性蛋白酶和风味蛋白酶；
所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的重量比为1:(0.5-1.5)；
优选地，所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的总量、碱性蛋白酶、风味蛋白酶三者之间的重量比为100：(1-5)：(1-5)。
优选地，所述使用双酶进行酶解的操作的条件为：先将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的混合液调节至pH为8-10，然后加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶，在25-45℃下酶解1-3h；然后在90-100℃下灭酶处理4-10min以使得碱性蛋白酶和风味蛋白酶失活；再将温度降低至40-50℃，获得超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液。
优选地，所述使用双酶进行酶解的操作中，加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行酶解1-3h的过程中，还进行加压操作以辅助酶解；
所述加压操作为：将温度调整到70-80℃并加压到2-4kgf/cm2，并保持10-20min，然后在3秒以内突然使压力降至0kgf/cm2；
优选地，在加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行酶解1-3h的过程中，进行至少一个所述加压操作。
优选地，所述方法还包括在对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作之后的吸附纯化、和/或浓缩的操作。
优选地，所述吸附纯化使用活性炭进行；
优选地，使用活性炭进行吸附纯化在20-35℃、pH2.5-5.0的条件下进行，其中活性炭和待纯化液的重量比为1∶(5-15)；
所述浓缩为真空浓缩；
优选地，所述真空浓缩在真空度82.7-90.6KPa、温度45-55℃下，浓缩处理10-15min。
本发明提供的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法，可以高效地去除鱿鱼和大豆中的脂类和腥味物质，解决了鱿鱼和大豆的腥味和苦味带来的服用不便的问题，同时该方法还能高效地从鱿鱼和大豆中获得功能肽，该功能肽具有良好的保健作用，且易于被人体消化吸收，尤其适用于心血管疾病的病人食用。
本发明的其他特征和优点将在如下的具体实施方式部分详细描述。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的实施方式作进一步地详细描述。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
本发明提供了一种超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法，所述方法包括将鱿鱼板进行超临界CO2萃取、亚临界水萃取和乙醇提取获得鱿鱼醇溶蛋白液的操作，将大豆进行超临界CO2萃取、亚临界水萃取和乙醇提取获得大豆醇溶蛋白液的操作；以及对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作。
根据本发明，所述鱿鱼板可以为将鱿鱼去除内脏之后的产物。进一步地，所述鱿鱼板可以为去掉包括但不限于墨囊、眼球、肝脏、生殖腺(缠卵腺、精巢、卵巢等)、肚子内类似塑料片的脊椎骨和白色粘膜之后的产物；更进一步地，所述鱿鱼板可以为去掉鱿鱼头、足、墨囊、眼球、肝脏、生殖腺(缠卵腺、精巢、卵巢等)肚子内类似塑料片的脊椎骨和白色粘膜之后的产物。
所述鱿鱼可以为阿根廷鱿鱼、秘鲁鱿鱼和太平洋鱿鱼中的任意一种或多种。所述鱿鱼可以为活鱿鱼，或者为在不高于-18℃的冷冻条件下保存不超过15天的鱿鱼。
根据本发明，在将鱿鱼板进行超临界CO2萃取之前，还包括对鱿鱼板进行预处理的操作。所述预处理可以包括将鱿鱼板进行破碎处理，打成块状，再用去离子水冲洗3-4次，然后打成浆状，从而获得鱿鱼鱼糜的操作。
根据本发明，所述将鱿鱼板进行超临界CO2萃取的次数可以为至少一次，优选为两次，两次超临界CO2萃取的条件可以相同也可以不同。超临界CO2萃取的条件可以包括：压力为10-45MPa，温度为35-60℃，时间为0.5-3h，CO2流量为15-40L/h。
进一步地，在超临界CO2萃取的条件中，压力可以为10、12、15、18、20、22、25、27、30、32、35、38、40、42和45MPa中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为10-20MPa、30-45MPa、15-35MPa、18-27MPa或22-35MPa；温度可以为35、38、40、42、45、47、50、52、55和60℃中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为35-42℃、50-60℃、40-52℃、38-55℃或45-55℃；时间可以为0.5、0.8、1、1.2、1.5、1.7、2、2.2、2.5、2.8和3h中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为0.5-1.5h、2.2-3h或1.2-2.5h；CO2流量可以为15、18、20、22、25、28、30、32、35、38和40L/h中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为15-25L/h、30-40L/h、22-32L/h、18-28L/h或25-35L/h。
所述超临界CO2萃取的操作可以在超临界萃取釜中，并以CO2作为萃取剂对鱿鱼板进行萃取，优选对经过上述预处理后获得的鱿鱼鱼糜进行两次萃取。经过第一次超临界CO2萃取，弃去鱿鱼肝油，得到第一次脱脂鱿鱼鱼糜，然后再对经过第一次超临界CO2萃取之后获得的第一次脱脂鱿鱼鱼糜进行第二次超临界CO2萃取，弃去鱿鱼肝油，得到第二次脱脂鱿鱼鱼糜(即脱脂鱿鱼产物)。第二次脱脂鱿鱼鱼糜无腥味，脂类物质含量小于0.1％(重量百分含量)。
