JP2021003001A - うつ症状の検査方法、及び治療薬のスクリーニング方法 - Google Patents

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Abstract

【課題】うつ病やうつ症状に効果を奏する薬剤をスクリーニングする方法の提供。また、うつ症状の鑑別診断を行う検査方法の確立。特に、（Ｒ）−ケタミンに対して感受性の高い患者を検出する方法の提供。【解決手段】腸内細菌叢を解析することによって、うつ症状に特異的な、また、（Ｒ）−ケタミン投与によって改善する腸内細菌を解析し、うつ症状に効果を有する薬剤のスクリーニングの指標として用いる。また、うつ症状の鑑別診断の補助方法として用いる。【選択図】なし

Description

うつ症状と腸内細菌叢との関係を明らかにし、腸内細菌叢を指標としてうつ症状を検査する方法に関する。また、腸内細菌叢を指標として、うつ症状の治療薬をスクリーニングする方法に関する。
うつ病（大うつ病性障害、Ｍａｊｏｒ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ）は、精神的ストレスや身体的ストレスが重なることなどにより脳の機能障害が起きている状態をいう。厚生労働省が３年毎に行っている患者調査によれば、うつ病を含む気分障害の患者が近年急速に増えていることが報告されている。また、日本では１００人に３〜７人という割合でこれまでにうつ病を経験したことがあるという報告があるが、その数は今後ますます増加することが予想される。
また、大うつ病性障害のような精神障害だけではなく、がん、循環器疾患などに罹患した患者がうつ症状を呈することは広く知られている。高齢化の増加とともに、これら疾患に罹患する患者も増加しており、うつ症状を治療する方法が求められている。
精神疾患の治療には、薬物治療が不可欠である。うつ病、あるいはうつ症状の治療においても、薬物治療は不可欠であり、従来から、抗うつ薬（三環系抗うつ薬、選択的セロトニン再取り込み阻害薬、セロトニン・ノルエピネフリン再取り込み阻害薬）が投与されている。また、治療抵抗性うつ病の治療に対して非定型抗精神病薬が投与されることがある。
また、近年うつ病や双極性障害などの気分障害に、グルタミン酸の伝達障害、特にＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ａｓｐａｒｔａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＮＭＤＡＲ）を介したグルタミン酸伝達経路が関与していることが報告されており、ＮＭＤＡＲアンタゴニストであるケタミンが奏効することが報告されている（非特許文献１）。さらに、ケタミンは治療抵抗性の大うつ病性障害の患者だけではなく（非特許文献２、３）、双極性障害のうつ状態（非特許文献４、５）にも効果があることが報告されている。また、治療抵抗性を示すうつ病患者の自殺念慮を短時間のうちに抑制する作用があることも報告されている（非特許文献６、７）。
ケタミンは麻酔薬として開発された化合物であり、（Ｒ）−ケタミンと、（Ｓ）−ケタミンの２種の異性体からなるラセミ体混合物である。（Ｓ）−ケタミンはＮＭＤＡＲに対する親和性が（Ｒ）−ケタミンの約４倍以上強く、麻酔効果も約３〜４倍高いが、精神病症状惹起性の副作用も強い（非特許文献８）。本発明者は、（Ｒ）−ケタミンが、（Ｓ）-ケタミンに比べて強い抗うつ効果を示し、さらにその効果が長時間持続すること、また副作用が少ない事を見出した（特許文献１）。
しかしながら、うつ病やうつ症状の発症メカニズムは未だに不明であり、様々な要因が関わっていると考えられている。職場や家庭などにおける人間関係に起因する環境要因や、慢性的な疲労や疾患などの身体的要因、遺伝的要因など複雑な要因が発症には関与していると考えられており、炎症仮説、モノアミン仮説、ストレス脆弱性モデルなど様々な仮説が提唱されている。上述のように、種々の薬剤に対して抵抗性を有する患者が存在することは、病因が一つではなく、複雑な要因が発症原因となっていることを示している。また、うつ症状の治療には、薬物治療が不可欠であるにもかかわらず、種々の薬剤に対して抵抗性を有する患者が存在することから、新しい治療薬の開発が望まれている。
一方、近年種々の疾患に腸内細菌が関与しているという報告がされている。次世代シーケンサーなどによって、種々の疾患に罹患した患者に特徴的な腸内細菌叢のパターンがあることが解析により明らかになってきている。精神神経疾患においても、疾患と腸内細菌叢との相関が報告されている（例えば、非特許文献９、特許文献２）。
うつ病においても、患者と健常人の間では腸内細菌叢が異なることが報告されている。非特許文献１０には、うつ病患者と、治療が奏効したうつ病患者、健常人の糞便中の細菌叢を比較し、うつ病患者と健常人との間では、細菌叢に違いが見られたが、治療が奏効したうつ病患者と健常人との間には違いが見られないことが報告されている。
非特許文献１０によれば、大うつ病性障害と健常者の糞便中の細菌叢を比較したところ、門レベルでは、フィルミクテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、プロテオバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、アクチノバクテリア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）が、科レベルでは、アシドアミノコッカス（Ａｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ポルフィロモナス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、リケネラ（Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ）、エリシペロトリクス（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ）、ラクノスピラ（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ）、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ）、ルミノコッカス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、ベイロネラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｃｅａｅ）が、属レベルでは、アリスティペス（Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ）、ブラウティア（Ｂｌａｕｔｉａ）、クロストリジウムＸＩＸ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ＸＩＸ）、ラクノスピラ（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａ ｉｎｃｅｒｔａｅ ｓｅｄｉｓ）、メガモナス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ）、パラバクテロイデス（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、パラステレラ（Ｐａｒａｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）、ファスコラークトバクテリウム（Ｐｈａｓｃｏｌａｒｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、オシリバクター（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、ロゼブリア（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ジアリスタ（Ｄｉａｌｉｓｔｅｒ）、フィーカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、ルミノコッカス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）に有意な差が見られたことを報告している。
また、近年、腸内細菌叢が疾患と相関があることから、腸内細菌叢のバランスを改善することにより、疾患を改善する試みが行われている（特許文献３、４）。うつ病においても、腸内細菌叢との相関が見られることから、腸内細菌叢のバランスを改善し治療につなげることも可能だと考えられるが、そのような取り組みは行われていない。
特開２０１５−７８１８１号公報 特表２０１６−５２５３５５号公報 特表２０１４−５３０２２９号公報 特開２０１６−１６６１７６号公報 特開２００７−１８９９４７号公報 特開２０１１−５１９４６号公報
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うつ病などの気分障害の患者が増加する一方で、新しい抗うつ剤が臨床現場で使用されるまでにはいたっておらず、うつ病やうつ症状の治療にはここ数十年にわたって大きな進展は見られていない。新しいうつ病やうつ症状の治療薬の開発には、その発症の機序を明らかにするとともに、新しいアプローチによる新薬の開発が不可欠である。中枢神経系に直接作用するのではなく、腸内細菌叢を改善する治療薬や治療法を開発することができれば、大うつ病障害だけではなく、がんなどの疾患に付随するうつ症状を改善する治療薬になることが期待できる。本発明は、うつ病やうつ症状の原因や、抗うつ作用に関連する腸内細菌群を明らかにし、新しい機序で作用する薬剤をスクリーニングする方法を提供することを課題とする。
また、うつ症状の鑑別診断を行う検査方法を確立することを課題とする。特に、（Ｒ）−ケタミンに対して感受性の高い患者を検出する方法を提供することを課題とする。（Ｒ）−ケタミン投与は、精神病症状惹起作用という副作用が、ラセミ体のケタミン及び（Ｓ）−ケタミンより少ないと予想され、治療抵抗性のうつ病患者に対して有効な治療薬となり得る。予め（Ｒ）−ケタミンによる治療効果の高い患者を選択する客観的な検査方法を提供することができれば、（Ｒ）−ケタミンによる治療を選択して行うことが可能となる。
さらに、がん、循環器疾患など、他の疾患に付随して生じるうつ症状の治療薬を提供することを課題とする。
本発明は以下のうつ症状の検査方法、薬剤のスクリーニング方法、治療薬に関する。
（１）（Ｒ）−ケタミン投与が効果を奏するうつ症状であるかを検査する方法であって、腸内細菌叢を網羅的に解析し、対象の腸内細菌のデルタプロテオバクテリア綱（Ｄｅｌｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、モリクテス綱（Ｍｏｌｌｉｃｕｔｅｓ）、バクテロイデス目（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ）、クロストリジウム目（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ）、ルミノコッカス科（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、モギバクテリア科（Ｍｏｇｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、又はブチリシモナス属（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｍｏｎａｓ）の少なくとも１つを解析し、コントロールに対して有意差がある場合に、（Ｒ）−ケタミン投与が効果を奏するうつ症状であると判定する方法。
（２）前記対象が、精神神経疾患、がん、循環器疾患に罹患していることを特徴とする（１）に記載の検査方法。
（３）前記対象が、大うつ病障害、双極性障害、不安障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、摂食障害、薬物依存、がん、急性心筋梗塞、高血圧に罹患していることを特徴とする（２）記載の検査方法。
（４）うつ症状の検査方法であって、腸内細菌叢を網羅的に解析し、テネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）、デルタプロテオバクテリア綱、モリクテス綱、デスルフォビブリオ科（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ）、モギバクテリア科の少なくとも１つを解析し、コントロールに対して有意差がある場合にうつ症状であると判定する方法。
（５）さらに、アクチノバクテリア門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、プロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、フソバクテリウム門（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス目、クロストリジウム目、ルミノコッカス科、アシドアミノコッカス科（Ａｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、エンテロバクター科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、フソバクテリウム科（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ポルフィロモナス科（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、リケネラ科（Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ）、バクテロイデス科（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ）、エリシペロトリクス科（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ）、ラクノスピラ科（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ）、プレボテラ科（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ）、ベイロネラ科（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｃｅａｅ）、クロストリジウム属、ブチリシモナス属、アリスティペス属（Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ）、ブラウティア属（Ｂｌａｕｔｉａ）、クロストリジウムＸＩＸ属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ＸＩＸ）、ラクノスピラ属（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａ ｉｎｃｅｒｔａｅ ｓｅｄｉｓ）、メガモナス属（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ）、パラバクテロイデス属（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、パラステレラ属（Ｐａｒａｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）、ファスコラークトバクテリウム属（Ｐｈａｓｃｏｌａｒｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、オシリバクター属（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、ロゼブリア属（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ジアリスタ属（Ｄｉａｌｉｓｔｅｒ）、フィーカリバクテリウム属（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、プレボテラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、又はルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）の少なくとも１つを解析することを特徴とする（４）記載の検査方法。
（６）前記対象が、精神神経疾患、がん、循環器疾患に罹患していることを特徴とする（４）又は（５）に記載の検査方法。
（７）前記対象が、大うつ病障害、双極性障害、不安障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、摂食障害、薬物依存、がん、急性心筋梗塞、高血圧に罹患していることを特徴とする（６）記載の検査方法。
（８）うつ症状の治療薬のスクリーニング方法であって、疾患モデルに候補化合物を投与し、テネリクテス門、デルタプロテオバクテリア綱、モリクテス綱、デスルフォビブリオ科、モギバクテリア科の腸内細菌の増加又は減少を指標として候補化合物を選択する治療薬のスクリーニング方法。
（９）さらに、アクチノバクテリア門、プロテオバクテリア門、フソバクテリウム門、バクテロイデス目、クロストリジウム目、ルミノコッカス科、アシドアミノコッカス科、エンテロバクター科、フソバクテリウム科、ポルフィロモナス科、リケネラ科、バクテロイデス科、エリシペロトリクス科、ラクノスピラ科、プレボテラ科、ベイロネラ科、クロストリジウム属、ブチリシモナス属、アリスティペス属、ブラウティア属、クロストリジウムＸＩＸ属、ラクノスピラ属（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａ ｉｎｃｅｒｔａｅ ｓｅｄｉｓ）、メガモナス属、パラバクテロイデス属、パラステレラ属、ファスコラークトバクテリウム属、オシリバクター属、ロゼブリア属、バクテロイデス属、ジアリスタ属、フィーカリバクテリウム属、プレボテラ属、又はルミノコッカス属の少なくとも１つ以上を指標とする（８）記載のうつ症状の治療薬のスクリーニング方法。
（１０）（Ｒ）−ケタミンを有効成分として含有するがん、循環器疾患に由来するうつ症状の治療薬。
（１１）（Ｒ）−ケタミンを有効成分として含有する腸内細菌叢の改善剤。
（１２）うつ症状を呈する患者を対象として投与する（１１）記載の腸内細菌叢改善剤。
（１３）（Ｒ）−ケタミンを有効成分とする組成物を投与することによる腸内細菌叢の改善方法。
（１４）うつ症状を呈する患者を対象として前記組成物を投与する（１３）記載の腸内細菌叢の改善方法。
新規の抗うつ薬をスクリーニングする方法を提供することができる。本発明のスクリーニング方法によれば、ケタミンに次ぐ新しいうつ症状の治療薬を開発できる可能性がある。腸内細菌叢の改善に着目した新規の薬剤を開発することができれば、従来の薬剤に治療抵抗性を示す患者に効果を奏する可能性が高い。また、新たなうつ症状の検査方法、特に（Ｒ）−ケタミンが有効な患者を鑑別する方法を提供することが可能となる。
ケタミン投与実験のタイムスケジュール、及び行動テストの結果を示す図。図１Ａは実験のタイムスケジュールを、図１Ｂは自発運動量試験、図１Ｃは尾懸垂試験、図１Ｄは強制水泳試験、図１Ｅはショ糖嗜好性試験の結果を示す。 社会的敗北ストレスマウスで変化のあった腸内細菌を示す図。図２Ａは、各個体の腸内細菌叢の門（ｐｈｙｌｕｍ）レベルでの解析を示す。図２Ｂはテネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）、図２Ｃはアクチノバクテリア門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）の細菌の変化を示す。 社会的敗北ストレスマウスで変化のあった腸内細菌を示す図。図３Ａは、各個体の腸内細菌叢の綱（ｃｌａｓｓ）レベルでの解析を示す。図３Ｂはデルタプロテオバクテリア綱（Ｄｅｌｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、図３Ｃはモリクテス綱（Ｍｏｌｌｉｃｕｔｅｓ）の細菌の変化を示す。 社会的敗北ストレスマウスで変化のあった腸内細菌を示す図。図４Ａは、各個体の腸内細菌叢の科（ｆａｍｉｌｙ）レベルでの解析を示す。図４Ｂはデスルフォビブリオ科（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ）の細菌の変化を示す。 社会的敗北ストレスマウスで変化のあった腸内細菌を示す図。図５Ａは、各個体の腸内細菌叢の属（ｇｅｎｕｓ）レベルでの解析を示す。図５Ｂはブチリシモナス属（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｍｏｎａｓ）、図５Ｃは、その他として分類された細菌の変化を示す。 （Ｒ）−ケタミン、ラニセミン投与実験のタイムスケジュール、及び行動テストの結果を示す図。図６Ａは実験のタイムスケジュールを、図６Ｂは自発運動量試験、図６Ｃは尾懸垂試験、図６Ｄは強制水泳試験、図６Ｅはショ糖嗜好性試験の結果を示す。 社会的敗北ストレスマウスの腸内細菌叢の解析結果を示す図。図７Ａは、各個体の腸内細菌叢の門（ｐｈｙｌｕｍ）レベルでの解析を示す。図７Ｂは各個体の腸内細菌叢の綱（ｃｌａｓｓ）レベルでの解析を示す。 社会的敗北ストレスマウスで変化のあった腸内細菌を示す図。図８Ａは、各個体の腸内細菌叢の目（ｏｒｄｅｒ）レベルでの解析を示す。図８Ｂはバクテロイデス目（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ）、図８Ｃはクロストリジウム目（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ）の変化を示す。 社会的敗北ストレスマウスで変化のあった腸内細菌を示す図。図９Ａは、各個体の腸内細菌叢の科（ｆａｍｉｌｙ）レベルの解析を示す。図９Ｂはルミノコッカス科（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、図９Ｃはモギバクテリア科（Ｍｏｇｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）の細菌の変化を示す。 社会的敗北ストレスマウスで変化のあった腸内細菌を示す図。図１０Ａは、各個体の腸内細菌叢の属（ｇｅｎｕｓ）レベルでの解析を示す。図１０Ｂはクロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）の細菌の変化を示す。
本発明者は、うつ様症状を示すモデルマウスを用いた実験から、うつ様症状に特異的に増減する細菌が存在すること、また、（Ｒ）−ケタミンを投与したマウスの腸内細菌叢は、生理食塩水を投与した群と比較して腸内細菌叢の変化に改善が見られることを見出した。さらに、ケタミンと同じくＮＭＤＡＲアンタゴニストであり、うつ病に対する効果が報告されているラニセミン投与と（Ｒ）−ケタミン投与による腸内細菌叢の変化を比較し、両者の対比からうつ症状の改善と相関する腸内細菌叢の解析を行った。本発明はこれらの知見に基づいて完成された。
本発明において、「うつ症状」とは、大うつ病性障害だけではなく、精神障害に伴ううつ症状、がんなどの他の疾患に付随したうつ症状全般を含む。うつ症状とは、抑うつ気分、悲壮感、意欲・興味の低下、罪悪感、自尊心の低下などの精神的な症状や、睡眠障害、食欲不振、疲労感、集中力の低下などの身体的症状などが長期間続くような状態を指す。臨床では、ＤＳＭ−５やＩＣＤ−１１などの診断基準に基づいて、上記のような症状から「うつ症状」であると診断される。
うつ症状を伴う疾患には、大うつ病障害の他、双極性障害、不安障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ：Ｐｏｓｔ Ｔｒａｕｍａｔｉｃ Ｓｔｒｅｓｓ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、摂食障害、薬物依存などの精神障害や、がん、急性心筋梗塞、高血圧などの循環器疾患など、精神障害以外の疾患であるが、うつ症状を伴うことが知られている疾患も含む。
腸内細菌叢によって、うつ症状を検査する場合には、以下に示す１６ｓ ｒＲＮＡを次世代シーケンサーによって解析すればよい。また、特定の目、科、属などの細菌の増減を解析するのであれば、定量的ＰＣＲによって解析することも可能である。本発明の方法は、腸内細菌叢の解析という非侵襲的な解析であることから、患者に対する身体的な負担がない。また、客観的な指標により、同一患者における病状の推移や、疾患の状態を経時的に検査することができる。
［実施例１］ケタミン投与による腸内細菌叢の解析
（１）うつ様症状を示すモデルマウス
以下に説明するすべての動物試験は、千葉大学動物実験委員会の許諾のもと、動物実験の適性な実施に向けたガイドラインの推奨する方法に沿って実施した。
社会的敗北ストレス（ＣＳＤＳ：ｃｈｒｏｎｉｃ ｓｏｃｉａｌ ｄｅｆｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ）モデルをうつ症状を呈するモデルマウスとして用いた。社会的敗北ストレスモデル（以下、ＣＳＤＳモデルと記載することもある。）は、既報（非特許文献１１）により作成した。具体的には、マウスモデルは、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、オス、体重２０〜２５ｇ、日本エスエルシー株式会社より購入）を攻撃的なＣＤ１（ＩＣＲ）マウス（１３〜１５週齢、オス、体重４０ｇ以上、日本エスエルシー株式会社より購入）に毎日１０分間接触させ、残りの時間は、ＣＤ１を飼育していたケージ内で有孔プレキシガラスによって、視覚、嗅覚、聴覚のうえでは接触可能なまま、空間的には隔離して１０日間飼育することによって、社会的ストレスを負荷した。最後の接触から２４時間後に全てのマウスは個別のケージに入れ飼育を行った。
１１日目に社会的行動テスト（ＳＩＴ：ｓｏｃｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）を行い、社会的敗北ストレスに感受性の高いマウスを選択して実験に用いた。ＳＩＴテストは、ワイヤーメッシュでできた空のケージ（１０×４．５ｃｍ）をテストボックス（４２×４２ｃｍ）の一端に置き、マウスを入れ、２．５分間マウスの行動を記録する。その後、攻撃的な未知のマウスをワイヤーメッシュケージ内に入れ、２．５分間さらにマウスの行動を観察する。ワイヤーメッシュケージの周囲８ｃｍの領域を相互作用域として、対象マウスがこの領域にいる時間を測定する。相互作用域に対象マウスがいる時間を、ケージ内に未知のマウスがいる時といない時で比較し、社会的敗北ストレスに対する感受性の有無を判定した。具体的には、「他のマウスがケージ内にいる時に相互作用域に対象マウスがいた時間」を「他のマウスがケージ内にいない時に相互作用域に対象マウスがいた時間」で除し、１以上であれば、社会的敗北ストレスに対して感受性が低く、１より小さければ、社会的敗北ストレスに感受性が高いと判定した。約７０〜８０％のマウスが社会的敗北ストレスに感受性が高いマウスと判断された。
（２）行動試験解析
図１には、実験のタイムスケジュール、及び行動テストの結果を示す。１０日間社会的敗北ストレスを負荷し、試験開始１１日目に社会行動試験を行い、社会的敗北ストレスに感受性を有したマウスを選択し、ランダムに３群に分け、１２日目に生理食塩水（１０ｍｌ／ｋｇ）、（Ｒ）−ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ）、あるいは（Ｓ）−ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射により投与した。また、社会的敗北ストレスを負荷していないコントロールマウスにも、生理食塩水（１０ｍｌ／ｋｇ）を腹腔内投与した。なお、（Ｒ）−ケタミン、（Ｓ）−ケタミンは、非特許文献１２に記載の方法により２つの異性体が混在する（Ｒ，Ｓ）−ケタミン（ケタラール（商品名）、第一三共株式会社）を再結晶化し、ＨＰＬＣにより精製度を確認して使用した。
その後、１２日目に自発運動量試験（ＬＭＴ）、１３日目に尾懸垂試験（ＴＳＴ）、１４日目に強制水泳試験（ＦＳＴ）、１５日目にショ糖嗜好性試験（ＳＰＴ）を行い、１６日目に糞便を採取し解析を行った。
なお、行動試験は以下の方法による。
自発運動試験（ＬＭＴ：Ｌｏｃｏｍｏｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）：試験マウスを実験ケージ（長さ×幅×高さ：５６０×５６０×３３０ｍｍ）に入れ、マウスの自発運動量を行動解析装置ＳＣＡＮＥＴＭＶ−４０（有限会社メルクエスト）を用いて測定し、累積運動量を６０分間記録した。
尾懸垂試験（ＴＳＴ：ｔａｉｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｔｅｓｔ）：マウスを飼育ケージから取り出し、粘着テープの小片を尾の先端から約２ｃｍのところに貼り付けた。テープに孔を１つ開けておき、孔をフックにかけてマウスをぶら下げた。マウスがぶら下がったまま完全に静止した状態を無動と判定した。１０分間尾懸垂を行い、無動時間を記録した。
強制水泳試験（ＦＳＴ：ｆｏｒｃｅｄ ｓｗｉｍｍｉｎｇ ｔｅｓｔ）：１５ｃｍの高さまで水（２３±１℃）を入れたシリンダー（直径：２３ｃｍ、高さ：３１ｃｍ）にマウスを入れ、ＳＣＡＮＥＴＭＶ−４０の自動強制水泳装置で試験を行った。試験時間６分間のうち、遊泳時間を差し引き、累積無動時間を算出した。
ショ糖嗜好性試験（ＳＰＴ：ｓｕｃｒｏｓｅ ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔｅｓｔ）：試験開始前４８時間、マウスに水と１％ショ糖溶液を与えた。次いで４時間水と餌を与えず、その後水が入ったボトルと１％ショ糖溶液が入ったボトルを用いて１時間にわたってマウスの嗜好性を調べた。各ボトルは、試験期間前後に重さを測定し、ショ糖溶液を摂取した割合をショ糖嗜好性として算出した。
ＣＳＤＳモデルの行動試験に対するケタミンの効果を図１Ｂ〜図１Ｅに示す。自発運動は、コントロール、ＣＳＤＳモデルに生理食塩水を投与した群（以下、非投与群という。）、（Ｒ）−ケタミンを投与した群、（Ｓ）−ケタミンを投与した群、いずれの群でも変化がなかった（図１Ｂ）。これに対し、尾懸垂試験（図１Ｃ）、強制水泳試験（図１Ｄ）では、（Ｒ）−ケタミン投与群、（Ｓ）−ケタミン投与群どちらも、非投与群に対して明らかに無動時間の短縮が見られた。また、（Ｒ）−ケタミン投与群は、（Ｓ）−ケタミン投与群と比較して、より無動時間の短縮が見られた。さらに、ショ糖嗜好性試験（図１Ｅ）の結果は、（Ｒ）−ケタミン投与群では、（Ｓ）−ケタミン投与群に比べて、よりショ糖に対する嗜好性が高く、（Ｒ）−ケタミンが抗アンヘドニア効果を有することを示している。なお、以下に示す図中＊はＰ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、ＮＳは有意差なし（ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ）を表している。
（３）腸内細菌の解析
試験開始１６日目（薬剤投与から４日後）に、コントロール、ＣＳＤＳモデル非投与群、（Ｒ）−ケタミン投与群、（Ｓ）−ケタミン投与群の各マウスから糞便試料を集め、腸内細菌の解析を行った。糞便試料は１．５ｍｌチューブに集め、急速凍結して保存した。１６Ｓ ｒＲＮＡシーケンスを行い、腸内細菌叢のバクテリアをアンプリコン解析した。ＤＮＡ抽出はＭｏＢｉｏ Ｐｏｗｅｒｌｙｚｅｒ Ｐｏｗｅｒｓｏｉｌ ＤＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＭｏＢｉｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を用い、以下のユニバーサルプライマーにイルミナ社のシークエンス用アダプターを付加し、１６Ｓ ｒＲＮＡのＶ４超可変領域を増幅して解析を行った。なお、解析はタカラバイオ株式会社で実施した。
Ｆｏｒｗａｒｄ（５１５Ｆ）：５′−ＴＣＧＴＣＧＧＣＡＧＣＧＴＣＡＧＡＴＧＴＧＴＡＴＡＡＧＡＧＡＣＡＧＧＴＧＣＣＡＧＣＭＧＣＣＧＣＧＧＴＡＡ−３′（配列番号１）
Ｒｅｖｅｒｓｅ（８０６Ｒ）：５′−ＧＴＣＴＣＧＴＧＧＧＣＴＣＧＧＡＧＡＴＧＴＧＴＡＴＡＡＧＡＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＷＴＣＴＡＡＴ−３′（配列番号２）
アンプリコンを生成し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ １６Ｓ Ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎプロトコルに従いシークエンスを行った。シークエンスデータはＭＯＴＨＵＲソフトウエアにより解析し、シークエンスエラーなどのノイズを除いた後に、ＣＤ−ＨＩＴＯＴＵ ｐｉｐｅｌｉｎｅを用い９７％以上の相同性があるＯＴＵのクラスタリングを行った。ＯＴＵの分類は、Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｐｒｏｊｅｃｔ Ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒによった（非特許文献１３）。
各個体における腸内細菌叢の門（ｐｈｙｌｕｍ）レベルの解析結果を図２Ａに示す。さらに、群毎に解析した結果、テネリクテス門の細菌がＣＳＤＳモデルにおいてコントロールと比較して減少していることが明らかとなった（図２Ｂ）。テネリクテス門のバクテリアは、ＣＳＤＳモデルすべての群で減少が見られ、（Ｒ）−ケタミン、（Ｓ）−ケタミンいずれの投与によっても増加が見られなかった。また、アクチノバクテリア門の細菌は、ＣＳＤＳモデルではコントロールに対して有意に増加していた。アクチノバクテリア門の細菌の増加に対しても、（Ｒ）−ケタミン、（Ｓ）−ケタミンいずれも抑制効果が見られなかった。
各個体における腸内細菌叢の綱（ｃｌａｓｓ）レベルでの解析結果を図３Ａに示す。さらに、群毎に解析した結果、デルタプロテオバクテリア綱の細菌が、ＣＳＤＳモデルマウスで有意に増加していることが明らかになった。また、ＣＳＤＳモデルマウスにおけるデルタプロテオバクテリア綱の細菌の増加は、（Ｒ）−ケタミン、（Ｓ）−ケタミンいずれの投与によっても有意に減少していた。
さらに、モリクテス綱の細菌は、ＣＳＤＳモデルマウスで減少していた。（Ｒ）−ケタミン、（Ｓ）−ケタミンいずれの投与によっても、モリクテス綱の細菌数は回復していたが、（Ｒ）−ケタミン投与群では回復が顕著であり、生理食塩水投与群と比較して、有意な増加が見られた。
各個体における腸内細菌叢の科（ｆａｍｉｌｙ）レベルでの解析結果を図４Ａに示す。さらに、群毎に解析した結果、デスルフィオビブリオ科の細菌が、ＣＳＤＳモデルマウスで有意に増加していることが明らかになった。さらに、（Ｓ）−ケタミン投与群では、生理食塩水投与群に較べてデスルフィオビブリオ科の細菌の著しい増加が見られた。これに対し、（Ｒ）−ケタミン投与群では、生理食塩水投与群との差は見られなかった。
各個体における腸内細菌叢の属（ｇｅｎｕｓ）レベルでの解析結果を図５Ａに示す。さらに、群毎に解析した結果、ブチリシモナス属の細菌が、ＣＳＤＳモデルの非投与群ではコントロールに比べて減少していた。（Ｒ）−ケタミン、（Ｓ）−ケタミンいずれの投与によってもブチリシモナス属の細菌は非投与群と比較して増加していたが、特に（Ｒ）−ケタミン投与群ではより顕著な増加が見られた。（Ｓ）−ケタミンはコントロールと同程度の割合まで、ブチリシモナス属の細菌の増加が見られた。また、その他として分類されている細菌については、ＣＳＤＳモデルの非投与群では減少していたが、（Ｒ）−ケタミン、（Ｓ）−ケタミン投与群ではその割合が回復しているのが確認された。
分類学上の門レベルの解析によれば、ＣＳＤＳモデルにおいて、テネリクテス門の細菌の減少と、アクチノバクテリア門の細菌の増加が見られた。したがって、これらの細菌の増減はうつ症状の指標とすることができる。
また、分類学上の綱レベルの解析によれば、ＣＳＤＳモデルにおいて、デルタプロテオバクテリア綱の細菌の増加と、モリクテス綱の細菌の減少が見られた。したがって、これらの細菌の増減はうつ症状の指標とすることができる。さらに、デルタプロテオバクテリア綱や、モリクテス綱の細菌の変化が（Ｒ）−ケタミンによって抑制されることから、これらの細菌がコントロール（健常者）に対して増減が見られるうつ症状患者には（Ｒ）−ケタミンが効果を奏する可能性が高い。
さらに、分類学上の科レベルの解析によれば、ＣＳＤＳモデルマウスにおいて、デスルフォビブリオ科の細菌の増加が見られた。デスルフォビブリオ科の細菌は硫化水素を産生する細菌であることが知られている。硫化水素は炎症にも関わっていることからうつ病の炎症仮説にも合致する。したがって、デスルフォビブリオ科の細菌の増加は、うつ症状の良い指標となるものと考えられる。
また、分類学上の属レベルの解析によれば、ＣＳＤＳモデルマウスにおいて、ブチリシモナス属、及びその他として分類される細菌の減少が見られた。したがって、これらの細菌の減少もうつ症状の指標として用いることができる。また、ブチリシモナス属の細菌は（Ｒ）−ケタミンによって増加することから、ブチリシモナス属の細菌が健常者に対して減少しているうつ症状患者には、（Ｒ）−ケタミンが効果を奏する可能性が高い。
また、これらの細菌を指標として医薬のスクリーニングを行う場合には、すでに特定の細菌に対して効果がある薬剤をＣＳＤＳモデルマウスなどのうつ症状を呈するモデル動物に投与して効果を解析すればよい。例えば、硫化水素を産生する細菌に対しては、その発生を抑制する物質が知られている（特許文献５、６）。これら特定の細菌に対して効果を有する物質を用いて、うつ症状が軽減するか否かをＣＳＤＳモデル動物などによって試験をすればよい。候補化合物の効果の解析は、行動試験解析によって行ってもよいし、１６Ｓ ｒＲＮＡ解析を行っても良い。
［実施例２］ケタミンとラニセミンによる腸内細菌叢の解析
次に、ＮＭＤＡＲアンタゴニストであるラニセミン（ｌａｎｉｃｅｍｉｎｅ）と（Ｒ）−ケタミンとの比較解析を行った。ラニセミンは、ケタミンと同じくＮＭＤＡＲアンタゴニストであり、多くの点でケタミンと類似した性質を有している（非特許文献１４、１５）。ラニセミンは、治療抵抗性のうつ病に対して即効性があるが、効果があまり持続しないことが報告されている（ｎ＝２２、非特許文献１４）。続いて行われた後期第二相（フェーズＩＩｂ）の臨床試験（ｎ＝１５２、１００ｍｇ又は１５０ｍｇを３週間にわたり週に３回静脈注射により投与。投与は投与中の薬剤に対して付加的な投与である。）では、治療抵抗性のうつ病に対して、効果があることが報告されている（非特許文献１５）。しかし、最近行われたより規模の大きい後期第二相臨床試験（ｎ＝３０２、５０ｍｇ又は１００ｍｇを１２週間にわたり週に３回静脈注射により投与。投与は投与中の薬剤に対して付加的な投与である。）では、治療抵抗性のうつ病に対して、効果が見られなかったことが報告されている（非特許文献１５）。
そこで、ラニセミンとケタミンの腸内細菌叢に対する効果を比較検討することとした。実験のタイムスケジュールは実施例１と同様、マウスに１０日間社会的敗北ストレスを負荷し、１１日目にＳＩＴにより社会的敗北ストレスに対して感受性があるマウスをモデルとして選択した後、その後、１２日目に自発運動量試験（ＬＭＴ）、１３日目に尾懸垂試験（ＴＳＴ）、１４日目に強制水泳試験（ＦＳＴ）、１５日目にショ糖嗜好性試験（ＳＰＴ）を行い、１６日目に糞便を採取し解析を行った。薬剤による処置は１２日目に、生理食塩水（１０ｍｌ／ｋｇ）、（Ｒ）−ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ）、又はラニセミン（ＡＺＤ６７６５、シグマ−アルドリッチ株式会社、１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射により投与した。また、コントロールマウスにも、生理食塩水（１０ｍｌ／ｋｇ）を腹腔内投与した（図６Ａ）。
自発運動は、コントロール、ＣＳＤＳモデルに生理食塩水を投与した群（以下、非投与群という。）、（Ｒ）−ケタミンを投与した群、ラニセミンを投与した群、いずれの群でも変化がなかった（図６Ｂ）。これに対し、尾懸垂試験（図６Ｃ）、強制水泳試験（図６Ｄ）においては、（Ｒ）−ケタミン投与群では、非投与群に対して明らかに無動時間の短縮が見られるのに対し、ラニセミン投与群では無動時間の短縮は見られなかった。また、ショ糖嗜好性試験（図６Ｅ）は、（Ｒ）−ケタミンは、コントロールと同程度にショ糖嗜好性が回復しているのに対し、ラニセミンは、ショ糖嗜好性が低下しており、抗アンヘドニア効果がないことを示している。ラニセミンにうつ症状を改善する効果がないことは、最近の臨床試験の結果（非特許文献１６）とも良い一致を示している。
次に、実施例１と同様にして、１６日目に採集した糞便中の細菌を次世代シーケンサーにより解析した。各個体における腸内細菌叢の門（ｐｈｙｌｕｍ）レベルでの腸内細菌叢の解析結果を図７Ａに示す。コントロール、ＣＳＤＳモデル非投与群、（Ｒ）−ケタミン投与群、ラニセミン投与群、いずれの群もバクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、フィルミクテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）の細菌が多く見られ、各群間に大きな差は認められなかった。
各個体における腸内細菌叢の綱（ｃｌａｓｓ）レベルでの解析結果を図７Ｂに示す。コントロール、ＣＳＤＳモデル非投与群、（Ｒ）−ケタミン投与群、ラニセミン投与群、いずれの群もバクテロイデス綱（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｉａ）、バシラス綱（Ｂａｃｉｌｌｉ）、クロストリジウム綱（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）の細菌が多く見られ、各群間に大きな差は認められなかった。
次に、各個体における腸内細菌叢の目（ｏｒｄｅｒ）レベルでの解析結果を図８Ａに示す。目レベルで細菌叢を比較すると、バクテロイデス目、クロストリジウム目の細菌がＣＳＤＳモデルマウスでは、コントロールに較べて有意に減少していた。さらに、（Ｒ）−ケタミン投与群では、バクテロイデス目、クロストリジウム目の細菌は、ともに非投与群に対して増加が認められたが、ラニセミン投与群では両者ともに増加は認められなかった。
次に、各個体における腸内細菌叢の科（ｆａｍｉｌｙ）レベルでの解析結果を図９Ａに示す。科レベルで細菌を比較すると、ＣＳＤＳモデルマウスでは、ルミノコッカス科の細菌の増加が認められた（図９Ｂ）。（Ｒ）−ケタミン投与群では、ルミノコッカス科の細菌の増加がコントロールと同等のレベルまで抑制されているのに対し、ラニセミン投与群ではそのような効果は認められなかった。一方、モギバクテリア科の細菌は、ＣＳＤＳモデルマウスでは、コントロールと比較して減少しているのが認められた。さらに、（Ｒ）−ケタミン投与群では、減少に対する抑制が認められるのに対し、ラニセミンではモギバクテリア科の細菌の減少抑制効果は認められなかった。
次に、各個体における腸内細菌叢の属（ｇｅｎｕｓ）レベルでの解析結果を図１０Ａに示す。属レベルでは、クロストリジウム属の細菌がＣＳＤＳモデルマウスでは顕著に増加しているのが認められた。（Ｒ）−ケタミン投与群、ラニセミン投与群、いずれの群でもクロストリジウム属の細菌の増加が、非投与群と比較して抑制されていたが、（Ｒ）−ケタミン投与群の方がより顕著な抑制効果を示していた。
分類学上の門レベル、綱レベルの解析によれば、コントロール、及びＣＳＤＳモデルにおける非投与群、ラニセミン投与群、（Ｒ）−ケタミン投与群間で腸内細菌叢に差は見られなかった。
分類学上の目レベルの解析によれば、ＣＳＤＳモデルにおいて、バクテロイデス目、クロストリジウム目の細菌の減少が見られた。したがって、バクテロイデス目、クロストリジウム目の減少はうつ症状の検査の指標となるものと考えられる。また、（Ｒ）-ケタミンはいずれの細菌に対しても、減少を抑制する効果があることから、これらの細菌が減少しているうつ症状を示す患者には、（Ｒ）−ケタミンが有効である可能性が高い。
分類学上の科レベルの解析によれば、ＣＳＤＳモデルにおいて、ルミノコッカス科の細菌の増加、モギバクテリア科の細菌の減少が見られた。したがって、これらの細菌の増減をうつ症状の指標とすることができる。さらに、（Ｒ）-ケタミンはルミノコッカス科の細菌の増加を抑制し、モギバクテリア科の細菌の減少を抑制することから、これらの細菌に変化が見られるうつ症状に対して奏効するものと考えられる。
分類学上の属レベルの解析によれば、ＣＳＤＳモデルにおいてクロストリジウム属の細菌の顕著な増加が見られた。したがって、クロストリジウム属の細菌の増加をうつ症状の指標とすることができる。
上記のように、腸内細菌叢の解析は、うつ症状の診断の補助的な検査とすることができるだけではなく、（Ｒ）−ケタミンが奏効する可能性の高い患者を選択することができる。さらに、腸内細菌叢の改善によってうつ症状を治療し得る新しい薬剤をスクリーニングできる可能性がある。

Claims (12)

  1. （Ｒ）−ケタミン投与が効果を奏するうつ症状であるかを検査する方法であって、
    腸内細菌叢を網羅的に解析し、
    対象の腸内細菌のデルタプロテオバクテリア綱（Ｄｅｌｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、モリクテス綱（Ｍｏｌｌｉｃｕｔｅｓ）、バクテロイデス目（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ）、クロストリジウム目（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ）、ルミノコッカス科（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、モギバクテリア科（Ｍｏｇｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、又はブチリシモナス属（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｍｏｎａｓ）の少なくとも１つを解析し、
    コントロールに対して有意差がある場合に、
    （Ｒ）−ケタミン投与が効果を奏するうつ症状であると判定する方法。
  2. 前記対象が、
    精神神経疾患、がん、循環器疾患に罹患していることを特徴とする請求項１に記載の検査方法。
  3. 前記対象が、
    大うつ病障害、双極性障害、不安障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、摂食障害、薬物依存、がん、急性心筋梗塞、高血圧に罹患していることを特徴とする請求項２記載の検査方法。
  4. うつ症状の検査方法であって、
    腸内細菌叢を網羅的に解析し、
    テネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）、デルタプロテオバクテリア綱、モリクテス綱、デスルフォビブリオ科（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ）、モギバクテリア科の少なくとも１つを解析し、
    コントロールに対して有意差がある場合にうつ症状であると判定する方法。
  5. さらに、アクチノバクテリア門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、プロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、フソバクテリウム門（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス目、クロストリジウム目、ルミノコッカス科、アシドアミノコッカス科（Ａｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、エンテロバクター科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、フソバクテリウム科（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ポルフィロモナス科（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、リケネラ科（Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ）、バクテロイデス科（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ）、エリシペロトリクス科（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ）、ラクノスピラ科（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ）、プレボテラ科（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ）、ベイロネラ科（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｃｅａｅ）、クロストリジウム属、ブチリシモナス属、アリスティペス属（Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ）、ブラウティア属（Ｂｌａｕｔｉａ）、クロストリジウムＸＩＸ属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ＸＩＸ）、ラクノスピラ属（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａ ｉｎｃｅｒｔａｅ ｓｅｄｉｓ）、メガモナス属（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ）、パラバクテロイデス属（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、パラステレラ属（Ｐａｒａｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）、ファスコラークトバクテリウム属（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、オシリバクター属（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、ロゼブリア属（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ジアリスタ属（Ｄｉａｌｉｓｔｅｒ）、フィーカリバクテリウム属（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、プレボテラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、又はルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）の少なくとも１つを解析することを特徴とする請求項４記載の検査方法。
  6. 前記対象が、
    精神神経疾患、がん、循環器疾患に罹患していることを特徴とする請求項４又は５に記載の検査方法。
  7. 前記対象が、
    大うつ病障害、双極性障害、不安障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、摂食障害、薬物依存、がん、急性心筋梗塞、高血圧に罹患していることを特徴とする請求項６記載の検査方法。
  8. うつ症状の治療薬のスクリーニング方法であって、
    疾患モデルに候補化合物を投与し、
    テネリクテス門、デルタプロテオバクテリア綱、モリクテス綱、デスルフォビブリオ科、モギバクテリア科の腸内細菌の増加又は減少を指標として候補化合物を選択する治療薬のスクリーニング方法。
  9. さらに、アクチノバクテリア門、プロテオバクテリア門、フソバクテリウム門、バクテロイデス目、クロストリジウム目、ルミノコッカス科、アシドアミノコッカス科、エンテロバクター科、フソバクテリウム科、ポルフィロモナス科、リケネラ科、バクテロイデス科、エリシペロトリクス科、ラクノスピラ科、プレボテラ科、ベイロネラ科、クロストリジウム属、ブチリシモナス属、アリスティペス属、ブラウティア属、クロストリジウムＸＩＸ属、ラクノスピラ属（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａ ｉｎｃｅｒｔａｅ ｓｅｄｉｓ）、メガモナス属、パラバクテロイデス属、パラステレラ属、ファスコラークトバクテリウム属、オシリバクター属、ロゼブリア属、バクテロイデス属、ジアリスタ属、フィーカリバクテリウム属、プレボテラ属、又はルミノコッカス属の少なくとも１つ以上を指標とする請求項８記載のうつ症状の治療薬のスクリーニング方法。
  10. （Ｒ）−ケタミンを有効成分として含有する
    がん、循環器疾患に由来するうつ症状の治療薬。
  11. （Ｒ）−ケタミンを有効成分として含有する
    腸内細菌叢の改善剤。
  12. うつ症状を呈する患者を対象として投与する請求項１１記載の腸内細菌叢改善剤。




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