CN108498857B - 一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法 - Google Patents

一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108498857B
CN108498857B CN201810457276.0A CN201810457276A CN108498857B CN 108498857 B CN108498857 B CN 108498857B CN 201810457276 A CN201810457276 A CN 201810457276A CN 108498857 B CN108498857 B CN 108498857B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
fullerene
chitosan
collagen
beta
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810457276.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108498857A (zh
Inventor
乔之光
刘永佳
孙彬彬
戴尅戎
朱邦尚
赵杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Original Assignee
Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine filed Critical Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Priority to CN201810457276.0A priority Critical patent/CN108498857B/zh
Publication of CN108498857A publication Critical patent/CN108498857A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108498857B publication Critical patent/CN108498857B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/02—Inorganic materials
    • A61L27/08—Carbon ; Graphite
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/18—Macromolecular materials obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
    • D01D—MECHANICAL METHODS OR APPARATUS IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS
    • D01D5/00—Formation of filaments, threads, or the like
    • D01D5/0007—Electro-spinning
    • D01D5/0015—Electro-spinning characterised by the initial state of the material
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D04—BRAIDING; LACE-MAKING; KNITTING; TRIMMINGS; NON-WOVEN FABRICS
    • D04H—MAKING TEXTILE FABRICS, e.g. FROM FIBRES OR FILAMENTARY MATERIAL; FABRICS MADE BY SUCH PROCESSES OR APPARATUS, e.g. FELTS, NON-WOVEN FABRICS; COTTON-WOOL; WADDING ; NON-WOVEN FABRICS FROM STAPLE FIBRES, FILAMENTS OR YARNS, BONDED WITH AT LEAST ONE WEB-LIKE MATERIAL DURING THEIR CONSOLIDATION
    • D04H1/00—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres
    • D04H1/70—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres characterised by the method of forming fleeces or layers, e.g. reorientation of fibres
    • D04H1/72—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres characterised by the method of forming fleeces or layers, e.g. reorientation of fibres the fibres being randomly arranged
    • D04H1/728—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres characterised by the method of forming fleeces or layers, e.g. reorientation of fibres the fibres being randomly arranged by electro-spinning
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/38—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of the spine, vertebrae or intervertebral discs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Textile Engineering (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Prostheses (AREA)

