CN108558808B - 一种酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有式Ⅰ所示结构的酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，该化合物或其药学上可接受的盐具有明显的抑制HIV蛋白酶和逆转录酶的活性；毒性研究显示其具有良好的成药性，表明该类化合物作为抗艾滋病药物具有良好的应用前景。根据实施例的实验数据可知，本发明的化合物对HIV‑1蛋白酶和HIV‑1逆转录酶均有抑制活性，而且均具有较低的细胞毒性。本发明的化合物或其药学上可接受的盐有望成为同时抑制HIV蛋白酶和逆转录酶的双靶点抑制剂。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种酰胺类衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS)，又称艾滋病，是人类因感染免疫缺陷病毒(Human ImmunodeficiencyVirus，HIV)而导致免疫缺陷，并引发一系列机会性感染及肿瘤的综合征。HIV是目前已知分化、变异程度最高的病毒，根据血清学反应、基因序列差异和地理分布特征，可分为两个亚型：HIV-1和HIV-2。HIV-1是引起艾滋病全球流行的病原体，在感染人数上占95％的绝对优势；HIV-2主要局限在非洲中部和西部的一些地区，感染人数相对较少。
自1987年齐多夫定(zidovudine,AZT)作为首个被批准正式用于临床AIDS治疗药物以来，目前已有三十余种抗AIDS药物应用于临床，其中包括1种侵入抑制剂、15种逆转录酶(RT)抑制剂、10种蛋白酶(PR)抑制剂、1种整合酶抑制剂、1种融合抑制剂以及6种复合剂等。但是长期应用单靶点药物容易引起交叉耐药及严重的毒副作用。1996年美籍华裔科学家何大一提出了“鸡尾酒疗法”即高效抗逆转录病毒治疗(HAART)，降低单一用药易产生的耐药性，最大限度地抑制病毒的复制，极大地提高了患者的生活质量。然而这种疗法剂量大、毒副作用强、药物相互作用复杂、患者依从性差，以上面临的严峻形势迫使人们不断探索寻找新颖的抗HIV药物。
多靶点药物设计(multitarget-directed ligands,MT-DLs)由于其均一的药动学性质、降低药物相互作用和提高治疗效果等优势，已成为当前药物设计的前沿领域，为许多疑难疾病的治疗带来了新的希望。逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂是“鸡尾酒疗法”中的首选药物，因此HIV PR/RT双靶点抑制剂的研究具有重要的意义。
HIV-1逆转录酶(reverse transcriptase,RT)在HIV病毒的复制过程中起着非常重要的作用，催化RNA逆转录合成双链DNA，双链DNA在整合酶的作用下进入细胞核内，并转录病毒RNA，成为宿主细胞的一部分。因此，RT是抗HIV药物的重要靶点，同时也是HIV最早的研究靶点。
HIV-1蛋白酶是由HIV基因编码的一种特异性天冬氨酰蛋白酶，其活性形式为两条相同肽链组成的同质二聚体，每条肽链由99个氨基酸残基组成，活性位点位于两条肽链之间。HIV-1蛋白酶抑制剂通过阻止蛋白酶对病毒gag或者gag-pol基因的剪切，使被感染的细胞只能产生不成熟、不具有感染性的病毒。因此，HIV-1PR是研发抗HIV药物的重要靶点。
迄今为止，尚未见有能够抑制HIV-1蛋白酶活性和逆转录酶活性、可应用于治疗艾滋病的衍生物的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够抑制HIV-1蛋白酶和逆转录酶的活性的酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，具有式Ⅰ所示结构：
式I中，Y为
1)当Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基，X为-CH2-或不为任何取代基时，R为Ra、Rb、Rc、Rd或Rg，所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
所述Rd为
所述Rg为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基。
2)当Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基，X为-O-或-S时，R为Re或Rf，所述Re为
所述Rf为
其中，R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。
3)当Rx为羟甲基、羟基或氨基时，X为-CH2-、-O-、-S-、-NH-或不为任何取代基；
Y为
R为Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf或Rg，所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
所述Rd为
所述Re为
所述Rf为
所述Rg为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基；
R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。
优选的，所述酰胺类衍生物包括6-(2-氧代-2H-苯并吡喃)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、4-羟基-3,5-二甲氧基苯基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-硝基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、(E)-3-(3,4-二羟基苯基)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基亚砜亚胺基)-1-苯基丁基-2-基]-丙烯酰胺、(E)-2-[(R)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基]-3-(3,4-二羟基苯基)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-硝基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-丙酰胺、(1-[(1R,3R,4R,5R)-1,3,4,5-四羟基环己基]-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基亚砜亚胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、N-((2R,3S)-3-((1S,3R,4R,5R)-3-(((E)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基)-1,4,5-三羟基环己基甲酰胺基)-2-羟基-4-苯基丁基-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸、N-((2R,3S)-2-羟基-3-(2-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酰胺基)-4-苯基丁基-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸、N-((2R,3S)-2-羟基-4-苯基-3-(((((2S,3R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)羰基)氨基)丁基)-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸或(2R,4R,5S)-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-氨基甲酸酯。
本发明还提供了所述酰胺类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
1)当式I所示结构的化合物中Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基时：
当X为-CH2-或不为任何取代基团，R为Ra、Rb、Rc、Rd或Rg时：
将具有式II-1所示结构的化合物与胺衍生物在催化剂作用下进行缩合反应，得到具有式I所示结构的化合物；
式II-1中，n＝0或1；
所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
或
所述Rd为
所述Rg为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、羰基、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基；
当X为-O-或-S-，R为Re或Rf时：
将所述具有式a所示结构的化合物或具有式b所示结构的化合物与乙酸酐进行乙酰化保护反应，得到中间产物I；
将所述中间产物I与苄胺进行脱保护反应，得到中间产物Ⅱ；
将所述中间产物Ⅱ与对硝基苯基氯甲酸酯进行取代反应，得到具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物；
将具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物与胺衍生物在胺类催化剂的作用下进行缩合反应，得到带有乙酰基保护的前体化合物；
将所述带有乙酰基保护的前体化合物脱除保护基，得到式Ⅰ所示结构的化合物；
其中，R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。R8'～R10'独立地为氢、乙酰氧基或乙酰氨基；
所述胺衍生物具有式III所示结构：
式III中，Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基；Y为
2)当式I所示结构的化合物中Rx为羟甲基、羟基或氨基时：
将具有式①、式②或式③结构的化合物在催化剂的作用下与硼氢化钠或氢气发生还原反应，得到式Ⅰ所示结构的化合物；
X为-CH2-、-O-、-S-、-NH-或不为任何取代基；
Y为
R为Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf或Rg，所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
所述Rd为
所述Re为
所述Rf为
所述Rg为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基；
R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。
优选的，所述具有式II-1所示结构的化合物与胺衍生物进行缩合反应所用的催化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和4-二甲氨基吡啶；
具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物与胺衍生物进行缩合反应所用的胺类催化剂为三乙胺；
脱除保护基所用的试剂为甲醇钠。
优选的，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III1所示结构：
所述具有式III1所示结构的胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯与式d所示结构的化合物进行亲核取代反应，得到式c所示结构的中间体；
将所述式c所示结构的中间体脱保护基Boc，得到具有式III1所示结构的胺衍生物；
优选的，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III2所示结构：
所述具有式III2所示结构的胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯与式d所示结构的化合物进行亲核取代反应，得到式c所示结构的中间体；
将所述式c所示结构的中间体与NaN3进行亚胺化反应，得到式e所示结构的中间体；
将所述式e所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III2所示结构的胺衍生物；
优选的，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III3所示结构：
所述具有式III3所示结构的胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将具有式f所示结构的4-取代苯基膦酰二氯、苯甲醇和所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯进行Arbuzov反应，得到式g所示结构的中间体；
将所述式g所示结构的中间体与H2进行还原反应，得到式h所示结构的中间体；
将所述式h所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III3所示结构的胺衍生物；
本发明还提供了所述酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在制备HIV抑制剂中的应用，所述HIV抑制剂以HIV蛋白酶和逆转录酶为靶点。
优选的，所述酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在HIV抑制剂中的剂量为0.01～100nM。
本发明提供了一种具有式Ⅰ所示结构的酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，该化合物或其药学上可接受的盐具有明显的抑制HIV蛋白酶和逆转录酶的活性；毒性研究显示其具有良好的成药性，表明该类化合物作为抗艾滋病药物具有良好的应用前景。根据实施例的实验数据可知，本发明的化合物对HIV-1蛋白酶和HIV-1逆转录酶均均有抑制活性，而且均具有较低的细胞毒性。本发明的核酸碱基化合物或其药学上可接受的盐有望成为同时抑制HIV蛋白酶和逆转录酶的双靶点抑制剂。
具体实施方式
本发明提供了一种酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，具有式Ⅰ所示结构：
式I中，Y为
1)当Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基，X为-CH2-或不为任何取代基时，R为Ra、Rb、Rc、Rd或Rg，所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
所述Rd为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基。
2)当Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基，X为-O-或-S时，R为Re或Rf，所述Re为
所述Rf为
其中，R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。
3)当Rx为羟甲基、羟基或氨基时，X为-CH2-、-O-、-S-、-NH-或不为任何取代基；
Y为
R为Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf或Rg，所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
所述Rd为
所述Re为
所述Rf为
所述Rg为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基；
R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。
在本发明中，若无特殊说明，所有原料均为本领域技术人员所熟知的市售产品。
在本发明中，所述酰胺类衍生物优选包括6-(2-氧代-2H-苯并吡喃)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、4-羟基-3,5-二甲氧基苯基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-硝基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、(E)-3-(3,4-二羟基苯基)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基亚砜亚胺基)-1-苯基丁基-2-基]-丙烯酰胺、(E)-2-[(R)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基]-3-(3,4-二羟基苯基)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-硝基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-丙酰胺、(1-[(1R,3R,4R,5R)-1,3,4,5-四羟基环己基]-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基亚砜亚胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、N-((2R,3S)-3-((1S,3R,4R,5R)-3-(((E)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基)-1,4,5-三羟基环己基甲酰胺基)-2-羟基-4-苯基丁基-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸、N-((2R,3S)-2-羟基-3-(2-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酰胺基)-4-苯基丁基-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸、N-((2R,3S)-2-羟基-4-苯基-3-(((((2S,3R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)羰基)氨基)丁基)-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸或(2R,4R,5S)-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-氨基甲酸酯。
本发明提供了所述酰胺类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
本发明还提供了所述酰胺类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
1)当式I所示结构的化合物中Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基时：
当X为-CH2-或不为任何取代基团，R为Ra、Rb、Rc、Rd或Rg时：
将具有式II-1所示结构的化合物与胺衍生物在催化剂作用下进行缩合反应，得到具有式I所示结构的化合物；
式II-1中，n＝0或1；
所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
所述Rd为
所述Rg为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、羰基、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基；
当X为-O-或-S-，R为Re或Rf时：
将所述具有式a所示结构的化合物或具有式b所示结构的化合物与乙酸酐进行乙酰化保护反应，得到中间产物I；
将所述中间产物I与苄胺进行脱保护反应，得到中间产物Ⅱ；
将所述中间产物Ⅱ与对硝基苯基氯甲酸酯进行取代反应，得到具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物；
将具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物与胺衍生物在胺类催化剂的作用下进行缩合反应，得到带有乙酰基保护的前体化合物；
将所述带有乙酰基保护的前体化合物脱除保护基，得到式Ⅰ所示结构的化合物；
其中，R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。R8'～R10'独立地为氢、乙酰氧基或乙酰氨基；
所述胺衍生物具有式III所示结构：
式III中，Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基；Y为
2)当式I所示结构的化合物中Rx为羟甲基、羟基或氨基时：
将具有式①、式②或式③结构的化合物在催化剂的作用下与硼氢化钠或氢气发生还原反应，得到式Ⅰ所示结构的化合物；
X为-CH2-、-O-、-S-、-NH-或不为任何取代基；
Y为
R为Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf或Rg，所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
所述Rd为
所述Re为
所述Rf为
所述Rg为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基；
R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。
在本发明中，当式I所示结构的化合物中Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基，X为-CH2-或不为任何取代基团，R为Ra、Rb、Rc或Rd时，所述酰胺类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将具有式II-1所示结构的化合物与胺衍生物在催化剂作用下进行缩合反应，得到具有式I所示结构的化合物；
式II-1中，n＝0或1；
所述Ra为
所述Rb为
所述Rc为
所述Rd为
所述Rg为
其中，M1为C或N，M2为O或S；L1为C或N，L2为O或S；R1～R7独立地为氢、羟基、羟甲基、氨基、卤素、羰基、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烯基、C1-C6烷氧基、C3-C6烷氧烯基、羟基或甲氧基取代的苯丙烯氧基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯基、羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙酰氧基或羟基或甲氧基单取代或双取代的苯丙烯酰氧基。
在本发明中，所述具有式II-1所示结构的化合物与胺衍生物进行缩合反应所用的催化剂优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBt)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)。在本发明中，所述缩合反应过程如下所示：
在本发明中，所述具有式II-1所示结构的化合物、胺衍生物、碳化二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和4-二甲氨基吡啶的摩尔比优选为1：(1.0～1.1)：(1.4～1.6)：(1.0～1.2)：(0.19～0.21)，更优选为1:1.05:1.5:1.1:0.2。在本发明中，所述碳化二亚胺盐酸盐优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐。在本发明中，所述缩合反应优选在有机溶剂存在的条件下进行；本发明对于所述有机溶剂的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的能够使缩合反应顺利进行的有机溶剂即可，具体如二甲基甲酰胺(DMF)。在本发明中，所述缩合反应优选包括以下步骤：
将具有式II-1所示结构的化合物、胺衍生物和DMF混合，在冰浴条件和氩气保护下向所得混合溶液中加入碳化二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑，在室温下进行第一缩合反应0.5～1.5h；然后在所得物料中加入4-二甲氨基吡啶，在室温下进行第二缩合反应1.5～2.5h。
完成所述缩合反应后，本发明优选将所得缩合物料进行后处理，得到具有式I所示结构的化合物。在本发明中，所述后处理优选包括以下步骤：
将所得缩合物料进行减压浓缩去除DMF，将残余物与水混合，采用乙酸乙酯对所得混合物进行萃取，将所得有机相用无水硫酸钠干燥，将干燥后的有机相进行浓缩得到粗品，将所述粗品经硅胶制备薄层层析进行分离纯化，洗脱剂为乙酸乙酯与甲醇的质量比为10:1的混合物，得到具有式I所示结构的化合物。
本发明对于所述具有式II-1所示结构的化合物的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员所熟知的市售产品或者是制备方法制备得到均可。
在本发明中，当式I所示结构的化合物中Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基，当X为-O-或-S-，R为Re或Rf时，所述酰胺类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将所述具有式a所示结构的化合物或具有式b所示结构的化合物与乙酸酐进行乙酰化保护反应，得到中间产物I；
将所述中间产物I与苄胺进行脱保护反应，得到中间产物Ⅱ；
将所述中间产物Ⅱ与对硝基苯基氯甲酸酯进行取代反应，得到具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物；
将具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物与胺衍生物在胺类催化剂的作用下进行缩合反应，得到带有乙酰基保护的前体化合物；
将所述带有乙酰基保护的前体化合物脱除保护基，得到式Ⅰ所示结构的化合物；
其中，R8～R10独立地为氢、羟基或氨基。R8'～R10'独立地为氢、乙酰氧基或乙酰氨基；
所述胺衍生物具有式III所示结构：
式III中，Rx为甲氧基、甲硫基、硝基或氨甲基；Y为
在本发明中，所述生成具有式I所示结构的化合物的反应过程如下所示：
具有式a所示结构的化合物的反应过程
具有式b所示结构的化合物的反应过程
在本发明中，所述具有式a所示结构的化合物或具有式b所示结构的化合物与乙酸酐的摩尔比优选为1：(18～22)，更优选为1：(19～21)，最优选为1:20。
在本发明中，所述乙酰化保护反应优选在催化剂的作用下进行；在本发明中，所述具有式a所示结构的化合物或具有式b所示结构的化合物与催化剂的摩尔比优选为(8～12)：1，更优选为(9～11)：1，最优选为10:1。在本发明中，所述催化剂优选为4-二甲氨基吡啶(DMAP)。
在本发明中，所述乙酰化保护反应优选包括以下步骤：
将具有式a所示结构的化合物或具有式b所示结构的化合物和乙酸酐混合，在冰浴条件下向所得混合物中加入DMAP，在室温条件下进行乙酰化保护反应10～14小时。
完成乙酰化保护反应后，本发明优选将乙酰化保护反应后得到的产物进行后处理，得到中间产物Ⅰ。在本发明中，所述后处理优选包括以下步骤：
将乙酰化保护反应后得到的产物采用水和乙酸乙酯进行萃取，将所得有机相用1NHCl和饱和碳酸氢钠洗涤、用无水硫酸钠干燥，蒸干，得到中间产物I。
得到中间产物I后，本发明将所述中间产物I与苄胺进行脱保护反应，得到中间产物II。在本发明中，所述中间产物I与苄胺的摩尔比优选为1：(1.3～1.7)，更优选为1：(1.4～1.6)，最优选为1:1.5。在本发明中，所述脱保护反应优选在有机溶剂中进行，所述有机溶剂优选为四氢呋喃(THF)；在本发明中，所述中间产物I的物质的量与有机溶剂的体积比优选为1mmol：(3.8～4.0)mL，更优选为1mmol：(3.85～3.95)mL，最优选为1mmol：3.9mL。
在本发明中，所述脱保护反应优选包括以下步骤：
将中间体I、有机溶剂和苄胺混合，在室温条件下进行脱保护反应15～17小时。
完成脱保护反应后，本发明优选将脱保护反应后得到的产物进行后处理，得到中间产物II。在本发明中，所述后处理优选包括以下步骤：
将脱保护反应后得到的产物利用减压的方法除去有机溶剂，将残余物与水混合后，采用乙酸乙酯(3×50mL)进行萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，采用硅胶柱层析进行分离纯化，得到中间产物II。
在本发明中，所述硅胶柱层析的洗脱剂优选为石油醚和乙酸乙酯的混合物；所述石油醚和乙酸乙酯的混合物中石油醚和乙酸乙酯的质量比优选为1：(10～15)。
得到中间产物II后，本发明将所述中间产物II与对硝基苯基氯甲酸酯进行取代反应，得到具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物。在本发明中，所述中间产物II与对硝基苯基氯甲酸酯的摩尔比优选为1：(1.4～1.6)，更优选为1：(1.45～1.55)，最优选为1:1.5。在本发明中，所述取代反应优选在有机溶剂中进行；所述有机溶剂优选为二氯甲烷。在本发明中，所述中间产物II的物质的量与有机溶剂的体积比优选为1mmol：(6.9～7.1)mL，更优选为1mmol：(6.95～7.05)mL，最优选为1mmol：7mL；在本发明中，所述取代反应优选在催化剂的作用下进行；所述催化剂优选为吡啶。在本发明中，所述中间产物II与催化剂的摩尔比优选为1：(1.9～2.1)，更优选为1：(1.95～2.05)，最优选为1:2。
在本发明中，所述取代反应优选包括以下步骤：
将中间产物II、有机溶剂、催化剂和对硝基苯基氯甲酸酯混合，在室温条件下进行取代反应1.9～2.1小时。
完成取代反应后，本发明优选将取代反应后得到的产物进行后处理，得到具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物。在本发明中，所述后处理优选包括以下步骤：
将取代反应后得到的产物减压蒸馏除去有机溶剂，将残余物与水混合后，采用乙酸乙酯(3×15mL)进行萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，采用硅胶柱层析进行分离纯化，得到具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物。
在本发明中，所述硅胶柱层析的洗脱剂优选为石油醚和乙酸乙酯的混合物；所述石油醚和乙酸乙酯的混合物中石油醚和乙酸乙酯的质量比优选为1：(8～10)。
得到具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物后，本发明将具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物与胺衍生物在胺类催化剂的作用下进行缩合反应，得到带有乙酰基保护的前体化合物。在本发明中，所述具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物与胺衍生物的摩尔比优选为1：(0.8～1.0)，更优选为1：(0.85～0.95)，最优选为1:0.9。在本发明中，所述缩合反应优选在有机溶剂中进行，所述有机溶剂优选为乙腈，在本发明中，所述具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物的物质的量与有机溶剂的体积比优选为1mmol：(18～19)mL，更优选为1mmol：(18.2～18.8)mL，最优选为1mmol：(18.4～18.6)mL；在本发明中，所述缩合反应优选在催化剂的作用下进行；所述催化剂优选为三乙胺(Et3N)。在本发明中，所述具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物与催化剂的摩尔比优选为1：(2.5～3.0)，更优选为1：(2.6～2.9)，最优选为1：(2.7～2.8)。
在本发明中，所述缩合反应优选包括以下步骤：
将具有式II-2-1或具有式II-2-2所示结构的化合物、胺衍生物、有机溶剂和催化剂混合，在室温条件下进行缩合反应0.5～1.5小时。
完成缩合反应后，本发明优选将缩合反应后得到的产物进行后处理，得到带有乙酰基保护的前体化合物。在本发明中，所述后处理优选包括以下步骤：
将缩合反应后得到的产物利用乙酸乙酯(3×10mL)进行萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，采用硅胶柱层析进行分离纯化，得到带有乙酰基保护的前体化合物。
在本发明中，所述硅胶柱层析的洗脱剂优选为石油醚和乙酸乙酯的混合物；所述石油醚和乙酸乙酯的混合物中石油醚和乙酸乙酯的质量比优选为1：(15～20)。
得到带有乙酰基保护的前体化合物后，本发明将所述带有乙酰基保护的前体化合物脱除保护基，得到式I所示结构的化合物。在本发明中，所述脱除保护基优选包括以下步骤：
将带有乙酰基保护的前体化合物溶于有机溶剂中，得到带有乙酰基保护的前体化合物溶液；
采用甲醇钠的甲醇溶液将所述带有乙酰基保护的前体化合物溶液的pH值调节为9.0～10.0，在室温条件下脱除保护基8～12小时。
在本发明中，所述有机溶剂优选为无水甲醇，所述带有乙酰基保护的前体化合物的物质的量与有机溶剂的体积比优选为1mmol：(6～7)mL，更优选为1mmol：(6.2～6.8)mL，最优选为1mmol：(6.4～6.6)mL。在本发明中，所述甲醇钠的甲醇溶液的质量浓度优选为9～11％，更优选为9.5～10.5％，最优选为9.8～10.2％。
完成脱除保护基后，本发明优选将所述脱除保护基后得到的产物进行后处理，得到具有式I所示结构的化合物。在本发明中，所述后处理优选包括以下步骤：
将脱除保护基后得到的产物用732型H型阳离子树脂调节pH值至7.0，过滤，浓缩滤液，采用硅胶柱层析进行分离纯化，得到具有式I所示结构的化合物。
在本发明中，所述硅胶柱层析的洗脱剂优选为乙酸乙酯和甲醇的混合物；所述石油醚和乙酸乙酯的混合物中乙酸乙酯和甲醇的质量比优选为10:1。
在本发明中，当式I所示结构的化合物中Rx为羟甲基、羟基或氨基时：
将式①、式②或式③在催化剂的作用下与氢气发生还原反应，得到式Ⅰ所示结构的化合物；
在本发明中，所述还原反应优选在有机溶剂中进行，所述有机溶剂优选为甲醇；在本发明中，所述式①～式③优选参考上述制备式Ⅰ所示结构化合物的不同情况的制备方法得到；在本发明中，所述缩合反应优选参考上述制备具有式Ⅰ所示结构的化合物的缩合反应，在此不再进行赘述；在本发明中，所述式①、式②或式③的物质的量与有机溶剂的体积比独立地优选为1mmol：(24～26)mL，更优选为1mmol：(24.5～25.5)mL，最优选为1mmol：(24.8～25.2)mL。在本发明中，所述还原反应优选在催化剂的作用下进行；所述催化剂优选为Pd/C。在本发明中，所述Pd/C中Pd与C的质量比优选为0.37:1。在本发明中，所述式①、式②或式③与催化剂的质量比独立地优选为1：(0.9～1.1)，更优选为1：(0.95～1.05)，最优选为1：(0.98～1.02)。
在本发明中，所述还原反应优选包括以下步骤：
将所述式①、式②或式③、催化剂和有机溶剂混合，在氢气气氛下，发生还原反应1.5～2.5小时。
在本发明中，所述氢气气氛中氢气的压力优选为45～55psi，更优选为48～52psi，最优选为50psi；在本发明中，所述还原反应优选在氢化反应瓶中进行；所述还原反应优选在室温条件下进行。
完成还原反应后，本发明优选将还原反应后得到的产物进行后处理，得到式I所示结构的化合物。在本发明中，所述后处理优选包括以下步骤：
将还原反应后得到的产物利用硅藻土Celite
过滤，甲醇洗涤滤饼，浓缩滤液，采用硅胶柱层析进行分离纯化，得到式I所示结构的化合物。
在本发明中，所述硅胶柱层析的洗脱剂优选为乙酸乙酯和甲醇的混合物；所述乙酸乙酯和甲醇的混合物中乙酸乙酯和甲醇的质量比优选为10:1。
在本发明中，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III1所示结构：
所述具有式III1所示结构的胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯与式d所示结构的化合物进行亲核取代反应，得到式c所示结构的中间体；
将所述式c所示结构的中间体脱保护基Boc，得到具有式III1所示结构的胺衍生物；
本发明优选将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯。在本发明中，所述3[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺的摩尔比优选为(73～78)：(187～192)，更优选为(75～76)：(189～190)，最优选为76：189。在本发明中，所述3[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]优选为市售产品，具体的可以来源于百灵威科技有限公司。在本发明中，所述亲核取代优选在有机溶剂存在的条件下进行，所述有机溶剂优选为乙腈。在本发明中，所述亲核取代反应的温度优选为75～85℃，更优选为80℃；反应的时间优选为4.5～5.5h，更优选为5h。完成所述亲核取代反应后，本发明优选将所得亲核取代物料依次进行冷却、浓缩和重结晶，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯。在本发明中，所述重结晶所采用的重结晶试剂优选为乙酸乙酯和正己烷；所述重结晶试剂中乙酸乙酯和正己烷的体积比优选为1：(8～10)，更优选为1:9。
得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯后，本发明优选将所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯与式d所示结构的R1取代苯磺酰氯进行亲核取代反应，得到式c所示结构的中间体。在本发明中，所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯与N,N-二异丙基乙胺、4-二甲氨基吡啶和R1取代苯磺酰氯的摩尔比优选为14～15:16～17:1～2:16～17，更优选为14.86mmol：16.34mmol：1.49mmol：16.34mmol。在本发明中，所述亲核取代反应优选在有机溶剂和催化剂存在的条件下进行，所述有机溶剂优选为四氢呋喃和THF，所述催化剂优选为N,N-二异丙基乙胺和4-二甲氨基吡啶。本发明优选先将(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯和四氢呋喃混合，然后在冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺、4-二甲氨基吡啶、R1取代苯磺酰氯和THF，进行亲核取代反应。在本发明中，所述亲核取代反应的温度优选为冰浴0℃，所述亲核取代反应的时间优选0.2～1h，更优选为0.5h。本发明优选通过TLC检测反应程度。待完成所述亲核取代反应后，本发明优选将所得亲核取代物料减压浓缩除去THF，然后采用乙酸乙酯萃取，将萃取所得有机相进行浓缩，将浓缩所得粗品经flash柱纯化，得到式c所示结构的中间体。在本发明中，所述flash柱纯化所采用的洗脱剂优选为乙酸乙酯和正己烷，所述洗脱剂中乙酸乙酯和正己烷的体积比优选为1:5。
得到式c所示结构的中间体后，本发明优选将所述式c所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III1所示结构的胺衍生物。在本发明中，所述脱保护基优选在有机溶剂和催化剂存在的条件下进行，所述有机溶剂优选为CH2Cl2，所述催化剂优选为三氟乙酸。在本发明中，所述式c所示结构的中间体的物质的量与CH2Cl2和三氟乙酸的体积比优选为8～10mmol：9～11mL：9～11mL，更优选为9.87mmol：10mL：10mL。在本发明中，所述脱保护基反应的温度优选为25～35℃，具体可以为室温；所述脱保护基反应的时间优选为2～4h，更优选为3h。完成所述脱保护基反应后，本发明优选先浓缩反应液，然后加入饱和碳酸氢钠溶液超声、搅拌，析出固体，抽滤，将抽滤所得产物进行柱层析分离，得到具有式III1所示结构的胺衍生物。在本发明中，所述柱层析分离所采用的洗脱剂优选为CH2Cl2和MeOH，所述洗脱剂中CH2Cl2和MeOH的体积比优选为10:1。
在本发明中，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III2所示结构：
所述具有式III2所示结构的胺衍生物的制备方法，优选包括以下步骤：
将3[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯与式d所示结构的R1取代苯磺酰氯进行亲核取代反应，得到式c所示结构的中间体；
将所述式c所示结构的中间体与叠氮钠进行亚胺化反应，得到式e所示结构的中间体；
将所述式e所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III2所示结构的胺衍生物；
在本发明中，所述式c所示结构的中间体的具体制备方法与上述方法相同，在此不再赘述。
得到式c所示结构的中间体后，本发明优选将所述式c所示结构的中间体与叠氮钠进行亚胺化反应，得到式e所示结构的中间体。在本发明中，所述式c所示结构的中间体与叠氮钠的摩尔比优选为6～7:6～7，更优选为6.30：6.90。在本发明中，所述亚胺化反应优选在有机溶剂和催化剂存在的条件下进行，所述有机溶剂优选为无水三氯甲烷，所述催化剂优选为浓硫酸。在所述亚胺化反应中，本发明优选先将式c所示结构的中间体与无水三氯甲烷混合，然后在氩气保护下加入叠氮钠，然后在冰浴0℃条件下滴加浓硫酸。本发明优选在5min内完成滴加浓硫酸的过程。在本发明中，所述亚胺化反应的温度优选为40～50℃，更优选为45℃；所述亚胺化反应的时间优选为10～12h。本发明优选采用TIC监测反应进程。待完成所述亚胺化反应后，本发明优选使用氯仿萃取所得反应物料，然后使用饱和食盐水洗涤有机相，经干燥后浓缩有机相，对浓缩产物经硅胶柱层析纯化，得到式e所示结构的中间体。在本发明中，所述硅胶柱层析纯化所采用的洗脱剂优选为乙酸乙酯和甲醇，所述洗脱剂中乙酸乙酯和甲醇的体积比优选为30:1。
得到式e所示结构的中间体后，本发明将所述式e所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III2所示结构的胺衍生物。本发明将式e所示结构的中间体进行脱保护基的具体方法与上述将式c所示结构的中间体脱保护基的方法相同，在此不再赘述。
在本发明中，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III3所示结构：
所述具有式III3所示结构的胺衍生物的制备方法，优选包括以下步骤：
将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将具有式f所示结构的4-取代苯基膦酰二氯、苯甲醇和所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯进行Arbuzov反应，得到式g所示结构的中间体；
将所述式g所示结构的中间体与H2进行还原反应，得到式h所示结构的中间体；
将所述式h所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III3所示结构的胺衍生物；
本发明将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯的具体方法与上述内容相同，在此不再赘述。
得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯后，本发明优选将具有式f所示结构的4-取代苯基膦酰二氯、苯甲醇和所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯进行Arbuzov反应，得到式g所示结构的中间体。在本发明中，所述具有式f所示结构的4-取代苯基膦酰二氯和(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯的物质的量与苯甲醇的体积比优选为4～5mol：3～4mL：3～4mol，更优选为4.16:3.78:3.78。在本发明中，所述Arbuzov反应优选在有机溶剂和催化剂存在的条件下进行；所述有机溶剂优选为苯，所述催化剂选为N,N-二异丙基乙胺(DIEA)和1-H-四氮唑。在本发明中，所述Arbuzov反应优选包括以下步骤：
将具有式f所示结构的4-取代苯基膦酰二氯、1-H-四氮唑溶于苯，在冰浴条件下向所得混合溶液中依次滴加苯甲醇、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)，进行第一冰浴反应25～35min；完成第一冰浴反应后，在室温下进行第一室温反应2～3h；完成第一室温反应后，在冰浴条件下向所得反应物料中依次加入(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯和DIEA，进行第二冰浴反应25～35min；完成第二冰浴反应后，在室温下进行第二室温反应3～4h。
完成所述Arbuzov反应后，本发明优选采用反相柱色谱对所得Arbuzov反应物料进行分离纯化，得到式g所示结构的中间体。在本发明中，所述反相柱色谱的流动相优选为乙醇和水的混合液，所述流动相中乙醇与水的体积比优选为5:1。
得到式g所示结构的中间体后，本发明优选将所述式g所示结构的中间体与H2进行还原反应，得到式h所示结构的中间体。在本发明中，所述还原反应优选在有机溶剂和催化剂存在的条件下进行，所述有机溶剂优选为四氢呋喃，所述催化剂优选为Pd/C。在所述还原反应中，本发明优选在氩气保护下将式g所示结构的中间体与四氢呋喃、Pd/C、K2CO3和水混合，然后使用氢气置换所述氩气，在室温下进行所述还原反应。在本发明中，所述Pd/C的湿度优选为35％～38％，更优选为36％～37％；在本发明中，所述还原反应的时间优选为3～5h，更优选为4h，所述还原反应的温度优选为25～35℃，具体的可以为室温。完成所述还原反应后，本发明优选使用微孔滤膜对还原反应所得反应液进行过滤，在冰浴条件下，使用盐酸将所得滤液的pH值调节至5.0，然后使用乙酸乙酯进行萃取，用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩有机相，得到式h所示结构的中间体。
得到式h所示结构的中间体后，本发明优选将所述式h所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III3所示结构的胺衍生物。本发明将式h所示结构的中间体进行脱保护基的具体方法与上述将式c所示结构的中间体脱保护基的方法相同，在此不再赘述。
本发明提供了上述技术方案所述酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在制备HIV抑制剂中的应用，所述HIV抑制剂以HIV蛋白酶和逆转录酶为靶点。
在本发明中，所述酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在HIV抑制剂中的剂量优选为0.01～100nM。
下面结合实施例对本发明提供的酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
1、N-((2R,3S)-2-羟基-3-氨基-4-苯基丁烷)-N-异丁基-4-甲氧基苯磺酰胺(中间体III1a)的合成：
1)、(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯(中间体2)的合成：
将(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯(原料1，75.94mmol)、乙腈80mL和异丁胺(189.46mmol)加入到200mL茄形瓶中，在80℃下搅拌反应5小时。反应完毕后反应液冷却至室温，减压浓缩除去溶剂。粗品用乙酸乙酯与正己烷的质量比为1:9的混合物重结晶后得白色产物，即中间体2(21.2g，83％)。中间体2的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 337.2。
2)、(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(N-异丁胺-4-甲氧基苯基磺酰胺)氨基甲酸叔丁酯(中间体3a)的合成
将中间体2(14.86mmol)、四氢呋喃(THF，40mL)加入250mL茄形瓶中，冰浴下缓慢加入N,N-二异丙基乙胺(DIEA，3.68mL，16.34mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP，1.49mmol)，随后加入4-甲氧基苯磺酰氯(16.34mmol)和THF(10mL)的混合溶液。冰浴下搅拌反应0.5小时后移至室温。TLC检测反应完毕后，减压浓缩除去THF，乙酸乙酯萃取(3×30mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品经flash柱纯化(所采用的洗脱剂为乙酸乙酯和正己烷的质量比为1:5的混合物)后得白色固体，即中间体3a(6.14g，82％)。中间体3a的LC-MS(ESI,M+H+)m/z507.0。
3)、N-((2R,3S)-2-羟基-3-氨基-4-苯基丁烷)-N-异丁基-4-甲氧基苯磺酰胺(III1a)的合成
将中间体3a(9.87mmol)加入100mL茄形瓶中，室温下加入CH2Cl2(10mL)和三氟乙酸(10mL)。加毕，室温反应3h。反应完毕后浓缩反应液，并加入200mL饱和碳酸氢钠溶液超声、搅拌，有固体析出，抽滤得粗品，柱层析(所采用的洗脱剂为CH2Cl2和MeOH的质量比为10:1的混合物)得白色固体，即中间体III1a(2.71g，68％)。中间体III1a的LC-MS(ESI,M+H+)m/z407.3。
2、6-(2-氧代-2H-苯并吡喃)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺(化合物1)的合成
将2-氧代-2H-苯并吡喃-6-羧酸(原料10，0.10mmol)和N-[(2R,3S)-2-羟基-3-氨基-4-苯基丁烷]-N-异丁基-4-甲氧基苯磺酰胺(中间体III1a，0.10mmol)溶于2mL无水DMF中，降温至0℃，在氩气保护下缓慢加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDCl，0.15mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBt，0.11mmol)，在0℃下继续搅拌10min，然后转移至室温反应1h，加入4-二甲氨基吡啶(DMAP，0.020mmol)，继续反应2h。减压蒸除溶剂，加入4mL水，用乙酸乙酯(3×4mL)萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，浓缩，采用硅胶柱层析进行分离纯化(所采用的洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的质量比为1:1-2:3的混合物)，得到淡黄色晶体粉末，即化合物1(0.050.g，87％)。
化合物1的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 579.5。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.97(s,1H),7.92(d,J＝9.6Hz,1H),7.84(d,J＝8.6Hz,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,2H),7.35(d,J＝8.6Hz,1H),7.28(d,J＝7.4Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,2H),7.12(t,J＝7.2Hz,1H),6.93(d,J＝8.0Hz,2H),6.47(d,J＝9.6Hz,1H),4.25(dd,J＝9.4,4.3Hz,1H),4.00–3.96(m,1H),3.80(s,3H),3.46(d,J＝15.0Hz,1H),3.10(dd,J＝13.3,8.5Hz,1H),3.00(d,J＝13.4Hz,1H),2.95–2.91(m,1H),2.83–2.77(m,2H),2.08–1.99(m,1H),0.92(d,J＝6.4Hz,3H),0.85(d,J＝6.4Hz,3H)；13C NMR(101MHz,CD3OD)δ168.4,164.9,164.5,161.9,157.1,145.1,140.2,132.3,131.8,130.6,130.3,129.3,128.8,127.3,120.0,118.1,117.7,115.3,74.7,59.1,56.2,56.1,54.4,36.6,28.0,20.5,20.4。
实施例2
1、N-((2R,3S)-2-羟基-3-氨基-4-苯基丁烷)-N-异丁基-4-硝基苯磺酰胺的制备(中间体III1b)的合成
中间体III1b的合成与实施例1中中间体III1a的合成类似，区别仅在于将4-甲氧基苯磺酰氯替换为4-硝基苯磺酰氯。
2、4-羟基-3,5-二甲氧基苯基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-硝基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺(中间体12)的合成
中间体12的合成与实施例1中化合物1的合成类似，区别仅在于将原料10替换为3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(原料11)，将中间体III1a替换为中间体III1b，反应得到白色粉末固体，即中间体12(0.16.g，52％)，中间体12的LC-MS(ESI，M+H+)m/z602.5。
3、4-羟基-3,5-二甲氧基苯基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-氨基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺(化合物2)的合成
向氢化反应瓶中加入中间体12(0.20mmol)、10％Pd/C(湿度37％，0.12g,wPd/wC＝0.37:1)和5mL甲醇，用氮气置换三次空气，再用氢气置换三次，在50psi压力下室温氢化反应2h。反应液用硅藻土Celite
过滤，少量甲醇洗涤。浓缩滤液，采用硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂为乙酸乙酯与甲醇的质量比为10:1的混合物)，得到淡黄色粉末固体，即化合物2(0.094g，82％)。
化合物2的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 572.4。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ7.39(d,J＝8.5Hz,2H),7.27(d,J＝7.0Hz,2H),7.21(t,J＝7.5Hz,2H),7.12(t,J＝7.0Hz,1H),6.99(s,2H),6.54(d,J＝8.5Hz,2H),4.23–4.19(m,1H),3.99(t,J＝7.0Hz,1H),3.83(s,6H),3.43(d,J＝14.0Hz,1H),3.30(d,J＝7.0Hz,1H),3.03(dd,J＝13.0,8.5Hz,1H),2.89–2.79(m,2H),2.74(dd,J＝13.5,6.0Hz,1H),2.03–1.98(m,1H),0.92(d,J＝6.5Hz,3H),0.84(d,J＝6.5Hz,3H)；13C NMR(126MHz,CD3OD)δ170.1,154.1,148.9,140.5,140.3,130.4,130.3,129.2,127.2,125.6,114.3,106.1,75.1,59.5,56.8,56.0,54.7,36.8,28.1,20.6,20.5。
实施例3
1、N-((2R,3S)-2-羟基-3-氨基-4-苯基丁烷)-N-异丁基-4-甲氧基苯亚砜亚胺的制备(中间体4a)的合成
将中间体3a(6.30mmol)加入50mL干燥的三口瓶中，加入8mL无水三氯甲烷，搅拌均匀，在氩气保护下缓慢加入叠氮钠(0.45g，6.90mmol)，将反应瓶置于冰浴中，在0℃下用滴液漏斗缓慢滴加入1.53mL浓硫酸，5min内滴加完毕。然后将反应瓶转移至4℃条件下搅拌反应过夜。TIC监测反应进程，用水淬灭反应，氯仿萃取(3×25mL)，合并有机相，用20mL饱和食盐水洗涤，干燥，有机相浓缩。粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯与甲醇的质量比为30:1的混合物)，得白色固体，即中间体4a(2.16..g，68％)。中间体4a的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 506.4。
2、N-((2R,3S)-2-羟基-3-氨基-4-苯基丁烷)-N-异丁基-4-甲氧基亚砜亚胺的制备(中间体III2a)的合成
中间体III2a的合成与实施例1的中间体III1a的合成类似，与中间体III1a的合成的区别仅在于将中间体3a替换为中间体4a，得到中间体III2a(.1.66..g，65％)。中间体III2a的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 406.3。
3、(E)-3-(3,4-二羟基苯基)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基亚砜亚胺基)-1-苯基丁基-2-基]-丙烯酰胺(化合物3)的合成
化合物3的合成与实施例1中化合物1的合成类似，与化合物1的合成的区别仅在于将原料10替换为(E)-3-(3,4-二羟基苯基)丙烯酸(原料13)，将中间体III1a替换为III2a，得到淡黄色油状物，即化合物3(0.049g，43％)。
化合物3的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 568.5。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ7.69(d,J＝8.5Hz,2H),7.28–7.21(m,5H),7.14(t,J＝7.0Hz,1H),7.01(s,1H),6.94–6.90(m,3H),6.77(d,J＝8.0Hz,1H),6.34(d,J＝15.0Hz,1H),4.10(dd,J＝12.5,5.0Hz,1H),3.91(t,J＝7.0Hz,1H),3.70(s,3H),3.33(d,J＝14.0Hz,1H),3.26(dd,J＝14.0,2.6Hz,1H),3.10(dd,J＝13.5,9.0Hz,1H),2.85(dd,J＝13.5,6.0Hz,1H),2.76(dd,J＝13.5,6.0Hz,1H),2.68(dd,J＝13.5,11.5Hz,1H),2.05–1.99(m,1H),0.94(d,J＝6.5Hz,3H),0.86(d,J＝6.5Hz,3H)；13C NMR(126MHz,CD3OD)δ168.4,164.3,148.4,146.3,142.0,139.6,130.9,130.2,129.8,128.8,127.7,126.7,121.6,117.7,116.0,114.8,114.6,74.4,59.0,55.5,55.0,54.0,36.4,27.5,20.0。
实施例4
(E)-2-[(R)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基]-3-(3,4-二羟基苯基)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-硝基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-丙酰胺(化合物4)的合成
化合物4的合成与实施例1中化合物1的合成类似，与化合物1的合成的区别仅在于将原料10替换为(R,E)-3-(3,4-二羟基苯基)-2-((3-(3,4-二羟基苯基))丙烯酰氧基)丙酸(原料14)，将中间体III1a替换为III1b，得到黄色粉末固体，即化合物4(0.073.g，收率48％)。
化合物4的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 764.7。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ8.36(d,J＝8.5Hz,2H),8.08(d,J＝8.5Hz,2H),7.46(d,J＝16.0Hz,1H),7.25–7.22(m,2H),7.20–7.14(m,3H),7.01(s,1H),6.90(d,J＝8.0Hz,1H),6.77(d,J＝8.0Hz,1H),6.64(d,J＝7.5Hz,2H),6.44(d,J＝8.0Hz,1H),6.20(d,J＝16.0Hz,1H),4.93(dd,J＝9.0,3.0Hz,1H),4.06–4.00(m,1H),3.79(t,J＝7.5Hz,1H),3.49(d,J＝14.5Hz,1H),3.22–3.12(m,3H),3.01(dd,J＝13.5,6.5Hz,1H),2.65–2.55(m,2H),2.44–2.41(m,1H),2.07–2.02(m,1H),0.91(d,J＝6.5Hz,3H),0.85(d,J＝6.5Hz,3H)；13C NMR(151MHz,CD3OD)δ172.8,168.1,151.3,149.7,147.7,146.9,146.8,146.1,145.2,139.7,130.4,129.9,129.4,127.6,127.4,125.4,123.2,121.6,117.5,116.5,116.3,115.2,114.3,76.1,73.6,58.2,55.3,53.5,38.3,37.3,27.7,20.4。
实施例5
(1-[(1R,3R,4R,5R)-1,3,4,5-四羟基环己基]-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基亚砜亚胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺(化合物5)的合成
化合物5的合成与实施例1中化合物1的合成类似，与化合物1的合成的区别仅在于将原料10替换为(1R,3R,4R,5R)-1,3,4,5-四羟基环己甲酸(原料15)，将中间体III1a替换为III2a，得到淡黄色粉末固体，即化合物5(0.029g，25％)。
化合物5的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 580.4。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ7.75(d,J＝8.5Hz,2H),7.25–7.21(m,4H),7.16(t,J＝6.5Hz,1H),7.08(d,J＝8.5Hz,2H),4.10(s,1H),3.97(d,J＝6.5Hz,1H),3.94–3.89(m,1H),3.87(s,3H),3.78(t,J＝6.0Hz,1H),3.36(d,J＝13.5Hz,1H),3.31(brs,1H),3.17–3.14(m,1H),3.10–3.05(m,1H),2.92(dd,J＝15.0,8.5Hz,1H),2.86(dd,J＝13.5,7.0Hz,1H),2.69(dd,J＝13.0,11.5Hz,1H),2.04–1.97(m,1H),1.88(d,J＝13.5Hz,1H),1.79(d,J＝14.5Hz,1H),1.63(d,J＝10.5Hz,1H),1.60–1.55(m,1H),0.92(d,J＝6.5Hz,3H),0.87(d,J＝6.5Hz,3H)；13C NMR(126MHz,CD3OD)δ176.6,164.5,139.6,132.0,130.6,129.2,127.3,115.4,77.8,77.0,73.7,72.3,68.0,58.8,56.2,54.8,53.9,42.5,38.6,36.6,28.0,20.5,20.4。
实施例6
1、N-((2R,3S)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁基)-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸(中间体III3a)的合成
1)叔丁基((2S，3R)-4-(((苄氧基)-(4-甲氧基苯基)磷酰基)-(异丁基)氨基)3-羟基-1-苯基丁基-2-基)氨基甲酸酯(中间体6a)的合成
将4-甲氧基苯基膦酰二氯(原料5a，4.16mmol)、1-H-四氮唑(0.038mmol)溶于8mL干燥的苯中，将反应瓶置于冰浴中，在氩气保护下依次缓慢滴加入苯甲醇(BnOH)(3.78mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(4.16mmol)。加毕，在冰浴中搅拌反应30min，然后转移至室温下继续反应2.5小时。将反应瓶置于冰浴中，依次缓慢加入中间体2(3.78mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(4.16mmol)，冰浴中搅拌反应30min，后转移至室温下继续反应3.5小时。过滤，滤液浓缩后采用反相柱色谱进行分离纯化(所采用的洗脱剂为MeOH与H2O的质量比为5：1的混合物)，得白色粉末，即中间体6a(0.95g，42.3％)。中间体6a的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 597.7。
2)、N-((2R,3S)-3-((二碳酸二叔丁酯)氨基)-2-羟基-4-苯基丁基)-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸(中间体7a)的合成
将中间体6a(0.17mmol)、1mL四氢呋喃、10％Pd/C(湿度37％，0.10g,wPd/wC＝0.37:1)、K2CO3(0.27mmol)及1mL水加入到氢化反应瓶中，在氩气保护下剧烈搅拌均匀，然后用氢气置换3次，在40psi压力下室温催化反应4小时。反应液用微孔滤膜过滤，滤液置于冰浴中，用2M HCl调节pH至5.0，搅拌30min，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到白色粉末固体即中间体7a(0.072g，83.9％)。中间体7a的LC-MS(ESI,M+H+)m/z507.7。
3)、N-((2R,3S)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁基)-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸(中间体III3a)的合成
中间体III3a的合成与实施例1的中间体III1a的合成类似，与中间体III1a的合成的区别仅在于将中间体3a替换为中间体7a，得到中间体III3a(2.20g，收率54.3％)。中间体III3a的LC-MS(ESI,M+H+)m/z406.7。
2、N-((2R,3S)-3-((1S,3R,4R,5R)-3-(((E)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基)-1,4,5-三羟基环己基甲酰胺基)-2-羟基-4-苯基丁基-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸(化合物6)的合成
化合物6的合成与实施例1中化合物1的合成类似，与化合物1的合成的区别仅在于将原料10替换为(1S,3R,4R,5R)-3-(((E)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基)-1,4,5-三羟基环己基甲酸(原料16)，将中间体III1a替换为的III3a，得到黄色粉末固体，即化合物6(0.095g，收率64％)。
化合物6的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 743.4。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ7.76(d,J＝8.0Hz,2H),7.59(d,J＝16.0Hz,1H),7.23–7.19(m,4H)，7.08–7.07(m,4H),6.97(d,J＝7.5Hz,1H),6.79(d,J＝7.5Hz,1H),6.29(d,J＝16.0Hz,1H),4.19(s,1H),3.99(m,1H),3.87(s,3H),3.79(t,J＝16.0Hz,2H),3.61(d,J＝10.0Hz,1H),3.36(d,J＝14.5Hz,1H),3.16(d,J＝13.5Hz,1H),3.07(dd,J＝13.0,8.5Hz,1H),2.94–2.84(m,2H),2.70–2.65(m,1H),2.02–1.95(m,2H),1.84(d,J＝15.0Hz,1H),1.67(d,J＝12.5Hz,1H),1.55(t,J＝12.5Hz,1H),0.92(d,J＝6.0Hz,3H),0.87(d,J＝6.0Hz,3H)；13C NMR(151MHz,CD3OD)δ176.1,168.9,164.5,149.6,147.0,146.8,139.6,132.0,130.7,130.6,129.2,127.8,127.2,123.0,116.5,115.4,115.2,77.6,74.3,73.8,72.6,71.8,58.8,56.2,54.9,53.91,40.1,38.3,36.7,28.0,20.5,20.4。
实施例7
1、2-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酸(中间体20)的合成
1)2-(2-氧代嘧啶-1(2H)-基)乙酸苄酯(中间体18)的合成
将嘧啶-2(1H)-酮(原料17，10mmol)加入到50mL茄形瓶中，加入10mL无水DMF，置于冰浴中，缓慢分批加入氢化钠(11mmol)，加毕转移至室温进行反应1小时，缓慢滴加溴乙酸苄酯(11mmol)，继续反应1小时。终止反应，加入10mL水，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色油状粗品。粗品经flash柱纯化(所采用的洗脱剂为乙酸乙酯与正己烷的质量比为1:2的混合物)，得无色针状结晶，即中间体18(2.03g，83％)。中间体18的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 245.4。
2)2-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酸苄酯(中间体19)的合成
中间体19的合成与实施例2中化合物2的合成类似，与化合物2的合成的区别仅在于将中间体12替换为中间体18，反应得到白色粉末固体，即中间体19(1.75g，收率88％)。中间体19的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 249.5。
3)2-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酸(中间体20)的合成
将NaOH(16.2mmol)溶于5mL水中，加入到含有中间体19(5.4mmol)的100mL茄形瓶中，室温搅拌反应1小时，将茄形瓶置于冰浴中，在搅拌状态下用4M HCl调节pH至4.0，冰浴下搅拌30min，析出大量固体，静置，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得白色粉末固体，即中间体20(0.57g，68％)。中间体20的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 157.4。
2、N-((2R,3S)-2-羟基-3-(2-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酰胺基)-4-苯基丁基-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸(化合物7)的合成
化合物7的合成与实施例1中化合物1的合成类似，与化合物1的合成的区别仅在于将原料10替换为中间体20，将中间体III1a替换为III3a，得到白色粉末固体，即化合物7(0.076g，收率70％)。
化合物7的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 546.7。1HNMR(600MHz,CD3OD)δ7.48(d,J＝8.7Hz,2H),7.26–7.23(m,4H),7.17-7.14(m,1H),6.70(d,J＝8.7Hz,2H),4.12(ddd,J＝8.6,6.3,3.1Hz,1H),3.85–3.81(m,2H),3.78(d,J＝16.4Hz,1H),3.36(dd,J＝14.9,3.8Hz,1H),3.21(t,J＝5.8Hz,2H),3.16(dd,J＝14.0,3.9Hz,1H),3.00–2.97(m,1H),2.94–2.84(m,3H),2.78(dd,J＝13.5,6.8Hz,1H),2.67(dd,J＝14.0,10.9Hz,1H),2.00–1.96(m,1H),1.80(dq,J＝11.1,5.6Hz,2H),0.92(d,J＝6.6Hz,3H),0.86(d,J＝6.6Hz,3H)；13C NMR(151MHz,CD3OD)δ171.5,158.7,154.4,140.1,130.6,130.5,129.9,129.4,127.3,114.5,73.9,59.4,55.2,54.3,51.5,47.4,41.1,36.4,28.2,22.8,20.7,20.6。
实施例8
1、((2R,3R,5R,6S)-2-乙酰氧甲基-6-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三取代三乙酸酯(中间体24)的合成
1)(3R,5R,6R)-6-(乙酰氧甲基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四取代四乙酸酯(中间体22)的合成
将D-葡萄糖(原料21，55.5mmol)加入茄形瓶中，冰浴下缓慢滴加乙酸酐(Ac2O，1110mmol)，加毕后加入四-二甲氨基吡啶(DMAP，5.55mmol)，缓慢升至室温反应。TLC跟踪反应进程，12h后反应完毕，加入水和乙酸乙酯萃取，萃取后有机相用1mol/L HCl和饱和NaHCO3洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，得白色粉末固体，即中间体22(16.88g，78％)。中间体22的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 391.4。
2)(2R,3R,5R)-2-乙酰氧甲基-6-羟基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三取代三乙酸酯(中间体23)的合成
将中间体22(25.6mmol)加入到盛有100mL THF的茄形瓶中，缓慢加入苄胺(BnNH2，4.2mL，38.4mmol)，室温反应。TLC跟踪反应进程，16h后反应完毕，反应完毕后减压除去THF，加入50mL水，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，浓缩，采用硅胶柱层析进行分离纯化(洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的质量比为1:10-1:15的混合物)，得到白色粉末固体，即中间体23(6.77g，76％)。中间体23的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 349.4。
3)((2R,3R,5R,6S)-2-乙酰氧甲基-6-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三取代三乙酸酯(中间体24)的合成
将中间体23(2.87mmol)加入到茄形瓶中，加入20mL CH2Cl2、吡啶(0.45mL，5.74mmol)和氯甲酸对硝基苯酯(原料9，0.87g，4.31mmol)，室温反应。TLC跟踪反应进程，2h后反应完毕，减压蒸除溶剂，加入15mL水，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，浓缩，采用硅胶柱层析进行分离纯化(洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的质量比为1:8～1:10的混合物)，得到白色粉末固体，即中间体24(0.40g，27％)。中间体24的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 514.4。
2、N-((2R,3S)-2-羟基-4-苯基-3-(((((2S,3R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)羰基)氨基)丁基)-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸(中间体25)的合成
将中间体24(0.54mmol)和中间体III3a(0.49mmol)加入25mL茄形瓶中，加入乙腈10mL、Et3N(0.2mL，1.48mmol)，室温反应。TLC跟踪反应进程，1h后反应完全，减压蒸除溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，浓缩，采用硅胶柱层析进行分离纯化(洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的质量比为1:15-1:20的混合物)，得到白色粉末固体，即中间体25(0.30g，79％)。中间体25的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 781.4。
3、N-((2R,3S)-2-羟基-4-苯基-3-(((((2S,3R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)羰基)氨基)丁基)-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸(化合物8)的合成
将中间体25(0.30mmol)溶于2mL无水甲醇中，在搅拌状态下用质量浓度为10％的甲醇钠的甲醇溶液调节pH至9.0，室温反应过夜。用732型H型阳离子树脂调节反应液的pH至7.0，过滤，浓缩滤液，浓缩，采用硅胶柱层析进行分离纯化(洗脱剂为乙酸乙酯与甲醇的质量比为10:1的混合物)，得到白色粉末固体，即化合物8(0.15g，82％)。
化合物8的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 613.5。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝9.0Hz,2H),7.31–7.21(m,5H),7.00(d,J＝9.0Hz,2H),6.05(d,J＝8.5Hz,1H),4.31(dd,J＝12.0,4.0Hz,1H),4.09–4.06(m,1H),4.00–3.92(m,2H),3.87(s,3H),3.79(d,J＝10.0Hz,1H),3.49–3.40(m,2H),3.38–3.35(m,1H),3.10(dd,J＝15.0,9.0Hz,1H),3.01–2.90(m,4H),2.78(dd,J＝13.0,7.0Hz,1H),1.85–1.78(m,1H),0.91(d,J＝6.5Hz,3H),0.87(d,J＝6.5Hz,3H)；13C NMR(126MHz,CDCl3)δ163.1,153.7,137.3,129.7,129.5,129.4,128.6,126.7,114.4,92.9,81.4,75.5,72.8,67.7,61.2,58.8,55.7,55.4,53.5,34.9,27.3,20.2,19.9。
实施例9
1、((2S,3R,5R)-3-乙酰氧基-5-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)四氢呋喃-2-基)乙酸甲酯(中间体29)的合成
1)(4R,5S)-5-(乙酰氧甲基)四氢呋喃-2,4-二取代二乙酸酯(中间体27)的合成
中间体27的合成与实施例8中中间体22的合成类似，与中间体22的合成的区别仅在于将原料21替换为(4R,5S)-5-(羟甲基)四氢呋喃-2,4-二醇(原料26)，得到白色粉末固体，即中间体27(9.36g，收率72％)。中间体27的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 261.4。
2)((2S,3R)-3-乙酰氧基-5-羟基四氢呋喃-2-基)乙酸甲酯(中间体28)的合成
中间体28的合成与实施例8中中间体23的合成类似，与中间体23的合成的区别仅在于将中间体22替换为中间体27，得到白色粉末固体，即中间体28(5.10g，收率78％)。
3)((2S,3R,5R)-3-乙酰氧基-5-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)四氢呋喃-2-基)乙酸甲酯(中间体29)的合成
中间体29的合成与实施例8中中间体24的合成，与中间体24的合成的区别仅在于将中间体23替换为中间体28，得到白色粉末固体，即中间体29(1.23g，收率32％)。中间体29的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 384.4。
2、(2R,4R,5S)-4-乙酰氧基-5-(乙酰氧甲基)四氢呋喃-2-基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-氨基甲酸酯(中间体30)的合成
中间体30的合成与实施例8中中间体25的合成类似，与中间体25的合成的区别仅在于将中间体24替换为中间体29，将中间体III3a替换为III1a，得到白色粉末固体，即中间体30(1.04g，收率80％)。中间体30的LC-MS(ESI,M+H+)m/z 651.5。
3、(2R,4R,5S)-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-氨基甲酸酯(化合物9)的合成
化合物9的合成与实施例8中化合物8的合成类似，与化合物8的合成的区别仅在于将中间体25替换为中间体30，得到白色粉末固体，即化合物9(0.48g，收率85％)。
化合物9的分析结果如下：LC-MS(ESI,M+H+)m/z 567.4。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.30–7.19(m,5H),7.08(d,J＝8.5Hz,2H),6.22(d,J＝8.5Hz,1H),4.40(dd,J＝12.0,4.0Hz,1H),4.07–4.03(m,1H),4.00–3.97(m,1H),3.85(s,3H),3.81(d,J＝12.0Hz,1H),3.58–3.49(m,3H),3.40–3.37(m,1H),3.21–3.18(m,1H),3.01–2.90(m,2H),2.68–2.59(m,2H),2.21(dd,J＝13.0,7.0Hz,1H),1.92–1.87(m,1H),0.91(d,J＝6.5Hz,3H),0.87(d,J＝6.5Hz,3H)；13CNMR(126MHz,CDCl3)δ163.5,158.7,138.2,130.6,130.0,129.6,128.2,127.0,114.5,94.1,88.3,73.2,72.0,63.3,58.2,55.6,55.0,53.5,40.2,27.6,20.2,19.9。
实施例10
将实施例1～9制备的化合物1～9均用DMSO溶解，并用双蒸水进行梯度稀释得到不同浓度的溶液作为样品，按照下述方法测定上述化合物对HIV-1蛋白酶抑制活性和细胞毒性。
按照文献(董飚，章天，陶佩珍.高通量荧光底物HIV-1蛋白酶模型的建立[J].中国艾滋病性病,2006(05):402-405.)的方法对化合物1～9进行HIV-1蛋白酶抑制活性的测试：
底物为(Arg-Glu(EDANS)-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-Lys(DABCYL)-Arg)(AnaSpec)，底物切点两侧分别标记Edans和Dabcyl发色团。Edans的荧光发色光谱与Dabcyl的吸收光谱重叠，在足够近的距离内通过荧光共振能量转移产生荧光淬灭，使完整的底物几乎没有荧光。当荧光底物经HIV蛋白酶切后，Edans发色团远离了Dabcyl基团，荧光淬灭条件消失，这时Edans就在340nm的激发光下于490nm处产生荧光，加入实施例1～9制备的化合物后，化合物对酶抑制活性强时则底物产物减少，荧光强度降低，反之荧光强度增加。
按照文献(董飚，章天，陶佩珍.高通量荧光底物HIV-1蛋白酶模型的建立[J].中国艾滋病性病,2006(05):402-405)的方法用96孔板对样品进行HIV-1PR抑制活性的测定，每孔加入底物(5μM)和缓冲液185μL，加入5μL样品溶液，测定空白吸收，加入10μL HIV-1PR，孵育5min后测定490nm波长的吸光度，计算出各个浓度下样品的抑制率，用Graphpad软件计算得到IC50值，以DRV(Darunavir)(购自美国ARP(American ResearchProduct)公司)为阳性对照。
其中，HIV-1PR按照(王云华等.HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立.中国病毒学第21卷2期.2006年3月)中的方法在大肠杆菌中表达并纯化，HIV-1PR使用PD-10柱脱盐。
以HIV-1蛋白酶抑制剂DRV(Darunavir)为阳性对照，按照上述方法测定实施例1～9所制备的化合物1～9对蛋白酶(PR)抑制活性及细胞毒性。结果表明化合物1～9对HIV-1蛋白酶的抑制活性优于阳性对照药物HIV-1蛋白酶抑制剂DRV；化合物2对HIV-1蛋白酶的抑制活性是阳性对照药物DRV对HIV-1蛋白酶的抑制活性的28倍；化合物5对HIV-1蛋白酶的抑制活性是阳性对照药物DRV对HIV-1蛋白酶的抑制活性的80倍；化合物6对HIV-1蛋白酶的抑制活性是阳性对照药物DRV对HIV-1蛋白酶的抑制活性的329倍；化合物8对HIV-1蛋白酶的抑制活性是阳性对照药物DRV对HIV-1蛋白酶的抑制活性的47倍；化合物9对HIV-1蛋白酶的抑制活性是阳性对照药物DRV对HIV-1蛋白酶的抑制活性的140倍(见表1)。
表1化合物1～9对HIV-1蛋白酶的抑制活性
细胞毒性的测试方法：
化合物细胞毒性采用试剂盒Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)测定。用96孔板对样品进行细胞毒性测试，每孔加入293T细胞2万个，孵育24h后加入1μL样品，继续孵育24h，加入10μL CCK-8，2h后与450nm下测定吸光度，计算出各个浓度存活细胞的百分率，用Graphpad软件计算得到CC50值，以DMSO为空白对照，以DRV(Darunavir)为阳性对照。
表2化合物1～9的细胞毒性
| 化合物 | CC<sub>50</sub>(μM) | 化合物 | CC<sub>50</sub>(μM) |
| 化合物1 | 288.2 | 化合物6 | 332.1 |
| 化合物2 | 273.1 | 化合物7 | 292.0 |
| 化合物3 | 303.4 | 化合物8 | 283.7 |
| 化合物4 | 251.9 | 化合物9 | 212.6 |
| 化合物5 | 277.2 | DRV | 244.7 |
结果表明，上述9个化合物均具有较低的细胞毒性。
实施例11
将实施例1～9制备的化合物1～9均用DMSO溶解，并用双蒸水进行梯度稀释得到不同浓度的溶液作为样品，按照下述方法测定上述化合物在细胞水平上对HIV-1蛋白酶抑制率。
以293T细胞为病毒宿主，测定样品抑制假型病毒携带报告基于荧光素酶活性。采用pNL-Luc-E-病毒株和表达水泡性口膜炎病毒的外壳糖蛋白pHCMV-G(VSV-G)共转染293T产生VSV-G-HIV。
按照文献(王萍，陈欢，罗荣华，等.VSVG/HIV-1NL4-3Luc假病毒筛选抗HIV-1药物的条件优化及应用[J].中国药理学通报，2016,32(3)：433-438)的方法对化合物1～9进行HIV-1蛋白酶抑制率的测试：
质粒pNL-Luc-E-和表达水泡性口膜炎病毒的外壳糖蛋白pHCMV-G(VSV-G)质粒共转染293T细胞制备VSV-G-HIV假病毒，转染5h后加入一定浓度蛋白酶抑制剂样品，置5％CO2，37℃培养48小时。之后每孔取上清10μL接种感染293T细胞96孔培养板，培养48小时后，测定感染细胞中荧光素酶活性，计算各样品的抑制率。
以HIV-1蛋白酶抑制剂DRV(Darunavir)为阳性对照，按照上述方法在10nM浓度下测定了上述化合物1～9对HIV蛋白酶(PR)的抑制率。结果表明，化合物2、化合物5、化合物6、化合物8和化合物9对HIV-1蛋白酶的抑制率高于阳性对照DRV；化合物1和化合物7对HIV-1蛋白酶的抑制率与阳性对照DRV相当；化合物3和化合物4对HIV-1蛋白酶的抑制率略弱于阳性对照DRV。如表3所示。
表3.化合物1～9对HIV-1蛋白酶的抑制率
| 化合物 | 抑制率(％) | 化合物 | 抑制率(％) |
| 化合物1 | 87.77 | 化合物6 | 98.17 |
| 化合物2 | 94.58 | 化合物7 | 88.34 |
| 化合物3 | 79.32 | 化合物8 | 94.29 |
| 化合物4 | 77.21 | 化合物9 | 95.97 |
| 化合物5 | 99.92 | DRV | 88.76 |
实施例12
将化合物1～9均用DMSO溶解，并用双蒸水进行梯度稀释得到不同浓度的溶液作为样品，按照下述方法测定上述化合物在细胞水平上对HIV-1逆转录酶抑制率。
HIV-1逆转录酶抑制活性的测试方法如下：
引物为5＇-CAG CAG TAC AAA TGG CAG TATTC-3＇，在T19位置用Cyanine 5(Cy5)标记，以3＇-TGT CGT CAT GTT TAC CGT CAT AAG TAG GTG TTA CTA GTC CGA TTT CCC CTAGTC CGA CCC ATG-5＇为模板，在T2位置用carboxytetramethylrhodamine(TMR)标记，TMR激发波长为540nm，发射波长为580nm，以FRET为供体。用96孔板对样品进行HIV-1RT抑制活性的测定，100nM HIV-1RT与100nM双标引物/模板复合物混合，聚合反应动力学由加入100μMdNTPs启动。加入HIV-1RT和双标引物/模板，孵育5min后测定580nm波长的吸光度，计算出各个浓度下样品的抑制率，用Graphpad软件计算得到IC50值，以EFV(Efavirenz)为阳性对照。若无特殊说明，所有测试是在20℃下缓冲液中进行。缓冲液用4M盐酸(pH7.5)、10mM KCl和6mM MgCl配制。
以HIV-1逆转录酶抑制剂EFV(Efavirenz)为阳性对照，在10nM浓度下测定了上述化合物1～9对HIV逆转录酶(RT)的抑制率。结果表明，上述9个化合物对HIV-1逆转录酶均具有较高的抑制率，其中化合物9对HIV-1逆转录酶的抑制率略高于阳性对照EFV；化合物1、化合物2、化合物4、化合物5、化合物6和化合物8对HIV-1逆转录酶的抑制率与阳性对照EFV相当；化合物3和化合物7对HIV-1逆转录酶的抑制率略弱于阳性对照EFV。如表4所示。
表4化合物1～9对HIV-1逆转录酶的抑制率
由以上实施例可知，本发明提供了一种具有式Ⅰ所示结构的酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，该化合物或其药学上可接受的盐具有明显的抑制HIV蛋白酶和逆转录酶的活性；毒性研究显示其具有良好的成药性，表明该类化合物作为抗艾滋病药物具有良好的应用前景。根据实施例的实验数据可知，本发明的化合物对HIV-1蛋白酶和HIV-1逆转录酶均均有抑制活性(表1)，而且均具有较低的细胞毒性(表2)。本发明的核酸碱基化合物或其药学上可接受的盐有望成为同时抑制HIV蛋白酶和逆转录酶的双靶点抑制剂。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，具有式Ⅰ所示结构：
其中，所述具有式Ⅰ所示结构的化合物为6-(2-氧代-2H-苯并吡喃)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、4-羟基-3,5-二甲氧基苯基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-硝基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、(E)-2-[(R)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基]-3-(3,4-二羟基苯基)-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-硝基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-丙酰胺、(1-[(1R,3R,4R,5R)-1,3,4,5-四羟基环己基]-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基亚砜亚胺基)-1-苯基丁基-2-基]-甲酰胺、N-((2R,3S)-3-((1S,3R,4R,5R)-3-(((E)-3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酰氧基)-1,4,5-三羟基环己基甲酰胺基)-2-羟基-4-苯基丁基-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸、N-((2R,3S)-2-羟基-3-(2-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酰胺基)-4-苯基丁基-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸、N-((2R,3S)-2-羟基-4-苯基-3-(((((2S,3R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)羰基)氨基)丁基)-N-异丁基-P-(4-甲氧基苯基)磷酰胺酸或(2R,4R,5S)-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基-N-[(2S,3R)-3-羟基-4-(N-异丁基-4-甲氧基苯基磺酰胺基)-1-苯基丁基-2-基]-氨基甲酸酯。
2.权利要求1所述的酰胺类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
1)当式I所示结构的化合物中Rx为甲氧基或硝基时：
当X为-CH2-或不为任何取代基团时：
将具有式II-1所示结构的化合物与胺衍生物在催化剂作用下进行缩合反应，得到具有式I所示结构的化合物；
式II-1中，n＝0或1；
所述胺衍生物具有式III所示结构：
式III中，Rx为甲氧基或硝基；Y为
2)当式I所示结构的化合物中Rx为氨基时：
将具有式①、式②或式③结构的化合物在催化剂的作用下与硼氢化钠或氢气发生还原反应，得到式Ⅰ所示结构的化合物；
X不为任何取代基。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述具有式II-1所示结构的化合物与胺衍生物进行缩合反应所用的催化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和4-二甲氨基吡啶。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III1所示结构：
所述具有式III1所示结构的胺衍生物采用以下方法进行制备，具体步骤包括：
将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯与式d所示结构的化合物进行亲核取代反应，得到式c所示结构的中间体；
将所述式c所示结构的中间体脱保护基Boc，得到具有式III1所示结构的胺衍生物；
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III2所示结构：
所述具有式III2所示结构的胺衍生物采用以下方法进行制备，具体步骤包括：
将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯与式d所示结构的化合物进行亲核取代反应，得到式c所示结构的中间体；
将所述式c所示结构的中间体与NaN3进行亚胺化反应，得到式e所示结构的中间体；
将所述式e所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III2所示结构的胺衍生物；
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，当所述胺衍生物中Y为
时，所述胺衍生物具有式III3所示结构：
所述具有式III3所示结构的胺衍生物采用以下方法进行制备，具体步骤包括：
将[(S)-1-((S)-环氧乙烷-2-基)-2-苯乙氨基甲酸叔丁酯]与异丁胺进行亲核取代反应，得到(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯；
将具有式f所示结构的4-取代苯基膦酰二氯、苯甲醇和所述(1S,2R)-1-苄基-2-羟基-3-(异丁胺)氨基甲酸叔丁酯进行Arbuzov反应，得到式g所示结构的中间体；
将所述式g所示结构的中间体与H2进行还原反应，得到式h所示结构的中间体；
将所述式h所示结构的中间体脱保护基，得到具有式III3所示结构的胺衍生物；
7.权利要求1所述酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在制备HIV抑制剂中的应用，所述HIV抑制剂以HIV蛋白酶和逆转录酶为靶点。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在HIV抑制剂中的剂量为0.01～100nM。
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