CN108474018A - 精神疾病生物标记 - Google Patents

精神疾病生物标记 Download PDF

Info

Publication number
CN108474018A
CN108474018A CN201680021725.6A CN201680021725A CN108474018A CN 108474018 A CN108474018 A CN 108474018A CN 201680021725 A CN201680021725 A CN 201680021725A CN 108474018 A CN108474018 A CN 108474018A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacterial population
cells
lactobacillus
excrement
mental disease
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201680021725.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108474018B (zh
Inventor
功刀浩
相泽惠美子
辻浩和
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
National Institute For Mental And Neurological Research National Research And Development Corp
Yakult Honsha Co Ltd
Original Assignee
National Institute For Mental And Neurological Research National Research And Development Corp
Yakult Honsha Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by National Institute For Mental And Neurological Research National Research And Development Corp, Yakult Honsha Co Ltd filed Critical National Institute For Mental And Neurological Research National Research And Development Corp
Publication of CN108474018A publication Critical patent/CN108474018A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108474018B publication Critical patent/CN108474018B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/06—Quantitative determination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/10—Enterobacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/14—Streptococcus; Staphylococcus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/48707—Physical analysis of biological material of liquid biological material by electrical means
    • G01N33/48735—Investigating suspensions of cells, e.g. measuring microbe concentration
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/56916—Enterobacteria, e.g. shigella, salmonella, klebsiella, serratia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/06—Gastro-intestinal diseases
    • G01N2800/065—Bowel diseases, e.g. Crohn, ulcerative colitis, IBS
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/30—Psychoses; Psychiatry
    • G01N2800/302—Schizophrenia
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/30—Psychoses; Psychiatry
    • G01N2800/304—Mood disorders, e.g. bipolar, depression

Abstract

本发明提供一种能够用于精神疾病的客观诊断的精神疾病判定标记。精神疾病的判定标记包含选自双歧杆菌、乳杆菌、短乳杆菌、路氏乳杆菌亚群、清酒乳杆菌亚群、阿托波氏菌簇、脆弱类杆菌群、肠球菌、球形梭菌群、柔嫩梭菌亚群、葡萄球菌、产气荚膜梭菌和肠杆菌科中的1种以上的肠内细菌。

Description

精神疾病生物标记
技术领域
本发明涉及一种能够简便检査的精神疾病的判定标记。
背景技术
在现代社会中，各种各样的因素已成为精神压力的原因，因精神压力而导致精神疾病的情况也很多。若基于WHO国际疾病分类第10版(ICD－10)，则精神疾病可以分为1大类10种，包括认知症、精神分裂症、情绪障碍等各种各样的疾病，在这些精神疾病的发病中，遗传和环境(精神压力)被认为是非常重要的危险因子。近年来，精神疾病的患者数在世界上有增加倾向，在社会上已成为大的问题。
在精神疾病中，抑郁症、躁郁症、精神分裂症的患者数多，相关连的研究也多。
抑郁症的特征是情绪低落、丧失活力、丧失兴趣、伴随有身体疾病的感觉、集中力下降、食欲变化、睡眠变化、身体功能和精神功能减退等症状的组合，是会带来无力感、不安感等的障碍。
躁郁症除了抑郁症的抑郁状态以外，还出现与抑郁状态相反的极端的躁狂状态，是这些状态交替出现的疾病，也称为双相障碍。
另外，精神分裂症以幻听、妄想等的阳性症状和热情下降、感情迟钝等的阴性症状作为特征。
这些精神疾病的诊断基于向患者的问诊，根据情况也综合从其家族获得的信息，以WHO国际疾病分类第10版和美国精神医学会(APA)的“诊断与统计手册第5版”(DSM－5)作为判断基准而进行。然而，最终的判断不得不依赖于基于负责医生的主观经验，在客观诊断这样的方面，诊断的精度不能说是充分的。
另一方面，在关于肠内细菌与精神症状的关系的研究中，已知有在对正常人投与瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)R0052和长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)R0175时，通过自诊断认可了不安、抑郁等的改善(非专利文献1)；和鲍氏梭菌(Clostridiumbolteae)高频率地存在于自闭症儿童的肠内(非专利文献2)，但还不知晓关于肠内细菌和精神疾病的判定的知识。
现有技术文献
专利文献
非专利文献1：Michael et.al.,Gut Microbes 2:4,256-261,2011
非专利文献2：Kinross et.al.,Genome Medicine 2011,3:14
发明内容
发明所要解决的课题
如上所述，精神疾病的诊断尚依赖于基于负责医生的经验的主观，因此，精度不充分。
因此，本发明的课题在于：提供一种更加客观、简便且非侵害性的新型精神疾病的判定标记。
用于解决课题的方法
因此，本发明人着眼于肠内细菌，对是否能够用于精神疾病的判定进行了研究，发现了与目前已知的肠内细菌不同的特定的肠内细菌与各种精神疾病之间存在相关性，通过检査该肠内细菌的有无和细菌数，能够判定精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度，进一步发现若以这些肠内细菌作为指标，则能够进行精神疾病预防治疗剂的筛选，完成了本发明。
即，本发明提供以下的〔1〕～〔21〕。
〔1〕一种包含选自双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳杆菌(Lactobacillus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、路氏乳杆菌亚群(Lactobacillus reuteri subgroup)、清酒乳杆菌亚群(Lactobacillus sakei subgroup)、阿托波氏菌簇(Atopobium cluster)、脆弱类杆菌群(Bacteroides fragilis group)、肠球菌(Enterococcus)、球形梭菌群(Clostridium coccoides group)、柔嫩梭菌亚群(Clostridium leptum subgroup)、葡萄球菌(Staphylococcus)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)和肠杆菌科(Enterobacteriaceae)中的1种以上的肠内细菌的精神疾病的判定标记。
〔2〕如〔1〕所述的标记，其中，精神疾病的判定是对精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度进行判定。
〔3〕如〔2〕所述的标记，其中，精神疾病为选自抑郁症、躁郁症和精神分裂症中的1种以上。
〔4〕一种以判定精神疾病为目的而对被检测体中的选自双歧杆菌、乳杆菌、短乳杆菌、路氏乳杆菌亚群、清酒乳杆菌亚群、阿托波氏菌簇、脆弱类杆菌群、肠球菌、球形梭菌群、柔嫩梭菌亚群、葡萄球菌、产气荚膜梭菌和肠杆菌科中的1种以上的肠内细菌进行测定的方法。
〔5〕如〔4〕所述的方法，其中，精神疾病的判定是对精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度进行判定。
〔6〕如〔5〕所述的方法，其中，精神疾病为选自抑郁症、躁郁症和精神分裂症中的1种以上。
〔7〕如〔4〕～〔6〕中任一项所述的方法，其中，被检测体为被检验者的粪便。
〔8〕一种用于实施〔4〕～〔7〕中任一项所述的测定方法的试剂盒，其特征在于，包含被检测体中的〔1〕～〔3〕中任一项所述的肠内细菌的测定试剂和操作说明。
〔9〕如〔8〕所述的试剂盒，其中，被检测体为被检验者的粪便。
〔10〕一种以〔1〕～〔3〕中任一项所述的肠内细菌的细菌数的变动作为指标的精神疾病改善剂的筛选方法。
〔11〕如〔10〕所述的筛选方法，其中，精神疾病为选自抑郁症、躁郁症和精神分裂症中的1种以上。
〔12〕一种利用〔10〕或〔11〕所述的方法获得的精神疾病改善剂。
〔13〕一种包含选自阿托波氏菌簇、球形梭菌群和葡萄球菌中的1种以上的肠内细菌的躁郁症患者的肠易激综合征的判定标记。
〔14〕如〔13〕所述的标记，其中，肠易激综合征的判定是对肠易激综合征的有无和/或肠易激综合征的重症度进行判定。
〔15〕一种以判定躁郁症患者的肠易激综合征为目的而对被检测体中的选自阿托波氏菌簇、球形梭菌群和葡萄球菌中的1种以上的肠内细菌进行测定的方法。
〔16〕如〔15〕所述的方法，其中，肠易激综合征的判定是对肠易激综合征的有无和/或肠易激综合征的重症度进行判定。
〔17〕如〔15〕或〔16〕所述的方法，其中，被检测体为躁郁症患者的粪便。
〔18〕一种用于实施〔15〕～〔17〕中任一项所述的测定方法的试剂盒，其特征在于，包含被检测体中的〔13〕或〔14〕所述的肠内细菌的测定试剂和操作说明。
〔19〕如〔18〕所述的试剂盒，其中，被检测体为躁郁症患者的粪便。
〔20〕一种以〔13〕或〔14〕记载的肠内细菌的细菌数的变动作为指标的躁郁症患者的肠易激综合征治疗剂的筛选方法。
〔21〕一种利用〔20〕所述的方法获得的躁郁症患者的肠易激综合征治疗剂。
发明效果
若对本发明的判定标记进行测定，则能够简便且非侵害性地判定抑郁症、躁郁症、精神分裂症等精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度。另外，也能够判定抑郁症患者的肠易激综合征的有无和/或重症度。进一步而言，若以本发明的判定标记作为指标，则能够筛选精神疾病改善剂。
附图说明
图1表示抑郁症患者的乳杆菌的细菌数与利用精神压力自诊断问卷HSCL获得的不安症状的得分的相关性。重症度越高细菌数越少，重症度越低细菌数越多。
图2表示第0个月和第6个月的HAM－D21的分差与第0个月和第6个月的双歧杆菌的细菌数的差的相关性。与第0个月相比，越是第6个月的细菌数增加的抑郁症患者，HAM－D21的评分越降低，抑郁症状越缓和。
图3表示躁郁症患者的双歧杆菌的细菌数与利用精神压力自诊断问卷HSCL获得的强迫症状的得分的相关性。重症度越高细菌数越少，重症度越低细菌数越多。
图4表示躁郁症患者的双歧杆菌的细菌数与利用精神压力自诊断问卷HSCL获得的人际关系过敏症的得分的相关性。人际关系过敏症的得分越高细菌数越少，得分越低细菌数越多。
图5表示躁郁症患者的双歧杆菌的细菌数与利用精神压力自诊断问卷HSCL获得的不安症状的得分的相关性。不安症状的得分越高细菌数越少，得分越低细菌数越多。
图6表示躁郁症患者的双歧杆菌的细菌数与利用精神压力自诊断问卷HSCL获得的抑郁症状的得分的相关性。抑郁症状的得分越高细菌数越少，得分越低细菌数越多。
图7表示躁郁症患者的双歧杆菌的细菌数与利用精神压力自诊断问卷HSCL获得的总计得分的相关性。总计得分越高细菌数越少，得分越低细菌数越多。
具体实施方式
本发明的精神疾病的判定标记是选自阿托波氏菌簇、乳杆菌、短乳杆菌、路氏乳杆菌亚群、清酒乳杆菌亚群、双歧杆菌、脆弱类杆菌群、肠球菌、球形梭菌群、柔嫩梭菌亚群、葡萄球菌、产气荚膜梭菌和肠杆菌科中的1种以上的肠内细菌。已知这些肠内细菌存在于人的肠内，但还完全没有报告过这些肠内细菌与精神疾病的关系。乳杆菌是指属于乳杆菌的全部菌，路氏乳杆菌亚群、清酒乳杆菌亚群是指属于该群(group)的菌。
如后述试验例所示，在患有精神疾病的患者的粪便中的上述肠内细菌的细菌数与精神疾病之间看到了有意义的相关关系。更详细而言，在上述肠内细菌的细菌数与精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度之间看到了有意义的相关关系。
其中，精神疾病包括选自抑郁症、躁郁症和精神分裂症中的1种以上。
更具体的肠内细菌与精神疾病的关系如下所述。
1.阿托波氏菌簇(Atopobium cluster)
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中阿托波氏菌簇的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的阿托波氏菌簇的细菌数少于109.5cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
(2)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中阿托波氏菌簇的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的阿托波氏菌簇的细菌数少于109.5cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
2.乳杆菌
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中乳杆菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的乳杆菌的细菌数少于106.5cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
还存在精神压力自诊断问卷的不安症状的得分越高乳杆菌的细菌数越少、症状和得分越低细菌数越多这样的有意义的相关性，利用乳杆菌的细菌数能够判定抑郁症的重症度。具体而言，关于不安症状，可以判定为：每1g被检测体中乳杆菌的细菌数为106.5cells以上时不安症状为轻度、为106.4～105.8cells时不安症状为中度、为105.7cells以下时不安症状为重度的可能性高。
3.短乳杆菌
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中短乳杆菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的短乳杆菌的细菌数少于103.7cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
(2)躁郁症
与正常人相比，躁郁症患者中短乳杆菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的短乳杆菌的细菌数少于104.0cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
(3)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中短乳杆菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的短乳杆菌的细菌数少于104.0cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
4.路氏乳杆菌亚群
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中路氏乳杆菌亚群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.7cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
(2)躁郁症
与正常人相比，躁郁症患者中路氏乳杆菌亚群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
(3)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中路氏乳杆菌亚群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
5.清酒乳杆菌亚群
(1)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中清酒乳杆菌亚群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的清酒乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
6.双歧杆菌
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中双歧杆菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的双歧杆菌的细菌数少于1010.1cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
还存在越是双歧杆菌的细菌数增加的抑郁症患者、其抑郁症状越缓和的倾向。
(2)躁郁症
双歧杆菌的细菌数在躁郁症患者的重症度的判定中是有用的。在利用精神压力自诊断问卷HSCL的评价中，躁郁症患者中存在强迫症状、人际关系过敏症、不安症状、抑郁症状总计的得分越高双歧杆菌的细菌数越少、得分越低细菌数越多这样的有意义的相关性。
具体而言，关于强迫症状，可以判定为：每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数为109.9cells以上时强迫症状为轻度、为109.8～109.5cells时强迫症状为中度、为109.4cells以下时强迫症状为重度的可能性高。关于人际关系过敏症，可以判定为：每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数为1010.1cells以上时人际关系过敏症为轻度、为1010.0～109.9cells时人际关系过敏症为中度、为109.8cells以下时人际关系过敏症为重度的可能性高。另外，关于不安症状，可以判定为：每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数为109.7cells以上时不安症状为轻度、为109.6～109.3cells时不安症状为中度、为109.2cells以下时不安症状为重度的可能性高。关于抑郁症状，可以判定为：每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数为109.9cells以上时抑郁症状为轻度、为109.8～109.4cells时抑郁症状为中度、为109.3cells以下时抑郁症状为重度的可能性高。
7.脆弱类杆菌群
(1)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中脆弱类杆菌群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的脆弱类杆菌群的细菌数少于109.1cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
8.肠球菌
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中肠球菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的肠球菌的细菌数少于107.1cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
(2)躁郁症
与正常人相比，躁郁症患者中肠球菌的细菌数有显著性差异地多。具体而言，每1g被检测体的肠球菌的细菌数为105.0cells以上时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
9.球形梭菌群
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中球形梭菌群的细菌数有显著性差异地多。具体而言，每1g被检测体的球形梭菌群的细菌数为1010.3cells以上时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
(2)躁郁症
与正常人相比，躁郁症患者中球形梭菌群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的球形梭菌群的细菌数少于109.3cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
(3)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中球形梭菌群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的球形梭菌群的细菌数少于109.3cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
10.柔嫩梭菌亚群
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中球形梭菌群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的柔嫩梭菌亚群的细菌数少于109.8cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
(2)躁郁症
与正常人相比，躁郁症患者中柔嫩梭菌亚群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的柔嫩梭菌亚群的细菌数少于1010.2cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
(3)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中柔嫩梭菌亚群的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的柔嫩梭菌亚群的细菌数少于109.5cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
11.葡萄球菌
(1)躁郁症
与正常人相比，躁郁症患者中葡萄球菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的葡萄球菌的细菌数少于104.4cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
12.产气荚膜梭菌
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中产气荚膜梭菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的产气荚膜梭菌的细菌数少于102.3cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
(2)躁郁症
与正常人相比，躁郁症患者中产气荚膜梭菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的产气荚膜梭菌的细菌数少于104.0cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
(3)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中产气荚膜梭菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的产气荚膜梭菌的细菌数少于104.7cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
13.肠杆菌科
(1)抑郁症
与正常人相比，抑郁症患者中肠杆菌科的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的肠杆菌科的细菌数少于106.4cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
(2)躁郁症
与正常人相比，躁郁症患者中肠杆菌科的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的肠杆菌科的细菌数少于107.2cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
(3)精神分裂症
与正常人相比，精神分裂症患者中肠杆菌科的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的肠杆菌科的细菌数少于106.4cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
14.与躁郁症患者的IBS的关系
在躁郁症患者中患有IBS的患者和未患有IBS的患者中，对阿托波氏菌簇、球形梭菌群、葡萄球菌的细菌数进行比较后发现，患有IBS的患者中各肠内细菌的细菌数有显著性差异地少。具体而言，每1g被检测体的阿托波氏菌簇的细菌数少于108.8cells、球形梭菌群的细菌数少于109.3cells、葡萄球菌的细菌数少于103.5cells时，可以判定为躁郁症患者中患有IBS的可能性高。
在使用本发明的标记对精神疾病(以下，精神疾病包括精神疾病和抑郁症患者中的IBS)进行判定时，可以测定被检测体中的上述肠内细菌数。作为被检测体，可以列举来自被检验者的生物体试样、例如肠液、粪便等的消化道内容物，因为粪便对被检验者的负担少，特别优选。
被检测体中的肠内细菌的测定包括有无肠内细菌存在的判定(定性)、肠内细菌数的测定(定量)中的任意种。关于判定有无肠内细菌存在的方法，例如可以列举在预先经过预测的选择培养基中培养肠内细菌并确认有无作为对象的肠内细菌的菌落的培养法、对作为靶标的基因和来自基因的mRNA进行检测的Southern杂交法、Northern杂交法、DNA微阵列法等。
另外，关于测定被检测体中的肠内细菌数的方法，例如可以列举在预先经过预测的选择培养基中培养肠内细菌并计测细菌数的方法、在选择液体培养基中培养肠内细菌并测定浊度和吸光度的方法、FISH法、实时PCR法、RT－PCR法等，其中优选利用RT－PCR法进行。
在此，对RT－PCR法进行说明。使用RT－PCR法的分析方法例如可以通过(1)提取被检测体中的作为目标的肠内细菌的RNA的工序、(2)使用与所提取的RNA杂交的核酸片断(引物)进行RT－PCR的工序和(3)对利用工序(2)扩增的DNA片断进行检测的工序而进行。通过将上述核酸片断与来自被检测体的模板cDNA组合而进行扩增反应，能够获得与作为目标的肠内细菌特异的DNA片断(PCR产物)。通过经时观察PCR产物并对达到一定的DNA量时的PCR循环数进行分辨，能够对被检测体中的作为目标的肠内细菌数进行定量。
所扩增的PCR产物的经时观察可以通过利用SYBR(R)Green I等的嵌入性荧光色素对PCR产物进行标识并测定各PCR阶段的荧光强度而进行。嵌入性色素具有通过与双链核酸嵌插结合而增加荧光强度的性质，因此，能够准确地测定通过PCR反应由靶标细菌的cDNA生成的PCR产物，特别适合使用SYBR(R)Green I。
通过对达到任意设定的一定的荧光强度(DNA量)时的PCR循环数(以下为CT值)进行分辨，能够对被检测体中的作为目标的肠内细菌进行定量。另外，也可以使用通过荧光色素标识的TaqMan探针和分子信标(Moleculer Beacon)等。TaqMan探针和分子信标(Moleculer Beacon)是使荧光色素和猝灭剂(quencher)与利用PCR扩增的区域的内部序列和具有同源性的寡核苷酸结合的探针，在PCR反应中共存而使用。利用与探针结合的荧光色素和猝灭剂的相互作用产生与PCR扩增反应相对应的荧光，因此，通过测定各PCR阶段的荧光强度，能够进行所扩增的PCR产物的经时观察。
被检测体中的作为目标的肠内细菌的定量可以通过利用DAPI计数法和培养法等计测的细菌数的对数值和CT值的标准曲线而求出。即，预先制作将作为靶标的细菌数的对数值绘制成横轴、将CT值绘制成纵轴的标准曲线，将PCR反应的结果所获得的CT值适用于该标准曲线，进行被检测体中的作为目标的肠内细菌的定量。
在精神疾病的有无的判定中，可以将来自正常人的被检测体中的上述肠内细菌数(在抑郁症患者的IBS的有无的判定中，为来自抑郁症患者中未患有IBS的患者的被检测体中的阿托波氏菌簇的细菌数)作为基准进行判定。另一方面，在精神疾病的重症度的判定中，肠内细菌数越少，越可以判定为重症，优选设计根据重症度的阶段预先设定的基准。
在精神疾病的有无的判定中，满足以下的基准的1种以上时，可以判定为患有下述的(1)～(3)的精神疾病的可能性高。这些基准也可以组合使用。
(1)抑郁症
(a)每1g被检测体中阿托波氏菌簇的细菌数少于109.5cells
(b)每1g被检测体中乳杆菌的细菌数少于106.5cells
(c)每1g被检测体中短乳杆菌的细菌数少于103.7cells
(d)每1g被检测体中路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.7cells
(e)每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数少于1010.1cells
(f)每1g被检测体中肠球菌的细菌数少于107.1cells
(g)每1g被检测体中球形梭菌群的细菌数为1010.3cells以上
(h)每1g被检测体中柔嫩梭菌亚群的细菌数少于109.8cells
(i)每1g被检测体中产气荚膜梭菌的细菌数少于102.3cells
(j)每1g被检测体中肠杆菌科的细菌数少于106.4cells
(1)躁郁症
(a)每1g被检测体中短乳杆菌的细菌数少于104.0cells
(b)每1g被检测体中路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells
(c)每1g被检测体中肠球菌的细菌数为105.0cells以上
(d)每1g被检测体中球形梭菌群的细菌数少于109.3cells
(e)每1g被检测体中柔嫩梭菌亚群的细菌数少于1010.2cells
(f)每1g被检测体中葡萄球菌的细菌数少于104.4cells
(g)每1g被检测体中产气荚膜梭菌的细菌数少于104.0cells
(h)每1g被检测体中肠杆菌科的细菌数少于107.2cells
(3)精神分裂症
(a)每1g被检测体中阿托波氏菌簇的细菌数少于109.5cells
(b)每1g被检测体中短乳杆菌的细菌数少于104.0cells
(c)每1g被检测体中路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells
(d)每1g被检测体中清酒乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells
(e)每1g被检测体中脆弱类杆菌群的细菌数少于109.1cells
(f)每1g被检测体中球形梭菌群的细菌数少于109.3cells
(g)每1g被检测体中柔嫩梭菌亚群的细菌数少于109.5cells
(h)每1g被检测体中产气荚膜梭菌的细菌数少于104.7cells
(i)每1g被检测体中肠杆菌科的细菌数少于106.4cells
(4)躁郁症中的IBS
(a)每1g被检测体中阿托波氏菌簇的细菌数少于108.8cells
(b)每1g被检测体中球形梭菌群的细菌数少于109.3cells
(c)每1g被检测体中葡萄球菌的细菌数少于103.5cells
在精神疾病的重症度的判定中，满足以下的基准的1种以上时，能够判定下述的(1)～(2)的精神疾病的重症度。这些基准也可以组合使用。
(1)抑郁症
(a)判定为：每1g被检测体中乳杆菌的细菌数为106.5cells以上时不安症状为轻度、为106.4～105.8cells时不安症状为中度、为105.7cells以下时不安症状为重度的可能性高。
(2)躁郁症
(a)关于强迫症状，判定为：每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数为109.9cells以上时强迫症状为轻度、为109.8～109.5cells时强迫症状为中度、为109.4cells以下时强迫症状为重度的可能性高。
(b)关于人际关系过敏症，判定为：每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数为1010.1cells以上时人际关系过敏症为轻度、为1010.0～109.9cells时人际关系过敏症为中度、为109.8cells以下时人际关系过敏症为重度的可能性高。
(c)关于不安症状，判定为：每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数为109.7cells以上时不安症状为轻度、为109.6～109.3cells时不安症状为中度、为109.2cells以下时不安症状为重度的可能性高。
(d)关于抑郁症状，判定为：每1g被检测体中双歧杆菌的细菌数为109.9cells以上时抑郁症状为轻度、为109.8～109.4cells时抑郁症状为中度、为109.3cells以下时抑郁症状为重度的可能性高。
另外，在精神疾病的重症度的判定中，继续对被检验者的上述肠内细菌数进行测定时，若肠内细菌数有增加倾向，则可以判断为精神疾病为向轻症发展，相反，若肠内细菌数有降低倾向，则可以判断为精神疾病为向重症发展。
在实施本发明的精神疾病的判定方法、特别是精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度的判定方法、躁郁症患者中的IBS的有无和/或IBS的重症度的判定方法中，优选使用包含用于测定被检测体中的上述肠内细菌的操作说明的试剂盒。该试剂盒包含本发明的标记的测定试剂和操作说明(记载了肠内细菌的测定方法、以及精神疾病的判定方法、特别是用于判定精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度和躁郁症患者中的IBS的有无和/或IBS的重症度的基准、对测定结果产生影响的主要因素及其影响的程度等)。该判定基准包括上述肠内细菌的标准细菌数、判断为患有精神疾病的可能性高的细菌数等，包括重症度的判定中根据重症度的阶段预先设定的规定细菌数范围等，可以针对作为对象的被检测体、精神症状的每种类型设定这些细菌数。能够使用该基准按照上述判定方法进行判定。其中，作为标记的测定试剂，可以列举前述的肠内细菌数测定用试剂、mRNA检测用试剂、DNA检测用试剂等。
若将上述肠内细菌的细菌数的变动作为指标，则能够筛选精神症状改善剂。其中，所谓作为指标的“细菌数的变动”，是包括投与被检物质后上述肠内细菌的细菌数增加(上升)的情形、对比投与前后促进上述肠内细菌的细菌数增加(上升)的情形、对比投与前后抑制上述肠内细菌的细菌数降低的情形的概念。即，将在活体外(in vitro)或活体内(invivo)使上述肠内细菌的细菌数增加(上升)的、促进细菌数增加的、抑制细菌数降低的被检物质判断为具有精神症状的改善作用的物质。
例如，对人和小鼠、大鼠或兔等的实验动物投与被检物质并与未投与的人和实验动物相比，对该被检物质是否使被检测体中的上述肠内细菌的细菌数发生变动进行判定。在该被检物质被判定为使上述肠内细菌的细菌数增加(上升)的、促进细菌数增加的、抑制细菌数降低的物质时，能够将该被检物质用作精神症状改善剂。
实施例
接着，列举实施例对本发明进行详细说明。
[1]使用菌株
使用保存于株式会社益力多本社中央研究所的表1所示的菌株。调整各菌株的初始细菌数，使其成为1×104cells左右。
将各菌株的培养条件示于表1。培养条件A～C的详细内容如下所述。
条件A：在加1％葡萄糖改良GAM液体培养基中，在37℃、厌氧条件下进行24～72小时的静置培养。
条件B：在MRS液体培养基中，在37℃、厌氧条件下进行24小时～72小时的静置培养。
条件C：在脑心浸液液体培养基中，在37℃、有氧条件下进行18小时振荡培养。
这些菌体在利用DAPI法测定细菌数后，适当稀释成一定的细菌数，制备菌液。
[表1]
参考例1
阿托波氏菌簇、乳杆菌、短乳杆菌、路氏乳杆菌亚群、清酒乳杆菌亚群、双歧杆菌、脆弱类杆菌群、肠球菌、球形梭菌群、柔嫩梭菌亚群、葡萄球菌、产气荚膜梭菌和肠杆菌科的特异引物的准备
将上述肠内细菌数的测定所使用的各引物示于表2。另外，记载各引物的文献也示于表2。
[表2]
A：Matsuki T,Watanabe K,Fujimoto J,et al.Quantitative PCR with16SrRNA-gene-targeted species-specific primers for analysis of human intestinalbifidobacteria.Applied and Environmental Microbiology 2004；70:167-73.
B：Matsuda K.,Tsuji H.,Asahara T.,Matsumoto K.,Takada T.,and NomotoK.Establishment of an Analytical System for the Human Fecal Microbiota,Basedon Reverse Transcription-Quantitative PCR Targeting of Multicopy rRNAMolecules.Appl Environ Microbiol 2009；75:1961-1969.
C：日本专利特开2001-112485号
D：Matsuki T,Watanabe K,Tanaka R,et al.Rapid identification of humanintestinal bifidobacteria by 16S rRNA-targeted species-and group-specificprimers.FEMS Microbiol Lett 1998；167:113-21.
E：Matsuki T,Watanabe K,Fujimoto J,et al.Development of 16S rRNA-gene-targeted group-specific primers for the detection and identification ofpredominant bacteria in human feces.Appl Environ Microbiol 2002；68:5445-51.
F：Matsuki T,Watanabe K,Fujimoto J,et al.Use of 16S rRNA gene-targetedgroup-specific primers for real-time PCR analysis of predominant bacteria inhuman feces.Appl Environ Microbiol 2004；70:7220-8.
G：Matsuki,T.Development of quantitative PCR detection method with 16SrRNA gene-targeted genus-and species-specific primers for the analysis ofhuman intestinal microflora and its application.Nippon Saikingaku Zasshi2007；62:255-261.
H:Kikuchi E.,Miyamoto Y.,Narushima S.,and Itoh K.Design of species-specific primers to identify 13species of Clostridium harbored in humanintestinal tracts.Microbiol Immunol 2002；46:353-358.
参考例2
RT－PCR所使用的标准曲线的准备
制作对被检测体中的作为目标的肠内细菌进行定量时所使用的标准曲线。具体而言，按照下述的顺序，制作将利用DAPI计数法计测的肠内细菌数绘制成横轴、将CT值绘制成纵轴的标准曲线。
1)向用上述[1]使用菌株制备的各菌株的菌液200μL中添加RNAlater(Ambion)400μL，室温下静置5分钟。之后，以13,000g离心分离5分钟，利用倾析除去上清。向除去上清后的残渣中添加溶菌缓冲液450μL(每1个样品混合346.5μL的RLT缓冲液(buffer)、100μL的TE和3.5μL的β－巯基乙醇(β－Mercaptoethanol)而制备)和直径为0.1mm的玻璃珠(TOMY精工)300mg。
2)将样品管放置于振荡机(Shake Master)后，振荡5分钟，将菌体破碎。
3)加入500μL水饱和苯酚(Phenol)，利用旋涡混合器搅拌5～10秒。
4)将样品管放置于60℃的微量恒温仪(heat block)中，反应10分钟(热酚法)。
5)加入100μL氯仿/异戊醇(Chloroform/Isoamyl alchol)(24﹕1)，利用旋涡混合器搅拌5～10秒。
6)离心分离后(13,000g×5分钟)，将上清470μL移至新的带盖微型管(1.5mL)中。
7)加入470μL氯仿/异戊醇(Chloroform/Isoamyl alchol)(24﹕1)，利用旋涡混合器搅拌5～10秒。
8)离心分离后(13,000g×5分钟)，将上清400μL移至新的带盖微型管(1.5mL)中。
9)加入3M乙酸钠(Na)(pH5.4)40μL和异丙醇(Isopropanol)400μL，倒转混合。
10)进行离心分离(20,000g×10分钟)。
11)利用倾析除去上清后，加入80％乙醇(Ethanol)500μL。
12)离心分离后(20,000g×2分钟)，利用倾析除去上清。
13)风干(使开口朝上约20分钟)后，基于利用DAPI法的细菌数测定，加入无核酸酶水(Nuclease－free water)(Ambion)，使其成为2×108cells/mL，搅拌使其均匀溶解。然后，利用无核酸酶水(Nuclease－free water)实施10倍分段连续稀释，使用稀释至2×10-3～2×10cells/mL的范围的样品作为以下的14)所记载的RNA样品，供给RT－qPCR反应。
14)使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit(QIAGEN)实施RT－qPCR，利用反应液组成包含1xQIAGEN OneStep RT-PCR Buffer、0.5xQ－Solution、0.4mM dNTP Mix、1/25量的QIAGEN OneStep RT－PCR Enzyme Mix、1/100,000量的SYBR(R)Green I(分子探针(Molecular Probes))、1xROX参比染料(Reference Dye)(Invitrogen)、0.60μM的表2所示的各引物和5μL的上述13)所制备的RNA样品的反应液(总量10μL)进行。
15)反应液首先在50℃进行逆转录反应30分钟，之后，为了使逆转录酶失活，在95℃加热15分钟。接着，以94℃下20秒、55℃或者60℃(表2的序列编号1～2和15～28为55℃，序列编号3～14和29～30为60℃)下20秒、72℃下50秒进行45次循环，得到扩增产物。每次循环中测定扩增产物的量作为SYBR(R)Green I的荧光强度，制作PCR曲线。设定荧光强度的基线和阈值，求出PCR曲线与阈值交叉的循环数(Threshold cycle：CT值)。将所获得的CT值绘制成纵轴，将供给PCR反应的样品细菌数绘制成横轴。这些解析使用序列检测系统(Sequence Detection System(SDS))软件(Applied Biosystems)。其中，为了确认PCR中的扩增是否特异地进行，另外进行改性温度的测定。改性温度的测定按照以下的方法进行，即，获得上述扩增产物后，在94℃反应15秒，之后，从55℃或者60℃至99℃以0.2℃/秒的速度缓慢地使温度上升，将温度绘制成x轴，将SYBR(R)Green I的荧光强度绘制成y轴，制作扩增产物的改性曲线，测定荧光强度急剧减少的温度。这些一系列的反应利用ABI PRISM(R)7900HT系统(Applied Biosystems)进行。
16)将利用DAPI法测得的各肠内细菌的细菌数绘制成x轴，将与其相对应的利用RT－qPCR获得的CT值绘制成y轴，制作标准曲线。
实施例1
精神疾病与肠内菌群的关系
仔细检查精神疾病(抑郁症、躁郁症、精神分裂症)患者的肠内菌群，对精神疾病与肠内菌群的关系进行评价。
(1)精神疾病的诊断
关于精神疾病的诊断，精神科医生使用精神疾病简易结构化面谈法MINI(Mini－International Neuropsychiatric Interview,日语版：Otsubo T,et al.Reliabilityand validity of Japanese version of the Mini-International NeuropsychiatricInterview.Psychiatry and Neurosciences 2005；59:517-526.)，将患者诊断为正常人、抑郁症、躁郁症、精神分裂症中的任意种。
(2)被检测体的获得
在上述(1)中进行精神疾病的诊断后，对于从下述患者获得的粪便，从被检测体中排除。
(a)63岁以上的男女
(b)合并有严重的内科疾病的患者
(c)服用抗生物质的患者
(d)患有智力障碍、癫痫、严重的先天异常的患者
(e)有肠道手术经历的患者
作为其结果，获得了正常人(Normal)62名、抑郁症患者(MDD)43名、躁郁症患者(MDI)39名、精神分裂症患者(Sz)47名的粪便作为被检测体。
(3)被检测体中的肠内细菌的定量
(a)RNA提取用样品的制备
向被检测体4mg中添加0.2mL的RNAlater(Ambion)，室温下静置5分钟。之后，以14,000g离心分离10分钟，利用倾析除去上清后，使用残渣作为RNA提取用样品。
(b)核酸提取
按照下述顺序，进行RNA提取操作。
1)向(a)所制备的RNA提取用样品中添加溶菌缓冲液450μL(每1个样品混合346.5μL的RLT缓冲液(buffer)、100μL的TE和3.5μL的β－巯基乙醇(β－Mercaptoethanol)而制备)和直径为0.1mm的玻璃珠300mg。
2)与上述参考例2的2)～12)所记载的方法同样进行核酸的提取操作。
3)风干(使开口朝上约20分钟)后，加入200μL的无核酸酶水(Nuclease－freewater)，搅拌使其均匀溶解，作为RNA样品。
(c)细菌数的测定
对于(b)所获得的RNA样品，使用RT－qPCR法，测定细菌数。RT－qPCR与上述参考例2的14)～15)所记载的方法同样进行。其中，使用序列编号3～20的引物测定乳杆菌的细菌数。作为干酪乳杆菌亚群(Lactobacillus casei subgroup)、格氏乳杆菌亚群(Lactobacillus gasseri subgroup)、植物乳杆菌亚群(Lactobacillus plantarumsubgroup)、路氏乳杆菌亚群(Lactobacillus reuteri subgroup)、瘤胃乳杆菌亚群(Lactobacillus ruminis subgroup)、清酒乳杆菌亚群(Lactobacillus sakeisubgroup)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)和食果糖乳杆菌(Lactobacillus fructivorans)的细菌数的总和求出。
(4)解析方法
(a)精神疾病的有无与肠内细菌数的关系的解析
1)精神疾病患者与正常人的细菌数比较
利用曼-惠特尼U检验(Mann－Whitney u－test)进行关于抑郁症、躁郁症、精神分裂症患者的各肠内细菌的细菌数与正常人的各肠内细菌的细菌数之间的差的检定。为了在各疾病群的性别、年龄方面不产生统计学上的显著性差异，合并了正常人组的解析对象者数。
2)使用cut－off值的比较
进行Receiver Operating analysis(ROC)解析，求出最好地识别抑郁症、躁郁症、精神分裂症患者和正常人的各肠内细菌的细菌数的cut－off值，算出抑郁症、躁郁症、精神分裂症患者和正常人中具有少于cut－off值的细菌数的人数的比例。
(b)精神疾病的重症度与肠内细菌数的关系的解析
1)GRID HAM－D的重症度和肠内细菌数的评价
作为抑郁症的重症度的评价方法之一，使用GRID汉密尔顿抑郁症评价尺度(GRID－HAMD)(Hamilton,M.,A rating scale ofdepression.J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry 1960；23,56-62.和A.Kalali,et al.,Thenew GRID HAM-D:pilot testing and international field trials.InternationalJournal of Neuropsychopharmacology.2002；5,S147？S148.)。本次使用了GRID－HAMD中由21个提问项目构成的HAMD21。将0分～7分判定为正常(缓解)，将8分～13分判定为轻度，将14分～18分判定为中度，将19分以上判定为重度。
2)利用精神压力自诊断问卷HSCL的重症度和肠内细菌数的评价
使用精神压力自诊断问卷HSCL(Derogatis LR,et al.,The Hopkins SymptomChecklist(HSCL)：a self-report symptom inventory.Behavioral science 1974；19,1-15.以及中野敬子2005.精神压力和管理入门学习自诊断和应对方法.金刚出版)，算出心身症状、强迫、人际关系过敏症、不安症状、抑郁症状各自的得分和总计的得分，利用曼-惠特尼U检验(Mann－Whitney u－test)进行关于抑郁症和躁郁症的得分与正常人的得分的差的检定。
(c)躁郁症患者中的IBS的有无与阿托波氏菌簇、球形梭菌群、葡萄球菌的细菌数的关系的解析
IBS的诊断使用作为国际上通用的基准而定义的Rome III诊断基准(LongstrethGF,et al.,Functional bowel disorders.Gastroenterology.2006；130,1480-91)。
在躁郁症的组内，分为患有IBS的组和不患有IBS的组的2个组，利用曼-惠特尼U检验(Mann－Whitney u－test)进行关于患有IBS的组的阿托波氏菌簇、球形梭菌群、葡萄球菌的细菌数与不患有IBS的组的细菌数的差的检定。
(5)结果
(a)阿托波氏菌簇
1)抑郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表3所示，将阿托波氏菌簇的细菌数少于109.5cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的阿托波氏菌簇的细菌数少于109.5cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表3]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
2)精神分裂症
在(4)(a)1)所述的与正常人的细菌数的比较中，如表4所示，精神分裂症患者中阿托波氏菌簇的细菌数有显著性差异地少。另外，在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表5所示，将阿托波氏菌簇的细菌数少于109.5cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的阿托波氏菌簇的细菌数少于109.5cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表4]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表5]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(b)乳杆菌
1)抑郁症
在(4)(a)2所述的使用cut－off值的比较中，如表6所示，将乳杆菌的细菌数少于106.5cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的乳杆菌的细菌数少于106.5cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
另外，在(4)(b)2)所述的利用精神压力自诊断问卷HSCL的评价中，在抑郁症患者中获得了不安症状的得分越高乳杆菌的细菌数越少、得分越低细菌数越多这样的有意义的相关性(图1)。具体可知，关于不安症状，可以判定为：每1g粪便中乳杆菌的细菌数为106.5cells以上时不安症状为轻度、为106.4～105.8cells时不安症状为中度、为105.7cells以下时不安症状为重度的可能性高。
[表6]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(c)短乳杆菌
1)抑郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表7所示，将短乳杆菌的细菌数少于103.7cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的短乳杆菌的细菌数少于103.7cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表7]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
2)躁郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表8所示，将短乳杆菌的细菌数少于104.0cells的躁郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，躁郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的短乳杆菌的细菌数少于104.0cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
[表8]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
3)精神分裂症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表9所示，将短乳杆菌的细菌数少于104.0cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的短乳杆菌的细菌数少于104.0cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表9]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(d)路氏乳杆菌亚群
1)抑郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表10所示，将路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.7cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.7cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表10]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
2)躁郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表11所示，将路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells的躁郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，躁郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
[表11]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
3)精神分裂症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表12所示，将路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的路氏乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表12]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(e)清酒乳杆菌亚群
1)精神分裂症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表13所示，将清酒乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的清酒乳杆菌亚群的细菌数少于104.8cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表13]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(f)双歧杆菌
1)抑郁症
在(4)(a)1)所述的与正常人的细菌数的比较中，如表14所示，抑郁症患者中双歧杆菌的细菌数有显著性差异地少。另外，在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表15所示，将双歧杆菌的细菌数少于1010.1cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的双歧杆菌的细菌数少于1010.1cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表14]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表15]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
另外，在(4)(b)1)所述的利用GRID HAM－D的评价中，求出抑郁症患者的第0个月与第6个月的HAM－D21的分差((第6个月的HAM－D21的评分)－(第0个月的HAM－D21的评分))和第0个月与第6个月的双歧杆菌的细菌数的差((第6个月的双歧杆菌的细菌数)－(第0个月的双歧杆菌的细菌数))并观察其相关性时，与第0个月相比，越是第6个月的双歧杆菌的细菌数增加的抑郁症患者，有意义的是HAM－D21的评分越降低，抑郁症状越缓和(图2)。由此可知，双歧杆菌的细菌数与抑郁症状存在相关性。其中，本试验对能够获得第0个月和第6个月两者的被检测体的20名抑郁症患者进行了解析。
2)躁郁症
在(4)(b)2)所述的利用精神压力自诊断问卷HSCL的评价中，在躁郁症患者中，获得了强迫症状、人际关系过敏症、不安症状、抑郁症状总计的得分越高双歧杆菌的细菌数越少、得分越低细菌数越多这样的有意义的相关性(图3～7)。具体可知，关于强迫症状，可以判定为：每1g粪便中双歧杆菌的细菌数为109.9cells以上时强迫症状为轻度、为109.8～109.5cells时强迫症状为中度、为109.4cells以下时强迫症状为重度的可能性高，关于人际关系过敏症，可以判定为：每1g粪便中双歧杆菌的细菌数为1010.1cells以上时人际关系过敏症为轻度、为1010.0～109.9cells时人际关系过敏症为中度、为109.8cells以下时人际关系过敏症为重度的可能性高。还可知，关于不安症状，可以判定为：每1g粪便中双歧杆菌的细菌数为109.7cells以上时不安症状为轻度、为109.6～109.3cells时不安症状为中度、为109.2cells以下时不安症状为重度的可能性高，关于抑郁症状，可以判定为：每1g粪便中双歧杆菌的细菌数为109.9cells以上时抑郁症状为轻度、为109.8～109.4cells时抑郁症状为中度、为109.3cells以下时抑郁症状为重度的可能性高。
(g)脆弱类杆菌群
1)精神分裂症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表16所示，将脆弱类杆菌群的细菌数少于109.1cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的脆弱类杆菌群的细菌数少于109.1cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表16]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(h)肠球菌
1)抑郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表17所示，将肠球菌的细菌数少于107.1cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的肠球菌的细菌数少于107.1cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表17]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
2)躁郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表18所示，将肠球菌的细菌数为105.0cells以上的躁郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，躁郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的肠球菌的细菌数为105.0cells以上时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
[表18]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(i)球形梭菌群
1)抑郁症
在(4)(a)1)所述的与正常人的细菌数的比较中，如表19所示，抑郁症患者中球形梭菌群的细菌数有显著性差异地多。另外，在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表20所示，将球形梭菌群的细菌数为1010.3cells以上的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的球形梭菌群的细菌数为1010.3cells以上时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表19]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表20]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
2)躁郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表21所示，将球形梭菌群的细菌数少于109.3cells的躁郁症患者的比例和正常人的比例进行比较，躁郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的球形梭菌群的细菌数少于109.3cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
[表21]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
3)精神分裂症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表22所示，将球形梭菌群的细菌数少于109.3cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的球形梭菌群的细菌数少于109.3cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表22]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(j)柔嫩梭菌亚群
1)抑郁症
在(4)(a)1)所述的与正常人的细菌数的比较中，如表23所示，抑郁症患者中柔嫩梭菌亚群的细菌数有显著性差异地多。另外，在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表24所示，将柔嫩梭菌亚群的细菌数少于109.8cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的柔嫩梭菌亚群的细菌数少于109.8cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表23]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表24]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
2)躁郁症
在(4)(a)1)所述的与正常人的细菌数的比较中，如表25所示，躁郁症患者中柔嫩梭菌亚群的细菌数有显著性差异地多。另外，在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表26所示，将柔嫩梭菌亚群的细菌数少于1010.2cells的躁郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，躁郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的柔嫩梭菌亚群的细菌数少于1010.2cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
[表25]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表26]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
3)精神分裂症
在(4)(a)1)所述的与正常人的细菌数的比较中，如表27所示，精神分裂症患者中柔嫩梭菌亚群的细菌数有显著性差异地多。另外，在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表28所示，将柔嫩梭菌亚群的细菌数少于109.5cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。
由此可知，每1g粪便的柔嫩梭菌亚群的细菌数少于109.5cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表27]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表28]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(k)葡萄球菌
1)躁郁症
在(4)(a)1)所述的与正常人的细菌数的比较中，如表29所示，躁郁症患者中葡萄球菌的细菌数有显著性差异地少。另外，在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表30所示，将葡萄球菌的细菌数少于104.4cells的躁郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，躁郁症患者的比例有显著性差异地少。由此可知，每1g粪便的葡萄球菌的细菌数少于104.4cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
[表29]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表30]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(l)产气荚膜梭菌
1)抑郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表31所示，将产气荚膜梭菌的细菌数少于102.3cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的产气荚膜梭菌的细菌数少于102.3cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表31]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
2)躁郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表32所示，将产气荚膜梭菌的细菌数少于104.0cells的躁郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，躁郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的产气荚膜梭菌的细菌数少于104.0cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
[表32]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
3)精神分裂症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表33所示，将产气荚膜梭菌的细菌数少于104.7cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的产气荚膜梭菌的细菌数少于104.7cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表33]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(m)肠杆菌科
1)抑郁症
在(4)(a)1)所述的与正常人的细菌数的比较中，如表34所示，抑郁症患者中肠杆菌科的细菌数有显著性差异地少。另外，在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表35所示，将肠杆菌科的细菌数少于106.4cells的抑郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，抑郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的肠杆菌科的细菌数少于106.4cells时，可以判定为患有抑郁症的可能性高。
[表34]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表35]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
2)躁郁症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表36所示，将肠杆菌科的细菌数少于107.2cells的躁郁症患者的比例和正常人的比例进行比较时，躁郁症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的肠杆菌科的细菌数少于107.2cells时，可以判定为患有躁郁症的可能性高。
[表36]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
3)精神分裂症
在(4)(a)2)所述的使用cut－off值的比较中，如表37所示，将肠杆菌科的细菌数少于106.4cells的精神分裂症患者的比例和正常人的比例进行比较时，精神分裂症患者的比例有显著性差异地多。由此可知，每1g粪便的肠杆菌科的细菌数少于106.4cells时，可以判定为患有精神分裂症的可能性高。
[表37]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
(n)躁郁症患者与IBS的关系
在(4)(c)所述的躁郁症患者中患有IBS的患者和不患有IBS的患者中，对阿托波氏菌簇、球形梭菌群、葡萄球菌的细菌数进行比较后发现，患有IBS的患者中各肠内细菌的细菌数有显著性差异地少(表38～表40)。由此可知，每1g粪便的阿托波氏菌簇的细菌数少于108.8cells、球形梭菌群的细菌数少于109.3cells、葡萄球菌的细菌数少于103.5cells时，可以判定为躁郁症患者中患有IBS的可能性高。
[表38]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表39]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
[表40]
*表示每1g粪便的细菌数(Log10细胞/克粪便)。
序列表（SEQUENCE LISTING）
　　<110> 国立研究开发法人国立精神·神经医疗研究中心（National Center ofNeurology and Psychiatry）；株式会社益力多本社（Kabushiki Kaisha Yakult Honsha）
　　<120> 精神疾病生物标记（A biomarker for mental disease）
　　<130> YK0089
　　<140> JP2015-083936
　　<141> 2015-04-16
　　<160> 36
　　<170> PatentIn version 3.5
　　<210> 1
　　<211> 17
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于阿托波氏菌簇设计的引物（Designed primer based on Atopobiumcluster）
　　<400> 1
　　gggttgagag accgacc 17
　　<210> 2
　　<211> 18
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于阿托波氏菌簇设计的引物（Designed primer based on Atopobiumcluster）
　　<400> 2
　　cggrgcttct tctgcagg 18
　　<210> 3
　　<211> 17
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 3
　　accgcatggt tcttggc 17
　　<210> 4
　　<211> 20
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 4
　　ccgacaacag ttactctgcc 20
　　<210> 5
　　<211> 27
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 5
　　gatgcatagc cgagttgaga gactgat 27
　　<210> 6
　　<211> 25
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 6
　　taaaggccag ttactacctc tatcc 25
　　<210> 7
　　<211> 17
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 7
　　accgcatggt tcttggc 17
　　<210> 8
　　<211> 20
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 8
　　ccgacaacag ttactctgcc 20
　　<210> 9
　　<211> 27
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 9
　　gatgcatagc cgagttgaga gactgat 27
　　<210> 10
　　<211> 25
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 10
　　taaaggccag ttactacctc tatcc 25
　　<210> 11
　　<211> 25
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 11
　　ctctggtatt gattggtgct tgcat 25
　　<210> 12
　　<211> 24
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 12
　　gttcgccact cactcaaatg taaa 24
　　<210> 13
　　<211> 16
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 13
　　gaacgcaytg gcccaa 16
　　<210> 14
　　<211> 19
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 14
　　tccattgtgg ccgatcagt 19
　　<210> 15
　　<211> 21
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 15
　　caccgaatgc ttgcaytcac c 21
　　<210> 16
　　<211> 19
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 16
　　gccgcgggtc catccaaaa 19
　　<210> 17
　　<211> 22
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 17
　　cataaaacct amcaccgcat gg 22
　　<210> 18
　　<211> 27
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 18
　　tcagttacta tcagatacrt tcttctc 27
　　<210> 19
　　<211> 24
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 19
　　attttgtttg aaaggtggct tcgg 24
　　<210> 20
　　<211> 25
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于乳杆菌设计的引物（Designed primer based on Lactobacillus）
　　<400> 20
　　acccttgaac agttactctc aaagg 25
　　<210> 21
　　<211> 17
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于双歧杆菌设计的引物（Designed primer based onBifidobacterium）
　　<400> 21
　　ctcctggaaa cgggtgg 17
　　<210> 22
　　<211> 22
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于双歧杆菌设计的引物（Designed primer based onBifidobacterium）
　　<400> 22
　　ggtgttcttc ccgatatcta ca 22
　　<210> 23
　　<211> 21
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于脆弱类杆菌群设计的引物（Designed primer based on Bacteroidesfragilis group）
　　<400> 23
　　ayagcctttc gaaagraaga t 21
　　<210> 24
　　<211> 21
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于脆弱类杆菌群设计的引物（Designed primer based on Bacteroidesfragilis group）
　　<400> 24
　　ccagtatcaa ctgcaatttt a 21
　　<210> 25
　　<211> 20
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于肠球菌设计的引物（Designed primer based on Enterococcus）
　　<400> 25
　　atcagagggg gataacactt 20
　　<210> 26
　　<211> 21
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于肠球菌设计的引物（Designed primer based on Enterococcus）
　　<400> 26
　　actctcatcc ttgttcttct c 21
　　<210> 27
　　<211> 20
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于球形梭菌群设计的引物（Designed primer based on Clostridiumcoccoides group）
　　<400> 27
　　aaatgacggt acctgactaa 20
　　<210> 28
　　<211> 22
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于球形梭菌群设计的引物（Designed primer based on Clostridiumcoccoides group）
　　<400> 28
　　ctttgagttt cattcttgcg aa 22
　　<210> 29
　　<211> 16
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于柔嫩梭菌亚群设计的引物（Designed primer based on Clostridiumleptum subgroup）
　　<400> 29
　　gcacaagcag tggagt 16
　　<210> 30
　　<211> 18
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于柔嫩梭菌亚群设计的引物（Designed primer based on Clostridiumleptum subgroup）
　　<400> 30
　　cttcctccgt tttgtcaa 18
　　<210> 31
　　<211> 30
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于葡萄球菌设计的引物（Designed primer based on Staphylococcus）
　　<400> 31
　　tttgggctac acacgtgcta caatggacaa 30
　　<210> 32
　　<211> 24
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于葡萄球菌设计的引物（Designed primer based on Staphylococcus）
　　<400> 32
　　aacaacttta tgggatttgc wtga 24
　　<210> 33
　　<211> 18
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于产气荚膜梭菌设计的引物（Designed primer based on Clostridiumperfringens）
　　<400> 33
　　gggggtttca acacctcc 18
　　<210> 34
　　<211> 18
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于产气荚膜梭菌设计的引物（Designed primer based on Clostridiumperfringens）
　　<400> 34
　　gcaagggatg tcaagtgt 18
　　<210> 35
　　<211> 23
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于肠杆菌科设计的引物（Designed primer based onEnterobacteriaceae）
　　<400> 35
　　tgccgtaact tcgggagaag gca 23
　　<210> 36
　　<211> 22
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
　　<220>
　　<223> 基于肠杆菌科设计的引物（Designed primer based onEnterobacteriaceae）
　　<400> 36
　　tcaaggacca gtgttcagtg tc 22
　　1

Claims (21)

1.一种精神疾病的判定标记，所述判定标记包含选自双歧杆菌、乳杆菌、短乳杆菌、路氏乳杆菌亚群、清酒乳杆菌亚群、阿托波氏菌簇、脆弱类杆菌群、肠球菌、球形梭菌群、柔嫩梭菌亚群、葡萄球菌、产气荚膜梭菌和肠杆菌科中的1种以上的肠内细菌。
2.如权利要求1所述的标记，其特征在于：
精神疾病的判定是对精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度进行判定。
3.如权利要求2所述的标记，其特征在于：
精神疾病为选自抑郁症、躁郁症和精神分裂症中的1种以上。
4.一种以判定精神疾病为目的而对被检测体中的肠内细菌进行测定的方法，所述肠内细菌是选自双歧杆菌、乳杆菌、短乳杆菌、路氏乳杆菌亚群、清酒乳杆菌亚群、阿托波氏菌簇、脆弱类杆菌群、肠球菌、球形梭菌群、柔嫩梭菌亚群、葡萄球菌、产气荚膜梭菌和肠杆菌科中的1种以上。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：
精神疾病的判定是对精神疾病的有无和/或精神疾病的重症度进行判定。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：
精神疾病为选自抑郁症、躁郁症和精神分裂症中的1种以上。
7.如权利要求4～6中任一项所述的方法，其特征在于：
被检测体为被检验者的粪便。
8.一种用于实施权利要求4～7中任一项所述的测定方法的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：
测定被检测体中的权利要求1～3中任一项所述的肠内细菌的测定试剂和操作说明。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：
被检测体为被检验者的粪便。
10.一种以权利要求1～3中任一项所述的肠内细菌的细菌数的变动作为指标的精神疾病改善剂的筛选方法。
11.如权利要求10所述的筛选方法，其特征在于：
精神疾病为选自抑郁症、躁郁症和精神分裂症中的1种以上。
12.一种利用权利要求10或11所述的方法获得的精神疾病改善剂。
13.一种躁郁症患者的肠易激综合征的判定标记，所述判定标记包含选自阿托波氏菌簇、球形梭菌群和葡萄球菌中的1种以上的肠内细菌的。
14.如权利要求13所述的标记，其特征在于：
肠易激综合征的判定是对肠易激综合征的有无和/或肠易激综合征的重症度进行判定。
15.一种以判定躁郁症患者的肠易激综合征为目的而对被检测体中肠内细菌进行测定的方法，所述肠内细菌选自阿托波氏菌簇、球形梭菌群和葡萄球菌中的1种以上。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于：
肠易激综合征的判定是对肠易激综合征的有无和/或肠易激综合征的重症度进行判定。
17.如权利要求15或16所述的方法，其特征在于：
被检测体为躁郁症患者的粪便。
18.一种用于实施权利要求15～17中任一项所述的测定方法的试剂盒，其特征在于包含：
测定被检测体中的权利要求13或14所述的肠内细菌的测定试剂和操作说明。
19.如权利要求18所述的试剂盒，其特征在于：
被检测体为躁郁症患者的粪便。
20.一种以权利要求13或14所述的肠内细菌的细菌数的变动作为指标的躁郁症患者的肠易激综合征治疗剂的筛选方法。
21.一种利用权利要求20所述的方法获得的躁郁症患者的肠易激综合征治疗剂。
CN201680021725.6A 2015-04-16 2016-04-15 精神疾病生物标记 Active CN108474018B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2015083936 2015-04-16
JP2015-083936 2015-04-16
PCT/JP2016/062182 WO2016167365A1 (ja) 2015-04-16 2016-04-15 精神疾患バイオマーカー

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108474018A true CN108474018A (zh) 2018-08-31
CN108474018B CN108474018B (zh) 2022-06-24

Family

ID=57126597

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680021725.6A Active CN108474018B (zh) 2015-04-16 2016-04-15 精神疾病生物标记

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11655493B2 (zh)
EP (1) EP3284830A4 (zh)
JP (1) JP6884323B2 (zh)
CN (1) CN108474018B (zh)
WO (1) WO2016167365A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111020020A (zh) * 2019-07-05 2020-04-17 深圳华大生命科学研究院 一种精神分裂症的生物标志物组合、其应用及metaphlan2筛选方法
WO2020244018A1 (zh) * 2019-06-06 2020-12-10 西安交通大学医学院第一附属医院 一种精神分裂症的小规模生物标志物组合、其应用及metaphlan2筛选方法
WO2022160359A1 (zh) * 2021-02-01 2022-08-04 苏州大学附属儿童医院 肠道微生物作为早产儿脑损伤标志物的应用
WO2023123613A1 (zh) * 2021-12-30 2023-07-06 浙江大学 双相情感障碍生物标志物及其应用

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110637093A (zh) * 2017-05-18 2019-12-31 株式会社益力多本社 帕金森病的判定标志物和判定方法
JP2021003001A (ja) * 2017-09-07 2021-01-14 国立大学法人千葉大学 うつ症状の検査方法、及び治療薬のスクリーニング方法
SG10201913043TA (en) * 2017-09-29 2020-03-30 Univ Industry Cooperation Group Kyung Hee Univ Novel lactic acid bacteria and use thereof
JP7264384B2 (ja) 2019-03-29 2023-04-25 日本たばこ産業株式会社 うつ病の評価を補助するための方法及びうつ病の治療法の効果の評価を補助するための方法、並びにうつ病若しくはうつ病の治療法の効果を評価するためのデータを取得する方法
KR102548376B1 (ko) * 2021-02-08 2023-06-26 경희대학교 산학협력단 장내 마이크로바이옴을 활용한 우울 불안 장애 진단 방법

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2311126C1 (ru) * 2006-03-06 2007-11-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Способ диагностики формы и степени выраженности нарушений психологического статуса у больных с хроническими заболеваниями органов пищеварения
WO2012142605A1 (en) * 2011-04-15 2012-10-18 Samaritan Health Services Rapid recolonization deployment agent

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1997906A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Lactobacillus
EP1997905A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Nucleic acid amplification
EP1997907A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Bifidobacteria

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2311126C1 (ru) * 2006-03-06 2007-11-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Способ диагностики формы и степени выраженности нарушений психологического статуса у больных с хроническими заболеваниями органов пищеварения
WO2012142605A1 (en) * 2011-04-15 2012-10-18 Samaritan Health Services Rapid recolonization deployment agent

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KAZUNORI MATSUDA ET AL.: "Establishment of an Analytical System for the Human Fecal Microbiota, Based on Reverse Transcription-Quantitative PCR Targeting of Multicopy rRNA Molecules", 《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》 *
梁姗等: "微生物与行为和精神疾病", 《心理科学进展》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020244018A1 (zh) * 2019-06-06 2020-12-10 西安交通大学医学院第一附属医院 一种精神分裂症的小规模生物标志物组合、其应用及metaphlan2筛选方法
CN111020020A (zh) * 2019-07-05 2020-04-17 深圳华大生命科学研究院 一种精神分裂症的生物标志物组合、其应用及metaphlan2筛选方法
WO2022160359A1 (zh) * 2021-02-01 2022-08-04 苏州大学附属儿童医院 肠道微生物作为早产儿脑损伤标志物的应用
WO2023123613A1 (zh) * 2021-12-30 2023-07-06 浙江大学 双相情感障碍生物标志物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP3284830A4 (en) 2018-12-19
WO2016167365A1 (ja) 2016-10-20
JP6884323B2 (ja) 2021-06-09
CN108474018B (zh) 2022-06-24
US11655493B2 (en) 2023-05-23
JPWO2016167365A1 (ja) 2018-02-15
US20180100177A1 (en) 2018-04-12
EP3284830A1 (en) 2018-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108474018A (zh) 精神疾病生物标记
US11414705B2 (en) Salivary biomarkers of brain injury
CN103003442B (zh) 一种通过微小rna表达水平评估人同种异体移植物状况的方法
CN111910002A (zh) 食道癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
CN110144384A (zh) 一种检测端粒内氧化性损伤的荧光化学传感器及其检测方法和应用
CN108690881A (zh) 用于诊断皮肤癣菌病的测定法
CN110373485A (zh) 一种解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌三联检试剂盒
CN106434982A (zh) 缺血性脑卒中相关的分子标记物及其应用
EP3626829B1 (en) Method for determining deterioration of parkinson&#39;s disease
CN102952850A (zh) 用于检测结核分枝杆菌的实时荧光定量pcr方法、引物、探针及试剂盒
CN110396542A (zh) 一种LncRNA标记物及其在糖尿病中的应用
JP6716596B2 (ja) エコール産生能の測定方法
JP2021112167A (ja) うつ病の診断補助方法及び診断用キット
RU2785017C2 (ru) Способ определения болезни паркинсона
JP2007020423A (ja) 腸内細菌群検出用核酸断片
JP7299765B2 (ja) マイクロｒｎａ測定方法およびキット
EP3369829B1 (en) Methods for detecting attention-deficit/hyperactivity disorder
KR102616105B1 (ko) 중증 알코올성 간염 치료 반응성 예측용 키트
EP2723891B1 (en) Diagnostic methods for detecting clostridium difficile
JP2024035040A (ja) 分析方法、キット及び検出用デバイス
CN116574826A (zh) 一种阴道菌群分子分型试剂盒及其使用方法
CN108350509A (zh) 生物标记组成物，诊断用试剂盒及提供信息方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant