CN108570427B - 一种微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的肥料 - Google Patents

一种微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的肥料 Download PDF

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Abstract

本申请公开了一种微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的肥料，其中，所述采用微生物菌剂制备的肥料，包括下述重量份数的原料：有机肥料40～70g，Roseomonas sp.CH‑Si‑5菌剂5～15g，草炭土5～50g，磷石膏5～20g和腐殖酸10～30g。

Description

一种微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的肥料
技术领域
本申请涉及生物有机肥料技术领域，特别涉及一种微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的肥料。
背景技术
目前，我国城镇化进程加快，城市面积的急剧扩张对18亿亩耕地面积的保护造成很大压力。同时，我国土地沙化问题严重，要想充分挖掘耕地潜力，除了防止滥用土地外，必须从土地的沙化，盐碱化治理开始。
另外，土地沙化造成的沙尘暴多次袭击我国北部大中城市，对整个国家的环境保护造成很大不利影响，改善沙地，盐碱地环境，保护和增加耕地面积不仅是人类生存的需求，也是社会高度发展的要求。
沙地和盐碱地的土壤含不溶态磷和钾的含量较高，会对植物的生长造成很大不利影响。
发明内容
有鉴于此，本申请提供一种具有解磷、解钾功能的微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的肥料。
本申请的技术方案是这样实现的：
一方面，本申请提供一种微生物菌剂的制备方法，包括：
(1)取根际土1g，加入到9ml的水中，超声震荡10～20min；取所述震荡液1ml做10倍梯度稀释，取5～10ml涂布在LB培养基上培养得到纯化菌株；所述LB培养基成分包括：蛋白胨9.0～11.0g，酵母粉4.0～6.0g，NaCl9.0～11.0g，加蒸馏水至1000ml，pH 7.0～7.2；
(2)将步骤(1)中得到的纯化菌株放置于PVK培养基中，筛选出Roseomonas sp.CH-Si-5菌株；所述PVK培养基的成分包括：葡萄糖9.0～11.0g，NaCl 0.1～0.3g，MgSO4·7H2O0.09～0.15g，KCl0.1～0.3g，(NH4)2SO4 0.4～0.6g，Ca3(PO4)24.0～6.0g，酵母浸膏0.4～0.6g，MnSO4·H2O 0.001～0.003g，FeSO4·7H2O 0.001～0.003g，溴酚蓝0.3～0.5g，pH 6.5～7.0，加蒸馏水至1000ml；
(3)将Roseomonas sp.CH-Si-5菌株放入发酵罐进行发酵，得到Roseomonassp.CH-Si-5菌剂；所述发酵罐内的发酵菌液的温度为30～35℃，溶氧0.2～0.3mmol·L-1，200r/min，自然pH值，接种量为5～7ml，发酵时间为20～25h。
另一方面，本申请还提供一种采用微生物菌剂制备的肥料，包括下述重量份数的原料：有机肥料40～70g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂5～15g，草炭土5～50g，磷石膏5～20g和腐殖酸10～30g。
可选地，所述有机肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便26～41g，锯末10～23g，有机肥料专用发酵剂4～6g。
可选地，所述采用微生物菌剂制备的肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便26g，锯末10g，有机肥料专用发酵剂4g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂5g，草炭土5g，磷石膏5g和腐殖酸10g。
可选地，所述采用微生物菌剂制备的肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便41g，锯末23g，有机肥料专用发酵剂6g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂15g，草炭土50g，磷石膏20g和腐殖酸30g。
可选地，所述采用微生物菌剂制备的肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便37g，锯末18g，有机肥料专用发酵剂5g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂10g，草炭土40g，磷石膏10g和腐殖酸20g。
本申请的有益效果是:本申请提供的微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的肥料通过采用具有解磷、解钾功能的微生物菌剂改善沙地、盐碱地的土壤理化性状和土壤养分状况，增加土壤微生物作用，促进沙地、盐碱地的植物根系生长。
具体实施方式
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似推广，因此本申请不受下面公开的具体实施的限制。
本申请中，NaCl为氯化钠，pH为氧离子浓度指数，MgSO4·7H2O为七水硫酸镁，KCl为氯化钾，(NH4)2SO4为硫酸铵，Ca3(PO4)2为硫酸钙，MnSO4·H2O为硫酸锰，FeSO4·7H2O为硫酸亚铁晶体。
本申请提供一种微生物菌剂的制备方法，包括：
(1)取根际土1g，加入到9ml的水中，超声震荡10～20min；取所述震荡液1ml做10倍梯度稀释，取5～10ml涂布在LB培养基上培养得到纯化菌株；所述LB培养基成分包括：蛋白胨9.0～11.0g，酵母粉4.0～6.0g，NaCl9.0～11.0g，加蒸馏水至1000ml，pH 7.0～7.2；
(2)将步骤(1)中得到的纯化菌株放置于PVK培养基中，筛选出Roseomonas sp.CH-Si-5菌株；所述PVK培养基的成分包括：葡萄糖9.0～11.0g，NaCl 0.1～0.3g，MgSO4·7H2O0.09～0.15g，KCl0.1～0.3g，(NH4)2SO4 0.4～0.6g，Ca3(PO4)24.0～6.0g，酵母浸膏0.4～0.6g，MnSO4·H2O 0.001～0.003g，FeSO4·7H2O 0.001～0.003g，溴酚蓝0.3～0.5g，pH 6.5～7.0，加蒸馏水至1000ml；