根据本发明，对经过超临界CO2萃取后的鱿鱼板(优选为经过上述第二次超临界CO2萃取后获得的第二次脱脂鱿鱼鱼糜，或称为脱脂鱿鱼产物)进行所述亚临界水萃取的条件可以包括：温度为100-150℃，压力为0.5-40MPa，时间为2-4h，水流量为5-70L/h，料液比为1g:(30-60)mL；其中，“料液比”中的“料”是指第二次超临界CO2萃取后的第二次脱脂鱿鱼鱼糜的重量，“液”是指加入的水的体积。经过亚临界水萃取，即可获得超脱脂鱿鱼蛋白混合物，其中脂类物质含量小于0.1％。
进一步地，在所述亚临界水萃取中，温度可以为100、105、110、115、120、125、130、135、140、145和150℃中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为100-120℃、130-150℃、110-130℃、125-140℃或105-120℃；压力可以为0.5、1、5、8、10、12、15、18、20、22、25、28、30、32、35、38和40Mpa中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为0.5-15Mpa、30-40Mpa、12-22Mpa、20-32Mpa或35-40Mpa；时间可以为2、2.2、2.4、2.5、2.6、2.8、3、3.2、3.4、3.5、3.7、3.9和4中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为2-2.5h、3.5-4h、2.4-3.4h、2.8-3.5h或3.2-3.9h；水流量可以为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65和70L/h中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为5-25L/h、15-35L/h、25-50L/h、40-60L/h或45-70L/h；料液比可以为1g:30mL、1g:35mL、1g:40mL、1g:45mL、1g:50mL、1g:55mL和1g:60mL中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为1g:(30-40)mL、1g:(50-60)mL、1g:(35-45)mL或1g:(45-55)mL。
优选地，在所述亚临界水萃取中，温度为140℃，压力为26MPa，萃取时间为3h，水流量为30L/h，料液比为1g:45mL。
根据本发明，对经过所述亚临界水萃取后的鱿鱼板(即，超脱脂鱿鱼蛋白混合物)进行所述乙醇提取的条件可以包括：乙醇的浓度(体积分数)为60％-90％，温度为50-60℃，pH为8-9，物料(经过两次超临界CO2萃取后的产物)与乙醇的重量比为1：(8-12)。具体地，所述物料可以为上述第二次脱脂鱿鱼鱼糜。
进一步地，在所述乙醇提取中，乙醇的浓度可以为60％、62％、65％、68％、70％、72％、75％、78％、80％、82％、85％、87％和90％中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为60％-75％、78％-90％、62％-72％、78％-87％或70％-80％；温度可以为50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和60℃中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为50-55℃、56-60℃、52-56℃或54-59℃；pH为8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9和9中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为8-8.4、8.5-9、8.2-8.8或8.3-8.7；物料与乙醇的重量比为1:8、1:9、1:10、1:11和1:12中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为1：(8-10)、1：(9-12)或1：(10-11)。
经过上述乙醇提取之后，即可获得鱿鱼醇溶蛋白液。
根据本发明，在将大豆进行超临界CO2萃取之前，还包括对大豆进行预处理的操作。所述预处理可以包括将新鲜大豆粉碎后挤压膨化得到膨化大豆物料，将膨化大豆物料与水(优选去离子水)混合得到膨化大豆混合液的操作；其中，膨化大豆物料与水的重量比可以为1g：(30-60mL)，如果水用量过少(低于下限1g：30mL)，会导致萃取不充分，损耗严重，如果水用量过多(高于上限1g：60mL)，会导致水的浪费。
根据本发明，所述将大豆进行超临界CO2萃取的次数可以为至少一次，优选为两次，两次超临界CO2萃取的条件可以相同也可以不同。超临界CO2萃取的条件可以包括：压力为10-45MPa，温度为35-60℃，时间为0.5-3h，CO2流量为15-40L/h。
优选地，对大豆进行超临界CO2萃取的条件与对鱿鱼板进行超临界CO2萃取的条件相同，这样可以方便操作，提高生产效率，降低设备损耗。
进一步地，在超临界CO2萃取的条件中，压力可以为10、12、15、18、20、22、25、27、30、32、35、38、40、42和45MPa中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为10-20MPa、30-45MPa、15-35MPa、18-27MPa或22-35MPa；温度可以为35、38、40、42、45、47、50、52、55和60℃中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为35-42℃、50-60℃、40-52℃、38-55℃或45-55℃；时间可以为0.5、0.8、1、1.2、1.5、1.7、2、2.2、2.5、2.8和3h中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为0.5-1.5h、2.2-3h或1.2-2.5h；CO2流量可以为15、18、20、22、25、28、30、32、35、38和40L/h中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为15-25L/h、30-40L/h、22-32L/h、18-28L/h或25-35L/h。
所述超临界CO2萃取的操作可以在超临界萃取釜中，并以CO2作为萃取剂对大豆进行萃取，优选对经过上述预处理后获得的膨化大豆混合液进行两次萃取。经过第一次超临界CO2萃取，弃去大豆油脂，得到第一次脱脂大豆蛋白混合物，然后再对经过第一次超临界CO2萃取之后获得的第一次脱脂大豆蛋白混合物进行第二次超临界CO2萃取，弃去大豆油脂，得到第二次脱脂大豆蛋白混合物(即脱脂大豆产物)。第二次脱脂大豆蛋白混合物无腥味，脂类物质含量小于0.1％(重量百分含量)。
根据本发明，对经过超临界CO2萃取后的大豆(优选为经过上述第二次超临界CO2萃取后获得的第二次脱脂大豆蛋白混合物，或称为脱脂大豆产物)进行所述亚临界水萃取的条件可以包括：温度为100-150℃，压力为0.5-40MPa，时间为2-4h，水流量为5-70L/h，料液比为1g:(30-60)mL；其中，“料液比”中的“料”是指第二次超临界CO2萃取后的二次脱脂大豆蛋白混合物的重量，“液”是指加入的水的体积。经过亚临界水萃取，即可获得超脱脂大豆蛋白混合物，其中脂类物质含量小于0.1％。
进一步地，在所述亚临界水萃取中，温度可以为100、105、110、115、120、125、130、135、140、145和150℃中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为100-120℃、130-150℃、110-130℃、125-140℃或105-120℃；压力可以为0.5、1、5、8、10、12、15、18、20、22、25、28、30、32、35、38和40Mpa中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为0.5-15Mpa、30-40Mpa、12-22Mpa、20-32Mpa或35-40Mpa；时间可以为2、2.2、2.4、2.5、2.6、2.8、3、3.2、3.4、3.5、3.7、3.9和4中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为2-2.5h、3.5-4h、2.4-3.4h、2.8-3.5h或3.2-3.9h；水流量可以为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65和70L/h中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为5-25L/h、15-35L/h、25-50L/h、40-60L/h或45-70L/h；料液比可以为1g:30mL、1g:35mL、1g:40mL、1g:45mL、1g:50mL、1g:55mL和1g:60mL中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为1g:(30-40)mL、1g:(50-60)mL、1g:(35-45)mL或1g:(45-55)mL。
优选地，在所述亚临界水萃取中，温度为140℃，压力为26MPa，萃取时间为3h，水流量为30L/h，料液比为1g:45mL。
根据本发明，对经过所述亚临界水萃取后的大豆(即，脱脂大豆蛋白混合物)进行所述乙醇提取的条件可以包括：乙醇的浓度(体积分数)为60％-90％，温度为50-60℃，pH为8-9，物料(经过两次超临界CO2萃取后的产物)与乙醇的重量比为1：(8-12)。具体地，所述物料可以为上述第二次脱脂大豆蛋白混合物。
优选地，对大豆进行亚临界水萃取的条件与对鱿鱼板进行亚临界水萃取的条件相同，这样可以方便操作，提高生产效率，降低设备损耗。
进一步地，在所述乙醇提取中，乙醇的浓度可以为60％、62％、65％、68％、70％、72％、75％、78％、80％、82％、85％、87％和90％中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为60％-75％、78％-90％、62％-72％、78％-87％或70％-80％；温度可以为50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和60℃中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为50-55℃、56-60℃、52-56℃或54-59℃；pH为8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9和9中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为8-8.4、8.5-9、8.2-8.8或8.3-8.7；物料与乙醇的重量比为1:8、1:9、1:10、1:11和1:12中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为1：(8-10)、1：(9-12)或1：(10-11)。
经过上述乙醇提取之后，即可获得大豆醇溶蛋白液。
根据本发明，对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作可以使用双酶进行。其中，所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的重量比可以为1：(0.5-1.5)。可以将所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液按照上述重量比混合后使用双酶进行酶解，也可以分别进行双酶酶解后按照上述重量比混合。
