CN108548744A - 一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法。本发明具有如下特点和优势：检测湿巾中异噻唑啉酮含量在模拟使用前后的变化，计算湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂的模拟使用转移率，反映了异噻唑啉酮在湿巾使用过程中随液体转移的情况，即异噻唑啉酮可能在皮肤上驻留的程度；制备了同时含有5种异噻唑啉酮的加标湿巾样品，对高、中、低三个加标水平的样品进行检测分析和总结归纳；将本发明方法应用于实际湿巾样品中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的检测，检测结果与加标湿巾样品相符合；本发明的方法定量准确，重现性好，能为日用消费品的质量安全监管提供技术支撑。

Description

一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法

技术领域

本发明涉及湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂检测技术领域，具体涉及一种湿巾中2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MIT)、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMIT)、1,2-苯并异噻唑啉-3-酮(BIT)、2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮(OIT)和4,5-二氯-2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮(DCOIT)模拟使用转移率的测定方法。

背景技术

我国绝大部分使用湿巾的消费者主要将湿巾用于手口清洁或婴幼儿卫生清洁，并且使用湿巾进行清洁后不会再进行冲洗，湿巾中的防腐剂会转移并驻留在皮肤上。而湿巾中常用的异噻唑啉酮类防腐剂往往具有致敏性、细胞毒性和神经毒性，可能引起过敏性炎症等后果，尤其对婴幼儿的健康更易产生严重影响。因此，建立湿巾中多种异噻唑啉酮类防腐剂在皮肤表面残留情况的分析方法具有重要意义。

湿巾中防腐剂的转移是湿巾在被使用时以湿巾中的液体为载体向皮肤转移的，然而通常情况下迁移量是指目标物向浸泡液中转移的量，因此不宜用迁移量来表述异噻唑啉酮类防腐剂在皮肤表面的残留。

在上述背景下，本项目研究了湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂的转移情况，计算了异噻唑啉酮类防腐剂的模拟使用转移率。湿巾在模拟使用实验中受外力作用下所析出的防腐剂含量与湿巾中所含的防腐剂总量的比率即为湿巾中防腐剂的模拟使用转移率，反映了湿巾在擦拭过程中防腐剂随着湿巾液体转移到皮肤表面的程度。本研究参考纺织品耐摩擦性能相关标准，设计了湿巾模拟使用实验，并对湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂的模拟使用转移率进行了测算。模拟使用转移率的提出及其测定方法的研究有利于促进湿巾中防腐杀菌剂的规范使用，促进湿巾相关检测方法标准的制定和实施，完善湿巾相关标准体系的建立，提高产品质量安全管控水平。

发明内容

本发明的目的在于提供一种定量准确，重现性好，能为日用消费品的质量安全监管提供技术支撑的湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，测定方法具体步骤如下：

(1)湿巾模拟使用实验：将市售湿巾样品进行称量后，取部分样品对称平整折叠，铺放在多张叠放的定性滤纸之间，放置于胶带滚压机的压辊运动路径上，开启滚压机，模拟湿巾使用过程，然后，称量模拟使用后的湿巾。

优选的，所述步骤(1)的具体操作过程如下：将市售湿巾样品进行称量后，取部分样品对称平整折叠，铺放在6张叠放的定性滤纸的第三层和第四层间，所述定性滤纸的尺寸为4.0cm×6.0cm，然后，放置于胶带滚压机的压辊运动路径上，开启滚压机，每秒1个往复滚压循环，共滚压10个循环，然后，称量模拟使用后的湿巾，所述往复滚压循环的滚压速度为208mm/s，压辊荷重9±0.2N，压辊为橡胶覆盖的金属滚轮，金属滚轮的直径为84mm，金属滚轮的宽度 45mm，橡胶的邵尔A型硬度为60～80°，橡胶的厚度为6mm。

(2)混合标准工作溶液的配置：分别称取适量的5种异噻唑啉酮类物质标准品，用甲醇配成质量浓度为1000mg/L的标准储备溶液；接着，分别移取适量体积的各标准储备溶液，用甲醇配成100mg/L 的混合标准中间溶液；然后，分别取适量混合标准中间溶液，用甲醇配成1.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0μg/L混合标准工作溶液。

(3)样品前处理：分别将未经模拟使用和模拟使用后的湿巾样品剪碎成小块，混匀；称取一定量的样品，置于聚丙烯离心管中，加入甲醇，涡旋并超声萃取后，于离心机上离心5min，取上清液移入装有500mg HLB亲水亲脂固相萃取填料的离心管中，涡旋后，于离心机上离心5min，取上清液于45℃氮吹至干，将残渣用甲醇溶解，经滤膜过滤后取续滤液待测。

优选的，所述步骤(3)的具体操作过程如下：分别将未经模拟使用和模拟使用后的湿巾样品剪碎成小于5mm×5mm的小块，混匀；称取1.0g样品，置于50mL聚丙烯离心管中，准确加入25.0mL甲醇，涡旋2min，在45℃超声萃取30min，然后，于离心机上以5000 r/min离心5min，取5.0mL上清液移入装有500mg HLB亲水亲脂固相萃取填料的15mL离心管中，涡旋2min后，于离心机上以5000 r/min离心5min，取上清液于45℃氮吹至干，将残渣用1.00mL甲醇溶解，经0.22μm滤膜过滤后取续滤液待测。

(4)超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定样品中异噻唑啉酮含量：采用UPLC-MS/MS分析方法，分别对质量浓度为1.0、 10.0、25.0、50.0、75.0、100.0μg/L的异噻唑啉酮混合标准工作溶液进行测定，以目标物峰面积对混合标准工作溶液的质量浓度进行线性回归，得到线性回归方程；然后，对处理后的样品提取液进行测定，将测定结果代入线性回归方程，求得样品中各个异噻唑啉酮的含量，然后，分别换算出湿巾样品中所含各个异噻唑啉酮的质量m1，以及湿巾样品经模拟使用后所含各个异噻唑啉酮的质量m2。

优选的，所述步骤(4)中液相色谱采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3柱，流动相的A相为甲醇，流动相的B相为水，进行梯度洗脱；流速为0.3mL/min；进样量为1.0μL；柱温为40℃。

优选的，所述步骤(4)中质谱采用电喷雾离子源正离子模式分析，数据采集采用多反应监测模式，干燥气温度350℃，干燥气流速10 L/min，雾化气压力310kPa，正离子模式毛细管电压4000V。

优选的，所述的干燥气和所述的雾化气均采用氮气。

(5)异噻唑啉酮加标湿巾样品的制备：将经测定不含异噻唑啉酮的市售湿巾进行称量后置于烘箱中干燥，将干燥后的湿巾浸泡于特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液中，于恒温恒湿实验室中将湿巾取出，提起一角悬挂，自然沥干至湿巾不再滴液，称量沥干后的湿巾，制得加标湿巾样品，分别制备高、中、低三个加标水平的样品，进行模拟使用实验，测定样品中异噻唑啉酮含量并计算异噻唑啉酮模拟使用转移率。

优选的，所述步骤(5)的具体操作过程如下：将经测定不含异噻唑啉酮的市售湿巾进行称量后置于95±2℃烘箱中干燥2h，将干燥后的湿巾浸泡于100mL特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液中 20min，于恒温恒湿实验室中将湿巾取出，恒温恒湿实验室内部的温度为23±2℃，相对湿度50±5％，提起湿巾一角悬挂，自然沥干至湿巾不再滴液时，称量沥干后的湿巾质量，应与干燥前的湿巾质量偏差不超过5％，制得加标湿巾样品，进行模拟使用实验，测定样品中异噻唑啉酮含量并计算异噻唑啉酮模拟使用转移率。

优选的，所述步骤(5)中特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液分为高浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液、中浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液以及低浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液，根据市售湿巾样品中异噻唑啉酮的浓度范围，制备高、中、低3种加标水平湿巾样品时所采用的特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液的浓度分别为20.0、10.0、0.5mg/kg。

(6)湿巾中异噻唑啉酮防腐剂模拟使用转移率的计算：

湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率X(％)：

m1–湿巾样品中所含异噻唑啉酮的质量；

m2–湿巾样品经模拟使用后所含异噻唑啉酮的质量。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1)本发明方法采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱进行分离，该色谱柱为采用特殊键合和封端技术、碳载量较低的硅胶基质反相C18色谱柱，对极性和非极性化合物都有很好的保留，尤其对 MIT、CMIT等水溶性的、极性较大的小分子也具有很好的分离效果，同时由于C18配体密度低，亲水性较差的OIT等也更容易进入颗粒材料的孔结构中，因此，HSS T3色谱柱可同时为5种异噻唑啉酮提供均衡的保留性能；

2)以甲醇－水作为流动相比用乙腈－水流动相分离效果更好，色谱峰更尖锐，最终选择分离效果好并且价格便宜、毒性较低的甲醇和水为流动相；

3)本发明方法中5种异噻唑啉酮的最强峰均为其准分子离子峰，因此选择准分子离子[M+H]⁺为母离子，通过优化喷雾流量、喷雾温度、离子传输毛细管电压、碎裂电压等参数使得母离子强度最大；

4)通过分散固相萃取(QuEChERS)对提取液进行处理可显著减少样品基质干扰，提高检测的灵敏度和稳定性。通过对HLB、C18、PEP-2 和C18+PSA(1:1)四种QuEChERS固相萃取填料的净化效果进行了对比，发现采用HLB进行净化后，提取液中5种目标组分的回收率均优于另外三种净化方式；

5)本发明方法通过测定湿巾中异噻唑啉酮的模拟使用转移率，可为湿巾中防腐剂在皮肤表面驻留情况的评估提供有力工具，有利于规范湿巾中防腐杀菌剂的合理使用，完善湿巾相关标准体系的建立，提高产品质量安全管控水平，从而降低湿巾使用者受湿巾中防腐剂危害的风险，具有十分重要的意义。

附图说明

图1：5种异噻唑啉酮结构式示意图；

图2：湿巾模拟使用实验示意图(1压辊，2定性滤纸，3湿巾)；

图3：不同分散固相萃取对5种异噻唑啉酮回收率的影响；

图4：多反应监测模式下MIT、CMIT、BIT、OIT、DCOIT混合标准溶液的总离子流色谱图。

附表说明

表1：液相色谱梯度洗脱条件；

表2：5种异噻唑啉酮的线性方程和相关系数；

表3：不同加标水平湿巾样品中5种异噻唑啉酮的加标回收率及相对标准偏差；

表4：不同加标水平湿巾样品中异噻唑啉酮的模拟使用转移率；

表5：8组阳性湿巾样品中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例中，一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，测定方法具体步骤如下：

1.仪器、试剂与材料

超高效液相色谱-串联质谱仪(1290-6460，美国安捷伦公司)；高速冷冻离心机(Multifuge X1R，美国赛默飞世尔公司)；超声波清洗仪(KQ5200DE，昆山市超声仪器有限公司)；YGJ-S胶带滚压试验机(济南三泉中石实验仪器有限公司)。标准品2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮 (MIT，纯度98％)、1,2-苯并异噻唑啉-3-酮(BIT，纯度99％)和2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮(OIT，纯度98％)购自美国Sigma-Aldrich公司，5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMIT，纯度98％)购自德国Dr. Ehrenstorfer GbmH公司，4,5-二氯-2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮 (DCOIT，纯度99％)购自日本东京化成株式会社。甲醇为液相色谱纯(美国TEDIA公司)，实验用水为经PURELAB flex超纯水机(英国ELGA 公司)处理的去离子水。其中，5种标准品的结构式参阅图1。

2.混合标准工作溶液的配置

分别称取适量的5种异噻唑啉酮类物质标准品，用甲醇配成质量浓度为1000mg/L的标准储备溶液；接着，分别移取适量体积的各标准储备溶液，用甲醇配成100mg/L的混合标准中间溶液；然后，分别取适量混合标准中间溶液，用甲醇配成1.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0μg/L混合标准工作溶液。

3.湿巾模拟使用实验

将市售湿巾样品进行称量后，取部分样品对称平整折叠，铺放在6张叠放的定性滤纸的第三层和第四层间，所述定性滤纸的尺寸为 4.0cm×6.0cm，然后，放置于胶带滚压机的压辊运动路径上，开启滚压机，每秒1个往复滚压循环，共滚压10个循环，然后，称量模拟使用后的湿巾。所述往复滚压循环的滚压速度为208mm/s，压辊荷重9±0.2N，压辊为橡胶覆盖的金属滚轮，金属滚轮的直径为 84mm，金属滚轮的宽度45mm，橡胶的邵尔A型硬度为60～80°，橡胶的厚度为6mm。湿巾模拟使用实验示意图参阅图2。

4.样品前处理

分别将未经模拟使用和模拟使用后的湿巾样品剪碎成小于5mm ×5mm的小块，混匀；称取1.0g样品，置于50mL聚丙烯离心管中，准确加入25.0mL甲醇，涡旋2min，在45℃超声萃取30min，然后，于离心机上以5000r/min离心5min，取5.0mL上清液移入装有500mg HLB亲水亲脂固相萃取填料的15mL离心管中，涡旋2min 后，于离心机上以5000r/min离心5min，取上清液于45℃氮吹至干，将残渣用1.00mL甲醇溶解，经0.22μm滤膜过滤后取续滤液待测。

通过对比水、乙腈、甲醇对5种异噻唑啉酮加标湿巾的提取效果发现，用水提取高浓度的BIT、OIT和DCOIT时的效果较差，用乙腈提取MIT的效果较差，而甲醇对5种化合物均有较好的提取效果，因此选取甲醇作为提取溶剂。经优化提取时间发现，超声提取30min时，5种异噻唑啉酮的提取效率达到最大值，因此确定提取时间为30 min。

湿巾的成分较为复杂，如将含有大量杂质的提取液直接用于检测分析，样品基质会影响异噻唑啉酮的离子化效率，增加质谱系统的工作负担，不利于质谱的检测稳定性。通过分散固相萃取(QuEChERS) 对提取液进行处理可显著减少样品基质干扰，提高检测的灵敏度和稳定性。通过对HLB、C18、SPE-2和C18+PSA(1:1)四种QuEChERS固相萃取填料的净化效果进行了对比，发现采用HLB进行净化后，提取液中5种目标组分的回收率均优于另外三种净化方式，具体见图3。

若所测试样中异噻唑啉酮浓度超出标准曲线范围，则作适当倍数稀释后进行测定。

5.超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定样品中异噻唑啉酮含量

采用UPLC-MS/MS分析方法，分别对质量浓度为1.0、10.0、25.0、 50.0、75.0、100.0μg/L的异噻唑啉酮混合标准工作溶液进行测定，以目标物峰面积对混合标准工作溶液的质量浓度进行线性回归，得到线性回归方程；然后，对处理后的样品提取液进行测定，将测定结果代入线性回归方程，求得样品中各个异噻唑啉酮的含量，然后，分别换算出湿巾样品中所含各个异噻唑啉酮的质量m1，以及湿巾样品经模拟使用后所含各个异噻唑啉酮的质量m2。

超高效液相色谱-串联质谱条件：

Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱为采用特殊键合和封端技术、碳载量较低的硅胶基质反相C18色谱柱，对极性和非极性化合物都有很好的保留，尤其对MIT、CMIT等水溶性的、极性较大的小分子也具有很好的分离效果，同时由于C18配体密度低，亲水性较差的OIT等也更容易进入颗粒材料的孔结构中，因此，HSS T3色谱柱可同时为5种异噻唑啉酮提供均衡的保留性能。采用适当的梯度洗脱程序，可以让5种异噻唑啉酮在较短的时间内得到较好的分离，在相同的梯度洗脱条件下，对比了乙腈和甲醇的分离效果，以甲醇－水作为流动相比用乙腈－水流动相分离效果更好，色谱峰更尖锐，最终选择分离效果好并且价格便宜、毒性较低的甲醇和水为流动相。本发明还考察了柱温分别为30、40、50℃时的分离效果，柱温对目标物的影响不显著，各组分均能在3个柱温条件下很好分离，峰形尖锐，峰面积没有显著变化。其中40℃柱温与30℃柱温相比，出峰时间较早，流动相粘度降低，传质阻力减小，液相系统操作压力较低，且比50℃时更节能环保而分离效果无明显变化，故选定40℃作为分析温度。

本发明方法的液相色谱条件：采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 柱，流动相的A相为甲醇，流动相的B相为水，进行梯度洗脱，具体洗脱梯度见表1；流速为0.3mL/min；进样量为1.0μL；柱温为 40℃。

异噻唑啉酮结构中的含氮基团易于结合质子得到正离子，因此选择正离子模式进行检测。将质量浓度为50.0μg/L的MIT、CMIT、 BIT、OIT和DCOIT混合标准溶液引入离子源，在不加碰撞气压力的情况下进行一级质谱分析，结果表明这5种化合物的最强峰均为其准分子离子峰，因此选择准分子离子[M+H]⁺为母离子，通过优化喷雾流量、喷雾温度、离子传输毛细管电压、碎裂电压等参数使得母离子强度最大。

本发明方法的质谱条件：采用电喷雾离子源正离子模式分析，数据采集采用多反应监测模式，干燥气温度350℃，干燥气流速10 L/min，雾化气压力310kPa，正离子模式毛细管电压4000V，所述的干燥气和所述的雾化气均采用氮气。

在上述优化实验条件下，50.0μg/L的异噻唑啉酮标准溶液色谱图见图4。

在上述优化实验条件下，对质量浓度为1.0～100.0μg/L的异噻唑啉酮混合标准工作溶液进行测定，以目标物峰面积对混合标准工作溶液的质量浓度进行线性回归，得到线性回归方程，5种异噻唑啉酮在1.0～100.0μg/L范围内呈良好的线性关系，相关系数r≥0.9995(具体见表2)，根据10倍信噪比确定5种异噻唑啉酮的仪器定量限均为1.0μg/L，方法定量限均为0.005mg/kg，表明本方法能够满足5种异噻唑啉酮的高灵敏检测。

6.异噻唑啉酮加标湿巾样品的制备：将经测定不含异噻唑啉酮的市售湿巾进行称量后置于95±2℃烘箱中干燥2h，将干燥后的湿巾浸泡于100mL特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液中20min，于恒温恒湿实验室中将湿巾取出，恒温恒湿实验室内部的温度为23±2℃，相对湿度50±5％，提起湿巾一角悬挂，自然沥干至湿巾不再滴液时，称量沥干后的湿巾质量，应与干燥前的湿巾质量偏差不超过 5％，制得加标湿巾样品，进行模拟使用实验，测定样品中异噻唑啉酮含量并计算异噻唑啉酮模拟使用转移率。

特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液分为高浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液、中浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液以及低浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液，根据市售湿巾样品中异噻唑啉酮的浓度范围，制备高、中、低3种加标水平湿巾样品时所采用的特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液的浓度分别为20.0、10.0、 0.5mg/kg。

在上述优化实验条件下，各加标湿巾样品平行处理6份，计算方法的回收率及相对标准偏差，结果见表3。样品中异噻唑啉酮的平均加标回收率在91.1％～103.5％之间，相对标准偏差RSD为2.11％～ 3.27％，符合分析检测的要求。

7.湿巾中异噻唑啉酮防腐剂模拟使用转移率的计算：

湿巾中异噻唑啉酮防腐剂模拟使用转移率X(％)：

m1–湿巾样品中所含异噻唑啉酮的质量；

m2–湿巾样品经模拟使用后所含异噻唑啉酮的质量。

实施例1：将经测定不含异噻唑啉酮的市售湿巾进行干燥，并采用高浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液进行浸泡制备高加标水平湿巾样品。根据市售湿巾样品中异噻唑啉酮的浓度范围，对应的高浓度浸泡用5种异噻唑啉酮混合标准溶液的浓度为20.0mg/kg。采用上述方法，经测定高加标水平湿巾样品的实际异噻唑啉酮加标浓度、模拟使用后异噻唑啉酮的浓度，计算模拟使用转移率的实验结果见表4。

实施例2：将经测定不含异噻唑啉酮的市售湿巾进行干燥，并采用中浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液进行浸泡制备中加标水平湿巾样品。根据市售湿巾样品中异噻唑啉酮的浓度范围，对应的中浓度浸泡用5种异噻唑啉酮混合标准溶液的浓度为10.0mg/kg。采用上述方法，经测定中加标水平湿巾样品的实际异噻唑啉酮加标浓度、模拟使用后异噻唑啉酮的浓度，计算模拟使用转移率的实验结果见表4。

实施例3：将经测定不含异噻唑啉酮的市售湿巾进行干燥，并采用低浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液进行浸泡制备低加标水平湿巾样品。根据市售湿巾样品中异噻唑啉酮的浓度范围，对应的低浓度浸泡用5种异噻唑啉酮混合标准溶液的浓度为0.5mg/kg。采用上述方法，经测定低加标水平湿巾样品的实际异噻唑啉酮加标浓度、模拟使用后异噻唑啉酮的浓度，计算模拟使用转移率的实验结果见表4。

实施例4：以2017年市场上随机抽取的20组湿巾中的8组阳性样品为研究对象，采用本发明方法测定实际阳性样品中异噻唑啉酮的模拟使用转移率。MIT和CMIT的模拟使用转移率分别为72.54～ 86.34％和79.03～88.65％之间，BIT的模拟使用转移率为70.66％，具体见表5，与加标湿巾样品的结果(表4)相符合。

本发明申请首次研究了湿巾中异噻唑啉酮的模拟使用转移率，总结归纳了高、中、低三个加标水平湿巾样品的模拟使用转移率。水溶性较好的MIT、CMIT和BIT的模拟使用转移率较高，为69.76～87.56％， DCOIT的模拟使用转移率随着添加浓度的增加而显著提高，由5.25％增加至25.59％，水溶性最差的OIT的模拟使用转移率则由51.34％提高到72.83％。以2017年市场上随机抽取的20组湿巾中的8组阳性样品为研究对象，采用所建立的方法测定异噻唑啉酮的模拟使用转移率。MIT和CMIT的模拟使用转移率分别为72.54～86.34％和79.03～ 88.65％之间，BIT的模拟使用转移率为70.66％。通过研究湿巾中异噻唑啉酮的模拟使用转移率，可为防腐剂在皮肤表面驻留情况的评估提供有力工具，有利于规范湿巾中防腐杀菌剂的合理使用，完善湿巾相关标准体系的建立，提高产品质量安全管控水平，从而降低湿巾使用者受湿巾中防腐剂危害的风险，具有十分重要的意义。

表1：液相色谱梯度洗脱条件

时间/min	流动相A/％	流动相B/％
			00	90	10
30	90	10
			45	50	50
60	20	80
			75	10	90
90	90	10
			120	90	10

表2：5种异噻唑啉酮的线性方程和相关系数

表3：不同加标水平湿巾样品中5种异噻唑啉酮的加标回收率及相对标准偏差(n＝6)

表4：不同加标水平湿巾样品中异噻唑啉酮的模拟使用转移率(n＝3)

表5：8组阳性湿巾样品中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率

“—”：低于检出限。

Claims (7)

1.一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，是对湿巾中的2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、1,2-苯并异噻唑啉-3-酮、2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮和4,5-二氯-2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮的模拟使用转移率的测定，其特征在于该测定方法具体步骤如下：

(1)湿巾模拟使用实验：将市售湿巾样品进行称量后，取部分样品对称平整折叠，铺放在多张叠放的定性滤纸之间，放置于胶带滚压机的压辊运动路径上，开启滚压机，模拟湿巾使用过程，然后，称量模拟使用后的湿巾；

(2)混合标准工作溶液的配置：分别称取适量的5种异噻唑啉酮类物质标准品，用甲醇配成质量浓度为1000mg/L的标准储备溶液；接着，分别移取适量体积的各标准储备溶液，用甲醇配成100mg/L的混合标准中间溶液；然后，分别取适量混合标准中间溶液，用甲醇配成1.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0μg/L混合标准工作溶液；

(3)样品前处理：分别将未经模拟使用和模拟使用后的湿巾样品剪碎成小块，混匀；称取一定量的样品，置于聚丙烯离心管中，加入甲醇，涡旋并超声萃取后，于离心机上离心5min，取上清液移入装有500mg HLB亲水亲脂固相萃取填料的离心管中，涡旋后，于离心机上离心5min，取上清液于45℃氮吹至干，将残渣用甲醇溶解，经滤膜过滤后取续滤液待测；

(4)超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定样品中异噻唑啉酮含量：采用UPLC-MS/MS分析方法，分别对质量浓度为1.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0μg/L的异噻唑啉酮混合标准工作溶液进行测定，以目标物峰面积对混合标准工作溶液的质量浓度进行线性回归，得到线性回归方程；然后，对处理后的样品提取液进行测定，将测定结果代入线性回归方程，求得样品中各个异噻唑啉酮的含量，然后，分别换算出湿巾样品中所含各个异噻唑啉酮的质量m1，以及湿巾样品经模拟使用后所含各个异噻唑啉酮的质量m2；

(5)异噻唑啉酮加标湿巾样品的制备：将经测定不含异噻唑啉酮的市售湿巾进行称量后置于烘箱中干燥，将干燥后的湿巾浸泡于特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液中，于恒温恒湿实验室中将湿巾取出，提起一角悬挂，自然沥干至湿巾不再滴液，称量沥干后的湿巾，制得加标湿巾样品，分别制备高、中、低三个加标水平的样品，进行模拟使用实验，测定样品中异噻唑啉酮含量并计算异噻唑啉酮模拟使用转移率；

(6)湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的计算：

湿巾中异噻唑啉酮防腐剂模拟使用转移率X(％)：

m1–湿巾样品中所含异噻唑啉酮的质量；

m2–湿巾样品经模拟使用后所含异噻唑啉酮的质量。

2.根据权利要求1所述的一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体操作过程如下：将市售湿巾样品进行称量后，取部分样品对称平整折叠，铺放在6张叠放的定性滤纸的第三层和第四层间，所述定性滤纸的尺寸为4.0cm×6.0cm，然后，放置于胶带滚压机的压辊运动路径上，开启滚压机，每秒1个往复滚压循环，共滚压10个循环，然后，称量模拟使用后的湿巾，所述往复滚压循环的滚压速度为208mm/s，压辊荷重9±0.2N，压辊为橡胶覆盖的金属滚轮，金属滚轮的直径为84mm，金属滚轮的宽度45mm，橡胶的邵尔A型硬度为60～80°，橡胶的厚度为6mm。

3.根据权利要求1所述的一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体操作过程如下：分别将未经模拟使用和模拟使用后的湿巾样品剪碎成小于5mm×5mm的小块，混匀；称取1.0g样品，置于50mL聚丙烯离心管中，准确加入25.0mL甲醇，涡旋2min，在45℃超声萃取30min，然后，于离心机上以5000r/min离心5min，取5.0mL上清液移入装有500mg HLB亲水亲脂固相萃取填料的15mL离心管中，涡旋2min后，于离心机上以5000r/min离心5min，取上清液于45℃氮吹至干，将残渣用1.00mL甲醇溶解，经0.22μm滤膜过滤后取续滤液待测。

4.根据权利要求1所述的一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，其特征在于：所述步骤(4)中液相色谱采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3柱，流动相的A相为甲醇，流动相的B相为水，进行梯度洗脱；流速为0.3mL/min；进样量为1.0μL；柱温为40℃；

所述步骤(4)中质谱采用电喷雾离子源正离子模式分析，数据采集采用多反应监测模式，干燥气温度350℃，干燥气流速10L/min，雾化气压力310kPa，正离子模式毛细管电压4000V。

5.根据权利要求4所述的一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，其特征在于，所述的干燥气和所述的雾化气均采用氮气。

6.根据权利要求1所述的一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，其特征在于，所述步骤(5)的具体操作过程如下：将经测定不含异噻唑啉酮的市售湿巾进行称量后置于95±2℃烘箱中干燥2h，将干燥后的湿巾浸泡于100mL特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液中20min，于恒温恒湿实验室中将湿巾取出，恒温恒湿实验室内部的温度为23±2℃，相对湿度50±5％，提起湿巾一角悬挂，自然沥干至湿巾不再滴液时，称量沥干后的湿巾质量，应与干燥前的湿巾质量偏差不超过5％，制得加标湿巾样品，进行模拟使用实验，测定样品中异噻唑啉酮含量并计算异噻唑啉酮模拟使用转移率。

7.根据权利要求1所述的一种湿巾中异噻唑啉酮类防腐剂模拟使用转移率的测定方法，其特征在于：所述步骤(5)中特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液分为高浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液、中浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液以及低浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液，根据市售湿巾样品中异噻唑啉酮的浓度范围，制备高、中、低3种加标水平湿巾样品时所采用的特定浓度的5种异噻唑啉酮混合标准溶液的浓度分别为20.0、10.0、0.5mg/kg。