CN108473544A

CN108473544A - 修饰侧向出芽的方法

Info

Publication number: CN108473544A
Application number: CN201780006690.3A
Authority: CN
Inventors: G.利奇; J.P.S.坦布里诺; M.E.汉弗莱; A.德斯拉特斯梅斯; J.D.芒克沃尔德
Original assignee: British American Tobacco Co Ltd
Current assignee: British American Tobacco Investments Ltd
Priority date: 2016-01-15
Filing date: 2017-01-12
Publication date: 2018-08-31
Also published as: CA3010674A1; BR112018012980A2; EP3402807A1; WO2017122014A1; JP2019508025A; US20190024108A1; MX2018008656A; PH12018501101A1

Abstract

本发明涉及修饰植物中侧向出芽的方法，所述方法包括修饰包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的序列的蛋白的表达或功能。本发明还涉及通过此类方法可获得的植物、植物繁殖材料、收获的叶和加工的叶。

Description

修饰侧向出芽的方法

发明领域

本发明涉及修饰植物中侧向出芽的方法以及细胞、植物、植物繁殖材料、收获的叶、加工的叶或从其衍生的产品。

背景

植物形态的控制对于商业生产用于农业或园艺目的的植物、提高生产力和产量、提高耕种和收获效率以及实现美学期望至关重要。

由于对植物的环境影响（包括物理损伤、食草动物摄食、病原体感染、寒冷、炎热和干旱），形态变化经常发生。它们通常可以通过物理上（修剪、弯曲、分型(typing)、用桩支撑(staking)或切除特定器官或结构）或化学上（施用农用化学品和植物生长结构）人为干预来实现。

控制形态变化以修饰植物形态的具体应用是调节（优选阻止或延迟）来自叶腋生分生组织的侧枝生长。当顶枝的优势被去除时，侧枝生长最常出现；例如，当顶枝被损伤或去除时，无论这是意外地通过物理损伤或被食草动物摄食，还是作为农业实践的一部分，例如打顶(topping)。例如修饰内源植物生长物质的生产、运输、检测或代谢的其他改变也可能引起自腋生分生组织的生长。侧枝或“腋芽(suckers)”单纯由于美学原因可能是不期望的，可能产生具有不可用形态的植物，或者可能通过充当各种代谢物或植物生长物质的额外来源或库而对植物整体具有有害的代谢作用。

出现侧芽生长的一个实例在茄科植物的商业化栽培中。例如，在烟草植物的栽培过程中，包含花序和最上部叶片的顶枝在植物生长期间的特定时间在称为“打顶”的处理中被去除，以刺激剩余叶片的生长和发育，增强根生长，并促进代谢物和次生化合物向植物叶片的再分配。打顶处理的缺点是它也刺激侧枝的生长，这从而抵消了期望的代谢物再分配。这种影响通常通过物理去除侧枝（这是高劳动强度的）或通过施用化学枝条抑制剂如马来酰肼来克服，所述化学枝条抑制剂在材料方面是昂贵的且可能导致化学品残渣残留在收获的植物上。

在番茄植物栽培期间，通常修剪腋芽以改善植物的生产和健康。然而，修剪腋芽可能会对植物造成不必要的损伤，并可能使植物易受疾病侵害。

此外，存在期望增加植物中侧向出芽的情况，例如某些大田作物中。

因此，通过特异性靶向侧芽生长来修饰优选减少这种“出腋芽(suckering)”的系统将为植物的商业化栽培提供巨大益处。

发明概述

根据第一方面，本发明提供了修饰植物中侧向出芽的方法，所述方法包括修饰包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的序列的蛋白的表达或功能。

在一个实施方案中，本发明提供了通过减少或阻止所述蛋白的表达或功能来减少和/或延迟侧向出芽的方法。

在一个实施方案中，本发明提供了通过增加所述蛋白的表达或功能来增加和/或促进侧向出芽的方法。

在另一方面，本发明提供通过根据本发明的第一方面的方法可获得（例如获得）的植物细胞。

在进一步的方面，本发明提供植物，所述植物

i）可通过本发明的方法获得；

ii）包含本发明的经修饰的核酸序列；

iii）包含本发明的细胞。

在另一方面，本发明提供从本发明的植物可获得的植物繁殖材料（例如植物种子）。

在进一步的方面，本发明提供本发明的植物的收获的叶、或从本发明的繁殖材料繁殖的植物可获得的收获的叶、或从通过本发明的方法可获得的植物可获得的收获的叶。

在另一方面，本发明提供加工的叶（优选无活力的加工的叶），所述加工的叶：

a. 包含本发明的植物细胞；

b. 可获自从本发明的方法可获得的植物；

c. 可获自加工本发明的植物；

d. 可获自从本发明的植物繁殖材料繁殖的植物；

e. 可通过加工本发明的收获的叶获得。

在另一实施方案中，本发明提供烟草产品，所述烟草产品：

a. 制备自本发明的烟草植物或其部分；

b. 制备自通过本发明的方法获得的或可获得的烟草植物或其部分（优选收获自所述植物的叶）；

c. 制备自从本发明的植物繁殖材料繁殖的烟草植物（优选叶）；

d. 制备自本发明的收获的烟叶；

e. 制备自本发明的加工的烟叶；

f. 制备自或包含从本发明的烟草植物获得的烟草植物提取物。

在进一步的方面，本发明提供根据本发明的植物或所述植物的部分的植物提取物。

在进一步的方面，本发明提供本发明的植物用于培育植物的用途。

在另一方面，本发明提供根据本发明的植物用于生长作物的用途。

在另一方面，本发明提供根据本发明的植物用于生产叶（例如，加工的（优选调制的）叶）的用途。

附图简述

本发明的实施方案现将仅借助于实例并参考附图进行描述，在所述附图中：

图1显示如使用数字表型分析测定的对照K326植物和突变体TFA1255植物中以24小时时间间隔的侧向出芽水平。

图2显示如使用数字表型分析测定的对照K326植物和突变体TFA0321植物中以24小时时间间隔的侧向出芽水平。

图3显示如通过侧芽生物质的重量测定的对照K326植物和突变体TFA1255植物中的侧向出芽水平。

图4显示如通过侧芽生物质的重量测定的对照K326植物和突变体TFA0321植物中的侧向出芽水平。

图5显示图像分析算法生成像素计数以测定腋芽生长的实例输出图像。

详细描述

首次，本发明人已令人惊奇地显示通过修饰包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能可以修饰植物中的侧向出芽。

侧向出芽

侧向出芽（出腋芽）是指从叶腋生分生组织的侧枝生长。当顶枝的优势被去除时，侧枝生长最常出现；例如，当顶枝被损伤或去除时，无论这是意外地通过物理损伤或被食草动物摄食，还是作为农业实践的一部分，例如打顶。例如修饰内源植物生长物质的生产、运输、检测或代谢的其他改变也可能引起自腋生分生组织的生长。

本文使用“修饰侧向出芽”来指改变植物中侧向出芽和/或侧枝生长的水平或量。具体而言，“修饰侧向出芽”可以指减少/降低和/或延迟植物中的侧向出芽和/或侧枝生长；或增加或促进植物中的侧向出芽和/或侧枝生长。

在一个实施方案中，“修饰侧向出芽”可以指减少/降低和/或延迟植物中的侧向出芽和/或侧枝生长。

在一个实施方案中，“修饰侧向出芽”可以指减少/降低植物中的侧向出芽和/或侧枝生长。

在一个实施方案中，通过实施本发明的方法以减少或阻止包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能来减少和/或延迟侧向出芽。

在植物例如烟草植物中减少和/或延迟侧向出芽是非常有利的技术效果。

本文使用术语“减少侧向出芽”或“侧向出芽的减少”来表示植物中侧向出芽的量和/或水平相对于可比较的植物更低。例如，可比较的植物将是尚未根据本发明进行修饰但其中所有其他相关特征相同（例如植物物种、生长条件等）的植物。

“减少侧向出芽”可以指相对于可比较的植物较少数量的侧芽和/或侧枝；侧芽和/或侧枝较低的生物质；和/或侧芽和/或侧枝的生长速率较低。

本文所用的术语“延迟侧向出芽”意指与可比较的（对照）植物相比，根据本发明的修饰的植物中的植物侧向出芽出现较晚。例如，可比较的（对照）植物将是尚未根据本发明进行修饰但其中所有其他相关特征相同（例如植物物种、生长条件等）的植物。延迟的长度可以取决于植物物种。然而，在一些物种例如烟草中，例如与尚未根据本发明进行修饰的可比较的植物相比，延迟可能超过2周、优选超过4周、优选超过6周。

在一个实施方案中，实施本发明的方法导致当与尚未进行修饰以减少或阻止包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能的植物相比，减少和/或延迟侧向出芽。

本领域已知的用于测定侧向出芽的量和/或水平的任何方法可用于本发明的上下文中。例如，可以使用方法诸如在本文描述的实施例中详细描述的那些方法。具体而言，可以测定侧芽生长的数字表型分析或侧芽生物质的重量。

在一个实施方案中，侧向出芽的量和/或水平相对于尚未根据本发明进行修饰的可比较的植物可以减少至少约1％、至少约3％、至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30 ％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或100％。在一些实施方案中，侧向出芽的量和/或水平相对于尚未根据本发明进行修饰的可比较的植物可以减少约5％至约95％、约10％至约90％、20％至约80％、30％至约70％或约40％至60％。

在一个实施方案中，通过实施本发明的方法以增加包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能来增加和/或促进侧向出芽。

本文使用术语“增加的侧向出芽”来表示植物中侧向出芽的量和/或水平相对于可比较的植物更高。例如，可比较的植物将是尚未根据本发明进行修饰但其中所有其他相关特征相同（例如植物物种、生长条件等）的植物。

“增加的侧向出芽”可以指相对于可比较的植物较多数量的侧芽和/或侧枝；侧芽和/或侧枝增加的生物质；和/或侧芽和/或侧枝的增加的生长速率。

如本文所用的术语“促进的侧向出芽”意指与可比较的（对照）植物相比，根据本发明的修饰的植物中的植物侧向出芽出现较早。例如，可比较的（对照）植物将是尚未根据本发明进行修饰但其中所有其他相关特征相同（例如植物物种、生长条件等）的植物。侧向出芽的准确时间可以取决于植物物种。然而，在一些物种中，与尚未根据本发明进行修饰的可比较的植物相比，侧向出芽可以被促进超过2周、优选超过4周、优选超过6周。

在一个实施方案中，实施本发明的方法导致当与尚未进行修饰以增加包含如SEQID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能的植物相比，增加和/或促进的侧向出芽。

在一个实施方案中，侧向出芽的量和/或水平相对于尚未根据本发明进行修饰的可比较的植物可以增加至少约1％、至少约3％、至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30 ％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或100％。在一些实施方案中，侧向出芽的量和/或水平相对于尚未根据本发明进行修饰的可比较的植物可以增加约5％至约95％、约10％至约90％、20％至约80％、30％至约70％或约40％至60％。

蛋白

如本文所用，术语“蛋白”与术语“多肽”同义。在一些情况下，术语“蛋白”与术语“肽”同义。

术语“减少或阻止蛋白的表达或功能”或“蛋白的表达或功能的减少或阻止”在本文中用于表示本发明的产品、方法或用途中包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的量/水平或活性相对于可比较的产品、方法或用途更低。例如，可比较的产品将来源于尚未根据本发明进行修饰但其中所有其他相关特征相同（例如植物物种、生长条件、加工方法等）的植物。

当与可获自或获得自可比较的植物的叶、收获的植物叶、加工的植物叶、植物产品或其组合相比时，可获自或获得自本发明的植物的植物叶、收获的植物叶、加工的植物叶、植物产品或其组合中包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能可以减少，所述可比较的植物尚未进行修饰以减少或阻止包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达。

在一个实施方案中，相对于尚未进行修饰以减少或阻止包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达的可比较的植物，包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能可以减少至少约1%、至少约3%、至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约99%或100%。在一些实施方案中，相对于尚未进行修饰以减少或阻止包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达的可比较的植物，包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能可以增加约5%至约95%、约10%至约90%、约20%至约80%、约30%至约70%、或约40%至60%。

术语“增加蛋白的表达或功能(to increase the expression or function of aprotein)”或“增加蛋白的表达或功能(increasing expression or function of aprotein)”在本文中用于表示本发明的产品、方法或用途中包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的量/水平或活性相对于可比较的产品、方法或用途更高。例如，可比较的产品将来源于尚未根据本发明进行修饰但其中所有其他相关特征相同（例如植物物种、生长条件、加工方法等）的植物。

当与可获自或获得自可比较的植物的叶、收获的植物叶、加工的植物叶、植物产品或其组合相比时，可获自或获得自本发明的植物的植物叶、收获的植物叶、加工的植物叶、植物产品或其组合中包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能可以增加，所述可比较的植物尚未进行修饰以增加包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达。

“增加的表达”意指与相同品种的亲本植物的表达水平相比，植物的mRNA水平或蛋白水平增加。将表达水平与在相同条件下栽培的同一品种的亲本植物的相应部分进行比较。表达水平是亲本植物的表达水平的至少1.1倍的情况优选被认为是表达水平增加的情况。在此，为了考虑到存在表达水平的增加，更优选植物的表达水平与亲本植物的表达水平相比通过t检验具有5％的显着差异。优选通过相同的方法同时测量植物和亲本植物的表达水平。但是，也可以使用作为背景数据存储的数据。

在一个实施方案中，相对于尚未进行修饰以增加包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达的可比较的植物，包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能可以增加至少约1%、至少约3%、至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约99%或100%。在一些实施方案中，相对于尚未进行修饰以增加包含如SEQ IDNO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达的可比较的植物，包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能可以减少约5%至约95%、约10%至约90%、约20%至约80%、约30%至约70%、或约40%至60%。

本领域中已知的用于测定包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的量/水平的任何方法均可用于本发明的上下文中。例如，可以使用已知的方法诸如蛋白质印迹、ELISA或原位杂交。包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达中的修饰还可以通过测量编码所述蛋白的mRNA的水平来测定。用于测量mRNA的合适方法是本领域已知的，例如，RT-PCR和RT-qPCR。

合适地，包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的量/水平或活性可以在加工的叶中被修饰。

合适地，包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的量/水平或活性可以在植物产品中被修饰。

如本文所用，氨基酸序列可以包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成。

在本实施例中，本发明人确定如SEQ ID NO: 1和2所示的氨基酸序列参与烟草植物中侧向出芽的控制。

如SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列具有95%的序列同一性。

SEQ ID NO: 1和2与登录号CAA63542.1和BAA09366的蛋白具有99%和95%的序列同一性 (参见Setiady等人; 1995; Plant J; 8(6):949-57和Riechheld 等人; 1996;PNAS; 93(24); 13819-13824)。这些蛋白已被描述为A型细胞周期蛋白，其表达可以通过细胞周期的S、G2和M期来检测。基因在生长中的烟草培养细胞中表达，但当细胞进入稳定期时不再表达，表明这些细胞周期蛋白基因的表达与细胞生长密切相关。没有关于在烟草植物中其表达的描述。

细胞周期蛋白是控制细胞周期进程的重要调节子。在一个实施方案中，包含如SEQID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的活性可以使用任何用于测量细胞周期进程的已知方法例如细胞生长测定或流式细胞术细胞周期测定来测定（参见Pozarowski等人; 2004; Methods Mol; 281：301-11）。在一个实施方案中，包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的活性可以使用如由Setiady等人（如上）所述的测定来测定。

本发明涵盖与如SEQ ID NO：1、2、7或8所示的氨基酸序列具有一定程度的序列同一性或序列同源性的蛋白（也称为“同源序列”）。在此，术语“同源物”意指与对象氨基酸序列具有某一同源性的实体。在此，术语“同源性”可以等同于“同一性”。

同源氨基酸序列应提供保留如SEQ ID NO: 1、2、7或8所示的氨基酸序列的功能活性的多肽。在一个实施方案中，同源氨基酸序列应提供保留如SEQ ID NO: 1或2所示的氨基酸序列的功能活性的多肽。

