CN108524605B - 一种构树叶黄酮的提取方法及提取物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种构树叶黄酮的提取方法及提取物的应用，本发明所提取的树黄酮提取物用于制备抗鸡新城疫病毒的制品。本发明以构树叶为原料来提供黄酮类物质，本发明方法获得的黄酮的提取率为2.61％。所获得的提取物能抑制鸡胚中新城病毒的繁殖。与已有的方法相比，不但提取周期大大缩短，且方法简便实用，适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于活性物质提取技术领域，具体涉及一种构树叶黄酮的提取方法及提取物的应用。
技术背景
构树(Broussonetia papyrifera(Linn.)L'Hér.ex Vent.) 为桑科(Moraceae)构树属(Broussonetia L's Herit.ex Vent.)。其中构树、小构树、藤构、落叶花桑在我国的黄河、长江、珠江、闽江流域均有分布，构树叶又称楮叶，最早记载于《名医别录》,性凉味甘，无毒，能清热利湿，凉血止血，杀虫解毒，可用于治疗吐血、血崩、外伤出血、水肿、痢疾、疝气等病症。
构树叶提取液的主要成分是黄酮类化合物。黄酮类化合物的提取方法包括多种，例如：加热回流提取法、溶剂浸提法以及微波辅助提取法等。回流法提取液在蒸发锅中受热时间较长，样品中的有效成分容受热遭到破坏，导致黄酮的含量降低，而微波辅助法效率高，大大节省了反应时间，从生产角度看，微波辅助法提高了经济效益，提取工艺条件合理、操作简便、可靠、稳定性好。
发明内容
本发明提供一种构树叶黄酮的提取方法及提取物的应用，从而弥补现有技术的不足。
本发明提供一种从构树中提取黄酮的方法，包括如下步骤：
1)将新鲜的构树叶自然阴干粉碎，过40目筛后制成构树叶粉末；
2)将上述步骤1)中的构树叶粉末，用乙醇和甲醇的提取液进行提取，获得的提取溶液，过滤浓缩，得到膏状物质，再将浸提膏用蒸馏水进行溶解获得构树叶粗提物溶解液；
3)将步骤2中的粗提物溶解液进行分离纯化，将粗提物溶解液通过AB-8树脂型，树脂用量为构树叶质量的0.5-2倍，上样浓度为 1.0-5.0mg/mL，上样流速为0.5-2.5mL/min，浓度为50-80％乙醇作为洗脱液，乙醇流速为0.5-2.5mL/min；洗脱液冷冻干燥后获得构树黄酮提取物；
所述的乙醇和甲醇的提取液中甲醇与乙醇的混合比例为1:1-5；
所述的步骤2)中的提取，其一种具体操作如下：提取温度 55-75℃，提取时间3-11min，提取功率300-700W，
优选构树叶粉末和提取液的质量体积比为1:15-35；
所述的步骤2)中的提取，其另一种具体操作如下：提取温度40 -80℃，提取时间1-3h，树叶粉末和提取液的质量体积比为20-40。
本发明所提取的树黄酮提取物用于制备抗鸡新城疫病毒的制品。
本发明以构树叶为原料来提供黄酮类物质，本发明方法获得的黄酮的提取率为2.61％。所获得的提取物能抑制鸡胚中新城病毒的繁殖。与已有的方法相比，不但提取周期大大缩短，且方法简便实用，适合工业化生产。
具体实施方式
本发明实施例中所涉及的标准曲线的制备方法如下：
1、芦丁对照品溶液的制备
精密称定芦丁标准品5mg，加少量无水乙醇溶解，再加70％酒精溶液定容至10mL，即得到浓度为500μg/mL的芦丁标准品溶液。
2、标准曲线的制作
精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL芦丁标准品溶液，加 0.2mL的5％亚硝酸钠溶液，摇匀静置6min。0.2mL的10％硝酸铝溶液，摇匀静置6min。
2mL的4％氢氧化钠溶液，70％酒精溶液补足至5mL，摇匀静置10min。根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法于510nm处测吸光值，以芦丁对照品溶液浓度(X，mg/mL)为横坐标，吸光度(Y)为纵坐标绘制标准曲线,得线性回归方程Y＝10.563X+0.0005,R2＝0.9998。
下面结合实施例对本发明的方法进行详细的描述。
实施例1：从构树叶中提取黄酮
首先按照现有技术中已报到的方法，将干燥粉碎的构树叶100g与 70％乙醇溶液按固液比1:30混合，在浸提温度90℃、浸提3h，氯仿萃取3次，每次30mL，静止分层除去杂质，得到的水相合并后在用乙酸乙酯萃取2-3次，每次25mL，萃取后得到的乙酸乙酯萃取液合并，经旋转蒸发仪蒸出乙酸乙酯即为黄酮类化合物。黄酮类化合物的产量为38mg。按照此方法生产周期较长，且产量低，为了解决上述问题，提出了本发明的提取方法。
本发明方法的具体步骤如下：
一、微波辅助提取法
1.微波辅助取提取单因素实验
(1)构树叶总黄酮提取反应时间的选择
以微波功率400W，以1:1混合溶剂为提取液，料液比为 1:20(g:mL)，反应温度为55℃，反应时间分别为3、5、7、9、11 min。根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮吸光值，在9min 时黄酮提取率为1.34％达到最大。
(2)构树叶总黄酮提取反应温度的选择
以微波功率400W，以1:1混合溶剂为提取液，料液比为 1:20(g:mL)，反应温度分别为55℃、60℃、65℃、70℃、75℃，微波反应时间9min。根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮吸光值，在70℃时黄酮提取率为1.35％到达最大。
(3)构树叶总黄酮提取反应功率的选择
以300W、400W、500W、600W、700W为微波辅助提取功率，以1:1混合溶剂为提取液，料液比为1:20(g:mL)，反应温度70℃，微波反应时间9min。根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮吸光值，在600W时黄酮提取率为1.34％到达最大。
(4)构树叶总黄酮提取料液比的选择
以400W为微波辅助提取功率，50％乙醇为溶剂，料液比分别为 1:15、1:20、1:25、1:30、1:35(g:mL)，提取温度为70℃，微波反应时间9min。根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮吸光值，在1:30(g:mL)时黄酮提取率为2.31％到达最大。
(5)构树叶总黄酮提取提取液浓度的选择
以1:1、1:2、1:3、1:4、1:5等比例混合的甲醇和乙醇溶液为提取液，反应功率500W，料液比为1:30(g:mL)，反应温度70℃，微波反应时间9min。根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮吸光值，在1:2时黄酮提取率为1.35％到达最大。
2.微波辅助法正交实验
在单因素实验的基础上，选取提取液浓度(A)、反应时间(B)、料液比(C)、反应温度(D)、反应功率(E)作为考察因素，以样品中黄酮提取率为指标，进行L16(45)正交实验。正交试验表明微波辅助法最佳条件为提取液浓度为1:2、反应时间9min、料液比1:35、反应温度70℃、反应功率700W，构树叶黄酮的提取率为2.61％。
二、加热回流提取法
1.加热回流法单因素实验
(1)构树叶总黄酮提取乙醇浓度的选择
以1:1、1:2、1:3、1:4、1:5等比例混合的甲醇和乙醇溶液为提取液，料液比为1:20(g:mL)，反应温度50℃，反应时间1h。根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮吸光值，在1:2时黄酮提取率为1.19％到达最大。
(2)构树叶总黄酮提取反应时间的选择
以1:2混合液为溶剂，料液比为1:20(g:mL)，反应温度为50℃，反应时间时间为1h、1.5h、2h、2.5h、3h。根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 比色法测定总黄酮吸光值，在2.5h时黄酮提取率为1.14％到达最大。
(3)构树叶总黄酮提取反应温度的选择
以1:2混合液为溶剂，料液比为1:20(g:mL)，反应温度为40℃、 50℃、60℃、70℃、80℃，加热回流反应时间2.5h。根据 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮吸光值，在70℃时黄酮提取率为1.14％到达最大。
(4)构树叶总黄酮提取料液比的选择
以1:2混合液为溶剂，料液比分别为1:20、1:25、1:30、1:35、 1:40(g:mL)，反应温度为70℃，反应时间2.5h。根据 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮吸光值，在1:30(g:mL)时黄酮提取率为2.34％到达最大。
2.加热回流法正交实验
在单因素实验的基础上，选取乙醇浓度(A)、反应时间(B)、反应温度(C)、料液比(D)作为考察因素，以样品中黄酮提取率为指标，进行L9(34)正交实验。正交试验表明加热回流法最佳条件为：提取液浓度浓度1:2、反应时间2.5h料液比1:30、反应温度80℃，构树叶黄酮的提取率为2.31％。
实施例2
在上述最佳提取工艺条件下提取的未纯化的构树黄酮为 28.37mg/g，为了提高黄酮纯度按照以下实施例进行。
1.上样浓度对树脂吸附效果的影响
将构树叶浸提膏配浓度为1mg/mL，2mg/mL，3mg/mL，4mg/mL， 5mg/mL，加到φ15×300、柱高为10cm的层析柱中，吸附流速1 mL/min，每5mL收集一流分，检测每流份中的黄酮含量。当浓度为 4mg/mL时，黄酮吸附率达到最大为84.10％。
2.上样流速对树脂吸附效果的影响
将构树叶浸提膏配成浓度为4mg/mL，加到φ15×300、柱高为 10cm的层析柱中，吸附流速0.5mL/min，1mL/min，1.5mL/min， 2mL/min，2.5mL/min，每5mL收集一流分，检测每流份中的黄酮含量。当流速为0.5mL/min，黄酮的吸附率达到最大为85.20％，当流速为1mL/min时，黄酮的吸附率为84.10％，两者相差不大，考虑实验周期问题选用流速为1mL/min。
3.洗脱浓度对树脂吸附效果的影响
将构树叶浸提膏配成浓度为4mg/mL，加到φ15×300、柱高为 10cm的层析柱中，吸附流速1mL/min，至泄漏点后用蒸馏水洗涤树脂，去掉多于杂质，再用50％、60％、70％、80％的乙醇进行洗脱，洗脱流速1mL/min，每5mL收集一流分，检测每流份中的黄酮含量。当洗脱浓度为70％时，黄酮的洗脱率达到最大为85.00％。
4.洗脱流速对树脂吸附效果的影响
将构树叶浸提膏配成浓度为4mg/mL，加到φ15×300、柱高为 10cm的层析柱中，吸附流速1mL/min，至泄漏点后用蒸馏水洗涤树脂，去掉多于杂质，再用70％乙醇进行洗脱，洗脱流速0.5mL/min， 1mL/min，1.5mL/min，2mL/min，2.5mL/min，每5mL收集一流分，检测每流份中的黄酮含量。当洗脱流速为0.5mL/min时，黄酮的洗脱率达到最大为87.90％；当洗脱流速为1mL/min时，黄酮的洗脱率为85.40％，两者差距较小，考虑实验周期问题，选用洗脱流速为1 mL/min。
纯化后构树叶总黄酮的含量是纯化前的2.1倍，整个过程中黄酮的损失率为21.85％。
实施例3
1.新城疫病毒EID50的测定
(1)鸡胚培养：将SPF种蛋放入孵化器内进行孵育(37℃，相对湿度是45-60％)鸡卵每日翻动1-2次。孵至第4日，用检卵灯观察鸡胚发育情况，弃去未受精和死亡的鸡胚，孵育9天。
(2)稀释病毒：将新城疫病毒F48E8尿囊液1mL，作10倍经行稀释至10-11稀释度。
(3)接种鸡胚：每个稀释度接种6枚9日龄SPF鸡胚，接种量为0.1 mL。37℃温箱培养120小时。期间死亡的鸡胚4℃冷藏，弃去24小时内死亡的鸡胚。至第5日将所有鸡胚4℃冷藏过夜。收获每枚鸡胚尿囊液分别保藏。
(4)检测血凝效价：判断感染情况，HA≥1:128即感染。
(5)EID50为10-9.5/0.1mL。
2.构树叶总黄酮药物毒性试验
将构树叶总黄酮提取物配成0.025g/mL、0.05g/mL、0.1g/mL、 0.15g/mL，将不同浓度的药液分别接种于10枚9日龄SPF鸡胚的尿囊腔中，每只0.2mL，置37℃恒温箱孵育72h，每天观察存活情况，胚全部存活的最高药物浓度为正式试验的起始浓度。同时设生理盐水对照组。由上述试验可得，0.025g/mL、0.05g/mL的鸡胚全部存活，0.1g/mL死亡2枚、0.15g/mL死亡4枚，所以构树叶总黄酮的非致死剂量为0.05g/mL。
3.构树叶总黄酮对鸡新城疫病毒抑制试验
将试验分为组6个组，每组15枚鸡胚。Ⅰ组：先注射0.1mL4EID50病毒液，37℃温温箱孵育2h，再注射0.2mL0.05g/mL药液。Ⅱ组：先注射0.2mL 0.05g/mL药液到鸡胚中再注射0.1mL 4EID50病毒液37℃温箱孵育2h。Ⅲ组：先注射0.1mL 4EID50病毒液，再注射0.2mL0.05g/mL利巴韦林。Ⅳ组：先注射0.1mL 4EID50病毒液，再注射0.2mL生理盐水。Ⅴ组：注射0.3mL生理盐水。将上述处理的6个组鸡胚放在37℃恒温箱中孵育，每天照蛋2-3次，弃去24h内死亡的鸡胚。收取24-72h死胚和72h活胚尿囊液，低温保存备用。以血凝(HA)试验检测每组鸡胚尿囊液的病毒滴度。
表1：血凝效价结果
如表1所示。试验各组均有显著性差异(P＜0.05)，Ⅲ组显著低于Ⅰ组(P＜0.05)，与Ⅱ组无显著性差异。Ⅱ组显著低于Ⅰ组(P ＜0.05)。用药各组均显著低于只接病毒的Ⅳ组(P＜0.05)。病毒接种前后使用构树叶总黄酮均能抑制鸡胚中新城疫病毒的繁殖，且预防效果优于治疗效果。
Claims (3)
1.一种从构树中提取黄酮提取物的方法，其特征在于，所述方法包括如下的步骤：
1)将新鲜的构树叶自然阴干粉碎，过40目筛后制成构树叶粉末；
2)将上述步骤1)中的构树叶粉末，用乙醇和甲醇的提取液进行提取，获得的提取溶液，过滤浓缩，得到膏状物质，再将浸提膏用蒸馏水进行溶解获得构树叶粗提物溶解液；
所述的乙醇和甲醇的提取液中甲醇与乙醇的混合比例为1:2；提取温度70℃，微波反应提取时间9min，微波提取功率700W；构树叶粉末和提取液的质量体积比为1:35；
3)将步骤2)中的粗提物溶解液进行分离纯化，将粗提物溶解液通过AB-8树脂型，树脂用量为构树叶质量的0.5-2倍，上样浓度为4.0mg/mL，上样流速为1mL/min，浓度为70％乙醇作为洗脱液，乙醇流速为1mL/min；洗脱液冷冻干燥后获得构树黄酮提取物。
2.一种黄酮提取物，其特征在于，所述的黄酮提取物是由权利要求1所述的方法提取的。
3.权利要求2所述的黄酮提取物在制备抗鸡新城疫病毒的制品中的应用。
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Citations (4)
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| CN102423343A (zh) * | 2011-11-17 | 2012-04-25 | 大连中植环境生物科技有限公司 | 一种构树叶总黄酮提取物及其制备方法与应用 |
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