CN108495648A - 用小分子消融化合物离体增强免疫细胞活性进行癌症免疫治疗的方法 - Google Patents
用小分子消融化合物离体增强免疫细胞活性进行癌症免疫治疗的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108495648A CN108495648A CN201680067095.6A CN201680067095A CN108495648A CN 108495648 A CN108495648 A CN 108495648A CN 201680067095 A CN201680067095 A CN 201680067095A CN 108495648 A CN108495648 A CN 108495648A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- tumor
- tumour
- animal
- induction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000002679 ablation Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 23
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 title abstract 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 15
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 title description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 title description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 265
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims abstract description 95
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 61
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 55
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 48
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 43
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 19
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 125000001834 xanthenyl group Chemical class C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 claims abstract 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 155
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 86
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 claims description 60
- 101100339431 Arabidopsis thaliana HMGB2 gene Proteins 0.000 claims description 58
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 claims description 58
- 101150021904 HMGB1 gene Proteins 0.000 claims description 58
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 50
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 47
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 45
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 43
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 40
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 40
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 39
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 31
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 25
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 22
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 22
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 21
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 20
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 16
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 6
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 6
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 claims description 6
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 claims description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 24
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 abstract description 15
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 abstract description 15
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 abstract description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 abstract description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 44
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 29
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 26
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 26
- 150000003732 xanthenes Chemical class 0.000 description 26
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 25
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 24
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 24
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 23
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 20
- 230000004044 response Effects 0.000 description 20
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 20
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 17
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 16
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 15
- 238000011160 research Methods 0.000 description 15
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 14
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 13
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 13
- -1 iodo erythrosine Chemical compound 0.000 description 12
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 10
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 9
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 8
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 8
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 8
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 8
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 8
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 8
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OALHHIHQOFIMEF-UHFFFAOYSA-N 3',6'-dihydroxy-2',4',5',7'-tetraiodo-3h-spiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3-one Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 OALHHIHQOFIMEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 6
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 6
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 description 5
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 description 5
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 description 5
- 101710113864 Heat shock protein 90 Proteins 0.000 description 5
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 5
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 5
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 4
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 4
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 4
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 4
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 3
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- MTFJSAGADRTKCI-UHFFFAOYSA-N N-(pyridin-2-ylmethylidene)hydroxylamine Chemical compound ON=CC1=CC=CC=N1 MTFJSAGADRTKCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 229940011411 erythrosine Drugs 0.000 description 3
- 235000012732 erythrosine Nutrition 0.000 description 3
- 239000004174 erythrosine Substances 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011207 functional examination Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710168537 High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229920002123 Pentastarch Polymers 0.000 description 2
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 2
- 241000872198 Serjania polyphylla Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108010060888 Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical class O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 2
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 2
- 229940101738 pentastarch Drugs 0.000 description 2
- GVKCHTBDSMQENH-UHFFFAOYSA-L phloxine B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 GVKCHTBDSMQENH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 150000007964 xanthones Chemical class 0.000 description 2
- MNKRTDOUBUSQHX-UHFFFAOYSA-N 2,4-dihydroxy-2-methyl-3-oxopentanoic acid Chemical class CC(O)C(=O)C(C)(O)C(O)=O MNKRTDOUBUSQHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXPZIVKEZRHGAS-UHFFFAOYSA-N 3-benzyl-5-[(2-nitrophenoxy)methyl]oxolan-2-one Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1OCC1OC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)C1 AXPZIVKEZRHGAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- IICCLYANAQEHCI-UHFFFAOYSA-N 4,5,6,7-tetrachloro-3',6'-dihydroxy-2',4',5',7'-tetraiodospiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound O1C(=O)C(C(=C(Cl)C(Cl)=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 IICCLYANAQEHCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005094 Advanced Glycation End Products Proteins 0.000 description 1
- 108700031361 Brachyury Proteins 0.000 description 1
- 101150011672 CCL9 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 101000972324 Cynodon dactylon Leaf protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 description 1
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 description 1
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 1
- 101710185235 High mobility group protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010072039 Histidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 description 1
- 150000008540 L-glutamines Chemical class 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 102000001109 Leukocyte L1 Antigen Complex Human genes 0.000 description 1
- 108010069316 Leukocyte L1 Antigen Complex Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 244000134336 Malus baccata Species 0.000 description 1
- 235000005079 Malus baccata Nutrition 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 108010075205 OVA-8 Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 229940123384 Toll-like receptor (TLR) agonist Drugs 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000000981 bystander Effects 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- QGBSISYHAICWAH-UHFFFAOYSA-N dicyandiamide Chemical compound NC(N)=NC#N QGBSISYHAICWAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- UWBXIFCTIZXXLS-UHFFFAOYSA-L disodium;2,3,4,5-tetrachloro-6-(2,4,5,7-tetraiodo-3-oxido-6-oxoxanthen-9-yl)benzoate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 UWBXIFCTIZXXLS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000276 dose-dependent cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002168 ethanoic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 210000000630 fibrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004023 fresh frozen plasma Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 229940126546 immune checkpoint molecule Drugs 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011337 individualized treatment Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000011645 metastatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000004987 nonapoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000011338 personalized therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229930187593 rose bengal Natural products 0.000 description 1
- 229940081623 rose bengal Drugs 0.000 description 1
- STRXNPAVPKGJQR-UHFFFAOYSA-N rose bengal A Natural products O1C(=O)C(C(=CC=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 STRXNPAVPKGJQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- SCPYDCQAZCOKTP-UHFFFAOYSA-N silanol Chemical compound [SiH3]O SCPYDCQAZCOKTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000006884 silylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical class [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001931 thermography Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/57—Skin; melanoma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
- A61K38/217—IFN-gamma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4615—Dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4622—Antigen presenting cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种癌症免疫治疗方法，其中通过病灶内(IL)将卤代呫吨肿瘤消融化合物给药到宿主动物的实体癌肿瘤中，在动物宿主中诱导“诱导的免疫抗癌剂”后，分离所述“诱导的免疫抗癌剂”。从荷瘤宿主中取出(收集)诱导的免疫抗癌剂样品，如果需要，将其储存，培养并优先扩增以形成免疫学有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物。该组合物被重新引入到宿主内(从所述宿主取得经前期物质诱导的免疫抗癌剂)，或被重新引入到另一个有需要的免疫学合适的宿主内。
Description
技术领域
本发明涉及通过病灶内注射小分子卤代呫吨肿瘤消融化合物以诱导哺乳动物的外周血、肿瘤组织或淋巴组织内的免疫系统组分来增强免疫细胞活性的方法。收集诱导的免疫系统组分成员，离体扩增，然后重新引入哺乳动物，所述免疫系统组分成员作为富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物而起源自所述哺乳动物中。
发明背景
结合病灶内(IL)治疗引发肿瘤特异性免疫应答的免疫治疗策略可以作为皮肤赘生物的非手术选择。已经显示这些策略诱导局部和系统性肿瘤消退。已经显示瘤内注射树突细胞(DC)、IL-2和GM-CSF以及用佐剂卡介苗(BCG)或Toll样受体(TLR)激动剂治疗可增强在黑素瘤荷瘤小鼠和晚期黑素瘤患者的系统性抗肿瘤免疫[Triozzi et al.,Cancer 89:2646-2654(2000)；Pilon-Thomas et al.,J Immunother 29:381-387(2006)；Guo et al.,Int J Cancer 120:2418-2425(2007)；Kaufman et al.,Ann Surg Oncol 17:718-730(2010)；Kidner et al.,J Immunother 35:716-720(2012)]。树突细胞是最有效的抗原呈递细胞(APC)，并且可以通过先前未暴露于抗原的T细胞引发免疫应答[Small et al.,JClin Oncol 18:3894-3903(2000)]。
在20世纪，荧光素类似物的一些用途出现了。这些化合物已被用作织物染料、生物染色剂、非易失性存储装置的构件、热成像基材以及食品和化妆品着色剂。例如，赤藓红(erythrosine)(FD&C No.3)和部分碘代赤藓红(D&C No.11和12)被用作食品、药物和化妆品染料。一种特殊的四碘代呫吨(玫瑰红(rose bengal))已被用于眼科疾病的可视化，并且以放射性标记的形式被用作1965年出现在美国药典中的用于肝功能的医学诊断。
由眼科医生和在肝功能研究中使用玫瑰红(RB)作为生物染料在20世纪变得很普遍[Norn,Acta Ophthalmol 48:546-559(1970)；Delprat Arch.Int.Med.32:401-410(1923)]。RB可以作为光动力敏化剂杀死微生物和癌细胞，或者甚至不用激光激活而用于转移性黑素瘤和卵巢癌[Banks et al.,J Appl Bact 58:391-400(1985)；Koevary,Int JPhysiol Pathophysiol Pharmacol 4:99-107(2012)；Thompson et al.,Melanoma Res18:405-411(2008)；Wachter et al.,Proc.SPIE 4620:143-147(2002)]。
RB可以在30-60分钟内通过细胞膜并积累在肿瘤细胞和自体肿瘤细胞的溶酶体中，而被正常细胞排除在外[Wachter et al.,Proc.SPIE 4620:143-147(2002)]。值得注意的是，在人类研究中，PV-10的IL治疗(10％玫瑰红的PBS的溶液；ProvectusBiopharmaceuticals，Inc.，Knoxville，TN)显示出引发肿瘤特异性免疫[Thompson etal.,Melanoma Res 18:405-411(2008)；和Thompson et al.,Ann Surg Oncology 22:2135-2142(2015)]表明未注射旁观者病灶消退。进一步的研究显示，IL PV-10治疗可诱导MT901乳腺癌和B16黑素瘤小鼠模型中T细胞介导的肿瘤特异性免疫应答[Toomey et al.,PloS one 8:e68561(2013)]。然而，其潜在机制仍然未知。
因此，玫瑰红已被公开为用于肿瘤破坏的消融剂专利(美国专利号8,557,298)。后玫瑰红消融的新作用是免疫系统组分在治疗的哺乳动物中原位识别肿瘤组织的能力。已经发现这些免疫系统组分在消融治疗的哺乳动物中诱导系统性免疫系统应答。
已经提出了许多策略来诱导免疫应答作为癌症的治疗策略。这些方法通常由以下组成：从宿主中取出患病组织并操作该组织以靶向、治疗或扩增尺寸或数量的有用免疫系统组分，然后将免疫组分重新给药于宿主。
例如，正在研究由肿瘤抗原离体脉冲的树突细胞和扩增的自然杀伤细胞组成的疫苗(美国专利号8,597,946)。已经制造了基于抗原和非抗原的抗体并离体操作以靶向肿瘤组织(美国专利号8,153,120，US 2004/0161413 A1)。值得注意的是，已报道非清髓性化疗和经扩增的T细胞的过继转移的组合可导致晚期癌症患者的持续临床应答[Pilon-Thomas,J.Immunother 35(8):615-620(2012)]。这些策略与内源性免疫组织无关，并且从提取的肿瘤组织或外周血离体制备以给药于患者。此外，使用非清髓性化疗增加了治疗的额外时间和成本，并且可能增加基于治疗的发病率的可能性增加。
垂死的癌细胞能够释放被称为损伤相关分子模式分子(DAMP)的可溶性分子，其主要由模式识别受体(PRR)识别[Zitvogel et al.,Cell 140:798-804(2010)]。特定的DAMP能够作为癌症治疗的强大免疫佐剂[Kroemer et al.,Ann Rev Immunol 31:51-72(2013)；Krysko et al.,Nature Rev Cancer 12:860-875(2012)]。这些DAMP包括热休克蛋白(HSP)家族的几个成员、S100蛋白、ATP、IL-1α和高速泳动族蛋白1(HMGB1)，也称为两性蛋白(amphoterin)[由Panzarini et al.,PloS one 9:e105778(2013)综述]。
HMGB1是在几乎所有真核细胞中丰富的与DNA结合的蛋白质。它的推定受体包括针对晚期糖基化终产物(RAGE)的受体，Toll样受体-2(TLR2)，TLR4和T细胞免疫球蛋白-3(TIM-3)(Taguchi et al.,Nature 405:354-360(2000)；Park et al.,J Biol Chem 279:7370-7377(2004)；Chiba et al.,Nature Immunol 13:832-842(2012)]。HMGB1具有膜结合形式，也能够作为细胞因子样因子分泌到细胞外空间中。它在乙酰化后由激活的免疫细胞如巨噬细胞和树突细胞(DC)分泌，或者可以由坏死、凋亡和自噬的癌细胞作为DAMP释放[Scaffidi et al.,Nature 418:191-195(2002)；Bonaldi et al.,EMBO J 22:5551-5560(2003)；Kazama et al.,Immunity 29:21-32(2008)；Thorburn et al.,Cell DeathDiffer 16:175-183.(2009)]。
HMGB1在内皮细胞的激活、血管生成的促进、免疫细胞迁移和炎症的发生中起重要作用[Lotze et al.,Nature Rev Immunol 5:331-342(2005)]。虽然HMGB1已被证明有助于肿瘤转移和新血管生成，但其通过垂死的肿瘤细胞的释放可导致DC的激活以阻止肿瘤进展[Apetoh et al.,Nature Med 13:1050-1059(2007)；Curtin et al.,PLoS Med 6:e10(2009)]。
已知有许多方法可以用设计用于刺激免疫系统抗肿瘤活性的组织分离、储存、扩增、靶向和撤退癌症患者。一些策略，如(SIPULEUCEL-T)和过继转移开始于患者外周血、淋巴或肿瘤组织。然而，这些策略都没有使用肿瘤组织的病灶内消融来在将它们从患者取出之前原位提高内源性免疫组分的质量。后取出治疗(post removal treatment)策略可以是患者特异性的，用于个体化治疗。
免疫球蛋白(抗体)和有时候针对常见疾病的疫苗已被用于在更广泛的患者群体中增强免疫应答以用于肿瘤治疗。这样的抗体和疫苗对于不一定被分离的患者更普遍。例如，使用内源性配体的抗体设计通常适用于各种各样的患者，并且这些配体通常在用刺激物探查系统以阐明更普遍的抗体后发现。
类似地，可以改造抗体以模拟天然发生的对癌症的内源性免疫应答的事件。例如，抗CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4)单克隆抗体易普利姆玛和tremelimumab被设计为通过阻断CTLA-4活性并因此抵抗免疫系统的下调，从而增强针对癌症的T细胞应答。类似地，单克隆抗体如派得利珠单抗、纳武单抗、lambrolizumab和派姆单抗与PD-1(程序性死亡1)受体结合以抵抗免疫系统的下调并增强对癌性肿瘤的T细胞应答。用PD-1配体PD-L1和PD-L2抗体(如针对PD-L1的BMS-936559、MEDI4736和阿特珠单抗(MPDL3280A))进行初始工作也表明抑制免疫系统的下调和增强的针对癌症的T细胞应答。
替代方法利用刺激免疫系统某些组分(即上调或下调)的物质，包括用以下物质给药：非特异性细胞因子(如白介素-1、白介素-2或白介素-12；“IL-1”、“IL-2”或“IL-12”；干扰素-α或干扰素-γ，“IFN-α”和“IFN-γ”；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，“GM-CSF”)，或利用试图激发肿瘤特异性免疫应答的物质。
如下文所公开的，据认为从宿主取出含有免疫细胞的组织或用卤代呫吨(例如PV-10中的玫瑰红)处理的肿瘤细胞能够用于制备普通抗体或个性化疗法。暴露于消融化合物后可以分离这些组分。
用卤代呫吨(例如PV-10的卤代呫吨)病灶内给药于肿瘤组织释放刺激消融后在外周血、局部淋巴组织或肿瘤组织中发现的肿瘤特异性免疫细胞的肿瘤抗原，但在安慰剂处理的受试者的这些组织中没有显著水平的肿瘤抗原。由此局部抗原呈递细胞预先装载有肿瘤碎片，并且可以根据其自身的优点在治疗疾病中有价值。
以下公开内容显示IL PV-10注射能够在患有黑素瘤的示例性患者和荷有黑素瘤的小鼠中引发肿瘤特异性免疫应答。进一步发现，潜在机制是将PV-10IL注射入黑素瘤肿瘤导致HMGB1的释放和免疫细胞的激活以诱导肿瘤特异性免疫。肿瘤和免疫系统组织中诱导的肿瘤应答的体内和体外级联激活的细胞可以被储存并重新引入，或者使用本领域已知的技术扩增然后重新引入以治疗或抑制癌症的进一步发作。
另外，这些局部使用的消融剂能够用于哺乳动物或体外研究，作为鉴定特异性针对消融细胞的抗体的工具，或作为在克隆用于治疗癌症的有用生物材料之前鉴定的工具。这些抗体可以单独或在根据本领域已知的技术克隆和制造后用作癌症的更一般治疗。从外周血、脾、肿瘤或淋巴结如此产生并分离的免疫组分能够对小鼠和人中的肿瘤都有应答，并且能够在病灶内注射后约1天或更长时间内检测到。
发明概述
本发明考虑使用衍生自“诱导的免疫抗癌组分”的一种“富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物”的免疫治疗方法，所述“诱导的免疫抗癌组分”例如一种或多种免疫细胞，免疫球蛋白，蛋白质如抗原，细胞因子和其他免疫组分，其在动物宿主中通过病灶内(IL)将卤代呫吨肿瘤消融化合物如玫瑰红二钠给药到该宿主动物的实体癌肿瘤中而诱导后分离。从荷瘤宿主中取出(收集)由卤代呫吨肿瘤消融产生的诱导的免疫抗癌组分的样品，如果需要，将其储存，或培养并优先扩增以形成富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物。如果需要，富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物也可以储存起来，或者经调整以形成免疫有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物并将其重新引入到从宿主取得经前期物质(predecessor)诱导的免疫抗癌组分的所述宿主中(自体转移)，或重新引入到另一个免疫适宜的宿主中(异体转移)。
通过取出等分试样的外周血、肿瘤组织或淋巴细胞(含淋巴细胞)组织例如引流淋巴结、胸腺细胞和脾细胞中的一个或多个样品来收集那些诱导的免疫抗癌组分。诱导的免疫抗癌剂优选在IL消融后或重复消融后约1至约365天、优选约4至约90天、最优选约7至约14天收集。诱导的免疫抗癌组分可以通过众所周知的血液储存(blood banking)技术储存，例如但不限于冷冻、冷却至约1.0至约8.0C或在采取进一步行动之前冷冻干燥。
存在于外周血、肿瘤组织和/或淋巴组织样品中的诱导的免疫抗癌组分通过已知的细胞培养方法体外培养以形成富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物。如上所述，富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物本身可以冷冻、冻干或以其他方式存储(store)以备后用(储存(bank))。
在优选的实施方案中，肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物经调整以形成免疫有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂，其含有溶解或分散于药学上可接受的稀释剂中的免疫有效浓度的富集肿瘤特异性免疫抗癌剂，所述制剂还具有适合肠胃外(parental)注射的盐含量、重量摩尔渗透压浓度(osmolality)和pH值。将该制剂肠胃外重新引入最初从宿主动物取得诱导免疫抗癌组分的所述宿主动物(自体给药)或给药于另一种免疫适宜的动物(同种异体给药)，或进一步培养以提供其他免疫抗癌剂。
在进一步的实施方案中，获得诱导的免疫抗癌组分，并在与先前描述的消融肿瘤的位置不同的位置给药于肿瘤。该给药可以在病灶内进行，或者通过其他众所周知的肠胃外给药方式进行，例如通过静脉内、皮下或腹膜内给药。
这种给药在没有将诱导的免疫抗癌组分扩增成肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物中的情况下进行。诱导的免疫抗癌组分可以在其重新引入宿主动物之前储存。
在另一实施方案中，该方法采用病灶内注射卤代呫吨如示例性玫瑰红到肿瘤组织中以诱导靶向内源性肿瘤组织的干扰素阳性T细胞。在进一步的实施方案中，该方法采用肿瘤组织的相同消融暴露给玫瑰红以诱导树突细胞，暴露肿瘤抗原，诱导抗体和患者特异性或患者非依赖性细胞治疗剂和细胞因子。
本发明具有几个益处和优点。
本发明的一个益处是提供富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物，其可以用作此类药剂的来源以供后续使用。
本发明的优点是它提供了用于给药于各种实体癌肿瘤的增强的基于免疫学的治疗方法。
本发明的另外的益处和优点对于本领域技术人员而言从以下公开中将是显而易见的。
附图简要说明
在形成本公开的一部分的附图中，
图1A是说明临床研究设计的示意图。图1B显示了在左侧用IL PV-10处理之前和之后7-14天来自人类患者肿瘤的活检样品以及在相同时间的来自旁观者肿瘤(未注射)的活检样品的显微照片。通过免疫组织化学(IHC)将细胞用针对melA的抗体染色以确定黑素瘤细胞的存在。在处理的病灶和旁观者病灶中注意到显著减少的肿瘤细胞，这也由病理学家检查证实。图1C显示在注射的肿瘤(inj)中和在旁观者、未注射的肿瘤(uni)中的肿瘤消退的图。图1D、1E和1F示出了处理后人类患者(n＝14)的外周血单核细胞(PBMC)中增加的CD8+T细胞(图1D)，CD4+ T细胞(图1E)和NKT细胞(图1F)。每个图中的数字表示居中条(bar)的p值。p值由Wilcoxon匹配对符号秩和检验确定。*,p<0.05相对于处理前为统计学显著；**,p<0.01；***,p<0.001；n.s.,不显著。图1G、1H和1I示出了从PBMC纯化并用自体黑素瘤细胞526或624或两者(图1G)，HLA匹配的624黑素瘤细胞(图1H)和HLA匹配的黑素瘤细胞(图1I)再刺激的不同患者CD8+T细胞的增加的IFN-γ(IFN-g)的产生。数据显示给药前(pre)、给药后7-14天(D7-14)和21-28天(D21-28)的值。P值由未配对的Student's t检验确定。n.s.＝不显著。
图2A示出了在第0天将表达OVA的3×105个黑素瘤B16(M05)细胞注射入C57BL/6小鼠的一侧(flank)后的肿瘤生长。之后，在第7天和第17天(n＝4)注射50μl的PV-10或PBS。图2B示出了通过流式细胞术测量的注射后8天来自引流LN的CD8+和OVA四聚体阳性细胞的百分比。图2C是显示在第7天在另一侧上用s.c.注射的3×105个M05细胞重新攻击的小鼠的IFN-γ(IFN-g)分泌的图。在第23天，用20ng/ml的IL-15、IL-21和1μg/ml的OVA 257-264肽扩增脾细胞7天，然后用M05细胞攻击。48小时后测量IFN-γ(也称为IFN-g)的产生。数据以三次独立研究的平均值±SEM表示。*,p<0.05,相对于对照为统计学显著；**,p<0.01。P值由未配对的Student's t检验确定。
图3A示出了在第0天和第13天将表达OVA的3×105个黑素瘤B16(M05)细胞注射到C57BL/6小鼠的一侧，将50μl的PV-10IL注射入或将PBS注射入相对侧，并且4小时后将2×106个violet标记的CD45.1OT-1T细胞静脉注射之后，IL PV-10引发肿瘤特异性抑制性免疫应答。p<0.05,在第23天PV-10+OT-1组相对于PV-10组具有统计学显著性，未配对student t检验。图3B示出了监测的小鼠的存活率。*,p<0.05,**,p<0.01。P值由对数秩检验确定。4天后，用CD45.1和CD45.2抗体染色来自脾(图3C和图3D)、肿瘤(图3E)和远端LN(图3F)的细胞。violet染料稀释的代表性直方图显示CD45.1+ T细胞的后代(子代)，其在死细胞的鉴别后具有至少一个分裂(division)(图3C)。数据以三次独立实验(n＝5只小鼠/组)的平均值±SEM表示。*,p<0.05,相对于对照为统计学显著；**,p<0.01。
图4A是显示在IL注射后18小时通过流式细胞术测量的来自注射3×105个M05细胞然后在第7天IL注射50μl的PV-10或PBS的来自C57BL/6小鼠的肿瘤引流LN(DLN)或非引流LN(NDLN)的树突细胞(DC；CD11c+MHC II+)的数量的图。图4B是显示18小时后通过流式细胞术测量的PV-10处理后4小时i.t.注射FITC-OVA后来自DLN或NDLN的FITC+DC的结果的图。这些数据以三次独立研究(n＝4只小鼠/组)的平均值±SEM表示。图4C是显示衍生自血液单核细胞的(BM-衍生的)DC的最后孵育16小时期间通过[3-H]-胸苷掺入测量的OT-1T细胞增殖的图，所述DC用完全培养基(CM)或来自用IL PV-10或PBS处理的荷有B16黑素瘤小鼠的肿瘤上清液(TS)孵育2天，然后用OVA蛋白脉冲并与OT-1T细胞以不同比率共培养3天。图4D是比较与用100μM的PV-10或PBS前孵育的B16细胞的肿瘤裂解物一起孵育的BM衍生的DC的数目的图，所述DC用OVA蛋白脉冲并与OT-1T细胞以所述比率共培养3天。通过在培养的最后16小时中[3H]-胸苷摄取一式三份测量细胞增殖。数据显示为平均值±SEM并且代表两个独立研究。*,p<0.05,相对于对照为统计学显著；**,p<0.01；***,p<0.001。
图5A显示小鼠黑素瘤B16细胞中细胞死亡与PV-10浓度的关系图，48小时后IC50为60μM，并且在3T3成纤维细胞中48小时后IC50为110μM。图5B是显示用50μM的PV-10处理48小时的B16细胞、3T3成纤维细胞、人原代黑素瘤细胞(P)和人胚肾293T细胞的流式细胞术分析的图。图5C是显示与PBS相比，在用PV-10处理的黑素瘤细胞中观察到坏死(DAPI+)显著增加而非早期细胞凋亡(膜联蛋白V+DAPI-)的流式细胞术分析的图。
图6A和图6B是在以所述剂量的PV-10处理B16、3T3细胞(图6A)或人888黑素瘤细胞(图6B)48小时后通过蛋白质印迹检测到的细胞上清液(S)中释放的HMGB1的密度计的密度图。在细胞裂解物(L)中验证了HMGB1表达的增加。图6C是与CM或在存在HMGB1中和抗体或同种型对照2天的情况下用100μM的PV-10或PBS前孵育2天的B16细胞的肿瘤上清液(TS)一起孵育的BM衍生的DC的图。细胞用针对CD40和CD11c的抗体染色并通过流式细胞术分析。显示了DC的CD40的相对平均荧光强度(MFI)。数据显示为平均值±SEM并且代表三个独立研究。*,p<0.05,**,p<0.01。图6D是BM衍生的DC的计数与细胞对细胞培养比率的图，所述DC用来自用IL PV-10处理2天的荷有M05黑素瘤的小鼠的肿瘤上清液孵育，用OVA蛋白脉冲，并用OT-1T细胞以所述比率共培养3天。在最后16小时的培养中通过[3-H]-胸苷掺入检查OT-1T细胞增殖。数据显示为平均值±SEM并且代表两个独立实验。*,p<0.05,**,p<0.01。
图7是显示相对于治疗前存在的血清量，在病灶内PV-10(10％玫瑰红水溶液；Provectus Biopharmaceuticals，Inc.，Knoxville，TN)治疗疗法后7-14天和21-28天的黑素瘤患者血清中存在的HMGB1水平的图。数据显示为平均值±SEM(n＝14)。*,p<0.05；n.s.,不显著。P值由Wilcoxon匹配对符号秩和检验确定。
发明详述
本发明考虑了形成和使用后能够免疫治疗使用的富集的肿瘤特异性免疫抗癌组分的制剂的方法。该方法包括以下步骤：(A)使宿主动物中的肿瘤组织与包含肿瘤消融量的优选溶解或分散于药物组合物中的卤代呫吨化合物的化学消融药物组合物接触。下文分别讨论化学消融药物组合物的细节。(B)将宿主动物维持足够的时间段(约1至约30天)以使其免疫系统产生针对该肿瘤的肿瘤特异性免疫抗癌剂；即用于诱导肿瘤特异性免疫抗癌剂。(C)从动物宿主收集(取出)含有一种或多种等分试样的含有肿瘤特异性免疫抗癌组分的外周血、肿瘤组织或淋巴组织的样品。(D)培养外周血、肿瘤组织和/或淋巴组织的样品中存在的肿瘤特异性免疫抗癌组分并体外优先扩增以形成富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物。
一旦将含有肿瘤消融量的卤代呫吨的药物组合物给予宿主动物的实体肿瘤以接触癌细胞，将宿主动物维持至少足以诱导宿主动物免疫系统的时间段来产生针对所述肿瘤的肿瘤特异性免疫抗癌剂。典型的维持时间为药物组合物消融给药后约1至约30天。
在这种情况下的维持只是简单地允许动物过正常的生活，有医疗/兽医的观察和/或干预，如在这样的治疗之后通常和所需要的。例如，使用配制用于病灶内注射的10％玫瑰红的水性组合物(PV-10；Provectus Biopharmaceuticals，Inc.，Knoxville，TN)注射到肿瘤中的80个患有阶段IIIB-IV黑素瘤的患者的2期人体临床试验，发现治疗耐受性良好，不良事件主要局限于注射部位，没有与使用PV-10相关的4级或5级不良事件。
一旦维持期结束，从动物宿主收集(取出)包含含有肿瘤特异性免疫抗癌组分的(1)等分试样的外周血、(2)肿瘤组织和(3)淋巴组织中的一种或多种的身体样品。该样品可以在被培养和优先扩增之前如下文所讨论的那样被储存(存储)。或者，在合适地筛分实体组分并将这些组分分散在合适的载体中用于肠胃外给药后，可将肿瘤特异性免疫抗癌组分引入相同宿主动物的另一肿瘤中。如前所述，这种肠胃外给药可以通过病灶内、静脉内、皮下或腹膜内或类似的给药来进行。以下讨论用于这种分散的适当媒介物。
优选的肿瘤特异性免疫抗癌组分具有两种一般类型。
第一种类型的肿瘤特异性免疫抗癌组分是免疫细胞，如T细胞、B细胞，抗原呈递细胞(APC)如树突细胞、NK细胞或单核细胞(巨噬细胞)。这些细胞识别肿瘤细胞抗原或消融的肿瘤细胞碎片，并且通过结合肿瘤细胞抗原、增殖、分泌细胞因子或以其他方式在存在来自被卤代呫吨消融的癌细胞的完整癌细胞或碎片上存在的抗原/免疫原变得激活而对该识别作出应答。
第二种类型的肿瘤特异性免疫抗癌组分是淋巴可溶性细胞因子或其他蛋白质，例如与展示在整个肿瘤细胞或化学消融的细胞碎片上的抗原或者卤代呫吨肿瘤消融和维持时间之后在宿主的血浆或淋巴中的肽或糖结合的抗体。
在维持时间之后，在处理的宿主中存在的肿瘤特异性免疫抗癌组分的量显著大于将病灶内卤代呫吨化学消融药物组合物给药于宿主动物的肿瘤之前。在卤代呫吨肿瘤消融和维持后可以通过文献中报道的标准技术容易地测定并且分别与卤代呫吨肿瘤消融前血液或淋巴或淋巴组织中存在的量相比较上述讨论的免疫细胞类型的淋巴可溶性细胞因子如IL-2、TNF-α、LT、GM-CSF、IFN-γ和HMGB1的浓度或其他肿瘤特异性免疫抗癌组分的显著增强的浓度。通过至少在90％置信水平(p<0.1)下，且优选在95％置信水平下(p<0.05)具有统计学显著性的增加来确定淋巴可溶性细胞因子或免疫细胞类型的浓度的显著增强。
通常利用外周全血来提供用于培养和优先富集的白细胞。因此，通常通过梯度离心将外周全血分离成多个级分。三层通常由顶层血浆(包括细胞因子和抗体)，接着是白细胞的血沉棕黄层和多形核细胞(如嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞)和红细胞(红血细胞；RBC)的底部级分形成。
在这些白细胞中，外周血单核细胞(PBMC)(具有圆核(与瓣叶核相对)或像血小板的没有细胞核的血细胞)在这里特别令人感兴趣。示例性的PBMC包括淋巴细胞和单核细胞(巨噬细胞)。淋巴细胞群由T细胞(例如，CD4+和CD8+细胞，约75％)、B细胞和NK细胞(组合起来约25％)组成。根据Stroncek et al.,Transfusion 51(12):2647-2655(2011)，在5％DMSO和6％喷他淀粉(pentastarch)(约50％羟乙基化淀粉)中冷冻保存的白细胞可以储存至少7年。
在全血分离后，可以收集PBMC，培养并倍增，并且可以使用血浆来提供相对于所选生物标志物的预消融浓度的抗体和/或细胞因子生物标志物浓度的测定。优选的淋巴组织是来自优选接近化学消融肿瘤部位的一个或多个淋巴结，来自脾组织或来自胸腺的组织或来自消融的或未治疗的肿瘤病灶的细胞。
体外培养和优先扩增存在于样品例如淋巴组织样品中的诱导的免疫抗癌组分提供富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂的组合物。那些富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂可主要包括增强数量的PBMC，例如T细胞(例如CD8+ T细胞和CD4+ T细胞)、单核细胞(巨噬细胞)和NK细胞，其本身可用于增强宿主动物针对消融的肿瘤组织的免疫应答。通常的细胞增殖技术将细胞部分与包括细胞因子和抗体的生长培养基可溶性部分分开，后者通常被丢弃。
B细胞、T细胞、NK细胞、树突细胞和其他抗原呈递细胞(APC)的培养和优先扩增可以导致抗体以及细胞因子的产生增加。如果需要，可以通过已知分离技术如柱层析和/或亲和层析从生长培养基中获得增加量的细胞因子，例如IL-2、TNFα、LT、GM-CSF和IFN-γ以及其它蛋白质，例如HMGB1，其可以增强由增殖细胞产生的免疫应答。
类似的方法适用于体外培养并优先扩增存在于肿瘤组织样品中的等效组的肿瘤特异性免疫抗癌组分。
在此使用短语“优先扩增”及其语法上适当的类似短语来描述增加一个或多个特定细胞类型相对于其数目不增加的其他细胞类型的数量。该优先扩增(富集)也用于涉及抗肿瘤蛋白质化合物例如由肿瘤特异性免疫抗癌细胞分泌的细胞因子或抗肿瘤抗体的相对浓度的增加。细胞数目和细胞因子浓度中的一种或两种的扩增(富集)在体外或离体而不是在动物宿主的身体里(体内)进行。
这些增加的免疫细胞的数量和/或抗癌蛋白质化合物(例如细胞因子或抗体)的浓度可以通过本文所示例的众所周知的测定容易地测量。体外(离体)优先扩增后免疫细胞数量和/或细胞因子浓度的增加相对于被取出的身体样品中的浓度是统计学显著的。由优先扩增产生的组合物在本文中称为富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物。
富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物的制剂通常不“原样”用于重新导入原始宿主动物或导入另一动物中，这是由于富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂的不适当浓度、盐含量、重量摩尔渗透压浓度、pH值或其他因素如异源丝裂原的存在。结果，富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物经调整以形成免疫有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂。
所考虑的免疫有效富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂具有溶解或分散于药学上可接受的稀释剂中的适当的免疫有效浓度的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂。该组合物还含有肠胃外(parental)注射适宜的盐含量、重量摩尔渗透压浓度和pH值，并且不含不需要的成分，例如异源丝裂原。这种可注射组合物的细节可以在文献中找到，例如Hoover,JohnE.,Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania；1975和Liberman,H.A.and Lachman,L.,Eds.,Pharmaceutical DosageForms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980，并且包括下文描述的用于含有消融肿瘤有效量的预期的卤代呫吨化合物的化学消融药物组合物的那些。
免疫有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物可以被给药回原始获得身体样品(重新引入)的动物以提供对病灶内治疗的免疫促进。这种免疫有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物通常也可以在接受清髓性化学疗法之后给药于另一个(第二)免疫适宜的同系动物宿主。
这种富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物或免疫有效的富集肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂可以如血液储存和细胞保存技术中众所周知的那样通过冷藏或冷冻存储(储存)用于以后使用。存在于该组合物或制剂中的肿瘤特异性免疫抗癌剂也可以进一步培养以产生所需的细胞因子，例如淋巴因子，或细胞内产生的抗体或其他免疫抗癌剂的制剂。
在美国，为收集和加工每种血液制品设定了一些标准。“全血”(WB)是一种定义产品的恰当名称，特别是添加批准的防腐剂的未分离静脉血。大部分输血用血都是作为全血收集的。有时自体捐献不需要进一步修饰就可以输血；然而，通常将全血分离(通过离心)成其组分，其中悬浮在溶液中的红细胞(RBC)是最常用的产物。
WB和RBC的单位都保持冷藏在33.8到42.8°F(1.0到6.0℃)，最大允许的储存期(货架期)分别为35和42天。当用甘油缓冲时，RBC单位也可以冷冻，但很少这样做。冷冻红细胞的有效期限为十年并存储在-85°F(-65℃)。
较不稠密的血浆被制成各种冷冻组分，并且根据冷冻时间和产品的预期用途而进行不同的标记。血浆含有抗体和细胞因子以及其他分散的蛋白质、肽、糖和盐。
如果血浆立即冷冻并打算用于输血，通常将其标记为新鲜冷冻血浆。如果打算将其制成其他产品，则通常将其标记为提取的血浆(recovered plasma)或用于分级分离的血浆。
如Sheikh等人的美国专利号8,153,120及其分案、美国专利号8,540,982所指出的那样，抗原呈递细胞(APC)和树突细胞(DC)可通过本领域容易获得的常规方法分离。在美国专利号5,976,546、6,080,409和6,210,662中公开了用于分离DC的示例性合适方法。
简而言之，可以从外周血制备血沉棕黄层细胞。可以从leukopacs中收获细胞，将其在离心管或装置中以密度1.0770g/ml、pH 7.4、280mOsm/kg H2O通过有机硅烷化胶体二氧化硅(OCS)分离介质柱(按Dom在美国专利号4,927,749中所述制备)进行分层。OCS介质优选通过使胶体二氧化硅(约10-20nm直径的颗粒)的硅烷醇基团与烷基三甲氧基硅烷试剂反应并因此封闭其来制备。
类似地，Mule等人的美国专利号8,597,946教导了从单采血液成分系统接着在梯度上离心以提供外周血单核细胞(PBMC)来制备DC。然后将这些细胞在70％人AB血清、20％X-VIVO 15Hematopoietic Media(Lonza America Inc.,Allendale,NJ)和10％DMSO中冷冻保存。然后在GM-CSF存在下接着用肿瘤裂解物(由辐射的肿瘤细胞制备)和抗MARCO抗体体外培养新鲜的或冷冻保存的PBMC。
在本发明的一个实施方案中，考虑的方法采用将卤代呫吨病灶内(IL)注射到肿瘤组织中以诱导靶向内源性肿瘤组织的干扰素阳性的T细胞。诱导的T细胞优选是循环的CD4+T细胞和/或CD8+T细胞。在另一实施方案中，抗癌细胞是NK细胞。在另一实施方案中，该方法采用将肿瘤组织的相同暴露给玫瑰红以诱导树突细胞，暴露肿瘤抗原，诱导抗体和患者特异性或患者非依赖性治疗剂如细胞因子。
在肿瘤消融治疗后取出(收集)外周血等分试样、肿瘤组织和/或淋巴组织，使得肿瘤消融产物和肿瘤细胞抗原(免疫原)迁移到近旁(近端)引流淋巴结(DLN)中。因此，取出血液、肿瘤组织和/或淋巴组织优选在消融剂量给药后约1至约30天，更优选在肿瘤消融后约4至约90天，并且最优选在消融剂量给药后约7至约14天进行，以允许迁移和针对消融的免疫应答。
在另一优选实施方案中，将一种或多种免疫系统下调的系统性抑制剂给药于宿主动物。优选地，所述免疫系统下调的系统性抑制剂是与CTLA-4、PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种发生免疫应答的单克隆抗体。这些单克隆抗体用与结合CTLA-4的那些名为易普利姆玛和tremelimumab；与PD-1结合的派得利珠单抗、纳武单抗、lambrolizumab和派姆单抗；和与PD-L1结合的BMS-936559、MEDI4736和阿特珠单抗(MPDL3280A)的那些进行示例。
免疫系统下调的系统性抑制剂可以在肿瘤消融量的卤代呫吨的给药之前、之后或同时给药于宿主动物。优选地，该抑制剂的给药在肿瘤消融后并且在收集含有来自宿主动物的诱导的免疫抗癌组分的样品之前进行。
可以在收集样品之前提供多种免疫系统下调抑制剂的给药。在初步研究中已经成功地使用了两到四种这样的给药。那些给药通常分开约1至约7天。
每次给药的单克隆抗体抑制剂的剂量是由制造商针对每种特定产品建议的剂量，作为最大剂量，其中更通常以最大剂量的约25％至约75％的剂量进行给药。当分开给药时，在不存在肿瘤消融呫吨化合物的情况下，示例性地如下进行单克隆抗体抑制剂的给药：在Physicians’Desk Reference,69ed,PDR Network,Montvale,NJ(2014)[PDR]中建议易普利姆玛(抗CTLA-4)以3mg/kg每3周总共四个剂量进行给药；派姆单抗(抗PD-1)被建议以2mg/kg每3周进行给药[PDR]；使用纳武单抗(抗PD-1)以0.1至10mg/kg每两周进行给药进行96周的I/II期剂量递增研究[Topalian et al.,J Clin Oncol 32:1020(2014)]。每种给药均在类似于下面讨论的那些的含水组合物中静脉内进行。
药物组合物
在考虑的方法中使用含有溶解或分散于药学上可接受的稀释剂中的消融肿瘤有效量的考虑的卤代呫吨化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。这种通常在本文中称为化学消融组合物的组合物在哺乳动物宿主动物中给药于肿瘤(病灶内)以诱导动物宿主的免疫系统产生诱导的免疫抗癌组分。
该药物组合物优选为适用于病灶内注射的含水组合物，其包括约1％或更多的卤代呫吨如玫瑰红(即PV-10)或另一种卤代呫吨的类似溶液或其混合物。卤代呫吨的药学上可接受的盐如二钠或二钾盐可用于该组合物中。
卤代呫吨的量大于约1％(w/v)至约3％(w/v)对于化学消融应用是特别有用的，因为较低的浓度通常不足以直接引起靶组织的破坏(消融)。因此，在优选实施方案中，卤代呫吨的浓度为约3％(w/v)至约20％(w/v)，并且更优选约3％(w/v)至约10％(w/v)。在另一实施方案中，卤代呫吨的浓度为约10％(w/v)至约20％(w/v)。在又一实施方案中，卤代呫吨的浓度为约10％(w/v)。
通过IL或其他肠胃外施用给药的化学消融药物组合物的典型剂量为约0.1mL/cc病灶体积至约2mL/cc病灶体积，更优选约0.25mL/cc至约0.75mL/cc病灶体积，并且最优选约0.5mL/cc病灶体积。这样剂量通常对应于约10mg至约1500mg卤代呫吨的患者剂量(其显著高于用于诊断性肝脏测定的那些剂量)。
考虑的药物组合物也是高度稳定的并且在制造和使用中都能够容易地处理。这些优选的浓度以重量比体积(w/v)表示，然而，重量比重量的浓度(w/w)基本上等价。
