CN108570436B - 植物乳杆菌zjuf t17及其应用 - Google Patents

植物乳杆菌zjuf t17及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108570436B
CN108570436B CN201810724365.7A CN201810724365A CN108570436B CN 108570436 B CN108570436 B CN 108570436B CN 201810724365 A CN201810724365 A CN 201810724365A CN 108570436 B CN108570436 B CN 108570436B
Authority
CN
China
Prior art keywords
zjuf
lactobacillus plantarum
plantarum
actinobacillus
serum
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810724365.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108570436A (zh
Inventor
冯凤琴
李杨
李阳
孔思杰
赵敏洁
钟浩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biogrowing Co ltd
Original Assignee
Zhejiang Quanzhi Biotechnology Co ltd
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Quanzhi Biotechnology Co ltd, Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang Quanzhi Biotechnology Co ltd
Publication of CN108570436A publication Critical patent/CN108570436A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108570436B publication Critical patent/CN108570436B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • A61K2035/115—Probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/25—Lactobacillus plantarum

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZJUF T17及其应用，属于生物技术领域。植物乳杆菌ZJUF T17分离自酸面团，保藏号为CCTCC NO:M 2017342。本发明提供的植物乳杆菌ZJUF T17在胃肠道中具有很高的生存率、较强的胃肠粘附力，能显著抑制胃、肠道致病菌的繁殖；该植物乳杆菌能够显著降低血清中胆固醇含量，优化高密度脂蛋白胆固醇与低密度脂蛋白胆固醇的比例；该植物乳杆菌能够显著降低血清中的TNF‑α含量，具有免疫调节的功能；该植物乳杆菌具有缓解体重增加的能力；此外，该植物乳杆菌具有制备发酵乳的潜力。

Description

植物乳杆菌ZJUF T17及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的一个新菌株ZJUF T17及其应用。
背景技术
传统发酵食品中含有丰富的乳酸菌，所述乳酸菌在人体的消化系统中共生，起到通过分解纤维质及复合蛋白质来制备重要的营养成分的作用。这种存活于包括人在内的动物的胃肠器官内，改善宿主的肠道微生物环境，从而对宿主的健康有利的微生物统称为益生菌。近年来，随着人们的健康意识的增加，促进了益生菌研究的发展。现已证明益生菌具有调节胃肠道菌群、调节免疫、抗氧化、降胆固醇等作用，且益生菌发酵生产的食品也具有相似的功能[Gerritsen,J.,et al.,Intestinal microbiota in human health anddisease:the impact of probiotics.Genes and Nutrition,2011.6(3):p.209-240.]。
为了使益生菌具有效果，需要经口摄取到达小肠，附着于肠表面并维持这种附着状态，而胃肠道内的低pH值、胆盐、蛋白酶的影响会导致活菌数的下降，因此至少需要具有优异的耐酸性、耐胆盐性，以及附着于肠上皮细胞上的附着力。
植物乳杆菌作为益生菌的一种，广泛存在于传统的发酵食品(发酵果蔬、发酵肉制品、发酵乳制品)、胃肠道和阴道中。不同菌株之间的功能有差异，且应用范围也有不同。已在预防胃肠道菌群失调及腹泻、降胆固醇、缓解过敏、缓解IBD和IBS等方面进行了广泛研究[de Vries,M.C.,et al.,Lactobacillus plantarum-survival,functional andpotential probiotic properties in the human intestinal tract.InternationalDairy Journal,2006.16(9):p.1018-1028.]。
传统的乳制品主要由保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌制作而成，近年来，也有使用发酵乳杆菌、干酪乳杆菌和副干酪乳杆菌进行发酵乳的制备。植物乳杆菌制备发酵乳也有见报道，但是其发酵能力仍略低于Lactobacillus casei Shirota等[Angmo,K.,etal.,Probiotic characterization of lactic acid bacteria isolated from fermentedfoods and beverage of Ladakh.Lwt-Food Science and Technology,2016.66:p.428-435.]，开发植物乳杆菌的发酵乳的能力具有一定前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZJUF T17，该植物乳杆菌具有优异的益生作用、调节胆固醇和免疫的功能以及具备制备发酵乳的潜力。
本发明从酸面团中分离筛选得到一菌株T17，经16S rRNA基因比对，鉴定该菌株为植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌ZJUF T17(Lactobacillus plantarum ZJUF T17)。植物乳杆菌ZJUF T17的16S rRNA的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。将植物乳杆菌ZJUF T17于2017年6月16日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉，武汉大学)，保藏号为：CCTCCNO:M 2017342。
体外实验证明，植物乳杆菌ZJUF T17具有耐受胃肠道转运液的能力，在模拟人工胃肠道中具有很高的生存率；植物乳杆菌ZJUF T17自凝率达到了98.10％，具备较强的胃肠粘附力；与肠道致病菌4h的交互凝集率均在35％以上，其在肠道中与致病菌凝集，并顺利排出体外，有利于肠道健康；植物乳杆菌ZJUF T17能够显著抑制胃肠道致病菌的繁殖，如大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌。因此，植物乳杆菌ZJUF T17可用于预防或治疗胃肠道菌群失衡。
本发明的另一个目的是提供一种植物乳杆菌ZJUF T17在制备抑制胃肠道致病菌的药物或食品中的应用。
本发明的另一个目的是提供一种植物乳杆菌ZJUF T17在制备降低动物或人体内胆固醇浓度的药物或食品中的应用。所述的植物乳杆菌ZJUF T17具有降低胆固醇的功能，能显著降低小鼠血清中的总胆固醇含量，提高高密度脂蛋白胆固醇与低密度脂蛋白胆固醇的比值。
本发明的另一个目的是提供一种植物乳杆菌ZJUF T17在制备免疫调节药物或保健食品中的应用。所述的植物乳杆菌ZJUF T17能提高血清中的IL-10含量以及显著降低的TNF-α含量，机体内过量的TNF-α，与其他炎症因子一起促进多种病理性损伤和引起代谢紊乱，其中，破坏胰岛素信号转导，产生胰岛素抵抗。IL-10主要由树突细胞和巨噬细胞分泌的抗炎细胞因子，可以抑制诱导慢性炎症的预炎细胞因子的产生。对IL-10的抑制会增加炎症因子(如TNF-α和IL-6)的表达。因此，植物乳杆菌ZJUF T17具有免疫调节的功能。
据报道，人的一些慢性代谢疾病(肥胖、糖尿病)与免疫细胞产生IL-10能力不足有关[Identification of a Lactobacillus plantarum strain that ameliorateschronic inflammation and metabolic disorders in obese and type 2diabeticmice]。
本发明的另一个目的是提供一种植物乳杆菌ZJUF T17在制备预防或治疗慢性疾病的药物或保健食品中的应用。
作为优选，所述的慢性疾病为肥胖症或糖尿病。
本发明研究表明，植物乳杆菌ZJUF T17能够降低高脂膳食带来的体重增加，优化胆固醇组成，而且能够降低高脂膳食肥胖带来的氧化应激损伤。
优选地，上述的药物的给药方式为经口给药，具体给药量根据疾病种类、疾病程度、年龄及给药目的进行调节。
本发明的另一个目的是提供一种植物乳杆菌ZJUF T17在生产发酵乳制品中的应用。所述的植物乳杆菌ZJUF T17具有发酵乳的潜力，24h发酵过程中，可以降低pH值到4.2；增加TTA值到110，发酵乳中的蛋白水解得到的丝氨酸含量可达到18.87mg/mL；发酵过程和4℃保存过程中能保持较高活菌率。
优选地，植物乳杆菌ZJUF T17按照1.5-2×107cfu/mL添加到经灭菌处理的脱脂乳培养基(脱脂乳11.5％，葡萄糖0.75％，蔗糖5％(w/v))中，37℃条件下发酵24h。
本发明具备的有益效果：
本发明提供的植物乳杆菌ZJUF T17在胃肠道中具有很高的生存率、较强的胃肠粘附力，能显著抑制胃、肠道致病菌的繁殖；该植物乳杆菌能够显著降低血清中胆固醇含量，优化高密度脂蛋白胆固醇与低密度脂蛋白胆固醇的比例；该植物乳杆菌能够显著降低血清中的TNF-α含量，具有免疫调节的功能；该植物乳杆菌具有缓解体重增加的潜力；此外，该植物乳杆菌具有制备发酵乳的潜力。
附图说明
图1为Lactobacillus plantarum ZJUF T17在模拟胃肠液中的转运耐受，其中(A)：人工胃液，(B)：人工肠液。
图2为Lactobacillus plantarumZJUF T17自凝集特性。
图3为3个实验组小鼠在饲喂高脂膳食10周过程中体重情况。
图4为3个实验组小鼠在饲喂高脂膳食第10周时的体重情况，图中*表示与NCD组进行显著性分析，#表示与HFD组进行显著性分析；****代表p<0.0001，##代表p<0.01。
图5为3个实验组小鼠在饲喂高脂膳食10周后血清中血脂参数变化，其中(A)为总胆固醇(T-CHO)、(B)为高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、(C)为低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、(D)为HDL-C/LDL-C的比例，图中*表示与NCD组进行显著性分析，#表示与HFD组进行显著性分析；****代表p<0.0001，***代表p<0.001，**代表p<0.01，####代表p<0.0001，##代表p<0.01。
图6为3个实验组小鼠在饲喂高脂膳食10周后血清中炎症因子的变化情况，其中(A)为IL-10，(B)为IL-1β、(C)为IL-6，(D)为TNF-α含量，图中*表示与NCD组进行显著性分析，#表示与HFD组进行显著性分析；**代表p<0.01，###代表p<0.001，##代表p<0.01。
图7为3个实验组小鼠在饲喂高脂膳食10周后血清中氧化应激因子的变化情况，其中(A)为T-AOC、(B)为GHS-Px、(C)为T-SOD、(D)为MDA，图中*表示与NCD组进行显著性分析，#表示与HFD组进行显著性分析；****代表p<0.0001，**代表p<0.01，####代表p<0.0001，##代表p<0.01。
图8为Lactobacillus plantarumZJUF T17发酵乳过程中pH变化，其中(A)为24h内的pH变化情况，(B)为2周内的pH变化情况。
图9为Lactobacillus plantarumZJUF T17发酵乳过程中TTA变化，其中(A)为24h内的TTA变化情况，(B)为2周内的TTA变化情况。
图10为Lactobacillus plantarum ZJUF T17发酵蛋白水解能力分析，其中(A)为24h内的丝氨酸浓度变化情况，(B)为2周内的丝氨酸浓度变化情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
1、菌株的筛选及分离
称取5g酸面团加入到45mL 0.85％的灭菌生理盐水中，振荡制成悬液，进行系列梯度稀释，稀释后取10-5、10-6、10-7三个梯度涂布于MRS培养基上，每个梯度做三个平行。将涂布后的平板放入37℃厌氧培养箱中培养24-48h。挑选差异明显的菌落进行MRS培养基上划线分离，将平板放入37℃厌氧培养箱中培养24-48h。连续划线3-5次后，取一滴现配的5％的过氧化氢滴于载玻片上，挑取固体培养基上单菌落接入5％的过氧化氢液滴中并混匀，产生气泡为过氧化氢酶试验阳性，未产生气泡为过氧化氢酶试验阴性，过氧化氢酶试验阴性菌株为疑似益生菌株。
将筛选得到的疑似益生菌株分别以1％接种量接入MRS-THIO液体培养基(MRS中添加0.2％的巯基乙酸钠)和含0.3％(w/v)的猪胆盐的MRS-THIO培养基中上述处理放置在37℃厌氧培养箱中培养24h，取样在620nm下测定吸光值，计算24h的OD值差值，检测菌株的生长能力。
将上述筛选得到的疑似益生菌株以1％接种量接种到pH3.0的MRS培养基中，37℃厌氧培养箱中培养24h，取样在600nm下测定吸光值，计算24h的OD值差值，检测菌株的生长能力，筛选得到了T17。
2、菌株的鉴定
将T17进行革兰氏染色，并进行了16S rRNA基因菌种鉴定，此鉴定送样上海派森诺生物有限公司进行，经过16S rRNA基因比对，T17为一株植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌ZJUF T17(Lactobacillus plantarum ZJUF T17)。植物乳杆菌ZJUF T17的16S rRNA的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
将植物乳杆菌ZJUF T17于2017年6月16日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉，武汉大学)，保藏号为：CCTCC NO:M 2017342。
3、模拟人工胃肠液耐受性
人工胃液：NaCl 0.2g/100mL，胃蛋白酶(pepsin)0.35g/100mL，用1mol/L HCl调整pH为2.0，2.5，3.0，4.0，过滤除菌备用(0.22μm膜)。
人工肠液：NaHCO3 1.1g/100mL，NaCl 0.2g/100mL，胰蛋白酶(trypsin)0.1g/100mL，猪胆盐1.8g/100mL，调整pH值为8.0，过滤除菌备用。
取0.5mL的供试菌液加入到4.5mL的人工胃液中，震荡10s后放入37℃厌氧培养，在处理0h、1h、2h、3h取样，测活菌数(total viable counts)。
取0.5mL的上述3h人工胃液反应液加入到4.5mL的人工肠液中，震荡10s后放入37℃厌氧培养，在处理0h、3h、8h、24h取样，测活菌数(total viable counts)。
Figure BDA0001719351430000051
N0：处理前的活菌数；
N1：用PBS或人工胃肠液处理过的活菌数。
结果如图1所示，Lactobacillus plantarum ZJUF T17耐受pH4.0和3.0胃肠液转运的能力较好，转运结束后存活率高于77％；pH2.5的胃液可显著降低菌株T17的存活率，3h胃液处理后存活率为77.8％，后经肠液消化后存活率下降至55.9％。
4、最高胆盐浓度耐受性实验
配制含不同胆盐浓度(0.3％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％)的MRS液体培养基，以不加胆盐的培养基作为对照，按1％的接种量接入培养基中，37℃厌氧培养24h，在0h和12h时测定620nm下测定吸光值，计算差值。培养基调整pH值为7.0。
OD值差值>0说明在此胆盐浓度下Lactobacillus plantarum ZJUF T17可以生长，如表1所示，Lactobacillus plantarum ZJUF T17浸在0.3％和0.4％的胆盐中可以生长。
表1 Lactobacillus plantarumZJUF T17在24h对不同胆盐耐受情况
Figure BDA0001719351430000052
5、黏附能力测定(凝集特性)
取108cfu/mL的菌悬液4ml加入无菌离心管中，在4、8、18、24h静置状态下取上层清液150uL加入到96孔板中，测定OD600nm值。
Figure BDA0001719351430000053
A0：0h时样品的OD值；
At：不同时间段样品的OD值。
相同体积(500uL)的益生菌和病原菌混合，放置在室温下(勿摇动)，在4h静置状态下取上层清液150uL加入到96孔板中，测定OD600nm值。
Figure BDA0001719351430000061
Apat：病原菌0h时OD值；
Aprobio：益生菌0h时OD值；
Amix：不同时间段的OD值。
如图2所示，植物乳杆菌ZJUF T17的自凝集率8h时已达到60％，18h后超过90％，说明此植物乳杆菌ZJUFT17的自凝集作用很好，具有较好的肠道黏附的潜力。
与肠道致病菌之间的交互凝集作用结果如下表2所示，对金黄色葡萄球菌交互凝集率最高，达到60％，其次是大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌，对单增李斯特菌的交互凝集作用最弱。此植物乳杆菌ZJUFT17的交互凝集作用能使其在肠道中与致病菌较好的凝集，并顺利排出体外，有利于肠道健康。
表2 Lactobacillus plantarumZJUF T17与不同病原菌交互凝集率
Figure BDA0001719351430000062
6、抑菌特性研究
使用琼脂孔扩散法(Well-diffiision Agar Assay)测定菌株的抑菌能力。取20mL灭菌冷却45℃的TSA培养基与200uL致病菌液(1-2*107cfu/mL)—起倒入平板混匀，待凝固后于平板上打孔，孔径为7mm。将已制备好的无菌上清液(将培养好的菌液离心，取上清液用0.22um的微孔滤膜过滤除菌，置于-80℃备用)100uL分别加入孔中，以等体积已灭菌的PBS为对照，置于4℃下扩散12h，取出放入37℃培养24h。测量其抑菌圈直径。
如表3所示，Lactobacillus plantarum ZJUF T17对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和李斯特菌4种常见致病菌具有一定的抑制能力，其中对鼠伤寒沙门氏菌的抑制能力最强，对2株革兰氏阳性菌的抑菌圈直径在17-18mm左右，对大肠杆菌的抑制能力最差，抑菌圈至今只有15.5mm。
表3 Lactobacillus plantarum ZJUF T17抑制致病菌能力
Figure BDA0001719351430000063
Figure BDA0001719351430000071
7、菌株ZJUF T17对正常膳食小鼠的影响
选取4周龄、体重相近的健康雄性C57BL/6小鼠(SPF)为实验对象，预饲喂1周后，随机分为2个实验组，每个实验组3笼，每笼3只小鼠，进行6周的饲喂实验。
对照组：饲喂普通饲料，每天灌胃200uL生理盐水；
ZJUF T17组：饲喂普通饲料，每天灌胃200uL(含有5*108cfu活菌)。
记录初始和结束体重，饲喂6周后处死眼眶取血，使用南京建成试剂盒进行血清中总胆固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量测定；使用eBioscience试剂盒进行血清中IL-10和TNF-α含量测定。
7.1菌株ZJUF T17灌胃小鼠降低血液胆固醇含量
结果如下表4所示，Lactobacillus plantarum ZJUF T17饲喂小鼠6周后，血清中总胆固醇含量为3.34mmol/L，对照组的含量为3.72mmol/L。结果说明小鼠摄入6周Lactobacillus plantarum ZJUF T17有降低血清中胆固醇含量的趋势。对于LDL-C和HDL-C来说，Lactobacillus plantarum ZJUF T17的摄入均比对照组显著降低。因LDL-C和HDL-C两者在ZJUF T17组的含量均降低，进行HDL-C/LDL-C比值的分析，结果显示，ZJUF T17组的HDL-C/LDL-C的比值显著高于对照组。
表4 Lactobacillus plantarum ZJUF T17饲喂小鼠6周血清胆固醇参数
Figure BDA0001719351430000072
7.2菌株ZJUF T17灌胃小鼠调节免疫
结果如下表5所示，Lactobacillus plantarum ZJUF T17饲喂小鼠6周后，血清中抗炎因子IL-10含量为61.85pg/mL，对照组的含量为52.14pg/mL，含量有所上升但没有显著性差异。血清中TNF-α含量为39.01pg/mL，对照组含量为57.91pg/mL，摄入菌株ZJUF T17后，小鼠血清中预炎因子TNF-α的含量有显著下降。菌株Lactobacillus plantarum ZJUF T17的摄入，对IL-10和TNF-α的调节说明其具有调节免疫的功能。
表5 Lactobacillus plantarum ZJUF T17饲喂小鼠6周血清细胞因子参数
Figure BDA0001719351430000081
8、植物乳杆菌ZJUF T17对高脂膳食小鼠的影响
选取4周龄、体重相近的健康雄性C57BL/6小鼠(SPF)为实验对象，预饲喂1周后，随机分为3个实验组，每个实验组5笼，每笼3只小鼠，进行10周的饲喂实验。
对照组(NCD)：饲喂普通饲料，每天灌胃200uL生理盐水；
高脂组(HFD)：饲喂45％的高脂饲料，每天灌胃200uL生理盐水；
ZJUF T17组(HFD-T17)：饲喂45％的高脂饲料，每天灌胃200uL(含有5*108cfu活菌)。
记录初始和结束体重，结束时，眼眶取血，使用南京建成试剂盒测定血清中总胆固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)含量，使用eBioscience试剂盒细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α，使用碧云天试剂盒测定血清中总抗氧化能力(T-AOC)。
8.1体重变化
饲喂10周后，3组小鼠的体重增重变化以及第10周的体重增重如图3所示，普通膳食(NCD)从第1周开始体重增重就显著低于高脂膳食组。饲喂前6周时，植物乳杆菌ZJUF T17缓解体重增加效果并不明显，从第7周开始，开始出现差异，8周后，与高脂组(HFD)间有显著性差异。
第10周的增重结果见图4，饲喂高脂膳食的小鼠体重均极显著高于普通膳食小鼠，而摄入植物乳杆菌ZJUF T17后，饲喂高脂膳食的小鼠增重显著低于HFD组(p＝0.0091)，显示了植物乳杆菌ZJUF T17缓解高脂膳食带来的体重的增加。
8.2对血清胆固醇的调节
高脂膳食的摄入，会带来胆固醇含量的增加，以及增加心血管疾病发生的风险，植物乳杆菌ZJUF T17的摄入，对血清中胆固醇进行了调节，结果见图5所示。总体上讲，高脂膳食(HFD)显著增加了总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量，相应显著降低了HDL-C/LDL-C的比例，增加了心血管疾病发生的风险；饲喂高脂膳食，并摄入植物乳杆菌ZJUF T17后，能有效的缓解这一现象，能显著降低高脂膳食带来的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的增加，相应地显著增加了HDL-C/LDL-C的比例，此比例与NCD组间也没有显著性差异。
与高脂膳食相比，摄入植物乳杆菌ZJUF T17后，血清中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量分别下降了25.21％和29.41％，而高密度脂蛋白胆固醇含量上升了13.6％。植物乳杆菌ZJUF T17对高脂膳食胆固醇的调节主要体现在降低低密度脂蛋白胆固醇含量上，从而优化胆固醇的组成。
8.3对血清炎症因子的影响
肥胖是一种慢性炎症疾病，体重的过度增加，会带来一定的炎症因子的改变，结果如图6所示。IL-10和TNF-α的变化与普通膳食小鼠的规律一致。高脂膳食(HFD)的饲喂能显著增加小鼠血清中预炎因子(IL-6和TNF-α)，摄入植物乳杆菌ZJUF T17后(HFD-T17)，能缓解高脂膳食带来的预炎因子含量的增加。
与高脂膳食相比，摄入植物乳杆菌ZJUF T17后，血清中抗炎因子IL-10含量增加了29.51％，预炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量分别降低了42.49％、7.1％和52.85％。植物乳杆菌ZJUF T17对高脂膳食中免疫因子的调节，总体上能降低预炎因子含量，增加抗炎因子含量，其中对IL-1β和TNF-α含量的调节具有显著性差异，而且从含量上能降低40-50％，具有优越的性能。
8.4对血清氧化应激的影响
对饲喂10周小鼠血清中氧化应激指标进行测定，结果如图7所示。高脂膳食(HFD)小鼠的抗氧化能力均显著低于普通膳食小鼠(T-AOC、GHS-Px和T-SOD)，而过氧化物MDA的含量要高于普通膳食小鼠。摄入植物乳杆菌ZJUF T17后，能显著缓解高脂膳食带来的不利影响。
与高脂膳食相比，摄入植物乳杆菌ZJUF T17后，血清中T-AOC含量升高了8.2％，GHS-Px含量升高了7.83％，T-SOD含量升高了28.89％，而MDA含量下降了35.32％。MDA常与T-SOD测定结合，T-SOD活力间接反映了机体清除氧自由基的能力，而MDA又间接反映机体细胞受自由基攻击的严重程度。植物乳杆菌ZJUF T17能显著大幅度改变T-SOD和MDA的含量，具有一定的降低高脂膳食肥胖带来的氧化应激损伤的能力。
9、Lactobacillus plantarum ZJUF T17发酵乳能力
活化后的T17和LGG(鼠李糖乳杆菌，对照菌株)调整菌浓度并用生理盐水进行清洗2次，加入到200mL的脱脂乳培养基(脱脂乳11.5％，葡萄糖0.75％，蔗糖5％(w/v))中，使最终菌浓度为1.5-2*107cfu/mL脱脂乳，每种处理做3个平行，放置在37℃中培养，并于0、6、12、18、24h取样测定发酵指标；随后放置在4℃冰箱中，于1周、2周后取样测定。
如图8所示，Lactobacillus plantarum ZJUF T17发酵乳过程中，使pH从6.6降低到4.2左右，且在保存过程中一直维持4.2左右。与阳性对照菌株LGG相比，LactobacillusplantarumZJUFT17在前6h使降低pH相对较快，随后，与LGG降低速率相似，最后均维持在4.2左右。
如图9所示，发酵乳过程中TTA从17增加到110。发酵前12h时，LactobacillusplantarumZJUF T17与阳性对照菌株LGG增加TTA速率相似，但12-18h时，Lactobacillusplantarum ZJUFT17增加TTA的速率显著高于LGG，直到保存14天后，Lactobacillusplantarum ZJUF T17发酵乳的TTA值仍高于LGG。
如图10所示，从整个发酵周期及保存周期来看，除发酵24h时，LactobacillusplantarumZJUF T17分解得到的丝氨酸含量均显著高于LGG(p<0.05)，保存14天仍有所增加，最终达到22mmol/L。
表6 Lactobacillus plantarum ZJUF T17发酵乳菌落分析
Figure BDA0001719351430000101
如表6所示，37℃发酵24h结束时，Lactobacillus plantarum ZJUF T17活菌数低于LGG，但两者之间没有显著性差异。在后期4℃保存中，两种菌的活菌都有所下降，Lactobacillus plantarum ZJUF T17活菌数显著低于LGG，说明Lactobacillus plantarumZJUF T17发酵过程中活菌数较高，但4℃保存时活菌数下降较快。
序列表
<110> 浙江大学
<120> 植物乳杆菌ZJUFT17及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1487
<212> DNA
<213> Lactobacillus plantarum
<400> 1
gcggctggtt cctaaaaggt taccccaccg actttgggtg ttacaaactc tcatggtgtg 60
acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg gcatgctgat ccgcgattac 120
tagcgattcc gacttcatgt aggcgagttg cagcctacaa tccgaactga gaatggcttt 180
aagagattag cttactctcg cgagttcgca actcgttgta ccatccattg tagcacgtgt 240
gtagcccagg tcataagggg catgatgatt tgacgtcatc cccaccttcc tccggtttgt 300
caccggcagt ctcaccagag tgcccaactt aatgctggca actgataata agggttgcgc 360
tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg acgacaacca tgcaccacct 420
gtatccatgt ccccgaaggg aacgtctaat ctcttagatt tgcatagtat gtcaagacct 480
ggtaaggttc ttcgcgtagc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc 540
cgtcaattcc tttgagtttc agccttgcgg ccgtactccc caggcggaat gcttaatgcg 600
ttagctgcag cactgaaggg cggaaaccct ccaacactta gcattcatcg tttacggtat 660
ggactaccag ggtatctaat cctgtttgct acccatactt tcgagcctca gcgtcagtta 720
cagaccagac agccgccttc gccactggtg ttcttccata tatctacgca tttcaccgct 780
acacatggag ttccactgtc ctcttctgca ctcaagtttc ccagtttccg atgcacttct 840
tcggttgagc cgaaggcttt cacatcagac ttaaaaaacc gcctgcgctc gctttacgcc 900
caataaatcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag 960
ccgtggcttt ctggttaaat accgtcaata cctgaacagt tactctcaga tatgttcttc 1020
tttaacaaca gagttttacg agccgaaacc cttcttcact cacgcggcgt tgctccatca 1080
gactttcgtc cattgtggaa gattccctac tgctgcctcc cgtaggagtt tgggccgtgt 1140
ctcagtccca atgtggccga ttaccctctc aggtcggcta cgtatcattg ccatggtgag 1200
ccgttacccc accatctagc taatacgccg cgggaccatc caaaagtgat agccgaagcc 1260
atctttcaag ctcggaccat gcggtccaag ttgttatgcg gtattagcat ctgtttccag 1320
gtgttatccc ccgcttctgg gcaggtttcc cacgtgttac tcaccagttc gccactcact 1380
caaatgtaaa tcatgatgca agcaccaatc aataccagag ttcgttcgac ttgcatgtat 1440
taggcacgcc gccagcgttc gtcctgagcc aggttccaaa actaaac 1487

Claims (6)

1.一种植物乳杆菌ZJUF T17(Lactobacillus plantarum ZJUF T17)，该植物乳杆菌的保藏号为CCTCC NO:M 2017342。
2.如权利要求1所述的植物乳杆菌ZJUF T17在制备抑制胃肠道致病菌的药物或食品中的应用，所述胃肠道致病菌为大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌。
3.如权利要求1所述的植物乳杆菌ZJUF T17在制备降低动物或人体内胆固醇浓度的药物或食品中的应用。
4.如权利要求1所述的植物乳杆菌ZJUF T17在制备免疫调节药物中的应用。
5.如权利要求1所述的植物乳杆菌ZJUF T17在制备预防或治疗慢性疾病的药物中的应用，所述慢性疾病为肥胖症或糖尿病。
6.如权利要求1所述的植物乳杆菌ZJUF T17在生产发酵乳制品中的应用。
CN201810724365.7A 2017-12-14 2018-07-04 植物乳杆菌zjuf t17及其应用 Active CN108570436B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2017113408898 2017-12-14
CN201711340889 2017-12-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108570436A CN108570436A (zh) 2018-09-25
CN108570436B true CN108570436B (zh) 2020-08-04

Family

ID=63573670

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810724365.7A Active CN108570436B (zh) 2017-12-14 2018-07-04 植物乳杆菌zjuf t17及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108570436B (zh)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109497132B (zh) * 2018-11-08 2021-05-04 江南大学 一种促进植物乳杆菌在乳基体系中高效增殖的复合增殖剂
CN109364102A (zh) * 2018-12-29 2019-02-22 重庆第二师范学院 植物乳杆菌cqpc03在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用
CN109645490A (zh) * 2018-12-29 2019-04-19 重庆第二师范学院 植物乳杆菌cqpc02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用
CN109706103B (zh) * 2019-03-19 2019-08-06 鲁东大学 具有高黏附性植物乳杆菌rs-09及其应用
CN110628663B (zh) * 2019-08-02 2021-12-17 华南理工大学 一株鼠李糖乳杆菌及其高密度培养方法和应用
CN110684701B (zh) * 2019-11-19 2021-02-12 西南大学 植物乳杆菌s58及其在制备用于缓解肥胖的产品中的应用
CN111909869A (zh) * 2020-07-23 2020-11-10 大连工业大学 植物乳杆菌y44及其在制备缓解肥胖或抗高血脂症药物或保健品中的应用
CN113444669B (zh) * 2021-07-27 2022-05-31 中国海洋大学 一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum F3-2及其应用
CN114317353B (zh) * 2021-12-30 2023-09-15 浙江大学 一种植物乳杆菌zjufyj7及其应用
CN114381395B (zh) * 2021-12-30 2023-06-06 杭州康源食品科技有限公司 一种植物乳杆菌zjufn1及其应用
CN115105535A (zh) * 2022-03-08 2022-09-27 润盈生物工程（上海）有限公司 植物乳杆菌Lp-G18在儿童调节免疫及降血脂方面的应用
CN116004475B (zh) * 2023-02-15 2024-05-03 生合生物科技（扬州）有限公司 一株用于预防、辅助治疗胃部虚寒的植物乳杆菌及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102597214A (zh) * 2009-07-22 2012-07-18 Cj第一制糖株式会社 新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物
CN105567586A (zh) * 2015-12-21 2016-05-11 南昌大学 一株具有抗糖尿病功能的植物乳杆菌及其应用
CN104073455B (zh) * 2014-06-18 2016-06-01 兰州大学 一株具有降低胆固醇能力的植物乳杆菌
CN103642716B (zh) * 2013-11-21 2017-02-01 河北一然生物科技有限公司 一种植物乳杆菌及其应用
CN106834196A (zh) * 2017-04-10 2017-06-13 吉林省农业科学院 植物乳杆菌ch126及其在制备降糖功能性食品中的应用
CN108085285A (zh) * 2018-01-25 2018-05-29 吉林省命之元生物科技有限公司 一株植物乳杆菌dm-50株及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102597214A (zh) * 2009-07-22 2012-07-18 Cj第一制糖株式会社 新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物
CN103642716B (zh) * 2013-11-21 2017-02-01 河北一然生物科技有限公司 一种植物乳杆菌及其应用
CN104073455B (zh) * 2014-06-18 2016-06-01 兰州大学 一株具有降低胆固醇能力的植物乳杆菌
CN105567586A (zh) * 2015-12-21 2016-05-11 南昌大学 一株具有抗糖尿病功能的植物乳杆菌及其应用
CN106834196A (zh) * 2017-04-10 2017-06-13 吉林省农业科学院 植物乳杆菌ch126及其在制备降糖功能性食品中的应用
CN108085285A (zh) * 2018-01-25 2018-05-29 吉林省命之元生物科技有限公司 一株植物乳杆菌dm-50株及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108570436A (zh) 2018-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108570436B (zh) 植物乳杆菌zjuf t17及其应用
CN111944725B (zh) 一种副干酪乳杆菌207-27及其应用
CN111944727B (zh) 一种短双歧杆菌207-1及其应用
CN106399162B (zh) 一种新型干酪乳杆菌及其应用
CN112175864B (zh) 动物双歧杆菌及其选育方法和应用
CN109234182B (zh) 植物乳杆菌zjuft34及其应用
WO2021114658A1 (zh) 动物双歧杆菌乳亚种i797、其分离纯化方法及应用
CN115354002B (zh) 一种凝结芽孢杆菌bc07、其用途及其抑菌剂、药物、食品和抑菌方法
CN113249280B (zh) 一种嗜热链球菌stn26、菌粉及在降尿酸产品中的应用
CN116814501B (zh) 一种缓解肥胖的长双歧杆菌长亚种及其应用
CN104430847A (zh) 发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum Lee工作发酵剂制品及其预防便秘保健用途
CN114990030B (zh) 嗜酸乳杆菌la18及其在制备调节肠道菌群或免疫调节的产品方面的应用
CN105132328B (zh) 一种可预防胃溃疡的发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum strain suo及其用途
CN106417594B (zh) 一种复合益生菌饮料及其应用
CN111543640A (zh) 一种具有改善小儿腹泻和消化不良的动物双歧杆菌乳亚种i797的应用
CN117159598B (zh) 植物乳植杆菌Lp18在制备增强免疫的药物或保健食品方面的用途及产品
CN109234181B (zh) 植物乳杆菌zjuf hn9及其应用
CN117683670A (zh) 一种植物乳植杆菌fmbl l23036 cnn、酸奶发酵剂、酸奶及其应用
US12077749B2 (en) Bifidobacterium longum subsp. infantis with fimbriae and applications thereof
JP4308481B2 (ja) 抗アレルギー剤
CN110982731A (zh) 一株具有益生特性的太空诱变植物乳杆菌st20-71及其应用
SI24570A (sl) Novi sevi rodu Lactobacillus in njihova uporaba
CN115011513A (zh) 一种增强免疫并调解肠胃控制脂肪及减肥排毒的乳酸菌粉
KR20180056896A (ko) 한국인 모유로부터 분리한 락토바실러스 가세리 제이12피4 와 스타필로코커스 에피더미디스 제이4피1로 제조한 인공영양아용 미생물제제 및 이를 사용한 장염 억제 방법
CN111269853A (zh) 一种具有保肝作用的复合菌剂

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20240523

Address after: 201799 No. 10666, Songze Avenue, Qingpu District, Shanghai

Patentee after: Biogrowing. Co.,Ltd.

Country or region after: China

Address before: 310013 Yuhang Tang Road, Xihu District, Hangzhou, Zhejiang 866

Patentee before: ZHEJIANG University

Country or region before: China

Patentee before: ZHEJIANG QUANZHI BIOTECHNOLOGY CO.,LTD.