CN108519423A - 一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法，包括步骤：第一步：分别对需要检验产地来源的第一滑菇以及已知产地来源的第二滑菇进行多糖提取操作，获得对应的第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末；第二步：将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末分别与蒸馏水，按照预设的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；第三步：在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液进行电泳处理，获知并第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离，从而判断第一滑菇的产地来源。本发明可以准确、可靠地对滑菇进行产地溯源，有效防止假冒伪劣的滑菇产品的出现，实现滑菇产品的安全溯源，保证人们的食品安全。

Description

一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法

技术领域

本发明涉及食品技术领域，特别是涉及一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法。

背景技术

目前，滑菇(Pholiota nameko)，又名真珠菇或滑子蘑，在中国各地广泛栽培。滑菇因菌盖表面有粘液而得名，滑菇口味鲜美，营养价值高。滑菇中含有对肿瘤起抑制作用的多糖物质，并可预防葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌、结核杆菌的感染。滑菇有多种功效，如提高机体免疫功能，改善视力，增强智力，提高耐力。因它含有大量的纤维素因而降血脂效果明显，并且还有降低胆固醇的功效，此外，滑菇子实体具有黏液，可以对肿瘤起到一定的抑制作用。其中的滑菇多糖作为真菌多糖同样具有清除自由基、抗氧化、抗肿瘤、降血脂等功能。由于滑菇具有较高的经济效益，各地劣质的滑菇产品广泛存在于市场中。

同时，随着人类生活水平的提高，人们对食品安全的要求越来越高。食品溯源技术是当前最热门的食品质量控制技术，是解决食品安全问题的重要手段之一。它包括食品链的结构、食品安全信息的追踪和食品中合适标识的选择。其中从食品本身寻找天然的特征标签，以追溯食品产地来源或者生产者来源是重要的研究方向之一。食品产地溯源有利于保护具有优质食品的信誉，满足消费者对食品产地信息的知情权。对食品产地或者企业进行保护和督促，同时促进食品产地或企业的良性竞争，有效防止假冒伪劣食品的出现。

但是，目前还没有一种技术，其可以准确、可靠地对滑菇进行产地溯源，有效防止假冒伪劣的滑菇产品的出现，保证人们的食品安全。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法，其可以准确、可靠地对滑菇进行产地溯源，有效防止假冒伪劣的滑菇产品的出现，实现滑菇产品的安全溯源，保证人们的食品安全，有利于广泛地推广应用，具有重大的生产实践意义。

为此，本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法，包括以下步骤：

第一步：分别对需要检验产地来源的第一滑菇以及已知产地来源的第二滑菇进行多糖提取操作，获得对应的第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末；

第二步：将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末分别与蒸馏水，按照预设的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；

第三步：在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液进行电泳处理，获知第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离，然后对比第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离，如果相等，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源相同，否则，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源不相同。

其中，所述第一步包括以下子步骤：

第一子步骤：分别选取预设重量的第一滑菇和第二滑菇，然后分别加入蒸馏水；

第二子步骤：将第一滑菇和第二滑菇分别与蒸馏水充分搅拌；

第三子步骤：将第一滑菇和第二滑菇分别在蒸馏水中进行破碎打浆操作，获得对应的第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液；

第四子步骤：将第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液分别进行水浴浸提，并使得水浴浸提温度为80℃、浸提时间为6小时；

第五子步骤：分别对第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液进行离心处理，然后进行过滤后，对应获得第一滑菇上清液和第二滑菇上清液；

第六子步骤：继续将第一滑菇上清液和第二滑菇上清液通过水浴浸提加热至55℃，分别加入两倍体积的无水乙醇，并保持在预设温度下静置24小时进行醇析分层处理，获得对应的第一滑菇多糖和第二滑菇多糖。

其中，在第一步包括的第一子步骤中，第一滑菇和蒸馏水之间的料液比为1:8(g/ml)，第二滑菇和蒸馏水之间的料液比为1:8(g/ml)。

其中，在所述第一步包括的第六子步骤之后，还包括以下存储处理步骤：

首先，对于所获得的第一滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，以及所获得的第二滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，均进行合并离心，然后分别使用无水乙醇进行洗涤；

然后，自然干燥3小时，除去第一滑菇多糖和第二滑菇多糖中的水分和乙醇，获得第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末。

其中，在所述第一步包括的第六子步骤之后，还包括以下存储处理步骤：

首先，对于所获得的第一滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，以及所获得的第二滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，均进行分别离心，然后分别使用无水乙醇进行洗涤；

然后，自然干燥3小时，除去第一滑菇多糖和第二滑菇多糖中的水分和乙醇，获得第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末。

其中，所述第二步包括以下步骤：

当进行琼脂糖凝胶电泳时，将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末，分别与蒸馏水，按照1:30～1:60(g/ml)的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；

或者，当进行醋酸纤维薄膜电泳时，将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末，分别与蒸馏水，按照1:1-1:10(g/ml)的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液。

其中，所述第三步具体包括以下步骤：

首先，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行琼脂糖凝胶电泳，或者对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行醋酸纤维薄膜电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱；

然后，通过比较第一滑菇多糖和第二滑菇多糖的电泳图谱上显示的在电泳介质上的迁移距离，如果相等，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源相同，否则，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源不相同。

其中，在第三步中，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行琼脂糖凝胶电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱，具体包括以下子步骤：

第一子步骤：将第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别加入到对应的一份琼脂糖凝胶中；

第二子步骤：通过电泳仪，分别对放置在琼脂糖凝胶中的第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液进行电泳处理；

第三子步骤：对加入有第一滑菇多糖溶液的琼脂糖凝胶以及加入有第二滑菇多糖溶液的琼脂糖凝胶，分别依次进行染色、脱色处理，然后分别采集获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱，所述第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱上分别显示第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离；

在所述第二子步骤中，所述琼脂糖凝胶被放入预设的第一电泳缓冲液中，所述预设的第一电泳缓冲液为0.2mol/L的硼砂-氢氧化钠缓冲液或0.2mol/L的磷酸盐缓冲液；

在所述第三子步骤中，通过甲苯胺蓝溶液或考马斯亮蓝溶液来进行染色处理；

在所述第三子步骤中，通过预设脱色液来进行脱色处理，所述预设脱色液具体包含无水乙醇、冰乙酸和水，其中，无水乙醇、冰乙酸和水之间的体积比为9∶1∶10。

其中，所述琼脂糖凝胶的配备步骤为：

首先，将琼脂糖粉末加入到预设第二电泳缓冲液中，琼脂糖粉末和预设第二缓冲液之间的料液比为1:100(g/ml)，获得0.1％mol/L的琼脂糖凝胶溶液；

然后，加热至预设温度后，自然冷却，最终获得琼脂糖凝胶；

所述预设第二缓冲液是浓度为1.5mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液或0.2mol/L的磷酸盐缓冲液。

其中，在第三步中，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖和第二滑菇多糖分别进行醋酸纤维薄膜电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱，具体包括以下子步骤：

第一子步骤：将第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别涂覆在预设规格的一个醋酸纤维薄膜上；

所述醋酸纤维薄膜为经过预处理操作的醋酸纤维薄膜，所述预处理操作具体为：将醋酸纤维薄膜使用过预设第三缓冲液完全浸透，并用清洁的滤纸吸去表面多余的预设第三缓冲液；

所述预设第三缓冲液是浓度为0.05mol/L硼砂缓冲液；

第二子步骤：通过电泳仪，分别对涂覆有第一滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜以及涂覆有第二滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜进行电泳处理；

第三子步骤：对涂覆有第一滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜以及涂覆有第二滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜，分别依次进行染色、漂洗处理，然后分别采集获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱；

在所述第三子步骤中，通过甲苯胺蓝溶液来进行染色处理；

在所述第三子步骤中，通过预设漂洗液来进行漂洗处理，所述预设漂洗液具体包含无水乙醇、冰醋酸和水，其中，无水乙醇、冰醋酸和水之间的体积比为9∶1∶10。

由以上本发明提供的技术方案可见，与现有技术相比较，本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法，其可以通过比较不同产品来源的滑菇在电泳介质上的迁移距离特征，准确、可靠地对滑菇进行产地溯源，有效防止假冒伪劣的滑菇产品的出现，实现滑菇产品的安全溯源，保证人们的食品安全，有利于广泛地推广应用，具有重大的生产实践意义。

附图说明

图1为本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法的流程图；

图2为本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法在对第一滑菇和第二滑菇中的多糖进行琼脂糖凝胶电泳后所获得的电泳图，该图显示了第一滑菇和第二滑菇中的多糖的迁移距离；

图3为本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法在对第一滑菇和第二滑菇中的多糖进行醋酸纤维薄膜电泳时，点样区在醋酸纤维薄膜上的示意简图；

图4为本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法在对第一滑菇和第二滑菇中的多糖进行醋酸纤维薄膜电泳后所获得的电泳图，该图显示了第一滑菇和第二滑菇中的多糖的迁移距离。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面结合附图和实施方式对本发明作进一步的详细说明。

参见图1至图4，本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法，其可以通过比较不同产品来源的两种滑菇在电泳介质上的迁移距离特征，准确、可靠地对滑菇进行产地溯源，有效防止假冒伪劣的滑菇产品的出现，该方法具体包括以下步骤：

第一步：分别对需要检验产地来源的第一滑菇以及已知产地来源的第二滑菇(即预先准备的已知产地来源的、可靠的滑菇产品)进行多糖提取操作，获得对应的第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末；

第二步：将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末分别与蒸馏水，按照预设的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；

第三步：在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液进行电泳处理，获知第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离，然后对比第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离，如果相等，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源相同，否则，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源不相同。

在本发明中，关于第一步，可以包括以下子步骤：

第一子步骤：分别选取预设重量(例如60g)的第一滑菇和第二滑菇，然后分别加入蒸馏水；

具体实现上，第一滑菇和蒸馏水之间的料液比为1:8(g/ml)，第二滑菇和蒸馏水之间的料液比为1:8(g/ml)。当第一滑菇和第二滑菇的重量为60g时，对应的蒸馏水的体积为480ml。第一滑菇和第二滑菇可以分别放置在一个烧杯中。

需要说明的是，对于本发明，第一滑菇和第二滑菇应选取无明显组织伤痕、大小均一且干净的新鲜滑菇。

第二子步骤：将第一滑菇和第二滑菇分别与蒸馏水充分搅拌；

具体实施上，可以通过搅拌机将第一滑菇和第二滑菇分别在蒸馏水中，在1小时内每隔10分钟，即按照60转/分钟的速度搅拌3分钟。

第三子步骤：将第一滑菇和第二滑菇分别在蒸馏水中进行破碎打浆操作，获得对应的第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液；

具体实现上，可以通过组织捣碎机进行破碎打浆操作。

第四子步骤：将第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液分别进行水浴浸提(即热水加热)，并使得水浴浸提温度为80℃、浸提时间为6小时；

第五子步骤：分别对第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液进行离心处理(具体可以通过离心机，实现将其中的沉淀物与溶液相分离)，然后进行过滤(具体可以通过三层纱布)后，对应获得第一滑菇上清液和第二滑菇上清液；

需要说明的是，上清液是位于沉淀物上层的透明液体。在所述离心处理时，离心速度为：3000转/分钟，离心时间为15分钟。

第六子步骤：继续将第一滑菇上清液和第二滑菇上清液通过水浴浸提加热至55℃，分别加入两倍体积(即第一滑菇上清液或和第二滑菇上清液的两倍体积)的无水乙醇，并保持在预设温度(例如0～10℃，具体通过放置冰箱中实现)下静置24小时进行醇析分层处理(可以将多糖分为上层和下层两层)，获得对应的第一滑菇多糖和第二滑菇多糖。

具体实现上，在第六子步骤之后，还可以包括以下存储处理步骤：

首先，对于所获得的第一滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，以及所获得的第二滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，均进行合并离心(通过合并离心机实现，上层部分和下层部分混合在一起后进行离心操作)，然后分别使用无水乙醇进行洗涤(具体可以为等于合并离心后的第一滑菇多糖或者第二滑菇多糖的两倍体积，洗涤一次)；

然后，自然干燥3小时，除去第一滑菇多糖和第二滑菇多糖中的水分和乙醇，获得第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末。

在所述离心处理时，离心速度为：3000转/分钟，离心时间为15分钟。

具体实现上，在第六子步骤之后，还可以包括以下第七子步骤，即存储处理步骤：

首先，对于所获得的第一滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，以及所获得的第二滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，均进行分别离心(通过离心机实现，上层部分和下层部分分别进行离心操作)，然后分别使用无水乙醇进行洗涤(具体可以为等于合并离心后的第一滑菇多糖或者第二滑菇多糖的两倍体积，洗涤一次)；

然后，自然干燥3小时(具体可以放置在干净的烧杯中)，除去第一滑菇多糖和第二滑菇多糖中的水分和乙醇，获得第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末。

在所述离心处理时，离心速度为：3000转/分钟，离心时间为15分钟。

在本发明中，在第二步中，具体包括以下步骤：

当进行琼脂糖凝胶电泳时，将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末，分别与蒸馏水，按照1:30～1:60(g/ml)的料液比(优选为1:50)进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；

或者，当进行醋酸纤维薄膜电泳时，将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末，分别与蒸馏水，按照1:1-1:10(g/ml)的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；

需要说明的是，对于本发明，对于所获得的、备用的第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末，当需要进行电泳处理前，需要将其进行复溶，获得所需要的第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液。

在本发明中，在第三步中，具体可以包括以下步骤：

首先，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行琼脂糖凝胶电泳，或者对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行醋酸纤维薄膜电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱；

然后，通过比较第一滑菇多糖和第二滑菇多糖的电泳图谱上显示的在电泳介质上的迁移距离，如果相等，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源相同，否则，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源不相同。

对于本发明，具体实现上，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行琼脂糖凝胶电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱，具体包括以下子步骤：

第一子步骤：将第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别加入到对应的一份琼脂糖凝胶中；

具体实现上，可以通过现有的移液枪来将第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液(例如10微升)分别加入到对应的一份琼脂糖凝胶中。

第二子步骤：通过电泳仪，分别对放置在琼脂糖凝胶中的第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液进行电泳处理(具体的电泳电压可以为120V，电泳时间可以为2小时)；

需要说明的是，电泳仪是现有常规的电泳装置，具体为使用现有的双水平电泳仪。双水平电泳仪可以广泛用于凝胶电泳，可以对样品进行分离、提纯。其中进行电泳时的槽体是采用耐腐蚀的材料制成，电极有良好的导电性，并且耐腐蚀，耐高温。保证可以安全使用。电泳时主要使用透明电泳槽、电泳仪电源、带有导线的上盖等。

具体实现上，在所述第二子步骤中，所述琼脂糖凝胶还放入预设的第一电泳缓冲液中，所述预设的第一电泳缓冲液可以为0.2mol/L的硼砂-氢氧化钠缓冲液(PH值为10，即为氢氧化钠溶液和硼砂溶液的混合溶液)或0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(PH值为7.4，即为磷酸二氢钠溶液和磷酸氢二钠溶液的混合溶液)。

第三子步骤：对加入有第一滑菇多糖溶液的琼脂糖凝胶以及加入有第二滑菇多糖溶液的琼脂糖凝胶，分别依次进行染色、脱色处理，然后分别采集获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱(具体可以通过紫外透射检测仪来获得)，参见图2所示，所述第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱上分别显示第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离。

图2为本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法在对第一滑菇和第二滑菇中的多糖进行琼脂糖凝胶电泳后所获得的电泳图，该图显示了第一滑菇和第二滑菇中的多糖的迁移距离。如图2所示，在对第一滑菇和第二滑菇中各自的多糖样品进行琼脂糖凝胶电泳后，在紫外凝胶成像系统(具体为紫外透射检测仪)下观察所获得的电泳迁移距离不一致，具体为：第一滑菇多糖样品从上到下进行迁移的最终迁移位置如A方向列中出现的相对发亮的条带所示，第二滑菇多糖样品从上到下进行迁移的最终迁移位置如B方向列中出现的相对发亮的条带所示，由图2可知，此时，第一滑菇多糖样品和第二滑菇多糖样品的电泳迁移距离不一致，因此，通过对第一滑菇多糖样品和第二滑菇多糖样品进行琼脂糖凝胶电泳，可以推断出它们的产地来源不同。

具体实现上，在所述第三子步骤中，通过甲苯胺蓝溶液(溶质甲苯胺蓝所占溶液的质量百分比为0.5％)或考马斯亮蓝溶液(溶质考马斯亮蓝所占溶液的质量百分比为0.1％)来进行染色处理。

具体实现上，在所述第三子步骤中，通过预设脱色液来进行脱色处理。所述预设脱色液具体包含无水乙醇、冰乙酸和水，其中，无水乙醇、冰乙酸和水之间的体积比为9∶1∶10。

具体实现上，所述琼脂糖凝胶的配备步骤为：

首先，将琼脂糖粉末加入到预设第二电泳缓冲液中，琼脂糖粉末和预设第二缓冲液之间的料液比为1:100(g/ml)，获得0.1％mol/L的琼脂糖凝胶溶液；

然后，加热至预设温度(例如100℃～150℃，可以使用烤箱或者微波炉，持续时间可以为1分钟)后，自然冷却，最终获得琼脂糖凝胶。

需要说明的是，所述预设第二缓冲液可以为浓度为1.5mol/L的三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸HCl缓冲液(PH值为8.8，即将Tris粉末溶解到盐酸溶液中)或0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(PH值为7.4)。

对于本发明，具体实现上，在第三步中，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖和第二滑菇多糖分别进行醋酸纤维薄膜电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱，具体包括以下子步骤：

第一子步骤：将第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别涂覆在预设规格(例如8厘米长，2厘米宽)的一个醋酸纤维薄膜上；

具体实现上，所述醋酸纤维薄膜为经过预处理操作的醋酸纤维薄膜，所述预处理操作具体为：将醋酸纤维薄膜使用过预设第三缓冲液完全浸透(例如浸润时间为30分钟)，并用清洁的滤纸吸去表面多余的预设第三缓冲液。

具体实现上，所述预设第三缓冲液可以为浓度为0.05mol/L硼砂缓冲液(pH值为8，将硼砂放进蒸馏水中配置，并用质量浓度为5％的盐酸HCL进行PH值的调节)。

需要说明的是，具体实现上，所述醋酸纤维薄膜可以放入盛有预设缓冲液的培养皿内，使其漂浮在液面，然后用镊子轻压，使其全部浸入缓冲液内。待膜完全浸透(约30分钟)后取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时分辨出光滑面和粗糙面。此外，还可以在醋酸纤维薄膜的粗糙面上用铅笔距薄膜条一端(例如距离1.5cm处)划线来作为点样线并作好标记，同时标上正极和负极。

具体实现上，所述第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液(例如为5微升)在所述醋酸纤维薄膜上预设宽度的区域(如1～2mm，定义为点样区)进行涂覆，具体涂覆操作可以通过现有的移液枪和点样器来实施，例如，用移液枪将5微升滑菇多糖样品液均匀地涂在点样器表面，然后再用点样器将溶液涂覆在醋酸纤维薄膜上预设宽度的区域。

例如，参见图3所示，可以在一个醋酸纤维薄膜上的点样区上涂覆第一滑菇多糖溶液或第二滑菇多糖溶液。

第二子步骤：通过电泳仪，分别对涂覆有第一滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜以及涂覆有第二滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜进行电泳处理(具体的电泳电压可以为100V，电泳电流强度为4毫安，电泳时间可以为15分钟，并且电泳后平衡5分钟)；

具体为：将电泳仪的正极和负极，分别连接醋酸纤维薄膜的左右两端(即充当正极和负极的两端)。

第三子步骤：对涂覆有第一滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜以及涂覆有第二滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜，分别依次进行染色、漂洗处理，然后分别采集获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱(具体可以通过紫外透射检测仪来获得)，参见图4所示，所述第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱上分别显示第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离。

图4为本发明提供了一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法在对第一滑菇和第二滑菇中的多糖进行醋酸纤维薄膜电泳后所获得的电泳图，该图显示了第一滑菇和第二滑菇中的多糖的迁移距离。如图4所示，在对第一滑菇和第二滑菇中各自的多糖样品进行醋酸纤维薄膜电泳后，在紫外凝胶成像系统(具体为紫外透射检测仪)下观察所获得的电泳迁移距离不一致，具体为：第一滑菇多糖样品从上到下进行迁移的最终迁移位置如C方向列中下方出现的相对发亮的条带C1所示，第二滑菇多糖样品从上到下进行迁移的最终迁移位置如D方向列中下方出现的相对发亮的条带D1所示，在图4中，第一滑菇多糖样品和第二滑菇多糖样品分别在两个醋酸纤维薄膜上的点样区，在紫外凝胶成像系统下观察，对应为图4中的C2和D2所指向区域。由图4可知，此时，第一滑菇多糖样品和第二滑菇多糖样品的电泳迁移距离不一致，因此，通过对第一滑菇多糖样品和第二滑菇多糖样品进行醋酸纤维薄膜电泳，可以推断出它们的产地来源不同。

具体实现上，在所述第三子步骤中，通过甲苯胺蓝溶液(溶质甲苯胺蓝所占溶液的质量百分比为0.5％)来进行染色处理。

具体实现上，在所述第三子步骤中，通过预设漂洗液来进行漂洗处理。所述预设漂洗液具体包含无水乙醇、冰醋酸和水，其中，无水乙醇、冰醋酸和水之间的体积比为9∶1∶10。

对于本发明，对于电泳仪，需要说明的是，电泳仪由电泳槽和稳压电源两部分组成，两者之间有专门的连线连接。电泳槽有两个互相隔离的槽，各自装有缓冲液，接不同的电极，红色为正极，黑色为负极。每个槽上都有一根可移动的横杆，滤纸的一头搭在横杆上，另一头浸入缓冲液中，形成了滤纸桥。两杆之间的距离调节到略小于醋酸纤维薄膜的长度，点好样的醋酸纤维薄膜就搭在滤纸桥上。稳压电源用于调节电压和通电时间。当电泳槽和稳压电源连接好后，将点好样的醋酸纤维薄膜搭在滤纸桥上，盖上盖子，通电，调整好电压，进行电泳。在使用时，应当注意电泳槽的电极方向，负极应与醋酸纤维薄膜上涂覆有多糖溶液的区域在同一侧。

需要说明的是，鉴于不同产地来源的滑菇受产地生态环境的影响，其多糖的成分会有不同的变化，而且具有特异性，具体表现为：不同产地来源滑菇的多糖具有各自不同电泳迁移特征，不同来源的滑菇多糖在电泳介质上有各自不同的迁移特征，可以实现滑菇的精准溯源。因此，对于本发明，其提供的用于滑菇溯源的电泳方法，通过琼脂糖凝胶电泳或者醋酸纤维薄膜电泳的方式，可以展示出滑菇多糖的特异成分特征，即展示出滑菇的多糖在电泳介质上的迁移距离特征，以不同的迁移距离显示差异性，因此，对于需要检验产地来源的滑菇产品，本发明可以通过检测获得它的多糖的电泳迁移特征(即滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离特征)，然后将其与现有已知产地来源的滑菇的多糖具有的不同的电泳迁移特征进行对比比较，最终获得需要检验产地来源的滑菇产品对应的产地来源，实现精准溯源。

对于本发明，通过热水浸提和乙醇沉淀获得的滑菇的多糖耐热性强，性质稳定，将滑菇的多糖通过醇析制备，简单方便经济。同时，滑菇多糖醋酸纤维薄膜层析指纹分析技术的前处理简单经济，检测速度快，成本较低。此外，本发明还可推广到其它蘑菇类食品的食品安全溯源应用。

综上所述，与现有技术相比较，本发明提供的一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法，其可以通过比较不同产品来源的滑菇在电泳介质上的迁移距离特征，准确、可靠地对滑菇进行产地溯源，有效防止假冒伪劣的滑菇产品的出现，实现滑菇产品的安全溯源，保证人们的食品安全，有利于广泛地推广应用，具有重大的生产实践意义。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种用于滑菇溯源的多糖电泳方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步：分别对需要检验产地来源的第一滑菇以及已知产地来源的第二滑菇进行多糖提取操作，获得对应的第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末；

第二步：将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末分别与蒸馏水，按照预设的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；

第三步：在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液进行电泳处理，获知第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离，然后对比第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离，如果相等，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源相同，否则，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源不相同。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一步包括以下子步骤：

第一子步骤：分别选取预设重量的第一滑菇和第二滑菇，然后分别加入蒸馏水；

第二子步骤：将第一滑菇和第二滑菇分别与蒸馏水充分搅拌；

第三子步骤：将第一滑菇和第二滑菇分别在蒸馏水中进行破碎打浆操作，获得对应的第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液；

第四子步骤：将第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液分别进行水浴浸提，并使得水浴浸提温度为80℃、浸提时间为6小时；

第五子步骤：分别对第一滑菇组织浆液和第二滑菇组织浆液进行离心处理，然后进行过滤后，对应获得第一滑菇上清液和第二滑菇上清液；

第六子步骤：继续将第一滑菇上清液和第二滑菇上清液通过水浴浸提加热至55℃，分别加入两倍体积的无水乙醇，并保持在预设温度下静置24小时进行醇析分层处理，获得对应的第一滑菇多糖和第二滑菇多糖。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在第一步包括的第一子步骤中，第一滑菇和蒸馏水之间的料液比为1:8(g/ml)，第二滑菇和蒸馏水之间的料液比为1:8(g/ml)。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述第一步包括的第六子步骤之后，还包括以下存储处理步骤：

首先，对于所获得的第一滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，以及所获得的第二滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，均进行合并离心，然后分别使用无水乙醇进行洗涤；

然后，自然干燥3小时，除去第一滑菇多糖和第二滑菇多糖中的水分和乙醇，获得第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述第一步包括的第六子步骤之后，还包括以下存储处理步骤：

首先，对于所获得的第一滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，以及所获得的第二滑菇多糖内包含的上层部分和下层部分，均进行分别离心，然后分别使用无水乙醇进行洗涤；

然后，自然干燥3小时，除去第一滑菇多糖和第二滑菇多糖中的水分和乙醇，获得第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二步包括以下步骤：

当进行琼脂糖凝胶电泳时，将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末，分别与蒸馏水，按照1:30～1:60(g/ml)的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；

或者，当进行醋酸纤维薄膜电泳时，将第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末，分别与蒸馏水，按照1:1-1:10(g/ml)的料液比进行复溶，获得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第三步具体包括以下步骤：

首先，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行琼脂糖凝胶电泳，或者对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行醋酸纤维薄膜电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱；

然后，通过比较第一滑菇多糖和第二滑菇多糖的电泳图谱上显示的在电泳介质上的迁移距离，如果相等，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源相同，否则，判断第一滑菇和第二滑菇的产地来源不相同。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，在第三步中，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别进行琼脂糖凝胶电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱，具体包括以下子步骤：

第一子步骤：将第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别加入到对应的一份琼脂糖凝胶中；

第二子步骤：通过电泳仪，分别对放置在琼脂糖凝胶中的第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液进行电泳处理；

第三子步骤：对加入有第一滑菇多糖溶液的琼脂糖凝胶以及加入有第二滑菇多糖溶液的琼脂糖凝胶，分别依次进行染色、脱色处理，然后分别采集获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱，所述第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱上分别显示第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在电泳介质上的迁移距离；

在所述第二子步骤中，所述琼脂糖凝胶被放入预设的第一电泳缓冲液中，所述预设的第一电泳缓冲液为0.2mol/L的硼砂-氢氧化钠缓冲液或0.2mol/L的磷酸盐缓冲液；

在所述第三子步骤中，通过甲苯胺蓝溶液或考马斯亮蓝溶液来进行染色处理；

在所述第三子步骤中，通过预设脱色液来进行脱色处理，所述预设脱色液具体包含无水乙醇、冰乙酸和水，其中，无水乙醇、冰乙酸和水之间的体积比为9∶1∶10。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶的配备步骤为：

首先，将琼脂糖粉末加入到预设第二电泳缓冲液中，琼脂糖粉末和预设第二缓冲液之间的料液比为1:100(g/ml)，获得0.1％mol/L的琼脂糖凝胶溶液；

然后，加热至预设温度后，自然冷却，最终获得琼脂糖凝胶；

所述预设第二缓冲液是浓度为1.5mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液或0.2mol/L的磷酸盐缓冲液。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，在第三步中，在相同的电泳条件下，对第一滑菇多糖和第二滑菇多糖分别进行醋酸纤维薄膜电泳，获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱，具体包括以下子步骤：

第一子步骤：将第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分别涂覆在预设规格的一个醋酸纤维薄膜上；

所述醋酸纤维薄膜为经过预处理操作的醋酸纤维薄膜，所述预处理操作具体为：将醋酸纤维薄膜使用过预设第三缓冲液完全浸透，并用清洁的滤纸吸去表面多余的预设第三缓冲液；

所述预设第三缓冲液是浓度为0.05mol/L硼砂缓冲液；

第二子步骤：通过电泳仪，分别对涂覆有第一滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜以及涂覆有第二滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜进行电泳处理；

第三子步骤：对涂覆有第一滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜以及涂覆有第二滑菇多糖溶液的醋酸纤维薄膜，分别依次进行染色、漂洗处理，然后分别采集获得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖对应的电泳图谱；

在所述第三子步骤中，通过甲苯胺蓝溶液来进行染色处理；

在所述第三子步骤中，通过预设漂洗液来进行漂洗处理，所述预设漂洗液具体包含无水乙醇、冰醋酸和水，其中，无水乙醇、冰醋酸和水之间的体积比为9∶1∶10。