用于本文的优选卤代呫吨为下面式1的化合物，其中R1独立地为F、Cl、Br、I、H或C1-C4烷基；R2、R3、R4和R5独立地为Cl、H或I，其中R2、R3、R4和R5中至少一个取代基是I并且至少一个是Cl或H；R6独立地为H或C1-C4烷基；R11是H或C1-C4烷基；R12是H或C1-C7酰基；和所有(a)互变异构形式；(b)阻转异构体，(c)如下面式2中描绘的封闭内酯形式，(d)式2中描绘的内酯形式的对映体，和(e)其药学上可接受的盐。
使用的优选化学消融的卤代呫吨优选为以下中的一种或多种：玫瑰红(4,5,6,7-四氯-2’,4',5',7'-四碘-荧光素),赤藓红B,荧光桃红(phloxine)B,4,5,6,7-四溴-2’,4',5',7'-四碘荧光素,2’,4,5,6,7-五氯-4',5',7'-三碘荧光素,4,4’,5,6,7-五氯-2',5',7'-三碘荧光素,2’,4,5,6,7,7’-六氯-4’,5’-二碘荧光素,4,4’,5,5’,6,7-六氯-2’,7’-二碘荧光素,2’,4,5,5’,6,7-六氯-4’,7’-二碘荧光素,4,5,6,7-四氯-2’,4’,5’-三碘荧光素,4,5,6,7-四氯-2’,4’,7’-三碘荧光素,4,5,6,7-四溴-2’,4’,5’-三碘荧光素,和4,5,6,7-四溴-2’,4’,7’-三碘荧光素溶解或分散在药学上可接受的稀释剂中。玫瑰红是特别优选的卤代呫吨。
因为所考虑的化学消融药物组合物通常旨在通过注射到肿瘤[病灶内(IL)施用]用于肠胃外给药，所以这样的组合物应含有电解质，并且优选具有近似生理重量摩尔渗透压浓度和pH值。化学消融药物组合物中单电荷电解质离子的优选浓度为约0.5至约1.5％(w/v)，更优选约0.8至约1.2％(w/v)，并且最优选浓度为约0.9％(w/v)。约0.9％(w/v)浓度是特别优选的，因为它对应于近似等渗溶液。在进一步优选的实施方案中，化学消融药物组合物中的电解质是氯化钠。
这种水平的电解质增加了IL化学消融药物组合物的重量摩尔渗透压浓度。因此，作为指定一定范围的电解质浓度的替代方案，重量摩尔渗透压浓度可用于部分表征组合物的电解质水平。优选组合物的重量摩尔渗透压浓度大于约100mOsm/kg，更优选组合物的重量摩尔渗透压浓度大于约250mOsm/kg，最优选约300至约500mOsm/kg。
化学消融药物组合物的pH值优选为约4至约9，以使得卤代呫吨在含水媒介物中具有最大溶解度，并确保与生物组织的相容性。特别优选的pH值为约5至约8，更优选约6至约7.5。在这些pH值下，卤代呫吨通常保持二元形式，而不是在低pH值下形成的不溶于水的内酯。
化学消融药物组合物的pH值可以通过本领域技术人员已知的任何合适的手段来调节或调整。可以缓冲组合物或通过加入酸或碱等调整pH值。由于卤代呫吨或其生理上可接受的盐是弱酸，取决于卤代呫吨浓度和/或电解质浓度，组合物的pH值可能不需要使用缓冲剂和/或pH调节剂。然而，特别优选的是，该组合物不含任何缓冲剂，允许其一旦给药就符合生物学环境。
如美国专利号9,107,887(其公开内容以引用的方式并入本文中)中所公开的，化学消融药物组合物优选地在病灶内(IL)给药于至少一种癌性实体瘤如黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、胆囊癌、原发性或转移性肝癌(肝细胞癌)以及小细胞和非小细胞肺癌。本发明的优选实施方案在此与黑素瘤特别相关地进行说明性描述。
因为考虑的药物组合物旨在用于体内(肠胃外)途径的IL给药，所以进一步优选它是无菌的，如符合美国药典(USP)<71>所要求的，并且进一步它含有可忽略的致热原物质水平，使得它符合USP<85>(鲎试验)或USP<151>(兔热原测试)，或符合基本上等价的要求，其致热原或内毒素水平相当于不超过(NMT)10个内毒素单位(EU)/mL。此外，药物组合物应符合USP<788>中限定的限制颗粒物质含量的要求(即，尺寸大于10微米的NMT 3000个颗粒和尺寸大于25微米的NMT 300个颗粒/容器)或基本上等价的要求。来自USP的这些参考文献中的每一篇均通过引用并入本文。
动物宿主可以基本上是任何哺乳动物，所述动物宿主患有癌性肿瘤(需要治疗)，向其给予包含考虑的卤化呫吨化合物的药物组合物并且从其取出了含有诱导的免疫抗癌组分的包含等分试样的外周血、肿瘤组织或淋巴组织中的一种或多种的样品。说明性哺乳动物动物宿主包括灵长类如人类，猿如黑猩猩或大猩猩，猴如食蟹猴或猕猴，实验动物如大鼠、小鼠或兔，伴侣动物如狗、猫、马，或食用动物如牛或阉牛、绵羊、羊羔、猪、山羊、美洲驼等。
如果考虑到体外哺乳动物细胞接触例如在培养和优先扩增中，经常使用来自说明性哺乳动物的癌细胞的组织培养物，如下文所示。
如果需要，可以将来自宿主动物的切除的肿瘤给予化学消融药物组合物肿瘤消融量的卤代呫吨化合物，其在体外溶解或分散于药物组合物中，然后如前所述体外培养(维持)以形成随后给药于宿主动物的肿瘤以引发进一步的免疫应答的诱导的免疫抗癌组分。
考虑的组合物通常只需给予给定的肿瘤一次，但可以在数天或数周或数月的时间段内多次给予该肿瘤。动物宿主中分开的肿瘤可以各自接受一次或多次给药。
考虑的卤代呫吨化合物的药物组合物优选通过直接注射到待治疗的癌性肿瘤中来肠胃外给药。本文使用的术语肠胃外包括血管内和病灶内注射或输注技术以及皮下、腹膜内或类似的给药模式。药物的配制讨论于例如Hoover,John E.,Remington'sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania；1975和Liberman,H.A.and Lachman,L.,Eds.,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980中。
对于可注射制剂，例如，可根据已知技术使用合适的分散或润湿化合物和悬浮材料来配制无菌注射用含水悬浮液。无菌注射制剂还可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如作为1,3-丁二醇中的溶液。在可以使用的可接受的媒介物和溶剂中是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液、磷酸盐缓冲盐水。液体药物组合物包括例如适用于肠胃外给药的溶液。活性组分的无菌水溶液或活性组分的在包含水、乙醇、DMSO或丙二醇的溶剂中无菌溶液是适于胃肠外给药的液体组合物的实例。
无菌溶液可以通过将活性组分溶解在所需溶剂体系中，然后将所得溶液通过膜过滤器进行灭菌来制备，或者可选地，通过在无菌条件下将无菌化合物溶解在预先灭菌的溶剂中来制备无菌溶液。
优选地，药物组合物是单位剂量形式。以这种形式，组合物被分成含有适量卤代呫吨肿瘤消融化合物的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，该包装含有不连续量的制剂，例如在小瓶或安瓿中。
讨论
IL治疗是示例性黑素瘤患者的手术干预的替代方案。然而，很少有病灶内化合物已引起系统性应答和旁观者未治疗病灶的消退。并入IL治疗的一些现有化合物并不理想。
例如，BCG与大量并发症有关，包括过敏反应、血清转化和系统性感染[Abbott etal.,Surg Clin North Am 94:1003-1015,viii(2014)]。在黑素瘤治疗的最大研究之一中，BCG也未能证明是有效的[Agarwala et al.,Cancer 100:1692-1698(2004)。病灶内IL-2不能引起系统性肿瘤特异性应答，尽管它在62.5％的治疗的黑素瘤患者中导致完全应答[Radny et al.,Br J Cancer 89:1620-1626(2003)]。
作为IL治疗的新候选者，PV-10已经证明了细胞溶解肿瘤细胞而没有显著的不良副作用的能力。PV-10最近用于治疗转移性黑素瘤的2期临床试验显示，在中等副作用的10个靶向病灶中，总体应答率为50％，完全应答率为26％[Thompson et al.,Ann SurgOncol.(2014)].在治疗的患者中，52周后8％没有疾病迹象。
在1期研究中，总体病灶应答率为91.7％(治疗14天内11个注射病灶中的10个病灶消退)。这些试验都表明未经治疗的病灶也会消退(分别为23％和83％)。这些数据表明，由IL PV-10触发的旁观者肿瘤存在肿瘤特异性系统性应答。
PV-10诱导的肿瘤特异性免疫的机制在很大程度上仍然未知。先前在荷有B16和MT-901的小鼠中的研究表明在IL注射PV-10后激活肿瘤特异性T细胞[Toomey et al.,PloSone 8:e68561(2013)]。在另一项研究中，检查了用IL PV-10治疗的患者淋巴细胞浸润到黑素瘤病灶中的情况。然而，在IL PV-10后病灶变小的一些患者的消融病灶中不能检测到淋巴细胞。[Sarnaik et al.,ASCO Annual Meeting,Abstract 9028,presented June 2,2014]。这可能是由于PV-10的细胞毒性或治疗后肿瘤尺寸的减小。出乎意料的是，在这些相同患者的外周血中测量到循环CD8+和CD4+T细胞的数量增加以及针对自体肿瘤或HLA匹配的肿瘤增加的IFN-γ应答。
使用荷有表达OVA的M05黑素瘤的小鼠，下文显示在IL PV-10治疗后存在增加的肿瘤特异性T细胞(OT-1T细胞)和更多具有记忆特征的T细胞。OT-1T细胞在PV-10处理的荷有M05的小鼠中的过继转移表明OT-1T细胞响应于肿瘤抗原而更迅速地增殖。这些效果可以通过树突细胞(DC)从肿瘤浸润到引流淋巴结(DLN)和通过DC激活进行部分解释(图4)。
HMGB1蛋白在肿瘤发展和癌症治疗过程中同时具有肿瘤促进和肿瘤抑制作用。一方面，HMGB1功能障碍与癌症的各种特征(hallmark)中的每一种相关，并且能够降低抗肿瘤免疫[Kusume et al.,Pathobiology 76:155-162(2009)；Liu et al.,Leukemia 25:23-31(2011)]。在肿瘤微环境中检测到分泌的HMGB1的水平增加和膜结合的HMGB1的表达[Tanget al.,Biochim Biophys Acta 1799:131-140(2010)]。
另一方面，HMGB1由于与肿瘤抑制剂-成视网膜细胞瘤蛋白质相关联[Jiao etal.,Acta Pharmacol Sin 28:1957-1967(2007)]或稳定基因组[Giavara et al.,CurrBiol 15,68-72(2005)]而发挥抗肿瘤作用。在荷有多形性胶质母细胞瘤的小鼠中，FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)和胸苷激酶的局部递送通过从垂死的肿瘤细胞中释放HMGB1以激活肿瘤浸润性DC而导致肿瘤消退[Curtin et al.,PLoS Med 6,e10(2009)]。HMGB1/TLR4途径的阻断通过干扰抗原加工和DC的交叉呈递能力消除化疗和放疗后的肿瘤特异性免疫应答[Apetoh et al.,Nature Med 13:1050-1059(2007)]。此外，TIM-3抑制DC中HMGB1介导的核酸传感器系统，并因此能够降低DNA疫苗和化疗的功效[Chiba et al.,Nature Immunol13:832-842(2012)]。
在下面讨论的研究中，测量到用PV-10孵育后黑素瘤细胞上清液中HMGB1释放的增加。这些数据与以下观察结果一致：在光动力照射后，HMGB1从用玫瑰红处理1小时的Hela细胞被动地释放[Panzarini et al.,PloS One 9:e105778(2014)]。
在Panazarini等人的研究中，用玫瑰红乙酸酯处理使得光敏化的Hela细胞能够变得凋亡和自噬并分泌HSP70、HSP90和HMGB1。相反，本发明的结果显示HSP90的水平未改变并且在PV-10孵育后分泌的HSP70较少。这种差异可能是由于不同的方法来处理细胞和使用玫瑰红的不同类似物。
此外，患者血清中的HMGB1水平在IL PV-10后增加。这些结果与显示放化疗后癌症患者血清中HMGB1水平升高的另一项研究一致[Suzuki et al.,Cancer Res 72:3967-3976(2012)]。因此，Suzuki及其同事发现，具有抗原特异性T细胞应答的患者中HMGB1的水平显著高于不具有抗原特异性T细胞应答的患者中的水平。在他们的研究中，HMGB1的免疫组织化学分析显示，在切除的肿瘤样品中HMGB1的较高表达与患者的较好存活相关。
下面的研究显示用PV-10处理的肿瘤细胞上清液中的HMGB1负责BM-衍生的DC上的CD40表达上调和DC增加的抗原呈递。这与观察到HMGB1对于激活人类髓样DC和浆细胞样DC是重要的一致[Dumitriuet al.,J Immunol 174:7506-7515(2005)；Messmer et al.,JImmunol173:307-313(2004)]。
具有CD40信号传导的DC的成熟对于呈递肿瘤抗原和在迁移到肿瘤组织中后引发CD8+ T细胞的细胞毒性活性是至关重要的[Watanabe et al.,J Immunol 171:5828-5836(2003)]。Watanabe发现DC中的短期CD40信号传导增强DC向肿瘤-DLN的迁移并成功诱导了保护性免疫。此外，已显示HMGB1诱导针对趋化因子配体9(CCL9)和趋化因子C-X-C基序配体12(CXCL12)的DC应答[Dumitriu et al.,J.Leuk Biol 81:84-91(2007)]并且HMGB1/RAGE相互作用能够在24小时后诱导皮下注射的DC向DLN的迁移[Manfredi et al.,J Immunol180:,2270-2275(2008)]。这与我们的数据一致，即IL PV-10诱导从肿瘤位点迁移到DLN中的DC数量增加。HMGB1与RAGE受体的相互作用也可能参与这一过程。
HMGB1在癌症中的双重功能取决于靶细胞、肿瘤细胞或其所作用的免疫细胞，其与之相互作用的受体以及与细胞因子的协同作用。这可通过HMGB1的氧化还原状态进行部分解释：来自凋亡细胞的氧化性HMGB1诱导耐受[Kazama et al.,Immunity 29:21-32(2008)]。将研究由PV-10以及不涉及本发明的研究的其他DAMP例如尿酸和钙网蛋白治疗的肿瘤分泌的HMGB1的氧化还原状态。
该研究已经表明，IL PV-10疗法可以在黑素瘤患者中引起增强的肿瘤特异性免疫应答。在荷有黑色素瘤的小鼠中，IL PV-10诱导肿瘤细胞坏死以释放HMGB1，这对于DC激活和DC浸润至DLN中并因此激活肿瘤特异性T细胞是至关重要的。IL PV-10在诱导抗肿瘤免疫中的作用也提示了增强肿瘤特异性免疫应答与阻断免疫检查点分子如CTLA-4、PD-1、PD-L1和PD-L2组合的可能性。
结果
IL PV-10导致黑素瘤患者的系统性免疫应答
为了研究IL注射PV-10在治疗转移性黑素瘤中的潜在机制，进行了包括14个患有真皮和/或皮下转移性黑素瘤的人类患者的试验性临床试验(下表1)。该研究计划如图1A所示。通过活检前处理(pre-treatment)对每位患者中的两个研究病灶进行采样。
表1
IL PV-10治疗患者的人口统计学*
| 患者 | 年龄 | 性别 | 阶段 | 先前的治疗 |
| PV001 | 48 | M | IIIC | 隔离肢体输注，IFN |
| PV002 | 81 | F | IIIB | 无 |
| PV003 | 72 | M | IIIC | 隔离肢体输注,ipi |
| PV004 | 77 | F | IIIB | 隔离肢体输注,ipi |
| PV005 | 60 | F | IIIC | 无 |
| PV006 | 77 | M | IV | ipi,nivo |
| PV007 | 59 | F | IV | 隔离肢体输注,vem |
| PV008 | 75 | M | IIIC | 隔离肢体输注,chemo,ipi,nivo |
| PV009 | 80 | M | IIIC | 无 |
| PV010 | 86 | F | IIIC | 无 |
| PV011 | 75 | M | IIIC | 无 |
| PV012 | 80 | M | IIIB | 隔离肢体输注,PEG-IFN |
| PV013 | 86 | F | IIIB | 隔离肢体输注,ipi |
| PV014 | 77 | F | IV | 隔离肢体输注 |
| PV015 | 69 | F | IIIC | 无 |
*IFN＝干扰素；PEG-IFN＝聚乙二醇化的干扰素；ipi＝易普利姆玛；vem＝威罗菲尼；nivo＝纳武单抗。
七天后[试验第零天(D0)]，两个病灶之一IL注射PV-10。PV-10注射后7至14天，两个部位都被完全切除。固定活检标本，用苏木精和伊红(H&E)染色，并由病理学家评估。在进行IL PV-10注射之前和之后进行治疗和未治疗样品中病理学完全应答(pCR)的比较，并且用黑素瘤抗原Melan-A/MART-1(melA)的免疫组织化学染色证实结果。
如图1B和图1C所示，在PV-10治疗和旁观者病灶中肿瘤完全消退。12个患者中有4个注意到该消退。另外，12个患者中有11个表现出注射病灶至少部分消退，melA+细胞频率减少4倍(平均值：26.8±3.6对6.4±2.8)。此外，12个患者中有10个表现出旁观者病灶至少部分消退，melA+细胞比例减少3倍(平均值：37.5±6.7对12.2±4.1)。
这些结果表明，IL PV-10能够诱导IL PV-10注射直接消融所继发的系统性应答。为了检查免疫细胞的作用，比较用IL PV-10治疗之前和之后PV-10治疗和旁观者病灶中CD3+、CD4+和CD8+ T细胞的百分比。然而，当肿瘤完全消退时，在病灶中检测到很少的浸润，并且没有测量到显著的变化。
接下来，检查在用IL PV-10治疗之前和之后在外周血中免疫细胞。在PV-10治疗后循环CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和NK T细胞显著增加(图1D-1F)。
为了确定CD8+ T细胞是否能够识别黑素瘤肿瘤，循环CD8+ T细胞被纯化并与自体肿瘤细胞体外共培养。用IL PV-10治疗后干扰素-γ(IFN-γ)的产生显著增加(图1G)，表明PV-10治疗增强肿瘤特异性免疫应答。
由于自体肿瘤不适用于所有患者，因此也使用HLA匹配的肿瘤细胞系。在测试的6个患者中的4个中IL PV-10注射后，循环CD8+ T细胞中的IFN-γ水平增加。当CD8+ T细胞与HLA-错配的细胞系共培养时，没有测量到变化。总之，这些研究表明IL PV-10注射增强黑素瘤患者的肿瘤特异性免疫应答。
IL PV-10引发荷有M05的小鼠中的肿瘤特异性免疫应答
为了研究由PV-10引发的肿瘤特异性免疫应答的潜在机制，使用荷有M05肿瘤细胞的C57BL/6小鼠。MO5肿瘤细胞是表达卵清蛋白(OVA)蛋白的B16黑素瘤细胞。类似于B16模型中的发现[Toomey et al.,PloS one 8:e68561(2013)]，IL注射PV-10直接抑制肿瘤生长(图2A)。与PBS处理组相比，IL PV-10治疗导致PV-10处理的小鼠的引流淋巴结(DLN)中的OVA特异性CD8+ T细胞增加(图2B)。
为了确定IL注射PV-10是否诱导具有记忆特征的T细胞，将来自用IL PV-10治疗两次的小鼠的脾细胞在OVA肽和补充有细胞因子IL-15和IL-21的培养基的存在下体外培养，这是维持CD8+记忆T细胞所必需的[Nguyen et al.,J Leukocyte Biol 87:43-49(2010)]。与从PBS处理的小鼠分离的T细胞相比，来自PV-10处理的小鼠的T细胞表现出响应于M05细胞的IFN-γ分泌增加约2倍。这表明IL PV-10可以在荷有M05黑素瘤的小鼠中诱导具有记忆特征的肿瘤特异性T细胞。
为了监测IL PV-10后的CD8+ T细胞应答，在第13天将PV-10或PBS注射到荷有M05黑素瘤的小鼠中，并过继转移用violet染料标记的OT-1T细胞。OT-1T细胞是特异性识别衍生自OVA蛋白的OVA 257-264肽的CD8+ T细胞[et al.,EurJ Immunol 21(11):2891-2894(1991)；Lipford et al.,J Immunol.150(4):1212-1222(1993)]。PV-10的IL注射和OT-1细胞的过继转移的组合显著阻碍了肿瘤进展并增加存活率(图3A和B)。
单独OT-1细胞的过继转移或单独用IL PV-10治疗不足以阻止当在第13天开始治疗时的肿瘤进展，平均肿瘤大小为52mm2。通过测量注射的CD45.1+OT-1T细胞的染料稀释度，在IL PV-10注射后检查肿瘤、淋巴结(LN)和脾脏中OT-1T细胞的增殖(图3C)。OT-1细胞在转移后第4天在PV-10或PBS处理的小鼠的肿瘤部位和近端淋巴结中强烈增殖，超过70％的细胞具有至少一个额外的分裂(与转移之前的细胞，以下称为“分裂的”T细胞)(图3D)。
与用PBS处理的小鼠(图3C-F)相比，在用IL PV-10处理的小鼠中在脾脏、肿瘤和远端LN中测量到分裂的T细胞数量的增加。在近端淋巴结中未发现变化(数据未显示)，表明引流LN中的OT-1T细胞应答可能过于强大以致无法测量治疗小鼠和未治疗小鼠之间的差异。总之，这些数据表明IL注射PV-10能够增强肿瘤特异性CD8+ T细胞应答，导致阻止荷有M05的小鼠的肿瘤进展。
IL PV-10导致树突细胞(DC)激活
因为DC是能够引发T细胞的专职抗原呈递细胞，所以在IL PV-10处理后检查了脾和LN中DC的存在。在PV-10注射后第7天，脾DC的绝对数量和百分比没有变化。与先前的发现一致，其他免疫亚群包括CD8+T细胞和骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)也未改变(数据未显示)，[Toomey et al.,PloS one 8:e68561(2013)]。
然而，在PV-10处理24小时(即约1天)后，引流LN(DLN)但不是在非引流LN(NDLN)中渗透的DC的数量增加(图4A)。处理后，DLN中细胞总数没有显著变化。72小时后，经PV-10处理的小鼠的DLN中浸润的DC的数量降低至PBS处理的小鼠中的基础水平，表明DC的浸润是短暂的。
为了检查DC是否从肿瘤部位浸润，在IL注射PV-10或PBS后4小时注射了用FITC标记的OVA蛋白(FITC-OVA)。在PV-10处理的小鼠的DLN但不是在NDLN中测量到增加的FITC+DC，(图4B)，表明IL PV-10能够诱导DC吸收抗原并从肿瘤位点浸润DLN。
因为IL PV-10处理后在DLN中测量了增强的OT-1T细胞增殖和增加的DC浸润，所以假设IL注射PV-10导致肿瘤特异性应答所需的DC激活。为了测试该假设，将BM-衍生的DC与先前用IL PV-10或PBS注射的B16肿瘤的上清液共培养。
在用OVA蛋白脉冲后，DC与OT-1T细胞共培养。与衍生自PBS处理的小鼠的B16肿瘤的上清液培养的DC相比，用衍生自PV-10处理的小鼠的B16肿瘤的上清液培养的DC诱导OT-1T细胞增殖增加(图4C)。另外，与用PBS处理的细胞的细胞裂解物脉冲的DC相比，经PV-10处理的细胞的细胞裂解物脉冲的DC能够更好地刺激OT-1T细胞分泌IFN-γ(图4D)。总之，这些结果支持IL PV-10在DC激活中和DC从肿瘤部位至DLN的浸润增加的作用。
PV-10治疗通过HMGB1增加DC激活。
为了检查IL PV-10诱导的肿瘤死亡可能与DC的激活相关联，研究了PV-10介导的细胞死亡，以及可能有助于DC激活的肿瘤细胞释放的潜在因子。
首先，体外研究由PV-10介导的鼠黑素瘤B16细胞的细胞毒性。如图5A所示，PV-10在B16细胞中表现出剂量依赖性细胞毒性，处理48小时后IC50值为60μM。在小鼠胚胎NIH3T3成纤维细胞中具有较小的细胞毒性，在用PV-10处理48小时后IC50值为110μM(图5A)。在6、12和24小时时，PV-10对B16和3T3细胞的IC50值相似。
在用50μM的PV-10处理48小时后，B16细胞和人原代黑素瘤(P)细胞的坏死(4'，6-二脒基-2-苯基吲哚二乳酸盐染色；DAPI+)显著增加，而对3T3或人胚肾293T细胞的影响很小(图5B)。然而，相对小比例的细胞处于早期凋亡中，这由Annexin V+DAPI-(BioVision,Inc.,Milpitas CA；图5C)证明。这在处理后6、12和24小时也发生了。该结果表明用50μM的PV-10处理通过坏死而非细胞凋亡导致细胞死亡。在相同剂量的PV-10存在下，极少数3T3成纤维细胞和人类胚胎肾293T细胞坏死或凋亡(图5B和5C)。这些研究表明PV-10可以以对非肿瘤细胞无毒的特定剂量杀死肿瘤细胞。
先前已经表明，坏死能够与细胞膜完整性的破坏和细胞溶质内容物失控释放到细胞外空间有关。接下来检查用PV-10处理的肿瘤细胞是否释放出与损伤相关的分子模式分子(DAMP)。
DAMP如HMGB1、IL-1a和HSP蛋白是坏死的已知副产物和DC激活的刺激物。用0、100或200μM的PV-10处理B16、888黑素瘤细胞和3T3成纤维细胞48小时。对等量的上清液进行HMGB1、HSP70、HSP90或IL-1a的免疫印迹。用PV-10处理导致HMGB1从B16细胞和人黑素瘤888细胞但不是从3T3细胞以剂量依赖性方式释放到上清液中(图6A和6B)。在用PV-10处理后未检测到HSP70和IL-1a并且HSP90未改变(数据未显示)。
为了确定分泌的HMGB1是否有助于DC激活，在HMGB1中和抗体或同种型(isotype)对照抗体存在下，将骨髓-(BM-)衍生的DC与来自用PV-10处理2天的B16细胞的10％上清液(TS)孵育。HMGB1中和抗体通过阻断来自RAW264.7巨噬细胞的TNF-α分泌来验证。
来自PV-10处理的细胞的肿瘤上清液导致DC成熟，同时表面CD40上调。HMGB1的中和显著降低了CD40的表达(图6C)。用PV-10处理DC直接没有改变CD40表达，表明PV-10本身不影响DC成熟。DC上的其他共刺激标志物包括CD86和CD80未被上调。
为了比较DC的抗原呈递能力，在HMGB1中和抗体或同种型对照抗体存在下，将BM-衍生的DC与来自用IL PV-10处理的M05肿瘤的上清液孵育2天。前处理的DC用OVA蛋白脉冲，然后与OT-1细胞共培养以检测OT-1T细胞增殖。如通过[3-H]-胸苷掺入所确定的，HMGB1的阻断降低了DC刺激OT-1T细胞增殖的能力(图6D)。该结果表明用PV-10处理肿瘤细胞如黑素瘤细胞导致HMGB1的释放，这对于DC激活是必需的。
为了确定HMGB1释放是否与用IL PV-10治疗的患者相关，通过测量患者血清中的IFN-γ来比较用IL PV-10治疗之前和之后的患者血清中的HMGB1水平。在用IL PV-10治疗后7-14天收集的样品中，患者血清中HMGB1的浓度显著增加(图7)。因此，在用PV-10IL治疗的患有肿瘤如转移性黑素瘤的患者中，HMGB1分泌似乎有助于旁观者效应。
实施例
以下实施例旨在是说明性的而非限制性的，并且代表本发明的具体实施方案。
一般方法
人类受试者
1期临床试验招募了14个皮肤和/或皮下转移性黑色素瘤患者。(NCT01760499)。14个患者中有6个患有以前用易普利姆玛、抗PD-1和/或威罗菲尼治疗无效的转移性疾病(表1)。通过活检前处理对每个患者中的两个肿瘤病灶进行采样；其中一个病灶注射IL PV-10，然后7-14天后完全切除两个残留部位。将活检标本在福尔马林中固定并包埋在石蜡中。将标本切成5-8μm厚，用苏木精和伊红染色以确定病理完全应答。
使用CD8、CD4、CD56和melA进行免疫组织化学。在IL PV-10注射前、IL PV-10注射后7-14天和IL PV-10注射后21-28天收集外周血和血清用于分析。通过FicollPlus(GE Healthcare,Pittsburgh,PA)分离外周血单核细胞(PBMC)。血液在室温下孵育1小时后收集上清液并在1,000×g下离心来制备血清。
动物
雌性C57BL/6小鼠(6-8周龄)购自Harlan Laboratories(Indianapolis，IN)。小鼠饲养于H.Lee Moffitt Cancer Center and Research Institute的动物研究设施中。根据美国兽医协会指南，通过吸入CO2对小鼠进行人道安乐死。每日观察小鼠,如果孤立的皮下肿瘤的面积超过200mm2或小鼠显示出可与转移癌相关的体征，则人道安乐死。所有动物实验均获得机构动物护理和使用委员会的批准，并根据美国公共卫生服务政策和国家研究委员会指南进行。
细胞系和细胞培养
从ATCC(Manassas，VA)获得NIH3T3、293T细胞和黑素瘤B16细胞。从NIH(Bethesda，MD)获得人黑素瘤细胞526、624和888。将细胞在补充有10％热灭活的FBS,0.1mM非必需氨基酸,1mM丙酮酸钠,2mM新鲜L-谷氨酰胺,100mg/ml链霉素,100U/ml青霉素,50mg/ml庆大霉素,0.5mg/ml fungizone(均来自Life Technologies,Rockville,MD)和0.05mM 2-ME(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)RPMI培养基(cRPMI)中培养。表达OVA蛋白的M05细胞[Faloet al.,Nature Med 1:649-653(1995)]维持在补充有0.8mg/ml G418的cRPMI中。细胞系测试为支原体污染阴性。所有细胞系在从冷冻储液初始恢复后传代少于10次。
对于体外研究，将肿瘤细胞与不同剂量的PV-10孵育指定的时间。收集细胞上清液用于功能测定或蛋白质印迹。从Provectus Biopharmaceuticals,Inc.,Knoxville,TN获得PV-10。
对于体内研究，将3×105个肿瘤细胞皮下(s.c.)注射到小鼠的一侧，并在第7或13天病灶内(IL)注射PV-10或PBS。18小时后从小鼠中分离肿瘤并用肿瘤解离试剂盒(Miltenyi Biotec,San Diego,CA)和GentleMACS(Miltenyi Biotec)进行消化。将活细胞以5×105个细胞/ml的浓度重悬于cRPMI中。2天后收集细胞上清液用于功能测定。
FACS和四聚体染色
通过将细胞通过70μm细胞过滤器来制备来自所示组织的单细胞悬浮液。在用ACK缓冲液进行RBC裂解后，将细胞用以下抗体在FACS缓冲液中染色用于流式细胞术分析：抗人CD3、CD4、CD8和CD56；抗小鼠CD11c、I-Ab、CD45.1、CD45.2、CD86、CD80和CD40(均来自BDBiosciences,San Diego,CA)。对于四聚体染色，细胞用H-2Kb/SIINFEKL四聚体(MBLinternational,Woburn,MA)在室温下染色20分钟，然后根据制造商的说明在冰上用另外的抗体孵育20分钟。在分析前，使用活/死的可固定近红外或aqua荧光活性染料(Invitrogen)排除死细胞。通过配备有四个激光器的LSR II(BD Biosciences)获得细胞，并用软件(Tree Star,Ashland,OR)分析数据。
通过ELISA评估IFN-γ和HMGB1
为了检测来自人类样品的IFN-γ，用人CD8+ T细胞分离试剂盒(MiltenyiBiotec)从PBMC分离CD8+ T细胞。1×105个细胞与肿瘤细胞一式三份以1:1的比率在U型底96孔板中共培养。48小时后，根据生产商的说明，用IFN-γELISA试剂盒(R&D Systems，Minneapolis，MN)测量细胞上清液中的IFN-γ水平。
为了检测患者血清中的HMGB1，根据制造商的说明使用来自IBL international(Toronto，Canada)的HMGB1ELISA试剂盒。
为了检测小鼠样品中的IFN-γ，小鼠s.c.接受了3×105个M05细胞。在初始肿瘤细胞注射后第7天，小鼠在相反的一侧s.c.接受第二次注射3×105个M05细胞。在第7天和第17天将PV-10或PBS(50μL)IL注射入初始M05肿瘤病灶。在第23天，收集脾细胞并在补充有1μg/ml SIINFEKL肽，20ng/ml IL-15和20ng/ml IL-21(R&D Systems)的cRPMI中培养7天(R&DSystems)(Cheng et al.,J Exp Med 205:2235-2249(2008)。将扩增的细胞与辐照的M05细胞以10:1的比例混合，并且在48小时后用IFN-γELISA试剂盒(BD Biosciences)根据制造商的方案测量上清液中的IFN-γ产生。
T细胞的过继转移
用T细胞富集柱(R&D Systems)纯化CD45.1OT-1T细胞，并在37℃用CellTrackerTMViolet(Life Technologies,现为Thermo Fisher Scientific,Inc.Waltham,MA)孵育20分钟。在PBS中洗涤两次后，将3×105个标记的细胞重悬于100μl的PBS中并静脉内注射进入荷有MO5肿瘤的小鼠。4天后，收集脾脏、淋巴结(LN)和肿瘤并用CD45.1和CD45.2的抗体染色。具有至少一个分裂的CD45.1+CD45.2-细胞被认为是“分裂的细胞”。
DC功能测定
在RBC裂解后，用重组小鼠20ng/ml GM-CSF和10ng/ml IL-4(R&D Systems,Minneapolis,MN)培养从C57BL/6小鼠获得的骨髓[Liu et al.,J Immunol 191:1916-1926(2013)]。在第5天，根据制造商的方案，用Opti-prep梯度(Axis-Shield，Oslo，Norway)纯化DC，并在GM-CSF和IL-4存在下以5×105个细胞/ml的细胞密度进行培养[Vohra et al.,Cancer Immunol Immun CII 59:729-736 2010)]。
在抗HMGB1(IBL international,Toronto,Canada)或相关同种型的拮抗性抗体存在下，将来自用100μM的PV-10孵育B16细胞2天的10％上清液培养DC。接下来，将DC用10μg/ml的OVA蛋白(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)脉冲2小时。多次洗涤后，将DC与1e5应答者OT-1T细胞一式三份在U型底96孔板中以不同刺激物与应答者的比率共培养3天。在细胞收获前18小时将3H-胸苷(1μCi)加入到每个孔中。通过3H-胸苷掺入液体闪烁计数器Trilux(PerkinElmer,Waltham,MA)测量T细胞增殖。
IC50的确定
将细胞与12.5、25、50、100或200μM的PV-10或PBS在12孔板中孵育6、12、24和48小时。收集所有孔，与计数珠混合并用LSR II获取。分析前用DAPI排除死细胞。通过比较珠事件与细胞事件的比率来计算活细胞的绝对数量。使用GraphPad软件(GraphPadSoftware,Inc.,La Jolla,CA)将PV-10对细胞生长的半数最大抑制确定为IC50。
蛋白质印迹
为了除去细胞碎片，将细胞上清液以14,000×g离心。测定每个样品的蛋白质浓度。在4-12％Bis-Tris Gels(Life Technologies)上分离等量的蛋白质，然后转移到聚偏二氟乙烯膜(Millipore)上。用5％BSA(w/v)的PBS将膜封闭1小时，并在4℃下用HMGB1(目录号3935)、HSP70(D69)或HSP90(C45G5)抗体探测过夜(均来自CellSignaling Technology,Danvers,MA)。通过用辣根过氧化物酶连接的二抗孵育并用增强的化学发光试剂处理来显现免疫反应性。
统计学分析
使用GraphPad软件、使用双尾Student's t检验或Wi lcoxon配对检验分析数据。p值<0.05被认为是统计学显著的。
这里引用的每个专利、专利申请和文章均通过引用并入本文。前面的描述和实施例旨在说明而不被视为限制。在本发明的精神和范围内的其他变化也是可能的，并且将容易地呈现给本领域技术人员。
Claims (25)
1.一种从宿主动物形成富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物的方法，该方法包括以下步骤：
(A)使动物宿主中的癌性肿瘤组织与肿瘤消融量的卤代呫吨接触；
(B)将所述动物宿主维持足够的时间段以诱导动物免疫系统产生针对所述肿瘤的诱导的免疫抗癌组分；
(C)从所述动物宿主收集包含一种或多种含有所述诱导的免疫抗癌组分的等分试样的外周血、肿瘤组织或淋巴组织的样品；和
(D)体外培养并优先扩增存在于所述样品中的所述诱导的免疫抗癌组分以形成富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物。
2.权利要求1所述的方法，其中所述诱导的免疫抗癌组分包括从宿主动物获得的免疫细胞。
3.权利要求2所述的方法，其中所述免疫细胞是NK细胞。
4.权利要求2所述的方法，其中所述免疫细胞是T细胞。
5.权利要求2所述的方法，其中所述免疫细胞是树突细胞。
6.权利要求2所述的方法，其中所述免疫细胞是B细胞。
7.权利要求1所述的方法，其中所述诱导的免疫抗癌组分包括抗肿瘤抗体和细胞因子。
8.权利要求7所述的方法，其中所述细胞因子包括HMGB1。
9.权利要求7所述的方法，其中所述细胞因子包括IFN-γ。
10.权利要求1所述的方法，其中所述富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物经调整以形成免疫有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂，其含有溶解或分散于药学上可接受的稀释剂中的免疫有效浓度的富集肿瘤特异性免疫抗癌剂，所述组合物还含有适合肠胃外注射的盐含量、重量摩尔渗透压浓度和pH值。
11.权利要求1所述的方法，其中T细胞与所述样品分离并且优先扩增。
12.权利要求1所述的方法，其还包括在步骤(D)之前将所述样品储存的步骤。
13.权利要求1所述的方法，其还包括在步骤(D)之后将所述样品储存的步骤。
14.权利要求1所述的方法，其中所述卤代呫吨为下面式1或式2的化合物，其中R1独立地为F、Cl、Br、I、H或C1-C4烷基；R2、R3、R4和R5独立地为Cl、H或I，其中R2、R3、R4和R5中至少一个取代基是I并且至少一个是Cl或H；R6独立地为H或C1-C4烷基；R11是H或C1-C4烷基；R12是H或C1-C7酰基
15.权利要求1所述的方法，其中接触的癌性肿瘤组织选自由黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、胰腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、胆囊癌、原发性或转移性肝癌和小细胞肺癌和非小细胞肺癌组成的组中的一种或多种。
16.权利要求1所述的方法，其中接触的癌性肿瘤组织是黑素瘤。
17.一种治疗患有癌性肿瘤的动物宿主的方法，该方法包括将有效量的权利要求10所述的免疫有效的富集肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂给药于所述动物宿主的步骤。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述免疫有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂包括NK细胞、T细胞、B细胞和树突细胞中的一种或多种。
19.根据权利要求17所述的方法，其中所述免疫有效的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂包括HMGB1和IFN-γ中的一种或两种。
20.根据权利要求17所述的方法，其中所述免疫有效富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂制剂中的富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂对于所述宿主动物是自体的。
21.根据权利要求17所述的方法，其还包括将一种或多种免疫系统下调的系统性抑制剂给药于所述宿主动物的步骤。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述免疫系统下调的系统性抑制剂是与CTLA-4、PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种发生免疫反应的单克隆抗体。
23.根据权利要求21所述的方法，其中在所述肿瘤消融量的卤代呫吨的给药之后并且从所述宿主动物收集含有所述诱导的免疫抗癌组分的所述样品之前，将所述免疫系统下调的系统性抑制剂给药于所述宿主动物。
24.一种治疗患有多种癌性肿瘤的动物宿主的方法，该方法包括以下步骤：
(A)使所述动物宿主中的第一癌性肿瘤的组织与肿瘤消融量的卤代呫吨接触；
(B)将所述动物宿主维持足够的时间段以诱导动物免疫系统产生针对所述肿瘤的诱导的免疫抗癌组分；
(C)从所述动物宿主收集包含一种或多种含有所述诱导的免疫抗癌组分的等分试样的外周血、肿瘤组织或淋巴组织的样品；
(D)使所述动物宿主中的第二种癌性肿瘤的组织与来自所述动物宿主的所述诱导的免疫抗癌组分接触；和
(E)将所述动物宿主维持足够的第二时间段以诱导动物免疫系统产生针对所述肿瘤的第二诱导的免疫抗癌组分。
25.根据权利要求24所述的方法，其包括另外的以下步骤：
(F)从所述动物宿主收集包含一种或多种含有所述第二诱导的免疫抗癌组分的等分试样的外周血、肿瘤组织或淋巴组织的第二样品；和
(D)体外培养并优先扩增存在于所述样品中的所述诱导的免疫抗癌组分以形成富集的肿瘤特异性免疫抗癌剂组合物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14/974,357 US10130658B2 (en) | 2015-12-18 | 2015-12-18 | Method of ex vivo enhancement of immune cell activity for cancer immunotherapy with a small molecule ablative compound |
| US14/974,357 | 2015-12-18 | ||
| PCT/US2016/065542 WO2017105993A1 (en) | 2015-12-18 | 2016-12-08 | Method of ex vivo enhancement of immune cell activity for cancer immunotherapy with a small molecule ablative compound |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108495648A true CN108495648A (zh) | 2018-09-04 |
Family
ID=57868325
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201680067095.6A Pending CN108495648A (zh) | 2015-12-18 | 2016-12-08 | 用小分子消融化合物离体增强免疫细胞活性进行癌症免疫治疗的方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10130658B2 (zh) |
| EP (1) | EP3347041A1 (zh) |
| JP (1) | JP6773788B2 (zh) |
| KR (1) | KR20180094903A (zh) |
| CN (1) | CN108495648A (zh) |
| CA (1) | CA3006302C (zh) |
| HK (1) | HK1257690A1 (zh) |
| MX (1) | MX2018004556A (zh) |
| WO (1) | WO2017105993A1 (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112530581A (zh) * | 2020-12-03 | 2021-03-19 | 安徽医科大学第一附属医院 | 一种前列腺癌患者的免疫分子分类系统及其应用 |
| CN115916343A (zh) * | 2020-03-26 | 2023-04-04 | 普罗维克图斯药品技术公司 | 卤代呫吨在肿瘤学和病毒学中的新用途 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3773548B1 (en) * | 2018-05-16 | 2023-08-09 | Provectus Pharmatech, Inc. | In vitro and xenograft anti-tumor activity of a halogenated-xanthene against refractory pediatric solid tumors |
| US12064507B2 (en) | 2019-11-19 | 2024-08-20 | Provectus Pharmatech, Inc. | Composition and method for oral treatment of leukemia |
| US11419844B2 (en) | 2019-11-19 | 2022-08-23 | Provectus Pharmatech, Inc. | Halogenated xanthene composition and method for treating hematologic cancers |
| US11938182B2 (en) | 2020-03-26 | 2024-03-26 | Provectus Pharmatech, Inc. | Halogenated xanthenes as vaccine adjuvants |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103476943A (zh) * | 2011-03-10 | 2013-12-25 | 普罗维克图斯药品公司 | 用于增强治疗癌症的局部和全身性免疫调节疗法的组合 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4927749A (en) | 1986-04-09 | 1990-05-22 | Jeanette Simpson | Reagent for cell separation |
| US6080409A (en) | 1995-12-28 | 2000-06-27 | Dendreon Corporation | Immunostimulatory method |
| US8557298B2 (en) | 1998-08-06 | 2013-10-15 | Provectus Pharmatech, Inc. | Medicaments for chemotherapeutic treatment of disease |
| CA2497554A1 (en) | 2002-09-20 | 2004-04-01 | Dendreon Corporation | Immunotherapeutic compositions and methods for the treatment of moderately to well-differentiated cancers |
| US8153120B2 (en) | 2007-03-22 | 2012-04-10 | Dendreon Corporation | Methods for inducing a natural killer (NK) cell-mediated immune response and for increasing NK cell activity |
| US8597946B2 (en) | 2008-03-10 | 2013-12-03 | H. Lee Moffitt Caner Center and Research Institute, Inc. | Enhanced dendritic cells for cancer immunotherapy |
| JP2012509720A (ja) * | 2008-11-24 | 2012-04-26 | グラディアント リサーチ，エルエルシー | 軟組織の光熱治療 |
| US20110123483A1 (en) | 2009-11-23 | 2011-05-26 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Hmgb1 for cancer treatment |
| EP4219759A3 (en) * | 2010-05-06 | 2023-09-06 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Monitoring health and disease status using clonotype profiles |
| CA2800844A1 (en) * | 2010-06-02 | 2011-12-08 | Bavarian Nordic A/S | Novel interferon-alpha-producing bone marrow dendritic cells |
| WO2012170742A2 (en) | 2011-06-07 | 2012-12-13 | University Of Hawaii | Treatment and prevention of cancer with hmgb1 antagonists |
-
2015
- 2015-12-18 US US14/974,357 patent/US10130658B2/en active Active
-
2016
- 2016-12-08 EP EP16829342.1A patent/EP3347041A1/en active Pending
- 2016-12-08 WO PCT/US2016/065542 patent/WO2017105993A1/en active Application Filing
- 2016-12-08 CA CA3006302A patent/CA3006302C/en active Active
- 2016-12-08 CN CN201680067095.6A patent/CN108495648A/zh active Pending
- 2016-12-08 MX MX2018004556A patent/MX2018004556A/es unknown
- 2016-12-08 KR KR1020187016912A patent/KR20180094903A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-12-08 JP JP2018530542A patent/JP6773788B2/ja active Active
-
2018
- 2018-10-02 US US16/149,468 patent/US20190030074A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-01-03 HK HK19100056.0A patent/HK1257690A1/zh unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103476943A (zh) * | 2011-03-10 | 2013-12-25 | 普罗维克图斯药品公司 | 用于增强治疗癌症的局部和全身性免疫调节疗法的组合 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| CHRISTIAN BECKER等: "Adoptive tumor therapy with T lymphocytes enriched through an IFN-γ capture assay", 《NATURE MEDICINE》 * |
| HAO LIU等: "Induction of anti-melanoma immunity after intralesional ablative therapy", 《AAR ANNUAL MEETING》 * |
| KNOXVILLE, TENN.-- PROVECTUS BIOPHARMACEUTICALS, INC.: "PV-10 immune mechanism data to be presented at the american association for cancer research annual meeting", 《BIOMED REPORTS》 * |
| KNOXVILLE, TENN.--BUSINESS WIRE: "PV-10 Immune Mechanism Data to Be Presented at the American Association for Cancer Research Annual Meeting", 《BUSINESSWIRE网页》 * |
| PAUL TOOMEY等: "Intralesional Injection of Rose Bengal Induces a Systemic Tumor-Specific Immune Response in Murine Models of Melanoma and Breast Cancer", 《PLOS ONE》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115916343A (zh) * | 2020-03-26 | 2023-04-04 | 普罗维克图斯药品技术公司 | 卤代呫吨在肿瘤学和病毒学中的新用途 |
| CN112530581A (zh) * | 2020-12-03 | 2021-03-19 | 安徽医科大学第一附属医院 | 一种前列腺癌患者的免疫分子分类系统及其应用 |
| CN112530581B (zh) * | 2020-12-03 | 2023-11-21 | 安徽医科大学第一附属医院 | 一种前列腺癌患者的免疫分子分类系统及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US10130658B2 (en) | 2018-11-20 |
| US20190030074A1 (en) | 2019-01-31 |
| JP2018537478A (ja) | 2018-12-20 |
| MX2018004556A (es) | 2019-04-22 |
| JP6773788B2 (ja) | 2020-10-21 |
| CA3006302A1 (en) | 2017-06-22 |
| HK1257690A1 (zh) | 2019-10-25 |
| CA3006302C (en) | 2021-08-31 |
| US20170173079A1 (en) | 2017-06-22 |
| EP3347041A1 (en) | 2018-07-18 |
| WO2017105993A1 (en) | 2017-06-22 |
| KR20180094903A (ko) | 2018-08-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhu et al. | Oxaliplatin induces immunogenic cell death in hepatocellular carcinoma cells and synergizes with immune checkpoint blockade therapy | |
| Liu et al. | Turning cold tumors into hot tumors by improving T-cell infiltration | |
| CN108495648A (zh) | 用小分子消融化合物离体增强免疫细胞活性进行癌症免疫治疗的方法 | |
| Calcinotto et al. | Targeting TNF-α to neoangiogenic vessels enhances lymphocyte infiltration in tumors and increases the therapeutic potential of immunotherapy | |
| Figdor et al. | Dendritic cell immunotherapy: mapping the way | |
| Kim et al. | Phase I/II study of immunotherapy using autologous tumor lysate-pulsed dendritic cells in patients with metastatic renal cell carcinoma | |
| Reichardt et al. | Impact of mammalian target of rapamycin inhibition on lymphoid homing and tolerogenic function of nanoparticle-labeled dendritic cells following allogeneic hematopoietic cell transplantation | |
| Xu et al. | TLR9 agonist enhances radiofrequency ablation-induced CTL responses, leading to the potent inhibition of primary tumor growth and lung metastasis | |
| Harshyne et al. | Glioblastoma exosomes and IGF-1R/AS-ODN are immunogenic stimuli in a translational research immunotherapy paradigm | |
| US11471517B2 (en) | Compositions and methods for preventing and treating graft versus host disease | |
| Di Gennaro et al. | CD4+ FOXP3+ T regulatory cells decrease and CD3+ CD8+ T cells recruitment in TILs from melanoma metastases after electrochemotherapy | |
| EP2787005A1 (en) | Targeted cancer immune therapy | |
| EP3532076B1 (en) | Immunotherapeutic treatments for tumours | |
| Guo et al. | Reprogramming of neutrophils as non-canonical antigen presenting cells by radiotherapy–radiodynamic therapy to facilitate immune-mediated tumor regression | |
| Bockel et al. | Combining radiation therapy and cancer immune therapies: From preclinical findings to clinical applications | |
| Zheng et al. | Sonosensitizer nanoplatform-mediated sonodynamic therapy induced immunogenic cell death and tumor immune microenvironment variation | |
| Rezvani et al. | Lymphodepletion is permissive to the development of spontaneous T-cell responses to the self-antigen PR1 early after allogeneic stem cell transplantation and in patients with acute myeloid leukemia undergoing WT1 peptide vaccination following chemotherapy | |
| Lee et al. | Caspase-cleavable peptide-doxorubicin conjugate in combination with CD47-antagonizing nanocage therapeutics for immune-mediated elimination of colorectal cancer | |
| Dongye et al. | Icaritin and intratumoral injection of CpG treatment synergistically promote T cell infiltration and antitumor immune response in mice | |
| Du et al. | Peptidic microarchitecture-trapped tumor vaccine combined with immune checkpoint inhibitor or PI3Kγ inhibitor can enhance immunogenicity and eradicate tumors | |
| US20160008435A1 (en) | Composition for preventing or treating b-cell lymphoma comprising il-21 expressing mesenchymal stem cells | |
| CN111182918A (zh) | 用于激活免疫细胞的方法 | |
| CN108291204A (zh) | 涉及用于患有晚期癌症的受试者的经活化树突状细胞组合物和免疫治疗处理的方法 | |
| CN114292813B (zh) | 用于激活整体抗肿瘤免疫系统的培养基配方物及制备激动剂激活的整体免疫效应细胞的方法 | |
| WO2011060205A1 (en) | Methods, compositions, and assays for determining the effect of an immune cell on a cell from an infectious or neoplastic disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1257690 Country of ref document: HK |