CN108624515A - 一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明具体涉及一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法，通过模拟白僵菌自然生活特性，即可寄生生活和腐生生活，通过逐渐的提高人工气候箱温度，对白僵菌进行高温驯化，挑取白僵菌所感染的象甲虫尸，并进行分离、纯化，以便获得高耐热性的白僵菌菌株。
Description
技术领域
本发明涉及农作物害虫生物防治技术领域，具体涉及一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法。
背景技术
球孢白僵菌(以下简称白僵菌)属丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科，是一类广谱性的昆虫病原真菌。据报道，白僵菌可寄生15目149科700多种昆虫和蜱螨类，在农林害虫防治发挥重要作用。尽管如此，白僵菌在实际应用中稳定性和生态适应性仍难尽如人意。高温是影响丝孢类真菌杀虫剂有效应用的关键自然环境因素之一。高温不仅影响昆虫病原真菌孢子的萌发、菌丝生长和侵染毒力，而且还影响其产品的货架期。虽然通过改良真菌杀虫剂剂型可以在一定程度上提高产品的耐热性，但是菌株本身的抗逆性能在很大程度上决定着菌剂的生态适应性和田间应用效果。大量研究发现不同地域来源的同一菌种的不同菌株在抗逆性能方面往往存在较大的差异。来源于赤道附近(高温地区)的菌株往往比来源于高纬度区域(低温地区)的菌株具有更强的耐热性。
在自然条件下，白僵菌既可营寄生生活，也可以营腐生生活。即遇到适宜的寄主昆虫时进行寄生，否则也可以生长在富有腐殖质的土壤中。土壤被认为是昆虫病原真菌的良好栖息地，它能对引起使昆虫病原真菌损伤的极端非生物胁迫(高温、低温和紫外线辐射等)起到缓冲作用。
茶树是一种多年生的经济作物，其在生长过程中常遭受多种害虫的取食为害。其中茶树食叶性象甲就是一类取食茶树芽叶的重要害虫(如茶丽纹象甲、茶大灰象甲和茶绿鳞象甲等)，该类象甲广泛分布于我国各主要产茶区，并在局部的茶园常爆发成灾。该类象甲一年发生一代，卵、若虫和蛹均在土壤里生活，靠取食土壤腐殖质或茶树根系为生；其成虫出土后善于攀爬，通过咬食茶树的叶片，造成缺刻或孔洞，严重影响茶叶的产量和品质。
在田间实际应用白僵菌防治茶树食叶性象甲时，夏季高温严重抑制白僵菌对食叶性象甲的防治效果。如何有效获取高耐热性的白僵菌菌株来满足茶树食叶性象甲生物防治的需求，是当前亟待解决的问题。因此，急需建立一种可培育高耐热性白僵菌菌株的方法，以便获得能满足夏季高温条件下能有效控制食叶性象甲的高耐热性白僵菌菌株。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后接种到步骤一所得的茶树盆栽苗的根际土壤，并使根际土壤与外界隔离；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，在象甲进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
进一步的，所述培育高耐热性白僵菌菌株的方法，所述步骤二具体为：将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况。
进一步的，所述培育高耐热性白僵菌菌株的方法，所述步骤二具体为：将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，喷洒在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况。
进一步的，所述培育高耐热性白僵菌菌株的方法，所述步骤三具体为：将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在80％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤。
进一步的，所述培育高耐热性白僵菌菌株的方法，所述步骤四具体为：在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述饲养装置内饲养有象甲，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中。
进一步的，所述培育高耐热性白僵菌菌株的方法，所述茶树盆栽苗通过水肥管理，保证正常生长。
进一步的，所述培育高耐热性白僵菌菌株的方法，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
进一步的，所述培育高耐热性白僵菌菌株的方法，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，喷洒在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
本发明的有益效果在于：通过模拟白僵菌自然生活特性，即可寄生生活和腐生生活，通过逐渐的提高人工气候箱温度，模拟自然界的夏季的高温天气，对白僵菌进行高温驯化，并进行分离、纯化，以便获得高耐热性的白僵菌菌株；通过白僵菌可以对靶标害虫寄生的特性，挑取白僵菌所感染的象甲虫尸，保证该高耐热性的白僵菌菌株具有对象甲的防治能力。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明最关键的构思在于：通过模拟白僵菌自然生活特性，即可寄生生活和腐生生活，通过逐渐的提高人工气候箱温度，对白僵菌进行高温驯化，挑取白僵菌所感染的象甲虫尸，并进行分离、纯化，以便获得高耐热性的白僵菌菌株。
一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后接种到步骤一所得的茶树盆栽苗的根际土壤，并使根际土壤与外界隔离；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，在象甲进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
进一步的，所述步骤二具体为：将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况。
从上述描述可知，由于白僵菌能够寄生也能够腐生，通过将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；死亡的象甲能够为根际土壤提供额外的成分，增加白僵菌的生存资源。
进一步的，所述步骤二具体为：将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，喷洒在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况。
进一步的，所述步骤三具体为：将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在80％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤。
进一步的，所述步骤四具体为：在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述饲养装置内饲养有象甲，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中。
进一步的，所述茶树盆栽苗通过水肥管理，保证正常生长。
进一步的，所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
进一步的，所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，喷洒在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：通过模拟白僵菌自然生活特性，即可寄生生活和腐生生活，通过不断的提高人工气候箱温度，模拟自然界的夏季的高温天气，对白僵菌进行高温驯化，并进行分离、纯化，以便获得高耐热性的白僵菌菌株；通过白僵菌可以对靶标害虫寄生的特性，挑取白僵菌所感染的象甲虫尸，保证该高耐热性的白僵菌菌株具有对象甲的防治能力。
实施例一
一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置50天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在80％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
实施例二
一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，喷洒在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置50天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在80％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
综上所述，本发明提供的一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法，通过模拟白僵菌自然生活特性，即可寄生生活和腐生生活，通过逐渐的提高人工气候箱温度，模拟自然界的夏季的高温天气，对白僵菌进行高温驯化，并进行分离、纯化，以便获得高耐热性的白僵菌菌株；通过白僵菌可以对靶标害虫寄生的特性，挑取白僵菌所感染的象甲虫尸，保证该高耐热性的白僵菌菌株具有对象甲的防治能力。
由于白僵菌能够寄生也能够腐生，通过将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；死亡的象甲能够为根际土壤提供额外的成分，增加白僵菌的生存资源。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (8)
1.一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后接种到步骤一所得的茶树盆栽苗的根际土壤，并使根际土壤与外界隔离；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，在象甲进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
2.根据权利要求1所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述步骤二具体为：将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况。
3.根据权利要求1所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述步骤二具体为：将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，喷洒在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况。
4.根据权利要求1所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述步骤三具体为：将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤。
5.根据权利要求1所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述步骤四具体为：在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中。
6.根据权利要求1-4任意一项所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述茶树盆栽苗通过水肥管理，保证正常生长。
7.根据权利要求1所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，通过孢悬液去感染象甲，并将象甲安置在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，同时使象甲在根际土壤周围死亡，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
8.根据权利要求1所述的培育高耐热性白僵菌菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、选择土壤经过无菌处理的茶树盆栽苗；
步骤二、将白僵菌原始菌株配制成孢悬液后，喷洒在步骤一中的茶树盆栽苗的根际土壤周围，并使根际土壤与外界隔离；将根际土壤带菌后的茶树盆栽苗放置40-60天后，通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；
步骤三、将步骤二所得的茶树盆栽苗置于人工气候箱中，所述人工气候箱的温度从26℃开始，每个月提升1-2℃，并且每个月通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况；提升至40℃后保持温度不变，同时保持湿度在75-90％，并且每个月再通过选择性培养基检测根际土壤中白僵菌的存活定殖情况，待处于40℃下的白僵菌于根际土壤中稳定定殖后再进行下一步步骤；
步骤四、在步骤三中的根际土壤中引入象甲并进行饲养，所述象甲用茶树的新鲜茶梢饲养，待象甲在步骤三中的根际土壤中进行产卵后，不再饲养象甲，象甲死后的虫尸也留在根际土壤中；
步骤五、待步骤四中卵发育为象甲成虫出土后，收集象甲成虫，使用无菌饲养杯进行保湿培养；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲虫尸，继续保湿培养，从象甲虫尸中分离出白僵菌菌株。
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| CN201810861930.4A CN108624515A (zh) | 2018-08-01 | 2018-08-01 | 一种培育高耐热性白僵菌菌株的方法 |
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