Abstract

本发明涉及人工髓核制备领域，具体为一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法，该载富勒烯人工髓核配方的制备方法，采用半成型的设计思路，可通过较小的侵入性植入患处，降低手术风险和术后移位的问题；将富勒烯加入人工髓核内，可降低髓核内自由基含量，达到减缓椎间盘退化的目的。将人工髓核设计成内层为干凝胶且外层为静电纺丝膜的结构，一方面可以利用外层的三维网状纤维膜可将内层的干凝胶包裹住，又不影响干凝胶的水化、膨胀又能起到防止凝胶移位，降低溢出的风险；另一方面能根据实际需要调节填充干凝胶的质量和纤维膜的直径，达到更好的填充的效果，更好的恢复椎间盘结构，且产品为干燥固体，易于保存，保存期长。

Description

一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法
技术领域
本发明涉及人工髓核制备领域，具体为一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法。
背景技术
据统计，2015年中国65岁及以上人口为14434万人，占全国人口的1/10以上，近十年65岁及以上人口逐年增加，意味着老年脊柱退行性疾病伴随着人口老龄化的高峰的即将到来也会呈现较高的增长趋势，导致活动受限和颈肩腰腿痛。椎间盘退变是导致脊柱退行性疾病的前提和病理基础，且椎间盘组织再生能力有限，一旦发生退变，很难阻止或逆转。
近年来的研究发现，椎间盘退变发生是多因素参与的过程，其中髓核细胞老化在椎间盘退变的过程中扮演着重要角色。细胞老化体现在细胞增殖能力及细胞数量丢失，同时细胞老化后TNF-α、IL-(1、6、8、10、20)、NO、PGE-2等炎症因子的分泌增加，进一步恶化邻近细胞的生存微环境，加速椎间盘细胞的老化。故通过控制炎症来改善细胞微环境，能在延缓椎问盘退变过程中起到重要作用。
椎间盘由髓核和纤维环组成，髓核内营养物质的降低和活性细胞数量减少可导致椎间盘盘的退化和功能丧失。有实验证明：保留纤维环，通过代替和补充髓核可以缓解疼痛，可保持椎间盘的完整和稳定，预防纤维环的进一步磨损，提高椎体高度和活动度。随着组织工程技术和材料学的发展，利用生物相容性材料结合可抗炎的富勒烯材料制备成可代替髓核的假体，为椎间盘修复提供了一种新的治疗思路。
通过预成形、原位注射成形和半成形的设计思路，制备成可代替髓核的假体各有优缺点。预成形人工髓核结构可控制和对外界的反应更快，但需要较高的手术侵入性。原位注射成型的手术风险小，在体内成型后可与髓核空腔壁紧密相贴，但机械性能不佳，三维结构很难控制，有纤维环切口和可能存在的纤维环裂隙溢出的风险。半成形人工髓核的设计思路介于二者之间，根据实际的需要设计植入体的尺寸，一种是放入经脱水处理的半成形凝胶假体，放入椎间隙后凝胶水化、膨胀；另外一种是向摘除的髓核腔内放入可折叠变形的气囊，再注入可原位凝固成半固态的高分子材料使气囊充分膨胀，进而使塌陷的椎间盘恢复应有的高℃。虽然近年来有许多关于人工髓核的研究，并取得一定进展，但是我们也发现临床上人工髓核多为预制式的，原位注射成形和半成形的人工髓核的设计还需进一步的研究。
椎间盘的退化过程中细胞的老化和凋亡起着重要作用，在退行性变过程中，椎间盘细胞的功能发生一系列的变化，数量和活力都会下降，基因表达也会与正常细胞有所差异。承认的椎间盘是无血管组织，氧含量较低，故髓核适于在无氧环境中保存活力。一旦椎间盘所受的生物力学发生变化机会引发氧自由基的大量产生，使髓核暴露在氧含量相对较高的环境中。氧自由基会直接损伤蛋白、脂质和DNA，抑制细胞的信号通路，导致细胞老化。通过在人工随和引入降低能降低髓核内氧自由基的含量的药物或材料，减缓髓核的进一步退化也是一种好的设计人工髓核的思路。目前针对髓核内氧自由基清除的研究还较少，而且，目前尚未有可以具备抗炎作用人工髓核的报道或者应用。
发明内容
本发明解决的技术问题在于克服现有技术的缺陷，提供一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法，该载富勒烯人工髓核配方的制备方法包括以下步骤：
S1、壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶的制备：
一、壳聚糖溶液的配制：1、材料的选取：使用50mL的广口烧杯进行若干浓度为0.IM的稀醋酸的量取以及使用天平进行一定量的脱乙酰度大于90％的壳聚糖粉末的称取；2、材料的混合：使用磁力搅拌机对烧杯内部量取的若干稀醋酸进行搅拌，并且将称取的壳聚糖粉末依次加入烧杯内部与其内部的稀醋酸进行混合，直至壳聚糖溶液的浓度为10-20wt％后，停止搅拌混合步骤；3、材料的消毒：将混合完成后的壳聚糖溶液置于高温高压灭菌锅的内部进行消毒；4、材料的存储：待消毒完成后，将壳聚糖溶液静置冷却，待冷却至室温后，将冷却至室温的壳聚糖溶液放入冰箱内进行存储，等待下一步骤；
二、Ⅱ型胶原溶液的配制：1、材料的选取：配置一定量浓度为0.02M的稀醋酸以及量取一定量的无菌Ⅱ型胶原；2、材料的消毒：使用滤膜将配置好的稀醋酸溶液进行过滤消毒，；3、材料的混合：将无菌Ⅱ型胶原依次加入配置好的稀醋酸溶液内，同时进行缓慢搅拌混合，二者溶解混合成为Ⅱ型胶原溶液，待混合后的溶液胶原浓度为2.5-5mg/mL后，停止搅拌；其中Ⅱ型胶原溶液的配制中的1-3步骤均在超净台中进行；4、材料的存储：将搅拌混合所得到的胶原浓度为2.5-5mg/mL的Ⅱ型胶原溶液进行封口后，放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；
三、β-甘油磷酸钠溶液的配制：1、材料的选取：选取一定量的β-甘油磷酸钠粉末，将其逐步加入到超纯水中进行溶解，直至β-甘油磷酸钠溶液的浓度为50wt％即可；2、材料的消毒：使用滤膜对溶解获得的浓度为50wt％的β-甘油磷酸钠溶液进行过滤消毒；3、材料的存储：将过滤消毒后的浓度为50wt％的β-甘油磷酸钠溶液放置于恒温冰箱内部，进行存储，等待下一步骤；
四、富勒烯/羟乙基纤维素溶液的配置：1、材料的选取：选取适量的羟乙基纤维素、不同浓度的富勒烯分子以及PBS溶液；2、材料的混合：将羟乙基纤维素逐步加入至PBS溶液内部进行溶解混合，通过二者的溶解混合形成羟乙基纤维素溶液，直至羟乙基纤维素溶液的浓度为10-50mg/mL即可；3、材料的消毒：使用滤膜对羟乙基纤维素溶液进行的过滤消毒；4、材料的二次混合：将多份不同浓度的富勒烯分子依次加入至浓度为10-50mg/mL的羟乙基纤维素溶液中进行二次混合；5、材料的存储：将二次混合后获得的富勒烯/羟乙基纤维素溶液放置在恒温冰箱内进行存储，等待下一步骤；
五、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液的配置：1、材料的混合：将步骤一中配置好的无菌壳聚糖溶液与步骤二中配置好的Ⅱ型胶原溶液按照2:1的体积比例加入无菌烧杯中，然后将烧杯置于冰上，进行无菌壳聚糖溶液以及Ⅱ型胶原溶液的搅拌混合，其中搅拌混合时长为10分钟；2、材料的存储：将搅拌混合后的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液进行封口，然后放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；
六、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、β-甘油磷酸钠溶液以及富勒烯/羟乙基纤维素溶液的混合：1、材料的混合：将步骤五中的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、步骤三中的β-甘油磷酸钠溶液以及步骤四中的富勒烯/羟乙基纤维素溶液置于超净台内部，其中壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液置于冰上进行搅拌，然后将配置好的浓度为50wt％的无菌β-甘油磷酸钠溶液逐步缓慢加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液内，进行混合，获得浓度为4-15wt％的壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠溶液，然后将富勒烯/羟乙基纤维素溶液加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠溶液的内部进行混合，将壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠/富勒烯/羟乙基纤维素的混合溶液置于温度为37℃的恒温水浴锅内，进行溶液的升温，待混合溶液呈凝胶状态后，置于冰箱内部进行冷冻干燥，从而获得富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶，其中冰箱的温度为-80℃，冷冻干燥时长为4小时。
S2、富勒烯聚氨酯静电纺丝膜的制备：
一、膜的成型：1、材料的选取：量取适量的聚氨酯、六氟异丙醇溶剂以及富勒烯，其中富勒烯的重量为聚氨酯重量的1～10％；2、材料的混合：将聚氨酯加入至六氟异丙醇溶剂内进行溶解混合，形成重量百分比为10～20％的溶液，然后将重量为聚氨酯重量的1～10％的富勒烯加入至混合溶液内，进行二次混合；3、材料的成膜：将二次混合后的富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂注入至静电纺丝装置内，进行静电纺丝，从而获得聚氨酯纳米纤维膜，其中静电纺丝装置的电压为20～30kV、喷丝头溶液流量为0.1～10mL/h及接收距离为10～20cm，其中聚氨酯纳米纤维膜的纤维直径为100～500nm；4、材料的成型：将静电纺丝后的聚氨酯纳米纤维膜进行冷冻干燥成型及真空干燥；
二、静电纺丝的过程：1、溶液的注入：将步骤一中的富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂置于注射器的内部，且通过其推进器进行推动，直至液滴稳定流下后，调高推进器电压；2、成型丝膜的接收：使用滚轴进行聚氨酯纳米纤维膜的接收，通过滚轴滚动进行纺丝过程中的聚氨酯纳米纤维膜的持续接收，从而形成完整的聚氨酯纳米纤维膜，其中滚轴为不锈钢材质构成。
S3、载富勒烯人工髓核的制备：一、内层的处理：将S1步骤中最终获得的富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶切成若干小块；二、外层的处理：将S2中的聚氨酯纳米纤维膜呈上下双层设置，其中二者之间留有间隔；三、载富勒烯人工髓核的成型：将步骤一中的若干小块的富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶放置在步骤二中的双层聚氨酯纳米纤维膜之间的间隔，并通过热压装置将双层的聚氨酯纳米纤维膜的边缘处进行密封，从而形成人工髓核。
优选的，所述S2步骤中的聚氨酯溶于六氟异丙醇溶剂的质量体积分数为10-20w/v％。
优选的，所述S1-S2步骤中的搅拌为磁力搅拌，其中磁力搅拌的转速为200-500rpm、磁力搅拌的温度为室温及搅拌的时间为12-24h。
优选的，所述S2步骤中的推进器的推进速度为0.1-10mL/h及电压为7-30kV，其中滚轴的接收距离为8-30cm、滚动速度为200-2000rpm、持续接收时间为0.5-20h。
优选的，所述S1步骤中第一步骤的消毒时长为20分钟，其中高温高压灭菌锅的温度为121℃。
优选的，所述S1步骤中第二、第三及第四步骤中的滤膜的孔径为0.22μm。
优选的，所述S1步骤中第一、第二、第三、第四及第五步骤的冰箱的温度均为4℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该载富勒烯人工髓核配方的制备方法，采用半成型的设计思路，可通过较小的侵入性植入患处，降低手术风险和术后移位的问题；将富勒烯加入人工髓核内，可降低髓核内自由基含量，达到减缓椎间盘退化的目的。将人工髓核设计成内层为干凝胶且外层为静电纺丝膜的结构，一方面可以利用外层的三维网状纤维膜可将内层的干凝胶包裹住，又不影响干凝胶的水化、膨胀又能起到防止凝胶移位，降低溢出的风险；另一方面能根据实际需要调节填充干凝胶的质量和纤维膜的直径，达到更好的填充的效果，更好的恢复椎间盘结构。本发明涉及的载富勒烯人工髓核的制备方法可得到系列化的不同规格的产品，且产品为干燥固体，易于保存，保存期长。
附图说明
图1为本发明的富勒烯人工髓核的制备流程示意图；
图2为本发明的细胞增殖MTT实验结果图示；
图3为本发明的细胞炎症实验结果。
图4为本发明的实施例六HE及番红O组织染色光镜观察结果示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-3，本发明提供一种技术方案：
一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法，该载富勒烯人工髓核配方的制备方法包括以下步骤：
S1、壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶的制备：
一、壳聚糖溶液的配制：1、材料的选取：使用50mL的广口烧杯进行若干浓度为0.IM的稀醋酸的量取以及使用天平进行一定量的脱乙酰度大于90％的壳聚糖粉末的称取；2、材料的混合：使用磁力搅拌机对烧杯内部量取的若干稀醋酸进行搅拌，并且将称取的壳聚糖粉末依次加入烧杯内部与其内部的稀醋酸进行混合，直至壳聚糖溶液的浓度为10-20wt％后，停止搅拌混合步骤；3、材料的消毒：将混合完成后的壳聚糖溶液置于高温高压灭菌锅的内部进行消毒；4、材料的存储：待消毒完成后，将壳聚糖溶液静置冷却，待冷却至室温后，将冷却至室温的壳聚糖溶液放入冰箱内进行存储，等待下一步骤；
二、Ⅱ型胶原溶液的配制：1、材料的选取：配置一定量浓度为0.02M的稀醋酸以及量取一定量的无菌Ⅱ型胶原；2、材料的消毒：使用滤膜将配置好的稀醋酸溶液进行过滤消毒，；3、材料的混合：将无菌Ⅱ型胶原依次加入配置好的稀醋酸溶液内，同时进行缓慢搅拌混合，二者溶解混合成为Ⅱ型胶原溶液，待混合后的溶液胶原浓度为2.5-5mg/mL后，停止搅拌；其中Ⅱ型胶原溶液的配制中的1-3步骤均在超净台中进行；4、材料的存储：将搅拌混合所得到的胶原浓度为2.5-5mg/mL的Ⅱ型胶原溶液进行封口后，放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；
三、β-甘油磷酸钠溶液的配制：1、材料的选取：选取一定量的β-甘油磷酸钠粉末，将其逐步加入到超纯水中进行溶解，直至β-甘油磷酸钠溶液的浓度为50wt％即可；2、材料的消毒：使用滤膜对溶解获得的浓度为50wt％的β-甘油磷酸钠溶液进行过滤消毒；3、材料的存储：将过滤消毒后的浓度为50wt％的β-甘油磷酸钠溶液放置于恒温冰箱内部，进行存储，等待下一步骤；
四、富勒烯/羟乙基纤维素溶液的配置：1、材料的选取：选取适量的羟乙基纤维素、不同浓度的富勒烯分子以及PBS溶液；2、材料的混合：将羟乙基纤维素逐步加入至PBS溶液内部进行溶解混合，通过二者的溶解混合形成羟乙基纤维素溶液，直至羟乙基纤维素溶液的浓度为10-50mg/mL即可；3、材料的消毒：使用滤膜对羟乙基纤维素溶液进行的过滤消毒；4、材料的二次混合：将多份不同浓度的富勒烯分子依次加入至浓度为10-50mg/mL的羟乙基纤维素溶液中进行二次混合；5、材料的存储：将二次混合后获得的富勒烯/羟乙基纤维素溶液放置在恒温冰箱内进行存储，等待下一步骤；
五、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液的配置：1、材料的混合：将步骤一中配置好的无菌壳聚糖溶液与步骤二中配置好的Ⅱ型胶原溶液按照2:1的体积比例加入无菌烧杯中，然后将烧杯置于冰上，进行无菌壳聚糖溶液以及Ⅱ型胶原溶液的搅拌混合，其中搅拌混合时长为10分钟；2、材料的存储：将搅拌混合后的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液进行封口，然后放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；
六、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、β-甘油磷酸钠溶液以及富勒烯/羟乙基纤维素溶液的混合：1、材料的混合：将步骤五中的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、步骤三中的β-甘油磷酸钠溶液以及步骤四中的富勒烯/羟乙基纤维素溶液置于超净台内部，其中壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液置于冰上进行搅拌，然后将配置好的浓度为50wt％的无菌β-甘油磷酸钠溶液逐步缓慢加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液内，进行混合，获得浓度为4-15wt％的壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠溶液，然后将富勒烯/羟乙基纤维素溶液加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠溶液的内部进行混合，将壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠/富勒烯/羟乙基纤维素的混合溶液置于温度为37℃的恒温水浴锅内，进行溶液的升温，待混合溶液呈凝胶状态后，置于冰箱内部进行冷冻干燥，从而获得富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶，其中冰箱的温度为-80℃，冷冻干燥时长为4小时。
S2、富勒烯聚氨酯静电纺丝膜的制备：
一、膜的成型：1、材料的选取：量取适量的聚氨酯、六氟异丙醇溶剂以及富勒烯，其中富勒烯的重量为聚氨酯重量的1～10％；2、材料的混合：将聚氨酯加入至六氟异丙醇溶剂内进行溶解混合，形成重量百分比为10～20％的溶液，然后将重量为聚氨酯重量的1～10％的富勒烯加入至混合溶液内，进行二次混合；3、材料的成膜：将二次混合后的富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂注入至静电纺丝装置内，进行静电纺丝，从而获得聚氨酯纳米纤维膜，其中静电纺丝装置的电压为20～30kV、喷丝头溶液流量为0.1～10mL/h及接收距离为10～20cm，其中聚氨酯纳米纤维膜的纤维直径为100～500nm；4、材料的成型：将静电纺丝后的聚氨酯纳米纤维膜进行冷冻干燥成型及真空干燥；
二、静电纺丝的过程：1、溶液的注入：将步骤一中的富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂置于注射器的内部，且通过其推进器进行推动，直至液滴稳定流下后，调高推进器电压；2、成型丝膜的接收：使用滚轴进行聚氨酯纳米纤维膜的接收，通过滚轴滚动进行纺丝过程中的聚氨酯纳米纤维膜的持续接收，从而形成完整的聚氨酯纳米纤维膜，其中滚轴为不锈钢材质构成。
S3、载富勒烯人工髓核的制备：一、内层的处理：将S1步骤中最终获得的富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶切成若干小块；二、外层的处理：将S2中的聚氨酯纳米纤维膜呈上下双层设置，其中二者之间留有间隔；三、载富勒烯人工髓核的成型：将步骤一中的若干小块的富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶放置在步骤二中的双层聚氨酯纳米纤维膜之间的间隔，并通过热压装置将双层的聚氨酯纳米纤维膜的边缘处进行密封，从而形成人工髓核。
作为本发明的一种技术优化方案，所述S2步骤中的聚氨酯溶于六氟异丙醇溶剂的质量体积分数为10-20w/v％。
作为本发明的一种技术优化方案，所述S1-S2步骤中的搅拌为磁力搅拌，其中磁力搅拌的转速为200-500rpm，例如：可以是200rpm、300rpm、400rpm或500rpm；磁力搅拌的温度为室温及搅拌的时间为12-24h，例如：可以是12h、16h、18h、20h、22h或24h，将所述搅拌时间限定在此范围是为了保证富勒烯和聚氨酯完全溶解且溶液较均匀，时间不宜过长会导致溶剂的挥发。
作为本发明的一种技术优化方案，所述S2步骤中的推进器的推进速度为0.1-10mL/h，例如：可以是0.1mL/h、0.5mL/h、1mL/h、2mL/h、4mL/h、5mL/h、6mL/h、8mL/h或10mL/h，速度过快会导致纺丝溶液滴出或纤维直径过大，速度过慢则会加长纺丝时间；电压为7-30kV，例如可以是7kV、8kV、10kV、14kV、18kV、20kV、22kV、25kV、28kV或30kV，将电压限制在此范围内是为了保证连续的纤维的顺利形成，电压过低纺丝溶液无法形成纤维，电压过高则使纺丝过程不稳定，导致纺丝不连续；其中滚轴的接收距离为8-30cm、滚动速度为200-2000rpm，例如可以是200rpm、500rpm、800rpm、1000rpm、1200rpm、1500rpm、1800rpm或2000rpm；持续接收时间为0.5-20h，例如可以是0.5h、1h、2h、5h、8h、10h、15h或20h。将纺丝时间限制在此范围主要是为了控制纺丝膜的厚度。时间过短，膜过薄，力学强度差；时间过长，膜过厚，透气性不好，均会限制纺丝膜的应用。。
作为本发明的一种技术优化方案，所述S1步骤中第一步骤的消毒时长为20分钟，其中高温高压灭菌锅的温度为121℃。
作为本发明的一种技术优化方案，所述S1步骤中第二、第三及第四步骤中的滤膜的孔径为0.22μm。
作为本发明的一种技术优化方案，所述S1步骤中第一、第二、第三、第四及第五步骤的冰箱的温度均为4℃。
实施例1
1.材料准备
天平称取一定量的脱乙酰度大于90％的壳聚糖粉末备用，量取若干浓度为0.IM的稀醋酸于50mL的广口烧杯中备用，磁力搅拌机搅拌下，将称量的壳聚糖粉末逐步加入的配制好的稀醋酸中搅拌约3小时，至壳聚糖溶液变得清澈透亮，最终获得浓度约为15wt％的壳聚糖溶液，将搅拌均匀的壳聚糖溶液置于121℃的高温高压灭菌锅中消毒20分钟，待灭菌后的壳聚糖溶液温度降至室温后放入4℃冰箱保存备用.
在超净台中，配制一定量的浓度为0.02M的稀醋酸，0.22μm的滤膜过滤消毒，将购买的无菌Ⅱ型胶原溶解于已消毒的0.02M的醋酸溶液中，缓慢搅拌，直至胶原完全溶解，最终获得的胶原浓度为3.5mg/mL，将Ⅱ型胶原溶液封口于4℃冰箱保存。
将β-甘油磷酸钠粉末溶解于超纯水中，获得浓度为50wt％的β-甘油磷酸钠溶液，0.22μm的滤膜过滤消毒，同样于4℃恒温冰箱保存。
将羟乙基纤维素溶解在PBS中，获得浓度为25mg/mL的β-甘油磷酸钠溶液，0.22μm的滤膜过滤消毒，加入相对于羟乙基纤维素重量5％的富勒烯于溶液中，于4℃恒温冰箱保存。
聚氨酯溶于六氟异丙醇溶剂中，配成重量百分比为12％的溶液，添加相对于聚氨酯重量5％的富勒烯充分溶解，室温磁力搅拌的转速为500rpm，搅拌12h。
2.干凝胶的制备
在超净台中，量取配制好的无菌壳聚糖溶液与配制好的胶原溶液按2:1的体积比例加入无菌烧杯中，于冰上搅拌10分钟后封口置入4℃冰箱保存备用。在超净台中，于冰上搅拌下将先前配制好的无菌50wt％的β-甘油磷酸钠溶液缓慢逐步滴入到配制好的壳聚糖/胶原溶液中，β-甘油磷酸钠的最终浓度为6wt％。将配制富勒烯/羟乙基纤维素溶液加入壳聚糖/胶原蛋白/β-甘油磷酸钠中，置于37℃的恒温水浴锅中30分钟，溶液呈凝胶状态后，放于-80℃冰箱4小时后冷冻干燥，得到富勒烯的壳聚糖/胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶。
3.静电纺丝膜的制备
将富勒烯/聚氨酯六氟异丙醇溶液注入到静电纺丝装置中，置于电压25kV，喷丝头溶液流量为1.5mL/h、接收距离为20cm的条件下进行静电纺丝，获得纤维直径为200nm的聚氨酯纳米纤维膜,所得膜冷冻干燥，真空干燥。
3.热压成型
将载富勒烯的壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶切成若干小块，称量干凝胶25mg；将富勒烯/聚氨酯静电纺丝膜裁剪成直径为10mm的两块薄膜；干凝胶置于上下两层纤维膜中间，用热压装置将膜边缘密封，即得载富勒烯人工髓核。
将按上述条件制备的载富勒烯人工髓核进行细胞存活率表征。将载富勒烯人工髓核放入96孔板中进行培养，然后利用MTT法检测该支架中的髓核细胞活力。分别培养1，2，4，8和10天后,弃旧培养基后加入PBS冲洗一遍去除死细胞，每孔加入200μL的无血清培养基和50μL的MTT溶液，于37℃条件下孵育处理4h。然后弃旧培养基后每孔加入200μL的DMSO充分溶解甲瓒结晶，取100μL溶解液利用酶标仪在490nm波长处检测吸光值。每个时间点进行三个平行孔实验。
MTT结果如图2所示，显示该支架上的软骨细胞具有良好的增殖行为，其细胞活力较好。
实施例二
本实施例的工艺方法与实施例一相同，将制备的载富勒烯人工髓核进行抗炎能力表征。利用LPS脂多糖构建巨噬细胞RAW264.7炎性细胞模型，然后分别将未添加富勒烯人工髓核与载富勒烯人工髓核与同等数目的炎性细胞共培养。培养1,2和3天后，利用ELASA试剂盒检测TNF-α和IL-6的含量，并做柱状图。
抗炎实验结果如图3所示，载富勒烯人工髓核的TNF-α和IL-6的含量要显著低于未添加富勒烯组，这表明载富勒烯人工髓核发挥抗炎作用，降低了RAW264.7巨噬细胞的炎性水平。
实施例三
本实施例的工艺方法与实施例一相同，将获得的载富勒烯人工髓核植入椎间盘髓核缺损处。
方法：取一个刚屠宰的成年公牛一段尾椎，将其附着的软组织去除干净，保存在20℃的冰箱中备用。使用外科手术刀在椎间盘前外侧纤维环上开个小切口，直达髓核腔，其中小切口直径约3-4mm。用髓核刮勺将凝胶状的髓核挖去直径为10mm的球形，将载富勒烯人工髓核通过微创手术放置于髓核空腔。
结果：载富勒烯人工髓核以预先半成型的方式直接放置于髓核空腔，创伤小，随着载富勒烯人工髓核的吸水溶胀，可充盈个髓核缺损空间，具有适配性，不易脱出。
实施例四
本实施例的工艺方法与实施例四相同，将获得的载富勒烯人工髓核植入椎间盘髓核缺损处后进行离体培养两周后，进行生化指标的检测。
方法：羟脯氨酸含量检测，GAG含量检测以及DNA含量检测，相关实验步骤参考试剂盒说明书以及相关文献报道。
结果：
Figure GDA0001731863020000141
实验结果表明，人工髓核植入两周后，椎间盘内羟脯氨酸、GAG和DNA含量与正常髓核组无明显差异。
实施例五
本实施例的工艺方法与实施例四相同，将获得的载富勒烯人工髓核植入椎间盘髓核缺损处后进行离体培养两周后，进行体外生物学性能研究。
方法：用生物力学试验机进行抗压实验，实验温度25℃，实验湿度20％，压缩高度比设为100％，压缩速度5mm/min。正常新鲜牛尾椎间盘作对照。
结果：
Figure GDA0001731863020000151
验结果表明，人工髓核植入两周后，最大载荷、抗压强度、屈服强度及弹性模量与缺损髓核组
相比有较大提高，恢复部分椎间盘的生物力学性能，与正常髓核组差异较小。
实施例六
本实施例的工艺方法与实施例四相同，将获得的载富勒烯人工髓核植入椎间盘髓核缺损处后进行离体培养两周后，进行HE及番红O组织染色光镜观察。
方法：髓核区样本置入4％多聚甲醛溶液中，4℃固定24小时，梯度乙醇脱水，二甲苯处理后常规石蜡包埋切片，层厚5μm切片，组织切片置于带有正电荷的载玻片上，55℃加热保证组织切片与玻片的粘附。进行HE、番红O染色，在光学显微镜下观察。
结果：如图4所示。HE及番红O组织染色结果提示，两周后随人工髓核的植入，有进展性的组织形成。可见人工髓核的孔隙被大量新生的细胞外基质所填充组织结构变得更为致密。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种载富勒烯人工髓核的制备方法，其特征在于：该载富勒烯人工髓核的制备方法包括以下步骤：
S1、富勒烯/壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶的制备：
一、壳聚糖溶液的配制：1、材料的选取：使用50 mL的广口烧杯进行浓度为0.1M的稀醋酸的量取以及使用天平进行一定量的脱乙酰度大于90%的壳聚糖粉末的称取；2、材料的混合：使用磁力搅拌机对烧杯内部量取的稀醋酸进行搅拌，并且将称取的壳聚糖粉末依次加入烧杯内部与稀醋酸进行搅拌混合，直至壳聚糖溶液的浓度为10-20 wt%后，停止搅拌混合步骤；3、材料的消毒：将混合完成后的浓度为10-20wt%的壳聚糖溶液置于高温高压灭菌锅的内部进行消毒；4、材料的存储：待消毒完成后，将壳聚糖溶液静置冷却，待冷却至室温后，将壳聚糖溶液放入冰箱内进行存储，等待下一步骤；
二、Ⅱ型胶原溶液的配制：1、材料的选取：配制一定量浓度为0.02M的稀醋酸溶液以及量取一定量的无菌Ⅱ型胶原；2、材料的消毒：使用滤膜将配制好的稀醋酸溶液进行过滤消毒；3、材料的混合：将无菌Ⅱ型胶原依次加入配制好的稀醋酸溶液内，同时进行缓慢搅拌混合，二者溶解混合成为Ⅱ型胶原溶液，待混合后的溶液胶原浓度为2.5-5 mg/mL后，停止搅拌，其中Ⅱ型胶原溶液的配制中的1-3步骤均在超净台中进行；4、材料的存储：将搅拌混合所得到的胶原浓度为2.5-5 mg/mL的Ⅱ型胶原溶液进行封口后，放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；
三、β-甘油磷酸钠溶液的配制：1、材料的选取：取一定量的β-甘油磷酸钠粉末，将其逐步加入到超纯水中进行溶解，直至β-甘油磷酸钠溶液的浓度为50wt%即可；2、材料的消毒：使用滤膜对溶解获得的浓度为50 wt%的β-甘油磷酸钠溶液进行过滤消毒；3、材料的存储：将过滤消毒后的β-甘油磷酸钠溶液放置于恒温冰箱内部，进行存储，等待下一步骤；
四、富勒烯/羟乙基纤维素溶液的配制：1、材料的选取：取适量的羟乙基纤维素、富勒烯以及PBS溶液；2、材料的混合：将羟乙基纤维素逐步加入至PBS溶液内部进行溶解混合，形成羟乙基纤维素溶液，羟乙基纤维素溶液的浓度为10-50 mg/mL；3、材料的消毒：使用滤膜对羟乙基纤维素溶液进行过滤消毒；4、材料的二次混合：将富勒烯加入至羟乙基纤维素溶液中进行二次混合；5、材料的存储：将二次混合后获得的富勒烯/羟乙基纤维素溶液放置在恒温冰箱内进行存储，等待下一步骤；
五、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液的配制：1、材料的混合：将步骤一中配制好的无菌壳聚糖溶液与步骤二中配制好的Ⅱ型胶原溶液按照2:1的体积比例加入无菌烧杯中，然后将烧杯置于冰上，进行搅拌混合，其中搅拌混合时长为10分钟；2、材料的存储：将搅拌混合后的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液进行封口，然后放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；
六、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、β-甘油磷酸钠溶液以及富勒烯/羟乙基纤维素溶液的混合：1、材料的混合：将步骤五中的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、步骤三中的β-甘油磷酸钠溶液以及步骤四中的富勒烯/羟乙基纤维素溶液置于超净台内部，其中壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液置于冰上进行搅拌，然后将配置好的无菌β-甘油磷酸钠溶液逐步缓慢加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液内，进行混合，获得浓度为4-15 wt%的壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠溶液，然后将富勒烯/羟乙基纤维素溶液加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠溶液的内部进行混合，将壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠/富勒烯/羟乙基纤维素的混合溶液置于温度为37℃的恒温水浴锅内，进行溶液的升温，待混合溶液呈凝胶状态后，置于冰箱内部进行冷冻干燥，从而获得富勒烯/壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶，其中冰箱的温度为-80℃，冷冻干燥时长为4小时;
S2、富勒烯聚氨酯静电纺丝膜的制备：
1、材料的选取：量取适量的聚氨酯、六氟异丙醇溶剂以及富勒烯，其中富勒烯的重量为聚氨酯重量的1~10％；2、材料的混合：将聚氨酯加入至六氟异丙醇溶剂内进行溶解混合，形成重量百分比为10~20％的溶液，然后将富勒烯加入至混合溶液内，进行二次混合；3、材料的成膜：将二次混合后的富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂注入至静电纺丝装置内，进行静电纺丝，从而获得聚氨酯纳米纤维膜，其中静电纺丝装置的电压为20~30 kV、喷丝头溶液流量为0.1~10 mL/h及接收距离为10~20 cm，其中聚氨酯纳米纤维膜的纤维直径为100~500nm；4、材料的成型：将静电纺丝后的聚氨酯纳米纤维膜进行冷冻干燥及真空干燥；其中静电纺丝的过程：（1）溶液的注入：将富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂置于注射器的内部，且通过其推进器进行推动，直至液滴稳定流下后，调高推进器电压；（2）丝膜的接收：使用滚轴进行聚氨酯纳米纤维膜的接收，通过滚轴滚动进行纺丝过程中的聚氨酯纳米纤维膜的持续接收，从而形成完整的聚氨酯纳米纤维膜，其中滚轴为不锈钢材质构成;
S3、载富勒烯人工髓核的制备：一、内层的处理：将S1步骤中最终获得的富勒烯/壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶切成若干小块；二、外层的处理：裁剪S2步骤制备的富勒烯聚氨酯静电纺丝膜，将2块富勒烯聚氨酯静电纺丝膜呈上下2层设置，二者之间留有间隔；三、载富勒烯人工髓核的成型：将步骤一中的若干小块的富勒烯/壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶放置在2层富勒烯聚氨酯静电纺丝膜之间的间隔，并通过热压装置将2层膜的边缘处进行密封，从而形成人工髓核。
2.根据权利要求1所述的一种载富勒烯人工髓核的制备方法，其特征在于：所述S1步骤中第一步骤的消毒时长为20分钟，其中高温高压灭菌锅的温度为121℃。
3.根据权利要求1所述的一种载富勒烯人工髓核的制备方法，其特征在于：所述S1步骤中第二、第三及第四步骤中的滤膜的孔径为0.22μm。
4.根据权利要求1所述的一种载富勒烯人工髓核的制备方法，其特征在于：所述S1步骤中第一、第二、第三、第四及第五步骤的冰箱的温度均为4℃。
CN201810457276.0A 2018-05-14 2018-05-14 一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法 Active CN108498857B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810457276.0A CN108498857B (zh) 2018-05-14 2018-05-14 一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810457276.0A CN108498857B (zh) 2018-05-14 2018-05-14 一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108498857A CN108498857A (zh) 2018-09-07
CN108498857B true CN108498857B (zh) 2023-04-18

Family

ID=63400493

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810457276.0A Active CN108498857B (zh) 2018-05-14 2018-05-14 一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108498857B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7466532B2 (ja) 2018-10-01 2024-04-12 ジ・エレクトロスピニング・カンパニー・リミテッド 膜

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103320967A (zh) * 2013-06-28 2013-09-25 陕西煤业化工技术研究院有限责任公司 一种用于医用敷料的含富勒烯和纳米银复合静电纺丝材料及制备方法
CN104353112A (zh) * 2014-09-29 2015-02-18 大连大学 一种骨支架复合材料的制备方法
CN106473843A (zh) * 2015-08-26 2017-03-08 台湾微创医疗器材股份有限公司 定位结合椎骨的椎间融合装置
CN107496060A (zh) * 2017-08-09 2017-12-22 国家纳米科学中心 一种三维人工全椎间盘及其制备方法和应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9132208B2 (en) * 2008-08-07 2015-09-15 Lifenet Health Composition for a tissue repair implant and methods of making the same
WO2008039530A2 (en) * 2006-09-27 2008-04-03 Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cell-nanofiber composite and cell-nanofiber-hydrogel composite amalgam based engineered intervertebral disc
US20090068244A1 (en) * 2007-09-12 2009-03-12 Boston Scientific Scimed, Inc. Polymeric/carbon composite materials for use in medical devices
US9039769B2 (en) * 2010-03-17 2015-05-26 Globus Medical, Inc. Intervertebral nucleus and annulus implants and method of use thereof
WO2015142721A1 (en) * 2014-03-16 2015-09-24 Drexel University Novel hydrogels and methods using same

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103320967A (zh) * 2013-06-28 2013-09-25 陕西煤业化工技术研究院有限责任公司 一种用于医用敷料的含富勒烯和纳米银复合静电纺丝材料及制备方法
CN104353112A (zh) * 2014-09-29 2015-02-18 大连大学 一种骨支架复合材料的制备方法
CN106473843A (zh) * 2015-08-26 2017-03-08 台湾微创医疗器材股份有限公司 定位结合椎骨的椎间融合装置
CN107496060A (zh) * 2017-08-09 2017-12-22 国家纳米科学中心 一种三维人工全椎间盘及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Xinlin Yang等.Transcriptional alteration of matrix-related gene expression in cultured human disc cells by nanoparticles of a bismethanophosphonate fullerene.《Cell Biology International》.2013,第34卷(第8期),第837-844页. *
唐尚权等.胶原蛋白海绵在腰椎间盘突出手术中的止血作用.《中国医药指南》.2012,第10卷(第09期),第31-32页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108498857A (zh) 2018-09-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106075598B (zh) 一种光交联丝胶蛋白水凝胶及其制备方法和应用
Yao et al. In vitro angiogenesis of 3D tissue engineered adipose tissue
CN101478934B (zh) 生物工程化的椎间盘及其制备方法
CN112321778B (zh) 一种双蛋白水凝胶的制备方法
CN109999227B (zh) 一种基于丝素蛋白和甲壳素混纺纳米纤维嵌入式水凝胶软骨仿生支架的制备方法及应用
Zeng et al. Silk fibroin porous scaffolds for nucleus pulposus tissue engineering
KR20100041027A (ko) 동물조직 분말을 이용한 다공성 3차원 지지체의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 다공성 3차원 지지체
CN102218160B (zh) 神经组织基质源性组织工程支架材料的制备及其应用
Jia et al. Regeneration of human-ear-shaped cartilage with acellular cartilage matrix-based biomimetic scaffolds
Lin et al. Mechanical property and biocompatibility of silk fibroin–collagen type II composite membrane
Yang et al. In vitro and in vivo study on an injectable glycol chitosan/dibenzaldehyde-terminated polyethylene glycol hydrogel in repairing articular cartilage defects
CN104056304B (zh) 负载生长因子壳聚糖微球的dbm支架修复关节软骨材料
Ma et al. 3D bioprinting of a gradient stiffened gelatin–alginate hydrogel with adipose-derived stem cells for full-thickness skin regeneration
CN108498857B (zh) 一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法
Bhunia et al. Modulation of extracellular matrix by annulus fibrosus cells on tailored silk based angle-ply intervertebral disc construct
Wang et al. 3D printed chondrogenic functionalized PGS bioactive scaffold for cartilage regeneration
Du et al. A novel integrated biphasic silk fibroin scaffold for intervertebral disc tissue engineering
CN105031734A (zh) 髓核-软骨细胞外基质支架及其制备方法
CN111849864A (zh) 一种三维肿瘤模型脱细胞衍生基质支架的构建方法及其应用
Zhao et al. Tissue Engineering Material KLD-12 Polypeptide/TGF-β1 the Protective Effect and Mechanism of Nanofiber Gel on Early Intervertebral Disc Degeneration
CN103861152B (zh) 分级多孔壳聚糖/聚乳酸复合材料及其制备方法与应用
Liu et al. Nanofiber Composite Microchannel‐Containing Injectable Hydrogels for Cartilage Tissue Regeneration
JP2023501925A (ja) 筋線維断片を利用した回旋腱板療法
Li et al. 3D printed hydroxyapatite/silk fibroin/polycaprolactone artificial bone scaffold and bone tissue engineering materials constructed with double-transfected bone morphogenetic protein-2 and vascular endothelial growth factor mesenchymal stem cells to repair rabbit radial bone defects
CN112641997B (zh) 髓核间充质干细胞联合胶原复合支架的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant