JP2024035040A - 分析方法、キット及び検出用デバイス - Google Patents
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Abstract
【課題】分析対象について、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を簡便に判定することができる分析方法及びキットを提供する。【解決手段】実施形態によれば、分析対象由来の試料中の、標的ｍｉＲＮＡ群から選択された標的ｍｉＲＮＡを定量することを含む、対象の乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する分析方法及びキットが提供される。【選択図】 図１
Description
本発明の実施形態は、分析方法、キット及び検出用デバイスに関する。
近年、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）と疾患との関係が注目されている。ｍｉＲＮＡは遺伝子発現を調節する機能を持ち、種々の疾患でその種類や発現量が初期の段階から変化していることが報告されている。即ち、ある疾患を持つ患者では、特定のｍｉＲＮＡ量が健常者と比較して増加又は減少している。そのため、被検者から採取された試料中の該ｍｉＲＮＡの量を調べることは、患者がその疾患に罹患しているか否かを知る手段となる。
本発明が解決しようとする課題は、分析対象について、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を簡便に判定することができる分析方法、キット及び検出用デバイスを提供することである。
実施形態によれば、対象由来の試料中のｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ，及びｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐのうちの少なくとも１つを定量することを含む、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する分析方法が提供される。
以下に、図面を参照しながら実施形態の分析方法、キット及び検出用デバイスについて説明する。
・第１実施形態
（分析方法）
第１実施形態に従う分析方法は、対象由来の試料中に、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ，及びｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐのうちの１種類を定量すること（定量工程（Ｓ１２））を含む、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無の判定する方法である。
（分析方法）
第１実施形態に従う分析方法は、対象由来の試料中に、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ，及びｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐのうちの１種類を定量すること（定量工程（Ｓ１２））を含む、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無の判定する方法である。
上述の計２３種のｍｉＲＮＡは、以下の説明において「標的ｍｉＲＮＡ群」とも称する。また、標的ｍｉＲＮＡ群を構成する個々のｍｉＲＮＡを「標的ｍｉＲＮＡ」とも称する。
例えば、標的ｍｉＲＮＡはそれぞれ下記の表１に示される塩基配列で表される。なお、本明細書において、各配列番号に対応する配列表上の「Ｔ」の表記は、「Ｕ」を意味する。定量される標的ｍｉＲＮＡは、標的ｍｉＲＮＡ群のうちの１種類であればよい。
対象は、本方法において分析に供される動物、即ち、試料を提供する動物である。対象は、何らかの疾患を有する動物であってもよいし、健常な動物であってもよい。例えば、対象は、がんに罹患している可能性がある動物、或いは過去にがんに罹患したことのある動物等であってもよく、特に、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患している可能性がある動物、或いは過去に乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患したことのある動物等であってもよい。対象はヒトであることが好ましい。
或いは、対象は他の動物であってもよい。他の動物は、例えば哺乳動物であり、例えば、サル等の霊長類、マウス、ラット又はモルモット等の齧歯類、イヌ、ネコ又はウサギ等の伴侶動物、ウマ、ウシ又はブタ等の家畜動物、或いは展示動物等に属する動物を含む。ヒト以外の動物である場合は、標的ｍｉＲＮＡは、その動物に存在する、上記ｍｉＲＮＡに対応したｍｉＲＮＡである。
対象由来の試料とは、対象から採取された試料又はそれを適切に処理した試料等を含む。試料は、好ましくは、血清又は血漿である。試料は、その他の体液、例えば、血液、白血球間質液、尿、便、汗、唾液、口腔内粘膜、鼻腔内粘膜、鼻水、咽頭粘膜、喀痰、消化液、胃液、リンパ液、髄液、涙液、母乳、羊水、精液又は膣液等であってもよい。或いは、試料は、組織又は細胞等であってもよく、対象から採取され、培養された組織又は細胞、或いはその上清であってもよい。
本明細書における、各種の「がん」は、何れの病期のものも含み、例えば、発生母地の臓器内に留まった状態、更に周辺の組織まで及んだ状態、更にリンパ節へ転移した状態、及び更に離れた臓器への転移がある状態等を含む。また本明細書において乳がんは、乳腺組織に形成される悪性腫瘍（新生物）をいう。例えば、乳がんは、一般に「乳癌」又は「乳がん」と称されるものも含む。また、本明細書における、各種のがんは、例えば上皮性腫瘍、非上皮性腫瘍、又は、上皮性及び非上皮性の両方からなる腫瘍を含む。
以下、第１実施形態の方法の手順の一例について、図１の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を参照して説明する。
図１の（ａ）に示す通り、分析方法は、例えば
対象由来の試料を用意すること（用意工程（Ｓ１１））と、
対象由来の試料中の標的ｍｉＲＮＡ群のうちの１種を定量すること（定量工程（Ｓ１２））と
を含む。
対象由来の試料を用意すること（用意工程（Ｓ１１））と、
対象由来の試料中の標的ｍｉＲＮＡ群のうちの１種を定量すること（定量工程（Ｓ１２））と
を含む。
まず、対象由来の試料を用意する（用意工程（Ｓ１１））。試料は、その種類に従う一般的な方法を用いて採取することができる。試料は、採取後そのまま使ってもよいし、核酸の定量のための反応を阻害しない状態又は反応により適した状態となるように処理してもよい。処理は、例えば、細切、ホモジナイズ、遠心、沈殿、抽出及び／又は分離等であり、公知の何れかの手段により行うことができる。
例えば、抽出は、市販の核酸抽出キットを用いて行ってもよい。核酸抽出キットとして、例えば、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ（登録商標） ｍｉＲＮＡ Ｐｌａｓｍａ（タカラバイオ製）、Ｑｕｉｃｋ－ｃｆＲＮＡ Ｓｅｒｕｍ ＆ Ｐｌａｓｍａ Ｋｉｔ（ザイモリサーチ製）、ｍｉＲＮｅａｓｙ Ｓｅｒｕｍ／Ｐｌａｓｍａ キット（キアゲン製）、ｍｉＲＶａｎａ ＰＡＲＩＳ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ（サーモフィッシャー製）、ＰｕｒｅＬｉｎｋＴＭ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｂｌｏｏｄ Ｋｉｔ（サーモフィッシャー製）、Ｐｌａｓｍａ／Ｓｅｒｕｍ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ （Ｎｏｒｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｋ製） 、ｍｉｃｒｏＲＮＡ Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ（登録商標） ＳＰ Ｋｉｔ（和光純薬製）、Ｈｉｇｈ Ｐｕｒｅ ｍｉＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（シグマアルドリッチ製）等を用いることができる。或いは、市販のキットを使用せずに、例えば、試料を緩衝液で希釈し、８０～１００℃の加熱処理を行い、遠心分離し、その上清を採取することによって抽出を行ってもよい。
次に、対象由来の試料に含有される、標的ｍｉＲＮＡ群のうちの１種を定量する（定量工程（Ｓ１２））。定量工程（Ｓ１２）は、ＲＮＡ、特にｍｉＲＮＡ等の短鎖のＲＮＡを定量するための一般的な方法を用いて行うことができる。一般的な方法として、例えば、標的ｍｉＲＮＡを逆転写してｃＤＮＡを生成し、得られたｃＤＮＡを増幅し、増幅産物を検出及び定量する方法が挙げられる。ＲＮＡが短鎖である場合、増幅を容易にするため、逆転写して得たｃＤＮＡの末端に人工配列を付加するように伸長することも一般的に実施されている。また、逆転写を経ず、試料中のＲＮＡを直接増幅し、増幅産物を検出及び定量する技術としてローリングサークル増幅法が知られている。さらに、試料中の標的ｍｉＲＮＡの濃度が比較的高い場合や高感度測定が可能な装置を使用できる場合は、標的ｍｉＲＮＡを増幅することを経ずに、標的ｍｉＲＮＡ（又は、そのｃＤＮＡ）を直接検出することも一般的な方法の一つである。直接検出が可能な装置として、例えば標的ｍｉＲＮＡと特異的に結合する核酸プローブを備えたマイクロアレイ等が挙げられる。
増幅には、例えば、ＰＣＲ法(ｑＰＣＲ法を含む)、又はＬＡＭＰ法を用いることができる。検出及び定量は、増幅の後に行われてもよいし、増幅中に経時的に行われてもよい。検出及び定量には、例えば、濁度若しくは吸光度に基づく信号を用いる測定法、光学的信号を用いる測定法又は電気化学的信号を用いる測定法、或いはこれらの組み合わせ等を用いることができる。例えば、増幅産物量に応じて得られる上記信号の強度又は変化量、或いは信号が閾値に達するまでの時間（立ち上がり時間）又はＰＣＲ法を用いる場合は立ち上がりサイクル数から標的ｍｉＲＮＡの定量を行うことができる。また、検出及び定量には、例えば次世代シーケンシング（ＮＧＳ）法の結果を用いてもよい。その場合、標的ｍｉＲＮＡにアライメントされたリード数等の検出結果から標的ｍｉＲＮＡの相対的な定量を行うことができる。
標的ｍｉＲＮＡの定量値は、上記信号の検出結果と標的ｍｉＲＮＡの存在量との関係を表す検量線を用いて決定してもよい。検量線は、異なる既知の濃度で標的ｍｉＲＮＡを含む複数の標準試料について信号の検出を行うことにより作成することができる。この検量線と、対象由来の試料について得られた信号の検出結果とを比較することによって、試料中の標的ｍｉＲＮＡの存在量が算出され得る。試料中の標的ｍｉＲＮＡの存在量は、例えば、試料の単位量当たりの標的ｍｉＲＮＡのコピー数として算出してもよい。
定量工程（Ｓ１２）における定量は、例えば、市販のキットを用いて行ってもよい。市販のキットの例は、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ａｄｖａｎｃｅｄ ｍｉＲＮＡ Ａｓｓａｙｓ（サーモフィッシャー製、カタログＮｏ．Ａ２５５７６）、ｍｉＲＣＵＲＹ ＬＮＡ（登録商標） ｍｉＲＮＡ ＰＣＲ Ａｓｓａｙｓ（キアゲン製、カタログＮｏ．３３９３０６、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ｍｉｃｒｏＲＮＡ検出システム（オリジンテクノロジーズ製）等であり、標的ｍｉＲＮＡを特異的に増幅するプライマーとともに用いられ得る。
定量工程（Ｓ１２）で得られた、標的ｍｉＲＮＡの検出に係るデータは、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無の判定のために用いることができる。例えば、第１実施形態の分析方法は、図１の（ｂ）に示す通り、定量工程（Ｓ１２）の後に行われる、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する工程（Ｓ１３）を更に含み得る。
なお、「対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する」とは、対象は５種のがんの全てについて罹患の可能性があるものの、対象が罹患しているがんの種類は５種のがんの中の何れか一つには特定されない、と判定されるか、又は、対象は５種の何れのがんにも罹患していない、と判定されることを意味している。
「対象は５種のがんの全てについて罹患の可能性があるものの、対象が罹患しているがんの種類は５種のがんの中の何れか一つには特定されない」とは、換言すると、対象における罹患可能性が５種のがん全てについて示される、ことを意味する。
さらに換言すれば、「対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する」ことによって、対象が乳がんに罹患している可能性、対象が膵臓がんに罹患している可能性、対象が肺がんに罹患している可能性、対象が胃がんに罹患している可能性、及び、対象が大腸がんに罹患している可能性が一度に提示されるか、又は、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんの何れにも罹患していないという可能性が提示される。
すなわち、本実施形態の方法は、がん健診における一次スクリーニングとして、がんの早期発見・早期治療の重要性に鑑みて、出来るだけ多くのがん種の罹患可能性を見逃さずに提示することを意図するものである。
以下、例えば「対象における乳がん、膵臓がん、肺がん及び胃がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する」や「対象における乳がん、膵臓がん及び肺がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する」など、５種のがんからいくつかのがん種を除いた同様の表現を用いているが、それらの表現は全て、対応するがん種に変更したうえで上記の解釈をする。例えば、「対象における乳がん、膵臓がん及び肺がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する」とは、対象は３種のがんの全てについて罹患の可能性があるものの、対象が罹患しているがんの種類は３種のがんの中の何れか一つには特定されない、と判定されるか、又は、対象は３種の何れのがんにも罹患していない、と判定されることを意味している。
判定工程（Ｓ１３）では、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定の判断を補助する情報を提供し得る。
例えば、判定工程（Ｓ１３）は、対象由来の試料に対する定量工程（Ｓ１２）と並列的に対照由来の試料に対して定量を行うことで得られる、対照由来の試料中の標的ｍｉＲＮＡの定量値を基準として、実施される。すなわち、第１実施形態の方法は、対照由来の試料中のｍｉＲＮＡを定量すること；及び対象におけるｍｉＲＮＡの定量値と、対照におけるｍｉＲＮＡの定量値とを比較することで、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定することを含む。
対照における標的ｍｉＲＮＡの定量値は、例えば対象由来の試料と同じ又は類似する試料（例えば対象由来の試料が血清である場合、対照由来の試料は血清又は血漿とする）に対して、定量工程（Ｓ１２）で用いられるのと同じ方法を用いて予め得られた、標的ｍｉＲＮＡの定量値である。なお、対照に該当する検体を複数用意し、複数検体ごとに定量して得られた値からなる数値範囲を基準として、判定してもよい。
対照は、例えば健常体であってもよい。健常体とは、少なくともがんに罹患していない個体をいう。健常体は、疾患や異常を有さない健康な個体であることが好ましい。
対照として選択される個体は、本方法で分析される対象とは別の個体であってもよいが、同じ種に属する個体、即ち対象がヒトであればヒトであることが好ましい。また、対照の年齢、性別及び身長体重等の身体的条件又は人数は特に限定されるものではないが、身体的条件は、本分析方法で検査を受ける対象のものと同じ又は類似であることが好ましい。
或いは、判定工程（Ｓ１３）は、予め設定された閾値等を基準として実施してもよい。閾値は、例えば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していることが既知の試料（以下、「標準試料」と称する）における定量値と、健常体における定量値とを切り分けることができる、標的ｍｉＲＮＡの存在度である。標準試料は、例えば対象由来の別部位の試料、対象と類似する（例えば同種の）個体由来の試料、又は乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の株化細胞を含む試料等である。標準試料における定量値は、対象の定量工程（Ｓ１２）と同様の方法を適用して得ることが好ましい。標準試料における定量値と健常体における定量値とを切り分ける値は、統計的な基準をもって決定してもよいし、標準試料における定量値の最大値又は最小値を閾値としてもよいし、或いは、対照における定量値の最大値又は最小値を閾値としてもよい。さらに、閾値は、用いられる定量方法、試料の種類及び測定条件等に従って決定されてもよい。
或いは、閾値は対象ごとに決定されてもよい。例えば、対象の健常な状態での標的ｍｉＲＮＡ定量値をモニターしていれば（例えば定期的な健康診断等）、それを閾値として用いることにより、閾値よりも定量値が高い又は低いときに乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんに罹患している可能性ありとしてアラームを出すことができる。閾値は個人ごとに異なり得る。例えば、通常標的ｍｉＲＮＡの定量値が約１０３コピーで推移していた対象Ａにおいて、あるとき１０４コピーとなった場合乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのいずれかの可能性ありとすることができる。一方で、約１０２コピーで推移していた対象Ｂにおいては、あるとき１０３コピーとなった場合に乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんの可能性ありとすることができる。
ここで、判定の基準となる、対照における定量値又は閾値は、文献等の過去の知見から決定してもよい。罹患しているとの判定は、罹患している可能性が高いことも含む。反対に、罹患していないとの判定は、罹患している可能性が低いことも含む。
乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患した対象において、標的ｍｉＲＮＡ群の中には、対照と比較して発現量が多いもの（多発現標的ｍｉＲＮＡ）と少ないもの（少発現標的ｍｉＲＮＡ）とが含まれる。少発現標的ｍｉＲＮＡは、対照と比較して定量値が低い場合に乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定され得る。一方で、多発現標的ｍｉＲＮＡは、対照と比較して定量値が高い場合に乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定され得る。
なお、本明細書において、「対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患している」とは、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんに罹患していると判定されるか、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん又は大腸がんに罹患していると判定されるか、乳がん、膵臓がん、肺がん又は胃がんに罹患していると判定されるか、乳がん、膵臓がん、胃がん又は大腸がんに罹患していると判定されるか、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんに罹患していると判定されるか、乳がん、肺がん、胃がん又は大腸がんに罹患していると判定されるか、乳がん、膵臓がん又は肺がんに罹患していると判定されるか、乳がん、膵臓がん又は胃がんに罹患していると判定されるか、乳がん、膵臓がん又は大腸がん罹患していると判定されるか、膵臓がん、肺がん又は胃がん罹患していると判定されるか、膵臓がん、肺がん又は大腸がん罹患していると判定されるか、乳がん、肺がん又は胃がん罹患していると判定されるか、乳がん、肺がん又は大腸がん罹患していると判定されるか、乳がん、肺がん又は胃がん罹患していると判定されるか、乳がん、胃がん又は大腸がん罹患していると判定されるか、肺がん、胃がん又は大腸がん罹患していると判定されるか、乳がん又は膵臓がんに罹患していると判定されるか、乳がん又は大腸がんに罹患していると判定されるか、乳がん又は肺がん罹患していると判定されるか、乳がん又は胃がん罹患していると判定されるか、膵臓がん又は肺がん罹患していると判定されるか、膵臓がん又は胃がん罹患していると判定されるか、膵臓がん又は大腸がん罹患していると判定されるか、肺がん又は胃がん罹患していると判定されるか、肺がん又は大腸がん罹患していると判定されるか、胃がん又は大腸がん罹患していると判定されるか、乳がんに罹患していると判定されるか、膵臓がんに罹患していると判定されるか、肺がんに罹患していると判定されるか、胃がんに罹患していると判定されるか、大腸がんに罹患していると判定されるかを含む。
詳述すると、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ（配列番号９），ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ（配列番号１１），ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ（配列番号１），ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ（配列番号２），ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ（配列番号４），ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ（配列番号８），ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ（配列番号１０），ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ（配列番号１２），ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ（配列番号１３），ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ（配列番号１４），ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ（配列番号１６），ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ（配列番号１７），ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ（配列番号１８），ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ（配列番号２０），ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ（配列番号２２）及びｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ（配列番号１５）は、対照を健常体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ（配列番号３）は、対照を健常体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に対象が乳がん、膵臓がん、肺がん又は大腸がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ（配列番号５）及びｈｓａ－ｍｉＲ－９４１（配列番号７）は、対照を健常体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に対象が乳がん、膵臓がん、肺がん又は胃がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ（配列番号６）は、対照を健常体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に対象が乳がん、膵臓がん、胃がん又は大腸がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ（配列番号１９）及びｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ（配列番号２１）は対照を健常体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に対象が乳がん、肺がん又は大腸がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐ（配列番号２３）は、対照を健常体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に、対象が膵臓がん又は胃がんに罹患していると判定することができる。
なお、対照における各ｍｉＲＮＡの定量値と対象における各ｍｉＲＮＡの定量値との差異は、統計的に有意であることが好ましい。統計的に有意であるかどうかは、各種がんに罹患していることが既知である試料を複数用意し、同試料における各ｍｉＲＮＡの定量値がとりうる数値範囲を確認し、その確率分布を前もって算出しておくか、又は、既知の文献等の情報から算出しておくことで判定することができる。
更なる実施形態によれば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定することは、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の予後又は再発を判定することも含む。例えば、分析方法は、図１の（ｃ）に示すように、定量工程（Ｓ１２）の後、定量の結果から対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の予後又は再発の有無を判定する予後再発判定工程（Ｓ１４）を含む。予後再発判定工程（Ｓ１４）においては、例えば、定量値が高い又は低い場合には、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の予後が不良である、又は乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種が再発している、或いはその可能性が高いと判定することが可能である。予後、再発の判定にも上記対照における定量値、閾値を用いることができる。特に対象ごとに決定された閾値を用いることが好ましい場合もあり得る。
また、判定工程（Ｓ１３）及び／又は予後再発判定工程（Ｓ１４）の後、判定結果に従って対象に適用するための治療法の種類又は薬剤の種類を選択、及びその補助を行うことも可能である。例えば、分析方法は、図１の（ｄ）に示すように、判定工程（Ｓ１３）及び／又は予後再発判定工程（Ｓ１４）の後、判定結果から対象に適用するための治療法の種類又は薬剤の種類を選択する選択工程（Ｓ１５）を含む。ここで治療法又は薬剤は、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんの治療のためのものである。治療法の種類又は薬剤の種類は、治療法又は薬剤の使用量、タイミング若しくは期間を含む。
以上に説明した第１実施形態の分析方法によれば、対象由来の試料中の、２３種のｍｉＲＮＡのうち１種の標的ｍｉＲＮＡを定量し、対照由来の試料中の同ｍｉＲＮＡの定量値と比較することにより、簡便に対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんの罹患の有無を判定することが可能である。言い換えれば、本方法によれば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患した対象と、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種のいずれにも罹患していない対象とを簡単に識別することができる。
本実施形態の方法は、健康診断等で容易に採取できる血清または血漿を用いることが可能であるため、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を早期に発見することができる。血清または血漿等を用いることで、細胞診等と比較して対象の肉体的及び経済的負担を大きく軽減することができるとともに、手順が容易であるため検査者にとっても負担が少ない。また、血清又は血漿は、そこに含まれるｍｉＲＮＡ濃度が安定しているため、より正確な検査を行うことが可能である。
更なる実施形態によれば、対象由来の試料中の標的ｍｉＲＮＡを定量すること（定量工程（Ｓ１２））を含む、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無の判定を補助するための分析方法も提供される。「判定を補助する」とは、例えば、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患している可能性に関する情報を取得することを含む。「情報」とは、例えば、試料の分析結果に関する情報であり、例えば定量値であり得る。本方法によれば、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無判定、予後判定、再発の有無判定、又は対象に適用される治療法若しくは薬剤の選択等を行うためのより精度の高い情報を取得することができる。
更なる実施形態によれば、対照は、例えば乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうちの何れか１種に罹患していることが検診等により確認された個体であってもよい。すなわち、対照は、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうちの何れか１種に罹患しているか否かが既知の個体である。すなわち、対照は、そのような判定工程（Ｓ１３）においては、対照が罹患するがん種を、対象が罹患しているか否かが判定される。具体的には、対照由来の試料中の特定のがんに罹患していることを示すバイオマーカーの定量値を基準として、対象由来の試料中の同バイオマーカーを定量し、基準と比較することによって判断する。
詳述すると、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ（配列番号９），ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ（配列番号１）、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ（配列番号４）、ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ（配列番号５）、ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１（配列番号７），ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ（配列番号８），ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ（配列番号１３）、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ（配列番号１４）及びｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ（配列番号２０）のそれぞれのｍｉＲＮＡは、対照を大腸がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん又は胃がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ（配列番号２）及びｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ（配列番号１７）のそれぞれのｍｉＲＮＡは、対照を大腸がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に、対象が乳がん、膵臓がん又は肺がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ（配列番号６）は、対照を大腸がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が小さい場合に、対象が肺がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ（配列番号１０）は、対照を大腸がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に、対象が乳がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ（配列番号１１）及びｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ（配列番号１８）のそれぞれのｍｉＲＮＡは、対照を大腸がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に、対象が乳がん、膵臓がん又は胃がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ（配列番号１２）は、対照を大腸がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に、対象が乳がん又は膵臓がんに罹患していると判定することができる。
なお、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ（配列番号６）、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ（配列番号４）、ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ（配列番号５）、ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ（配列番号８）及びｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ（配列番号１２）のそれぞれのｍｉＲＮＡは、対照を乳がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が小さい場合に、対象が肺がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ（配列番号１３）、ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ（配列番号２）、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ（配列番号３）及びｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ（配列番号２１）のそれぞれのｍｉＲＮＡは、対照を乳がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が小さい場合に、対象が胃がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ（配列番号２２）は、対照を乳がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が小さい場合に、対象が膵臓がん又は胃がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ（配列番号６）は、対照を肺がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が大きい場合に、対象が膵臓がん又は胃がんに罹患していると判定することができる。ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ（配列番号２１）は、対照を肺がん罹患体とし、対象の定量値よりも対照の定量値の方が小さい場合に、対象が胃がんに罹患していると判定することができる。
更なる実施形態によれば、本分析方法は、対象由来でない試料中における乳がん細胞、膵臓がん細胞、肺がん細胞、胃がん細胞又は大腸がん細胞の検出等にも使用することができる。例えば、乳がん細胞、膵臓がん細胞、肺がん細胞、胃がん細胞又は大腸がん細胞を人工的に製造する場合に、製造された細胞含有溶液中に同細胞が存在するか否かを確かめる際等にも使用することができる。
（マーカー）
第１実施形態によれば、１種の標的ｍｉＲＮＡを含む、対象の乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのマーカーが提供される。
第１実施形態によれば、１種の標的ｍｉＲＮＡを含む、対象の乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのマーカーが提供される。
ここで、「マーカー」は、試料中のその有無又は濃度を検出することで、試料及び／又はその由来となる対象が特定の状態であるか否かを判定することのできる物質をいう。
第１実施形態の乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのマーカーは、例えば、対象由来の試料中のその存在量（定量値）を測定することで、上記したように対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無判定、予後又は再発の有無の判定、又は対象に適用される治療法若しくは薬剤の選択等を行うことができる。
（キット）
第１実施形態によれば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのキットが提供される。
第１実施形態によれば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのキットが提供される。
キットは、ＲＮＡ、特にｍｉＲＮＡ等の短鎖のＲＮＡを定量するための一般的な方法に用いられ得る試薬類、及び、標的ｍｉＲＮＡと特異的に結合可能な（すなわち、標的ｍｉＲＮＡとハイブリダイズする）核酸を含む。標的ｍｉＲＮＡの検出にｑＰＣＲ法を用いる場合、標的ｍｉＲＮＡと特異的に結合可能な核酸は、標的ｍｉＲＮＡを逆転写するための逆転写用（ＲＴ）プライマーであってもよいし、標的ｍｉＲＮＡを伸長するための伸長用（ＥＬ）プライマーであってもよいし、標的ｍｉＲＮＡを増幅するための増幅用プライマーセットであってもよい。
ＲＴプライマーは、標的ｍｉＲＮＡのｃＤＮＡを得るためのプライマーである。ＲＴプライマーは、標的ｍｉＲＮＡの少なくとも１部の配列に相補的な配列を含む。ＲＴプライマーは、標的ｍｉＲＮＡのｃＤＮＡを増幅しやすくするためにｃＤＮＡに付加する人工配列を更に含んでもよい。
ＥＬプライマーは、標的ｍｉＲＮＡのｃＤＮＡを増幅しやすくするためにｃＤＮＡに人工配列を付加するためのプライマーである。ＥＬプライマーは、標的ｍｉＲＮＡのｃＤＮＡの少なくとも１部の配列に相補的な配列と、各ｃＤＮＡの伸長用に付加する配列とを含み得る。
増幅用プライマーセットは、例えばＰＣＲ法用であれば、少なくともフォワードプライマーとリバースプライマーとを含む。または、増幅用プライマーセットはＬＡＭＰ法用であってもよく、一般的なＬＡＭＰ法で使用される、標的ｍｉＲＮＡの塩基配列に対応する配列のプライマー類を含んでもよい。または、増幅用プライマーセットは例えばＮＧＳ法用であってもよく、人工的なアダプター配列を含むフォワードプライマーとその相補的配列を含むリバースプライマーを含んでもよい。ＮＧＳ法用の増幅用プライマーセットは、複数の検体を同時に解析するために、異なるバーコード配列を含むフォワードプライマーとリバースプライマーの組み合わせを複数種類含んでもよい。増幅用プライマーセットがローリングサイクル増幅法に用いられる場合、キットは、増幅用プライマーがハイブリダイズして増幅の鋳型となる環状１本鎖ＤＮＡをさらに含む。
増幅用プライマーセットに含まれる各プライマーは、標的ｍｉＲＮＡのｃＤＮＡ又はその相補配列と結合するように設計されてもよいし、ＲＴプライマー及び／又はＥＬプライマーによって付加された人工配列と結合するように設計されてもよい。
さらに、試料中の標的ｍｉＲＮＡがマイクロアレイによって直接検出される場合、標的ｍｉＲＮＡと特異的に結合可能な核酸は、マイクロアレイが備える核酸プローブである。核酸プローブは、標的ｍｉＲＮＡ、そのｃＤＮＡ、或いはその増幅産物の少なくとも１部の配列又はその相補配列を有し得る。
キットに含まれる上記核酸は、個別に又は何れかが組み合わされて適切な担体とともに容器に収容されて提供されてもよい。適切な担体は、例えば、水、生理的溶液又は緩衝液等である。容器は、例えば、チューブ又はマイクロタイタープレート等である。或いは、これら核酸はマイクロ流体チップ等の固相に固定されて提供されてもよい。
キットは、上記核酸の他に、逆転写、伸長又は増幅に用いられる試薬、例えば酵素、基質及び／又は検出に用いられる光学的信号又は電気的化学信号を生じる標識物質等を含んでもよい。標識物質は、例えば、ＳＹＢＲ ＧｒｅｅｎやＥｖａＧｒｅｅｎ（登録商標）、ＳＹＴＯ（登録商標） ８２などの蛍光色素、電流検出する場合はルテニウムヘキサアミンなどの金属錯体等の指示薬である。
キットは、例えば、上記のように対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無判定、予後判定、再発の有無判定、治療法の種類又は薬剤の種類の選択等に使用することができる。
更なる実施形態によれば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのキットは、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を診断するための組成物又は診断薬として提供される。また、実施形態によれば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の診断用組成物、又は乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の診断薬の製造における上記核酸の少なくとも１種の使用も提供される。
・第２実施形態
（分析方法）
第２実施形態の方法は、図２の（ａ）に示すように、例えば
対象由来の試料を用意すること（用意工程（Ｓ２１））と、
対象由来の試料中のｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐの標的ｍｉＲＮＡのうち、複数種類の標的ｍｉＲＮＡを定量すること（定量工程（Ｓ２２））とを含む。
（分析方法）
第２実施形態の方法は、図２の（ａ）に示すように、例えば
対象由来の試料を用意すること（用意工程（Ｓ２１））と、
対象由来の試料中のｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐの標的ｍｉＲＮＡのうち、複数種類の標的ｍｉＲＮＡを定量すること（定量工程（Ｓ２２））とを含む。
複数種類（すなわち、少なくとも２種類以上）の標的ｍｉＲＮＡを定量する場合、標的ｍｉＲＮＡの種類ごとに別個の反応系を用意し、それぞれの反応系ごとに逆転写、伸長、増幅及び／又は検出をすることで定量を行ってもよいし、複数の核酸を同時に検出可能な流路チップ等を用いて同一の反応系で複数種類の標的ｍｉＲＮＡを検出及び定量してもよい。また、例えば、ＮＧＳ法を用いることで、複数種類の標的ｍｉＲＮＡを同一反応系で超並列的に増幅、検出及び定量を行うことも可能である。
定量工程（Ｓ２２）で得られた、複数種類の標的ｍｉＲＮＡの定量値を含むデータは、対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無の判定又はその補助のために用いることができる。例えば、第２実施形態の分析方法は、図２の（ｂ）に示す通り、定量工程（Ｓ２２）の後に行われ得る判定工程（Ｓ２３）を更に含み得る。
判定工程（Ｓ２３）では、例えば各標的ｍｉＲＮＡに第１実施形態と同様の基準が設定され、基準と定量工程（Ｓ２２）で得られた定量値と比較することにより判定される。対象の各標的ｍｉＲＮＡの基準はそれぞれ、対照の対応する標的ｍｉＲＮＡの定量値又は閾値等であることが好ましく、各閾値は、標的ｍｉＲＮＡの種類ごとにそれぞれ決定されることが好ましい。すなわち、第２実施形態の方法は、対照由来の試料中の複数種類のｍｉＲＮＡを定量すること；及び対象における複数種類のｍｉＲＮＡの定量値と、対照における複数種類のｍｉＲＮＡの定量値とを比較することで、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定することを含む。対照は、健常体であるか、又は、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種であることが既知の検体である。
定量工程（Ｓ２２）により、複数種類の標的ｍｉＲＮＡの定量値のデータを得た場合、定量値のデータを得た全ての種類の標的ｍｉＲＮＡが基準と比較して高い又は低い場合に、対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定してもよい。それに限らず、複数種類のうちの１種の標的ｍｉＲＮＡの定量値が閾値等の基準と比較して高い又は低い場合に対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定してもよいし、そのうちの少なくとも２種類以上の標的ｍｉＲＮＡの定量値が基準と比較して高い又は低い場合に対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定してもよい。また、２種類以上の標的ｍｉＲＮＡの定量値を組み合わせて四則演算、指数対数演算などを行った演算値が基準と比較して高い又は低い場合に対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定してもよい。
また、基準と定量値との差異又は関連度を数値化（すなわち、モデル化）したうえで、判定してもよい。モデル化を含む判定方法は、例えば下記の方法である：対象以外の被験体由来の学習用試料を用意することと、学習用試料中の前記ｍｉＲＮＡ群のそれぞれを定量することと、被験体の情報、及び学習用試料におけるｍｉＲＮＡ群のそれぞれの定量値をモデル学習データとして、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を決定する判定アルゴリズムを構築することと、判定アルゴリズムを用いて、対象のｍｉＲＮＡの定量値及び被験体の情報から、対象の乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種のがんの罹患の有無を判定する。
例えば、複数種類のｍｉＲＮＡごとに、演算値の重み付けを差別化し、各がん種との関連性が高いｍｉＲＮＡについては重み付け係数を高く、関連性が低いｍｉＲＮＡについては重み付け係数を低く設定したモデルを作成することで関連度を数値化してもよい。このとき、判定の基準としては一定程度の関連度があれば対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定してもよい。
複数種類のｍｉＲＮＡと各がん種との関連性の高さは、二項ロジスティック回帰モデル又は多項ロジスティック回帰モデルによって決定してもよい。二項ロジスティック回帰モデル又は多項ロジスティック回帰モデルにおける変数選択法として、スパース推定(Ｌａｓｓｏ，ＳＣＡＤ，ＭＣＰなど)、ステップワイズ法、及び総当たり法(Ｂｅｓｔ Ｓｕｂｓｅｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎなど)が挙げられる。その他、二項ロジスティック回帰モデル又は多項ロジスティック回帰モデルに限らず、例えばＡＮＯＶＡ分析やクラスカルウォリス分析などの統計的手法による変数選択法、寄与度及びｐ値による変数選択法、又は機械学習手法を用いて複数種類のｍｉＲＮＡと各がん種との関連性の高さを決定してもよい。
予め用意した訓練データを用いた機械学習を行うことで、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患を判定可能な学習済みモデルを、判定アルゴリズムの一種として作成することができる。訓練データには、被験体の情報が含まれていてもよい。被験体の情報とは、各種がんの罹患の有無に関する情報であってもよく、その他、既往症や性別、ＢＭＩ、喫煙率などのパーソナルデータを含んでもよい。この学習済みモデルを用いて、対象由来の試料で確認された複数の標的ｍｉＲＮＡの定量値のデータから、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患しているか否かを判定してもよい。
学習済みモデルの生成のためには、乳がん罹患体、膵臓がん罹患体、肺がん罹患体、胃がん罹患体及び大腸がん罹患体のサンプルデータと健常体のサンプルデータを複数用意することが好ましい。機械学習が例えばニューラルネットワークである場合、ニューラルネットワークによる学習は、訓練データを入力すると罹患判定結果が出力として得られるように、ニューラルネットワークの構成を設定する。また、機械学習のモデルとしてこの方法に限らず、他にランダムフォレスト、ブースティング、ニューラルネットワークなどを用いてもよい。
複数種類の標的ｍｉＲＮＡは、表１に記載の各標的ｍｉＲＮＡ（配列番号１～２３）の組み合わせからなる。ただし、この組み合わせは、予め特定の条件（例えば対象、試料、検出及び定量方法の種類など）において検出及び定量の感度や特異度を調査することで、マーカーとして好ましいと確認された組み合わせであることが好ましい。標的ｍｉＲＮＡの組み合わせは、多発現標的ｍｉＲＮＡと少発現標的ｍｉＲＮＡとの組み合わせであってもよい。
標的ｍｉＲＮＡの組み合わせとして、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ（配列番号４）、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ（配列番号６）、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ（配列番号９）、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ（配列番号１１）、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ（配列番号１３）及びｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐ（配列番号１７６）からなる標的ｍｉＲＮＡの組み合わせ（組み合わせ１）が挙げられる。例えば、このような標的ｍｉＲＮＡの組み合わせを用いた判定工程（Ｓ２３）においては、対象の該組み合わせの定量値を、予め作成していた二項ロジスティック回帰モデル等の判定アルゴリズムに同計算値を適用することで、対象の大腸がんの罹患の有無を判定することができる。
標的ｍｉＲＮＡの組み合わせは、組み合わせ１に限らず、他の好ましい組み合わせが特定されている。例えば、対象が大腸がんである場合、後述の表９に記載の組み合わせ２及び組み合わせ３も、好ましい組み合わせであることが確認されている。また、後述の表１０に記載の組み合わせ４、組み合わせ５及び組み合わせ６の定量値を、判定アルゴリズムに適用することで、対象の膵臓がんの罹患の有無を判定することができる。
更なる実施形態の方法によれば、定量工程（Ｓ２２）の後に、第１実施形態と同様の予後再発判定工程（Ｓ２４）を含む。また、判定工程（Ｓ２３）及び／又は予後再発判定工程（Ｓ２４）の後、判定結果に従って対象に適用するための治療法の種類又は薬剤の種類選択、及び／又はその補助を行うことも可能である。さらに、方法は、判定工程（Ｓ２３）及び／又は予後再発判定工程（Ｓ２４）の後に、第１実施形態と同様の選択工程（Ｓ２５）を含む。ここで治療法又は薬剤は、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の治療のためのものである。選択工程（Ｓ２５）では、例えば、治療法の種類、薬剤の種類、薬剤の使用量、或いは、治療法又は薬剤投与のタイミング又は期間等が選択される。
（マーカー）
第２実施形態によれば、複数種類の標的ｍｉＲＮＡを含む、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の検出用マーカーが提供される。当該マーカーは、例えば、対象由来の試料中のその存在量を測定し定量値を得ることで、上記したように対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無判定、予後又は再発の有無の判定、又は対象に適用される治療法若しくは薬剤の選択等を行うことができる。
第２実施形態によれば、複数種類の標的ｍｉＲＮＡを含む、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の検出用マーカーが提供される。当該マーカーは、例えば、対象由来の試料中のその存在量を測定し定量値を得ることで、上記したように対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無判定、予後又は再発の有無の判定、又は対象に適用される治療法若しくは薬剤の選択等を行うことができる。
（キット）
第２実施形態によれば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのキットが提供される。当該キットは、複数種類のｍｉＲＮＡを一般的な方法で検出及び定量するためのキットである。第１実施形態のキットと同様、ＲＮＡ、特にｍｉＲＮＡ等の短鎖のＲＮＡを定量するための一般的な方法に用いられ得る試薬類、及び、各標的ｍｉＲＮＡと特異的に結合可能な複数種類の核酸を含む。
第２実施形態によれば、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのキットが提供される。当該キットは、複数種類のｍｉＲＮＡを一般的な方法で検出及び定量するためのキットである。第１実施形態のキットと同様、ＲＮＡ、特にｍｉＲＮＡ等の短鎖のＲＮＡを定量するための一般的な方法に用いられ得る試薬類、及び、各標的ｍｉＲＮＡと特異的に結合可能な複数種類の核酸を含む。
第２実施形態のキットによれば、複数種類のｍｉＲＮＡを検出及び定量することにより、その組み合わせによってはより感度よく乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんの罹患の有無を判定することが可能であり得る。
［例］
以下に、本実施形態のマーカーを得るために行った実験、及び、本実施形態のマーカーを用いた判別アルゴリズムの検証について記載する。
以下に、本実施形態のマーカーを得るために行った実験、及び、本実施形態のマーカーを用いた判別アルゴリズムの検証について記載する。
例１．各種がんの罹患体と健常体とを識別するｍｉＲＮＡマーカーの包括的な探索と選定
乳がん罹患体、膵臓がん罹患体及び肺がん罹患体と、健常体とを識別することができるｍｉＲＮＡマーカーを、以下に示すように探索した。
乳がん罹患体、膵臓がん罹患体及び肺がん罹患体と、健常体とを識別することができるｍｉＲＮＡマーカーを、以下に示すように探索した。
・検体の用意
検体として、乳がん患者血清、膵臓がん患者血清、肺がん患者血清、及び健常者血清を各２４検体、計９６検体分用意した。
検体として、乳がん患者血清、膵臓がん患者血清、肺がん患者血清、及び健常者血清を各２４検体、計９６検体分用意した。
・検体の処理とｍｉＲＮＡの定量
すべての血清３００μLから、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ（登録商標） ｍｉＲＮＡ Ｐｌａｓｍａ（タカラバイオ株式会社製）を用いてｍｉＲＮＡを抽出した。
すべての血清３００μLから、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ（登録商標） ｍｉＲＮＡ Ｐｌａｓｍａ（タカラバイオ株式会社製）を用いてｍｉＲＮＡを抽出した。
ｃＤＮＡの合成には、ＴａｑＭａｎ ｍｉＲＮＡ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ．Ａ２８００７)を用いた。ＴａｑＭａｎ ｍｉＲＮＡ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔは、成熟ＲＮＡの３’末端へのポリ（Ａ）鎖の付加、及び５’末端へのアダプター配列のライゲーションを行うことで、ターゲット特異的ではなく、サンプル内に存在する全ての成熟ＲＮＡを全般的に逆転写させることを特徴とするキットである。従って、各検体中の、ｍｉＲＮＡ含む全成熟ＲＮＡに対応するｃＤＮＡを得た。
得られたｃＤＮＡのうちｍｉＲＮＡには、ＴａｑＭａｎ Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）とＴａｑＭａｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ ｍｉＲＮＡ Ａｓｓａｙｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）を用いたＲＴ－ｑＰＣＲを、同梱のプロトコルの通りに実施することで定量した。５’ヌクレアーゼアッセイの１つであるＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法は、ターゲットを増幅するためのプライマーと、その分子内で蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）が生じており、かつ、ターゲットに特異的に結合するＴａｑＭａｎプローブとを併用することにより、検出精度が優れていることを特徴とする増幅方法である。このＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法を適用することで得られるｃＤＮＡの定量値は、例えば、各プローブ及びプライマーに対応するｃＤＮＡが検出基準に達するまでのサイクル数（Ｃｔ値）である。
なお、定量値については、個体毎にｍｉＲＮＡ全体の活動レベルが異なる場合があること、及び、検体の処理において抽出や増幅反応の収率が細胞や検体の種類ごとに異なる場合があることを考慮し、健常体及び各種がん罹患体の血清試料に共通して存在するｍｉＲＮＡ（標準ｍｉＲＮＡ）の定量値をもって補正していた。具体的には、健常体及び各種がん罹患体において発現量が多いことが知られているｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐ（配列番号１７６）の定量値を用いて補正を行った。各ｍｉＲＮＡのＣｔ値からｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐのＣｔ値を引算することで正規化した差分（△Ｃｔ値）を発現量の指標とするように補正し、健常者・乳がん・肺がん・膵臓がんの群間でその発現量比を求めた。
・探索の結果
ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法を用いたＲＴ－ｑＰＣＲの測定結果を表２－１～表２－６に示した。表２－１～表２－６に示すように、計１７５種類のｍｉＲＮＡが観測された。なお、表２－１～表２－６中において「－」は、健常体、乳がん罹患体、膵がん罹患体及び肺がん罹患体において、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法による増幅が十分にみられず、検出の基準値に達しなかったデータを表している。
ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法を用いたＲＴ－ｑＰＣＲの測定結果を表２－１～表２－６に示した。表２－１～表２－６に示すように、計１７５種類のｍｉＲＮＡが観測された。なお、表２－１～表２－６中において「－」は、健常体、乳がん罹患体、膵がん罹患体及び肺がん罹患体において、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法による増幅が十分にみられず、検出の基準値に達しなかったデータを表している。
以上のように測定した、計９６検体に含有されるｍｉＲＮＡの各存在度の情報をもとに、同ｍｉＲＮＡの中でも各がん種に特徴的に存在するｍｉＲＮＡ、すなわち、各がん種のマーカーを選定した。
各がん種にとって特徴的であるか否かは、ｍｉＲＮＡが、各がん種で確認された値と健常体で確認された値との比率が２倍以上異なるかどうかを基準として決定した。換言すれば、あるｍｉＲＮＡが、いずれかのがん種の罹患体で確認された値が健常者で確認された値の２倍以上であるか又は２分の１以下である場合に、同ｍｉＲＮＡは同がん種の罹患体にとって特徴的であり、同がん種の罹患の有無を示すマーカーであると判断した。
・マーカー選定の結果
マーカーとして選定されたｍｉＲＮＡを、表３に示す。表３中の数値は、各検体中の各ｍｉＲＮＡのｃＤＮＡに係るＣｔ値を検体種ごとに平均し、さらに前述したように内部標準をもって正規化した値である。
マーカーとして選定されたｍｉＲＮＡを、表３に示す。表３中の数値は、各検体中の各ｍｉＲＮＡのｃＤＮＡに係るＣｔ値を検体種ごとに平均し、さらに前述したように内部標準をもって正規化した値である。
表３に示すように、各がん種のがんマーカーを計２３種類特定することができた。例えば、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ（配列番号１４）は、対象中のその存在度が健常体における存在度の２分の１以下である場合に、対象が乳がん、膵臓がん、または肺がんに罹患していることを示す少発現標的ｍｉＲＮＡのマーカーであることが分かった。さらにｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐの発現量の大きさは、肺がん、膵臓がん、乳がん罹患体の順番に大きい。よって、比較対象を既知の膵臓がん罹患体に係る発現量との比較とすることで、乳がん、膵臓がん及び肺がんのうち、どのがん種に罹患しているかを識別することができる。
例２．マーカーの性能検証
例１で得られたｍｉＲＮＡマーカーを、以下に示すように検体数を増やし、かつ、その他がん種と識別可能かどうかを検証した。
例１で得られたｍｉＲＮＡマーカーを、以下に示すように検体数を増やし、かつ、その他がん種と識別可能かどうかを検証した。
・検体の用意
検体として、乳がん患者血清、膵臓がん患者血清、肺がん患者血清、胃がん患者血清、大腸がん患者血清及び健常者血清を計５８１検体分用意した。それぞれの検体数は、表４に示したように、乳がん患者血清９９検体、膵臓がん患者血清９８検体、肺がん患者血清９８検体、胃がん患者血清９９検体、大腸がん患者血清１００検体、及び、健常者血清８７検体であった。
検体として、乳がん患者血清、膵臓がん患者血清、肺がん患者血清、胃がん患者血清、大腸がん患者血清及び健常者血清を計５８１検体分用意した。それぞれの検体数は、表４に示したように、乳がん患者血清９９検体、膵臓がん患者血清９８検体、肺がん患者血清９８検体、胃がん患者血清９９検体、大腸がん患者血清１００検体、及び、健常者血清８７検体であった。
・検体の処理とｍｉＲＮＡの定量
上記の検体は、例１と同様の方法でｍｉＲＮＡを抽出し、各種ｍｉＲＮＡを定量した。各定量値については、標準ｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量値で補正し、健常者、乳がん、肺がん、膵臓がん、胃がん、及び大腸がんの群間でその発現量比を求めた。
・定量結果と統計的検証
例２で特定された、２３種のｍｉＲＮＡマーカーの定量値を図３Ａ～図３Ｗに示した。図３Ａ～図３Ｗは箱ひげ図であり、横軸は各検体が罹患している各がん種を示し、縦軸は各検体において測定された相対比を示している。
上記の検体は、例１と同様の方法でｍｉＲＮＡを抽出し、各種ｍｉＲＮＡを定量した。各定量値については、標準ｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量値で補正し、健常者、乳がん、肺がん、膵臓がん、胃がん、及び大腸がんの群間でその発現量比を求めた。
・定量結果と統計的検証
例２で特定された、２３種のｍｉＲＮＡマーカーの定量値を図３Ａ～図３Ｗに示した。図３Ａ～図３Ｗは箱ひげ図であり、横軸は各検体が罹患している各がん種を示し、縦軸は各検体において測定された相対比を示している。
図３Ａ～図３Ｗに示す定量値の分布を示す各ｍｉＲＮＡマーカーが、健常体、又はその他がん種と識別可能かどうかを検証した。具体的には、例えば対照を健常体とし、対象を乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんの罹患体として、両者の間で各ｍｉＲＮＡの定量値のとりうる数値範囲が有意に異なるかどうかを検証した。同様に、対照を大腸がん罹患体、対象を乳がん、膵臓がん、肺がん又は胃がんの罹患体とする場合、対照を乳がん罹患体、対象を膵臓がん、肺がん又は胃がんとする場合、並びに、対照を肺がん罹患体、対象を膵臓がん又は胃がんとする場合についても、各マーカーが統計的に有意に識別できるかどうかを検証した。
統計解析の結果を表５～８に示す。表５及び表６において、「＊」は有意水準（ｐ値）を０．０５よりも小さい値に設定した場合に有意であることを示し、「＊＊」は有意水準（ｐ値）を０．０１よりも小さい値に設定した場合に有意であることを示し、「＊＊＊」は有意水準（ｐ値）を０．００１よりも小さい値に設定した場合に有意であることを示し、「ｎ.ｓ」は有意な差異ではないことを示している。表７及び表８において、「減少」とは対照よりも対象の方が定量値が小さいことを示し、「増加」とは対照よりも対象の方が定量値が大きいことを示し、「ｎ.ｓ」は有意な差異ではないことを示している。なお、各ｍｉＲＮＡは略称で示した（例えば、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐは、「１９０ａ－５ｐ」と記載した）。
例えば、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ相対比は健常体に比べ、すべてのがんで有意に低く、がん検体間では大腸がんに比べ乳、膵臓、肺及び胃がんで有意に低下していた（健常体vs乳、膵臓、肺、胃及び大腸がん、ｐ＜０．００１；大腸がんｖｓ乳、膵臓、肺及び胃がん、ｐ＜０．００１）。ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ相対比は健常体に対して、すべてのがんで相対比は有意に低く、がん検体間では大腸がんに比べ乳、膵臓、肺及び胃がんで有意に低下していた（健常体vs乳、膵臓、肺、胃及び大腸がん、ｐ＜０．００１；大腸がんｖｓ乳、膵臓、肺及び胃がん、ｐ＜０．００１）。ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ相対比は健常体に対して、すべてのがん種において有意に低く、がん検体間では大腸がんに比べ乳、膵臓、肺及び胃がんで有意に低下していた（健常体ｖｓ乳、膵臓、肺、胃及び大腸がん、ｐ＜０．００１；大腸がんｖｓ乳、膵臓、肺及び胃がん、ｐ＜０．００１）。ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ相対比は健常体に比べ、すべてのがんで有意に低下していたが、がん検体間において有意な差は観察されなかった（健常体ｖｓ乳及び肺がん、ｐ＜０．００１；健常体ｖｓ膵臓がん、ｐ＜０．０１；健常体ｖｓ胃及び大腸がん、ｐ＜０．０５）。ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ相対比は健常体に対して、すべてのがんで相対比は有意に低く、がん検体間では大腸がんに比べ乳がん、膵臓がん、肺がん及び胃がんで有意に低下し、乳がんが肺がんに比べて有意に増加していた（健常体ｖｓ乳、膵臓、肺、胃及び大腸がん、ｐ＜０．００１；大腸がんｖｓ乳、膵臓、肺、及び胃がん、ｐ＜０．００１；乳がんｖｓ肺がん、ｐ＜０．０５）。ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ相対比は、健常体に比べ乳、膵臓、肺及び胃がんで有意に低く、がん検体間では大腸がんに比べ乳、膵臓、肺及び胃がんで有意に低下し、乳がんに比べ肺がんで有意に増加していた（健常体ｖｓ乳、膵臓、肺及び胃がん、ｐ＜０．００１；大腸がんｖｓ乳、膵臓、肺及び胃がん、ｐ＜０．００１；乳がんｖｓ肺がん、ｐ＜０．０５）。
例３．各種がん罹患体同士を識別するｍｉＲＮＡの組み合わせの抽出及び検証
・組み合わせの抽出
例２で得られた全データのうち、ランダムに抽出した８割のデータを学習データとして用いて、表１に記載の２３種のマイクロＲＮＡの中から大腸がん、または膵臓がんを識別するマーカーの組み合わせを二項ロジスティック回帰モデル又は多項ロジスティック回帰モデルの寄与度によって抽出した。
・組み合わせの抽出
例２で得られた全データのうち、ランダムに抽出した８割のデータを学習データとして用いて、表１に記載の２３種のマイクロＲＮＡの中から大腸がん、または膵臓がんを識別するマーカーの組み合わせを二項ロジスティック回帰モデル又は多項ロジスティック回帰モデルの寄与度によって抽出した。
・結果
ｍｉＲＮＡの組み合わせを選別した結果、表９及び表１０に記載の組み合わせ１～６が統計的に有意であることが分かった。
ｍｉＲＮＡの組み合わせを選別した結果、表９及び表１０に記載の組み合わせ１～６が統計的に有意であることが分かった。
・ｍｉＲＮＡの組み合わせによる識別性能の検証
上記抽出で得られたｍｉＲＮＡの組み合わせについて、学習データ以外を試験データとして、判別モデルで識別性能を検証した。
上記抽出で得られたｍｉＲＮＡの組み合わせについて、学習データ以外を試験データとして、判別モデルで識別性能を検証した。
・検証結果
表１１及び表１２に、ｍｉＲＮＡの各組み合わせの識別性能を示す。
表１１及び表１２に、ｍｉＲＮＡの各組み合わせの識別性能を示す。
表１１に示すように、例えば、健常体、乳がん罹患検体、膵臓がん罹患検体、肺がん罹患検体、胃がん罹患検体及び大腸がん罹患検体を含むテストデータについて、組み合わせ１の定量値を求め、健常体、乳がん罹患検体、膵臓がん罹患検体、肺がん罹患検体、胃がん罹患検体及び大腸がん罹患検体を含む学習データから得られた大腸がん判別モデルで判定することにより、感度８０％で大腸がんの罹患を判別できることが分かった。従って、対象におけるｍｉＲＮＡの組み合わせ１の定量値を求めることで、対象の大腸がんの罹患の有無を確認することができる。
同様に、非がん・大腸がん・乳がん・膵臓がん・肺がん・胃がん罹患検体を含むテストデータについて、組み合わせ２及び３の定量値を求め、非がん・大腸がん・乳がん・膵臓がん・肺がん・胃がん罹患検体を含む学習データから得られた大腸がん判別モデルで判定することによっても、大腸がんの罹患の有無を確認することができる（表１１参照）。
また、表１２に示すように、健常体、乳がん罹患検体、膵臓がん罹患検体、肺がん罹患検体、胃がん罹患検体及び大腸がん罹患検体を含むテストデータについて、組み合わせ４～６の定量値を求め、健常体、乳がん罹患検体、膵臓がん罹患検体、肺がん罹患検体、胃がん罹患検体及び大腸がん罹患検体を含む学習データから得られた膵臓がん判別モデルで判定することにより、感度８０％で膵臓がんの罹患を判別できることが分かった。従って、対象におけるｍｉＲＮＡの組み合わせ４～６の定量値を求めることで、膵臓がんの罹患の有無を確認することができる。
以上、例３により、例２に提示したｍｉＲＮＡの組み合わせ１～６が、がん種を識別するマーカーとして優れていることが示された。
本発明の幾つかの実施形態を説明したが、これらの実施形態は、例として提示したものであり、発明の範囲を限定することは意図していない。これら新規な実施形態は、その他の様々な形態で実施されることが可能であり、発明の要旨を逸脱しない範囲で種々の省略、置き換え、変更を行うことができる。これらの実施形態やその変形は、発明の範囲や要旨に含まれるとともに、特許請求の範囲に記載された発明とその均等の範囲に含まれる。
Claims (39)
- 対象由来の試料中の、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ，及びｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐからなるｍｉＲＮＡ群から選択されるｍｉＲＮＡを定量することを含む、前記対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する分析方法。
- 対照由来の試料中の前記ｍｉＲＮＡを定量すること；及び
前記対象における前記ｍｉＲＮＡの定量値と、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値とを比較することで、前記対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定すること；
を更に含む、請求項１に記載の方法。 - 前記対照は、健常体であるか、又は、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種であることが既知の検体である、請求項２に記載の方法。
- 前記対照は、健常体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ及びｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐからなるｍｉＲＮＡ群から選択される何れか１種のｍｉＲＮＡの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん又は大腸がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、健常体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん、膵臓がん、肺がん又は大腸がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、健常体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ又はｈｓａ－ｍｉＲ－９４１の定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん、膵臓がん、肺がん又は胃がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、健常体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん、膵臓がん、胃がん又は大腸がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、健常体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ、又はｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん、肺がん又は大腸がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、健常体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が膵臓がん又は胃がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、大腸がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ又はｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん、膵臓がん、肺がん又は胃がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、大腸がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ又はｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん、膵臓がん又は肺がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、大腸がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも大きい場合に、前記対象が肺がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、大腸がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５又はｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん、膵臓がん又は胃がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、大腸がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、大腸がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が乳がん又は膵臓がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、乳がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも大きい場合に、前記対象が胃がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、乳がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも大きい場合に、前記対象が肺がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、乳がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも大きい場合に、前記対象が膵臓がんまたは胃がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、肺がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも小さい場合に、前記対象が膵臓がん又は胃がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 前記対照は、肺がん罹患体であり、
前記判定は、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐの定量値が、前記対照における前記ｍｉＲＮＡの定量値よりも大きい場合に、前記対象が胃がんに罹患していると判定する、請求項３に記載の方法。 - 対象由来の試料中の、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ及びｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐからなるｍｉＲＮＡ群から選択される何れか複数種類のｍｉＲＮＡを定量することを含む、前記対象における乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を判定する分析方法。
- 対照由来の試料中の前記複数種類のｍｉＲＮＡを定量すること；及び
前記対象における前記複数種類のｍｉＲＮＡの定量値と、前記対照における前記複数種類のｍｉＲＮＡの定量値とを比較することで、前記対象が乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種に罹患していると判定すること；
を更に含む、請求項２１に記載の方法。 - 前記対照は、健常体であるか、又は、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種であることが既知の検体である、請求項２２に記載の方法。
- 前記対象以外の被験体由来の学習用試料を用意することと、
前記学習用試料中の前記ｍｉＲＮＡ群のそれぞれのｍｉＲＮＡを定量することと、
前記被験体の情報、及び前記学習用試料における前記ｍｉＲＮＡ群のそれぞれの定量値をモデル学習データとして、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種の罹患の有無を決定する判定アルゴリズムを構築することと、
前記判定アルゴリズムを用いて、前記対象のｍｉＲＮＡ群から選択される何れか複数種類のｍｉＲＮＡの定量値及び前記被験体の情報から、前記対象の乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種のがんの罹患の有無を判定することと、
を含む、請求項２１に記載の方法。 - 前記被験体の情報は、前記被験体のがんの罹患に関する情報である、請求項２４に記載の方法。
- 前記判定アルゴリズムは、二項ロジスティック回帰又は多項ロジスティック回帰を用いた変数選択法、統計的手法による変数選択法、又は寄与度及びｐ値による変数選択法、或いは、機械学習手法を用いる、請求項２４に記載の方法。
- 前記二項ロジスティック回帰又は多項ロジスティック回帰を用いた変数選択法は、スパース推定、ステップワイズ法又は総当たり法であり、
前記機械学習手法は、ランダムフォレスト、ブースティング又はニューラルネットワークである、請求項２４に記載の方法。 - 前記判定は、前記判定アルゴリズムを用いて、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ及びｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量値から、前記対象の大腸がんの罹患の有無を判定する、請求項２４に記載の方法。
- 前記判定は、前記判定アルゴリズムを用いて、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ及びｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量値から前記対象の大腸がんの罹患の有無を判定する、請求項２４に記載の方法。
- 前記判定は、前記判定アルゴリズムを用いて、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ及びｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量値から前記対象の大腸がんの罹患の有無を判定する、請求項２４に記載の方法。
- 前記判定は、前記判定アルゴリズムを用いて、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ及びｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量値から、前記対象の膵臓がんの罹患の有無を判定する、請求項２４に記載の方法。
- 前記判定は、前記判定アルゴリズムを用いて、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐ及びｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量値から前記対象の膵臓がんの罹患の有無を判定する、請求項２４に記載の方法。
- 前記判定は、前記判定アルゴリズムを用いて、前記対象におけるｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ及びｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量値から前記対象の膵臓がんの罹患の有無を判定する、請求項２４に記載の方法。
- 前記定量は、ＰＣＲ法、ＬＡＭＰ法、又はマイクロアレイ法を用いて行われる、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記試料は、血清又は血漿である請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記対象由来の試料の前記ｍｉＲＮＡの定量値、及び前記対照由来の試料の前記ｍｉＲＮＡの定量値は、前記対象由来の試料及び前記対照由来の試料に共通して含有される標準ｍｉＲＮＡによって補正される、
請求項２～２１のいずれか１項に記載の方法。 - 前記標準ｍｉＲＮＡは、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐである請求項３６に記載の方法。
- ｈｓａ－ｍｉＲ－２０５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４８３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－５７４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２２３－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１３－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－９４１，ｈｓａ－ｍｉＲ－３２４－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９０ａ－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１９４－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－３ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ，ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ，及びｈｓａ－ｍｉＲ－３７５－３ｐからなるｍｉＲＮＡ群から選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡと特異的に結合可能な核酸を含む、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん及び大腸がんのうち少なくとも何れか１種を検出するためのキット。
- 前記ｍｉＲＮＡと特異的に結合可能な核酸は、前記ｍｉＲＮＡを逆転写するための逆転写用プライマー、前記ｍｉＲＮＡを伸長するための伸長用プライマー、前記ｍｉＲＮＡを増幅するための増幅用プライマーセット、又は前記ｍｉＲＮＡを検出するための核酸プローブである請求項３８に記載のキット。
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