CN108517004A - 墨鱼高f值寡肽以及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种墨鱼高F值寡肽以及其制备方法。其中，一种墨鱼高F值寡肽，所述高F值寡肽包含若干如下肽段：肽段M1的序列为SEQ ID NO.1：Tyr‑Cys‑Trp‑Ala‑Val‑Lys‑Phe‑Leu‑Tyr；肽段M2的序列为SEQ ID NO.2：Leu‑Val‑Thr‑Arg‑Tyr‑Gln‑Val。首次从墨鱼中制备出纯度高、肽段序列已知的墨鱼高F值寡肽，且上述高F值寡肽F值高。

Description

墨鱼高F值寡肽以及其制备方法

技术领域

本发明涉及活性肽制备技术领域，特别是涉及墨鱼高F值寡肽以及其制备方法。

背景技术

墨鱼是贝类，亦称乌贼鱼、墨斗鱼、目鱼等。属软体动物门，头足纲，十腕目，乌贼科。中国所指的“墨鱼”或叫“乌贼”，大多是中国东海主产的曼氏无针乌贼和金乌贼两个种。

两者的外形差别不大，主要差别是：前者胴部卵圆形，稍瘦，无骨针，干制品叫螟虫甫鲞；后者有骨针，干制品叫乌贼干。乌贼遇到强敌时会以喷墨作为逃生的方法并伺机离开，因而有“乌贼”、墨鱼等名称。其皮肤中有色素小囊，会随“情绪”的变化而改变颜色和大小。乌贼会跃出海面，具有惊人的空中飞行能力。墨鱼壳，既乌贼板，学名叫乌贼骨，也是中医上常用的药材，称海螵蛸，是一味制酸、止血、收敛之常用中药。墨鱼中含有丰富的氨基酸、蛋白质、多肽，墨鱼提取物是生物活性肽的优良资源。

高F值寡肽是一类由2-9个氨基酸以独特的方式组合成的小肽混合物，其氨基酸混合物中支链氨基酸与芳香族氨基酸质量比值远高于正常人体中的比值。在临床上，高F值寡肽的F值的高低往往与生理活性密切相关，F值高、纯度高的高F值寡肽常用来治疗肝性脑病，苯丙酮尿症，改善病人术后的营养状况等。但是，现有的高F值寡肽F值和纯度都不高，多为混合肽，且肽的氨基酸序列多处于未知，而现有制备工艺复杂，且提取率小，不便于大规模生产。

发明内容

基于此，有必要提供一种纯度高、肽段序列已知的墨鱼高F值寡肽。

一种墨鱼高F值寡肽，所述高F值寡肽包含若干如下肽段：

肽段M1的序列为SEQ ID NO.1：Tyr-Cys-Trp-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Tyr；

肽段M2的序列为SEQ ID NO.2：Leu-Val-Thr-Arg-Tyr-Gln-Val。

首次从墨鱼中制备出纯度高、肽段序列已知的墨鱼高F值寡肽，且上述高F值寡肽F值高。

本发明还提供了一种的墨鱼高F值寡肽的制备方法。

包括下述步骤：

将墨鱼研磨，然后将研磨后的墨鱼按1:1-1:1.5加入蒸馏水中，并向搅碎的墨鱼中接种质量份数为1％-2％纳豆芽孢杆菌，然后控制发酵温度35℃-45℃，发酵78h-96h得发酵液；

将活性炭装入层析柱中，所述发酵液流经装有活性炭的层析柱，然后干燥制得寡肽粉末A；

凝胶层析，干燥得寡肽粉末B；

高效液相色谱梯度洗脱，收集洗脱液，干燥，制得墨鱼高F值寡肽。

上述墨鱼高F值寡肽的制备方法简单，省去了常规的两步法酶水解步骤。并采用活性炭替代活性炭进行动态脱芳，对芳香族氨基酸吸附效果好，且可以尽可能保留支链氨基酸，最终制备的墨鱼高F值寡肽F值高，且首次从墨鱼中制备出已知肽段序列的墨鱼高F值寡肽。

在其中一个实施例中，一种墨鱼高F值寡肽的制备方法，包括下述步骤：

将墨鱼研磨，然后将研磨后的墨鱼按1:1-1:1.5加入蒸馏水中，得到搅碎的墨鱼，并向搅碎的墨鱼中接种质量份数为1％-2％纳豆芽孢杆菌，然后控制发酵温度35℃-45℃，发酵78h-96h得发酵液；

将活性炭装入层析柱中，所述发酵液流经装有活性炭的层析柱，然后干燥制得寡肽粉末A；

凝胶层析，干燥得寡肽粉末B；

高效液相色谱梯度洗脱，收集洗脱液，干燥，制得墨鱼高F值寡肽。

在其中一个实施例中，在搅碎的墨鱼中接种质量份数为1％-2％纳豆芽孢杆菌后，再向所述搅碎的墨鱼中接种0.8％-1.2％胃蛋白酶。

在其中一个实施例中，所述活性炭的粒径为100目-200目。

在其中一个实施例中，所述滤液在所述层析柱的流速为0.6mL/min-1.2mL/min。

在其中一个实施例中，所述活性炭中掺杂纳米氧化锌或纳米氧化锰中的一种或多种。

在其中一个实施例中，按重量份计，所述纳米氧化锌的加入量为0.6％-1.0％、所述纳米氧化锰的加入量为2.0％-4.0％。

在其中一个实施例中，所述的凝胶层析中选用洗脱液为超纯水，超纯水的流速为0.32mL/min-0.45mL/min，每1.8-2.2min收集1管。

在其中一个实施例中，所述高效液相色谱纯化的条件为:采用梯度洗脱，洗脱时间、洗脱液成份及其百分比和流速依次为：0-15min，乙腈35％，超纯水65％，流速为0.12-0.22mL/min；16-50min，乙腈80％，超纯水20％，流速为0.35-0.52mL/min；51-70min,乙腈20％，超纯水80％，流速0.64-0.70mL/min。

在其中一个实施例中，所述干燥为冷冻干燥。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本申请一个实施例为一种墨鱼高F值寡肽，高F值寡肽包含若干如下肽段：

肽段M1的序列为SEQ ID NO.1：Tyr-Cys-Trp-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Tyr；

肽段M2的序列为SEQ ID NO.2：Leu-Val-Thr-Arg-Tyr-Gln-Val。

首次从墨鱼中制备出纯度高、肽段序列已知的墨鱼高F值寡肽，且上述高F值寡肽F值高。

本申请还提供了一种墨鱼高F值寡肽的制备方法。

一种墨鱼高F值寡肽的制备方法，包括下述步骤：

将墨鱼研磨，然后将研磨后的墨鱼按1:1-1:1.5加入蒸馏水中，并向搅碎的墨鱼中接种质量份数为1％-2％纳豆芽孢杆菌，然后控制发酵温度35℃-45℃，发酵78h-96h得发酵液；

将活性炭装入层析柱中(也称作活性炭动态脱芳)，所述发酵液流经装有活性炭的层析柱，然后干燥制得寡肽粉末A。

凝胶层析，干燥得寡肽粉末B。

高效液相色谱梯度洗脱，收集洗脱液，干燥，制得墨鱼高F值寡肽。

纳豆芽孢杆菌除了用于发酵豆制品外，一些药用动植物，如：海参、金针菇经纳豆芽孢杆菌发酵后也具有溶栓作用。近几年，在大力倡导食物原料综合加工利用、提高原料“零浪费”背景下，一些食品加工副产物，如：豆粕，啤酒糟，米糠等也被用作纳豆芽孢杆菌发酵基质，积极地拓宽了纳豆芽孢杆菌的应用范围。因为纳豆芽孢杆菌在生长繁殖过程中产生多种蛋白酶类，这些蛋白酶能将发酵基质中蛋白质降解为易被人体吸收利用的寡肽和氨基酸，不仅提高了纳豆芽孢杆菌发酵制品的营养价值，而且富集了寡肽和氨基酸的发酵液还具有抗氧化、抑菌、抗癌等生理活性。

在一优选实施方式中，水解pH为7.0-8.0，更利于胰蛋白酶和风味蛋白酶水解。

在一优选实施方式中，水解的温度在38℃-42℃，更利于纳豆芽孢杆菌水解。

在一优选实施方式中，接种质量份数为1.2％-2％纳豆芽孢杆菌。

在一优选实施方式中，还向搅碎的墨鱼中接种质量份数为0.8％-1.2％胃蛋白酶，优选地，接种质量份数为0.9％-1.1％胃蛋白酶。

胃蛋白酶对墨鱼细胞的破壁具有很好的效果，进而有助于纳豆芽孢杆菌将大的蛋白质酶解成小的寡肽。

其中，发明人还发现，活性炭可以吸附水解后的芳香族氨基酸，而对支链氨基酸的吸附较小，进而可以提高寡肽的F值。本申请选用活性炭动态脱芳：将活性炭装入层析柱中，滤液流经装有活性炭的层析柱，然后干燥制得寡肽粉末A。

本申请的发明人发现，相比于将活性炭直接加入水解液中进行脱芳的工艺(即静态脱芳)而言，活性炭动态脱芳具有工艺简单，省去了静态脱芳后的离心，过滤工艺，且水解液中会有活性炭残留，后续凝胶层析中，极易堵塞层析柱中的凝胶。为此，发明人分别对动态吸附和静态吸附进行了比对。并以220nrn和280nm的吸光值的比值(OD220/OD280)作为支链氨基酸和芳香族氨基酸的摩尔浓度比作为初步考核指标，研究表明，支链氨基酸多在220nm具有良好的吸光度，而芳香族氨基酸在220nm具有良好的吸光度。取同种规格(XFT-240型、粒径为150目)的活性炭进行脱芳试验，分别测定脱芳前后的220nm和280nm吸光度的比值，结果见表1。

表1

吸光度比值	动态脱芳后	静态脱芳后	未脱芳
				OD220/OD280	27.13	20.21	11.01

由表1可知，动态脱芳后的水解液脱芳效果最好。

在一优选实施方式中，活性炭为颗粒状活性炭，活性炭粒径为100目-200目。颗粒状活性炭具有孔径大、易解析等优点，以此做为动态吸附实验的填充材料，层析过程中不易堵塞层析管道，流速快，吸附效率高。此外，如果用粉末状活性炭填充后，进液速度和流出速度很难保持一致，造成层析柱顶端“溢液”现象。

在一优选实施方式中，滤液在层析柱的流速为0.6mL/min-1.2mL/min。

在一优选实施方式中，吸附柱的规格为Φ＝1.0×40.0cm，活性炭的添加量为柱体积的3/4。

通过控制滤液流速和活性炭的添加量(即层析柱中的碳层高度)两个因素，可以保证芳香族氨基酸更好的被吸附，且滤液不会在层析柱内停留时间过长，而吸附过多支链氨基酸寡肽。

在一优选实施方式中，活性炭中掺杂纳米氧化锌或纳米氧化锰中的一种或多种。可进一步增加其对游离的芳香族氨基酸的吸附率。也就是说，活性炭中掺杂纳米氧化锌、活性炭中掺杂纳米氧化锰或三者混合掺杂。其中，纳米氧化锌、纳米氧化锰的粒径在1-100nm之间。

在一优选实施方式中，按重量份计，纳米氧化锌的加入质量份为0.6％-1.0％、纳米氧化锰的加入质量份为2.0％-4.0％。

取规格为XFT-240型、粒径为150目的活性炭进行动态脱芳试验，脱芳后统一测定吸光度值，结果见表2。

表2

由表2可知，活性炭中掺杂一定比例的纳米氧化锌、纳米氧化锰可以提高其对游离的芳香族氨基酸的吸附率。

其中，凝胶层析的作用是将寡肽进一步分离纯化。在一优选实施方式中，凝胶选用SepHadex G-25凝胶。SepHadex G-25凝胶颗粒，对于小肽和其他小分子具有很好的分离效果，出峰峰型稳定。而且，SepHadexG-25凝胶颗粒在弱酸、碱溶液以及有机溶液中具有较好的耐热性、稳定性，经过活化后可以重复使用，还具有一定脱盐功能。

凝胶层析中选用洗脱液为超纯水，流速为0.32-0.45mL/min，每1.8-2.2min收集1管。

其中，高效液相色谱纯化的作用是进一步分离出纯的墨鱼高F值寡肽序列。

在一优选实施方式中，高效液相色谱纯化的条件为:采用梯度洗脱，洗脱时间、洗脱液成份及其百分比和流速依次为：0-15min，乙腈35％，超纯水65％，流速为0.12-0.22mL/min；16-50min，乙腈80％，超纯水20％，流速为0.35-0.52mL/min；51-70min,乙腈20％，超纯水80％，流速0.64-0.70mL/min。

在一优选实施方式中，干燥为冷冻干燥。

为了较好地保存墨鱼高F值寡肽，避免墨鱼高F值寡的有效成分失活，在一优选实施方式中，所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，在制得墨鱼高F值寡肽之后，还执行以下步骤：将墨鱼高F值寡肽至于一保存系统中，该保存系统中包括筒体和筒体外壁贴附的制冷片。制冷片用于对所述筒体提供制冷功能，如此，通过制冷片，能够使容置腔维持在较低的温度。又如，所述制冷片为半导体制冷片。又如，所述筒体还设置有电源模块，所述电源模块连接所述制冷片。又如，所述制冷片远离所述容置腔的侧面还贴设有散热石墨膜，如此，通过散热石墨膜能够使制冷片的制热侧的热量快速被散走，从而进一步提高制冷片对容置腔的制冷效果。又如，所述散热石墨膜的厚度为0.15毫米-5毫米，优选的，所述散热石墨膜的厚度为0.29毫米-2.4毫米，更优选的，所述散热石墨膜的厚度为1.43毫米，如此，能够使制冷片的制热侧的热量快速被散走，如此，能够进一步提高制冷片对容置腔的制冷效果。如此，能够较好地保存墨鱼高F值寡肽，减缓高F值寡肽的有效成分失活。

上述墨鱼高F值寡肽的制备方法简单，省去了常规的两步法酶水解步骤。并采用活性炭替代活性炭进行动态脱芳，对芳香族氨基酸吸附效果好，且可以尽可能保留支链氨基酸，最终制备的墨鱼高F值寡肽F值高，且首次从墨鱼中制备出已知肽段序列的墨鱼高F值寡肽。

以下结合具体实施例对本发明作进一步的阐述。

实施例1

墨鱼高F值寡肽的制备方法，具体步骤如下：

采用研磨机将墨鱼研磨，然后将研磨后的墨鱼按1:1加入蒸馏水中，并向墨鱼中接种质量份数为1％纳豆芽孢杆菌，然后控制发酵温度35℃，发酵78h得发酵液。

将150目的活性炭装入层析柱(Φ＝1.3×41.0cm)中，活性炭的添加量为柱体积的3/4,滤液以0.8mL/min流经装有活性炭的层析柱，然后干燥制得寡肽粉末A1。

SepHadex G-25凝胶层析：将SepHadexG-25凝胶置于蒸馏水中浸泡，浸泡温度为40℃，浸泡时间为4h。充分溶胀后倒入抽滤瓶，抽真空，在此期间，不断地换水并去掉漂浮在表面的杂质、吸掉凝胶颗粒中的气泡，直至凝胶沉淀后上清液清澈透明、未见任何悬浮物。装柱，平衡，将寡肽粉末溶于蒸馏水，寡肽粉末：蒸馏水质量体积比为10mg/mL，充分溶解后上样，以超纯水为流动相开始洗脱，流速为0.54mL/min，每2.0min收集1管。检测每管样品在220nm和280nm处的紫外吸收值，将样品按峰合并收集，冷冻干燥得寡肽粉末B1。

高效液相色谱纯化：取乙腈和超纯水作为洗脱液进行梯度洗脱，洗脱时间、洗脱液成份及其百分比和流速依次为：0-15min，乙腈35％，超纯水65％，流速为0.12mL/min；16-50min，乙腈80％，超纯水20％，流速为0.39mL/min；51-70min,乙腈20％，超纯水80％，流速0.66mL/min。

收集洗脱液，冷冻干燥，制得墨鱼高F值寡肽计为A1并对寡肽粉复溶于水中测定寡肽液的氨基酸组成结果见表3，经计算F值为26.31。

表3

实施例2

墨鱼高F值寡肽的制备方法，具体步骤如下：

采用研磨机将墨鱼研磨，然后将研磨后的墨鱼按1:1.3加入蒸馏水中，并向搅碎的墨鱼中接种质量份数为1.5％纳豆芽孢杆菌和质量份数为0.8％胃蛋白酶，然后控制发酵温度35℃，发酵78h得发酵液。

将150目的活性炭装入层析柱(Φ＝1.3×41.0cm)中，活性炭的添加量为柱体积的3/4,滤液以0.8mL/min流经装有活性炭的层析柱，然后干燥制得寡肽粉末A1。

SepHadex G-25凝胶层析：将SepHadexG-25凝胶置于蒸馏水中浸泡，浸泡温度为40℃，浸泡时间为4h。充分溶胀后倒入抽滤瓶，抽真空，在此期间，不断地换水并去掉漂浮在表面的杂质、吸掉凝胶颗粒中的气泡，直至凝胶沉淀后上清液清澈透明、未见任何悬浮物。装柱，平衡，将寡肽粉末溶于蒸馏水，寡肽粉末：蒸馏水质量体积比为10mg/mL，充分溶解后上样，以超纯水为流动相开始洗脱，流速为0.54mL/min，每2.0min收集1管。检测每管样品在220nm和280nm处的紫外吸收值，将样品按峰合并收集，冷冻干燥得寡肽粉末B1。

高效液相色谱纯化：取乙腈和超纯水作为洗脱液进行梯度洗脱，洗脱时间、洗脱液成份及其百分比和流速依次为：0-15min，乙腈35％，超纯水65％，流速为0.12mL/min；16-50min，乙腈80％，超纯水20％，流速为0.39mL/min；51-70min,乙腈20％，超纯水80％，流速0.66mL/min。

收集洗脱液，冷冻干燥，制得墨鱼高F值寡肽计为A2并对寡肽粉复溶于水中测定寡肽液的氨基酸组成结果见表4，经计算F值为29.01。

表4

实施例3

墨鱼高F值寡肽的制备方法，具体步骤如下：

采用研磨机将墨鱼研磨，然后将研磨后的墨鱼按1:1.5加入蒸馏水中，并向搅碎的墨鱼中接种质量份数为2％纳豆芽孢杆菌和质量份数为0.8％胃蛋白酶，然后控制发酵温度35℃，发酵78h得发酵液。

将150目的活性炭与质量份数为0.8％、50nm的纳米氧化锌和质量份数为2.5％、50nm的纳米氧化锰混合，然后装入层析柱(Φ＝1.3×41.0cm)中，添加量为柱体积的3/4,滤液以0.8mL/min流经装有掺杂纳米氧化锌和纳米氧化锰的活性炭层析柱中，然后干燥制得寡肽粉末A1。

SepHadex G-25凝胶层析：将SepHadexG-25凝胶置于蒸馏水中浸泡，浸泡温度为40℃，浸泡时间为4h。充分溶胀后倒入抽滤瓶，抽真空，在此期间，不断地换水并去掉漂浮在表面的杂质、吸掉凝胶颗粒中的气泡，直至凝胶沉淀后上清液清澈透明、未见任何悬浮物。装柱，平衡，将寡肽粉末溶于蒸馏水，寡肽粉末：蒸馏水质量体积比为10mg/mL，充分溶解后上样，以超纯水为流动相开始洗脱，流速为0.54mL/min，每2.0min收集1管。检测每管样品在220nm和280nm处的紫外吸收值，将样品按峰合并收集，冷冻干燥得寡肽粉末B1。

高效液相色谱纯化：取乙腈和超纯水作为洗脱液进行梯度洗脱，洗脱时间、洗脱液成份及其百分比和流速依次为：0-15min，乙腈35％，超纯水65％，流速为0.12mL/min；16-50min，乙腈80％，超纯水20％，流速为0.39mL/min；51-70min,乙腈20％，超纯水80％，流速0.66mL/min。

收集洗脱液，冷冻干燥，制得墨鱼高F值寡肽计为A3并对寡肽粉复溶于水中测定寡肽液的氨基酸组成结果见表5，经计算F值为30.21。

表5

此外，对A3的肽段采用de novo测序法测定氨基酸序列，得到如下序列:

肽段M1的序列为SEQ ID NO.1：Tyr-Cys-Trp-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Tyr；

肽段M2的序列为SEQ ID NO.2：Leu-Val-Thr-Arg-Tyr-Gln-Val。

对比例1

墨鱼高F值寡肽的制备方法大体同实施例1，不同之处在于，选用活性炭静态脱芳替代活性炭动态脱芳。其中，活性炭静态脱芳工艺为：滤液中加入粒径为150目的活性炭，活性炭和滤液固液比为1:18，pH为5.0，温度为22℃，吸附时间为3h。离心，将上清液冷冻干燥得到寡肽粉末。最终制得墨鱼高F值寡肽计为B1并对寡肽粉复溶于水中测定寡肽液的氨基酸组成结果见表6。

表6

综合实施例1至实施例3的寡肽液中氨基酸组成的测定结果可知，实施例3中的墨鱼高F值寡肽值最高，而掺入纳米氧化锌和纳米氧化锰的实施例3相比于其他实施例对芳香族氨基酸的吸附效果更好，进而制备的墨鱼高F值寡肽的F值也较其他组高。

此外，参照对比例1可知，采用活性炭静态脱芳代替活性炭动态脱芳进行吸附，吸附后的墨鱼高F值寡肽中的芳香族氨基酸含量过高，导致F低，活性效果差。

需要说明的是，各所述实施例中的所述重量份，即质量份，亦即质量份数，可以理解为克、毫克、千克、斤、公斤、英镑、吨等。以克为例，例如，1重量份为0.0001至10000克中的某一质量；例如，1重量份可以为0.001g、0.01g、0.02g、0.05g、0.1g、0.2g、0.5g、1g、2g、3g、4g、5g、10g、15g、20g、30g、50g、80g、100g、500g、1000g、5000g、10000g或50000g等，且不限于此，根据实际生产制造选用即可，各实施例以此类推。例如，1重量份为1克，0.1重量份即为0.1克，以此类推。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司

<120> 墨鱼高F值寡肽以及其制备方法

<141> 2018-04-02

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 1

Thr Cys Thr Ala Val Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 2

Leu Val Thr Ala Thr Gly Val

1 5

Claims (10)

1.一种墨鱼高F值寡肽，其特征在于，所述高F值寡肽包含若干如下肽段：

肽段M1的序列为SEQ ID NO.1：Tyr-Cys-Trp-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Tyr；

肽段M2的序列为SEQ ID NO.2：Leu-Val-Thr-Arg-Tyr-Gln-Val。

2.一种墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

将墨鱼研磨，然后将研磨后的墨鱼按1:1-1:1.5加入蒸馏水中，得到搅碎的墨鱼，并向搅碎的墨鱼中接种质量份数为1％-2％纳豆芽孢杆菌，然后控制发酵温度35℃-45℃，发酵78h-96h得发酵液；

将活性炭装入层析柱中，所述发酵液流经装有活性炭的层析柱，然后干燥制得寡肽粉末A；

凝胶层析，干燥得寡肽粉末B；

高效液相色谱梯度洗脱，收集洗脱液，干燥，制得墨鱼高F值寡肽。

3.根据权利要求2所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于，在搅碎的墨鱼中接种质量份数为1％-2％纳豆芽孢杆菌后，再向所述搅碎的墨鱼中接种0.8％-1.2％胃蛋白酶。

4.根据权利要求3所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于，所述活性炭的粒径为100目-200目。

5.根据权利要求2所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于，所述滤液在所述层析柱的流速为0.6mL/min-1.2mL/min。

6.根据权利要求2所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于，所述活性炭中掺杂纳米氧化锌或纳米氧化锰中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于，按重量份计，所述纳米氧化锌的加入量为0.6％-1.0％、所述纳米氧化锰的加入量为2.0％-4.0％。

8.根据权利要求2所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于：所述的凝胶层析中选用洗脱液为超纯水，超纯水的流速为0.32mL/min-0.45mL/min，每1.8-2.2min收集1管。

9.根据权利要求2所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于，所述高效液相色谱纯化的条件为:采用梯度洗脱，洗脱时间、洗脱液成份及其百分比和流速依次为：0-15min，乙腈35％，超纯水65％，流速为0.12-0.22mL/min；16-50min，乙腈80％，超纯水20％，流速为0.35-0.52mL/min；51-70min,乙腈20％，超纯水80％，流速0.64-0.70mL/min。

10.根据权利要求2所述的墨鱼高F值寡肽的制备方法，其特征在于，所述干燥为冷冻干燥。