进一步地，鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的重量比可以为1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4和1:1.5中的任意一个或两个之间的范围，例如可以为1:(0.5-0.8)、1:(1.1-1.5)、1:(0.7-1.3)、1:(0.8-1.2)或1:(0.9-1.4)。
所述双酶可以为碱性蛋白酶和风味蛋白酶。所述碱性蛋白酶又称丝氨酸蛋白酶，可以在碱性条件(最适pH一般在9～11范围内)下将蛋白质水解。所述碱性蛋白酶可以为购自无锡酶制剂厂的碱性蛋白酶ProperaseE。所述风味蛋白酶可以使风味前体物水解，从而释放出风味物质，增强和改善食品的风味，风味酶还可以控制肽的苦味，减少苦味对人的不适感。所述风味蛋白酶可以为购自上海士锋生物科技有限公司牌号为A0990S的商品。
在上述使用双酶进行酶解(可以简称为双酶酶解)的操作中，鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的总量、碱性蛋白酶、风味蛋白酶三者之间的重量比可以为100：(1-5)：(1-5)。
上述使用双酶进行酶解的操作的条件可以为：先将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的混合液调节至pH为8-10，然后加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶，在25-45℃下酶解1-3h；然后在90-100℃下灭酶处理4-10min以使得碱性蛋白酶和风味蛋白酶失活；再将温度降低至40-50℃即可获得超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液(即，鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的混合酶解液)。当然，也可以分别对鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行上述双酶解操作，然后再将酶解液混合即可。
由于碱性蛋白酶和风味蛋白酶需要碱性的环境才能有效发挥酶解作用，因此需要首先将所述鱿鱼醇溶蛋白液和/或大豆醇溶蛋白液的pH调节到碱性范围内进行酶解，本发明优选将pH调节到8-10。本发明优选使用食品级氢氧化钠来调节pH。可以将食品级氢氧化钠配制成0.02mol/L的溶液用以调节pH。
上述使用双酶进行酶解的操作中，加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行酶解1-3h的过程中，还可以进行加压操作以辅助酶解。所述加压操作可以为：将温度调整到70-80℃并加压到2-4kgf/cm2(优选3kgf/cm2)，并保持10-20min，然后在3秒以内突然使压力降至0kgf/cm2。在加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行酶解1-3h的过程中，可以进行至少一个上述加压操作。通过采用上述加压操作，可以使得蛋白质断链更加均匀完全，得到的小肽链更短，酶解时间更短。
根据本发明，所述超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法还可以包括在对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作之后的吸附纯化、和/或浓缩的操作。
所述吸附纯化可以使用活性炭进行，通过使用活性炭进行吸附纯化可以除去芳香族氨基酸，从而进一步去苦、去腥。使用活性炭进行吸附纯化可以在20-35℃、pH2.5-5.0的条件下进行，其中活性炭和待纯化液(即，经过双酶酶解处理之后的鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液)的重量比可以为1∶(5-15)。可以采用食品级柠檬酸或乙酸(浓度可以为0.02mol/L)调整纯化液的pH至2.5-5。
所述浓缩可以为真空浓缩，例如可以在真空度82.7-90.6KPa、温度45-55℃下，浓缩干燥处理10-15min。
经过上述浓缩处理后即可获得重量百分比浓度为15-25％(优选20％)的溶液，即超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液。本发明也可以将该口服液进行干燥处理制备得到肽粉；所述干燥处理可以为采用超滤膜截留分子量为3KD以下的分子，这样可以更有利于收集小分子量的肽。
本发明提供的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法，可以从鱿鱼和大豆中提取得到功能肽(混合功能双肽)，该混合功能双肽分子量较小，与富含黄酮类物质、皂甙、磷脂等活性物质形成的混合物易被人体消化吸收，还具有口感丰富，食用简便等特点，还可用于制备抗氧化、降血压、抗动脉粥样硬化或美容的保健食品或药品，同时还有抗衰老、抗癌、抗疲劳等生理功能和健脑及预防心脑血管病的功能，因此非常适合心血管疾病病人食用，具有广阔的市场和应用前景。
经分子量检测，采用本发明的方法获得的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液中的多肽分子量分布为800D-3KD。
本发明提供的方法多次(优选三次)利用超临界萃取技术，前两次的超临界CO2萃取能够有效去除鱿鱼和大豆油脂和腥、苦味物质，达到脱脂、脱苦、脱腥的目的，同时第三次的亚临界水萃取中的超临界水与常温常压水相比更类似于有机溶剂，具有低相对介电常数、高离子浓度、低粘度和低表面张力及高扩散能力等特点，能显著提高溶质的溶出率；又因其无毒、环保、经济等优点，广泛应用于加工生产中。
本发明通过使用超临界CO2萃取和亚临界水萃取技术对蛋白进行萃取，更容易获得水溶性蛋白，同时脱脂效果良好，同时利用双酶解和加压双重作用，得到的活性肽链短，易吸收。如果上述操作的操作参数过高会破坏部分样品活性，参数过低或过高产率较低，脱脂、脱腥效果不好。
下面以具体的实施例为例说明本发明提供的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法。
实施例1
本实施例的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法按照如下方式操作。
鱿鱼醇溶蛋白液的制备：
鱿鱼预处理：将新鲜活秘鲁鱿鱼去除墨囊、眼球、肝脏、生殖腺(缠卵腺、精巢、卵巢等)、肚子内类似塑料片的脊椎骨和白色粘膜，得到鱿鱼板。再将鱿鱼板破碎处理，打成块状，用去离子水洗4次后打成浆状的鱿鱼鱼糜。
超临界CO2萃取：将鱿鱼鱼糜通入超临界萃取釜中，进行第一次超临界CO2萃取，萃取剂为CO2，萃取条件为：压力为30MPa，温度为35℃，时间为1h，CO2流量为40L/h，弃去鱿鱼肝油，得到第一次脱脂鱿鱼鱼糜；将第一次脱脂鱿鱼鱼糜继续通入超临界萃取釜中，进行第二次超临界CO2萃取，萃取剂为CO2，萃取条件为：压力为45MPa，温度为50℃，时间为1h，CO2流量为40L/h，弃去鱿鱼肝油，得到第二次脱脂鱿鱼鱼糜。第二次脱脂鱿鱼鱼糜无腥味，脂类物质的重量百分含量小于0.1％。
亚临界水萃取：然后将第二次脱脂鱿鱼鱼糜通入超临界萃取釜中，采用超临界水流体在超临界条件下萃取，亚临界水萃取的条件为：温度为150℃，压力为40MPa，水流量为20L/h，时间为2h，从而获得超脱脂鱿鱼蛋白混合物，脂类物质含量小于0.1％。
乙醇提取：再用乙醇对超脱脂鱿鱼蛋白混合物进行提取，乙醇提取的条件为：乙醇体积分数为60％，温度为50℃，pH为8.0，超脱脂鱿鱼蛋白混合物与乙醇的重量比为1∶8，从而获得鱿鱼醇溶蛋白液。
大豆醇溶蛋白液的制备：
大豆预处理：将新鲜大豆粉碎后挤压膨化得到膨化大豆物料，将膨化大豆物料与去离子水按照重量比为1：45的比例混合后得到膨化大豆混合液。
超临界CO2萃取：将膨化大豆混合液通入超临界萃取釜中，进行第一次超临界CO2萃取，萃取剂为CO2，萃取条件为：压力为30MPa，温度为40℃，时间为1h，CO2流量为40L/h，弃去大豆油脂，得到第一次脱脂大豆蛋白混合物；将第一次脱脂大豆蛋白混合物继续通入超临界萃取釜中，进行第二次超临界CO2萃取，萃取剂为CO2，萃取条件为：压力为40MPa，温度为50℃，时间为2h，CO2流量为20L/h，弃去大豆油脂，得到第二次脱脂大豆蛋白混合物。第二次脱脂大豆蛋白混合物无腥味，脂类物质的重量百分含量小于0.1％。
亚临界水萃取：然后将第二次脱脂大豆蛋白混合物通入超临界萃取釜中，采用超临界水流体在超临界条件下萃取，亚临界水萃取的条件为：温度为50℃，压力为40MPa，水流量为20L/h，时间为2h，从而获得超脱脂大豆蛋白混合物，脂类物质含量小于0.1％。
乙醇提取：再用乙醇对超脱脂大豆蛋白混合物进行提取，乙醇提取的条件为：乙醇体积分数为60％，温度为50℃，pH为8.0，超脱脂大豆蛋白混合物与乙醇的重量比为1∶8，从而获得大豆醇溶蛋白液。
鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的酶解：
将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液按照重量比为1：0.5的比例混合，再用浓度为0.02mol/L食品级氢氧化钠溶液将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的混合液调节pH至8.0，再按照鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的总量、ProperaseE碱性蛋白酶、风味蛋白酶的重量比为100:2:2的比例，向鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的混合液中加入ProperaseE碱性蛋白酶和风味蛋白酶，在35℃下酶解2h；在酶解期间，将温度调节到80℃，然后先加压到3kgf/cm2，并保持10min，再用2秒的时间使压力降至0kgf/cm2；然后升温到100℃灭酶4min；再将温度降至40℃，即可得到超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液。
然后利用活性炭在35℃、pH 5.0的条件下，调整活性炭与超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液的重量比为1∶5，对超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液进行吸附纯化，得到纯化后的超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液。最后在真空度90.6Kpa、温度为50℃下浓缩干燥处理10min，获得20％的溶液，即得到超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液。
实施例2
除了以下操作参数外，其他操作参数同实施例1。
在鱿鱼预处理时，将新鲜活秘鲁鱿鱼换成在-18℃下冷冻不超过15天的阿根廷鱿鱼。
在用乙醇对超脱脂鱿鱼蛋白混合物进行乙醇提取时，将超脱脂鱿鱼蛋白混合物与乙醇的重量比改为1：12。
在用乙醇对超脱脂大豆蛋白混合物进行乙醇提取时，超脱脂大豆蛋白混合物与乙醇的重量比为1：12，将温度改为60℃。
在鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的酶解时，鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的重量比改为1：1.5；将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的总量、ProperaseE碱性蛋白酶、风味蛋白酶的重量比改为100：1：1的比例；将加压操作的温度改为70℃，保持时间改为20min，并用3秒的时间使压力降至0kgf/cm2。
实施例3
除了以下操作参数外，其他操作参数同实施例1。
在对鱿鱼鱼糜进行第一次超临界CO2萃取时，萃取时间改为0.5h。
在对经过第一次脱脂鱿鱼鱼糜进行第二次超临界CO2萃取时，温度改为40℃，时间改为0.5h。
在对第二次脱脂鱿鱼鱼糜进行超临界水流体萃取时，萃取时间改为4h。
在对超脱脂鱿鱼蛋白混合物进行乙醇提取时，温度改为60℃，超脱脂鱿鱼蛋白混合物与乙醇的重量比改为1∶10。
在对膨化大豆混合液进行第一次超临界CO2萃取时，压力改为20MPa，温度改为35℃，时间改为2h。
在对膨化大豆混合液进行第二次超临界CO2萃取时，压力改为30MPa，温度改为40℃，时间改为2h。
在对超脱脂大豆蛋白混合物进行乙醇提取时，温度改为60℃，pH改为9.0，超脱脂大豆蛋白混合物与乙醇的重量比改为1∶10。
在鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的酶解时，鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的重量比改为1：1；将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的总量、ProperaseE碱性蛋白酶、风味蛋白酶的重量比改为100:5:5；将加压操作的温度改为70℃，并在3秒内突然使压力降至0kgf/cm2；将活性炭与超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液的重量比改为1∶15，pH改为5.0。
实施例4
除了以下操作参数外，其他操作参数同实施例1。
在鱿鱼预处理时，将秘鲁鱿鱼换成太平洋鱿鱼。
在对鱿鱼鱼糜进行第一次超临界CO2萃取时，萃取压力改为25MPa。
在对经过第一次脱脂鱿鱼鱼糜进行第二次超临界CO2萃取时，温度改为60℃。
在对超脱脂鱿鱼蛋白混合物进行乙醇提取时，温度改为60℃，pH改为9.0。
在对膨化大豆混合液进行第一次超临界CO2萃取时，压力改为45MPa，温度改为35℃。
在对膨化大豆混合液进行第二次超临界CO2萃取时，温度改为150℃。
在用乙醇对超脱脂大豆蛋白混合物进行乙醇提取时，乙醇的体积分数改为90％，温度改为60℃，pH改为8.5，超脱脂大豆蛋白混合物与乙醇的重量比改为1∶10。
在鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的酶解时，鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的重量比改为1：1.2；将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的总量、ProperaseE碱性蛋白酶、风味蛋白酶的重量比改为100:3:3，酶解时间改为1h；将加压操作中改为在3秒内突然使压力降至0kgf/cm2；灭酶时间改为10min；将活性炭与超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液的重量比改为1∶10。
实施例5
除了以下操作参数外，其他操作参数同实施例1。
在对鱿鱼鱼糜进行第一次超临界CO2萃取时，萃取压力改为45MPa，温度改为60℃，时间改为2h。
在对经过第一次脱脂鱿鱼鱼糜进行第二次超临界CO2萃取时，温度改为60℃，时间改为2h。
在对第二次脱脂鱿鱼蛋白混合物进行亚临界水萃取时，温度改为20℃，时间改为3h。
在对超脱脂鱿鱼蛋白混合物进行乙醇提取时，乙醇的体积分数改为90％。
在对膨化大豆混合液进行第一次超临界CO2萃取时，压力改为45MPa，温度改为60℃，时间改为2h。
在对膨化大豆混合液进行第二次超临界CO2萃取时，温度改为60℃，时间改为2h。
在对第二次脱脂大豆蛋白混合物进行亚临界水萃取时，温度改为120℃，时间改为4h。
在用乙醇对超脱脂大豆蛋白混合物进行乙醇提取时，乙醇的体积分数改为90％，温度改为60℃，超脱脂大豆蛋白混合物与乙醇的重量比改为1∶12。
在鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的酶解时，鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的重量比改为1：0.8；将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的总量、ProperaseE碱性蛋白酶、风味蛋白酶的重量比改为100:4:4，酶解时间改为3h；将加压操作的温度改为75℃，并在2.5秒内突然使压力降至0kgf/cm2；灭酶温度改为90℃，时间改为10min；将温度降至50℃，得到超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液；将活性炭与超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液的重量比改为1∶15。
测试例
1、实施例1-5获得的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液中的脂肪酸含量的测定方法如下：
将实施例1-5获得的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液分别使用喷雾干燥法干燥后称取样品5g，将样品置入索氏提取器，加入100mL乙醚，40℃回流提取，提取时间为6h。冷却后，用旋转蒸发仪蒸除乙醚溶剂，得到提取后的油脂；然后取油脂2滴置入10mL试管，加0.5mol/mL氢氧化钾-甲醇溶液1.0mL，摇匀，在60℃水浴中反应30min。取出冷却至室温，加入3mL的14％三氟化硼-甲醇溶液，摇匀，60℃水浴加热3min，冷却至室温，加入1mL正己烷提取，将上层溶液用于气相色谱分析。
分析结果如表1所示，百分数均为重量百分比含量。
表1脂肪酸含量测定结果
Figure BDA0001662687110000161
*注：序号1、2、3表示同一个样品进行的三个平行测试。
由表1中的数据可以看出，本发明提供的方法制备得到的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液中的脂肪酸含量很低，因此非常适用于心血管疾病的病人食用。
2、实施例1-5获得的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的羟自由基清除能力测定方法如下：
取0.5mL的0.75mol/L的磷二氮菲溶液，1mL的0.15mol磷酸缓冲液(pH为7.4)和5mL去离子水，充分混匀，加入0.5mL的0.75mmol/L FeSO4，混匀后，加入0.5mL的0.12％的H2O2溶液，在37℃下反应60min，冷却后，在波长536nm测量体系吸光度Ai；操作同上，以0.5mL去离子水代替H2O2溶液，测量的吸光度为An；以0.5mL的待测样品(实施例1-5获得的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液)替代去离子水时候测量的吸光度为As；羟自由基清除率按照如下公式计算：
羟自由基清除率(·OH，％)＝(As-Ai)/(An-Ai)×100％
表2羟自由基清除率测定结果
Figure BDA0001662687110000171
*注：序号1、2、3表示同一个样品进行的三个平行测试。
由表2中的数据可以看出，本发明提供的方法制备得到的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的羟自由基清除率很高，因此具有良好的保健作用，非常适用于心血管疾病的病人食用。
3、实施例1-5获得的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液中的小肽(分子量较小的肽)的含量的测定。
利用三氯醋酸作蛋白质沉淀剂，将超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液中肽链较长的肽沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，经离心、过滤、消化、蒸馏，测定其蛋白质量。本方法是参照中华人民共和国轻海洋鱼低聚肽粉(QB/T2879-2007)基础上修订而来。
较低分子量的蛋白质水解物(其中包含肽类及游离氨基酸)，可溶于三氯乙酸溶液，高分子蛋白质在三氯乙酸溶液中容易发生沉淀。样品经三氯乙酸溶解后，离心分离出沉淀物质，清液中酸溶蛋白质含量减去游离氨基酸含量即为低聚肽含量。
具体测定方法如下：
取10mL样品(实施例1-5获得的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液)(如果做成粉末的化，取2g粉末即可)，加入10ml的15wt％TCA(三氯乙酸)，混合均匀，静置5min。将溶液定量转移，在4000rpm下离心10min，取全部上清液。按GB/T 5009.5的方法测定可溶性蛋白质。蛋白质转换系数为6.25，同时按GB/T 5009.5的方法测定游离氨基酸。每个样品平行测定三次。低聚肽含量＝可溶性蛋白质含量-游离氨基酸含量。
实施例1-5以及对比例制备的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液中小肽(即功能肽)含量见表1。
表3小肽含量测定结果
Figure BDA0001662687110000181
*注：序号1、2、3表示同一个样品进行的三个平行测试。
由表3中的数据可以看出，本发明提供的方法制备得到的超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液中小肽含量高，因此易于被人体消化吸收，非常适用于心血管疾病的病人食用。
由技术常识可知，本发明可以通过其它的不脱离其精神实质或必要特征的实施方案来实现。因此，上述公开的实施方案，就各方面而言，都只是举例说明，并不是仅有的。所有在本发明范围内或在等同于本发明的范围内的改变均被本发明包含。

Claims (10)

1.一种超低脂活性鱿鱼-大豆混合肽口服液的制备方法，其特征在于，所述方法包括将鱿鱼板进行超临界CO2萃取、亚临界水萃取和乙醇提取获得鱿鱼醇溶蛋白液的操作，将大豆进行超临界CO2萃取、亚临界水萃取和乙醇提取获得大豆醇溶蛋白液的操作；以及对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作；
对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作使用双酶进行，所述双酶为碱性蛋白酶和风味蛋白酶，所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的重量比为1:(0.5-1.5)，所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的总量、碱性蛋白酶、风味蛋白酶三者之间的重量比为100：(1-5)：(1-5)；
所述使用双酶进行酶解的操作的条件为：先将鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液的混合液调节至pH为8-10，然后加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶，在25-45℃下酶解1-3h；然后在90-100℃下灭酶处理4-10min以使得碱性蛋白酶和风味蛋白酶失活；再将温度降低至40-50℃，获得超脱脂鱿鱼-大豆混合肽液；
在所述将鱿鱼板进行超临界CO2萃取中，所述超临界CO2萃取的条件包括：压力为10-45MPa，温度为35-60℃，时间为0.5-3h，CO2流量为15-40L/h；对经过所述超临界CO2萃取后的鱿鱼板进行所述亚临界水萃取的条件包括：温度为100-150℃，压力为0.5-40MPa，时间为2-4h，水流量为5-70L/h，料液比为1g:(30-60)mL；对经过所述亚临界水萃取后的鱿鱼板进行所述乙醇提取的条件包括：乙醇的浓度为60％-90％，温度为50-60℃，pH为8-9，物料与乙醇的重量比为1：(8-12)；
在所述将大豆进行超临界CO2萃取中，所述超临界CO2萃取的条件包括：压力为10-45MPa，温度为35-60℃，时间为0.5-3h，CO2流量为15-40L/h；对经过所述超临界CO2萃取后的大豆进行所述亚临界水萃取的条件包括：温度为100-150℃，压力为0.5-40MPa，时间为2-4h，水流量为5-70L/h，料液比为1g:(30-60)mL；对经过所述亚临界水萃取后的大豆进行所述乙醇提取的条件包括：乙醇的浓度为60％-90％，温度为50-60℃，pH为8-9，物料与乙醇的重量比为1：(8-12)。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：
在将鱿鱼板进行所述超临界CO2萃取之前，对所述鱿鱼板进行预处理的操作；
所述预处理包括将所述鱿鱼板进行破碎处理，打成块状，再用去离子水冲洗3-4次，然后打成浆状，从而获得所述鱿鱼鱼糜的操作。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：
在将大豆进行所述超临界CO2萃取之前，对所述大豆进行预处理的操作；
所述预处理包括将新鲜大豆粉碎后挤压膨化得到膨化大豆物料，将膨化大豆物料与水混合得到所述膨化大豆混合液的操作；其中，所述膨化大豆物料与水的重量比为1g：(30-60)mL。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，
所述将鱿鱼板进行超临界CO2萃取的次数为两次，两次所述超临界CO2萃取的条件相同或不同。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述将大豆进行超临界CO2萃取的次数为两次，两次所述超临界CO2萃取的条件相同或不同。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述使用双酶进行酶解的操作中，加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行酶解1-3h的过程中，还进行加压操作以辅助酶解；
所述加压操作为：将温度调整到70-80℃并加压到2-4kgf/cm2，并保持10-20min，然后在3秒以内突然使压力降至0kgf/cm2。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行酶解1-3h的过程中，进行至少一个所述加压操作。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在对所述鱿鱼醇溶蛋白液和大豆醇溶蛋白液进行酶解的操作之后的吸附纯化、和/或浓缩的操作。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述吸附纯化使用活性炭进行；
使用活性炭进行吸附纯化在20-35℃、pH2.5-5.0的条件下进行，其中活性炭和待纯化液的重量比为1∶(5-15)。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述浓缩为真空浓缩；
所述真空浓缩在真空度82.7-90.6KPa、温度45-55℃下，浓缩处理10-15min。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1317392C (zh) * 2005-08-09 2007-05-23 吉林农业大学 玉米蛋白高f值低聚肽的生产方法
CN102138960A (zh) * 2010-02-03 2011-08-03 中国医学科学院药用植物研究所 用超(亚)临界二氧化碳萃取降香油的新工艺
KR20120120571A (ko) * 2011-04-25 2012-11-02 민순영 오징어 내피 추출 콜라겐 펩타이드 및 해조류와 생약성분을 이용한 항산화 근골강화 기능 식품의 제조방법
CN102796610A (zh) * 2012-08-18 2012-11-28 湘西老爹生物有限公司 从杜仲种仁中提取杜仲油、杜仲蛋白质的生产技术
CN107556364A (zh) * 2017-09-30 2018-01-09 厦门市百肽生物科技有限公司 亚临界水辅助酶解提取鲍鱼蛋白肽的方法及产品
CN107752041A (zh) * 2017-11-19 2018-03-06 山东千屋央厨海洋科技有限公司 一种鱿鱼蛋白粉及制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1317392C (zh) * 2005-08-09 2007-05-23 吉林农业大学 玉米蛋白高f值低聚肽的生产方法
CN102138960A (zh) * 2010-02-03 2011-08-03 中国医学科学院药用植物研究所 用超(亚)临界二氧化碳萃取降香油的新工艺
KR20120120571A (ko) * 2011-04-25 2012-11-02 민순영 오징어 내피 추출 콜라겐 펩타이드 및 해조류와 생약성분을 이용한 항산화 근골강화 기능 식품의 제조방법
CN102796610A (zh) * 2012-08-18 2012-11-28 湘西老爹生物有限公司 从杜仲种仁中提取杜仲油、杜仲蛋白质的生产技术
CN107556364A (zh) * 2017-09-30 2018-01-09 厦门市百肽生物科技有限公司 亚临界水辅助酶解提取鲍鱼蛋白肽的方法及产品
CN107752041A (zh) * 2017-11-19 2018-03-06 山东千屋央厨海洋科技有限公司 一种鱿鱼蛋白粉及制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
固定化酶水解鱿鱼碎肉制备高F值寡肽的工艺优化;王秋萍等;《中国食品学报》;20170331;113-119 *
蛋白质酶解物苦味形成机理及控制研究;周雪松;《粮食与油脂》;20041231;20-24 *

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