CN108611274A - 定向筛选土壤目标微生物菌群的方法 - Google Patents

定向筛选土壤目标微生物菌群的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108611274A
CN108611274A CN201810313958.4A CN201810313958A CN108611274A CN 108611274 A CN108611274 A CN 108611274A CN 201810313958 A CN201810313958 A CN 201810313958A CN 108611274 A CN108611274 A CN 108611274A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pcr
objective microbe
soil
culture medium
flora
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810313958.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108611274B (zh
Inventor
刘金光
李明
项萌
冉景
朱巧红
高卫民
夏溢
焦朋朋
程寒飞
安忠义
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huatian Engineering and Technology Corp MCC
Original Assignee
Huatian Engineering and Technology Corp MCC
MCC Huatian Anhui Energy Conservation and Environmental Protection Research Institute Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huatian Engineering and Technology Corp MCC, MCC Huatian Anhui Energy Conservation and Environmental Protection Research Institute Co Ltd filed Critical Huatian Engineering and Technology Corp MCC
Priority to CN201810313958.4A priority Critical patent/CN108611274B/zh
Publication of CN108611274A publication Critical patent/CN108611274A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108611274B publication Critical patent/CN108611274B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，包括以下步骤：S1样品采集；S2分离培养；S3利用目标微生物特异性引物的聚合酶链式反应法快速分筛。本发明利用特异性引物和细菌菌液直接进行PCR快速筛选未知细菌菌群中的目标菌群，整个筛选过程操作简单，省时省力，快速、直观、高效，为环境样品中目标菌群的高通量筛选提供了一种快速便捷的方法。

Description

定向筛选土壤目标微生物菌群的方法
技术领域
本发明涉及环境微生物技术领域，具体涉及一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法。
背景技术
土壤中存在着大量微生物，且种类繁多。微生物能够降解土壤环境中有机污染物，也可通过促进植物生长，提高植物修复的效率。由于外源添加到土壤中的微生物需要与土著微生物进行竞争，使得添加的微生物在土壤环境中存在时间较短。快速筛选土壤样品中的目标微生物菌群可有效提高污染土壤植物修复和微生物修复的效率。
目标微生物菌群的传统筛选主要采用选择性培养基法。由于选择性培养基的选择作用往往非常有限，分离得到的目标微生物菌群数量较少，尤其大量菌群没有合适的选择性培养基供使用。而且，传统分离过程成本高、周期长。
发明内容
针对以上不足之处，本发明的目的在于提供一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，该方法可以在短时间内从大量未知细菌中识别目标微生物，实现土壤样品中的目标微生物菌群的定向高通量快速筛选。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1采集土壤样品，制备土壤悬液：取土样，置于无菌瓶中，加入缓冲液，置于摇床上震荡，得土壤悬液；
S2分离培养：将步骤S1所述土壤悬液进行梯度稀释，取稀释液涂布到含有真菌抑制剂的培养基平板上，于培养箱内培养；然后，挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化；接着，挑取纯化后的所述单菌落，在含有无菌水的聚合酶链式反应(PCR)管中搅拌，同时接种至含有液体培养基的离心管；再将离心管置于摇床上培养8h～12h生成菌株；
S3快速分筛：将步骤S2所述PCR管置于PCR仪上，运行PCR程序；其中，所述PCR管中溶液作为后续PCR反应的模板，使用目标微生物的特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)；采用琼脂糖凝胶电泳检测菌株的聚合酶链式反应(PCR)扩增产物，筛选出扩增DNA片段大小与目标微生物扩增DNA片段相近的菌株，即为潜在目标微生物。
本发明，在步骤S1中，取5g～10g新鲜土样，置于无菌三角瓶中，加入45mL～90mL无菌磷酸缓冲液，置于摇床上震荡，得土壤悬液；其中，所述无菌磷酸缓冲液pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L；在置于摇床上震荡时，震荡时间为30min～60min，且每10min～15min以47kHz频率超声一次，每次20s～40s。
在步骤S2中，将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10、102以及103的稀释液分别涂布到含有真菌抑制剂的培养基平板上，于温度为30℃的培养箱内培养2～7天，其中，
所述真菌抑制剂为放线菌酮和噻菌灵，浓度分别为100mg/L和50mg/L；
所述培养基可以为低营养培养基，也可以为富营养培养基；进一步地，所述低营养培养基为1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硫酸铵、0.1g/L酵母提取物、20g/L琼脂，pH 6.5；所述富营养培养基为胰酪蛋白胨15.0g/L、大豆木瓜蛋白酶消化物5.0g/L、氯化钠5.0g/L、琼脂15.0g/L，pH 7.1～pH 7.5；
优选地，步骤S2中，使用无菌牙签挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化，接着，挑取纯化后的所述单菌落，在含有20μL无菌水的PCR管中搅拌多次，同时接种至含有1mL液体培养基的2mL的离心管，将离心管置于转速为180rpm的摇床上培养8h～12h。
在步骤S3中，所述PCR反应的模板无需DNA提取步骤，所述PCR程序为：95℃预变性10min，10℃冷却10min。
优选地，所述PCR反应采用25μL反应体系：Takara Premix Ex Taq 12.5μL，10μmol/L的引物各0.5μL，DNA模板1μL，无菌水10.5μL；PCR反应条件：95℃预变性30s；94℃变性60s，56℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环，72℃延伸10min；或者，95℃预变性30s，95℃变性5s，60℃退火和延伸30s，32个循环，72℃延伸10min；采用琼脂糖凝胶电泳检测菌株的PCR扩增产物，筛选出扩增DNA片段大小与目标微生物扩增DNA片段相近的菌株，即为潜在目标微生物。
本发明中，所述目标微生物可以为伯克氏菌、假单胞菌或其他微生物菌群。
所述目标微生物菌群为伯克氏菌，所述特异性引物的序列分别如SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2所示，筛选出的扩增DNA片段大小约440bp。
所述目标微生物菌群为假单胞菌，所述特异性引物的序列分别如SEQ IDNO：3和SEQ ID NO：4所示，筛选出的扩增DNA片段大小约250bp。
有益效果：
本发明利用目标微生物菌群特异性引物与细菌菌液直接进行聚合酶链式反应(PCR)筛选未知细菌菌群中的目标菌群，整个筛选过程操作简单，省时省力，快速、直观、高效；实现土壤样品中的目标微生物菌群的定向高通量快速筛选；本发明无需提取DNA直接进行PCR，大大缩短菌株鉴定周期。
附图说明
图1为本发明定向筛选土壤目标微生物菌群的流程图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1-4的工作流程如图1所示。
实施例1和2中，目标微生物菌群为伯克氏菌，其特异性引物为P1和P2，如表1所示；实施例3和4中，目标微生物菌群为假单胞菌，其特异性引物为P3和P4，如表1所示。
表1 特异性引物
引物 引物序列(5′-3′)
P1 CCCTAAACGATGTCAACTAGTTG(SEQ ID NO：1)
P2 ACCCTCTGTTCCGACCAT(SEQ ID NO：2)
P3 ACTTTAAGTTGGGAGGAAGGG(SEQ ID NO：3)
P4 ACACAGGAAATTCCACCACCC(SEQ ID NO：4)
实施例1
S1采集土壤样品，制备土壤悬液：取10g新鲜土样，置于无菌三角瓶中，加入90mL无菌磷酸缓冲液(pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L)，置于摇床上震荡60min，每15min 47kHz超声一次，每次30s；
S2分离培养：将步骤S1中土壤悬液10倍梯度稀释，取适量稀释液(稀释倍数为10、102、103)均匀涂布到含有真菌抑制剂(放线菌酮和噻菌灵，浓度分别100和50mg/L)的培养基平板上，30℃培养箱内培养7天，所选用培养基为低营养培养基，其中，1g/L磷酸二氢钾，0.1g/L硫酸铵，0.1g/L酵母提取物，20g/L琼脂，pH 6.5，使用该培养基产生单菌落；使用无菌牙签挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化；使用无菌牙签挑取纯化后的单菌落，在含有20μL无菌水的PCR管中搅拌数次，同时接种至含有1mL液体培养基的2mL离心管，将离心管置于转速为180rpm的摇床上培养8h～12h；
S3快速分筛：将步骤S2中的PCR管置于PCR仪上，运行PCR程序：95℃预变性10min，10℃冷却10min；PCR管中溶液作为后续PCR反应的模板；PCR引物分别如SEQ ID NO：1和SEQID NO：2所示；PCR采用25μL反应体系：Takara Premix Ex Taq 12.5μL，引物(10μmol/L)各0.5μL，DNA模板1μL，10.5μL无菌水；PCR反应条件：95℃预变性30s；94℃变性60s，56℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环；72℃延伸10min；采用琼脂糖凝胶电泳检测菌株的PCR扩增产物；扩增DNA片段大小约440bp的菌株即为潜在伯克氏菌。
实施例2
S1采集土壤样品，制备土壤悬液：取10g新鲜土样，置于无菌三角瓶中，加入90mL无菌磷酸缓冲液(pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L)，置于摇床上震荡60min，每15min 47kHz超声一次，每次30s；
S2分离培养：将步骤S1中土壤悬液10倍梯度稀释，取适量稀释液(稀释倍数为10、102、103)均匀涂布到含有真菌抑制剂(放线菌酮和噻菌灵，浓度分别100和50mg/L)的培养基平板上，30℃培养箱内培养2天，所选用培养基为富营养培养基，其中，胰酪蛋白胨15.0g/L，大豆木瓜蛋白酶消化物5.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂15.0g/L，pH 7.1～pH 7.5；使用无菌牙签挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化；使用无菌牙签挑取纯化后的单菌落，在含有20μL无菌水的PCR管中搅拌数次，同时接种至含有1mL液体培养基的2mL离心管，将离心管置于转速为180rpm的摇床上培养8h～12h；
S3快速分筛：将步骤S2中的PCR管置于PCR仪上，运行PCR程序：95℃预变性10min，10℃冷却10min；PCR管中溶液作为后续PCR反应的模板；PCR引物分别如SEQ ID NO：1和SEQID NO：2所示；PCR采用25μL反应体系：Takara Premix Ex Taq 12.5μL，引物(10μmol/L)各0.5μL，DNA模板1μL，10.5μL无菌水；PCR反应条件：95℃预变性30s；94℃变性60s，56℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环；72℃延伸10min；采用琼脂糖凝胶电泳检测各菌株的PCR扩增产物；扩增DNA片段大小约440bp的菌株即为潜在伯克氏菌。
实施例3
S1采集土壤样品，制备土壤悬液：取10g新鲜土样，置于无菌三角瓶中，加入90mL无菌磷酸缓冲液(pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L)，置于摇床上震荡60min，每15min 47kHz超声一次，每次30s；
S2分离培养：将步骤S1中土壤悬液10倍梯度稀释，取适量稀释液(稀释倍数为10、102、103)均匀涂布到含有真菌抑制剂(放线菌酮和噻菌灵，浓度分别100和50mg/L)的培养基平板上，30℃培养箱内培养2天，所选用培养基为富营养培养基，其中，胰酪蛋白胨15.0g/L，大豆木瓜蛋白酶消化物5.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂15.0g/L，pH 7.1～pH 7.5；使用无菌牙签挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化；使用无菌牙签挑取纯化后的单菌落，在含有20μL无菌水的PCR管中搅拌数次，同时接种至含有1mL液体培养基的2mL离心管，将离心管置于转速为180rpm的摇床上培养8h～12h；
S3快速分筛：将步骤S2中的PCR管置于PCR仪上，运行PCR程序：95℃预变性10min，10℃冷却10min；PCR管中溶液作为后续PCR反应的模板；PCR引物分别如SEQ ID NO：3和SEQID NO：4所示；PCR采用25μL反应体系：Takara Premix Ex Taq 12.5μL，引物(10μmol/L)各0.5μL，DNA模板1μL，10.5μL无菌水；PCR反应条件：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火和延伸30s，32个循环；72℃延伸10min；采用琼脂糖凝胶电泳检测各菌株的PCR扩增产物；扩增DNA片段大小约250bp的菌株即为潜在假单胞菌。
实施例4
S1采集土壤样品，制备土壤悬液：取10g新鲜土样，置于无菌三角瓶中，加入90mL无菌磷酸缓冲液(pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L)，置于摇床上震荡60min，每15min 47kHz超声一次，每次30s；
S2分离培养：将步骤S1中土壤悬液10倍梯度稀释，取适量稀释液(稀释倍数为10、102、103)均匀涂布到含有真菌抑制剂(放线菌酮和噻菌灵，分别100和50mg/L)的培养基平板上，30℃培养箱内培养7天；选用培养基为低营养培养基，其中，1g/L磷酸二氢钾，0.1g/L硫酸铵，0.1g/L酵母提取物，20g/L琼脂，pH 6.5；使用无菌牙签挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化；使用无菌牙签挑取纯化后的单菌落，在含有20μL无菌水的PCR管中搅拌数次，同时接种至含有1mL液体培养基的2mL离心管，将离心管置于转速为180rpm的摇床上培养8h～12h；
S3快速分筛：将步骤S2中的PCR管置于PCR仪上，运行PCR程序：95℃预变性10min，10℃冷却10min；PCR管中溶液作为后续PCR反应的模板；PCR引物分别如SEQ ID NO：3和SEQID NO：4所示；PCR采用25μL反应体系：Takara Premix Ex Taq 12.5μL，引物(10μmol/L)各0.5μL，DNA模板1μL，10.5μL无菌水；PCR反应条件：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火和延伸30s，32个循环；72℃延伸10min；采用琼脂糖凝胶电泳检测各菌株的PCR扩增产物；扩增DNA片段大小约250bp的菌株即为潜在假单胞菌。

Claims (10)

1.一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1采集土壤样品，制备土壤悬液：取土样，置于无菌瓶中，加入缓冲液，置于摇床上震荡，得土壤悬液；
S2分离培养：将步骤S1所述土壤悬液进行梯度稀释，取稀释液涂布到含有真菌抑制剂的培养基平板上，于培养箱内培养，然后，挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化，接着，挑取纯化后的所述单菌落，在含有无菌水的PCR管中搅拌，同时接种至含有液体培养基的离心管，再将离心管置于摇床上培养8h～12h生成菌株，PCR即聚合酶链式反应；
S3快速分筛：将步骤S2所述PCR管进行PCR反应；其中，所述PCR管中溶液作为后续PCR反应的模板，使用目标微生物的特异性引物进行PCR；采用琼脂糖凝胶电泳检测菌株的PCR扩增产物，筛选出扩增DNA片段大小与目标微生物扩增DNA片段相近的菌株，即为潜在目标微生物。
2.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，步骤S1中，取土样5g～10g，置于无菌三角瓶中，所述缓冲液为45mL～90mL，pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液，震荡时间为30min～60min，且每10min～15min以47kHz频率超声一次，每次20s～40s。
3.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，步骤S2中，所述培养基为低营养培养基或富营养培养基，低营养培养基为1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硫酸铵、0.1g/L酵母提取物、20g/L琼脂，pH 6.5，富营养培养基为胰酪蛋白胨15.0g/L、大豆木瓜蛋白酶消化物5.0g/L、氯化钠5.0g/L、琼脂15.0g/L，pH 7.1～pH 7.5。
4.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，步骤S2中，将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10、102以及103的稀释液分别涂布到真菌抑制剂的培养基平板上，所述真菌抑制剂为放线菌酮和噻菌灵，浓度分别为100mg/L和50mg/L，于温度为30℃的培养箱内培养2～7天。
5.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，步骤S2中，使用无菌牙签挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化，并使用无菌牙签挑取纯化后的所述单菌落，在含有20μL无菌水的PCR管中搅拌多次，同时接种至含有1mL液体培养基的2mL的离心管，将离心管置于转速为180rpm的摇床上培养8h～12h。
6.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述PCR反应采用25μL反应体系：Takara Premix Ex Taq 12.5μL，10μmol/L的引物各0.5μL，DNA模板1μL，无菌水10.5μL。
7.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，在步骤S3中，PCR反应条件：95℃预变性30s，94℃变性60s，56℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环，72℃延伸10min；或者，95℃预变性30s，95℃变性5s，60℃退火和延伸30s，32个循环，72℃延伸10min。
8.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，所述目标微生物为伯克氏菌或假单胞菌。
9.如权利要求8所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，步骤S3中，所述目标微生物菌群为伯克氏菌，所述特异性引物的序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2所示，筛选出的扩增DNA片段大小为440bp。
10.如权利要求8所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法，其特征在于，步骤S3中，所述目标微生物菌群为假单胞菌，所述特异性引物的序列分别如SEQ ID NO：3和SEQ IDNO：4所示，筛选出的扩增DNA片段大小为250bp。
CN201810313958.4A 2018-03-29 2018-03-29 定向筛选土壤目标微生物菌群的方法 Active CN108611274B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810313958.4A CN108611274B (zh) 2018-03-29 2018-03-29 定向筛选土壤目标微生物菌群的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810313958.4A CN108611274B (zh) 2018-03-29 2018-03-29 定向筛选土壤目标微生物菌群的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108611274A true CN108611274A (zh) 2018-10-02
CN108611274B CN108611274B (zh) 2021-10-12

Family

ID=63659691

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810313958.4A Active CN108611274B (zh) 2018-03-29 2018-03-29 定向筛选土壤目标微生物菌群的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108611274B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110624949A (zh) * 2019-09-30 2019-12-31 武汉工程大学 利用土著微生物和植物联合修复磷矿废弃地过量磷污染的方法
CN110756578A (zh) * 2019-10-31 2020-02-07 中冶华天工程技术有限公司 快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法
CN112662727A (zh) * 2020-12-16 2021-04-16 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种基于绝迹稀释培养组的功能微生物高通量分析和选育方法
CN113462572A (zh) * 2021-08-11 2021-10-01 上海清涟环境科技有限公司 一种土著型微生物菌剂及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007236215A (ja) * 2006-03-06 2007-09-20 Univ Of Tokyo 生物試料の検出方法
CN101838705A (zh) * 2010-02-04 2010-09-22 浙江大学 一种水果或蔬菜上洋葱伯克氏菌群的检测及种的鉴定方法
CN102643918A (zh) * 2012-04-25 2012-08-22 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种基于属特异性引物-pcr结合链霉素抗性平板特异性分离鞘氨醇单胞菌的方法及其专用引物
CN102676428A (zh) * 2012-04-29 2012-09-19 山东大学威海分校 产中性植酸酶菌株的制备和发酵条件
CN104946754A (zh) * 2015-06-09 2015-09-30 南京农业大学 一种定量检测土壤中青枯菌的方法及其检测试剂盒
CN106906296A (zh) * 2017-04-05 2017-06-30 江南大学 一种高效筛选魏斯氏菌的标记物及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007236215A (ja) * 2006-03-06 2007-09-20 Univ Of Tokyo 生物試料の検出方法
CN101838705A (zh) * 2010-02-04 2010-09-22 浙江大学 一种水果或蔬菜上洋葱伯克氏菌群的检测及种的鉴定方法
CN102643918A (zh) * 2012-04-25 2012-08-22 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种基于属特异性引物-pcr结合链霉素抗性平板特异性分离鞘氨醇单胞菌的方法及其专用引物
CN102676428A (zh) * 2012-04-29 2012-09-19 山东大学威海分校 产中性植酸酶菌株的制备和发酵条件
CN104946754A (zh) * 2015-06-09 2015-09-30 南京农业大学 一种定量检测土壤中青枯菌的方法及其检测试剂盒
CN106906296A (zh) * 2017-04-05 2017-06-30 江南大学 一种高效筛选魏斯氏菌的标记物及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张海燕等: "利用菌落PCR-DGGE快速鉴定盐渍土壤菌种多样性", 《塔里木大学学报》 *
李艳嫦等: "西瓜细菌性果斑病菌在不同场所存活期的检测", 《华中农业大学学报》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110624949A (zh) * 2019-09-30 2019-12-31 武汉工程大学 利用土著微生物和植物联合修复磷矿废弃地过量磷污染的方法
CN110624949B (zh) * 2019-09-30 2021-10-12 武汉工程大学 利用土著微生物和植物联合修复磷矿废弃地过量磷污染的方法
CN110756578A (zh) * 2019-10-31 2020-02-07 中冶华天工程技术有限公司 快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法
CN112662727A (zh) * 2020-12-16 2021-04-16 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种基于绝迹稀释培养组的功能微生物高通量分析和选育方法
CN113462572A (zh) * 2021-08-11 2021-10-01 上海清涟环境科技有限公司 一种土著型微生物菌剂及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108611274B (zh) 2021-10-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108611274A (zh) 定向筛选土壤目标微生物菌群的方法
CN113214999B (zh) 一株地霉tn42及其在污水处理中的应用
CN104312957A (zh) 一种反硝化细菌及其发酵生产方法
CN104560806B (zh) 1‑氨基环丙烷‑1‑羧酸作为细菌趋化物质的应用
JP5374750B2 (ja) 難培養性微生物の培養方法
CN111621437B (zh) 分离自猪场氧化塘的旱獭埃希氏菌lm-dk及其应用
CN105255934A (zh) 一种高效联产α-氨基丁酸及葡萄糖酸的策略
CN105483038B (zh) 一株嗜纤维菌科的好氧砷甲基化细菌sm-1及其应用
Sekiguchi et al. Molecular and conventional analyses of microbial diversity in mesophilic and thermophilic upflow anaerobic sludge blanket granular sludges
CN110218736A (zh) 一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法
CN107674839B (zh) 一种腐皮镰刀菌及其发酵生产右旋糖酐酶的方法
CN111235041B (zh) 一种红霉素降解菌rjj-62及其应用
CN104277996B (zh) 解角质素微杆菌及其培养方法和应用
CN110684699B (zh) 一株纤维化纤维微细菌dgnk-jj1及其应用
CN111100940B (zh) 一种快速检测金针菇培养料中假单胞菌的方法
CN107142230A (zh) 一种藤黄微球菌株及其用途
CN109337837B (zh) 一种嗜热芽孢杆菌df7菌株及其应用
CN105907839A (zh) 一种桑园土壤氨氧化细菌的高效分离与鉴定方法
CN105018410A (zh) 一种诱导三孢布拉氏霉老化菌株快速大量产孢的方法
Ramachandiran et al. Identification and characterization of gut associated bacteria in Epilachna vigintioctopunctata Fab.(Coleoptera: Coccinellidae)
CN111286470A (zh) 一株可降解红霉素的枯草芽孢杆菌及其应用
CN109355196A (zh) 一种促进木薯渣基质发酵进程的真菌分离方法
Bull et al. New dimensions in microbiology: an introduction
CN113215008B (zh) 芽生葡萄孢酵母tn29及其在污水处理中的应用
CN103122316A (zh) 一株槭射脉革菌菌株及其在甲霜灵农药残留降解中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220531

Address after: 210019 the Fuchun River East Street, Jianye District, Nanjing, Jiangsu 18

Patentee after: HUATIAN NANJING ENGINEERING & TECHNOLOGY CORPORATION, MCC

Patentee after: HUATIAN ENGINEERING & TECHNOLOGY CORPORATION, MCC

Address before: 210019 18 East Street, Fuchunjiang, Jianye District, Nanjing City, Jiangsu Province

Patentee before: HUATIAN NANJING ENGINEERING & TECHNOLOGY CORPORATION, MCC

Patentee before: HUATIAN ENGINEERING & TECHNOLOGY CORPORATION, MCC

Patentee before: MCC HUATIAN (ANHUI) ENERGY SAVING ENVIRONMENTAL PROTECTION RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd.