CN108517358A

CN108517358A - 一种辅助癫痫诊断的标志物及其检测试剂盒

Info

Publication number: CN108517358A
Application number: CN201810314408.4A
Authority: CN
Inventors: 田鑫; 王学峰; 王唯; 肖飞; 阳勇; 马远林; 胡以达; 徐馨; 谷万杰; 杨艺
Original assignee: First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University
Current assignee: First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University
Priority date: 2018-04-09
Filing date: 2018-04-09
Publication date: 2018-09-11

Abstract

本发明公开了一种辅助癫痫诊断的标志物及其检测试剂盒，涉及癫痫诊断领域。本发明的研究通过对一个癫痫家系患者的成员的KCNT1基因的检测发现，该家系中患有癫痫的成员的KCNT1基因上具有突变c.G1955T，该基因突变导致其对应的KCNT1蛋白的第652位氨基酸由谷氨酸(G)变异为缬氨酸(V)，为错义突变。含有c.G1955T突变的核酸分子，或者含有突变p.G652V的蛋白均可以作为癫痫诊断的生物标志物，从分子水平上为癫痫的诊断提供一种快速、可靠的检测辅助标记物。

Description

一种辅助癫痫诊断的标志物及其检测试剂盒

技术领域

本发明涉及癫痫诊断领域，具体而言，涉及一种辅助癫痫诊断的标志物及其检测试剂盒。

背景技术

癫痫是慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征。以脑部神经元高度同步化异常放电引起反复痫性发作为特征。癫痫是神经系统常见疾病之一，患病率仅次于脑卒中。癫痫的发病率与年龄有关。一般认为1岁以内患病率最高，1～10岁以后逐渐降低。我国癫痫患者男女之比为(1.15-1.7):1。

癫痫病因极其复杂，可分三大类，并存在多种影响发病的因素：

1.特发性癫痫

可疑遗传倾向且无其他明显病因，常在特定年龄段起病，有特征性临床及脑电图表现，诊断较明确。

2.症状性癫痫

中枢神经系统病变影响结构或功能等，如染色体异常、局灶性或弥漫性脑部疾病，以及某些系统性疾病所致。

(1)局限性或弥漫性脑部疾病①先天性异常胚胎发育中各种病因导致脑穿通畸形、小头畸形、先天性脑积水胼胝体缺如及大脑皮质发育不全，围生期胎儿脑损伤等；②获得性脑损伤如脑外伤，颅脑手术后，脑卒中后，颅内感染后，急性酒精中毒；③产伤所致新生儿癫痫发生率约为1％，分娩时合并产伤多伴脑出血或脑缺氧损害，新生儿合并脑先天发育畸形或产伤，癫痫发病率高达25％；④感染包括中枢神经系统细菌、病毒、真菌、寄生虫、螺旋体感染及AIDS神经系统并发症等；⑤脑血管疾病如脑动静脉畸形、脑梗死和脑出血等；⑥颅内原发性肿瘤如神经胶质瘤、脑膜瘤等；⑦遗传代谢性疾病如结节性硬化、脑-面血管瘤病、苯丙酮酸尿症等；⑧神经系统变性疾病如Alzheimer病、Pick病等约1/3的患者合并癫痫发作。

(2)系统性疾病①缺氧性脑病如心搏骤停、CO中毒窒息、麻醉意外和呼吸衰竭等可引起肌阵挛性发作或全身性大发作；②代谢性脑病如低血糖症，其他代谢及内分泌障碍如高血糖症、低钙血症、低钠血症，以及尿毒症、肝性脑病和甲状腺毒血症等均可导致癫痫发作；③心血管疾病如心脏骤停、高血压脑病等；④热性惊厥热性发作；⑤子痫；⑥中毒如酒精、异烟肼、卡巴唑等药物及铅、铊等重金属中毒。

3.隐源性癫痫

较多见，临床表现提示症状性癫痫，但未找到明确病因，可在特殊年龄段起病，无特定临床和脑电图表现。

癫痫的临床表现有以下：

1.全面强直-阵挛发作(大发作)

系指全身肌肉抽动及意识丧失的发作。以产伤、脑外伤、脑瘤等较常见。强直-阵挛发作可发生在任何年龄，是各种癫痫中最常见的发作类型。其典型发作可分为强直期、阵挛期、恢复期三个临床阶段。发作期间脑电图为典型的爆发性多棘波和棘-慢波综合，每次棘-慢波综合可伴有肌肉跳动。

2.单纯部分发作

是指脑的局部皮质异常放电而引起的与该部位的功能相对应的症状，发作时意识始终存在，包括运动、感觉、自主神经、精神症状及体征。分为四组：①伴运动症状者；②伴躯体感觉或特殊感觉症状者；③伴自主神经症状和体征者；④伴精神症状者。

3.复杂部分发作

习惯上又称精神运动性发作，伴有意识障碍。先兆多在意识丧失前或即将丧失时发生，发作后不能或部分不能回忆发作细节。4.失神发作(小发作)

其典型表现为意识障碍，而不伴先兆或发作后症状。

5.癫痫持续状态

是指单次癫痫发作超过5分钟，或者短期内癫痫频繁发作，以致患者尚未从前一次发作中完全恢复而又有另一次发作。癫痫持续状态是一种需要抢救的急症。

癫痫的治疗可分为控制发作、病因治疗、外科治疗、一般卫生及预防五个方面。其中最重要的是控制发作，目前以药物治疗为主。

临床上根据癫痫发作类型选用抗癫痫药物，一旦找到可以完全控制发作的药物和剂量，就应不间断地应用。一般应于发作完全控制后，如无不良反应再继续服用3～5年，方可考虑逐渐停药。目前多主张用单药治疗，确认单药治疗失败后，方可加用第2种药物。如失神发作或肌阵挛发作无法用单药控制者，可合用乙琥胺和丙戊酸钠，或其一加用苯二氮类。对合并多种发作类型者可以根据发作类型合理联合用药，但以不超过3种药物为宜。

用药宜从小剂量开始，然后逐渐增量，以既能控制发作，又不产生毒性反应的最小有效剂量为宜。换药宜采取先加用新药及后递减旧药的原则。不能骤然停药。

有些器质性脑病的癫痫患者可能需要终身服药；有人主张发病年龄大于30岁者需谨慎停药，因其停药后复发率较高，需长期服药或终身服药。但仍有10％～15％患者难以控制发作，可以采用外科治疗。

在预防方面：

1.预防癫痫病的发生，应详细地进行家系调查，了解患者双亲同胞和近亲中是否有癫痫发作及其发作特点，对能引起智力低下和癫痫的一些严重遗传性疾病，应进行产前诊断或新生儿期过筛检查，以决定终止妊娠或早期进行治疗。防止分娩意外，新生儿产伤是癫痫发病的重要原因之一，避免产伤对预防癫痫有重要意义。

2.对癫痫患者要及时诊断，及早治疗，治疗越早脑损伤越小，复发越少，预后越好。去除或减轻引起癫痫的原发病如颅内占位性疾病、代谢异常、感染等，对反复发作的病例也有重要意义。

3.癫痫是一种慢性疾病，可迁延数年、甚至数十年之久，因而可对患者身体、精神、婚姻以及社会经济地位等，造成严重的不良影响。患者在家庭关系、学校教育和就业等方面的不幸和挫折、文体活动方面的限制等，可使患者产生耻辱感和悲观心理，从而严重影响患者的身心发育，这就要求社会各界对癫痫患者给予理解和支持。

早诊断早治疗是防治癫痫的有效方法，但目前缺乏癫痫诊断相关的标志物。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于辅助癫痫诊断的生物标志物，该生物标志物可以用于辅助癫痫的诊断，为癫痫的诊断提供一种新的思路。

本发明的另一目的在于提供上述生物标志物的应用。

本发明的另一目的在于提供一种辅助癫痫诊断的试剂盒。

本发明的另一目的在于提供一种用于辅助癫痫诊断的基因芯片。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供了一种辅助癫痫诊断的生物标志物，其为核酸分子，其相对于正常KCNT1的编码序列具有突变c.G1955T。

从功能及结构角度来看，钾离子通道是电压门控离子通道中最复杂的一类。其复杂多样的功能包括：调控神经递质释放、心率、胰岛素释放、神经元兴奋性、上皮电解质转运、平滑肌收缩以及细胞体积。

KCNT1基因编码钙离子钾离子通道亚单位，被认为在离子电导与发育信号通路中起作用，该基因的突变会引起早发型幼儿癫痫脑病、婴儿恶性游走性部分性癫痫发作以及常染色体显性遗传夜间额叶癫痫。可变剪切可产生多种转录本变体。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述标志物的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的研究通过对一个癫痫家系患者的成员的KCNT1的检测测序发现，该家系中患有癫痫的成员的KCNT1上具有突变c.G1955T，该基因突变导致其对应的KCNT1蛋白的第652位氨基酸由谷氨酸(G)变异为缬氨酸(V)，为错义突变。该变异不属于多态性位点，在人群中发生频率极低。在HGMD专业版数据库中未见报道。经家系验证分析，受检人(图1中4号成员)之母(图1中3号成员)该位点无变异，受检人之父(图1中2号成员)该位点杂合变异，受检人之叔(图1中1号成员)该位点杂合变异。

因此，含有c.G1955T突变的核酸分子即相对于正常KCNT1的编码序列具有突变c.G1955T的核酸片段，或者含有突变p.G652V的蛋白均可以作为癫痫诊断的生物标志物，从分子水平上为癫痫的诊断提供一种快速、可靠的检测辅助标记物。

第二方面，本发明提供了一种辅助癫痫诊断的生物标志物，其为蛋白或多肽，其相对于正常KCNT1蛋白具有突变p.G652V。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述标志物的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

另一方面，本发明提供了检测第一方面所述的标志物的引物或探针、或检测权第二方面所述的生物标志物的抗体在制备癫痫辅助诊断试剂盒、癫痫产前诊断试剂盒或新生儿癫痫筛查试剂盒中的应用。

基于本发明的研究成果，本领域技术人员应当很容易将用于检测含有c.G1955T突变的KCNT1突变基因的引物或探针，以及用于检测含有p.G652V突变的KCNT1突变蛋白的抗体用于制备癫痫辅助诊断试剂盒、癫痫产前诊断试剂盒以及新生儿癫痫筛查试剂盒等领域中。

或者将检测含有c.G1955T突变的KCNT1突变基因的探针用于制备辅助癫痫诊断的基因芯片中。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述探针相对于正常KCNT1的编码序列的第1955位的碱基为T。

另一方面，本发明提供了一种辅助癫痫诊断的试剂盒，其含有用于检测第一方面所述的生物标志物的引物或探针；

或者所述试剂盒含有检测第二方面所述的生物标志物的抗体。

另一方面，本发明提供了一种用于辅助癫痫诊断的基因芯片，该基因芯片上含有用于与目标片段特异性结合的探针，所述目标片段性相对于正常KCNT1的编码序列具有突变c.G1955T。

所述探针与目标片段特异性结合的区域涵盖如下位置：相对于正常KCNT1的第1955位。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述探针相对于正常KCNT1编码序列的第1955位的碱基为T。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述目标片段为来自待测主体的KCNT1的编码序列。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述主体为人。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例1中的受检对象癫痫患者家系的遗传家系图谱；

图2-A为本发明实施例1中的遗传家系图谱中的4号成员的KCNT1测序结果图；

图2-B为本发明实施例1中的遗传家系图谱中的1号成员的KCNT1测序结果图；

图2-C为本发明实施例1中的遗传家系图谱中的2号成员的KCNT1测序结果图；

图2-D为本发明实施例1中的遗传家系图谱中的3号成员的KCNT1测序结果图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

1癫痫患者家系的KCNT1突变检测

1.1对象：来自重庆市丰都县的蔡氏癫痫家系先证者及其家系成员，该家系的遗传图谱如图1所示，检测对象包括3例癫痫患者(图中1 2 4号成员)，1例正常家庭成员(图中3号成员)；1号、2号、4号：全面强直-阵挛发作；3号：未患病。对所有1-4号家庭成员进行详细体格检查，在签署知情同意书后每人采集血液样本。

1.2测序：

将采集的血液样本送北京迈基诺基因科技股份有限公司测序进行癫痫基因突变筛查及验证，分析临床表型、基因型的关系，结果如下：

将测得的序列与正常KCNT1标准序列比对(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_020822.2)，测序结果如图2-A所示，先证者即4号成员KCNT1有1个杂合突变：c.1955G>T(编码区第1955号核苷酸由鸟嘌呤突变为胸腺嘧啶)，导致氨基酸改变p.G652V(第0000号氨基酸由谷氨酰胺变异为精氨酸)，为错义突变。该变异不属于多态性位点，在人群中发生频率极低。在HGMD专业版数据库中未见报道。经家系验证分析，在HGMD专业版数据库中未见报道。经家系验证分析，先证者(图1中4号成员)之母(图1中3号成员)该位点无变异，先证者之父(图1中2号成员)该位点杂合变异，先证者之叔(图1中1号成员)该位点杂合变异。图2的A-D中，箭头所示为KCNT1的1955位点的测序结果，1、2、4号成员在该位点的测序结果为均杂合突变(基因型为GT型)，3号成员在该位点的测序结果为无突变(基因型为GG型)。

c.1955G>T变异信息如下：

注：参考基因组版本为GRCH37/hg19；hom/het/hemi:bom表示此突变位点为纯合突变，het表示此突变位点为杂合突变，hemi表示此突变位点为半合子突变

综上分析可以看出，KCNT1基因的1955位点发生突G>T与癫痫发生相关，该位点可以作为辅助诊断癫痫疾病的靶点，且含有该突变c.G1955T的核酸片段或相应的具有突变p.G652V的KCNT1蛋白均可以作为辅助诊断癫痫疾病的生物标志物。相应的，用于检测含有具有突变c.G1955T的核酸片段的探针、引物或其他试剂以及检测具有突变p.G652V的KCNT1蛋白的抗体等均可以用于制备辅助诊断癫痫疾病的制剂盒。

实施例2

本实施例提供了检测KCNT1第1955位点突变的试剂盒，其包括：用于检测KCNT11955位点是否发生突变G1955T的引物,正向引物：GACTCTGGTGATTTGCAGGAA,反向引物：GCATAGGCCAAGAGGAACTG；以及PCR扩增试剂：10×Buffer(含15mM Mg²⁺)、dNTP(2.5Mm)、高保真DNA聚合酶pfu DNA聚合酶(5U/μl)以及ddH₂O。

使用试剂盒的检测KCNT1第1955位点是否发生突变G>T的方法，主要包括如下步骤：

(1)提取样本DNA，以此为模板，利用上述PCR反应试剂盒进行PCR反应。

(2)多重PCR产物检测：用琼脂糖凝胶对PCR扩增产物进行电泳检测PCR是否成功扩增，扩增片段理论值600bp。

(3)将PCR产物直接测序，将测序结果与正常KCNT1序列比对，可判断待测样本的KCNT11955位点是否发生突变G>T。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 重庆医科大学附属第一医院

<120> 一种辅助癫痫诊断的标志物及其检测试剂盒

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 3708

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atgccactcc ctgacggggc gcggaccccg gggggcgtct gccgggaggc gcgcggcggg 60

ggctacacca accggacctt cgagtttgac gacggccaat gcgcccccag gcggccctgc 120

gcgggggacg gcgcgctcct ggacaccgcc ggcttcaaga tgagcgacct ggactccgag 180

gtgctgccct tgccgccgcg ctaccgcttc cgggacctgc tgctgggcga cccgtccttc 240

cagaacgacg acagggtcca ggtggagttc tacgtcaacg agaacacctt caaggagcgg 300

ctcaagctgt tcttcatcaa aaaccaaaga tcgagcctga ggatccggct gttcaacttc 360

tccctgaagc tgctcacctg cctgctctac attgtgcgcg tcctgctcga tgacccggcc 420

ctgggcatcg gatgctgggg ctgcccaaag cagaactact ccttcaatga ctcgtcctcc 480

gagatcaact gggctcctat tctgtgggtg gagagaaaga tgacactgtg ggcgatccag 540

gtcatcgtgg ccataataag cttcctggag acgatgcttc tcatctacct cagctacaaa 600

ggcaacatct gggagcagat cttccgcgtg tccttcgtcc tggagatgat caacactctg 660

cccttcatca tcacgatctt ctggccgccg ctgcggaacc tgttcatccc cgtctttctg 720

aactgctggc tggccaagca cgcgctggaa aacatgatta atgacttcca ccgtgccatc 780

ctgcggacac agtcagccat gttcaaccag gtcctcatcc tcttctgcac cctgctgtgc 840

ctcgttttca cggggacctg cggcatccag cacctggagc gggcgggcga gaacctgtcc 900

ctcctgacct ccttctactt ctgcatcgtc accttctcca ccgtgggcta cggtgacgtc 960

acgcccaaga tctggccatc gcagctgctg gtggtcatca tgatctgcgt ggccctcgtg 1020

gtgctcccac tgcagttcga ggagctcgtc tacctctgga tggagcggca gaagtcaggg 1080

ggcaactaca gccgccaccg tgcgcagacg gagaagcacg tggtcctgtg tgtcagctcc 1140

ctcaagatcg accttctcat ggacttcctg aacgagttct acgcccaccc ccggctccag 1200

gactattacg tggtcatcct gtgccccacg gagatggatg tccaggtgcg cagagtcctg 1260

cagatccctc tgtggtccca gcgggtcatc tacctccagg gctctgcact caaagaccag 1320

gacctcatgc gagccaagat ggacaatggg gaggcctgct tcatcctcag cagcaggaac 1380

gaggtggacc gcacggctgc agaccaccag accatcctgc gcgcctgggc cgtgaaggac 1440

ttcgccccca actgccccct ctacgtccag atcctcaaac ctgaaaacaa gtttcacgtc 1500

aagtttgctg accacgtggt gtgtgaggag gagtgcaagt acgccatgct ggcgctgaac 1560

tgcatctgcc cggcgacctc caccctcatc accctgctgg tgcacacgtc ccgcggccag 1620

gagggacagg agtctccgga gcagtggcag cgcatgtatg ggcgctgctc cggcaacgag 1680

gtgtaccaca tccgcatggg tgacagcaag ttcttccgcg agtacgaggg caagagcttc 1740

acctacgcgg ccttccacgc ccacaagaag tatggcgtgt gcctcatcgg gctgaagcgg 1800

gaggacaaca agagcatcct gctgaacccg gggccccggc acatcctggc cgcctctgac 1860

acctgcttct acatcaacat caccaaggag gagaactcgg ccttcatctt caagcaggag 1920

gagaagcgga agaagagggc cttctcgggg caggtgctgc acgagggtcc ggcccgcctg 1980

cccgtgcaca gcatcatcgc ctccatgggg acagtggcca tggacctgca gggcacagag 2040

caccggccta cgcagagcgg cggtgggggc gggggcagca agctggcact gcccacggag 2100

aacggctcgg gcagccggcg gcccagcatc gcgcccgtcc tggaactggc cgacagctca 2160

gccctgctgc cctgcgacct gctgagcgac cagtcggagg atgaggtgac gccgtcggac 2220

gacgaggggc tctccgtggt agagtatgtg aagggctacc ctcccaactc gccctacatc 2280

ggcagctccc caaccctgtg ccacctcctg cctgtgaaag cccccttctg ctgcctgcgg 2340

ctggacaagg gctgcaagca caacagctat gaagacgcca aggcctacgg gttcaagaac 2400

aagctgatca tcgtctcggc agagacggcc ggcaatgggc tgtacaactt catcgtgcca 2460

ctgcgggcct actacagatc ccgcaaggag ctgaacccca tcgtgctgct gctggacaac 2520

aagcccgacc accacttcct ggaagccatc tgctgcttcc ccatggtcta ctacatggag 2580

ggctctgtgg acaacctgga cagcctgctg cagtgtggca tcatctatgc ggacaacctg 2640

gtggtggtgg acaaggagag caccatgagc gccgaggagg actacatggc ggacgccaag 2700

accatcgtca acgtgcagac catgttccgg ctcttcccca gcctcagcat caccacggag 2760

ctcacccacc cttccaacat gcgcttcatg cagttccgcg ccaaggacag ctactctctg 2820

gctctttcca aactagaaaa gagggagcga gagaatggct ccaacctggc cttcatgttc 2880

cgcctgccgt tcgccgccgg ccgcgtcttc agcatcagca tgttggacac actgctctac 2940

cagtccttcg tgaaggacta catgatcacc atcacccggc tgctgctggg cctggacacc 3000

acgccgggct cggggtacct ctgtgccatg aaaatcaccg agggcgacct gtggatccgc 3060

acgtacggcc gcctcttcca gaagctctgc tcctccagcg ccgagatccc cattggcatc 3120

taccggacag agagccacgt cttctccacc tcggagcccc acgacctcag agcccagtcc 3180

cagatctcgg tgaacgtgga ggactgtgag gacacacggg aagtgaaggg gccctggggc 3240

tcccgcgctg gcaccggagg cagctcccag ggccgccaca cgggcggcgg tgaccccgca 3300

gagcacccac tgctacggcg caagagcctg cagtgggccc ggaggctgag ccgcaaggcg 3360

cccaagcagg caggccgggc ggcggccgcg gagtggatca gccagcagcg cctcagcctg 3420

taccggcgct ctgagcgcca ggagctctcc gagctggtga agaaccgcat gaagcacctg 3480

gggctgccca ccaccggcta cgacgagatg aacgaccacc agaacaccct ctcctacgtc 3540

ctcatcaacc ctccgcccga cacgaggctg gagcccagtg acattgtcta tctcatccgc 3600

tccgaccccc tggctcacgt ggccagcagc tcccagagcc ggaagagcag ctgcagccac 3660

aagctgtcgt cctgcaaccc cgagactcgc gacgagacac agctctga 3708

<210> 2

<211> 1235

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Met Pro Leu Pro Asp Gly Ala Arg Thr Pro Gly Gly Val Cys Arg Glu

1 5 10 15

Ala Arg Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Arg Thr Phe Glu Phe Asp Asp Gly

20 25 30

Gln Cys Ala Pro Arg Arg Pro Cys Ala Gly Asp Gly Ala Leu Leu Asp

35 40 45

Thr Ala Gly Phe Lys Met Ser Asp Leu Asp Ser Glu Val Leu Pro Leu

50 55 60

Pro Pro Arg Tyr Arg Phe Arg Asp Leu Leu Leu Gly Asp Pro Ser Phe

65 70 75 80

Gln Asn Asp Asp Arg Val Gln Val Glu Phe Tyr Val Asn Glu Asn Thr

85 90 95

Phe Lys Glu Arg Leu Lys Leu Phe Phe Ile Lys Asn Gln Arg Ser Ser

100 105 110

Leu Arg Ile Arg Leu Phe Asn Phe Ser Leu Lys Leu Leu Thr Cys Leu

115 120 125

Leu Tyr Ile Val Arg Val Leu Leu Asp Asp Pro Ala Leu Gly Ile Gly

130 135 140

Cys Trp Gly Cys Pro Lys Gln Asn Tyr Ser Phe Asn Asp Ser Ser Ser

145 150 155 160

Glu Ile Asn Trp Ala Pro Ile Leu Trp Val Glu Arg Lys Met Thr Leu

165 170 175

Trp Ala Ile Gln Val Ile Val Ala Ile Ile Ser Phe Leu Glu Thr Met

180 185 190

Leu Leu Ile Tyr Leu Ser Tyr Lys Gly Asn Ile Trp Glu Gln Ile Phe

195 200 205

Arg Val Ser Phe Val Leu Glu Met Ile Asn Thr Leu Pro Phe Ile Ile

210 215 220

Thr Ile Phe Trp Pro Pro Leu Arg Asn Leu Phe Ile Pro Val Phe Leu

225 230 235 240

Asn Cys Trp Leu Ala Lys His Ala Leu Glu Asn Met Ile Asn Asp Phe

245 250 255

His Arg Ala Ile Leu Arg Thr Gln Ser Ala Met Phe Asn Gln Val Leu

260 265 270

Ile Leu Phe Cys Thr Leu Leu Cys Leu Val Phe Thr Gly Thr Cys Gly

275 280 285

Ile Gln His Leu Glu Arg Ala Gly Glu Asn Leu Ser Leu Leu Thr Ser

290 295 300

Phe Tyr Phe Cys Ile Val Thr Phe Ser Thr Val Gly Tyr Gly Asp Val

305 310 315 320

Thr Pro Lys Ile Trp Pro Ser Gln Leu Leu Val Val Ile Met Ile Cys

325 330 335

Val Ala Leu Val Val Leu Pro Leu Gln Phe Glu Glu Leu Val Tyr Leu

340 345 350

Trp Met Glu Arg Gln Lys Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Arg His Arg Ala

355 360 365

Gln Thr Glu Lys His Val Val Leu Cys Val Ser Ser Leu Lys Ile Asp

370 375 380

Leu Leu Met Asp Phe Leu Asn Glu Phe Tyr Ala His Pro Arg Leu Gln

385 390 395 400

Asp Tyr Tyr Val Val Ile Leu Cys Pro Thr Glu Met Asp Val Gln Val

405 410 415

Arg Arg Val Leu Gln Ile Pro Leu Trp Ser Gln Arg Val Ile Tyr Leu

420 425 430

Gln Gly Ser Ala Leu Lys Asp Gln Asp Leu Met Arg Ala Lys Met Asp

435 440 445

Asn Gly Glu Ala Cys Phe Ile Leu Ser Ser Arg Asn Glu Val Asp Arg

450 455 460

Thr Ala Ala Asp His Gln Thr Ile Leu Arg Ala Trp Ala Val Lys Asp

465 470 475 480

Phe Ala Pro Asn Cys Pro Leu Tyr Val Gln Ile Leu Lys Pro Glu Asn

485 490 495

Lys Phe His Val Lys Phe Ala Asp His Val Val Cys Glu Glu Glu Cys

500 505 510

Lys Tyr Ala Met Leu Ala Leu Asn Cys Ile Cys Pro Ala Thr Ser Thr

515 520 525

Leu Ile Thr Leu Leu Val His Thr Ser Arg Gly Gln Glu Gly Gln Glu

530 535 540

Ser Pro Glu Gln Trp Gln Arg Met Tyr Gly Arg Cys Ser Gly Asn Glu

545 550 555 560

Val Tyr His Ile Arg Met Gly Asp Ser Lys Phe Phe Arg Glu Tyr Glu

565 570 575

Gly Lys Ser Phe Thr Tyr Ala Ala Phe His Ala His Lys Lys Tyr Gly

580 585 590

Val Cys Leu Ile Gly Leu Lys Arg Glu Asp Asn Lys Ser Ile Leu Leu

595 600 605

Asn Pro Gly Pro Arg His Ile Leu Ala Ala Ser Asp Thr Cys Phe Tyr

610 615 620

Ile Asn Ile Thr Lys Glu Glu Asn Ser Ala Phe Ile Phe Lys Gln Glu

625 630 635 640

Glu Lys Arg Lys Lys Arg Ala Phe Ser Gly Gln Val Leu His Glu Gly

645 650 655

Pro Ala Arg Leu Pro Val His Ser Ile Ile Ala Ser Met Gly Thr Val

660 665 670

Ala Met Asp Leu Gln Gly Thr Glu His Arg Pro Thr Gln Ser Gly Gly

675 680 685

Gly Gly Gly Gly Ser Lys Leu Ala Leu Pro Thr Glu Asn Gly Ser Gly

690 695 700

Ser Arg Arg Pro Ser Ile Ala Pro Val Leu Glu Leu Ala Asp Ser Ser

705 710 715 720

Ala Leu Leu Pro Cys Asp Leu Leu Ser Asp Gln Ser Glu Asp Glu Val

725 730 735

Thr Pro Ser Asp Asp Glu Gly Leu Ser Val Val Glu Tyr Val Lys Gly

740 745 750

Tyr Pro Pro Asn Ser Pro Tyr Ile Gly Ser Ser Pro Thr Leu Cys His

755 760 765

Leu Leu Pro Val Lys Ala Pro Phe Cys Cys Leu Arg Leu Asp Lys Gly

770 775 780

Cys Lys His Asn Ser Tyr Glu Asp Ala Lys Ala Tyr Gly Phe Lys Asn

785 790 795 800

Lys Leu Ile Ile Val Ser Ala Glu Thr Ala Gly Asn Gly Leu Tyr Asn

805 810 815

Phe Ile Val Pro Leu Arg Ala Tyr Tyr Arg Ser Arg Lys Glu Leu Asn

820 825 830

Pro Ile Val Leu Leu Leu Asp Asn Lys Pro Asp His His Phe Leu Glu

835 840 845

Ala Ile Cys Cys Phe Pro Met Val Tyr Tyr Met Glu Gly Ser Val Asp

850 855 860

Asn Leu Asp Ser Leu Leu Gln Cys Gly Ile Ile Tyr Ala Asp Asn Leu

865 870 875 880

Val Val Val Asp Lys Glu Ser Thr Met Ser Ala Glu Glu Asp Tyr Met

885 890 895

Ala Asp Ala Lys Thr Ile Val Asn Val Gln Thr Met Phe Arg Leu Phe

900 905 910

Pro Ser Leu Ser Ile Thr Thr Glu Leu Thr His Pro Ser Asn Met Arg

915 920 925

Phe Met Gln Phe Arg Ala Lys Asp Ser Tyr Ser Leu Ala Leu Ser Lys

930 935 940

Leu Glu Lys Arg Glu Arg Glu Asn Gly Ser Asn Leu Ala Phe Met Phe

945 950 955 960

Arg Leu Pro Phe Ala Ala Gly Arg Val Phe Ser Ile Ser Met Leu Asp

965 970 975

Thr Leu Leu Tyr Gln Ser Phe Val Lys Asp Tyr Met Ile Thr Ile Thr

980 985 990

Arg Leu Leu Leu Gly Leu Asp Thr Thr Pro Gly Ser Gly Tyr Leu Cys

995 1000 1005

Ala Met Lys Ile Thr Glu Gly Asp Leu Trp Ile Arg Thr Tyr Gly

1010 1015 1020

Arg Leu Phe Gln Lys Leu Cys Ser Ser Ser Ala Glu Ile Pro Ile

1025 1030 1035

Gly Ile Tyr Arg Thr Glu Ser His Val Phe Ser Thr Ser Glu Pro

1040 1045 1050

His Asp Leu Arg Ala Gln Ser Gln Ile Ser Val Asn Val Glu Asp

1055 1060 1065

Cys Glu Asp Thr Arg Glu Val Lys Gly Pro Trp Gly Ser Arg Ala

1070 1075 1080

Gly Thr Gly Gly Ser Ser Gln Gly Arg His Thr Gly Gly Gly Asp

1085 1090 1095

Pro Ala Glu His Pro Leu Leu Arg Arg Lys Ser Leu Gln Trp Ala

1100 1105 1110

Arg Arg Leu Ser Arg Lys Ala Pro Lys Gln Ala Gly Arg Ala Ala

1115 1120 1125

Ala Ala Glu Trp Ile Ser Gln Gln Arg Leu Ser Leu Tyr Arg Arg

1130 1135 1140

Ser Glu Arg Gln Glu Leu Ser Glu Leu Val Lys Asn Arg Met Lys

1145 1150 1155

His Leu Gly Leu Pro Thr Thr Gly Tyr Asp Glu Met Asn Asp His

1160 1165 1170

Gln Asn Thr Leu Ser Tyr Val Leu Ile Asn Pro Pro Pro Asp Thr

1175 1180 1185

Arg Leu Glu Pro Ser Asp Ile Val Tyr Leu Ile Arg Ser Asp Pro

1190 1195 1200

Leu Ala His Val Ala Ser Ser Ser Gln Ser Arg Lys Ser Ser Cys

1205 1210 1215

Ser His Lys Leu Ser Ser Cys Asn Pro Glu Thr Arg Asp Glu Thr

1220 1225 1230

Gln Leu

1235

Claims

1.一种辅助癫痫诊断的生物标志物，其特征在于，其为核酸分子，其相对于正常KCNT1的编码序列具有突变c.G1955T。

2.根据权利要求1所述的辅助癫痫诊断的生物标志物，其特征在于，所述标志物的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种辅助癫痫诊断的生物标志物，其特征在于，其为蛋白或多肽，其相对于正常KCNT1蛋白具有突变p.G652V。

4.根据权利要求3所述的辅助癫痫诊断的生物标志物，其特征在于，所述标志物的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.检测权利要求1或2所述的标志物的引物或探针、或检测权利要求3或4所述的生物标志物的抗体在制备癫痫辅助诊断试剂盒、癫痫产前诊断试剂盒或新生儿癫痫筛查试剂盒中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述探针相对于正常KCNT1的编码序列的第1955位的碱基为T。

7.一种辅助癫痫诊断的试剂盒，其特征在于，其含有用于检测权利要求1或2所述的生物标志物的引物或探针；

或者所述试剂盒含有检测权利要求3或4所述的生物标志物的抗体。

8.一种用于辅助癫痫诊断的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片上含有用于与目标片段特异性结合的探针，所述目标片段性相对于正常KCNT1的编码序列具有突变c.G1955T；

9.根据权利要求8所述的基因芯片，其特征在于，所述探针相对于正常KCNT1编码序列的第1955位的碱基为T。

10.根据权利要求8或9所述的基因芯片，其特征在于，所述目标片段为来自待测主体的KCNT1的编码序列。