通常，同源序列将包含与如SEQ ID NO: 1、2、7或8所示的氨基酸序列相同的活性位点和功能结构域等。在一个实施方案中，同源序列将包含与如SEQ ID NO: 1或2所示的氨基酸序列相同的活性位点和功能结构域等。虽然同源性也可以在相似性（即具有相似化学特性/功能的氨基酸残基）方面来考虑，但在本发明的上下文中，优选根据序列同一性表示同源性。

在一个实施方案中，认为同源序列包括与如SEQ ID NO: 1、2、7或8所示的氨基酸序列相比具有一个或几个添加、缺失和/或取代的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明涉及其氨基酸序列在本文表示为SEQ ID NO: 1、2、7或8的蛋白或通过在该（亲本）蛋白的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或几个氨基酸、诸如2、3、4、5、6、7、8、9个氨基酸或更多个氨基酸诸如10个或多于10个氨基酸而衍生自亲本蛋白并具有所述亲本蛋白的活性的蛋白。

在一个实施方案中，本发明涉及编码其氨基酸序列在本文表示为SEQ ID NO: 1、2、7、8的蛋白或编码通过在该（亲本）蛋白的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或几个氨基酸、诸如2、3、4、5、6、7、8、9个氨基酸或更多个氨基酸诸如10个或多于10个氨基酸而衍生自亲本蛋白并具有所述亲本蛋白的活性的蛋白的核酸序列（或基因）。

在一个实施方案中，本发明涉及蛋白，其氨基酸序列在本文表示为SEQ ID NO: 1、2、7、8或为与SEQ ID NO: 1、2、7或8具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明涉及蛋白，其氨基酸序列在本文表示为SEQ ID NO: 1或为与SEQ ID NO: 1具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明涉及蛋白，其氨基酸序列在本文表示为SEQ ID NO: 2或为与SEQ ID NO: 2具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明涉及蛋白，其氨基酸序列在本文表示为SEQ ID NO: 7或为与SEQ ID NO: 7具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明涉及蛋白，其氨基酸序列在本文表示为SEQ ID NO: 8或为与SEQ ID NO: 8具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的氨基酸序列。

核酸序列/多核苷酸

本方法可以包括提供编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列或多核苷酸中的突变。

如本文所用的术语“核酸序列”和“多核苷酸”是指寡核苷酸序列或多核苷酸序列及其变体、同源物、片段和衍生物（诸如其部分）。核苷酸序列可以是基因组来源的，并且可以是双链的或单链的，无论代表有义链或反义链。

与本发明相关的术语“核酸序列”或“多核苷酸”可以指基因组DNA、RNA或cDNA。

在一个实施方案中，编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列或多核苷酸可以包含如SEQ IDNO: 5或6所示的核酸序列。

转录为如SEQ ID NO: 5或6所示的核酸序列的基因组DNA序列可以包含如SEQ IDNO: 3或4所示的核酸序列或多核苷酸。

如本文所用，核酸序列可以包含如SEQ ID NO：3、4、5、6、9或10所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的核酸序列（或多核苷酸），基本上由其组成或由其组成。

本发明还涵盖与如SEQ ID NO：3、4、5、6、9或10所示的核酸序列（或多核苷酸）具有一定程度的序列同一性或序列同源性的核酸序列（也称为“同源序列”）。在此，术语“同源物”意指与对象核酸序列具有某一同源性的实体。在此，术语“同源性”可以等同于“同一性”。

同源核酸序列（或多核苷酸）应编码保留如SEQ ID NO: 1、2、7或8所示的氨基酸序列的功能活性的多肽。在一个实施方案中，同源核酸序列应编码保留如SEQ ID NO: 1或2所示的氨基酸序列的功能活性的多肽。

通常，同源序列将编码包含与如SEQ ID NO: 1、2、7或8所示的氨基酸序列相同的活性位点和功能结构域等的蛋白。在一个实施方案中，同源序列将编码包含与如SEQ IDNO: 1或2所示的氨基酸序列相同的活性位点和功能结构域等的蛋白。虽然同源性也可以在相似性（即具有相似化学特性/功能的氨基酸残基）方面来考虑，但在本发明的上下文中，优选根据序列同一性表示同源性。

核酸序列或多核苷酸可以包含如SEQ ID NO: 3、4、5、6、9、10所示的序列或与SEQID NO: 3、4、5、6、9或10具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列。

核酸序列或多核苷酸可以包含如SEQ ID NO: 3所示的序列或与SEQ ID NO: 3具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列。

核酸序列或多核苷酸可以包含如SEQ ID NO: 4所示的序列或与SEQ ID NO: 4具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列。

核酸序列或多核苷酸可以包含如SEQ ID NO: 5所示的序列或与SEQ ID NO: 5具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列。

核酸序列或多核苷酸可以包含如SEQ ID NO: 6所示的序列或与SEQ ID NO: 6具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列。

核酸序列或多核苷酸可以包含如SEQ ID NO: 9所示的序列或与SEQ ID NO: 9具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列。

核酸序列或多核苷酸可以包含如SEQ ID NO: 10所示的序列或与SEQ ID NO: 10具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列。

序列同一性

同源性或同一性比较可以通过目视进行，或者更通常地借助于容易获得的序列比较程序进行。这些可商购的计算机程序可以计算两个或更多个序列之间的％同源性。

可以在连续序列上计算％同源性或％同一性，即将一个序列与另一序列比对，并且一个序列中的每个氨基酸与另一序列中的相应氨基酸直接比较，一次一个残基。这被称为“未加空位的(ungapped)”比对。通常，这种未加空位比对仅在相对少数量的残基上进行。

尽管这是非常简单且一致的方法，但它没有考虑到，例如，在其他方面相同的一对序列中，一个插入或缺失会导致随后的氨基酸残基无法对齐，从而可能导致在进行全局比对时%同源性大大降低。因此，设计大多数序列比较方法以产生最佳比对，其考虑到可能的插入和缺失，而不会过度地惩罚总体同源性评分。这是通过在序列比对中插入“空位”以尽量将局部同源性最大化来实现的。

然而，这些更为复杂的方法对比对中出现的每个空位分配“空位罚分”，以便对于相同数量的相同氨基酸，具有尽可能少的空位的序列比对 - 反映两个比较的序列之间的更高关联性 - 将获得比具有很多空位的序列比对更高的分数。通常使用“仿射空位成本(Affine gap costs)”，其使空位存在承担相对高的成本并且使空位中每个后续残基承担较小罚分。这是最常用的空位评分系统。高空位罚分当然会产生空位更少的优化的比对。大多数比对程序允许修改空位罚分。然而，当使用这些软件进行序列比较时，优选使用默认值。

因此，考虑到空位罚分，最大%同源性的计算首先需要产生最佳比对。实施此类比对的合适的计算机程序是Vector NTI (Invitrogen Corp.)。可以进行序列比较的软件的实例包括但不限于例如BLAST程序包(参见 Ausubel 等人 1999 Short Protocols inMolecular Biology, 第四版 - 第18章)、BLAST 2 (参见FEMS Microbiol Lett 1999 174(2):247-50；FEMS Microbiol Lett 1999 177(1):187-8和tatiana@ncbi.nlm.nih.gov)、FASTA (Altschul 等人 1990 J. Mol.Biol.403-410)和AlignX。至少BLAST、BLAST 2和FASTA可用于线下和线上检索(参见Ausubel 等人 1999, 第7-58至7-60页)。

尽管最终的％同源性可以按照同一性来测量，但比对过程本身通常不是基于全或无的对比较。相反，通常使用缩放的相似性得分矩阵，其基于化学相似性或进化距离将得分分配给每个成对比较。常用的这种矩阵的一个实例是BLOSUM62矩阵 - BLAST程序套件的默认矩阵。Vector NTI程序通常使用公共默认值或自定义符号比较表（如果提供）（更多详细信息参见用户手册）。对于某些应用，优选使用Vector NTI软件包的默认值。

可选地，可以基于与CLUSTAL (Higgins DG & Sharp PM (1988), Gene 73(1),237-244)类似的算法，使用Vector NTI (Invitrogen Corp.)中的多比对特征来计算百分比同源性。

一旦软件已产生最佳比对，就可以计算％同源性，优选％序列同一性。该软件通常将其作为序列比较的一部分来完成并生成数值结果。

如果在确定序列同一性时使用空位罚分，以下参数可用于成对比对：

在一个实施方案中，可以用如上所限定的空位罚分和空位延伸来使用BLAST。

在一个实施方案中，可以用如上所限定的空位罚分和空位延伸来使用CLUSTAL。

在一些实施方案中，用于BLAST或CLUSTAL比对的空位罚分可以不同于以上详述的那些。技术人员将会理解，用于执行BLAST和CLUSTAL比对的标准参数可以定期改变，并且将能够基于当时针对BLAST或CLUSTAL比对算法详述的标准参数来选择适当的参数。

合适地，关于核苷酸序列的同一性程度是在至少20个连续核苷酸上测定，优选在至少30个连续核苷酸上，优选在至少40个连续核苷酸上，优选在至少50个连续核苷酸上，优选在至少60个连续的核苷酸上，优选在至少100个连续的核苷酸上。

合适地，可以在整个序列上测定关于核苷酸序列的同一性程度。

序列还可以具有产生沉默改变并导致功能等同物质的氨基酸残基的缺失、插入或取代。只要物质的二级结合活性得到保留，就可以基于残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性性质的相似性来进行有意的氨基酸取代。例如，带负电荷氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；带正电荷氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；并且有具有相似亲水性值的不带电荷极性头基的氨基酸包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。

例如根据下表可以进行保守取代。第二列中同一区块中和优选第三列中同一行中的氨基酸可以彼此取代：

本发明还包括可能以即同类(like-for-like)取代（诸如碱性取代碱性、酸性取代酸性、极性取代极性等）发生的同源取代（取代和替换两者在本文用于表示现有氨基酸残基与可选残基的交换）。非同源取代也可以发生，即从一类残基到另一类残基，或可选地涉及包括非天然氨基酸例如鸟氨酸（以下称为Z）、二氨基丁酸鸟氨酸（以下称为B）、正亮氨酸鸟氨酸（以下称为O）、吡啶丙氨酸、噻吩丙氨酸、萘基丙氨酸和苯甘氨酸。

替换还可以通过非天然氨基酸进行，包括：α*和α双取代的* 氨基酸、N-烷基氨基酸*、乳酸*、天然氨基酸的卤化物衍生物诸如三氟酪氨酸*、对-Cl-苯丙氨酸*、对-Br-苯丙氨酸*、对-I-苯丙氨酸*、L-烯丙基甘氨酸*、β-丙氨酸*、L-α-氨基酸丁酸*、L-γ-氨基丁酸*、L-α-氨基异丁酸*、L-ε-氨基己酸^#、7-氨基庚酸*、L-甲硫氨酸砜#^*、L-正亮氨酸*、L-戊氨酸*、对硝基-L-苯丙氨酸*、L-羟基脯氨酸^#、L-硫代脯氨酸*、苯丙氨酸（Phe）的甲基衍生物诸如4-甲基-Phe*、五甲基-Phe*、L-Phe（4-氨基）^＃、L-Tyr（甲基）*、L-Phe（4-异丙基）*、L-Tic（1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸）*、L-二氨基丙酸^#和L-Phe (4-苄基)*。符号*已用于上述讨论（涉及同源或非同源取代）的目的，以表明衍生物的疏水性质，而＃已被用于指示衍生物的亲水性质，＃^*表示两亲性特征。

变体氨基酸序列可以包括除了氨基酸间隔子例如甘氨酸或β-丙氨酸残基之外，可以插入序列的任何两个氨基酸残基之间的合适的间隔基团，包括烷基例如甲基、乙基或丙基基团。变化的其他形式涉及存在以类肽形式的一个或多个氨基酸残基，将被本领域技术人员完全理解。为避免疑问，使用“类肽形式”来指变体氨基酸残基，其中α-碳取代基位于残基的氮原子上而不是α-碳上。制备类肽形式的肽的方法是本领域已知的，例如Simon RJ等人, PNAS (1992) 89(20), 9367-9371和Horwell DC, Trends Biotechnol.(1995) 13(4), 132-134。

本发明还包括与本发明的核酸序列互补的序列、或能够与本发明的序列或与其互补的序列杂交的序列。

本文所用术语“杂交”应包括“经其核酸链通过碱基配对与互补链结合的过程”以及如聚合酶链式反应（PCR）技术中进行的扩增过程。

本发明还涉及可与本发明的核苷酸序列杂交的核苷酸序列（包括本文呈现的那些序列的互补序列）。

优选地，杂交在严格条件下测定(例如50℃和0.2xSSC {1xSSC = 0.15 M NaCl、0.015 M 柠檬酸三钠 pH 7.0})。

更优选地，杂交在高严格条件下测定(例如65℃和0.1xSSC {1xSSC = 0.15 MNaCl、0.015 M 柠檬酸三钠 pH 7.0})。

减少或阻止表达

本领域中已知用于减少或阻止蛋白的表达或功能的任何方法可用于本方法中。

借助于实例，本方法可以包括：

• 提供编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列中的突变；

• 提供有助于控制包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达的调节区（例如启动子和增强子）中的突变；

• 提供减少编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列的水平的反义RNA、siRNA或miRNA。

以上方法的每一种导致减少或阻止包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能。

如本文所用，术语“突变”包括天然遗传变体和工程化的变体。具体而言，术语“突变”是指与SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列相比氨基酸序列中的变化，其减少了蛋白的表达或功能。

在一个优选的实施方案中，存在于植物中的编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的序列的蛋白的核酸序列的每一拷贝如本文限定突变（例如，植物中编码所述蛋白的基因的每个基因组拷贝被突变）。例如，普通烟草(N. tabacum)异源四倍体基因组中的基因的每个拷贝都可以被突变。

在一个优选的实施方案中，根据本发明的植物或植物细胞是纯合的。

在一个实施方案中，优选地，根据本发明的植物或植物细胞只表达突变的核酸。换言之，在一些实施方案中，根据本发明的植物中不存在内源（或内源和功能性）蛋白。换言之，如果存在任何内源蛋白，则其优选处于无活性和/或截短形式。

在一个实施方案中，本方法可以包括提供如SEQ ID NO：3、4、5、6、9、10所示的序列或与其具有至少70％同一性的核酸序列中的突变。

突变可以改变植物基因组，从而使得编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列被完全或部分地缺失或者以其他方式变得无功能。

突变可以中断编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列。

中断可能导致核酸序列不被转录和/或翻译。

例如，可以通过缺失或另外修饰核酸序列的ATG起始密码子来中断核酸序列，从而减少或阻止蛋白的翻译。

核酸序列可包含一个或多个减少或阻止蛋白表达或影响蛋白运输的核苷酸改变。例如，可通过在可读框中引入一个或多个提前终止密码子、移码、剪接突变体或非可接受的氨基酸取代来减少或阻止蛋白的表达。

提前终止密码子是指将终止密码子引入可读框并且阻止整个氨基酸序列翻译的突变。提前终止密码子可以是TAG（“琥珀”）、TAA（“赭石”）或TGA（“蛋白石”或“棕土”）密码子。

移码突变（也称为框架错误或阅读框移位）是由核酸序列中不能被3整除的多个核苷酸的插入缺失（插入或缺失）引起的突变。由于通过密码子的基因表达的三联体性质，插入或缺失可以改变阅读框，从而导致与原始翻译完全不同的翻译。移码突变通常会导致读取突变后的密码子以编码不同的氨基酸。移码突变通常会导致引入提前的终止密码子。

剪接突变体在将前体信使RNA加工成成熟信使RNA期间在剪接发生的特定位点中插入、缺失或改变多个核苷酸。剪接位点的缺失导致一个或多个内含子保留在成熟mRNA中并可能导致产生异常蛋白。

非可接受的氨基酸取代是指导致蛋白中非同义氨基酸取代的突变，其导致蛋白功能减少或消除。

本领域已知的用于在核酸序列中提供突变的任何方法可用于本方法中。例如，可以使用同源重组，其中产生其中相关核酸序列被突变并用于转化植物或植物细胞的载体。然后可以选择表达突变序列的重组植物或植物细胞。

在一个实施方案中，突变在包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的序列的蛋白中引入提前的终止密码子。例如，突变可以对应于如SEQ ID NO: 3所示的核酸序列中的C868T突变（其对应于SEQ ID NO: 5中的C868T突变），这导致生成提前的终止密码子（TAA）。这导致终止密码子被引入如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的位置290处。所得的氨基酸序列如SEQ ID NO: 11所示，其从SEQ ID NO: 1的C末端缺少194个氨基酸。

在一个实施方案中，突变在包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的序列的蛋白中引入非可接受的氨基酸取代。例如，突变可以对应于如SEQ ID NO：4所示的核酸序列中的C1436T突变（其对应于SEQ ID NO：6中的C350T突变）。这导致SEQ ID NO：2的位置117处的Ser至Phe取代（S117F）。

在一个实施方案中，突变相对于如SEQ ID NO：1、2、7、8或与其具有至少70％序列同一性的序列所示的蛋白减少蛋白的活性。

在一个实施方案中，突变相对于如SEQ ID NO：1、2、7、8或与其具有至少70％序列同一性的序列所示的蛋白不改变蛋白的水平或表达但减少所述蛋白的活性。

核酸序列可以全部或部分缺失。缺失可以是连续的，或者可以包括多个序列部分。缺失优选去除足够量的核苷酸序列，使得核酸序列不再编码功能性蛋白。例如，缺失可以去除核酸序列编码部分的至少50％、60％、70％、80％或90％。

与可比较的未修饰植物的相应基因组相比，缺失可能是全部的，在这种情况下，100％的核酸序列的编码部分不存在。

在植物中缺失核酸序列的方法是本领域已知的。例如，可以使用同源重组，其中产生其中相关核酸序列缺失并用于转化植物或植物细胞的载体。然后可以选择表达序列的新的部分的重组植物或植物细胞。

用如上所述的载体转化的植物细胞可以根据熟知的组织培养方法进行生长和维持，例如通过在提供有必要生长因子如氨基酸、植物激素、维生素等的合适培养基中培养细胞。

可以使用定向诱变方法（也称为靶向核苷酸交换（TNE）或寡聚体指导的诱变（ODM））进行核酸序列的修饰。定向诱变方法包括但不限于使用锌指核酸酶、TALEN（参见WO2011/072246和WO2010/079430）、Cas9样、Cas9/crRNA/tracrRNA或Cas9/gRNA CRISPR系统（参见WO 2014/071006和WO2014/093622）、大范围核酸酶（参见WO2007/047859和WO2009/059195）的那些，或使用诱变寡核苷酸（可能含有化学修饰的核苷酸用于增强与基因序列互补性的诱变）到植物原生质体中的定向诱变方法（例如KeyBase®或TALENs）。

可选地，诱变系统诸如TILLING (Targeting Induced Local Lesions INGenomics；McCallum 等人, 2000, Nat Biotech 18:455, 和McCallum 等人2000, PlantPhysiol.123, 439-442，均通过引用并入本文)可用于生成包含具有突变的编码蛋白的基因的植物株系。TILLING使用传统的化学诱变（例如甲磺酸乙酯（EMS）诱变），然后进行高通量筛选突变。因此，可以获得包含具有所需突变的基因的植物、种子和组织。

该方法可以包括以下步骤：诱变植物种子（例如EMS诱变），合并植物个体或DNA，PCR扩增目标区域，异源双链体形成和高通量检测，鉴定突变体植物，测序突变体PCR产物。应该理解，其他诱变和选择方法可以同样用于生成这样的修饰植物。例如，可以对种子进行辐射或化学处理，并且可以针对修饰的表型筛选植物。

可以通过分子方法（例如存在于DNA中的突变）和通过修饰的表型特征将经修饰的植物与未经修饰的植物（即野生型植物）区分开来。修饰的植物对于突变可以是纯合的或杂合的。

在一个实施方案中，减少或阻止包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达的方法不包括用化学品（例如农用化学品）处理植物。

增加表达

在一个方面中，本发明提供了通过增加包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能来增加植物中侧向出芽的方法。

在一个实施方案中，本发明提供了通过增加包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的表达来增加植物中侧向出芽的方法。

表达的增加可以通过本领域技术人员已知的任何手段来实现。

用于增加基因或基因产物表达的方法在本领域中有充分的记载，并且包括例如由合适启动子驱动的过表达，使用转录增强子或翻译增强子。用作启动子或增强子元件的分离的核酸可以引入多核苷酸的非异源形式的适当位置（通常是上游）以上调编码目标多肽的核酸的表达。例如，内源启动子可以通过突变、缺失和/或取代在体内改变（参见US 5,565,350；WO9322443），或分离的启动子可以以与本发明的基因适当的方向和距离引入植物细胞以控制基因的表达。

如果需要多肽表达，通常需要在多核苷酸编码区的3'-端包含聚腺苷酸化区域。聚腺苷酸化区域可以来源于天然基因、各种其他植物基因或T-DNA。待添加的31个末端序列可以来源于例如胭脂碱合酶或章鱼碱合酶基因，或者可选地来源于另一植物基因，或者更不优选地来源于任何其他真核生物基因。

内含子序列也可以添加到部分编码序列的5'非翻译区（UTR）或编码序列中以增加在细胞溶胶中累积的成熟信使的量。已经显示在植物和动物表达构建体中在转录单元中包含可剪接的内含子在mRNA和蛋白水平两者上增加基因表达高达1000倍(Buchman和Berg(1988) MoI.Cell biol.8:4395-4405；Callis 等人(1987) Genes Dev 1 :1183-1200)。当置于转录单元的5'端附近时，基因表达的这种内含子增强通常是最大的。玉米内含子Adh1-S内含子1、2和6、Bronze-1内含子的使用是本领域已知的。一般信息请参见：The MaizeHandbook, 第116章, Freeling和Walbot编辑, Springer, N.Y.(1994)。

在一个实施方案中，增加的表达可以通过使用基因编辑或定向诱变来实现。

方法可以包括在植物内表达多核苷酸（例如外源多核苷酸），所述多核苷酸含有编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列。

多核苷酸序列可以包含如SEQ ID NO：3、4、5、6、9、10所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的核酸序列。

核酸序列可以与异源启动子可操作地连接以指导所述核酸序列在所述植物中的转录。

在一些实施方案中，启动子可以选自：组成型启动子、组织特异性启动子、发育调节型启动子和诱导型启动子。

在一个实施方案中，启动子可以是组成型启动子。

组成型启动子在植物发育过程中持续地在整个植物的各个部分中指导基因的表达，尽管所述基因在所有细胞类型中可能不以相同水平表达。已知的组成型启动子的实例包括与以下相关的那些：花椰菜花叶病毒35S转录物(Odell JT, Nagy F, Chua NH.(1985).Identification of DNA sequences required for activity of thecauliflower mosaic virus 35S promoter.Nature.313 810-2)、稻肌动蛋白1基因(ZhangW, McElroy D, Wu R. (1991).Analysis of rice Act1 5' region activity intransgenic rice plants.Plant Cell 3 1155-65)和玉米泛素1基因(Cornejo MJ, LuthD, Blankenship KM, Anderson OD, Blechl AE.(1993).Activity of a maizeubiquitin promoter in transgenic rice.Plant Molec.Biol.23 567-81)。组成型启动子诸如香石竹蚀环病毒(CERV)启动子(Hull R, Sadler J, LongstaffM (1986) Thesequence of carnation etched ring virus DNA: comparison with cauliflowermosaic virus and retroviruses.EMBO Journal, 5(2):3083-3090)。

组成型启动子可以选自：香石竹蚀环病毒（CERV）启动子、花椰菜花叶病毒（CaMV35S启动子）、来自稻肌动蛋白1基因或玉米泛素1基因的启动子。

启动子可以是组织特异性启动子。在一个实施方案中，启动子是侧生分生组织特异性启动子。

组织特异性启动子是指导基因在植物的一个（或几个）部分表达的启动子，通常在这些植物部分的整个寿命期间。组织特异性启动子的种类通常还包括其特异性不是绝对的启动子，即它们也可以在优选组织以外的组织中指导较低水平的表达。

侧生分生组织特异性启动子的一个实例由WO 2006/035221提供。

在另一个实施方案中，启动子可以是发育调节型启动子。

发育调节型启动子在植物发育期间的特定时间指导植物的一个或多个部分中基因表达的改变。基因可以在其他时候以不同的（通常较低的）水平在该植物部分中表达，并且也可以在其他植物部分中表达。

在一个实施方案中，启动子可以是诱导型启动子。

诱导型启动子能够响应诱导物而指导基因的表达。在没有诱导物的情况下，基因不会被表达。诱导物可以直接作用于启动子序列，或者可以通过抵消阻抑蛋白分子的作用而起作用。诱导物可以是化学试剂例如代谢物、蛋白、生长调节剂或有毒元素，生理应激例如热、创伤或渗透压，或者病原体或害虫的作用的间接结果。发育调节型启动子可以被描述为对由植物产生的内源诱导物或植物生命周期中特定时间点的环境刺激物起反应的特定类型的诱导型启动子。已知的诱导型启动子的实例包括与以下相关的那些：创伤反应，诸如由Warner SA, Scott R, Draper J.所述((1993) Plant J. 3 191-201)，如由Benfey和Chua (1989)所公开的温度响应 (Benfey, P.N.,和Chua, N-H. ((1989) Science 244174-181)以及化学诱导，如由Gatz所述((1995) Methods in Cell Biol.50 411-424)。

本发明还提供包含编码蛋白的核酸序列的构建体或载体，所述蛋白包含如SEQ IDNO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列，如本文所限定的。

本发明进一步提供编码蛋白的核酸序列增加和/或促进植物中侧向出芽的用途，所述蛋白包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。

本发明还提供包含与编码蛋白的核酸序列可操作地连接的启动子的嵌合构建体，所述蛋白包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列，如本文所限定的。

合适的启动子序列可以是组成型、非组成型、组织特异性、发育调节型或诱导型/可阻抑型的。

在一个实施方案中，合适的启动子可以是选自以下的启动子：花椰菜花叶病毒35S启动子、香石竹蚀环病毒（CERV）启动子、豌豆质体蓝素启动子、rubisco启动子、胭脂碱合酶启动子、叶绿素a/b结合启动子、高分子量麦谷蛋白启动子、α、β-麦醇溶蛋白启动子、大麦醇溶蛋白启动子、patatin启动子或衰老特异性启动子。

构建体可以包含在载体中。合适地，载体可以是质粒。

可以通过合适的载体例如植物转化载体将外源多核苷酸引入根据本发明的植物中。植物转化载体可以包含表达盒，所述表达盒在转录方向上5'-3'包含：启动子序列、目的基因（例如编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列）编码序列、任选地包括内含子，和任选地3'非翻译终止子序列，所述终止子序列包括用于RNA聚合酶的终止信号和用于聚腺苷酸化酶的聚腺苷酸化信号。启动子序列可以以一个或多个拷贝存在，并且这样的拷贝可以是相同的或如上所述的启动子序列的变体。终止子序列可以从植物、细菌或病毒基因获得。例如，合适的终止子序列是豌豆rbcS E9终止子序列、来源于根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的胭脂碱合酶基因的nos终止子序列和来自花椰菜花叶病毒的35S终止子序列。本领域技术人员将容易地意识到其他合适的终止子序列。

表达盒还可以包含提高启动子强度的基因表达增强机制。这种增强子元件的一个实例是来源于豌豆质体蓝素基因启动子的一部分的增强子元件，并且其是国际专利申请号WO 97/20056的主题。例如，合适的增强子元件可以是来源于根癌土壤杆菌的胭脂碱合酶基因的nos增强子元件和来自花椰菜花叶病毒的35S增强子元件。这些调控区可以与启动子DNA序列来源于相同的基因，或者可以来源于不同的基因，例如来源于茄科（Solanaceae）的植物。所有调控区都应该能够在待转化组织的细胞中起作用。

启动子DNA序列可以与本发明中使用的目的基因（例如启动子将要指导的基因，例如编码植物修饰以增加包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的活性或表达的基因）编码序列来源于相同的基因，或者可以来源于不同的基因，例如来源于茄科的植物。

可以将表达盒整合到基础植物转化载体中，例如pBIN 19 Plus、pBI 101或本领域已知的其他合适的植物转化载体。除表达盒之外，植物转化载体将含有如转化过程所需的这样的序列。这些序列可包括土壤杆菌vir基因、一个或多个T-DNA边界序列、以及可选择标记物或鉴定转基因植物细胞的其他手段。

术语“植物转化载体”是指能够体内或体外表达的构建体。优选地，表达载体被整合到生物的基因组中。术语“整合的”优选涵盖稳定整合入基因组。

用于转化植物的技术在本领域中是众所周知的，并且包括例如土壤杆菌介导的转化。遗传修饰植物的构建的基本原则是在植物基因组中插入遗传信息，从而获得插入的遗传物质的稳定维持。在Potrykus(Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol [1991] 42:205-225)和Christon (AgroFood-Industry Hi-Tech March/April1994 17-27)的文章中可以找到关于一般技术的综述。

通常，在土壤杆菌介导的转化中，通过将土壤杆菌与来自目标植物的外植体共培养，将携带目的外源DNA的双元载体从合适的土壤杆菌菌株转移至目标植物中。然后在选择培养基上再生转化的植物组织，所述选择培养基包含可选择标记物和植物生长激素。可选择的方法是花浸法（Clough＆Bent，1998），其中使完整植物的花芽与含有嵌合基因的土壤杆菌菌株的悬浮液接触，并且在种子形成后，使转化的个体萌发并在选择性培养基上通过生长鉴定。通过土壤杆菌直接感染植物组织是简单的技术，其已被广泛采用并且其描述于Butcher D. N. 等人, (1980), Tissue Culture Methods for Plant Pathologists, 编辑:D. S. Ingrams和J.P. Helgeson, 203-208。

其他合适的转化方法包括使用聚乙二醇或电穿孔技术、粒子轰击、微量注射以及例如使用碳化硅纤维将基因直接转移到原生质体中。

使用弹道转化(ballistic transformation)包括碳化硅晶须技术转化植物教导于Frame B R, Drayton P R, Bagnaall S V, Lewnau C J, Bullock W P, Wilson H M,Dunwell J M, Thompson J A & Wang K (1994)。通过碳化硅晶须介导的转化产生可育的转基因玉米植物教导于The Plant Journal 6:941-948)并且病毒转化技术教导于例如Meyer P, Heidmmm I & Niedenhof I (1992)。木薯花叶病毒作为植物的载体系统的用途教导于Gene 110:213-217。关于植物转化的其他教导可见于EP-A-0449375。

在进一步的方面，本发明涉及载体系统，其携带编码目的基因（例如编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的核酸序列）并将其引入生物如植物的基因组中的核苷酸序列。载体系统可以包含一种载体，但它也可以包含两种载体。在两种载体的情况下，载体系统通常被称为双元载体系统。双元载体系统更详细地描述于Gynheung Anetal, (1980), Binary Vectors, Plant MolecularBiology Manual A3, 1-19。

用于转化植物细胞的一种广泛使用的系统使用来自根癌土壤杆菌的Ti质粒或来自发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes)的Ri质粒Anetal., (1986), PlantPhysiol.81, 301-305和Butcher D. N. 等人, (1980), Tissue Culture Methods forPlant Pathologists, 编辑:D. S. Ingrams和J.P. Helgeson, 203-208。在植物中根据本发明的期望的外源基因的每种引入方法之后，进一步的DNA序列的存在和/或插入可能是必需的。T-DNA用于转化植物细胞的用途已经被深入研究，并描述于EP-A-120516；Hoekema,于:The Binary Plant Vector System Offset-drukkerij Kanters B. B., Amsterdam,1985, 第V章；Fraley,等人, Crit.Rev. Plant Sci., 4:1-46；和Anetal., EMBO J(1985) 4:277-284。

用编码目的蛋白（例如包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白）的外源基因转化的植物细胞可以根据众所周知的组织培养方法生长并维持，例如通过在提供有必需生长因子如氨基酸、植物激素、维生素等的合适培养基中培养细胞。

与本发明相关的术语“转基因植物”包括包含编码目的基因例如包含如SEQ IDNO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白（如本文所述的）的外源基因的任何植物。优选地，外源基因被整合到植物的基因组中。

术语“转基因植物”和“外源基因”不涵盖当天然核苷酸编码序列在其天然启动子（所述启动子也在其天然环境中）的控制下时的在其天然环境中的所述天然核苷酸编码序列。

因此，在一个实施方案中，本发明涉及产生转基因植物的方法，所述方法包括将编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白的外源基因（嵌合构建体或载体）引入未修饰的植物。

在一个实施方案中，本发明涉及产生转基因植物的方法，所述方法包括用包含核酸的构建体或载体（例如嵌合构建体）转化植物细胞，所述核酸编码包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的蛋白；和从转化的植物细胞再生植物。

根据本发明的外源核酸序列（构建体或载体或嵌合构建体）用于增加或促进植物中的侧向出芽的用途，例如通过用所述外源核酸序列（构建体或载体或嵌合构建体）转化植物。

在如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的序列中的突变可以相对于如SEQ ID NO：1、2、7、8或与其具有至少70％序列同一性的序列所示的蛋白增加蛋白的活性。

在如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70％序列同一性的序列中的突变可以相对于如SEQ ID NO：1、2、7、8或与其具有至少70％序列同一性的序列所示的蛋白不改变蛋白的水平或表达但可以增加蛋白的活性。

商业上期望的性状

术语“商业上期望的性状”将包括性状诸如产量、品质、非生物（例如干旱）胁迫耐受性、除草剂耐受性和/或生物（例如昆虫、细菌或真菌）胁迫耐受性。

植物培育

在一个实施方案中，本发明提供了产生具有减少的侧向出芽的植物的方法，其包括：

a. 将具有减少的侧向出芽的供体植物与受体植物杂交，其中所述供体植物包含减少或阻止含有如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70%同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能的突变，所述受体植物不具有减少的侧向出芽并且具有商业上期望的性状；

b. 从与所述受体植物杂交的所述供体植物的后代分离遗传物质；和

C. 用分子标记物进行分子标记物辅助的选择，其包括：

i. 鉴定包含减少或阻止含有如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70%同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能的突变的渗入区域(introgressedregion)。

在一个实施方案中，本发明提供了产生具有增加的侧向出芽的植物的方法，其包括：

a. 将具有增加的侧向出芽的供体植物与不具有增加的侧向出芽并具有商业上期望的性状的受体植物杂交；

C. 用分子标记物进行分子标记物辅助的选择，其包括：

i. 鉴定包含增加含有如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70%同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能的突变的渗入区域。

分子标记物辅助的选择可以包括进行PCR以鉴定包含减少、阻止或增加含有如SEQID NO：1、2、7、8所示的氨基酸序列或与其具有至少70%同一性的氨基酸序列的蛋白的表达或功能的突变的渗入核酸序列。

植物

在一个实施方案中，本文中提及的植物是茄科的。

具体而言，植物可以是Cestoideae亚科的。例如，植物可以是番茄、马铃薯、茄子、矮牵牛或烟草植物。

可以认为与如SEQ ID NO：1和2所示的氨基酸序列同源的番茄和马铃薯氨基酸序列的实例具有登录号NP_001303847和XP_006351136.1。这些氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7（番茄(Solanum lycopersicum)）和SEQ ID NO: 8（马铃薯(Solanum tuberosum)）所示。

SEQ ID NO:7具有与SEQ ID NO:1 88%的同一性和与SEQ ID NO:2 86%的同一性。SEQ ID NO:8具有与SEQ ID NO:1和2 88%的序列同一性。

可以认为与编码SEQ ID NO：1和2的核酸序列同源的番茄和马铃薯核酸序列的实例是如登录号NM_001246833.2和XM_006351074给出的核酸序列。衍生于这些序列的预测的编码序列分别如SEQ ID NO: 9（番茄(Solanum lycopersicum)）和SEQ ID NO: 10（马铃薯(Solanum tuberosum)）所示。

SEQ ID NO:9具有与SEQ ID NO:5和6 88%的序列同一性。SEQ ID NO:10具有与SEQID NO:5和6 89%的序列同一性。

烟草植物

在一个实施方案中，植物是烟草植物。

在一个实施方案中，本发明提供针对烟草植物的方法、用途以及烟草细胞、烟草植物和植物繁殖材料。

在其中植物是烟草植物的实施方案中，蛋白包含如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的序列。

在优选的实施方案中，通过根据本发明的方法减少烟草植物中的侧向出芽。具体而言，在优选的实施方案中，本发明提供了减少烟草植物中侧向出芽的方法，所述方法包括减少或阻止包含如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的序列的蛋白的表达或功能。

如本文所用的术语“烟草植物”是指用于生产烟草产品的烟草属(Nicotiana)的植物。合适的烟草植物的非限制性实例包括普通烟草(N. tabacum)和黄花烟草(N. rustica)（例如LA B21、LN KY171、Tl 1406、Basma、Galpao、Perique、Beinhart 1000-1和Petico）。不旨在将术语“烟草”延伸至不能用于生产烟草产品的烟草属物种。

因此，在一个实施方案中，烟草植物的确包括皱叶烟草(Nicotiana plumbaginifolia)。

烟草材料可以来源于普通烟草物种的多种品种，通常称为白肋烟(Burley)品种、烟道或浅色(flue or bright)品种、深色(dark)品种和东方/土耳其(oriental/Turkish)品种。在一些实施方案中，烟草材料来源于白肋烟、弗吉尼亚、烟道烤制的(flue-cured)、晾制的(air-cured)、明火烤制的(fire-cured)、东方的或深色烟草植物。烟草植物可选自马里兰烟草、稀有烟草、特种烟草、膨胀烟草等。

本文也考虑烟草栽培种和优质烟草栽培种的使用。用于本文的烟草植物因此可以是烟草品种或优质烟草栽培种。

特别有用的普通烟草品种包括白肋烟型、深色型、烟道烤制型和东方型烟草。

在一些实施方案中，烟草植物可以例如选自以下品种中的一种或多种：普通烟草AA 37-1、普通烟草B 13P、普通烟草Xanthi (Mitchell-Mor)、普通烟草KT D#3 Hybrid107、普通烟草Bel-W3、普通烟草79-615、普通烟草Samsun Holmes NN, 来自普通烟草BU21x 普通烟草Hoja Parado杂交的F4, 株系97、普通烟草KTRDC#2 Hybrid 49、普通烟草KTRDC#4 Hybrid 1 10、普通烟草Burley 21、普通烟草PM016、普通烟草KTRDC#5 KY 160SI、普通烟草KTRDC#7 FCA、普通烟草KTRDC#6 TN 86 SI、普通烟草PM021、普通烟草K 149、普通烟草K 326、普通烟草K 346、普通烟草K 358、普通烟草K 394、普通烟草K 399、普通烟草K 730、普通烟草KY 10、普通烟草KY 14、普通烟草KY 160、普通烟草KY 17、普通烟草KY8959、普通烟草KY 9、普通烟草KY 907、普通烟草MD 609、普通烟草McNair 373、普通烟草NC2000、普通烟草PG 01、普通烟草PG 04、普通烟草P01、普通烟草P02、普通烟草P03、普通烟草RG 1 1、普通烟草RG 17、普通烟草RG 8、普通烟草Speight G-28、普通烟草TN 86、普通烟草TN 90、普通烟草VA 509、普通烟草AS44、普通烟草Banket A1、普通烟草Basma Drama B84/31、普通烟草Basma I Zichna ZP4/B、普通烟草Basma Xanthi BX 2A、普通烟草Batek、普通烟草Besuki Jember、普通烟草C104、普通烟草Coker 319、普通烟草Coker 347、普通烟草Criollo Misionero、普通烟草PM092、普通烟草Delcrest、普通烟草Djebel 81、普通烟草DVH 405、普通烟草Galpao Comum、普通烟草HB04P、普通烟草Hicks Broadleaf、普通烟草Kabakulak Elassona、普通烟草PM102、普通烟草Kutsage E1、普通烟草KY 14xL8、普通烟草KY 171、普通烟草LA BU 21、普通烟草McNair 944、普通烟草NC 2326、普通烟草NC 71、普通烟草NC 297、普通烟草NC 3、普通烟草PVH 03、普通烟草PVH 09、普通烟草PVH 19、普通烟草PVH 21 10、普通烟草Red Russian、普通烟草Samsun、普通烟草Saplak、普通烟草Simmaba、普通烟草Talgar 28、普通烟草PM132、普通烟草Wislica、普通烟草Yayaldag、普通烟草NC4、普通烟草TR Madole、普通烟草Prilep HC-72、普通烟草Prilep P23、普通烟草Prilep PB156/1、普通烟草Prilep P12-2/1、普通烟草Yaka JK-48、普通烟草Yaka JB 125/3、普通烟草ΤΊ-1068、普通烟草KDH-960、普通烟草TI-1070、普通烟草TW136、普通烟草PM204、普通烟草PM205、普通烟草Basma、普通烟草TKF 4028、普通烟草L8、普通烟草TKF 2002、普通烟草TN90、普通烟草GR141、普通烟草Basma xanthi、普通烟草GR149、普通烟草GR153和普通烟草Petit Havana。

品种或栽培种的非限制性实例是：BD 64、CC 101 、CC 200、CC 27、CC 301 、CC400、CC 500、CC 600、CC 700、CC 800、CC 900、Coker 176、Coker 319、Coker 371 Gold、Coker 48、CD 263、DF91 1 、DT 538 LC Galpao烟草、GL 26H、GL 350、GL 600、GL 737、GL939、GL 973、HB 04P、HB 04P LC、HB3307PLC、Hybrid 403LC、Hybrid 404LC、Hybrid 501LC、K 149、K 326、K 346、K 358、K394、K 399、K 730、KDH 959、KT 200、KT204LC、KY10、KY14、KY 160、KY 17、KY 171 、KY 907、KY907LC、KTY14xL8 LC、Little Crittenden、McNair 373、McNair 944、msKY 14xL8、窄叶Madole、窄叶Madole LC、NBH 98、N-126、N-777LC、N-7371LC、NC 100、NC 102、NC 2000、NC 291 、NC 297、NC 299、NC 3、NC 4、NC 5、NC 6、NC7、NC606、NC 71 、NC 72、NC 810、NC BH 129、NC 2002、Neal Smith Madole、OXFORD 207、PD7302 LC、PD 7309 LC、PD 7312 LC 'Periq'e'烟草、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51 、R610、R 630、R 7-1 1 、R 7-12、RG 17、RG 81 、RG H51 、RGH 4、RGH 51 、RS 1410、Speight168、Speight 172、Speight 179、Speight 210、Speight 220、Speight 225、Speight 227、Speight 234、Speight G-28、Speight G-70、Speight H-6、Speight H20、Speight NF3、Tl1406、Tl 1269、TN 86、TN86LC、TN 90、TN 97、TN97LC、TN D94、TN D950、TR (Tom Rosson)Madole、VA 309、VA359、AA 37-1 、B 13P、Xanthi (Mitchell-Mor)、Bel-W3、79-615、SamsunHolmes NN、KTRDC第2 杂交种 49、Burley 21 、KY 8959、KY 9、MD 609、PG 01 、PG 04、P01、P02、P03、RG 1 1 、RG 8、VA 509、AS44、Banket A1 、Basma Drama B84/31 、Basma IZichna ZP4/B、Basma Xanthi BX 2A、Batek、Besuki Jember、C104、Coker 347、CriolloMisionero、Delcrest、Djebel 81 、DVH 405、Galpao Comum、HB04P、Hicks Broadleaf、Kabakulak Elassona、Kutsage E1 、LA BU 21 、NC 2326、NC 297、PVH 21 10、RedRussian、Samsun、Saplak、Simmaba、Talgar 28、Wislica、Yayaldag、Prilep HC-72、PrilepP23、Prilep PB 156/1 、Prilep P12-2/1 、Yaka JK-48、Yaka JB 125/3、TI-1068、KDH-960、Tl-1070、TW136、Basma、TKF 4028、L8、TKF 2002、GR141 、Basma xanthi、GR149、GR153、Petit Havana。即使本文没有具体指出，也可以考虑上述的低转化子亚变种(Lowconverter subvarieties)。

在一个实施方案中，烟草植物是白肋烟型烟草植物，合适地是白肋烟PH2517。

在一个实施方案中，植物繁殖材料可以可获自本发明的烟草植物。

如本文所用的“植物繁殖材料”是指由其可以产生进一步的植物的从植物获取的任何植物物质。

合适地，植物繁殖材料可以是种子。

在一个实施方案中，烟草细胞、烟草植物和/或植物繁殖材料可以通过根据本发明的方法可获得（例如获得）。在一个实施方案中，本发明的烟草细胞、烟草植物和/或植物繁殖材料可以在编码包含如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的序列或与其具有至少70%序列同一性的序列的蛋白的核酸序列中包含突变。

合适地，当与未修饰的烟草植物相比，根据本发明的烟草植物可以具有减少的侧向出芽，其中所述修饰是减少或阻止包含如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的序列或与其具有至少70%序列同一性的序列的蛋白的表达。

在一个实施方案中，根据本发明的烟草植物包含本发明的烟草细胞。

在另一个实施方案中，植物繁殖材料可以可获自（例如获得自）本发明的烟草植物。

在一个实施方案中，提供了如前述实施方案中提供的烟草细胞用于生产烟草产品的用途。

此外，提供了如本文所述的烟草植物用于培育烟草植物的用途。

在另一个实施方案中，本发明还提供了前述实施方案的烟草植物用于生产烟草产品的用途。

在另一个实施方案中，提供了本发明的烟草植物用于生长作物的用途。

产品

本发明还提供了可获自或获得自根据本发明的烟草的产品。

在一个实施方案中，提供了本发明的烟草植物用于生产烟叶的用途。

合适地，烟叶可以经受下游应用诸如加工。因此，在一个实施方案中，前述实施方案的使用可以提供加工的烟叶。合适地，烟叶可以经受调制、发酵、巴氏灭菌或其组合。

在另一个实施方案中，烟叶可以被切割。在一些实施方案中，烟叶可以在经受调制、发酵、巴氏灭菌或其组合之前或之后被切割。

在一个实施方案中，本发明提供本发明的烟草植物的收获的叶。

在进一步的实施方案中，收获的叶可以可获自（例如获得自）从本发明的繁殖材料繁殖的烟草植物。

在另一个实施方案中，提供了可获自本发明的方法或用途的收获的叶。

合适地，收获的叶可以是切割的收获的叶。

在一些实施方案中，收获的叶可以包含活的烟草细胞。在其他实施方案中，收获的叶可以经受进一步加工。

还提供加工的烟叶。

加工的烟叶可以可获自本发明的烟草植物。合适地，加工的烟叶可以可获自根据本发明的任何方法和/或用途获得的烟草植物。

在另一个实施方案中，加工的烟叶可以可获自从根据本发明的烟草植物繁殖材料繁殖的烟草植物。

本发明的加工的烟叶可以通过加工本发明的收获的叶而可获得。

如本文所使用的术语“加工的烟叶”是指已经历了本领域中烟草经受的一个或多个加工步骤的烟叶。“加工的烟叶”不包含或实质上不包含活细胞。

术语“活细胞”是指能够生长和/或具有代谢活性的细胞。因此，如果一个细胞被认为不是活的，也称为“无活力的”，那么细胞不会显示活细胞的特征。

术语“实质上无活细胞”是指小于约5％的全部细胞是活的。优选地，小于约3％、更优选小于约1％、甚至更优选小于约0.1％的全部细胞是活的。

在一个实施方案中，加工的烟叶可以通过以下一种或多种来加工：调制、发酵和/或巴氏灭菌。

合适地，加工的烟叶可以通过调制来加工。

烟叶可以通过本领域已知的任何方法来调制。在一个实施方案中，烟叶可以通过选自以下的调制方法中的一种或多种来调制：晾制、明火烤制、烟道烤制和晒制。

合适地，烟叶可以是晾制的。

通常，晾制通过将烟叶悬挂在充分通风的仓房中并允许干燥来实现。这通常在四到八周的时间内进行。晾制特别适合于白肋烟。

合适地，烟叶可以明火烤制。明火烤制通常通过以下来实现，将烟叶悬挂在大型仓房中，其中取决于工艺和烟草，以持续或间歇性低闷烧(low smoulder)保持硬木火焰，且通常需要三天至十周。

在另一个实施方案中，烟叶可以烟道烤制。烟道烤制可以包括将烟叶串到烟草梗上并将它们从烤架(tier-poles)上悬挂在烤房中。仓房通常具有一个从外部供料的火箱进入的烟道。通常，这产生已经被热烤而不暴露于烟的烟草。通常，温度会在调制过程中缓慢升高，且整个过程大约需要1周。

合适地，烟叶可以被晒制。这种方法通常涉及将未覆盖的烟草暴露在太阳下。

合适地，加工的烟叶可以通过发酵来加工。

可以以本领域已知的任何方式进行发酵。通常，在发酵过程中，将烟叶堆积成覆盖在例如麻袋内的烤烟垛（堆）以保留水分。叶内剩余水分与烟草重量的组合产生使烟草成熟的自然热量。每天监测堆中心的温度。在一些方法中，每周将整个堆打开。然后移动叶以摇动和润湿，并将堆翻转，使得内部叶到外面且底部叶放置于堆的顶部。这确保了整个堆的均匀发酵。叶上的额外水分加上叶本身的实际翻转产生热量，释放烟草的天然氨并减少尼古丁，同时也加深了颜色并改善了烟草的香气。通常，发酵过程持续长达6个月，这取决于烟草的品种、叶上的秆位置、叶的厚度和预期用途。

合适地，加工的烟叶可以通过巴氏灭菌来加工。当烟叶将用于制造无烟烟草产品（最优选鼻烟）时，可以特别优选巴氏灭菌。

烟叶巴氏灭菌可以通过本领域已知的任何方法进行。例如，巴氏灭菌可以如以下中详述进行：J Foulds, L Ramstrom, M Burke, K Fagerstrom.Effect of smokelesstobacco (snus) on smoking and public health in Sweden. Tobacco Control (2003)12:349–359，其教导通过引用并入本文。

在鼻烟生产期间，通常通过其中用蒸汽对烟草热处理24-36小时（达到大约100℃的温度）的过程来进行巴氏灭菌。这产生几乎无菌的产品，并且不希望受到理论的束缚，这样的后果之一被认为是限制进一步的TSNA形成。

在一个实施方案中，巴氏灭菌可以是蒸汽巴氏灭菌。

在一些实施方案中，加工的烟叶可以被切割。加工的烟叶可以在加工之前或之后被切割。合适地，加工的烟叶可以在加工后被切割。

在一些实施方案中，烟草植物、烟草植物的收获的叶和/或加工的烟叶可用于提取尼古丁。尼古丁的提取可以使用本领域已知的任何方法来实现。例如，从烟草中提取尼古丁的方法教导于US 2,162,738，其通过引用并入本文。

在另一方面，本发明提供了烟草产品。

在一个实施方案中，烟草产品可以从本发明的烟草植物或其部分制备。

合适地，烟草植物或其部分可以从根据本发明的烟草植物繁殖材料繁殖。

如本文在烟草植物上下文中使用的术语“其部分”是指烟草植物的部分。优选地，“其部分”是烟草植物的叶。

在另一个实施方案中，烟草产品可以从本发明的收获的叶制备。

在进一步的实施方案中，烟草产品可以从本发明的加工的烟叶制备。

合适地，烟草产品可以从通过以下中一种或多种加工的烟叶制备：调制、发酵和/或巴氏灭菌。

合适地，烟草产品可以包含切丝烟叶，任选地，其根据前述实施方案加工。

在一个实施方案中，烟草产品可以是吸烟制品。

如本文所用，术语“吸烟制品”可包括可点燃抽吸产品，例如卷烟、香烟、雪茄和小雪茄，无论是基于烟草、烟草衍生物、膨胀烟草、再造烟草或烟草替代品。

在另一个实施方案中，烟草产品可以是无烟烟草产品。

如本文所用的术语“无烟烟草产品”是指不旨在被点燃抽吸和/或经受燃烧的烟草产品。在一个实施方案中，无烟烟草产品可以包括鼻烟(snus)、鼻烟(snuff)、嚼用烟草等。

在进一步的实施方案中，烟草产品可以是烟草加热装置。

通常，在加热的吸烟制品中，通过将热量从热源传递到物理上分离的气溶胶形成基材或材料（其可位于热源内部、周围或下游）而产生气溶胶。在吸烟过程中，挥发性化合物通过来自热源的热传递而从气溶胶形成基材释放并且夹带在通过吸烟制品吸入的空气中。当释放的化合物冷却时，它们冷凝形成被使用者吸入的气溶胶。

用于消耗或吸烟烟草加热装置的气溶胶产生物品和装置在本领域中是已知的。它们可以包括例如电加热的气溶胶产生装置，其中通过将热量从气溶胶产生装置的一个或多个电加热元件传递到烟草加热装置的气溶胶形成基材而产生气溶胶。

合适地，烟草加热装置可以是气溶胶产生装置。

优选地，烟草加热装置可以是加热但不燃烧装置(heat-not-burn device)。加热但不燃烧装置在本领域中是已知的，并且通过加热而不是燃烧烟草来释放化合物。

合适的加热但不燃烧装置的实例可以是WO2013/034459或GB2515502中教导的装置，所述公开通过引用并入本文。

在一个实施方案中，烟草加热装置的气溶胶形成基材可以是根据本发明的烟草产品。

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有如本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。Singleton, 等人, DICTIONARY OF MICROBIOLOGY ANDMOLECULAR BIOLOGY, 20 ED., John Wiley and Sons, New York (1994)和Hale &Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991)为技术人员提供了本公开中所用的众多术语的一般字典。

本公开不受本文公开的示例性方法和材料的限制，并且与本文所述的那些相似或等同的任何方法和材料可以用于本公开的实施方案的实践或测试中。数值范围包括定义范围的数字。除非另有说明，否则分别地，任何核酸序列均以5'至3'的方向从左至右书写；氨基酸序列以氨基到羧基方向从左到右书写。

本文提供的标题不是对本公开的各个方面或实施方案的限制，其可作为整体参考说明书而具有。因此，下文直接定义的术语通过参考说明书整体更全面地定义。

氨基酸在本文中使用氨基酸的名称、三字母缩写或单字母缩写来提及。

如本文所用，术语“蛋白”包括蛋白、多肽和肽。

如本文所用，术语“氨基酸序列”与术语“多肽”和/或术语“蛋白”是同义的。在一些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“肽”是同义的。

术语“蛋白”和“多肽”在本文中可互换使用。在本公开和权利要求书中，可以使用氨基酸残基的常规单字母和三字母代码。氨基酸的3字母代码如按照IUPACIUB生物化学命名联合委员会（IUPACIUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, JCBN）所定义。还应理解的是，由于遗传密码的简并性，多肽可由多于一种核苷酸序列编码。

术语的其他定义可以在整个说明书中出现。在更详细地描述示例性实施例之前，应理解的是，本公开不限于所描述的特定实施方案，因此当然可以变化。还应理解本文所用的术语学仅用于描述具体实施方案的目的，并不旨在是限制性的，这是由于本公开的范围仅由所附的权利要求书来限定。

在提供数值范围的情况下，应该理解的是，除非上下文另有明确规定，否则在该范围的上限和下限之间的每个介于中间的值至下限单位的十分之一也被具体公开。在规定范围内的任何规定值或介于中间的值与该规定范围内的任何其他规定值或介于中间的值之间的每个较小范围包含在本公开内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在该范围内或从该范围排除，并且其中在较小范围内包括任一限值、不包括限值或包括两个限值的每一范围也包括在本公开中，服从于规定范围中任何具体排除的限值。在规定范围包括一个或两个限值的情况下，排除这些所包括的限值中的任一个或两个的范围也包括在本公开中。

必须注意如本文和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一个/种(a、an)”和“所述/该”包括复数指示物，除非上下文另外明确指出。因此，例如，提及“蛋白”或“核酸序列”包括多种本领域技术人员已知的此类候选试剂及其等同物等等。

提供本文讨论的出版物仅用于其在本申请的申请日之前的公开内容。本文中任何内容都不应被解释为承认此类出版物构成了本文所附权利要求书的现有技术。

现在将参考以下附图和实施例仅以实例的方式描述本发明。

实施例

实施例1-具有减少的侧向出芽的突变的普通烟草植物

将两个可读框鉴定为参与普通烟草中侧向出芽的候选蛋白。

候选可读框的生物信息学分析鉴定了基因组序列(SEQ ID NO: 3和4)、编码序列(cds) (SEQ ID NO: 5和6)和预测的氨基酸序列(SEQ ID NO: 1和2)。

产生在第一候选可读框(SEQ ID NO: 1)中具有提前的终止突变的K326普通烟草突变体，并通过Sanger测序进行验证。突变体包含基因组序列(SEQ ID NO: 3)中的C2340T突变，其导致在cds (SEQ ID NO: 5)中的C868T突变和在氨基酸序列(SEQ ID NO: 1)的290位的提前的终止密码子。将该突变体称为TFA1255。

从该突变产生的成熟蛋白如SEQ ID NO: 11所示，其从SEQ ID NO: 1的C末端缺少194个氨基酸。

产生在第二候选可读框(SEQ ID NO: 2)中引入非可接受的氨基酸取代的K326普通烟草突变体，并通过Sanger测序进行验证。突变体包含基因组序列(SEQ ID NO: 4)中的C1436T突变，其导致在cds (SEQ ID NO: 6)中的C350T突变和在SEQ ID NO: 2的117位的Ser至Phe取代（S117F）。将该突变体称为TFA0321。

数字表型分析

TFA1255和TFA0321纯合植物和对照K326植物在具有通用盆栽土壤的3升盆中生长。植物生长11周，随后转移至带(belt)上。在第8-12叶期，将植物打顶并修剪叶片。不管是否达到开花，所有植物都在同一时间打顶。打顶时，将除了底部的两片或三片叶之外的所有叶都从植物中去除。

打顶后，将植物每天成像一次，持续14天。使用RGB相机从以9、90、180和270°旋转的四个侧角拍摄每日图像，并从顶部拍摄一张图像。使用像素计数来测定实验期间的腋芽生长。使用所得的经清洁的检测像素大小数据集来拟合生长模型，从中估计不同基因型的生长速率（像素的每日增加）。比较这些速率以推断基因型之间的差异。将生长模型应用于每个植物*角度组合，并在适当时对相关因素如温室位置进行校正后获得基因型平均值。

这些结果表明，与对照K326植物相比，TFA1255植物（图1）和TFA0321植物（图2）具有减少的和/或延迟的侧向出芽（出腋芽）。

传统生物质表型分析

TFA1255和TFA032植物和对照K326植物以与上述数字表型分析相同的方式生长，不同之处在于在打顶前允许这些植物达到开花并且然后根据需要打顶。

每种植物在打顶后允许继续生长14天，此时将顶部三个腋芽去除，合并，干燥并称重。将该重量用作出腋芽表型的量度。

这些结果表明，与对照K326植物相比，TFA1255植物（图3）和TFA0321植物（图4）具有减少的侧向出芽（出腋芽）。

以上说明书中提及的所有出版物均通过引用并入本文。本发明所述的方法和系统的各种改变和变化对于本领域技术人员是显而易见的，且不会背离本发明的范围和精神。尽管本发明已经关于具体优选的实施方案进行了描述，但应理解要求保护的本发明不应过度地限于此类具体的实施方案。实际上，对于生物化学和生物技术或相关领域中的技术人员显而易见的用于进行本发明的所述方式的各种改变均旨在以下权利要求书的范围之内。

序列表

<110> British American Tobacco (Investments) Limited

<120> 修饰侧向出芽的方法

<130> P108758PCT

<150> GB 1600752.8

<151> 2016-01-15

<150> GB 1601042.3

<151> 2016-01-20

<160> 11

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 484

<212> PRT

<213> 普通烟草

<400> 1

Met Ala Thr Thr Gln Asn Arg Arg Ser Ser Val Ser Ser Ala Thr Ala

1 5 10 15

Lys Arg Gln Ala Met Thr Ala Asn Ser Ser Leu Glu Asn Asn Asn His

20 25 30

Gly Lys Leu Val Ala Lys Lys Arg Pro Ala Leu Thr Asn Ile Ser Asn

35 40 45

His Thr Thr Ala Ser Ala Arg Asn Ser Leu Ser His Ser Ser Lys Leu

50 55 60

Ala Pro Cys Thr Ser Lys Ala Val Ser Ile Lys Lys Ser Asn Ser Asn

65 70 75 80

Ala Ala Ser Ser Val Leu Pro Thr Ser Ser Phe Val Lys Pro Ile Ser

85 90 95

Lys Thr Val Ser Ile Pro Arg Ser Asp Ala Ala Ile Pro Lys Ile Thr

100 105 110

Ala Ile Pro Leu Pro Ala Thr Cys Ser Met Asp Ile Ser Pro Ser His

115 120 125

Ser Asp Gly Ser Leu Val Ser Met Asp Glu Thr Met Ser Thr Ser Asp

130 135 140

Ser Leu Arg Ser Pro Asp Val Glu Tyr Ile Asp Asp Asn Gln Thr Ala

145 150 155 160

Ala Phe Asp Ser Ile Glu Lys Lys Ala Phe Ser Thr Leu Tyr Ile Ser

165 170 175

Glu Asp Val Lys Ala Ala Ala Asp Ile Cys Lys Arg Asp Val Leu Val

180 185 190

Asp Ile Glu Ser Gly Asp Lys Ile Ala Asn Ile Asp Asn Asn Phe Val

195 200 205

Asp Pro Gln Leu Cys Ala Thr Met Ala Cys Asp Ile Tyr Lys His Leu

210 215 220

Arg Ala Thr Glu Val Lys Lys Arg Pro Ser Thr Asp Phe Met Glu Lys

225 230 235 240

Val Gln Lys Asp Ile Asn Ala Ser Met Arg Ala Ile Leu Ile Asp Trp

245 250 255

Leu Val Glu Val Ala Glu Glu Tyr Arg Leu Val Pro Asp Thr Leu Tyr

260 265 270

Leu Thr Val Asn Tyr Ile Asp Arg Tyr Leu Ser Gly Asn Leu Met Asp

275 280 285

Arg Gln Arg Leu Gln Leu Leu Gly Val Ala Cys Met Met Ile Ala Ser

290 295 300

Lys Tyr Glu Glu Ile Cys Ala Pro Gln Val Glu Glu Phe Cys Tyr Ile

305 310 315 320

Thr Asp Asn Thr Tyr Phe Lys Glu Glu Val Leu Gln Met Glu Ser Thr

325 330 335

Val Leu Asn Tyr Leu Lys Phe Glu Met Thr Ala Pro Thr Ala Lys Cys

340 345 350

Phe Leu Arg Arg Phe Val Arg Ala Ala Gln Gly Leu Asn Glu Val Leu

355 360 365

Ser Leu Gln Leu Glu His Leu Ala Ser Tyr Ile Ala Glu Leu Ser Leu

370 375 380

Leu Glu Tyr Asn Met Leu Cys Tyr Ala Pro Ser Val Ile Ala Ala Ser

385 390 395 400

Ala Ile Phe Leu Ala Lys Tyr Ile Leu Leu Pro Ser Lys Lys Pro Trp

405 410 415

Asn Ser Thr Leu Arg His Tyr Thr Leu Tyr Gln Pro Ser Asp Leu Arg

420 425 430

Asp Cys Val Val Ala Leu His Ser Leu Cys Cys Asn Asn Asn Asn Ser

435 440 445

Ser Leu Pro Ala Ile Arg Glu Lys Tyr Ser Gln His Lys Tyr Lys Phe

450 455 460

Val Ala Lys Lys Tyr Cys Pro Pro Thr Ile Pro Val Glu Phe Phe Gln

465 470 475 480

Asn Ile Ser Cys

<210> 2

<211> 482

<212> PRT

<213> 普通烟草

<400> 2

Met Ala Thr Thr Gln Asn Arg Arg Asn Ser Val Ser Ser Ala Val Ala

1 5 10 15

Lys Arg Gln Ala Met Ala Glu Asn Asn His Gly Lys Leu Pro Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Lys Lys Arg Pro Ala Leu Thr Asn Ile Ser Asn His Thr Thr

35 40 45

Ala Ser Ala Arg Asn Ser Leu Ser His Ser Ser Lys Leu Ala Pro Cys

50 55 60

Thr Ser Lys Val Val Ser Ile Lys Lys Asn Asn Ser Asn Ala Ala Ser

65 70 75 80

Ser Val Leu Pro Thr Ser Ser Ser Phe Val Lys Pro Ile Ser Lys Thr

85 90 95

Val Ser Leu Pro Arg Ser Asp Ala Ala Val Pro Lys Ile Thr Ala Ile

100 105 110

Pro Pro Leu Pro Ser Thr Cys Ser Met Asp Ile Ser Pro Ser His Ser

115 120 125

Asp Gly Ser Leu Val Ser Met Asp Glu Thr Met Ser Thr Ser Asn Ser

130 135 140

Leu Arg Ser Pro Asp Val Glu Tyr Ile Asp Asp Asn Gln Thr Ala Ala

145 150 155 160

Phe Asp Ser Ile Glu Lys Lys Ala Phe Ser Thr Leu Tyr Ile Ser Glu

165 170 175

Asp Val Lys Ala Ala Asp Ile Cys Lys Arg Asp Val Leu Val Asp Met

180 185 190

Glu Ser Gly Asp Lys Ile Ala Asn Ile Asp Asn Asn Leu Val Asp Pro

195 200 205

Gln Leu Cys Ala Thr Met Ala Cys Asp Ile Tyr Lys His Leu Arg Ala

210 215 220

Thr Glu Val Lys Lys Arg Pro Ser Thr Asp Phe Met Glu Lys Val Gln

225 230 235 240

Lys Asp Ile Asn Ala Ser Met Arg Ala Ile Leu Ile Asp Trp Leu Val

245 250 255

Glu Val Ala Glu Glu Tyr Arg Leu Val Pro Asp Thr Leu Tyr Leu Thr

260 265 270

Val Asn Tyr Ile Asp Arg Tyr Leu Ser Gly Asn Leu Met Asp Arg Gln

275 280 285

Arg Leu Gln Leu Leu Gly Val Ala Cys Met Met Ile Ala Ser Lys Tyr

290 295 300

Glu Glu Ile Cys Ala Pro Gln Val Glu Glu Phe Cys Tyr Ile Thr Asp

305 310 315 320

Asn Thr Tyr Phe Lys Glu Glu Val Leu Gln Met Glu Ser Thr Val Leu

325 330 335

Asn Tyr Leu Lys Phe Glu Met Thr Ala Pro Thr Ala Lys Cys Phe Leu

340 345 350

Arg Arg Phe Val Arg Ala Ala Gln Gly Leu Asn Glu Val Leu Ser Leu

355 360 365

Gln Leu Glu His Leu Ala Ser Tyr Ile Ala Glu Leu Ser Leu Leu Glu

370 375 380

Tyr Asn Met Leu Cys Tyr Ala Pro Ser Val Ile Ala Ala Ser Ala Ile

385 390 395 400

Phe Leu Ala Lys Tyr Ile Leu Leu Pro Ser Lys Lys Pro Trp Asn Ser

405 410 415

Thr Leu Arg His Tyr Thr Leu Tyr Gln Pro Ser Asp Leu Arg Asp Cys

420 425 430

Val Met Ala Leu His Ser Leu Cys Cys Asn Asn Asn Asn Ser Ser Leu

435 440 445

Pro Ala Ile Arg Glu Lys Tyr Ser Gln His Lys Tyr Lys Phe Val Ala

450 455 460

Lys Lys Tyr Cys Pro Pro Thr Ile Pro Val Glu Phe Phe Gln Asn Ile

465 470 475 480

Ser Cys

<210> 3

<211> 3953

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 3

aatttacaca cacatacttg taacagcttt cttctttctt cttcgttact tgatgaaacg 60

ttgttgataa tagaccctag tttttctaca taattacggt tgctaccatt tcgtaggagg 120

aaatggcgac gacccagaat agacgttcgt cagtttcgag tgcgacggca aagaggcaag 180

cgatgacggc taattcgtcg ttggagaata ataatcatgg gaaattggtg gccaagaaac 240

gaccagccct cactaatatc agtaatcata caactgcctc cgctcgtaac tcgctctctc 300

actcctccaa actcgtacgt tttttccctt ttttcttctc tattcaattt tccactgtaa 360

attttgtagc atttagaact tgttaattat gtggaatttt atctctagga aaaaaatagt 420

tcattttgct ctttttccag tgatatttct tctttgtgtt tttgaaacta gtttgatggt 480

tcttttgctt tttcattcat tacagttatt tatggaattt ttggaggggt tttcttgata 540

aatttttatg tgtacctggg cttcgaaacc cacccccccc cccccccacc cccacgccca 600

cccacccaaa aaaaaaatga agaagtagaa gtagaaagat tgaacatttt gctttgagga 660

tcatgaaaaa gatttgacgg tcttggatat gagaggattg cgggatttat ttttttgtca 720

agattttgat attcagatat tgaaattctt tgtttattga cttcccttat ataaccaagt 780

tccctgtttt tagcaggaaa tgcgtcagtt cggtttcttt gaaaaaaaaa aaagatcaag 840

taaattgact tgtgggtgga ttaaaaaaaa aaactatttt ggaataaaat attctatttt 900

tggtaaaaaa gcattctgaa tggaaaattt tgaaacatct tccccaaatc ctgcttcttg 960

tctcattttg tttatctgcc tactttgctt tttgaacatt tgaagaaatt tctagtgttc 1020

atgttaatta ggctgaagaa aagtttctgg tttttcacat gaattgttta gcatatcatc 1080

agaggtgaag gttttcaagg attttataat tgttcttaat ttgttacgaa catatttgtt 1140

tttttaacaa atgagcagtt aattttgatt ggataaacct tttatttaat aaggtgttta 1200

aatgtttctt gaaaaagatc cgaagttgtg gctaactttg aattattttt ggcttttgaa 1260

ggcaccatgt acatccaagg ctgtaagcat taagaagagc aatagtaatg cagcttcctc 1320

agttctgcca acatcctcct ttgtcaaacc aatcagcaaa actgtgtcta ttccaagaag 1380

tgatgcagct atccctaaga tcactgccat tcctcttcct gctacttgca gcatggacat 1440

ttctccatct cactcggacg gatcattggt ctccatggat gaaactatgt ccacttctga 1500

ctcactgaga agtccggatg ttgagtacat tgacgacaac caaacagctg cattcgattc 1560

cattgagaag aaggcgttta gcaccctcta catctcagaa gatgtcaaag cagcaggttg 1620

tgttttgata actttaacac tgtattttac cttgttgttg tcactctttc attggttgtg 1680

aaatggatat gtccttgatc aaacatttta tttcaactat ttttttgatt tatttaatca 1740

atttatctgt ttttgattcc tgcagcagat atatgcaaga gagatgtact tgtagacatc 1800

gaatcagggg ataaaattgc caacattgat aacaattttg ttgatccaca attatgtgct 1860

acaatggcct gtgacatata caaacacttg agagccacag aggtataaag atgattatat 1920

atctctctta aattggatgt tactgccaac tttaaccact tactacattg aaagctttag 1980

attttccgtt taaactataa ccaaattgat gttttagaag tatcgacatt tgcttcaatt 2040

tgtcatgtat gttaatgtta gcttttggtc gttgtactag gtaaagaaaa ggccttccac 2100

agatttcatg gagaaagttc agaaggacat caacgctagc atgcgtgcta ttttgattga 2160

ctggcttgtt gaggtaaact tgtaatgtct ttcttctcac atattgtccc tgccaatatc 2220

aaagtgctgg aacttatgac ttaattatgt cgatgaagat cagcaactcc tgagtttgat 2280

gtagaatatg ttgccaccac tatgtatagg ttgccgagga atacaggctt gtcccggaca 2340

cattgtatct gactgttaac tacattgatc gatatctctc cggcaatttg atggacaggc 2400

aacgactaca gttgcttgga gtagcttgca tgatgatcgc atcgtaagaa actacccttc 2460

ttactttctc aaatgtacca aacatttctg gaagaaaatg ctgtaagact aatgcattaa 2520

tacggtaaat gctatattgc agcaaatatg aggagatctg tgcgcctcaa gtagaagagt 2580

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aatggagtct accgttttaa attacttgaa gtttgaaatg acagccccaa cagccaaatg 2760

ttttctgagg tcactgttta atattttacc attacccagt agttgctttt aagtacgatg 2820

atttaggcac ttatcattga catatatttc aggaggttcg ttcgtgctgc tcaaggactt 2880

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aaaaaagaaa aagcactttt gagttcacaa ttaacacttt taatcttgta caggttctgt 3000

cactgcagtt ggaacacttg gccagctaca tagcagaact ctctctttta gagtacaaca 3060

tgctttgtta tgctccatca gtcattgctg cttctgcaat tttcttagcc aaatatattc 3120

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tataatgtat tctcccttct tttaacaaaa cgtattatct ttataaaatt tgacttttgt 3240

aatctcctaa tacagaactc taccttgagg cattatactc tgtatcaacc ctctgatcta 3300

cgagactgtg tcgtggcact acatagcctt tgttgcaaca acaacaattc tagtttacca 3360

gcaatcaggg aaaaatacag ccagcacaag gtaatctctt attctgaatg ctcagcaagc 3420

agtttaaaat aagtgtttcg attaaaaaat ataagtggaa tgaagtccta acatatggta 3480

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ttgcagttta agccaattag agttgagata ataacaataa ttcatttcca agc 3953

<210> 4

<211> 4090

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 4

cttgtaacag ctttcttctt cttcttgagg aagcgctgat gaaacattgg gcctaatttt 60

ctaaataatt acagttgttg ccattcaggg gttatatttc gaaggaggaa atggcgacga 120

ctcagaatag acgtaattca gtttcgagtg cggtggcaaa gcggcaagcg atggcggaga 180

ataatcacgg gaaattgccg gcgggtgggg ccaagaaaag accagccctc actaatatca 240

gtaatcatac aactgcttcc gctcgtaact cgctctctca ctcctccaaa ctcgtatgtt 300

tttttccatt tttttgtttg tttgttcttc ttgtctaatt gtgacaaagt aaattttgta 360

ccttatgaag cttgttaatt tatgtacttt taccgtggga aaattgtttg tttttctcct 420

gtgatctttt tatttggtat ttaattacta gttcattgtt tttttcttat gctgttatgg 480

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cctctagaaa tagttatatt tttctcgttt tgtgtgtgtg tgtgcgtgtc gtttatgtaa 600

ggtttatggg aggttctttt cttgaattaa atactgtaaa aagtttaaaa aaaatgactg 660

gacaatttgg gttgaatgac tgagaaaaat catgtaatgg gatttgaggc tgttcgatag 720

gagaggattg cggaattttt tttttcaaga ttttgattcg caagttgaaa ttctttgtta 780

ttgactttcc ttctataaac aagttccctg ttattagcag aaaatgcgtc agttctgttt 840

tttttcttct tcttaaaatc aagtgaattg acgtatggat ggatttaaaa aaaaatatat 900

attttggaaa aaaatatatt cttttaatga taaaaaggca ttatgaacgg aaaatttgaa 960

acatcttccc caaatcctgc ttcttgtctc cttttgcttt tttaatattt gaagaaattt 1020

catttttaac attatcatta gaggtgaagg tttttgaagg attttattat tgtacttaat 1080

ttgttaggaa cagatttggt tttacagatg agcagttatt tttgatttat cacaattgga 1140

taaacctttt atgtaataag ctgttttgca atgcgagtct tgttctgctt ccgctaataa 1200

tattgaaaaa aagatcattt cttgtttctg aagttgtggc taacttggaa tcatttttgg 1260

ttttgaaagg caccatgtac atctaaggtt gtaagcatta agaagaacaa tagtaatgca 1320

gcttcctcag ttctgccaac atcctcctcc tttgtcaaac caatcagcaa aactgtgtct 1380

cttccaagaa gtgatgcagc tgtccctaag atcactgcaa ttcctcctct tccttccact 1440

tgcagcatgg acatttctcc gtctcactcg gacggatcat tggtctccat ggatgaaact 1500

atgtccactt ctaactcact gagaagtccg gatgttgagt acattgacga caaccaaaca 1560

gctgcatttg attccattga gaagaaggct tttagcaccc tctacatctc agaagatgtt 1620

aaagcagcag gtttgtgctt tgataacttt aacagtcttt taccttgttg tttgatattt 1680

tcagcagaga gtagtttctc tttcactgaa tgtgaaatgg atatgtcctt gaacaaacat 1740

tttatttctt cagctatttt tcatttaatt aataaattta tctgtttttt gtaccgtcaa 1800

acagatatat gcaagagaga tgtactcgtg gatatggaat caggggataa aattgccaac 1860

attgataaca atcttgttga tccacaatta tgtgctacaa tggcctgtga catatacaaa 1920

cacttgagag ccacagaggt ataaagatgt ttatatatat ctcttttcag ttcttttggc 1980

tccttaaatt agatgctact gccaacttta accacttaat acattgaaaa gtttacagtt 2040

gtttgaaatt ataatcgaat tgaagtatca acatttgctg caatttgtcg tgtatgtttt 2100

aacgttagct tttggtcatc gtgctaggta aagaaaaggc cttccacaga tttcatggag 2160

aaagttcaga aagacataaa tgctagcatg cgtgctatct tgattgactg gcttgttgag 2220

gtaaacttct aatgtctttc ttcctaccgc tgtccctgac aatatcagag tgctggaatt 2280

tatgacttaa atatatgtcg atgaagctca gcaactcctg agtttgatgt agaacttgtt 2340

gccaccacta tgtgtaggtt gccgaggaat acaggcttgt cccagacaca ttgtatctga 2400

ctgttaacta cattgatcga tatctctctg gcaatttgat ggacaggcaa cgactacagt 2460

tgcttggagt agcttgcatg atgatcgcat cgtaagaaac tacccttctt actttctcaa 2520

atgtaccaaa catttctgga agaaaatgct gtatcataca ttaatacggg aaatgctata 2580

ttgcagcaaa tatgaggaga tctgtgcgcc tcaagtagaa gaattctgct acataacaga 2640

caacacttac ttcaaggagg aggtacatga gttttattta caggactatg cactttctaa 2700

acattgcaat ggcactaagc actatgtatt atgcaggtct tgcaaatgga gtctaccgtt 2760

ttaaattact tgaagtttga aatgacagcc ccaacagcca aatgttttct gaggtcactg 2820

tttaatagtt taccattacc caacagttgc ttttaagtat gatgatctag gaacttattg 2880

ttgaaatata tttcaggagg ttcgttcgcg ctgctcaagg acttaatgag gtaatctctt 2940

cacataaggt ttatagttct ccaacatatt ttatatagga aacagaaaag aaaatatcag 3000

ttttgagttc ataattcact cttctttggc ccttcgcctc atgaatatga atggaagagt 3060

ttgattaaaa tcttataatc ttctacaggt tctgtcactg cagttggaac acttggccag 3120

ctacatagca gaactctctc ttttagagta caacatgctt tgttatgctc catcagtcat 3180

tgctgcttct gcaattttct tagccaaata tattcttctc ccctcaaaga aaccttgggt 3240

atgtacgaat tagcattgac aatcgtgtaa atggttgtaa tatattctcc cttctttata 3300

aaatttgaca tttgtaaact cctaatacag aactctacct tgaggcatta tactctgtat 3360

caaccctctg atttacgaga ctgtgtcatg gcactacata gcctttgctg caacaacaac 3420

aattctagtt taccagcaat cagggaaaaa tacagccagc acaaggtaat ctttaattct 3480

gatctctgaa tttcttttct tcatcctact ttcctagcgc caggagctga atgctcagca 3540

agcagtttaa aatgacactg ttttgattaa aaaatataag tagaataaag tcataacatg 3600

tggtaggcat ctgcatacaa ttcctcctga ttttattcta atatatatga ttatttgaaa 3660

cagtacaaat ttgttgcaaa gaagtattgt cctccaacaa tacctgtaga gttcttccag 3720

aacataagct gctaagcaga gaggaggcat caacttcact cttccaattc tctgttggat 3780

tcaattcaag gcattggcat caacttcatt tcaacggtgc ttcattcgtc gcagatcaag 3840

ccaacaactt ctctttgcat ggccggccat aggagagcat ctttgttgat attcatttaa 3900

cattgacttt gcaggattag tcttgtttac cctacttttc ttctctagtt tagattctct 3960

agtcagtgtg tgtacagaag agctgttggc agctccctta actcagaaac tattcagtaa 4020

ttccttttct ggaacaattg cagttttaag ccaattaggg ttgagataat aacaataatt 4080

catttccaag 4090

<210> 5

<211> 1455

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 5

atggcgacga cccagaatag acgttcgtca gtttcgagtg cgacggcaaa gaggcaagcg 60

atgacggcta attcgtcgtt ggagaataat aatcatggga aattggtggc caagaaacga 120

ccagccctca ctaatatcag taatcataca actgcctccg ctcgtaactc gctctctcac 180

tcctccaaac tcgcaccatg tacatccaag gctgtaagca ttaagaagag caatagtaat 240

gcagcttcct cagttctgcc aacatcctcc tttgtcaaac caatcagcaa aactgtgtct 300

attccaagaa gtgatgcagc tatccctaag atcactgcca ttcctcttcc tgctacttgc 360

agcatggaca tttctccatc tcactcggac ggatcattgg tctccatgga tgaaactatg 420

tccacttctg actcactgag aagtccggat gttgagtaca ttgacgacaa ccaaacagct 480

gcattcgatt ccattgagaa gaaggcgttt agcaccctct acatctcaga agatgtcaaa 540

gcagcagcag atatatgcaa gagagatgta cttgtagaca tcgaatcagg ggataaaatt 600

gccaacattg ataacaattt tgttgatcca caattatgtg ctacaatggc ctgtgacata 660

tacaaacact tgagagccac agaggtaaag aaaaggcctt ccacagattt catggagaaa 720

gttcagaagg acatcaacgc tagcatgcgt gctattttga ttgactggct tgttgaggtt 780

gccgaggaat acaggcttgt cccggacaca ttgtatctga ctgttaacta cattgatcga 840

tatctctccg gcaatttgat ggacaggcaa cgactacagt tgcttggagt agcttgcatg 900

atgatcgcat ccaaatatga ggagatctgt gcgcctcaag tagaagagtt ctgctacatc 960

acagacaaca cttacttcaa ggaggaggtt ttacaaatgg agtctaccgt tttaaattac 1020

ttgaagtttg aaatgacagc cccaacagcc aaatgttttc tgaggaggtt cgttcgtgct 1080

gctcaaggac ttaatgaggt tctgtcactg cagttggaac acttggccag ctacatagca 1140

gaactctctc ttttagagta caacatgctt tgttatgctc catcagtcat tgctgcttct 1200

gcaattttct tagccaaata tattcttctc ccctcaaaga aaccttggaa ctctaccttg 1260

aggcattata ctctgtatca accctctgat ctacgagact gtgtcgtggc actacatagc 1320

ctttgttgca acaacaacaa ttctagttta ccagcaatca gggaaaaata cagccagcac 1380

aagtacaaat ttgttgcaaa gaagtattgc cctccaacaa tacctgtaga gttcttccag 1440

aacataagct gctaa 1455

<210> 6

<211> 1449

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 6

atggcgacga ctcagaatag acgtaattca gtttcgagtg cggtggcaaa gcggcaagcg 60

atggcggaga ataatcacgg gaaattgccg gcgggtgggg ccaagaaaag accagccctc 120

actaatatca gtaatcatac aactgcttcc gctcgtaact cgctctctca ctcctccaaa 180

ctcgcaccat gtacatctaa ggttgtaagc attaagaaga acaatagtaa tgcagcttcc 240

tcagttctgc caacatcctc ctcctttgtc aaaccaatca gcaaaactgt gtctcttcca 300

agaagtgatg cagctgtccc taagatcact gcaattcctc ctcttccttc cacttgcagc 360

atggacattt ctccgtctca ctcggacgga tcattggtct ccatggatga aactatgtcc 420

acttctaact cactgagaag tccggatgtt gagtacattg acgacaacca aacagctgca 480

tttgattcca ttgagaagaa ggcttttagc accctctaca tctcagaaga tgttaaagca 540

gcagatatat gcaagagaga tgtactcgtg gatatggaat caggggataa aattgccaac 600

attgataaca atcttgttga tccacaatta tgtgctacaa tggcctgtga catatacaaa 660

cacttgagag ccacagaggt aaagaaaagg ccttccacag atttcatgga gaaagttcag 720

aaagacataa atgctagcat gcgtgctatc ttgattgact ggcttgttga ggttgccgag 780

gaatacaggc ttgtcccaga cacattgtat ctgactgtta actacattga tcgatatctc 840

tctggcaatt tgatggacag gcaacgacta cagttgcttg gagtagcttg catgatgatc 900

gcatccaaat atgaggagat ctgtgcgcct caagtagaag aattctgcta cataacagac 960

aacacttact tcaaggagga ggtcttgcaa atggagtcta ccgttttaaa ttacttgaag 1020

tttgaaatga cagccccaac agccaaatgt tttctgagga ggttcgttcg cgctgctcaa 1080

ggacttaatg aggttctgtc actgcagttg gaacacttgg ccagctacat agcagaactc 1140

tctcttttag agtacaacat gctttgttat gctccatcag tcattgctgc ttctgcaatt 1200

ttcttagcca aatatattct tctcccctca aagaaacctt ggaactctac cttgaggcat 1260

tatactctgt atcaaccctc tgatttacga gactgtgtca tggcactaca tagcctttgc 1320

tgcaacaaca acaattctag tttaccagca atcagggaaa aatacagcca gcacaagtac 1380

aaatttgttg caaagaagta ttgtcctcca acaatacctg tagagttctt ccagaacata 1440

agctgctaa 1449

<210> 7

<211> 489

<212> PRT

<213> 番茄

<400> 7

Met Met Thr Thr Gln Asn Arg Arg Ser Ser Ala Val Ala Lys Arg Gln

1 5 10 15

Ala Met Ala Ala Asn Ser Ser Gly Leu Glu His Asn Gln Thr Gly Lys

20 25 30

Leu Asn Ala Lys Lys Arg Pro Ala Leu Ser Asn Ile Ser Asn Asn Thr

35 40 45

Thr Val Ser Ala Arg Asn Ser Val Ser His Ser Ser Lys Leu Ala Pro

50 55 60

Cys Thr Ser Lys Ile Val Asn Ile Lys Lys Asn Thr Ser Ala Cys Asn

65 70 75 80

Ser Asn Ala Val Ser Ser Gly Thr Ala Val Leu Pro Ala Ser Ser Ser

85 90 95

Val Arg Pro Ser Ser Lys Pro Val Ser Ile Gln Arg Ser Asp Ala Val

100 105 110

Val Pro Lys Ile Thr Val Ile Pro Val Pro Ala Thr Cys Ser Met Asp

115 120 125

Ile Ser Pro Ser His Ser Asp Gly Ser Leu Val Ser Met Asp Glu Ser

130 135 140

Met Ser Asn Ser Asp Thr Val Arg Ser Pro Glu Val Glu Tyr Ile Asp

145 150 155 160

Asp His Glu Leu Ala Ala Val Asp Ser Ile Glu Lys Lys Ala Cys Ser

165 170 175

Thr Leu Tyr Ile Ser Glu His Val Lys Ala Ala Ala Asp Ile Cys Lys

180 185 190

Arg Asp Val Leu Val Asp Leu Glu Ser Gly Asp Lys Ile Met Asn Ile

195 200 205

Asp Asn Asn Leu Val Asp Pro Gln Leu Cys Ala Thr Met Ala Cys Asp

210 215 220

Ile Tyr Lys His Leu Arg Ala Ser Glu Ala Lys Lys Arg Pro Ser Thr

225 230 235 240

Asp Phe Met Ala Lys Val Gln Lys Asp Ile Asn Pro Ser Met Arg Ala

245 250 255

Ile Leu Ile Asp Trp Leu Val Glu Val Ala Glu Glu Tyr Arg Leu Val

260 265 270

Pro Asp Thr Leu His Leu Thr Ile Asn Tyr Ile Asp Arg Tyr Leu Ser

275 280 285

Gly Asn Leu Met Asp Arg Gln Arg Leu Gln Leu Leu Gly Val Ala Cys

290 295 300

Met Met Ile Ala Ser Lys Tyr Glu Glu Ile Cys Ala Pro Gln Val Glu

305 310 315 320

Glu Phe Cys Tyr Ile Thr Asp Asn Thr Tyr Phe Lys Glu Glu Val Leu

325 330 335

Gln Met Glu Ser Ala Val Leu Asn Tyr Leu Lys Phe Glu Met Thr Ala

340 345 350

Pro Thr Ala Lys Cys Phe Leu Arg Arg Phe Val Arg Ala Ala Gln Gly

355 360 365

Leu Asn Glu Val Leu Ser Leu Gln Leu Glu His Leu Ala Ser Tyr Ile

370 375 380

Ala Glu Leu Ser Leu Leu Glu Tyr Asn Met Leu Cys Tyr Ala Pro Ser

385 390 395 400

Leu Ile Ala Ala Ser Ala Ile Phe Leu Ala Lys Tyr Ile Leu Leu Pro

405 410 415

Ser Val Lys Pro Trp Asn Ser Thr Leu Arg His Tyr Thr Leu Tyr Gln

420 425 430

Pro Ser Asp Leu Arg Asp Cys Val Leu Ala Leu His Ser Leu Cys Cys

435 440 445

Asn Asn Asn Asn Ser Ser Leu Pro Ala Val Arg Glu Lys Tyr Ser Gln

450 455 460

His Lys Tyr Lys Phe Val Ala Lys Lys Tyr Cys Pro Pro Thr Val Pro

465 470 475 480

Val Glu Phe Phe Gln Asn Ile Ser Ser

485

<210> 8

<211> 488

<212> PRT

<213> 马铃薯

<400> 8

Met Met Thr Thr Gln Asn Arg Arg Ser Ser Val Ser Ser Ala Val Ala

1 5 10 15

Lys Arg Gln Ala Met Ala Ala Asn Ser Ser Gly Leu Glu Asn Asn Gln

20 25 30

Thr Gly Lys Leu Asn Ala Gly Ala Ala Lys Lys Arg Pro Ala Leu Ser

35 40 45

Asn Ile Ser Asn His Thr Thr Val Ser Ala Arg Asn Ser Ile Ser His

50 55 60

Ser Ser Lys Leu Ala Pro Cys Thr Ser Lys Ile Val Ser Ile Lys Lys

65 70 75 80

Asn Ile Ser Ser Gly Thr Ala Val Leu Pro Ala Ser Ser Ser Val Arg

85 90 95

Pro Ser Ser Lys Pro Val Ser Ile Gln Arg Ser Asp Ala Val Val Pro

100 105 110

Lys Ile Thr Ala Ile Pro Leu Pro Ala Thr Cys Ser Met Asp Ile Ser

115 120 125

Pro Ser His Ser Asp Gly Ser Leu Val Ser Met Asp Glu Ser Met Ser

130 135 140

Thr Ser Asp Thr Val Arg Ser Pro Glu Val Glu Tyr Ile Asp Asp Leu

145 150 155 160

Glu Ser Ala Ala Val Asp Ser Ile Glu Lys Lys Ala Cys Ser Thr Leu

165 170 175

Tyr Ile Ser Glu His Ile Lys Ala Ala Ala Ala Asp Ile Cys Lys Arg

180 185 190

Asp Val Leu Val Asp Leu Glu Ser Gly Asp Lys Ile Val Asn Ile Asp

195 200 205

Asn Asn Leu Val Asp Pro Gln Leu Cys Ala Thr Met Ala Cys Asp Ile

210 215 220

Tyr Thr His Leu Arg Ala Ser Glu Ala Lys Lys Arg Pro Ser Thr Asp

225 230 235 240

Phe Met Ala Lys Val Gln Lys Asp Ile Asn Pro Ser Met Arg Ala Ile

245 250 255

Leu Ile Asp Trp Leu Val Glu Val Ala Glu Glu Tyr Arg Leu Val Pro

260 265 270

Asp Thr Leu His Leu Thr Ile Asn Tyr Ile Asp Arg Tyr Leu Ser Gly

275 280 285

Asn Leu Met Asp Arg Gln Arg Leu Gln Leu Leu Gly Val Ala Cys Met

290 295 300

Met Ile Ala Ser Lys Tyr Glu Glu Ile Cys Ala Pro Gln Val Glu Glu

305 310 315 320

Phe Cys Tyr Ile Thr Asp Asn Thr Tyr Phe Lys Glu Glu Val Leu Gln

325 330 335

Met Glu Ser Thr Val Leu Asn Tyr Leu Lys Phe Glu Met Thr Ala Pro

340 345 350

Thr Ala Lys Cys Phe Leu Arg Arg Phe Val Arg Ala Ala Gln Gly Leu

355 360 365

Asn Glu Val Leu Ser Leu Gln Leu Glu His Leu Ala Ser Tyr Ile Ala

370 375 380

Glu Leu Ser Leu Leu Glu Tyr Asn Met Leu Ser Tyr Ala Pro Ser Leu

385 390 395 400

Ile Ala Ala Ser Ala Ile Phe Leu Ala Lys Tyr Ile Leu Leu Pro Ser

405 410 415

Val Lys Pro Trp Asn Ser Thr Leu Arg His Tyr Thr Leu Tyr Gln Pro

420 425 430

Ser Asp Leu Gln Asp Cys Val Met Ala Leu His Ser Leu Cys Cys Asn

435 440 445

Asn Asn Asn Ser Ser Leu Pro Ala Val Arg Glu Lys Tyr Ser Gln His

450 455 460

Lys Tyr Lys Phe Val Ala Lys Lys Tyr Cys Pro Pro Thr Val Pro Val

465 470 475 480

Glu Phe Phe Gln Asn Ile Ser Ser

485

<210> 9

<211> 1473

<212> DNA

<213> 番茄

<400> 9

atgatgacaa cccagaatag gcggtcgtct gcggtggcga agagacaagc aatggcagcg 60

aattcatcgg ggttagagca taatcagacc ggaaaattga atgccaagaa acgaccggct 120

ttgtctaata tctcgaataa tacaactgtc tctgctcgga actcggtttc tcattcctcc 180

aaactcgcac catgtacatc caagattgta aacattaaga agaacacttc tgcttgcaac 240

agtaatgcag tttcctcagg gactgctgtt ctgccagcat cctcctctgt gagaccaagc 300

agcaaacctg tttctattca aagaagtgat gcagttgtgc ctaagatcac tgtcattcct 360

gttcctgcca cttgcagcat ggacatttct ccatctcatt cagatggatc attagtctcc 420

atggatgaat ctatgtcaaa ttccgacaca gtgagaagtc cggaggtcga atacatagat 480

gaccatgaat tagctgcagt tgattccatc gagaagaaag cgtgtagcac cctctacatc 540

tcagaacatg tcaaagccgc agcagctgat atatgcaaga gagatgtact tgtggacttg 600

gaatcagggg acaaaattat gaacattgat aacaatcttg ttgacccaca gttatgtgct 660

acaatggcct gtgacatata caaacacttg agagcctctg aggcaaagaa aaggccttcc 720

acagatttca tggcgaaagt acagaaagac atcaatccta gcatgcgcgc tatcttaatc 780

gactggcttg ttgaggttgc cgaggagtac aggcttgtcc cagacacgct gcatttgaca 840

attaactaca ttgatcgata tctttcgggc aacctgatgg acagacaacg actacagttg 900

cttggagtag cttgcatgat gatcgcatca aaatatgagg agatctgtgc acctcaagtt 960

gaagagttct gctacataac agacaacact tacttcaagg aggaggtgtt gcaaatggag 1020

tctgctgttt taaattactt gaagtttgaa atgacagctc caacagccaa atgttttctg 1080

aggaggtttg ttcgagctgc tcaaggactt aatgaggttc tgtcactgca gttggaacac 1140

ttggctagct acattgcaga actctctctt ttagaataca acatgctttg ttatgctcca 1200

tcactcattg ctgcttctgc aatttttttg gccaaatata ttcttcttcc ttcagtgaaa 1260

ccttggaatt ctaccttgag gcattatact ttgtatcaac cctctgattt acgagactgt 1320

gtcttggcac tacacagcct ttgctgcaac aacaacaatt ctagcttacc agcagtccgg 1380

gaaaaataca gccaacacaa gtacaaattt gttgcaaaga agtattgccc tccaactgta 1440

cctgtagaat tcttccagaa cataagcagc taa 1473

<210> 10

<211> 1467

<212> DNA

<213> 马铃薯

<400> 10

atgatgacga cccagaatag gcgttcgtct gtttcgagtg cggtagcgaa gagacaagca 60

atggcagcga attcatcagg gttagagaat aatcagaccg gaaaattgaa tgctggagcg 120

gccaagaaac gaccggcatt gtctaatatc tcgaatcata caactgtttc tgctcggaac 180

tcgatttctc attcctccaa acttgcacca tgtacgtcca agattgtaag cattaagaag 240

aacatttcct cagggactgc tgttctgcca gcatcctcct ctgtcagacc aagcagcaaa 300

cctgtttcta ttcaaagaag tgatgcagtt gtgcctaaga tcactgccat tcctcttcct 360

gccacctgca gcatggacat ttctccatct cactcagatg gatcattagt ctccatggat 420

gaatctatgt caacttctga cacagtgaga agtccggagg tcgaatacat agatgacctt 480

gaatcggctg cagttgattc catcgagaag aaggcgtgta gcaccctcta catctcagaa 540

catatcaaag ccgcagcagc agatatatgc aagagagatg tacttgtgga cttggaatca 600

ggggacaaaa ttgtcaacat tgataacaat cttgttgacc cacagttatg tgctacaatg 660

gcctgtgaca tatatacaca cttgagagcc tctgaggcaa agaaaaggcc ttccacagat 720

ttcatggcga aagtacagaa agacatcaat cctagcatgc gcgctatctt aattgactgg 780

cttgttgagg ttgccgagga gtacaggctt gtcccagaca cgctgcattt gacaattaac 840

tacattgatc gatatctttc gggcaacttg atggacagac aacgactaca gttgcttgga 900

gtagcttgca tgatgatcgc atcaaaatat gaggagatct gtgcacctca agtcgaagag 960

ttctgctaca taacagacaa cacttacttc aaggaggagg tgttgcaaat ggagtctact 1020

gttttaaatt acttgaagtt tgaaatgaca gctccaacag ccaaatgttt tctgaggagg 1080

tttgttcgag ctgctcaagg acttaatgag gttctgtcac tgcagttgga acacttggct 1140

agctacattg cagaactctc tcttttagaa tacaacatgc tttcttatgc tccatcactc 1200

attgctgctt ctgcaatttt cttggccaaa tatattcttc ttccttcagt gaaaccttgg 1260

aactctacct tgaggcatta tactttgtac caaccctctg atttacaaga ctgtgtcatg 1320

gcactacaca gcctttgctg caacaacaac aattctagct taccagcagt cagggaaaaa 1380

tacagccaac acaagtacaa atttgttgca aagaagtatt gccctccaac tgtacctgta 1440

gagttcttcc agaacataag cagctaa 1467

<210> 11

<211> 289

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变体TFA1255成熟蛋白

<400> 11

Met Ala Thr Thr Gln Asn Arg Arg Ser Ser Val Ser Ser Ala Thr Ala

1 5 10 15

Lys Arg Gln Ala Met Thr Ala Asn Ser Ser Leu Glu Asn Asn Asn His

20 25 30

Gly Lys Leu Val Ala Lys Lys Arg Pro Ala Leu Thr Asn Ile Ser Asn

35 40 45

His Thr Thr Ala Ser Ala Arg Asn Ser Leu Ser His Ser Ser Lys Leu

50 55 60

Ala Pro Cys Thr Ser Lys Ala Val Ser Ile Lys Lys Ser Asn Ser Asn

65 70 75 80

Ala Ala Ser Ser Val Leu Pro Thr Ser Ser Phe Val Lys Pro Ile Ser

85 90 95

Lys Thr Val Ser Ile Pro Arg Ser Asp Ala Ala Ile Pro Lys Ile Thr

100 105 110

Ala Ile Pro Leu Pro Ala Thr Cys Ser Met Asp Ile Ser Pro Ser His

115 120 125

Ser Asp Gly Ser Leu Val Ser Met Asp Glu Thr Met Ser Thr Ser Asp

130 135 140

Ser Leu Arg Ser Pro Asp Val Glu Tyr Ile Asp Asp Asn Gln Thr Ala

145 150 155 160

Ala Phe Asp Ser Ile Glu Lys Lys Ala Phe Ser Thr Leu Tyr Ile Ser

165 170 175

Glu Asp Val Lys Ala Ala Ala Asp Ile Cys Lys Arg Asp Val Leu Val

180 185 190

Asp Ile Glu Ser Gly Asp Lys Ile Ala Asn Ile Asp Asn Asn Phe Val

195 200 205

Asp Pro Gln Leu Cys Ala Thr Met Ala Cys Asp Ile Tyr Lys His Leu

210 215 220

Arg Ala Thr Glu Val Lys Lys Arg Pro Ser Thr Asp Phe Met Glu Lys

225 230 235 240

Val Gln Lys Asp Ile Asn Ala Ser Met Arg Ala Ile Leu Ile Asp Trp

245 250 255

Leu Val Glu Val Ala Glu Glu Tyr Arg Leu Val Pro Asp Thr Leu Tyr

260 265 270

Leu Thr Val Asn Tyr Ile Asp Arg Tyr Leu Ser Gly Asn Leu Met Asp

275 280 285

Arg

Claims

1.修饰植物中侧向出芽的方法，所述方法包括修饰包含如SEQ ID NO：1、2、7、8所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的序列的蛋白的表达或功能。

2.权利要求1的方法，其中通过减少或阻止所述蛋白的表达或功能来减少和/或延迟侧向出芽。

3.权利要求2的方法，所述方法包括提供在编码所述蛋白的多核苷酸中的突变。

4.权利要求3的方法，其中所述突变在编码所述蛋白的多核苷酸中产生提前的终止密码子、缺失、剪接突变体或编码非可接受的氨基酸取代的密码子。

5.权利要求4的方法，其中所述突变产生在SEQ ID NO: 1的290位包含提前的终止密码子的氨基酸序列。

6.权利要求4的方法，其中所述突变对应于SEQ ID NO: 2中的S117F突变。

7.产生具有减少的和/或延迟的侧向出芽的植物的方法，其包括：

c. 用分子标记物进行分子标记物辅助的选择，其包括：

i. 鉴定在编码如a中限定的蛋白的多核苷酸中包含突变的渗入区域。

8.任一前述权利要求的方法，其中所述蛋白包含如SEQ ID NO: 1、2、7、8所示的序列或与其具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列。

9.任一前述权利要求的方法，其中所述蛋白由包含如SEQ ID NO：5、6、9、10所示的序列或与其具有至少70％序列同一性的序列的多核苷酸编码。

10.权利要求9的方法，其中所述蛋白由包含如SEQ ID NO: 5、6、9、10所示的序列或与其具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列的多核苷酸编码。

11.权利要求1的方法，其中通过增加所述蛋白的表达或功能来增加和/或促进侧向出芽。

12.通过权利要求1-11中任一项的方法可获得（例如获得）的植物细胞。

13.植物，其：

i) 通过权利要求1-11中任一项的方法可获得；

ii) 包含如权利要求3-11中任一项限定的修饰的多核苷酸；

iii) 包含权利要求12的植物细胞。

14.权利要求13的植物，其中在所述植物中不存在如权利要求1-10中任一项限定的内源（或内源且功能性）蛋白。

15.植物繁殖材料（例如植物种子），其可获自权利要求13或权利要求14的植物。

16.收获的叶，其为权利要求13或权利要求14的植物的收获的叶，或者可获自从权利要求15的繁殖材料繁殖的植物，或者可获自通过权利要求1-11中任一项的方法可获得的植物。

17.权利要求13或权利要求14的植物的收获的叶，其中所述收获的叶是切割的收获的叶。

18.加工的叶（优选无活力的加工的叶），其：

a. 包含权利要求12的植物细胞；

b. 可获自从权利要求1-11中任一项的方法可获得的植物；

c. 可获自加工权利要求13或权利要求14的植物；

d. 可获自从权利要求15的植物繁殖材料繁殖的植物；

e. 可通过加工权利要求16或权利要求17的收获的叶来获得。

19.权利要求18的加工的叶，其中所述植物或叶通过调制、发酵、巴氏灭菌或其组合来加工。

20.权利要求18或权利要求19的加工的叶，其中所述加工的叶是切割的加工的叶。

21.权利要求1-11中任一项的方法、权利要求12的植物细胞、权利要求13或权利要求14的植物、权利要求15的植物繁殖材料、权利要求16或17的收获的叶或权利要求18-20中任一项的加工的叶，其中所述植物是茄科的。

22.权利要求21的方法、细胞、植物、植物繁殖材料、收获的叶或加工的叶，其中所述植物是Cestoideae亚科的。

23.权利要求22的方法、细胞、植物、植物繁殖材料、收获的叶或加工的叶，其中所述植物是烟草属的，所述蛋白包含如SEQ ID NO: 1、2所示的序列或与其具有至少70%序列同一性的序列，并且通过减少或阻止所述蛋白的表达或功能减少侧向出芽。

24.权利要求23的方法、细胞、植物、植物繁殖材料、收获的叶或加工的叶，其中所述植物是普通烟草(Nicotiana tabacum)或黄花烟草(Nicotiana rustica)。

25.权利要求1-11中任一项的方法、权利要求12的植物细胞、权利要求13或权利要求14的植物、权利要求15的植物繁殖材料、权利要求16或17的收获的叶或权利要求18-20中任一项的加工的叶，其中所述植物选自番茄、黄瓜、茄子、南瓜、矮牵牛、石竹、云杉、松、桉树、杨、马铃薯、烟草、棉花、莴苣、茄子、甜瓜、南瓜、豌豆、油菜、大豆、甜菜、向日葵、小麦、大麦、黑麦、稻、和玉米、胡椒、西葫芦、抱子甘蓝、西兰花和花椰菜。

26.烟草产品，其：

a. 制备自权利要求23或权利要求24的烟草植物或其部分；

b. 制备自通过权利要求1-11中任一项的方法获得的或可获得的烟草植物或其部分（优选收获自所述植物的叶）；

c. 制备自从权利要求23或权利要求24的植物繁殖材料繁殖的烟草植物（优选叶）；

d. 制备自权利要求23或权利要求24的收获的烟叶；

e. 制备自权利要求23或权利要求24中任一项的加工的烟叶；

f. 制备自或包含从权利要求23或权利要求24的烟草植物获得的烟草植物提取物。

27.权利要求26的烟草产品，其中所述烟草产品为吸烟制品。

28.权利要求27的烟草产品，其中所述烟草产品为无烟烟草产品。

29.权利要求27的烟草产品，其中所述烟草产品为烟草加热装置，例如气溶胶生成装置。

30.权利要求13或权利要求14的所述植物或所述植物的部分的植物提取物（例如烟草提取物）。

31.以下用于生产如权利要求25-27中任一项限定的产品的用途：

a. 权利要求22的烟草植物或其部分；

b. 从权利要求22的植物繁殖材料繁殖的烟草植物（优选叶）；

c. 权利要求22的收获的烟叶；

d. 权利要求22中任一项的加工的烟叶；

e. 从权利要求22的烟草植物获得的烟草植物提取物。

32.权利要求13或权利要求14的植物用于培育植物的用途。

33.权利要求13或权利要求14的植物用于生长作物的用途。

34.权利要求13或权利要求14的植物用于生产叶（例如加工的（优选调制的）叶）的用途。

35.烟草植物或种子，其包含

(i) 包含SEQ ID NO: 1或2的序列或与其具有至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列的蛋白，其中所述蛋白包含在对应于SEQ ID NO: 2的117位的氨基酸位置处的非可接受的氨基酸取代，优选地，其中所述取代是S117F；或

(ii) 如SEQ ID NO: 1或2或与其具有至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列所示的蛋白的截短形式，优选地，其中编码所述截短的蛋白的多核苷酸编码在对应于SEQ ID NO: 1的290位的位置处的提前的终止密码子。

36.权利要求35的烟草植物或种子，其中不存在对应于包含SEQ ID NO: 1或2的序列或其变体的蛋白的内源功能性蛋白。

37.权利要求35-36中任一项的烟草植物或种子，其中所述植物是纯合的。

38.权利要求35-37中任一项的烟草植物或种子，其中所述植物是普通烟草或黄花烟草。

39.权利要求35-38中任一项的烟草植物用于减少或延迟侧向出芽的用途。

40.以下用于减少或延迟侧向出芽的用途：

(i) SEQ ID NO:5、6、9或10的多核苷酸或与其具有至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的多核苷酸，其中所述多核苷酸在分别对应于SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9的C868T和C2340T的位置包含突变；或

(ii) 编码如SEQ ID NO: 11所示的蛋白或与其具有至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的蛋白的多核苷酸。

41.番茄植物或种子，其包含：

(i) 包含SEQ ID NO: 7的序列或与其具有至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列的蛋白，其中所述蛋白包含非可接受的氨基酸取代，优选在对应于SEQ IDNO: 2的117位的氨基酸位置处；或

(ii) 如SEQ ID NO: 7或与其具有至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列所示的蛋白的截短形式，优选地，其中编码所述截短的蛋白的多核苷酸编码例如在对应于SEQ ID NO: 1的290位的位置处的提前的终止密码子。

42.权利要求41的番茄植物或种子，其中不存在对应于包含SEQ ID NO: 4的序列或其变体的蛋白的内源功能性蛋白。

43.权利要求41-42中任一项的番茄植物或种子，其中所述植物是纯合的。

44.权利要求41-43中任一项的番茄植物或种子，其中所述植物是番茄(Solanum lycopersicum)。

45.权利要求41-44中任一项的番茄植物用于减少或延迟侧向出芽的用途。

46.马铃薯植物或种子，其包含：

(i) 包含SEQ ID NO: 8的序列或与其具有至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列的蛋白，其中所述蛋白包含非可接受的氨基酸取代，优选在对应于SEQ IDNO: 2的117位的氨基酸位置处；或

(ii) 如SEQ ID NO: 8或与其具有至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的序列所示的蛋白的截短形式，优选地，其中编码所述截短的蛋白的多核苷酸编码例如在对应于SEQ ID NO: 1的290位的位置处的提前的终止密码子。

47.权利要求46的马铃薯植物或种子，其中不存在对应于包含SEQ ID NO: 8的序列或其变体的蛋白的内源功能性蛋白。

48.权利要求46-47中任一项的马铃薯植物或种子，其中所述植物是纯合的。

49.权利要求46-48中任一项的马铃薯植物或种子，其中所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。

50.权利要求46-49中任一项的马铃薯植物用于减少或延迟侧向出芽的用途。