(3)将Roseomonas sp.CH-Si-5菌株放入发酵罐进行发酵，得到Roseomonassp.CH-Si-5菌剂；所述发酵罐内的发酵菌液的温度为30～35℃，溶氧0.2～0.3mmol·L-1，200r/min，自然pH值，接种量为5～7ml，发酵时间为20～25h。
本申请的Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂中的活性成分包括Roseomonas sp.CH-Si-5菌株，其中，所述Roseomonas sp.CH-Si-5菌株已保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏日期为2017年7月31日，保藏号CGMCC No.14479。
本申请提供一种采用微生物菌剂制备的肥料，包括下述重量份数的原料：有机肥料40～70g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂5～15g，草炭土5～50g，磷石膏5～20g和腐殖酸10～30g。
可选地，所述有机肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便26～41g，锯末10～23g，有机肥料专用发酵剂4～6g。
可选地，所述采用微生物菌剂制备的肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便26g，锯末10g，有机肥料专用发酵剂4g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂5g，草炭土5g，磷石膏5g和腐殖酸10g。
可选地，所述采用微生物菌剂制备的肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便41g，锯末23g，有机肥料专用发酵剂6g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂15g，草炭土50g，磷石膏20g和腐殖酸30g。
可选地，所述采用微生物菌剂制备的肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便37g，锯末18g，有机肥料专用发酵剂5g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂10g，草炭土40g，磷石膏10g和腐殖酸20g。
下面将通过实施例来进一步说明本申请。但是，需要说明的是，以下实施例是对本申请的技术方案的进一步的说明，本申请的技术方案并不因此而受到任何限制。
实施例一
一种微生物菌剂的制备方法，包括：
(1)取根际土1g，加入到9ml的水中，超声震荡15min；取所述震荡液1ml做10倍梯度稀释，取10ml涂布在LB培养基上培养得到纯化菌株；所述LB培养基成分包括：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl10.0g，加蒸馏水至1000ml，pH 7.2；
(2)将步骤(1)中得到的纯化菌株放置于PVK培养基中，筛选出Roseomonas sp.CH-Si-5菌株；所述PVK培养基的成分包括：葡萄糖9.0～11.0g，NaCl 0.1～0.3g，MgSO4·7H2O0.09～0.15g，KCl 0.1～0.3g，(NH4)2SO4 0.4～0.6g，Ca3(PO4)2 4.0～6.0g，酵母浸膏0.4～0.6g，MnSO4·H2O 0.001～0.003g，FeSO4·7H2O 0.001～0.003g，溴酚蓝0.3～0.5g，pH 6.5～7.0，加蒸馏水至1000ml；
具体地，将步骤(2)分离得到的Roseomonas sp.CH-Si-5菌株利用16S rRNA基因的序列分析的方法鉴定，以确定其基因序列；
(3)将Roseomonas sp.CH-Si-5菌株放入发酵罐进行发酵，得到Roseomonassp.CH-Si-5菌剂；所述发酵罐内的发酵菌液的温度为30℃，溶氧0.2mmol·L-1，200r/min，自然pH值，接种量为6ml，发酵时间为24h。
一种采用微生物菌剂制备的肥料，使用牛羊粪便26g，锯末10g和有机肥料专用发酵剂4g均匀混合后发酵一个月使其全部腐熟，然后与Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂5g，草炭土5g，磷石膏5g和腐殖酸10g均匀混合制成；所述Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂通过上述实施例中的微生物菌剂的制备方法得到。
本实施例中得到的有机肥料适合沙地和盐碱地使用，可以改良土壤，改善植物的生长环境，促进植物生长。
将本实施例中的采用微生物菌剂制备的肥料应用在萝卜种植上，实验结果见表1。
表1
Figure BDA0001605250170000061
本申请实施例中，每平方采用2kg的本实施例的采用微生物菌剂制备的肥料时，每平方萝卜产量为1.03kg，每平方采用2kg的微生物肥时，每平方萝卜产量为0.5kg，每平方采用2kg的有机肥料时，每平方萝卜产量为0.33kg，不采用任何肥料时，每平方萝卜产量为0.26kg，由此可知，本申请实施例的采用微生物菌剂制备的肥料可以极大的提高对农作物的产量。
实施例二
一种微生物菌剂的制备方法，包括：
(1)取根际土1g，加入到9ml的水中，超声震荡15min；取所述震荡液1ml做10倍梯度稀释，取10ml涂布在LB培养基上培养得到纯化菌株；所述LB培养基成分包括：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl10.0g，加蒸馏水至1000ml，pH 7.2；
(2)将步骤(1)中得到的纯化菌株放置于PVK培养基中，筛选出Roseomonas sp.CH-Si-5菌株；所述PVK培养基的成分包括：葡萄糖9.0～11.0g，NaCl 0.1～0.3g，MgSO4·7H2O0.09～0.15g，KCl 0.1～0.3g，(NH4)2SO4 0.4～0.6g，Ca3(PO4)2 4.0～6.0g，酵母浸膏0.4～0.6g，MnSO4·H2O 0.001～0.003g，FeSO4·7H2O 0.001～0.003g，溴酚蓝0.3～0.5g，pH 6.5～7.0，加蒸馏水至1ml；
具体地，将步骤(2)分离得到的Roseomonas sp.CH-Si-5菌株利用16S rRNA基因的序列分析的方法鉴定，以确定其基因序列；
(3)将Roseomonas sp.CH-Si-5菌株放入发酵罐进行发酵，得到Roseomonassp.CH-Si-5菌剂；所述发酵罐内的发酵菌液的温度为30℃，溶氧0.2mmol·L-1，200r/min，自然pH值，接种量为6ml，发酵时间为24h。
一种采用微生物菌剂制备的肥料，选取牛羊粪便41g，锯末23g，有机肥料专用发酵剂6g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂15g，草炭土50g，磷石膏20g和腐殖酸30g，然后将所有材料进行混合搅拌制成含菌量大于10^8CFU/g的有机肥料；所述微生物菌剂通过上述的微生物菌剂的制备方法得到。
本实施例中得到的有机肥料具有解磷，解钾功能，可以改良土壤，改善植物的生长环境，促进植物生长，从而实现植物的绿色，有机，食品安全的目的。
将上述实施例中的采用微生物菌剂制备的肥料应用在萝卜种植上，实验结果见表2。
表2
Figure BDA0001605250170000071
本申请实施例中，每平方采用2kg的本实施例的采用微生物菌剂制备的肥料时，每平方萝卜产量为1.53kg，每平方采用2kg的微生物肥时，每平方萝卜产量为0.5kg，每平方采用2kg的有机肥料时，每平方萝卜产量为0.33kg，不采用任何肥料时，每平方萝卜产量为0.26kg，由此可知，本申请实施例的采用微生物菌剂制备的肥料可以极大的提高对农作物的产量。
实施例三
一种微生物菌剂的制备方法，包括：
(1)取根际土1g，加入到9ml的水中，超声震荡15min；取所述震荡液1ml做10倍梯度稀释，取10ml涂布在LB培养基上培养得到纯化菌株；所述LB培养基成分包括：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl10.0g，加蒸馏水至1000ml，pH 7.2；
(2)将步骤(1)中得到的纯化菌株放置于PVK培养基中，筛选出Roseomonas sp.CH-Si-5菌株；所述PVK培养基的成分包括：葡萄糖9.0～11.0g，NaCl 0.1～0.3g，MgSO4·7H2O0.09～0.15g，KCl 0.1～0.3g，(NH4)2SO4 0.4～0.6g，Ca3(PO4)2 4.0～6.0g，酵母浸膏0.4～0.6g，MnSO4·H2O 0.001～0.003g，FeSO4·7H2O 0.001～0.003g，溴酚蓝0.3～0.5g，pH 6.5～7.0，加蒸馏水至1ml；
具体地，将步骤(2)分离得到的Roseomonas sp.CH-Si-5菌株利用16S rRNA基因的序列分析的方法鉴定，以确定其基因序列；
(3)将Roseomonas sp.CH-Si-5菌株放入发酵罐进行发酵，得到Roseomonassp.CH-Si-5菌剂；所述发酵罐内的发酵菌液的温度为30℃，溶氧0.2mmol·L-1，200r/min，自然pH值，接种量为6ml，发酵时间为24h。
一种采用微生物菌剂制备的肥料，选取牛羊粪便37g，锯末18g，有机肥料专用发酵剂5g，Roseomonas sp.CH-Si-5菌剂10g，草炭土40g，磷石膏10g和腐殖酸20g混合搅拌均匀，制备成含菌量大于10^8CFU/g有机肥料；所述微生物菌剂通过上述微生物菌剂的制备方法得到。
本实施例的采用微生物菌剂制备的肥料具有有效地改善土壤理化性状和土壤养分状况，增加土壤微生物作用，促进植物根系发达，从而实现绿色、有机、食品安全的目的。
将上述实施例中的采用微生物菌剂制备的肥料应用在萝卜种植上，实验结果见表3。
表3
Figure BDA0001605250170000091
本申请实施例中，每平方采用2kg的本实施例的采用微生物菌剂制备的肥料时，每平方萝卜产量为1.23kg，每平方采用2kg的微生物肥时，每平方萝卜产量为0.5kg，每平方采用2kg的有机肥料时，每平方萝卜产量为0.33kg，不采用任何肥料时，每平方萝卜产量为0.26kg，由此可知，本申请实施例的采用微生物菌剂制备的肥料可以极大的提高对农作物的产量。
以上公开的本申请优选实施例只是用于帮助阐述本申请。可选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该申请仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本申请的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本申请。本申请仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
SEQUENCE LISTING
<110> 鄂尔多斯市亿鼎生态农业开发有限公司；亿利资源集团有限公司
<120> 一种具有解磷功能的菌株、菌剂的制备方法及菌剂
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 628
<212> DNA
<213> 红球菌（Roseomonas sp.）
<400> 1
agtaccgcgt aggaatgtgt ccagaggtgg gggacaacct tgggaaactg aggctaatac 60
cgcatatgag ctgaggctca aagcagcgat gcgcctttgg agtagcctgc gtccgattag 120
ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc gacgatcggt agctggtctg agaggacgac 180
cagccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat 240
tggacaatgg gcgcaagcct gatccagcaa tgccgcgtgt gtgaagaagg tcttcggatc 300
gtaaagcact ttcgacgggg acgatgatga cggtacccgt agaagaagcc ccggctaact 360
tcgtgccagc agccgcggta atacgaaggg ggctagcgtt actcggaatt actgggcgta 420
aagggcgcgt aggcggcgct ccaagttagg cgtgaaagtc ctgggctcaa cctgggaact 480
gcgcttgata ctggagtgct tgaggatgga agagggtcgt ggaattccca gtgtagaggt 540
gaaattcgta gatattggga agaacaccgg tggcgaaggc ggcgacctgg tccattactg 600
acgctgaggc gcgacagcgt ggggagca 628

Claims (5)

1.一种采用微生物菌剂制备的肥料，其特征在于，包括下述重量份数的原料：有机肥料40~70g，玫瑰单胞菌(Roseomonas sp.) CH-Si-5菌剂5~15g，草炭土5~50g，磷石膏5~20g和腐殖酸10~30g；
其中，所述Roseomonas sp. CH-Si-5菌剂通过包含下述步骤的发酵方法发酵得到：
将Roseomonas sp. CH-Si-5菌株放入含有PVK培养基的发酵罐进行发酵，得到Roseomonas sp. CH-Si-5菌剂；所述发酵罐内的发酵菌液的温度为30 ~35℃，溶氧0.2～0.3 mmol•L-1，200 r/min，自然pH值，接种量为5~7ml，发酵时间为20~25h；
其中，所述Roseomonas sp. CH-Si-5菌株的保藏号为CGMCC No. 14479，保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏日期为2017年7月31日。
2.根据权利要求1所述的采用微生物菌剂制备的肥料，其特征在于，所述有机肥料包括下述重量份数的原料：牛羊粪便26~41g，锯末10~23g，有机肥料专用发酵剂4~6g。
3.根据权利要求1所述的采用微生物菌剂制备的肥料，其特征在于，包括下述重量份数的原料：牛羊粪便26g，锯末10g，有机肥料专用发酵剂4g，Roseomonas sp. CH-Si-5菌剂5g，草炭土5g，磷石膏5g和腐殖酸10g。
4.根据权利要求2所述的采用微生物菌剂制备的肥料，其特征在于，包括下述重量份数的原料：牛羊粪便41g，锯末23g，有机肥料专用发酵剂6g，Roseomonas sp. CH-Si-5菌剂15g，草炭土50g，磷石膏20g和腐殖酸30g。
5.根据权利要求2所述的采用微生物菌剂制备的肥料，其特征在于，包括下述重量份数的原料：牛羊粪便37g，锯末18g，有机肥料专用发酵剂5g，Roseomonas sp. CH-Si-5菌剂10g，草炭土40g，磷石膏10g和腐殖酸20g。
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