CN108546738A - 海带孢子体幼苗pcr模板制备方法及扩增方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速制备海带孢子体幼苗PCR模板的方法及PCR模板扩增方法，取海带孢子体幼苗，剪取叶片放入离心管中；加入蒸馏水浸泡幼苗叶片，对幼苗叶片进行充分研磨；离心；将上清液转移至新的离心管中作为PCR反应模板进行扩增。本发明在常规提取基因组DNA进行PCR检测的基础上，步骤明显简化，无需使用各种试剂及试剂盒，无需进行基因组DNA的提取，直接将海带孢子体幼苗研碎，离心后取上清直接进行PCR扩增，方法简便，结果明确，省去了大量人力、物力、财力，并大大减少了对环境和实验人员的污染和伤害。

Description

海带孢子体幼苗PCR模板制备方法及扩增方法
技术领域
本发明属于分子生物学领域。具体涉及一种快速制备海带孢子体幼苗PCR模板的方法，还涉及所述PCR模板的扩增方法。
背景技术
海带是一种典型的具有异性世代交替生活史的重要经济海藻，其配子体和孢子体形态差异显著。培育高产抗逆新品种，为养殖户提供优质苗种是保障产业链可持续发展的重要前提。在海带的实际生产过程中，通常是在育苗车间进行孢子体幼苗的培育，待幼苗长至2-3cm，并且海况条件合适后下海暂养；待幼苗长至30-40cm后，进行分苗，将幼苗夹到养殖绳上挂到养殖海区进行生产性养殖。近年来，结合分子标记技术，针对海带进行了大量群体遗传多样性和遗传结构分析、亲缘关系分析、种质鉴定等相关工作，选用的材料主要是海带不同生长阶段的孢子体。
随着分子生物学的快速发展，传统生物学的研究手段得到了巨大的扩展，PCR技术作为核酸水平研究的主要工具具有特异性强、灵敏度高、快速简便、重复性好等特点，变得越来越重要，可以在获得物种基因组DNA的前提下，短时间内在体外将特定DNA序列从几个拷贝扩增到几百万倍的水平。
传统的基因组DNA提取方法主要包括裂解法、试剂盒法及衍生出的一系列改良方法。但这些方法往往在准备阶段需要配制各种试剂及缓冲液，提取前需要将样品在液氮中研磨粉碎，而后进行多次抽提、沉淀、纯化。操作过程中用到的部分试剂具有一定毒性，会对环境及实验人员造成一定的负面影响；实验步骤繁琐，人力物力成本较高；对材料的取样量有一定要求，需要将实验材料培养至一定生物量后方能进行实验。在海带新品种培育的过程中，相关的遗传学分析及分子生物学评价等工作贯穿整个苗种繁育和生产性养殖周期，早期的工作由于孢子体材料大小的限制往往难以开展。在早期评价过程中，快速获得大样本量的海带孢子体幼苗PCR模板是提升工作效率的关键，传统的DNA提取方法耗时长、效率低，不适用于大量样品的快速分析评价。
对原有海带孢子体幼苗的分析鉴定一般采用传统的CTAB法提取海带基因组DNA后，再选取适于海带分析的PCR引物进行扩增检测。DNA提取步骤主要包括：海带孢子体幼苗于液氮条件下迅速研磨至粉末状，将粉末迅速移至提取缓冲液，震荡混匀；55℃消化2h，期间每0.5h颠倒混匀一次，离心；将上清液移取至另一离心管，加入酚、氯仿和异戊醇（25：24：1），颠倒混匀10min，离心；将上清液移取至另一离心管，加入氯仿和异戊醇（24：1），颠倒混匀10min，离心；将上清液移取至另一离心管，缓慢加入预冷的异丙醇，-20℃过夜；离心；弃上清后加入预冷的无水乙醇缓慢颠倒洗涤沉淀，离心；弃上清并吹干乙醇，用蒸馏水溶解，置于4℃冰箱中保存。
上述方法原理：海带孢子体的遗传构成分析以及群体多样性分析实验中，通常需要依赖PCR扩增，首先需要进行植物组织DNA的提取。传统的DNA提取方法又被称为CTAB法，CTAB(hexadecyl trimethyl ammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
上述方法缺陷：
1）、只能通过基因组DNA的提取来进行后续PCR检测，首先提取过程需要耗费一定时间；其次会产生实验试剂与实验用品的消耗；再次中间用到巯基乙醇、酚、氯仿等有机试剂，对实验人员和环境都不利。
2）、进行基因组DNA的提取时，对材料的取样量有一定要求，早期海带孢子体幼苗很小，且提取过程中有一定损耗，往往无法满足后续实验的取样量要求。
发明内容
本发明旨在提供一种海带孢子体幼苗PCR模板制备方法及扩增方法，用于克服现有方法的不足，不采用任何有毒试剂，通过简易步骤快速得到供后续PCR反应的模板；同时只需要极少量的样品即可完成相关实验，用以解决样品取样量不足的困扰。
本发明的技术方案如下：
一种海带孢子体幼苗PCR模板制备方法，其特征在于按照以下步骤制备：
取海带孢子体幼苗，剪取叶片放入离心管中；加入蒸馏水浸泡幼苗叶片，对幼苗叶片进行充分研磨；离心；将上清液转移至新的离心管中作为PCR反应模板。
优选的步骤：
1）、取海带孢子体幼苗用滤纸吸净水分并擦拭干净，剪取（1-2mm）×（2-4mm）大小的叶片放入1.5mL离心管中；
2）、加入40-60μL ddH2O浸泡幼苗叶片并用1.5mL离心管专用研磨棒进行反复研磨，直至ddH2O中无孢子体组织块存在；
3）、在5000-7000rpm条件下常温离心4-6分钟；
4）、吸取上清液转移至新的离心管中作为PCR反应模板。
进一步地：其中步骤1）叶片大小1mm×2mm；步骤2）中加入ddH2O的量为50μL； 步骤3）以6000rpm常温离心5分钟。
对得到的PCR反应模板进行扩增的方法，其特征在于：对PCR反应模板直接进行PCR扩增或将PCR反应模板在4℃下保存一段时间再进行PCR扩增；所述的一段时间不超过48h。
优选地：PCR 扩增体系共20μL，包括2×PCR supermix 10μL、ddH2O 7μL、10umol/L上下游引物各1μL、PCR反应模板1μL。
优选地：PCR反应条件为：95℃变性5min；95℃变性30s，58-63℃退火30s，72℃延伸60s，循环30次；72℃延伸5min，10℃保温。
优选地：还包括以下步骤：取PCR扩增产物6μL，在12V/cm电压下，利用浓度为1％的琼脂糖凝胶进行电泳，制胶时加入核酸染料，用量为10μL核酸染料储液/100 mL胶，电泳完毕后，在凝胶成像系统下观察条带情况。
本发明中，PCR SuperMix属于PCR预混液，含DNA Polymerase，dNTPs和优化的反应缓冲液。购买于北京全式金生物技术有限公司。
本发明所用核酸染料Gelstain购买于北京全式金生物技术有限公司。
本发明的积极效果在于
1、本发明在常规提取基因组DNA进行PCR检测的基础上，步骤明显简化，无需使用各种试剂及试剂盒，无需进行基因组DNA的提取，直接将海带孢子体幼苗研碎，离心后取上清直接进行PCR扩增，方法简便，结果明确，省去了大量人力、物力、财力，并大大减少了对环境和实验人员的污染和伤害。
2、此方法摸索了取样面积，一方面对于特别小的海带孢子体幼苗，只需要很小的量就可以完成本实验。反之，如果进行基因组DNA提取的话，苗体太小，组织量无法满足基因组DNA提取的要求；另一方面，对于其他类似的褐藻，只要取样厚度及面积与本实验中最优条件描述相差不大，此方法都可通用。
附图说明
图1是由左至右排列的、分别用18S1、Zspj38、ZpsjE45、ZpsjE52引物检测海带孢子体幼苗DNA的凝胶电泳图。
图2是用18S1引物检测不同大小取样组织的海带孢子体幼苗DNA的凝胶电泳图。
图3、图4、图5分别是用18S1引物检测制备模板不同保存时间（图3为直接进行扩增、图4为保存24h、图5为保存48h）的海带孢子体幼苗DNA的凝胶电泳图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例详细说明本发明。
方案优选过程如下：
剪取的叶片大小范围选定为（1-2mm）×（2-4mm），优选为1mm×2mm。尝试做过更大面积的幼苗叶片，但后期取上清进行PCR验证时，并不能得到特异且清晰的目的条带。
浸泡并研磨幼苗叶片时加入ddH2O的量为40-60μL。根据幼苗叶片大小，尝试做过40-100μL的ddH2O浸泡，ddH2O量太大导致上清浓度低，PCR验证不能得到特异且清晰的目的条带，所以更优选为50μL。
尝试将上清液直接进行扩增及在4℃保存24h、48h后进行扩增，取样面积较大时，保存时间越久，扩增效果越差，无法得到特异且清晰的目的条带；取样面积较小时，保存时间对扩增效果影响不大，综合考虑以上结果，更优选为直接进行扩增。
实施例1
本发明提供了一种海带孢子体幼苗PCR模板制备方法，本实施例中，进行不同退火温度引物的扩增验证，所述方法包括以下步骤 ：
1）、取海带孢子体幼苗用滤纸吸净水分并擦拭干净，剪取约1mm×2mm大小的叶片放入1.5mL离心管中。
2）、加入50μL ddH2O浸泡幼苗叶片并用1.5mL离心管专用研磨棒进行反复研磨，直至ddH2O中无孢子体组织块存在。
3）、以6000rpm常温离心5分钟。
4）、吸取上清液转移至新的离心管中，即可作为PCR反应模板。
应用本发明制备方法得到的PCR模板进行扩增，本方法选用的引物为：18S1、Zspj38、ZpsjE45、ZpsjE52。方法如下：PCR 扩增体系共20μL，包括2×PCR supermix 10μL、ddH2O 7μL、10umol/L上下游引物各1μL、PCR模板1μL。PCR反应条件为：95℃变性5min；95℃变性30s，58-63℃（适宜温度）退火30s，72℃延伸60s，循环30次；72℃延伸5min，10℃保温。取上述PCR扩增产物5μL，在12V/cm电压下，利用浓度为1％的琼脂糖凝胶进行电泳，制胶时加入Gelstain核酸染料，用量为 10μL Gelstain储液/100 mL胶，电泳完毕后，在凝胶成像系统下观察条带情况。
实施例2
本发明提供了一种海带孢子体幼苗PCR模板制备方法，本实施例中，进行不同大小取样组织的比较，所述方法包括以下步骤：
1）、取海带孢子体幼苗用滤纸吸净水分并擦拭干净，剪取约（a）1mm×2mm（b）2mm×4mm（c）3mm×8mm（d）4mm×20mm大小的叶片共4份，分别放入1.5mL离心管中。
2）、加入50μL ddH2O浸泡幼苗叶片并用1.5mL离心管专用研磨棒进行反复研磨，直至ddH2O中无孢子体组织块存在。
3）、以6000rpm常温离心5分钟。
4）、吸取上清液转移至新的离心管中，即可作为PCR反应模板。
应用本发明制备方法得到的PCR模板进行扩增，方法如下：PCR 扩增体系共20μL，包括2×PCR supermix 10μL、ddH2O 7μL、10umol/L上下游引物各1μL（所用引物为18S1）、PCR模板1μL。PCR反应条件为：95℃变性5min；95℃变性30s，60℃（适宜温度）退火30s，72℃延伸60s，循环30次；72℃延伸5min，10℃保温。取上述PCR扩增产物5μL，在12V/cm电压下，利用浓度为1％的琼脂糖凝胶进行电泳，制胶时加入Gelstain核酸染料，用量为 10μLGelstain储液/100 mL胶，电泳完毕后，在凝胶成像系统下观察条带情况。
实施例3
本发明提供了一种海带孢子体幼苗PCR模板制备方法，本实施例中，进行制备模板不同保存时间的比较，所述方法包括以下步骤：
1）、取海带孢子体幼苗用滤纸吸净水分并擦拭干净，剪取约1mm×2mm大小的叶片放入1.5mL离心管中。
2）、加入50μL ddH2O浸泡幼苗叶片并用1.5mL离心管专用研磨棒进行反复研磨，直至ddH2O中无孢子体组织块存在。
3）、以6000rpm常温离心5分钟。
4）、吸取上清液转移至新的离心管中，直接进行扩增、4℃保存24h后扩增、4℃保存48h后扩增，即可作为PCR反应模板。
应用本发明制备方法得到的PCR模板进行扩增，方法如下：PCR 扩增体系共20μL，包括2×PCR supermix 10μL、ddH2O 7μL、10umol/L上下游引物各1μL（所用引物为18S1）、PCR模板1μL。PCR反应条件为：95℃变性5min；95℃变性30s，60℃（适宜温度）退火30s，72℃延伸60s，循环30次；72℃延伸5min，10℃保温。取上述PCR扩增产物5μL，在12V/cm电压下，利用浓度为1％的琼脂糖凝胶进行电泳，制胶时加入Gelstain核酸染料，用量为10μLGelstain储液/100 mL胶，电泳完毕后，在凝胶成像系统下观察条带情况。
表1为4对海带孢子体幼苗进行快速鉴定的引物信息。
表1
图1是用18S1、Zspj38、ZpsjE45、ZpsjE52引物检测海带孢子体幼苗DNA的凝胶电泳图，其中每张小图泳道1和2为浸泡幼苗叶片并研磨后再以6000rpm离心5分钟后吸取上清1μL作为模板扩增的结果；泳道3为阳性对照（以CTAB法提取的海带孢子体幼苗基因组DNA作为模板）；泳道4为阴性对照（不加模板），泳道5为Marker I（100~700bp）。
图2是用18S1引物检测不同大小取样组织的海带孢子体幼苗DNA的凝胶电泳图，图中泳道1和2为海带孢子体幼苗（取样面积为1mm×2mm）经过处理后吸取上清1μL作为模板扩增的结果；泳道3和4为海带孢子体幼苗（取样面积为2mm×4mm）经过处理后吸取上清1μL作为模板扩增的结果；泳道5和6为海带孢子体幼苗（取样面积为3mm×8mm）经过处理后吸取上清1μL作为模板扩增的结果；泳道7和8为海带孢子体幼苗（取样面积为4mm×20mm）经过处理后吸取上清1μL作为模板扩增的结果。泳道9为阳性对照（以CTAB法提取的海带孢子体幼苗基因组DNA作为模板），泳道10为阴性对照（不加模板），泳道11为Marker I（100~700bp）。
图3、4、5是用18S1引物检测制备模板不同保存时间（图3为直接进行扩增、图4为24h、图5为48h）的海带孢子体幼苗DNA的凝胶电泳图，其中各图中泳道1和2为海带孢子体幼苗（取样面积为1mm×2mm）经过处理后吸取上清1μL作为模板扩增的结果；泳道3和4为海带孢子体幼苗（取样面积为2mm×4mm）经过处理后吸取上清1μL作为模板扩增的结果；泳道5和6为海带孢子体幼苗（取样面积为3mm×8mm）经过处理后吸取上清1μL作为模板扩增的结果；泳道7和8为海带孢子体幼苗（取样面积为4mm×20mm）经过处理后吸取上清1μL作为模板扩增的结果。泳道9为阳性对照（以CTAB法提取的海带孢子体幼苗基因组DNA作为模板），泳道10为阴性对照（不加模板），泳道11为Marker I（100~700bp）。
结果分析如下：
经过18S1、Zspj38、ZpsjE45、ZpsjE52这4对引物的PCR扩增产物分析，5种不同海带孢子体小苗叶片组织破碎处理的方法中，用50μL ddH2O浸泡并研磨后再以3000rpm离心5分钟后吸取上清1μL作为模板扩增的结果效率最高，最接近阳性扩增条带的亮度，因此此方法为最优处理方法。
同时，实验中进行了取样面积的摸索，其中取样面积为1mm×2mm和2mm×4mm的海带孢子体小苗经过上述方法扩增的结果效率最高，且相差不大，并且结合离心后吸取上清4℃放置24h和48h后再吸取上清1μL作为模板扩增的结果显示，取样面积为1mm×2mm的样品在48h后依然能够扩增出有效条带，即DNA稳定性更强，因此1mm×2mm为最优取样面积。
由于藻类其他物种中有与海带孢子体小苗相似的品种，因此，对于其他物种小苗的快速鉴定该发明也同样适用。
该方法简单易行，检验结果准确。通过研磨和离心可快速使细胞组织破裂，并得到少量基因组DNA进行PCR扩增，取代了耗时耗力的传统检测方法。

Claims (8)

1.一种海带孢子体幼苗PCR模板制备方法，其特征在于按照以下步骤制备：
取海带孢子体幼苗，剪取叶片放入离心管中；加入蒸馏水浸泡幼苗叶片，对幼苗叶片进行充分研磨；离心；将上清液转移至新的离心管中作为PCR反应模板。
2.根据权利要求1所述的海带孢子体幼苗PCR模板制备方法，其特征在于按照以下步骤制备：
1）、取海带孢子体幼苗用滤纸吸净水分并擦拭干净，剪取（1-2mm）×（2-4mm）大小的叶片放入1.5mL离心管中；
2）、加入40-60μL ddH2O浸泡幼苗叶片并用1.5mL离心管专用研磨棒进行反复研磨，直至ddH2O中无孢子体组织块存在；
3）、在5000-7000rpm条件下常温离心4-6分钟；
4）、吸取上清液转移至新的离心管中作为PCR反应模板。
3.根据权利要求2所述的海带孢子体幼苗PCR模板制备方法，其特征在于：
其中步骤1）叶片大小1mm×2mm；步骤2）中加入ddH2O的量为50μL； 步骤3）以6000rpm常温离心5分钟。
4.对权利要求1或2或3得到的PCR反应模板进行扩增的方法，其特征在于：对PCR反应模板直接进行PCR扩增或将PCR反应模板在4℃下保存一段时间再进行PCR扩增；所述的一段时间不超过48h。
5.根据权利要求4所述的对PCR反应模板进行扩增的方法，其特征在于：PCR 扩增体系共20μL，包括2×PCR supermix 10μL、ddH2O 7μL、10umol/L上下游引物各1μL、PCR反应模板1μL。
6.根据权利要求4所述的对PCR反应模板进行扩增的方法，其特征在于：PCR反应条件为：95℃变性5min；95℃变性30s，58-63℃退火30s，72℃延伸60s，循环30次；72℃延伸5min，10℃保温。
7.根据权利要求4所述的对PCR反应模板进行扩增的方法，其特征在于还包括以下步骤：取PCR扩增产物6μL，在12V/cm电压下，利用浓度为1％的琼脂糖凝胶进行电泳，制胶时加入核酸染料，用量为10μL核酸染料储液/100 mL胶，电泳完毕后，在凝胶成像系统下观察条带情况。
8.根据权利要求6所述的对PCR反应模板进行扩增的方法，其特征在于还包括以下步骤：取PCR扩增产物6μL，在12V/cm电压下，利用浓度为1％的琼脂糖凝胶进行电泳，制胶时加入核酸染料，用量为10μL核酸染料储液/100 mL胶，电泳完毕后，在凝胶成像系统下观察条带情况。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114085828A (zh) * 2021-11-17 2022-02-25 安徽荃银高科种业股份有限公司 一种水稻基因组dna的快速低成本提取方法及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1800386A (zh) * 2004-12-30 2006-07-12 中国科学院海洋研究所 一种制备海带孢子体大分子量dna的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1800386A (zh) * 2004-12-30 2006-07-12 中国科学院海洋研究所 一种制备海带孢子体大分子量dna的方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIE PENG等: "Development of genic SSR markers from an assembled Saccharina japonica genome", 《J APPL PHYCOL》 *
LINAN ZHANG等: "Development of 27 trinucleotide microsatellite markers for saccharina japonica using next generation sequencing technology", 《CONSERVATION GENET RESEAR》 *
ZHANG LINAN等: "Characterization of Genome-Wide Microsatellites of Saccharina japonica Based on a Preliminary Assembly of Illumina Sequencing Reads", 《J. OCEAN UNIV. CHINA》 *
山东海洋学院等主编: "《藻类养殖学》", 31 January 1962, 农业出版社 *
曹墨菊主编: "《植物生物技术概论》", 31 October 2014 *
林鹿等: "《制浆漂白生物技术与原理》", 31 January 2012 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114085828A (zh) * 2021-11-17 2022-02-25 安徽荃银高科种业股份有限公司 一种水稻基因组dna的快速低成本提取方法及其应用

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