JP7416761B2 - 最適化された組織優先的プロモーターおよびその使用 - Google Patents

最適化された組織優先的プロモーターおよびその使用 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第119条に基づいて2018年8月2日に出願された米国仮特許出願第62/713,819号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
分野
本開示は、植物における吸枝の減少または排除に有用な核酸およびタンパク質の発現を改善するための方法および組成物を提供する。
配列表の援用
「P34633WO00_SL.TXT」という名称のファイルに含まれる配列表は、733,397バイトであり(MS-Windows(登録商標)で計測)、2019年8月1日に作成され、本明細書に添えて電子的に提出されるものであり、参照によりその全体が援用される。
タバコは、非常に強力な頂芽優勢を示す植物種である。茎頂分裂組織(SAM)からの分子シグナルは、腋芽(axillary bud)の成長を効果的に阻害するホルモンシグナルを媒介する。SAMを除去(「摘心」とも呼ばれる)すると、生理学的および分子的変化が生じ、腋生分裂組織(芽)から新しいシュート(または「吸枝(sucker)」)の成長が可能になる。吸枝の成長は、収量および葉の品質の喪失をもたらす。吸枝は、手で取り除くことによって、また化学薬品の塗布を通じて制御されている。マレイン酸ヒドラジドおよびフルメトラリンは、摘心された植物に日常的に使用され、腋芽の成長(「吸枝発生」)を阻害する。しかしながら、吸枝を制御するための労力と化学物質は非常に高価である。従来の育種、変異育種、およびトランスジェニックアプローチによるタバコにおける吸枝発生の制御は、数十年間、主要な目的であったが、これらのアプローチによる吸枝発生の阻害または排除の成功は達成されていない。最近の分子学的研究により、吸枝が低減または排除されたトランスジェニック植物が産生されているが、腋芽成長抑制遺伝子の漏出発現(leaky expression)は、種子および胚の死をもたらす可能性があり、後続の世代のトランスジェニック植物の産生を妨げる。したがって、腋芽成長抑制遺伝子が望ましくない組織および/または器官で発現するのを防ぐための方法および組成物を開発することで、化学薬剤の使用が低減され、タバコ産生に関連するコストおよび労力が低減されるであろう。
一態様では、本開示は、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子であって、当該プロモーターが、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み(当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される)、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、(c)異種核酸分子に作動可能に連結されている、核酸分子を提供する。
一態様では、本開示は、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子を含むタバコ植物であって、当該プロモーターが、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、当該同一性が、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ(c)異種核酸分子に作動可能に連結されており、タバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の同じ品種の対照タバコ植物と比較して、摘心後に吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む、タバコ植物を提供する。
一態様では、本開示は、核酸分子を含む植物または種子であって、当該核酸分子が、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、当該プロモーターが、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、当該同一性が、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、(c)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されている、植物または種子を提供する。
一態様では、本開示は、タバコ植物において摘心により誘導される吸枝を制御するための方法であって、(a)タバコ細胞に核酸分子を導入する工程であって、当該核酸分子が、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、当該プロモーターが、(i)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み(当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される)、(ii)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、(iii)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されている、工程と、(b)当該タバコ細胞からタバコ植物を再生する工程であって、当該タバコ植物が、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、摘心により誘導される吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む、工程と、を含む、方法を提供する。
一態様では、本開示は、タバコ植物を成長させる方法であって、核酸分子を含むタバコ種子を栽植する工程を含み、当該核酸分子が、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、当該プロモーターが、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、当該同一性が、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ(c)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されており、当該タバコ種子が発芽して、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、摘心により誘導される吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含むタバコ植物になる、方法を提供する。
[本発明1001]
腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子であって、前記プロモーターが、
(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、ここで前記同一性は、前記配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、
(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ
(c)異種核酸分子に作動可能に連結されている、
核酸分子。
[本発明1002]
前記プロモーターが、50ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む、本発明1001の核酸分子。
[本発明1003]
前記欠失が、
(a)少なくとも1つの糖抑制エレメント、
(b)腋芽up2エレメント、
(c)少なくとも1つの芽休眠エレメント、または
(d)(a)、(b)、および(c)の任意の組み合わせ
の欠失を含む、本発明1001の核酸分子。
[本発明1004]
前記プロモーターが、配列番号257と少なくとも85%同一の核酸配列を含む、本発明1001の核酸分子。
[本発明1005]
前記異種核酸分子が、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする、本発明1001の核酸分子。
[本発明1006]
前記少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物が、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される、本発明1005の核酸分子。
[本発明1007]
前記ポリペプチドが、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも70%同一または類似のアミノ酸配列を含む、本発明1006の核酸分子。
[本発明1008]
前記低分子RNAが、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む、本発明1006の核酸分子。
[本発明1009]
プロモーターを含む核酸分子を含むタバコ植物であって、前記プロモーターが、
(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、ここで前記同一性は、前記配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、
(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ
(c)異種核酸分子に作動可能に連結されており、
前記タバコ植物が、同等の条件下で成長した場合の同じ品種の対照タバコ植物と比較して、摘心後に吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む、タバコ植物。
[本発明1010]
前記プロモーターが、50ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む、本発明1009のタバコ植物。
[本発明1011]
前記欠失が、
(a)少なくとも1つの糖抑制エレメント、
(b)腋芽up2エレメント、
(c)少なくとも1つの芽休眠エレメント、または
(d)(a)、(b)、および(c)の任意の組み合わせ
の欠失を含む、本発明1009のタバコ植物。
[本発明1012]
前記プロモーターが、配列番号257と少なくとも85%同一の核酸配列を含む、本発明1009のタバコ植物。
[本発明1013]
前記プロモーターが、前記摘心の少なくとも7日後に腋生分裂組織において活性を有する、本発明1009のタバコ植物。
[本発明1014]
前記プロモーターが、
(a)タバコ苗植物、
(b)茎頂分裂組織、または
(c)(a)および(b)の両方
において活性を有さない、本発明1009のタバコ植物。
[本発明1015]
前記吸枝の減少が、前記吸枝の乾燥生物量の低減、前記吸枝の新鮮重量の低減、前記吸枝の長さの低減、前記吸枝の直径の低減、総吸枝数の減少、またはこれらの任意の組み合わせを含む、本発明1009のタバコ植物。
[本発明1016]
熱風乾燥種タバコ植物、明色種タバコ植物、バーレー種タバコ植物、バージニア種タバコ植物、メリーランド種タバコ植物、ガルパオ種タバコ植物、暗色種タバコ植物、オリエンタル種タバコ植物、およびトルコ種タバコ植物からなる群より選択される、本発明1009のタバコ植物。
[本発明1017]
前記異種核酸分子が、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする、本発明1009のタバコ植物。
[本発明1018]
前記少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物が、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される、本発明1017のタバコ植物。
[本発明1019]
前記ポリペプチドが、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも70%同一または類似のアミノ酸配列を含む、本発明1018のタバコ植物。
[本発明1020]
前記低分子RNAが、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む、本発明1018のタバコ植物。
[本発明1021]
本発明1009のタバコ植物に由来する乾燥タバコ材料を含む、タバコ製品。
[本発明1022]
紙巻タバコ(cigarette)、クレテック(kretek)、ビディシガレット(bidi cigarette)、葉巻(cigar)、シガリロ(cigarillo)、非通気式紙巻タバコ(non-ventilated cigarette)、通気式リセスフィルター紙巻タバコ(vented recess filter cigarette)、パイプタバコ(pipe tobacco)、嗅ぎタバコ(snuff)、噛みタバコ(chewing tobacco)、湿性無煙タバコ(moist smokeless tobacco)、ファインカット噛みタバコ(fine cut chewing tobacco)、ロングカット噛みタバコ(long cut chewing tobacco)、およびポーチ噛みタバコ(pouched chewing tobacco)製品からなる群より選択される、本発明1021のタバコ製品。
[本発明1023]
ガム(gum)、タブレット(tablet)、ロゼンジ(lozenge)、および溶解性ストリップ(dissolving strip)からなる群より選択される、本発明1021のタバコ製品。
[本発明1024]
前記乾燥タバコ材料が、空気乾燥(air-cured)タバコ材料、火力乾燥(fire-cured)タバコ材料、日干乾燥(sun-cured)タバコ材料、および熱風乾燥(flue-cured)タバコ材料からなる群より選択される、本発明1021のタバコ製品。
配列の簡単な説明
配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83~160、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225~228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、および257~260は、核酸配列である。
配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、および256は、ポリペプチド配列である。
本明細書で提供される配列番号のさらなる説明は、表1に見出すことができる。
(表1)配列の説明
Figure 0007416761000001
Figure 0007416761000002
Figure 0007416761000003
Figure 0007416761000004
Figure 0007416761000005
Figure 0007416761000006
Figure 0007416761000007
Figure 0007416761000008
Figure 0007416761000009
Figure 0007416761000010
Figure 0007416761000011
Figure 0007416761000012
バイナリーベクターp45-2-7(配列番号112)のプラスミドマップである。 プロモーター配列p1 2.5kb(配列番号113)およびp1 2.4kb(配列番号257)における、シス制御エレメントである、芽休眠エレメント(配列番号258)、糖抑制エレメント(配列番号259)、および腋芽Up2エレメント(配列番号260)の位置を示す。 タバコのβ-グルクロニダーゼ(GUS)に融合したプロモーター(配列番号113)の発現パターンを示す。GUS蓄積の暗色領域は、摘心後に配列番号113が活性を有することを示す。配列番号113は、摘心(0時間)の時点で、茎頂分裂組織(SAM)において活性を有さない。しかしながら、配列番号113は、摘心時(0時間)、摘心後24時間(24h)、および摘心後72時間(72h)に腋生分裂組織において活性を有する。配列番号113は、摘心7日後(7d)において活性を有さない。h=時間。 図4は、タバコのGUSに融合したプロモーター(配列番号257)の発現パターンを示す。GUS蓄積の暗色領域は、摘心後に配列番号257が活性を有することを示す。配列番号257は、摘心(0時間)の時点で、茎頂分裂組織(SAM)において活性を有さない。しかしながら、配列番号257は、摘心の時点(0時間)、摘心24時間後(24h)、摘心72時間後(72h)、および摘心7日後(7d)に腋生分裂組織において活性を有する。パネル4Aおよび4Bは、配列番号257::GUS構築物を含む異なる独立したタバコ株を示す。h=時間。 図4Aの説明を参照。 タバコ苗における配列番号113::GUSおよび配列番号257::GUS構築物の発現パターンを示す。いずれの構築物でもGUS染色は検出されなかった。 タバコの柱頭、葯、および花粉粒における配列番号113::GUSの発現パターンを示す。これらの組織のいずれにおいても、GUS染色は検出されなかった。 野生型(対照)タバコ植物の写真、および配列番号113::バルナ―ゼ(配列番号79)構築物を含む3つの独立したタバコ株由来のT0タバコ植物の写真を示す。摘心2週間後において、配列番号113::バルナ―ゼ構築物を含むタバコ株が示す吸枝発生は、野生型と比較して低減されていた。h=時間。 図8は、野生型(対照)タバコ植物の写真、および配列番号257::バルナ―ゼ(配列番号79)構築物を含む1つのタバコ株由来のT1タバコ植物の写真を示す。パネル8Aは、摘心時の植物を示す。 パネル8Bは、摘心4週間後の植物を示す。配列番号257::バルナ―ゼ構築物を含む植物が示す吸枝発生は、野生型植物と比較して低減されていた。
詳細な説明
特に定義しない限り、使用される全ての技術用語および科学用語は、本明細書が属する技術分野の当業者に一般的に理解される意味と同じ意味を有する。用語が単数形で提供される場合、発明者らはまた、その用語の複数形によって説明される本開示の態様を企図する。参照により援用される参照文献で使用される用語および定義に相違がある場合、本出願で使用される用語は、本明細書に与えられる定義を有するものとする。使用される他の技術用語は、様々な技術分野に特化した辞書、例えば、「The American Heritage(登録商標)Science Dictionary」(Editors of the American Heritage Dictionaries,2011,Houghton Mifflin Harcourt,Boston and New York)、「McGraw-Hill Dictionary of Scientific and Technical Terms」(6th edition,2002,McGraw-Hill,New York)、または「Oxford Dictionary of Biology」(6th edition,2008,Oxford University Press,Oxford and New York)によって例示されるように、それらが使用される技術分野においてそれらの通常の意味を有する。
例えば、全ての特許、公開特許出願、および非特許文献を含む本明細書に引用されるいかなる参考文献も、それらの全体が参照により援用される。
一群の選択肢が提示される場合、その選択肢群を構成するメンバーの任意のおよび全ての組み合わせが具体的に想定される。例えば、項目がA、B、C、およびDからなる群より選択される場合、本発明者らは、各選択肢を個別に(例えば、A単独、B単独など)、ならびにA、B、およびD、ならびにC、BおよびCなどの組み合わせを具体的に想定する。用語「および/または」は、2つ以上の項目のリストにおいて使用される場合、単独で、または任意の1つ以上の他の列挙された項目と組み合わせて、列挙された項目のうちのいずれか1つを意味する。例えば、「Aおよび/またはB」という表現は、AとBのいずれかまたは両方、すなわち、A単独、B単独、またはAとBの組み合わせを意味することが意図される。「A、Bおよび/またはC」という表現は、A単独、B単独、C単独、AとBの組み合わせ、AとCの組み合わせ、BとCの組み合わせ、またはAとBとCの組み合わせを意味することが意図される。
本明細書で数の範囲が提供される場合、範囲は、範囲の端、ならびに定義された範囲の端の間の任意の数を包含するものと理解される。例えば、「1~10」は、1~10の間の任意の数、ならびに数1および数10を含む。
本明細書で使用される場合、単数形の「a」、「an」、および「the」は、文脈から明らかでない限り、複数の参照を含む。例えば、「化合物」または「少なくとも1つの化合物」という用語は、それらの混合物を含む複数の化合物を含み得る。
本明細書で提供される任意の核酸分子は、本明細書で提供される任意の方法と共に使用することが想定される。本明細書で提供される任意の核酸分子は、本明細書で提供される任意の植物または種子と共に使用することが想定される。本明細書で提供される任意の核酸分子は、本明細書で提供される任意のタバコ植物またはタバコ種子と共に使用することが想定される。
一態様では、本開示は、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子を提供し、プロモーターは、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み(当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される)、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、(c)異種核酸分子に作動可能に連結されている。
「ポリヌクレオチド」または「核酸分子」という用語の使用は、本開示が、デオキシリボ核酸(DNA)を含むポリヌクレオチドに限定されることは意図されない。例えば、リボ核酸(RNA)分子も想定される。当業者は、ポリヌクレオチドおよび核酸分子は、リボヌクレオチド、ならびにリボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドの組み合わせを含み得ることを認識するであろう。かかるデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドは、天然に存在する分子および合成類似体の両方を含む。また、本開示のポリヌクレオチドは、限定されないが、一本鎖形態、二本鎖形態、ヘアピン、ステムアンドループ構造などを含む全ての形態の配列を包含する。一態様では、本明細書で提供される核酸分子は、DNA分子である。別の態様では、本明細書で提供される核酸分子は、RNA分子である。一態様では、本明細書で提供される核酸分子は、一本鎖である。別の態様では、本明細書で提供される核酸分子は、二本鎖である。核酸分子は、ポリペプチドまたは非コードRNAをコードすることができる。
一態様では、本明細書で提供される核酸分子は、プラスミドまたはベクターである。一態様では、本明細書で提供されるプラスミドまたはベクターは、組換えベクターである。本明細書で使用される場合、「組換えベクター」という用語は、分子クローニングなどの遺伝子組換えの実験室法によって形成されるベクターを指す。別の態様では、本明細書で提供されるプラスミドは、合成プラスミドである。本明細書で使用される場合、「合成プラスミド」は、天然プラスミド(例えば、Tiプラスミド)と同じように機能(例えば、複製)することができる人工的に作製されたプラスミドである。限定されないが、当業者は、個々のヌクレオチドによるプラスミドの合成を介して、または異なる既存のプラスミドをスプライシングすることによって、合成プラスミドをデノボで作製することができる。
本明細書で使用される場合、「ベクター」または「プラスミド」という用語は、互換的に使用され、染色体DNAから物理的に分離される環状の二本鎖DNA分子を指す。一態様では、本明細書で使用されるプラスミドまたはベクターは、インビボで複製することができる。本明細書で使用される場合、「形質転換ベクター」は、植物細胞を形質転換することができるプラスミドである。一態様では、本明細書で提供されるプラスミドは、細菌プラスミドである。別の態様では、本明細書で提供されるプラスミドは、アグロバクテリウム(Agrobacterium)Tiプラスミドであるか、またはそれに由来する。
当該技術分野で一般的に理解されるように、「プロモーター」という用語は、RNAポリメラーゼ結合部位、転写開始部位、および/またはTATAボックスを含有し、関連する転写可能なポリヌクレオチド配列および/または遺伝子(または導入遺伝子)の転写および発現を補助するか、または促進するDNA配列を指す。プロモーターは、既知のプロモーター配列または天然に存在するプロモーター配列あるいは他のプロモーター配列から合成的に産生、変異、または誘導することができる。プロモーターはまた、2つ以上の異種配列の組み合わせを含むキメラプロモーターを含み得る。したがって、本出願のプロモーターは、組成が類似するが、本明細書で既知または提供される他のプロモーター配列と同一ではないプロモーター配列のバリアントを含み得る。
当該技術分野では、プロモーターは、プロモーターがいつ、どこで、どれくらい長く活性を有するかを決定する上で重要な役割を果たす1つ以上の「エレメント」を含み得ることが理解される。本明細書で使用される場合、「活性」のプロモーターは、検出可能なレベルで作動可能に連結された核酸分子の転写を開始しているプロモーターを指す。当業者は、当該技術分野で既知のいくつかの方法のうちのいずれか1つを介して、プロモーターが活性を有するかどうかを決定することができる。例えば、プロモーターが活性を有するかどうかを決定する例示的な方法としては、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)、定量的RT-PCR、およびRNA配列決定が挙げられる。これら、および他の好適な方法を使用して、プロモーターに作動可能に連結した核酸分子のRNA転写産物の蓄積を検出することによって、プロモーターが活性を有するかどうかを決定することができる。同様に、プロモーターの活性は、プロモーターが活性を有するかどうかを決定するために、視覚マーカー、例えば、β-グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ、または緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子に作動可能に連結され得る。組織試料中の視覚マーカーの存在は、プロモーターがその組織内で活性を有することを示す。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターエレメントは、芽休眠エレメント(配列番号258)である。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターエレメントは、糖抑制エレメント(配列番号259)である。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターエレメントは、腋芽up2エレメント(配列番号260)である。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、3つ以下の芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、2つ以下の芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1つまたは0の芽休眠エレメントを含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、3つの芽休眠エレメントを含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、2つの芽休眠エレメントを含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、芽休眠エレメントを含まない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも3つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも5つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、0~5つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、0~4つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、0~3つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、0~2つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~5つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~4つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~3つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、2~5つの芽休眠エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~4つの芽休眠エレメントを含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、3つ以下の糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、2つ以下の糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1つまたは0の糖抑制エレメントを含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、3つの糖抑制エレメントを含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、2つの糖抑制エレメントを含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、糖抑制エレメントを含まない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも3つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも5つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、0~5つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、0~4つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、0~3つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、0~2つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~5つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~4つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~3つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、2~5つの糖抑制エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~4つの糖抑制エレメントを含む。
別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1つまたは0の腋芽up2エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1つの腋芽up2エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、腋芽up2エレメントを含まない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの腋芽up2エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2つの腋芽up2エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも5つの腋芽up2エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~5つの腋芽up2エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~4つの腋芽up2エレメントを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1~3つの腋芽up2エレメントを含む。
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結されている」は、2つ以上のエレメント間が機能的に連結されていることを指す。例えば、目的のポリヌクレオチドと制御配列(例えば、プロモーター)との間の作動可能な連結は、目的のポリヌクレオチドの発現を可能にする機能的な連結である。作動可能に連結されているエレメントは、連続的または非連続的であってもよい。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、異種核酸分子に作動可能に連結されている。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されている。
本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、2つ以上のDNA分子または配列、例えば、プロモーターおよび関連する転写可能なDNA配列、コード配列または遺伝子の組み合わせを指し、そのような組み合わせは人工的であり、自然界に通常見出されない。
2つ以上のヌクレオチド配列またはタンパク質配列に関して本明細書で使用される場合、「パーセント同一性」または「パーセント同一」という用語は、(i)2つの最適にアライメントした配列(ヌクレオチドまたはタンパク質)を、比較のウィンドウ(「アライメント可能な」領域)にわたって比較すること、(ii)両方の配列で同一の核酸塩基(ヌクレオチド配列の場合)またはアミノ酸残基(タンパク質の場合)が生じる位置の数を決定して、一致する位置の数を得ること、(iii)一致する位置の数を、比較のウィンドウ内の位置の総数で割り、次いで(iv)この商に100%を乗じてパーセント同一性を得ることによって計算される。特定の比較ウィンドウが指定されることなく「パーセント同一性」が参照配列に関して計算される場合、パーセント同一性は、アライメントの領域にわたる一致する位置の数を参照配列の全長で割ることによって決定される。したがって、本出願の目的のために、2つの配列(クエリおよび対象)が最適にアライメントされるとき(それらのアライメントにおけるギャップを許容する)、クエリ配列の「パーセント同一性」は、2つの配列間の同一の位置の数を、その長さにわたるクエリ配列内の位置の総数(または比較ウィンドウ)で割り、次いで、それに100%を乗じたものに等しい。タンパク質に関して配列同一性のパーセンテージが使用される場合、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によってしばしば異なり、アミノ酸残基は、類似の化学特性(例えば、電荷または疎水性)を有する他のアミノ酸残基に置換され、したがって、分子の機能特性を変化させないことが認識される。配列が保存的置換で異なる場合、配列同一性のパーセントは、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整され得る。そのような保存的置換によって異なる配列は、「配列類似性」または「類似性」を有すると言われる。
それらのパーセント同一性を計算するための配列の最適アライメントに関して、ClustalWまたはBasic Local Alignment Search Tool(登録商標)(BLAST(商標))などの様々なペアワイズまたは複数配列アライメントアルゴリズムおよびプログラムが当該技術分野で既知であり、2つ以上のヌクレオチドまたはタンパク質配列間の配列同一性または配列類似性を比較するために使用することができる。他のアライメント方法および比較方法は当該技術分野で既知であるが、2つの配列間のアライメントおよびパーセント同一性(上に記載のパーセント同一性の範囲を含む)は、ClustalWアルゴリズムによって決定され得る。例えば、Chenna et al.,“Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs,”Nucleic Acids Research 31:3497-3500(2003)、Thompson et al.,“Clustal W:Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting,position-specific gap penalties and weight matrix choice,”Nucleic Acids Research 22:4673-4680(1994)、Larkin MA et al.,“Clustal W and Clustal X version 2.0,”Bioinformatics 23:2947-48(2007)、およびAltschul et al.“Basic local alignment search tool.”J.Mol.Biol.215:403-410(1990)を参照されたい(それらの全容および開示は、参照により本明細書に援用される)。
2つの配列が最適にアライメントされるとき、アライメントは、ギャップ(一方の配列が他方の配列と比較して「欠損した」ヌクレオチドであるように見える)を生成し得る。このようなギャップは、「欠失」と称される。欠失は、内部(例えば、2つの配列が欠失の両側で互いにアライメントされる)または外部(例えば、2つの配列が欠失の片側のみで互いにアライメントされる)であり得る。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも85%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも90%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも91%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも92%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも93%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも94%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも95%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも96%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも97%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも98%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも99%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257と少なくとも99.5%同一の核酸配列を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、本質的に配列番号257からなる。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号257からなる。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1つのヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも5つの連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも10個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも25個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも75個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも100個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも150個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも200個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも250個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも300個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも350個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも400個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも450個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも500個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも600個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも700個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも800個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも900個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1000個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1250個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1500個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1750個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも2000個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも2250個の連続するヌクレオチドの欠失を含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも1つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも1つの糖抑制エレメントの欠失を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも2つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも2つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも2つの糖抑制エレメントの欠失を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも3つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも3つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも3つの糖抑制エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも3つの糖抑制エレメントの欠失を含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも2つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも2つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも2つの芽休眠エレメントの欠失を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも3つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも3つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも3つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも3つの芽休眠エレメントの欠失を含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも2つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも2つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも2つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも3つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも3つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも3つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも3つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの腋芽up2エレメントおよび少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1つの腋芽up2エレメントおよび少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも1つの腋芽up2エレメントおよび少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも1つの腋芽up2エレメントおよび少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1つの糖抑制エレメント、少なくとも1つの腋芽up2エレメント、および少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と比較して、少なくとも1つの糖抑制エレメント、少なくとも1つの腋芽up2エレメント、および少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、少なくとも1つの糖抑制エレメント、少なくとも1つの腋芽up2エレメント、および少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。別の態様では、本明細書で提供される欠失は、配列番号113と比較して、少なくとも1つの糖抑制エレメント、少なくとも1つの腋芽up2エレメント、および少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む。
一態様では、本明細書で提供される欠失は、(a)少なくとも1つの糖抑制エレメント、(b)腋芽up2エレメント、(c)少なくとも1つの芽休眠エレメント、または(d)(a)、(b)、および(c)の任意の組み合わせ、の欠失を含む。
2つのヌクレオチド配列に関して本明細書で使用される「パーセント相補性」または「パーセント相補的な」という用語は、パーセント同一性の概念に類似しているが、クエリおよび対象配列が、ループ、ステム、またはヘアピンなどの二次折り畳み構造なしで線形に配置され、最適に塩基対が形成されるときに、対象配列のヌクレオチドと最適に塩基対合するかまたはハイブリダイズするクエリ配列のヌクレオチドのパーセンテージを指す。かかるパーセント相補性は、2つのDNA鎖間、2つのRNA鎖間、またはDNA鎖とRNA鎖間であり得る。「パーセント相補性」は、(i)比較のウィンドウにわたって(すなわち、折り畳みまたは二次構造なしで)線形かつ完全に伸長した配置において、2つのヌクレオチド配列を、最適に塩基対合させるかまたはハイブリダイズさせること、(ii)比較のウィンドウにわたって、2つの配列間で塩基対合する位置の数を決定して、相補的な位置の数を得ること、(iii)相補的な位置の数を比較のウィンドウ内の位置の総数で割ること、および(iv)この商に100%乗じて、2つの配列のパーセント相補性を得ること、によって計算することができる。2つの配列の最適な塩基対の形成は、水素結合を通して、G-C、A-T、およびA-Uなどのヌクレオチド塩基の既知の対合に基づいて決定することができる。「パーセント相補性」が、特定の比較ウィンドウを指定せずに参照配列に関して計算される場合、次いで、パーセント同一性は、2つの線形の配列間の相補的な位置の数を参照配列の全長で割ることによって決定される。したがって、本出願の目的のために、2つの配列(クエリおよび対象)が最適に塩基対合するとき(ミスマッチまたは非塩基対合ヌクレオチドを許容する)、クエリ配列の「パーセント相補性」は、2つの配列間の塩基対合の位置の数を、その長さにわたるクエリ配列内の位置の総数で割り、次いで、それに100%を乗じたものに等しい。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と少なくとも80%の同一性を有する配列を含み、当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と少なくとも85%の同一性を有する配列を含み、当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と少なくとも90%の同一性を有する配列を含み、当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と少なくとも95%の同一性を有する配列を含み、当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、配列番号113と100%の同一性を有する配列を含み、当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、50ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、100ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、250ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、500ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、1000ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、2000ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも50ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも75ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも100ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも200ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも300ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも400ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも500ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも600ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも700ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも800ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも900ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1000ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1100ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1200ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1300ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1400ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1500ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1600ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1700ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1800ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも1900ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2000ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2100ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2200ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2300ヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、少なくとも2400ヌクレオチドを含む。
本明細書で使用される場合、「腋芽成長抑制生成物(axillary bud-degrading product)」は、腋芽の成長および/または発達を阻害するように機能し得る任意の核酸またはタンパク質を指す。一態様では、本開示は、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする核酸分子を提供する。一態様では、腋芽成長抑制生成物は、腋芽の成長を阻害する。別の態様では、腋芽成長抑制生成物は、腋芽の発達を阻害する。限定されないが、腋芽の発達を阻害することは、正常な発達の進行を遅らせること、または腋芽が正常な発達を継続するのを阻止することを含むことができる。一態様では、腋芽成長抑制生成物は、RNAを含む。別の態様では、腋芽成長抑制生成物は、ポリペプチドを含む。別の態様では、腋芽成長抑制生成物は、低分子RNAを含む。一態様では、腋芽成長抑制生成物は、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される。一態様では、本明細書で提供される核酸分子は、腋芽成長抑制生成物をコードする。別の態様では、本明細書で提供される異種核酸は、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする。
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、少なくとも2つの共有結合で連結されたアミノ酸の鎖を指す。ポリペプチドは、本明細書で提供されるポリヌクレオチドによってコードすることができる。ポリペプチドの一例は、タンパク質である。本明細書で提供されるタンパク質は、本明細書で提供される核酸分子によってコードすることができる。
一態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも70%同一のアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも75%同一のアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも80%同一のアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも70%類似するアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも75%類似するアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも80%類似するアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%類似するアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%類似するアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも95%類似するアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と100%類似するアミノ酸配列を含む。
本明細書で使用される場合、「低分子RNA」は、任意の非コードRNA分子を指す。一態様では、低分子RNAは、18ヌクレオチド~30ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、18ヌクレオチド~24ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、18ヌクレオチド~22ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、18ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、19ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、20ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、21ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、22ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、23ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、24ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、25ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、26ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、27ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、28ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも18ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも19ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも20ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも21ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも22ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも23ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも24ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも25ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも26ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも27ヌクレオチド長である。別の態様では、低分子RNAは、少なくとも28ヌクレオチド長である。
一態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、マイクロRNA(miRNA)である。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、低分子干渉RNA(siRNA)である。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、ヘテロクロマチンsiRNA(hc-siRNA)である。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、Piwi相互作用RNA(piRNA)である。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、ヘアピン二本鎖RNA(hp-dsRNA)である。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、トランス作動性siRNA(ta-siRNA)である。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、天然に存在するアンチセンスsiRNA(nat-siRNA)である。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、Cas9ガイドRNA(gRNA)である。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、Cpf1-gRNAである。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、CasX-gRNAである。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、Csm1-gRNAである。
一態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも19個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも20個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも21個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも22個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも23個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも24個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも25個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも26個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも27個の連続するヌクレオチドを含む。別の態様では、本明細書で提供される低分子RNAは、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも28個の連続するヌクレオチドを含む。
一態様では、本開示は、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子を含むタバコ植物を提供し、当該プロモーターは、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み(当該同一性は、その配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される)、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ(c)異種核酸分子に作動可能に連結されており、当該タバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の同じ品種の対照タバコ植物と比較して、摘心後に吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む。
別の態様では、本開示は、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子を含む植物を提供し、当該プロモーターは、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み(当該同一性は、その配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される)、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ(c)異種核酸分子に作動可能に連結されており、当該植物は、同等の条件下で成長した場合の同じ品種の対照植物と比較して、摘心後に吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む。
さらに別の態様では、本開示は、核酸分子を含む植物または種子を提供し、当該核酸分子は、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、当該プロモーターは、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み(当該同一性は、その配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される)、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、(c)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されている。一態様では、本明細書で提供される植物は、同等の条件下で成長した場合、対照植物と比較して、吸枝を含まないか、または低減された吸枝を含む。
本明細書で使用される場合、「植物」は、植物全体を指す。植物に由来する細胞または組織培養物は、任意の植物成分または植物器官(例えば、葉、茎、根など)、植物組織、種子、植物細胞、および/またはそれらの子孫を含み得る。子孫植物は、任意の雑種世代、例えば、F、F、F、F、F、F、Fなどに由来し得る。植物細胞は、植物から採取されるか、または培養を通して植物から採取される細胞に由来する植物の生物学的な細胞である。本明細書で使用される場合、「苗」は、発芽後14日以内である植物を指す。
一態様では、本明細書で提供される植物成分としては、限定されないが、葉、茎、根、種子、花、花粉、葯、胚珠、小花柄、果実、成長点、子葉、胚軸、鞘、胚、胚乳、外植片、カルス、組織培養物、シュート、細胞、およびプロトプラストが挙げられる。さらなる態様では、本開示は、生殖物質ではなく、植物の自然生殖を媒介しない植物の細胞、組織、および器官を提供する。別の態様では、本開示はまた、生殖物質であり、植物の自然生殖を媒介する植物の細胞、組織、および器官も提供する。別の態様では、本開示は、光合成を介して自体を維持することができない植物の細胞、組織、および器官を提供する。別の態様では、本開示は、体細胞性の植物細胞を提供する。体細胞は、生殖系列細胞とは反対に、植物生殖を媒介しない。
提供される細胞、組織、および器官は、種子、果実、葉、子葉、胚軸、成長点、胚、胚乳、根、シュート、茎、鞘、花、花序、柄、小花柄、花柱、柱頭、花床、花弁、萼片、花粉、葯、花糸、子房、胚珠、果皮、篩部、および維管束組織に由来し得る。別の態様では、本開示は、植物の葉緑体を提供する。さらなる態様では、本開示は、表皮細胞、気孔細胞、毛茸細胞、根毛、または貯蔵根を提供する。
別の態様では、本開示は、タバコのプロトプラスト細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコのカルス細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの種子細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの種子細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの果実細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの葉細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの子葉細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの胚軸細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの分裂組織細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの胚細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの根細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコのシュート細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの茎細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの花細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの花序細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの柄細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの小花柄細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの花柱細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの柱頭細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの花床細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの花弁細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの萼片細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの花粉細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの葯細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの花糸細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの子房細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの胚珠細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの果皮細胞を提供する。別の態様では、本開示は、タバコの篩部細胞を提供する。
タバコは、ナス科(Solanaceae)の植物として、当該技術分野で既知である。非限定的で例示的なタバコ種としては、ニコチアナ・アクミナタ(Nicotiana acuminata)、ニコチアナ・アフリカナ(Nicotiana africana)、ニコチアナ・アラタ(Nicotiana alata)、ニコチアナ・アテヌアタ(Nicotiana attenuata)、ニコチアナ・ベンタミアナ(Nicotiana benthamiana)、ニコチアナ・クレベランジ(Nicotiana clevelandii)、ニコチアナ・エキシグア(Nicotiana exigua)、ニコチアナ・グラウカ(Nicotiana glauca)、ニコチアナ・グルチノサ(Nicotiana glutinosa)、ニコチアナ・ラングスドルフィ(Nicotiana langsdorffii)、ニコチアナ・ロンギフロラ(Nicotiana longiflora)、ニコチアナ・オシデンタリス(Nicotiana occidentalis)、ニコチアナ・オブツシフォリア(Nicotiana obtusifolia)、ニコチアナ・オトホラ(Nicotiana otophora)、ニコチアナ・プルムバギニフォリア(Nicotiana plumbaginifolia)、ニコチアナ・クアドリバルビス(Nicotiana quadrivalvis)、ニコチアナ・ラスティカ(Nicotiana rustica)、ニコチアナ・スアベオレンス(Nicotiana suaveolens)、ニコチアナ・シルベストリス(Nicotiana sylvestris)、ニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)、およびニコチアナ・トメントシホルミス(Nicotiana tomentosiformis)が挙げられる。一態様では、タバコは、ニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)を指す。
一態様では、本明細書で提供される植物は、タバコ植物である。別の態様では、本明細書で提供される種子は、タバコ種子である。別の態様では、本明細書で提供される葉は、タバコ葉である。別の態様では、本明細書で提供される植物細胞は、タバコ細胞である。別の態様では、本明細書で提供される植物組織は、タバコ組織である。別の態様では、本明細書で提供される植物器官は、タバコ器官である。さらなる態様では、本明細書で提供される植物成分は、タバコ成分である。
一態様では、本明細書で提供される植物は、改変植物である。別の態様では、本明細書で提供される種子は、改変種子である。さらなる態様では、本明細書で提供される植物成分は、改変植物成分である。一態様では、本明細書で提供される植物細胞は、改変植物細胞である。別の態様では、本明細書で提供される植物ゲノムは、改変植物ゲノムである。本明細書で使用される場合、「改変された」は、変異誘発、ゲノム編集、遺伝子形質転換、またはそれらの組み合わせ、に供された植物、種子、植物成分、植物細胞、および植物ゲノムを指す。一態様では、本開示は、タバコ植物を提供する。別の態様では、本開示は、タバコ種子を提供する。さらなる態様では、本開示は、タバコ葉を提供する。またさらなる態様では、本開示は、改変された乾燥タバコ葉を提供する。
一態様では、本開示は、タバコ植物を提供し、本明細書で提供される任意の核酸分子を含む。別の態様では、本開示は、タバコ種子を提供し、本明細書で提供される任意の核酸分子を含む。さらなる態様では、本開示は、タバコ葉を提供し、本明細書で提供される任意の核酸分子を含む。またさらなる態様では、本開示は、乾燥タバコ葉を提供し、本明細書で提供される任意の核酸分子を含む。一態様では、本開示は、植物を提供し、本明細書で提供される任意の核酸分子を含む。別の態様では、本開示は、種子を提供し、本明細書で提供される任意の核酸分子を含む。さらなる態様では、本開示は、葉を提供し、本明細書で提供される任意の核酸分子を含む。
本明細書で使用される場合、「吸枝発生(suckering)」は、葉と柄との間で成長する腋生分裂組織に由来する腋芽(または側芽)(「吸枝(sucker)」)の発生および/または成長を指す。腋芽は、腋生分裂組織、周囲の葉組織、および周囲の茎組織を含む幼芽である。一態様では、吸枝発生は、植物を摘心することによって誘導される。
双子葉植物の茎頂分裂組織および腋生分裂組織は、L1層(最外層)、L2層(中間層)、およびL3層(最内層)の3つの異なる細胞層を含む。L1層およびL2層は外衣(tunica)を構成し、それらは垂層分裂する(分割面は分裂組織の表面に垂直である)。L3層、すなわち内体(corpus)は、全ての方向に分裂する。L1層は、最終的には、表皮組織を生じ、L2層は、基本組織(例えば、柔組織、厚角組織、厚壁組織)を生じ、L3層は、典型的には、維管束組織(例えば、木部、篩部)を生じる。
茎頂分裂組織および腋生分裂組織には、多能性細胞のグループとして自体を維持すること、および植物の地上の器官(例えば、茎、葉、花)を生成することの2つの主要な機能がある。分裂組織が何らかの理由で自体を維持できない場合、最終的に多能性細胞を枯渇させ、追加の器官が生じなくなる。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の同じ品種の対照タバコ植物と比較して、腋生分裂組織の成長の阻害もしくは排除、腋生分裂組織の維持の阻害もしくは排除、またはそれらの組み合わせを示す。
一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、腋生分裂組織において活性を有する。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、腋芽組織において活性を有する。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、摘心後少なくとも7日間、腋生分裂組織において活性を有する。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、摘心後少なくとも7日間、腋芽組織において活性を有する。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、タバコ苗植物において活性を有さない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、苗植物において活性を有さない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、タバコ種子において活性を有さない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、種子において活性を有さない。さらなる態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、タバコ胚において活性を有さない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、植物胚において活性を有さない。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、タバコ花粉細胞において活性を有さない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、花粉細胞において活性を有さない。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、タバコ卵細胞において活性を有さない。別の態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、植物卵細胞において活性を有さない。一態様では、本明細書で提供されるプロモーターは、茎頂分裂組織において活性を有さない。
本明細書で使用される場合、「摘心(topping)」は、植物が成熟に近いときに、茎頂分裂組織(SAM)を含む茎頂、花、および最大でいくつかの隣接する葉を含む茎頂を除去することを指す。タバコ植物を摘心すると、頂芽優勢が失われる。摘心前は、SAMが発するホルモンシグナルによって吸枝発生はほとんど休眠状態に保たれる。摘心によってホルモンシグナルが取り除かれ、吸枝の成長が可能になり得る(「摘心により誘導される吸枝発生」)。吸枝発生が十分に制御される場合、摘心により、収量が増加(1エーカーあたりの値が増加)し、タバコ葉の物理的および化学的特性に対して望ましい変化がもたらされる。
本明細書で使用される場合、「同等の成長条件」は、2つ以上の植物遺伝子型を成長させて当該2つ以上の植物遺伝子型の間で有意義な比較を行うための類似の環境条件および/または農耕法であって、いかなる環境条件も農耕法も当該2つ以上の植物遺伝子型の間で観察されたいかなる違いにも寄与しないかまたはそれを説明しない、環境条件および/または農耕法を指す。環境条件としては、例えば、光、温度、水、湿度、および栄養素(例えば、窒素およびリン)が挙げられる。農耕法としては、例えば、播種、剪定、アンダーカット、移植、摘心、およびサッカリングが挙げられる。Tobacco,Production,Chemistry and Technology,Davis & Nielsen,eds.,Blackwell Publishing,Oxford(1999),pp.70-103の4B章および4C章を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「摘心により誘導される吸枝発生の低減」または「吸枝発生の低減」は、農学的性能(例えば、収量、品質、および全体的な生産性)に対して、摘心後の同等の条件下で成長したときの対照植物と比較して、吸枝の数の減少、吸枝のサイズの減少(例えば、乾燥生物量、新鮮重量、長さ、直径)、および/または吸枝の影響の減少を有することを指す。本明細書で使用される場合、吸枝の数、吸枝のサイズ、および/または吸枝が有する農学的性能に対する影響の「低減」は、統計的に有意な低減を指す。本明細書で使用される場合、「統計的に有意」は、統計的有意性の適切な尺度(例えば、片側二標本t検定)を使用する場合、0.05未満のp値を指す。
別途指定されない限り、タバコの植物、品種、栽培品種、または株について、本明細書で言及される吸枝の長さ、吸枝の生物量、吸枝の数、葉の収量、または葉の等級指標値の測定値は、例えば、単一の植物の複数の葉の平均(例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、もしくは20枚、またはそれより多くの葉)、または単一の品種、栽培品種、もしくは株由来のタバコ植物の集団からの平均測定値を含む平均測定値を指す。平均測定値(例えば、新鮮重量、乾燥生物量、または葉の等級付け)を決定するためのタバコ植物の集団またはタバコ葉の収集物は、任意のサイズ、例えば、5、10、15、20、25、30、35、40、または50であり得る。業界で認められている標準プロトコルに従って、平均測定値または等級指標値を決定する。
一態様では、低減された吸枝発生は、吸枝の乾燥生物量の低減を含む。一態様では、低減された吸枝発生は、吸枝の新鮮重量の低減を含む。別の態様では、低減された吸枝発生は、吸枝の長さの低減を含む。さらに別の態様では、低減された吸枝発生は、存在する吸枝の数の減少を含む。一態様では、低減された吸枝発生は、吸枝の乾燥生物量の低減、吸枝の新鮮重量の低減、吸枝の長さの低減、吸枝の直径の低減、総吸枝数の減少、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
一態様では、吸枝の数は、摘心の1週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の2週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の3週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の4週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の5週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の6週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の7週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の8週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の9週間後にカウントされる。別の態様では、吸枝の数は、摘心の10週間後にカウントされる。
一態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の1週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の2週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の3週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の4週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の5週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の6週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の7週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の8週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の9週間後に測定される。別の態様では、吸枝の新鮮重量は、摘心の10週間後に測定される。
一態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の1週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の2週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の3週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の4週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の5週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の6週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の7週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の8週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の9週間後に測定される。別の態様では、吸枝の乾燥生物量は、摘心の10週間後に測定される。
吸枝の長さは、吸枝の基部(植物の主茎に付く場所)と吸枝の基部から最も遠位の吸枝の部分との間の距離として測定される。一態様では、吸枝の長さは、摘心の1週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の2週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の3週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の4週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の5週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の6週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の7週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の8週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の9週間後に測定される。別の態様では、吸枝の長さは、摘心の10週間後に測定される。
吸枝の直径は、植物の主茎に隣接する基部で測定される。一態様では、吸枝の直径は、摘心の1週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の2週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の3週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の4週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の5週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の6週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の7週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の8週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の9週間後に測定される。別の態様では、吸枝の直径は、摘心の10週間後に測定される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも10%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも15%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも20%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも25%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも30%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも35%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも40%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも45%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも50%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも55%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも60%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも65%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも70%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも75%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも80%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも85%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも90%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、少なくとも95%低減される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、1%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、1%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、1%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、1%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、5%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、5%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、5%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、5%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、10%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、10%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、10%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、10%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、25%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、25%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、25%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、50%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、50%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の新鮮生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の新鮮生物重量と比較して、75%~100%低減される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して少なくとも10%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも15%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも20%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して少なくとも25%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも30%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも35%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも40%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも45%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも50%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも55%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも60%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも65%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも70%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも75%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも80%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも85%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも90%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、少なくとも95%低減される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、1%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、1%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、1%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、1%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、5%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、5%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、5%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、5%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、10%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、10%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、10%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、10%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、25%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、25%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、25%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、50%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、50%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の乾燥生物重量は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の乾燥生物重量と比較して、75%~100%低減される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも10%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも15%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも20%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも25%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも30%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも35%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも40%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも45%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも50%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも55%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも60%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも65%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも70%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも75%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも80%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも85%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも90%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、少なくとも95%低減される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、1%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、1%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、1%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、1%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、5%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、5%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、5%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、5%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、10%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、10%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、10%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、10%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、25%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、25%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、25%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、50%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、50%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の長さは、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の長さと比較して、75%~100%低減される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも10%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも15%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも20%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも25%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも30%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも35%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも40%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも45%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも50%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも55%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも60%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも65%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも70%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも75%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも80%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも85%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも90%低減される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、少なくとも95%低減される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、1%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、1%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、1%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、1%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、5%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、5%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、5%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、5%~100%減少する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、10%~25%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、10%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、10%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、10%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、25%~50%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、25%~75%減少する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、25%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、50%~75%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、50%~100%低減される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物の吸枝の直径は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物の吸枝の直径と比較して、75%~100%低減される。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも1個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも2個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも3個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも4個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも5個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも6個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも7個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも8個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも9個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも10個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも15個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも20個の総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも30個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも40個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも50個少ない総吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも60個少ない総吸枝を含む。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも10%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも15%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも20%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも25%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも30%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも35%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも40%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも45%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも50%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも55%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも60%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも65%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも70%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも75%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも80%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも85%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも90%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、少なくとも95%少ない吸枝を含む。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、1%~25%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、1%~50%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、1%~75%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、1%~100%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、5%~25%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、5%~50%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、5%~75%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、5%~100%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、10%~25%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、10%~50%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、10%~75%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、10%~100%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、25%~50%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、25%~75%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、25%~100%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、50%~75%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、50%~100%少ない吸枝を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、75%~100%少ない吸枝を含む。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物と比較して、類似のまたはより高いレベルの収量(yield mass)を含む。本明細書で使用される場合、「類似の」は、10%以内を指す。一態様では、葉の収量は、新鮮収量、乾燥収量(dry yield mass)、および乾燥収量(cured yield mass)からなる群より選択される。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、対照タバコ植物と比較して、より高い葉収量を含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の50%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の45%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の40%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の35%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の30%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の25%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の20%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の15%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の10%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の5%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の4%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の3%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の2%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の1%以内の葉収量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の葉収量の0.5%以内の葉収量を産生する。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも0.25%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも0.5%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも1%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも2.5%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも5%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも10%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも15%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも20%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも25%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも30%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも40%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも50%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも60%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも70%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも80%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも90%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも100%多い乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量よりも少なくとも150%多い乾燥葉質量を産生する。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の0.25%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の0.5%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の1%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の2.5%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の5%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の10%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の15%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の20%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の25%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の30%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の40%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の50%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の60%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の70%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の80%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の90%~150%の乾燥葉質量を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の乾燥葉質量の100%~150%の乾燥葉質量を産生する。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物によって産生された葉の数の75%以内の数の葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物によって産生された葉の数の60%以内の数の葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物によって産生された葉の数の50%以内の数の葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物によって産生された葉の数の25%以内の数の葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物によって産生された葉の数の15%以内の数の葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物によって産生された葉の数の10%以内の数の葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物によって産生された葉の数の5%以内の数の葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した対照タバコ植物によって産生された葉の数の1%以内の数の葉を産生する。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物と比較して、類似の植物の高さを含む。一態様では、植物の高さは、植物が成長している成長培地(例えば、土壌)の最上部の表面と植物の最上部の葉の最上部の表面との間の距離として測定される。一態様では、タバコ植物は、対照植物の高さと等しいかまたはより高い高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも75%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも50%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも25%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも20%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも15%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも10%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも5%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも2.5%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも1%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも0.75%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも0.5%超の高さを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物の高さよりも少なくとも0.25%超の高さを含む。
タバコの等級は、限定されないが、葉の着葉位置、葉のサイズ、葉の色、葉の均一性および完全性、成熟度、質感、弾力性、光沢(葉の強度および着色深度ならびに輝きに関連)、吸湿性(タバコの葉が周囲の湿気を吸収および保持する能力)、ならびに緑色の色合いまたは色被りを含むがこれらに限定されない要因に基づいて評価される。葉の等級は、例えば、米国農務省の農業マーケティングサービスによって公表された公式標準等級を使用して決定することができる(7U.S.C.§511)。例えば、1990年11月5日発効のバーレータバコ(Burley Tobacco)の公式標準等級(米国タイプ31および外国タイプ93)(55F.R.40645)、1989年3月27日発効の熱風乾燥タバコ(Flue-Cured Tobacco)の公式標準等級(米国タイプ11、12、13、14および外国タイプ92)(54F.R.7925)、1965年1月8日発効のペンシルバニア州シードリーフタバコ(Pennsylvania Seedleaf Tobacco)の公式標準等級(米国タイプ41)(29F.R.16854)、1963年12月8日発効のオハイオ州シガーリーフタバコ(Ohio Cigar-Leaf Tobacco)の公式標準等級(米国タイプ42、43、および44)(28F.R.11719および28F.R.11926)、1969年11月20日発効のウィスコンシン州シガーバインダータバコ(Wisconsin Cigar-Binder Tobacco)の公式標準等級(米国タイプ54および55)(34F.R.17061)、1971年4月発効のジョージア州・フロリダ州日陰栽培シガーラッパータバコ(Georgia and Florida Shade-Grown Cigar-Wrapper Tobacco)の公式標準等級(米国タイプ62)を参照されたい。USDA等級指標値は、業界で認められている等級指標に従って決定することができる。例えば、Bowman et al,Tobacco Science,32:39-40(1988)、Legacy Tobacco Document Library(Bates Document #523267826-523267833,July 1,1988,Memorandum on the Proposed Burley Tobacco Grade Index)、およびMiller et al.,1990,Tobacco Intern.,192:55-57を参照されたい(前述の参照文献は全て、それらの全体が推論により援用される)。あるいは、葉の等級は、ハイパースペクトルイメージングを介して決定することができる。例えば、WO2011/027315(2011年3月10日に公開され、その全体が推論によって援用される)を参照のこと。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物と比較して、類似のまたはより高いUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約50%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約45%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約40%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約35%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約30%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約25%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約20%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約15%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約10%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約5%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約4%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約3%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約2%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約1%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、同等の条件下で成長した場合の対照タバコ植物のUSDA等級指標値の約0.5%以内のUSDA等級指標値を有する葉を産生する。
一態様では、本明細書で提供される植物は、同等の条件下で成長した場合、対照植物と比較して、吸枝発生を制御するために必要な管理が低減される。本明細書で使用される場合、「管理」は、吸枝を手で除去すること、吸枝を阻害もしくは除去するための化学物質(例えば、マレイン酸ヒドラジド、フルメトラリン)を塗布すること、またはその両方を指す。一態様では、本明細書で提供される植物は、同等の条件下で成長させた対照植物と比較して、必要とされる手動の吸枝除去の頻度が低減され、化学物質の塗布の頻度が低減されるか、化学物質の塗布の量が低減されるか、またはそれらの組み合わせである。例えば、Fisher et al.“Topping,Managing Suckers,and Using Ethephon,”pages 96-117 In:2016 Flue-Cured Tobacco Information,North Carolina State Universityを参照されたい(その全体が参照により本明細書に援用される)。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物と比較して、類似の葉の化学プロフィールを有する。限定されないが、葉の化学プロフィールは、タバコ植物またはタバコ葉のアルカロイド(例えば、ニコチン、ノルニコチン、アナバシン、アナタビン)、リンゴ酸、および還元糖(例えば、デキストロース)、またはそれらの組み合わせの量を含むことができる。限定されないが、葉の化学的性質は、乾燥葉質量1グラムあたりのミリグラムとして、または乾燥葉質量全体に対する割合(%)として測定することができる。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの50%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの40%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの30%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの25%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの20%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの15%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの10%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの5%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの4%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの3%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの2%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの1%以内の総アルカロイドレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総アルカロイドレベルの0.5%以内の総アルカロイドレベルを含む。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの50%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの40%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの30%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの25%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの20%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの15%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの10%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの5%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの4%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの3%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの2%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの1%以内のニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルの0.5%以内のニコチンレベルを含む。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの50%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの40%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの30%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合、対照植物のノルニコチンレベルの25%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの20%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの15%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの10%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの5%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合、対照植物のノルニコチンレベルの4%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの3%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合、対照植物のノルニコチンレベルの2%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの1%以内のノルニコチンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のノルニコチンレベルの0.5%以内のノルニコチンレベルを含む。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの50%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの40%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの30%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの25%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの20%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの15%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの10%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの5%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの4%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの3%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの2%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの1%以内のアナバシンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナバシンレベルの0.5%以内のアナバシンレベルを含む。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの50%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの40%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの30%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの25%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの20%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの15%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの10%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの5%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの4%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの3%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの2%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの1%以内のアナタビンレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のアナタビンレベルの0.5%以内のアナタビンレベルを含む。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの50%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの40%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの30%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの25%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの20%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの15%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの10%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの5%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの4%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの3%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの2%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のリンゴ酸レベルの1%以内のリンゴ酸レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の総リンゴ酸レベルの0.5%以内のリンゴ酸レベルを含む。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの50%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの40%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの30%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの25%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの20%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの15%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの10%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの5%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの4%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの3%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの2%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの1%以内の還元糖レベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物の還元糖レベルの0.5%以内の還元糖レベルを含む。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの50%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの40%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの30%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの25%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの20%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの15%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの10%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの5%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの4%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの3%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの2%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの1%以内のデキストロースレベルを含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物のデキストロースレベルの0.5%以内のデキストロースレベルを含む。
一態様では、本明細書で提供される植物または葉は、同等の条件下で成長した場合の対照植物と比較して、吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも50%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して、吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも60%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも70%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも80%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して、吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも90%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも95%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも96%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも97%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも98%低いニコチンレベルをさらに含む。別の態様では、本明細書で提供される植物または葉は、対照植物と比較して吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、同等の条件下で成長した場合の対照植物のニコチンレベルよりも少なくとも99%低いニコチンレベルをさらに含む。
一態様では、本開示は、本明細書で提供される任意の植物由来のタバコの葉を提供する。
本開示のタバコ植物、細胞、株、品種、またはハイブリッドから得られたタバコ材料を使用して、タバコ製品を製造することができる。本明細書で使用される場合、「タバコ製品」は、人による使用または消費を意図したタバコから製造された、または由来する任意の製品として定義される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ製品は、本明細書で提供されるタバコ植物由来の乾燥成分を含む。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ製品は、本明細書で提供されるタバコ植物由来の乾燥タバコ葉を含む。一態様では、本開示は、本明細書で提供される任意のタバコ植物に由来する乾燥タバコ材料を含むタバコ製品を提供する。
アルカロイド化合物は、本明細書で提供される任意のタバコ植物または植物部分から抽出または単離され得る。一態様では、本明細書で提供されるタバコ製品は、タバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたアルカロイドを含む。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ製品は、タバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたニコチンを含む。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ製品は、タバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたアナタビンを含む。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ製品は、タバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたアナバシンを含む。一態様では、本明細書で提供されるタバコ製品は、タバコ植物または植物部分から抽出されたノルニコチンを含む。
一態様では、本明細書で提供される乾燥タバコ材料は、空気乾燥タバコ(air-cured tobacco)材料を含む。別の態様では、本明細書で提供される乾燥タバコ材料は、火力乾燥タバコ(fire-cured tobacco)材料を含む。別の態様では、本明細書で提供される乾燥タバコ材料は、日干乾燥タバコ材料(sun-cured tobacco)を含む。別の態様では、本明細書で提供される乾燥タバコ材料は、熱風乾燥タバコ(flue-cured tobacco)材料を含む。別の態様では、本明細書で提供される乾燥タバコ材料は、空気乾燥タバコ材料、火力乾燥タバコ材料、日干乾燥タバコ材料、および熱風乾燥タバコ材料からなる群より選択される。
本明細書で提供されるタバコ製品としては、紙巻タバコ製品(例えば、紙巻タバコ(cigarette)、ビディシガレット(bidi cigarette)、クレテック(kretek))、葉巻製品(例えば、葉巻(cigar)、葉巻タバコ(cigar wrapping tobacco)、シガリロ(cigarillo))、パイプタバコ製品、タバコ由来製品、タバコ由来ニコチン製品、無煙タバコ製品(例えば、湿性嗅ぎタバコ(moist snuff)、乾燥嗅ぎタバコ(dry snuff)、噛みタバコ(chewing tobacco)、湿性無煙タバコ(moist smokeless tobacco)、ファインカット噛みタバコ(fine cut chewing tobacco)、ロングカット噛みタバコ(long cut chewing tobacco)、ポーチ噛みタバコ(pouched chewing tobacco))、フィルム(film)、チュアブル(chewable)(例えば、ガム(gum))、ロゼンジ(lozenge)、溶解ストリップ(dissolving strip)、タブ(tab)、タブレット(tablet)、成型部分(shaped part)、ゲル(gel)、消耗品ユニット(consumable unit)、不溶性マトリックス(insoluble matrix)、中空形状(hollow shape)、再構成タバコ(reconstituted tobacco)、膨張タバコ(expanded tobacco)などが含まれるが、これらに限定されない。例えば、米国特許公開第2006/0191548号を参照されたい。一態様では、タバコ製品は、紙巻タバコ、クレテック、ビディシガレット、葉巻、シガリロ、非通気式紙巻タバコ、通気式リセスフィルター紙巻タバコ、パイプタバコ、嗅ぎタバコ、噛みタバコ、湿性無煙タバコ、ファインカット噛みタバコ、ロングカット噛みタバコ、およびポーチ噛みタバコからなる群より選択される。別の態様では、タバコ製品は、ガム、タブレット、ロゼンジ、および溶解性ストリップからなる群より選択される。別の態様では、本開示のタバコ製品は、無煙タバコ製品である。
本明細書で提供されるタバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたアルカロイド化合物を使用して、不燃性製品(non-combustible product)との使用に好適な組成物を生成することができる。例示的な不燃性製品としては、電子タバコ(electronic cigarette)(「Eシガレット(e-cigarette)」)、電子喫煙物品(electronic smoking article)、Eベイパー製品(e-vapor product)、エアロゾル化ベイパー製品(aerosolized vapor product)、および加熱タバコ製品(heated tobacco product)が挙げられる。一態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、本明細書で提供されるタバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたアルカロイドを含む。一態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、本明細書で提供されるタバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたニコチンを含む。一態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、本明細書で提供されるタバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたアナバシンを含む。一態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、本明細書で提供されるタバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたアナタビンを含む。一態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、本明細書で提供されるタバコ植物またはタバコ植物部分から抽出されたノルニコチンを含む。
一態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、Eシガレットである。別の態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、電子喫煙物品である。別の態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、エアロゾル化ベイパー製品である。別の態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、加熱タバコ製品である。別の態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、Eベイパー製品である。一態様では、本明細書で提供される不燃性製品は、電子タバコ、電子喫煙物品、エアロゾル化ベイパー製品、および加熱タバコ製品からなる群より選択される。
本明細書で使用される場合、「紙巻タバコ(cigarette)」は、「ロッド(rod)」および「フィラー(filler)」を有するタバコ製品を指す。紙巻タバコの「ロッド」には、タバコ紙、フィルター、プラグラップ(濾過材料を含むために使用)、タバコ巻紙(フィラーを含む)をフィルターに保持するチップペーパー、およびこれらの構成要素を一緒に保持する全ての接着剤が含まれる。「フィラー」は、(1)再構成タバコおよび膨張タバコを含むがこれらに限定されない全てのタバコ、(2)非タバコ置換物(ハーブ、非タバコ植物材料、ならびに紙巻タバコの紙内で巻かれたタバコに付随し得る他のスパイスを含むがこれらに限定されない)、(3)ケーシング、(4)調味料、ならびに(5)全ての他の添加物(タバコおよび置換物に混合され、紙巻タバコ内に巻かれる)を含むがこれらに限定されない。
一態様では、本開示は、タバコ葉の容器を提供し、本明細書に記載のタバコ植物由来の乾燥タバコ葉または未乾燥タバコ葉を、貯蔵、輸送、またはその他収納するために使用する。非限定的な例として、容器は、箱、袋、樽、木枠(crate)、または任意の他の好適な容器であり得る。
別の態様では、本開示は、本明細書で提供される任意のタバコ植物由来の乾燥タバコ葉の俵(bale)を提供する。本明細書で提供される任意のタバコ植物由来の未乾燥タバコ葉の俵もまた、本明細書で提供される。俵は、当該技術分野で既知の任意のサイズであり得る。一態様では、俵は、少なくとも1kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも5kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも10kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも15kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも20kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも25kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも30kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも35kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも40kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも45kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも50kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも60kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも70kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも80kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも90kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも100kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも125kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも150kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも175kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも200kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも225kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも250kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも275kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも300kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも350kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも400kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも450kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも500kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも600kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも700kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも800kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも900kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも1000kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも1500kgを含む。別の態様では、俵は、少なくとも2000kgを含む。俵は、任意の形状であり得る。俵形状の非限定的な例としては、円錐形、球形、直方形、および立方形が挙げられる。
また、本明細書に記載のタバコ植物から収穫され、乾燥されたタバコ葉由来のタバコ製品の容器も、本明細書で提供される。非限定的な例として、容器は、箱、袋、パケット、パック、ポーチ、缶、または当該技術分野で既知の任意の他の容器であってもよい。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物、種子、植物成分、植物細胞、および植物ゲノムは、熱風乾燥タバコ、日干乾燥タバコ、空気乾燥タバコ、暗色空気乾燥タバコ、および暗色火力乾燥タバコからなる群より選択されるタバコのタイプに由来する。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物、種子、植物成分、植物細胞、および植物ゲノムは、バーレータバコ(Burley tobacco)、メリーランドタバコ(Maryland tobacco)、明色タバコ(bright tobacco)、バージニアタバコ(Virginia tobacco)、オリエンタルタバコ(Oriental tobacco)、トルコタバコ(Turkish tobacco)、およびガルパオタバコ(Galpao tobacco)からなる群より選択されるタバコのタイプに由来する。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物または種子は、ハイブリッド植物または種子である。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、熱風乾燥種タバコ植物、明色種タバコ植物、バーレー種タバコ植物、バージニア種タバコ植物、メリーランド種タバコ植物、ガルパオ種タバコ植物、暗色種タバコ植物、オリエンタル種タバコ植物、およびトルコ種タバコ植物からなる群より選択される。
本明細書で使用される場合、「ハイブリッド」は、子孫が各親由来の遺伝物質を含むように、異なる品種または種に由来する2つの植物を交配することによって作製される。当業者は、高次ハイブリッドも同様に生成され得ることを認識する。例えば、第1のハイブリッドは、品種Cを品種Dと交配してC×Dハイブリッドを作製することによって作ることができ、第2のハイブリッドは、品種Eと品種Fを交配してE×Fハイブリッドを作製することによって作ることができる。第1および第2のハイブリッドをさらに交配して、4つ全ての親品種からの遺伝情報を含む高次ハイブリッド(C×D)×(E×F)を作製することができる。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、ハイブリッドタバコ植物である。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ種子は、ハイブリッドタバコ種子である。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ品種は、雄性不稔(male sterile)である。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ品種は、細胞質雄性不稔(cytoplasmic male sterile、CMS)である。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、雄性不稔である。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、細胞質雄性不稔である。雄性不稔タバコ植物は、当該技術分野で既知の任意の方法によって産生され得る。雄性不稔タバコの産生方法は、Wernsman,E.A.,and Rufty,R.C.1987.Chapter Seventeen.Tobacco.Pages 669-698 In:Cultivar Development.Crop Species.W.H.Fehr(ed.),MacMillan Publishing Go.,Inc.,New York,N.Y.761 pp.に記載されている。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ品種は、雌性不稔(female sterile)である。非限定的な例として、雌性不稔植物は、STIG1遺伝子を変異させることによって作製することができる。例えば、Goldman et al.1994,EMBO Journal 13:2976-2984を参照されたい。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、雌性不稔である。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ品種は、一倍体(haploid)の倍化を介して産生される。一倍体の倍加は、一倍体の株を誘導して、その染色体を、ゲノム内の全ての遺伝子座でホモ接合である二倍体の状態になるように倍化するときに生じる。
熱風乾燥タバコ(バージニアの明色タバコとも呼ばれる)は、世界のタバコ生産量の約40%に相当する。熱風乾燥タバコは、乾燥中に黄金色から深いオレンジ色になるため、しばしば「明色タバコ」と称されることもある。熱風乾燥タバコは、軽くて際立つ芳香と風味がある。熱風乾燥タバコは、一般的に糖分が多く、油分も少ない。主要な熱風乾燥タバコ生産国は、アルゼンチン、ブラジル、中国、インド、タンザニア、および米国である。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物または種子は、CC13、CC27、CC33、CC35、CC37、CC65、CC67、CC700、GF318、GL338、GL368、GL939、K346、K399、K326、NC102、NC196、NC291、NC297、NC299、NC471、NC55、NC606、NC71、NC72、NC92、PVH1118、PVH1452、PVH2110、SPEIGHT168、SPEIGHT220、SPEIGHT225、SPEIGHT227、SPEIGHT236、ならびに前述の品種のうちのいずれかに本質的に由来する任意の品種からなる群より選択される熱風乾燥タバコの背景にある。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物または種子は、Coker48、Coker176、Coker371-Gold、Coker319、Coker347、GL939、K149、K326、K340、K346、K358、K394、K399、K730、NC27NF、NC37NF、NC55、NC60、NC71、NC72、NC82、NC95、NC297、NC606、NC729、NC2326、McNair373、McNair944、Ox207、Ox414NF、Reams126、Reams713、Reams744、RG8、RG11、RG13、RG17、RG22、RG81、RGH4、RGH51、Speight H-20、Speight G-28、Speight G-58、Speight G-70、Speight G-108、Speight G-111、Speight G-117、Speight 168、Speight 179、Speight NF-3、Va116、Va182、および前述の品種のうちのいずれかに本質的に由来する任意の品種からなる群より選択される熱風乾燥タバコの背景にある。WO2004/041006A1を参照されたい。さらなる態様では、本明細書で提供されるタバコ植物、種子、ハイブリッド、品種、または株は、K326、K346、およびNC196からなる群より選択される任意の熱風乾燥の背景にある。
空気乾燥タバコには、バーレー、メリーランド、および暗色タバコが含まれる。一般的な要因は、乾燥に、人工的な熱源および湿度源を主として用いないことである。バーレータバコは、薄色から濃い茶色で、油分が多く、糖分が少ない。バーレータバコは、小屋で空気乾燥される。バーレーの主要な栽培国はアルゼンチン、ブラジル、イタリア、マラウイ、米国である。メリーランドタバコは、非常にふわふわとして、良く燃焼し、ニコチンが少なく、自然な芳香がする。メリーランドの主要な栽培国としては、米国とイタリアが含まれる。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物または種子は、Clay402、Clay403、Clay502、Ky14、Ky907、Ky910、Ky8959、NC2、NC3、NC4、NC5、NC2000、TN86、TN90、TN97、R610、R630、R711、R712、NCBH129、HB4488PLC、PD7319LC、Bu21×Ky10、HB04P、Ky14×L8、Kt200、Newton98、Pedigo561、Pf561、およびVa509からなる群より選択されるバーレータバコの背景にある。さらなる態様では、本明細書で提供されるタバコ植物、種子、ハイブリッド、品種、または株は、TN90、KT209、KT206、KT212、およびHB4488からなる群より選択される任意のバーレーの背景にある。別の態様では、本明細書で提供されるタバコ植物または種子は、Md10、Md40、Md201、Md609、Md872、およびMd341からなる群より選択されるメリーランドタバコの背景にある。
暗色空気乾燥タバコは、主にその乾燥プロセスによって他のタイプと区別され、暗色空気乾燥タバコに中~濃い褐色と独特の芳香を与える。暗色空気乾燥タバコは、主に噛みタバコおよび嗅ぎタバコに使用される。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物または種子は、Sumatra、Jatim、Dominican Cubano、Besuki、One sucker、Green River、Virginia sun-cured、およびParaguan Passadoからなる群より選択される暗色空気乾燥タバコの背景にある。
暗色火力乾燥タバコは、一般に、閉鎖乾燥小屋の床で低燃焼の焚火で乾燥する。暗色火力乾燥タバコは、パイプブレンド、紙巻タバコ、噛みタバコ、嗅ぎタバコ、強い風味の葉巻タバコを作るために使用される。暗色火力乾燥タバコの主な栽培地域は、米国のテネシー州、ケンタッキー州、およびバージニア州であるである。一態様では、提供される低アルカロイドまたは低ニコチンのタバコ植物または種子は、Narrow Leaf Madole、Improved Madole、Tom Rosson Madole、Newton’s VH Madole、Little Crittenden、Green Wood、Little Wood、Small Stalk Black Mammoth、DT508、DT518、DT592、KY171、DF911、DF485、TN D94、TN D950、VA309、およびVA359からなる群より選択される暗色火力乾燥タバコの背景にある。
オリエンタルタバコは、典型的には、トルコ、ギリシャ、ブルガリア、マケドニア、シリア、レバノン、イタリア、ルーマニアなどの東地中海地域で栽培されるという事実から、ギリシャタバコ、アロマタバコ、およびトルコタバコとも称される。今日のオリエンタル種の特徴である小さな植物および葉のサイズ、ならびにその特有の芳香特性は、過去数世紀にわたって培われた、この植物の土壌の悪さとストレスの多い気候条件に対する適応の結果である。一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物または種子は、Izmir、Katerini、Samsun、BasmaおよびKrumovgrad、Trabzon、Thesalian、Tasova、Sinop、Izmit、Hendek、Edirne、Semdinli、Adiyanman、Yayladag、Iskenderun、Duzce、Macedonian、Mavra、Prilep、Bafra、Bursa、Bucak、Bitlis、Balikesirおよび前述の品種のうちのいずれかに本質的に由来する任意の品種からなる群より選択されるオリエンタルタバコの背景にある。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物、種子、ハイブリッド、品種、または株は、BU64、CC101、CC200、CC13、CC27、CC33、CC35、CC37、CC65、CC67、CC301、CC400、CC500、CC600、CC700、CC800、CC900、CC1063、Coker176、Coker319、Coker371Gold、Coker48、CU263、DF911、Galpao、GL26H、GL338、GL350、GL395、GL600、GL737、GL939、GL973、GF157、GF318、RJR901、HB04P、K149、K326、K346、K358、K394、K399、K730、NC196、NC37NF、NC471、NC55、NC92、NC2326、NC95、NC925、PVH1118、PVH1452、PVH2110、PVH2254、PVH2275、VA116、VA119、KDH959、KT200、KT204LC、KY10、KY14、KY160、KY17、KY171、KY907、KY907LC、KTY14xL8LC、Little Crittenden、McNair373、McNair944、雄性不稔KY14xL8、Narrow Leaf Madole、MS KY171、Narrow Leaf Madole(phph)、MS Narrow Leaf Madole、MS TND950、PD7302LC、PD7305LC、PD7309LC、PD7312LC、PD7318LC、PD7319LC、MSTKS2002、TKF2002、TKF6400、TKF4028、TKF4024、KT206LC、KT209LC、KT210LC、KT212LC、NC100、NC102、NC2000、NC291、NC297、NC299、NC3、NC4、NC5、NC6、NC7、NC606、NC71、NC72、NC810、NCBH129、NC2002、Neal Smith Madole、OXFORD207、‘Perique’、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R610、R630、R7-11、R7-12、RG17、RG81、RGH51、RGH4、RGH51、RS1410、Speight168、Speight172、Speight179、Speight210、Speight220、Speight225、Speight227、Speight234、Speight G-28、Speight G-70、Speight H-6、Speight H20、Speight NF3、TI1406、TI1269、TN86、TN86LC、TN90、TN90LC、TN97、TN97LC、TND94、TND950、TR(Tom Rosson)Madole、VA309、VA359、または当該技術分野で既知の標準的なタバコ交配技術による任意の商用タバコ品種に本質的に由来するか、またはその遺伝的背景にある。
一態様では、本明細書で提供されるタバコ植物は、BU64植物、CC101植物、CC200植物、CC13植物、CC27植物、CC33植物、CC35植物、CC37植物、CC65植物、CC67植物、CC301植物、CC400植物、CC500植物、CC600植物、CC700植物、CC800植物、CC900植物、CC1063植物、Coker176植物、Coker319植物、Coker371Gold植物、Coker48植物、CU263植物、DF911植物、Galpao植物、GL26H植物、GL338植物、GL350植物、GL395植物、GL600植物、GL737植物、GL939植物、GL973植物、GF157植物、GF318植物、RJR901植物、HB04P植物、K149植物、K326植物、K346植物、K358植物、K394植物、K399植物、K730植物、NC196植物、NC37NF植物、NC471植物、NC55植物、NC92植物、NC2326植物、NC95植物、NC925植物、PVH1118植物、PVH1452植物、PVH2110植物、PVH2254植物、PVH2275植物、VA116植物、VA119植物、KDH959植物、KT200植物、KT204LC植物、KY10植物、KY14植物、KY160植物、KY17植物、KY171植物、KY907植物、KY907LC植物、KTY14xL8 LC植物、Little Crittenden植物、McNair373植物、McNair944植物、雄性不稔KY14xL8植物、Narrow Leaf Madole植物、MS KY171植物、Narrow Leaf Madole(phph)植物、MS Narrow Leaf Madole植物、MS TND950植物、PD7302LC植物、PD7305LC植物、PD7309LC植物、PD7312LC植物、PD7318LC植物、PD7319LC植物、MSTKS2002植物、TKF2002植物、TKF6400植物、TKF4028植物、TKF4024植物、KT206LC植物、KT209LC植物、KT210LC植物、KT212LC植物、NC100植物、NC102植物、NC2000植物、NC291植物、NC297植物、NC299植物、NC3植物、NC4植物、NC5植物、NC6植物、NC7植物、NC606植物、NC71植物、NC72植物、NC810植物、NC BH129植物、NC2002植物、Neal Smith Madole植物、OXFORD207植物、‘Perique’植物、PVH03植物、PVH09植物、PVH19植物、PVH50植物、PVH51植物、R610植物、R630植物、R7-11植物、R7-12植物、RG17植物、RG81植物、RGH51植物、RGH4植物、RGH51植物、RS1410植物、Speight168植物、Speight172植物、Speight179植物、Speight210植物、Speight220植物、Speight225植物、Speight227植物、Speight234植物、Speight G-28植物、Speight G-70植物、Speight H-6植物、Speight H20植物、Speight NF3植物、TI1406植物、TI1269植物、TN86植物、TN86LC植物、TN90植物、TN90LC植物、TN97植物、TN97LC植物、TND94植物、TND950植物、TR(Tom Rosson)Madole植物、VA309植物、およびVA359植物からなる群より選択される。
前述の暗色空気乾燥、バーレー、メリーランド、暗色火力乾燥、またはオリエンタルタイプの全ての特定の品種を、例示の目的としてのみ列挙している。本出願では、任意の追加の暗色空気乾燥種、バーレー種、メリーランド種、暗色火力乾燥種、オリエンタル種も企図される。
一態様では、本開示は、タバコ植物において摘心により誘導される吸枝を制御するための方法を提供し、(a)タバコ細胞に核酸分子を導入する工程であって、当該核酸分子が、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、当該プロモーターが、(i)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み(当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される)、(ii)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、(iii)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されている、工程と、(b)タバコ細胞からタバコ植物を再生する工程であって、当該タバコ植物が、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、摘心により誘導される吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む、工程と、を含む。
また、当該技術分野で既知の任意の好適な形質転換方法を使用して、本明細書に記載の組換え構築物または発現カセットを用いるタバコ植物の形質転換も本明細書で提供される。ポリヌクレオチド配列をタバコ植物に導入する方法は、当該技術分野で既知であり、安定した形質転換方法、一過性の形質転換方法、およびウイルス媒介方法が含まれるが、これらに限定されない。「安定した形質転換」とは、植物に導入された目的のヌクレオチド構築物が植物のゲノムに組み込まれ、その子孫に受け継がれ得る形質転換を指す。「一過性の形質転換」は、配列が植物に導入され、一時的にのみ発現されるか、または植物に一過的にのみ存在することを意味することが意図される。
一態様では、本明細書で提供される方法および組成物は、1つ以上のポリヌクレオチドを、1つ以上の植物細胞に導入することを含む。一態様では、本明細書で提供される植物ゲノムは、導入された核酸分子または組換えベクターを含むように改変される。本明細書で使用される場合、「植物ゲノム」は、植物細胞の核ゲノム、ミトコンドリアゲノム、またはプラスチド(例えば、葉緑体)ゲノムを指す。別の態様では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、人工染色体に組み込まれる。一態様では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドを含む人工染色体は、植物細胞に組み込まれる。
本開示の植物細胞に核酸分子(例えば、導入遺伝子、組換えベクター、組換えDNA構築物、組換えポリヌクレオチド、発現構築物)を導入する好適な方法としては、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、アグロバクテリウム媒介形質転換(米国特許第5,104,310号、同第5,149,645号、同第5,177,010号、同第5,231,019号、同第5,463,174号、同第5,464,763号、同第5,469,976号、同第4,762,785号、同第5,004,863号、同第5,159,135号、同第5,563,055号、および同第5,981,840号)、直接的遺伝子導入、および弾道粒子加速(遺伝子銃送達(biolistic delivery)としても知られている。例えば、米国特許第4,945,050号、同第5,141,131号、同第5,886,244号、同第5,879,918号、および同第5,932,782号を参照されたい)が挙げられる。一態様では、核酸分子をタバコ細胞に導入する方法は、アグロバクテリウム媒介形質転換を含む。別の態様では、タバコ細胞に核酸分子を導入する方法は、エレクトロポレーションを含む。一態様では、核酸分子をタバコ細胞に導入する方法は、アグロバクテリウム媒介形質転換を含む。一態様では、核酸分子をタバコ細胞に導入する方法は、遺伝子銃送達を含む。
本明細書で提供される核酸分子は、植物をウイルスまたはウイルス核酸と接触させることによって、植物に導入され得る。一般に、かかる方法は、ウイルスDNAまたはRNA分子内に本開示の発現カセットを組み込むことを含む。本明細書で提供される発現カセットにおいて使用するためのプロモーターは、ウイルスRNAポリメラーゼによる転写に利用されるプロモーターを包含することも認識される。ウイルスDNAまたはRNA分子が関与する、ポリヌクレオチドを植物に導入し、それにコードされたタンパク質を発現するための方法は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第5,889,191号、同第5,889,190号、同第5,866,785号、同第5,589,367号、同第5,316,931号を参照されたい。
任意の植物組織は、その後、器官形成または胚形成によって、クローン法を使用して増殖することができ、本明細書で提供される組換え構築物または発現カセットで形質転換され得る。「器官形成」によって、分裂組織の中心からシュートおよび根が順次発生するプロセスが意図される。「胚発生」によって、シュートと根が、体細胞または配偶子から、(順次ではなく)協調的な様式で一緒に発達するプロセスが意図される。本明細書に記載の様々な形質転換プロトコルに好適な例示的な組織としては、限定されないが、プロトプラスト細胞、カルス組織、既存の分裂組織(例えば、頂端分裂組織、腋生分裂組織、および根端分裂組織)、ならびに誘導された分裂組織(例えば、子葉分裂組織および胚軸分裂組織)、胚軸、子葉、葉片、花粉、胚などが挙げられる。一態様では、形質転換細胞は、プロトプラスト細胞を含む。別の態様では、形質転換細胞は、カルス細胞を含む。
一態様では、本開示は、核酸分子を含むタバコ種子を栽植する工程を含む、タバコ植物を成長させる方法であって、当該核酸分子が、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、当該プロモーターが、(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み(当該同一性は、当該配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定される)、(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ(c)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されており、当該タバコ種子が発芽して、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、摘心により誘導される吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含むタバコ植物になる、方法。
本明細書で使用される場合、「栽植」は、種子の発芽を誘導するのに好適な条件を有する種子を提供することを指す。一態様では、タバコ種子は、圃場に栽植される。別の態様では、タバコ種子は、温室に栽植される。別の態様では、タバコ種子は、成長箱に栽植される。別の態様では、タバコ種子は、実験室に栽植される。別の態様では、タバコ種子は、水耕栽培システムに栽植される。別の態様では、タバコ種子は、ポットに栽植される。一態様では、タバコ種子は、屋外に栽植される。別の態様では、タバコの種子は、室内に栽植される。別の態様では、タバコ種子は、成長培地に栽植される。成長培地の非限定的な例としては、土壌、粘土、砂、壌土、堆肥、肥料、マルチ、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
以下の例示的で非限定的な実施形態が想定される:
1.腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子であって、前記プロモーターが、
(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、ここで前記同一性は、前記配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、
(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、
(c)異種核酸分子に作動可能に連結されている、
核酸分子。
2.前記プロモーターが、50ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む、実施形態1に記載の核酸分子。
3.前記プロモーターが、少なくとも50ヌクレオチドを含む、実施形態1に記載の核酸分子。
4.前記プロモーターが、少なくとも500ヌクレオチドを含む、実施形態1に記載の核酸分子。
5.前記プロモーターが、少なくとも1000ヌクレオチドを含む、実施形態1に記載の核酸分子。
6.前記プロモーターが、少なくとも2000ヌクレオチドを含む、実施形態1に記載の核酸分子。
7.前記プロモーターが、2つ以下の糖抑制エレメントを含む、実施形態1~6のいずれか1つに記載の核酸分子。
8.前記欠失が、少なくとも1つの糖抑制エレメントの欠失を含む、実施形態1~6のいずれか1つに記載の核酸分子。
9.前記欠失が、少なくとも2つの糖抑制エレメントの欠失を含む、実施形態1~6のいずれか1つに記載の核酸分子。
10.前記欠失が、腋芽up2エレメントの欠失を含む、実施形態1~9のいずれか1つに記載の核酸分子。
11.前記欠失が、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む、実施形態1~10のいずれか1つに記載の核酸分子。
12.前記欠失が、少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む、実施形態1~11のいずれか1つに記載の核酸分子。
13.前記欠失が、配列番号113と比較して、少なくとも75個の連続するヌクレオチドの欠失を含む、実施形態1~12のいずれか1つに記載の核酸分子。
14.前記欠失が、配列番号113と比較して、少なくとも100個の連続するヌクレオチドの欠失を含む、実施形態1~13のいずれか1つに記載の核酸分子。
15.前記欠失が、配列番号113と比較して、少なくとも200個の連続するヌクレオチドの欠失を含む、実施形態1~14のいずれか1つに記載の核酸分子。
16.前記欠失が、配列番号113と比較して、少なくとも500個の連続するヌクレオチドの欠失を含む、実施形態1~15のいずれか1つに記載の核酸分子。
17.前記プロモーターが、配列番号257と少なくとも85%同一の核酸配列を含む、実施形態1~16のいずれか1つに記載の核酸分子。
18.前記異種核酸分子が、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする、実施形態1~17のいずれか1つに記載の核酸分子。
19.前記少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物が、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される、実施形態18に記載の核酸分子。
20.前記ポリペプチドが、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも70%同一または類似のアミノ酸配列を含む、実施形態19に記載の核酸分子。
21.前記低分子RNAが、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む、実施形態19に記載の核酸分子。
22.腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子を含むタバコ植物であって、前記プロモーターが、
(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、前記同一性は、前記配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、
(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ
(c)異種核酸分子に作動可能に連結されており、
前記タバコ植物が、同等の条件下で成長した場合の同じ品種の対照タバコ植物と比較して、摘心後に吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む、タバコ植物。
23.前記プロモーターが、50ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む、実施形態22に記載のタバコ植物。
24.前記プロモーターが、少なくとも50ヌクレオチドを含む、実施形態22に記載のタバコ植物。
25.前記プロモーターが、少なくとも500ヌクレオチドを含む、実施形態22に記載のタバコ植物。
26.前記プロモーターが、少なくとも1000ヌクレオチドを含む、実施形態22に記載のタバコ植物。
27.前記プロモーターが、少なくとも2000ヌクレオチドを含む、実施形態22に記載のタバコ植物。
28.前記プロモーターが、2つ以下の糖抑制エレメントを含む、実施形態22~27のいずれか1つに記載のタバコ植物。
29.前記欠失が、少なくとも1つの糖抑制エレメントの欠失を含む、実施形態22~27のいずれか1つに記載のタバコ植物。
30.前記欠失が、少なくとも2つの糖抑制エレメントの欠失を含む、実施形態22~27のいずれか1つに記載のタバコ植物。
31.前記欠失が、腋芽up2エレメントの欠失を含む、実施形態22~30のいずれか1つに記載のタバコ植物。
32.前記欠失が、少なくとも1つの糖抑制エレメントおよび少なくとも1つの腋芽up2エレメントの欠失を含む、実施形態22~31のいずれか1つに記載のタバコ植物。
33.前記欠失が、少なくとも1つの芽休眠エレメントの欠失を含む、実施形態22~32のいずれか1つに記載のタバコ植物。
34.前記欠失が、配列番号113と比較して、少なくとも75個の連続するヌクレオチドの欠失を含む、実施形態22~33のいずれか1つに記載のタバコ植物。
35.前記欠失が、配列番号113と比較して、少なくとも100個の連続するヌクレオチドの欠失を含む、実施形態22~34のいずれか1つに記載のタバコ植物。
36.前記欠失が、配列番号113と比較して、少なくとも200個の連続するヌクレオチドの欠失を含む、実施形態22~35のいずれか1つに記載のタバコ植物。
37.前記欠失が、配列番号113と比較して、少なくとも500個の連続するヌクレオチドの欠失を含む、実施形態22~36のいずれか1つに記載のタバコ植物。
38.前記プロモーターが、配列番号257と少なくとも85%同一の核酸配列を含む、実施形態22~37のいずれか1つに記載のタバコ植物。
39.前記プロモーターが、腋生分裂組織において活性を有する、実施形態22~38のいずれか1つに記載のタバコ植物。
40.前記プロモーターが、前記摘心の少なくとも7日後に、腋生分裂組織において活性を有する、実施形態22~39のいずれか1つに記載のタバコ植物。
41.前記プロモーターが、タバコ苗植物において活性を有さない、実施形態22~40のいずれか1つに記載のタバコ植物。
42.前記プロモーターが、茎頂分裂組織において活性を有さない、実施形態22~41のいずれか1つに記載のタバコ植物。
43.前記摘心の1週間後に測定される前記吸枝がないかまたは減少している、実施形態22~42のいずれか1つに記載のタバコ植物。
44.前記摘心の4週間後に測定される前記吸枝がないかまたは減少している、実施形態22~43のいずれか1つに記載のタバコ植物。
45.前記減少した吸枝が、少なくとも10%少ない吸枝を含む、実施形態22~44のいずれか1つに記載のタバコ植物。
46.前記吸枝の減少が、吸枝の乾燥生物量の低減、吸枝の新鮮重量の低減、吸枝の長さの低減、吸枝の直径の低減、総吸枝数の減少、またはこれらの任意の組み合わせを含む、実施形態22~45のいずれか1つに記載のタバコ植物。
47.前記タバコ植物が、前記対照タバコ植物と比較して、より高い葉収量を含む、実施形態22~46のいずれか1つに記載のタバコ植物。
48.前記タバコ植物が、前記対照植物の高さと等しいかまたはより高い高さを含む、実施形態22~47のいずれか1つに記載のタバコ植物。
49.前記タバコ植物が、BU64植物、CC101植物、CC200植物、CC13植物、CC27植物、CC33植物、CC35植物、CC37植物、CC65植物、CC67植物、CC301植物、CC400植物、CC500植物、CC600植物、CC700植物、CC800植物、CC900植物、CC1063植物、Coker176植物、Coker319植物、Coker371Gold植物、Coker48植物、CU263植物、DF911植物、Galpao植物、GL26H植物、GL338植物、GL350植物、GL395植物、GL600植物、GL737植物、GL939植物、GL973植物、GF157植物、GF318植物、RJR901植物、HB04P植物、K149植物、K326植物、K346植物、K358植物、K394植物、K399植物、K730植物、NC196植物、NC37NF植物、NC471植物、NC55植物、NC92植物、NC2326植物、NC95植物、NC925植物、PVH1118植物、PVH1452植物、PVH2110植物、PVH2254植物、PVH2275植物、VA116植物、VA119植物、KDH959植物、KT200植物、KT204LC植物、KY10植物、KY14植物、KY160植物、KY17植物、KY171植物、KY907植物、KY907LC植物、KTY14xL8 LC植物、Little Crittenden植物、McNair373植物、McNair944植物、雄性不稔KY14xL8植物、Narrow Leaf Madole植物、MS KY171植物、Narrow Leaf Madole(phph)植物、MS Narrow Leaf Madole植物、MS TND950植物、PD7302LC植物、PD7305LC植物、PD7309LC植物、PD7312LC植物、PD7318LC植物、PD7319LC植物、MSTKS2002植物、TKF2002植物、TKF6400植物、TKF4028植物、TKF4024植物、KT206LC植物、KT209LC植物、KT210LC植物、KT212LC植物、NC100植物、NC102植物、NC2000植物、NC291植物、NC297植物、NC299植物、NC3植物、NC4植物、NC5植物、NC6植物、NC7植物、NC606植物、NC71植物、NC72植物、NC810植物、NC BH129植物、NC2002植物、Neal Smith Madole植物、OXFORD207植物、‘Perique’植物、PVH03植物、PVH09植物、PVH19植物、PVH50植物、PVH51植物、R610植物、R630植物、R7-11植物、R7-12植物、RG17植物、RG81植物、RGH51植物、RGH4植物、RGH51植物、RS1410植物、Speight168植物、Speight172植物、Speight179植物、Speight210植物、Speight220植物、Speight225植物、Speight227植物、Speight234植物、Speight G-28植物、Speight G-70植物、Speight H-6植物、Speight H20植物、Speight NF3植物、TI1406植物、TI1269植物、TN86植物、TN86LC植物、TN90植物、TN90LC植物、TN97植物、TN97LC植物、TND94植物、TND950植物、TR(Tom Rosson)Madole植物、VA309植物、およびVA359植物からなる群より選択される、実施形態22~48のいずれか1つに記載のタバコ植物。
50.熱風乾燥種タバコ植物、明色種タバコ植物、バーレー種タバコ植物、バージニア種タバコ植物、メリーランド種タバコ植物、ガルパオ種タバコ植物、暗色種タバコ植物、オリエンタル種タバコ植物、およびトルコ種タバコ植物からなる群より選択される、実施形態22~49のいずれか1つに記載のタバコ植物。
51.前記タバコ植物が、ハイブリッドタバコ植物である、実施形態22~50のいずれか1つに記載のタバコ植物。
52.前記タバコ植物が、雌性不稔タバコ植物である、実施形態22~51のいずれか1つに記載のタバコ植物。
53.前記タバコ植物が、雄性不稔タバコ植物である、実施形態22~52のいずれか1つに記載のタバコ植物。
54.前記雄性不稔タバコ植物が、細胞質雄性不稔タバコ植物である、実施形態53に記載のタバコ植物。
55.前記異種核酸分子が、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする、実施形態22~54のいずれか1つに記載のタバコ植物。
56.前記少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物が、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される、実施形態55に記載のタバコ植物。
57.前記ポリペプチドが、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも70%同一または類似のアミノ酸配列を含む、実施形態56に記載のタバコ植物。
58.前記低分子RNAが、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む、実施形態56に記載のタバコ植物。
59.実施形態22~58のいずれか1つに記載のタバコ植物のタバコ葉。
60.実施形態22~58のいずれか1つに記載のタバコ植物に由来する乾燥タバコ材料を含む、タバコ製品。
61.請求項22に記載のタバコ植物またはその部分から抽出されたアルカロイドを含む、タバコ製品。
62.前記アルカロイドが、ニコチン、ノルニコチン、アナタビン、およびアナバシンからなる群より選択される、請求項60または61に記載のタバコ製品。
63.紙巻タバコ(cigarette)、クレテック(kretek)、ビディシガレット(bidi cigarette)、葉巻(cigar)、シガリロ(cigarillo)、非通気式紙巻タバコ(non-ventilated cigarette)、通気式リセスフィルター紙巻タバコ(vented recess filter cigarette)、パイプタバコ(pipe tobacco)、嗅ぎタバコ(snuff)、噛みタバコ(chewing tobacco)、湿性無煙タバコ(moist smokeless tobacco)、ファインカット噛みタバコ(fine cut chewing tobacco)、ロングカット噛みタバコ(long cut chewing tobacco)、およびポーチ噛みタバコ(pouched chewing tobacco)製品からなる群より選択される、実施形態60に記載のタバコ製品。
64.前記タバコ製品が、ガム(gum)、タブレット(tablet)、ロゼンジ(lozenge)、および溶解性ストリップ(dissolving strip)からなる群より選択される、実施形態60に記載のタバコ製品。
65.無煙タバコ製品(smokeless tobacco product)である、実施形態60~64のいずれか1つに記載のタバコ製品。
66.電子タバコ、電子喫煙物品、エアロゾル化ベイパー製品、および加熱タバコ製品からなる群より選択される、請求項61または62に記載のタバコ製品。
67.前記乾燥タバコ材料が、空気乾燥タバコ材料、火力乾燥タバコ材料、日干乾燥タバコ材料、および熱風乾燥タバコ材料からなる群より選択される、実施形態60または62~66のいずれか1つに記載のタバコ製品。
68.核酸分子を含む植物または種子であって、前記核酸分子が、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、前記プロモーターが、
(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、前記同一性は、前記配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、
(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、
(c)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されている、
植物または種子。
69.前記プロモーターが、50ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む、実施形態68に記載の植物または種子。
70.前記プロモーターが、少なくとも50ヌクレオチドを含む、実施形態68に記載の植物または種子。
71.前記プロモーターが、少なくとも500ヌクレオチドを含む、実施形態68に記載の植物または種子。
72.前記プロモーターが、少なくとも1000ヌクレオチドを含む、実施形態68に記載の植物または種子。
73.前記プロモーターが、少なくとも2000ヌクレオチドを含む、実施形態68に記載の植物または種子。
74.前記プロモーターが、配列番号257と少なくとも85%同一の核酸配列を含む、実施形態68~73のいずれか1つに記載の植物または種子。
75.タバコ植物またはタバコ種子である、実施形態68~73のいずれか1つに記載の植物または種子。
76.同等の条件下で成長した場合の対照植物と比較して、吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む、実施形態68~74のいずれか1つに記載の植物。
77.前記腋芽成長抑制生成物が、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される、実施形態68~75のいずれか1つに記載の植物または種子。
78.前記ポリペプチドが、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも70%同一または類似のアミノ酸配列を含む、実施形態77に記載のタバコ植物または種子。
79.前記低分子RNAが、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む、実施形態77に記載の植物または種子。
80.タバコ植物において摘心により誘導される吸枝を制御する方法であって、
(a)タバコ細胞に核酸分子を導入する工程であって、前記核酸分子が、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、前記プロモーターが、
(i)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、ここで前記同一性は、前記配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、
(ii)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、
(iii)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されている、
工程と、
(b)前記タバコ細胞からタバコ植物を再生する工程であって、前記タバコ植物が、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、摘心により誘導される吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む、工程と
を含む、方法。
81.前記導入が、アグロバクテリウム媒介形質転換を含む、実施形態80に記載の方法。
82.前記導入が、エレクトロポレーションを含む、実施形態80に記載の方法。
83.前記導入が、前記核酸分子の遺伝子銃送達を含む、実施形態80に記載の方法。
84.前記タバコ細胞が、プロトプラスト細胞である、実施形態80~83のいずれか1つに記載の方法。
85.前記タバコ細胞が、カルス細胞である、実施形態80~83のいずれか1つに記載の方法。
86.前記タバコ細胞が、種子細胞、果実細胞、葉細胞、子葉細胞、胚軸細胞、分裂組織細胞、胚細胞、胚乳細胞、根細胞、シュート細胞、幹細胞、花細胞、花序細胞、柄細胞、小花柄細胞、花柱細胞、柱頭細胞、花床細胞、花弁細胞、萼片細胞、花粉細胞、葯細胞、花糸細胞、子房細胞、胚珠細胞、果皮細胞、および篩部細胞からなる群より選択される、実施形態80~83のいずれか1つに記載の方法。
87.核酸分子を含むタバコ種子を栽植する工程を含む、タバコ植物を成長させる方法であって、前記核酸分子が、腋芽組織において活性を有するプロモーターを含み、前記プロモーターが、
(a)配列番号113と少なくとも75%の同一性を有する配列を含み、ここで前記同一性は、前記配列と配列番号113との間のアライメント可能な領域全体に基づきかつ限定され、
(b)配列番号113と比較して少なくとも50個の連続するヌクレオチドの欠失を含み、かつ
(c)腋芽成長抑制生成物をコードする異種核酸分子に作動可能に連結されており、
前記タバコ種子が発芽して、同等の条件下で成長した対照タバコ植物と比較して、摘心により誘導される吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含む、タバコ植物になる、方法。
88.前記プロモーターが、50ヌクレオチド~2450ヌクレオチドを含む、実施形態80~87のいずれか1つに記載の方法。
89.前記プロモーターが、少なくとも50ヌクレオチドを含む、実施形態80~87のいずれか1つに記載の方法。
90.前記プロモーターが、少なくとも500ヌクレオチドを含む、実施形態80~87のいずれか1つに記載の方法。
91.前記プロモーターが、少なくとも1000ヌクレオチドを含む、実施形態80~87のいずれか1つに記載の方法。
92.前記プロモーターが、少なくとも2000ヌクレオチドを含む、実施形態80~87のいずれか1つに記載の方法。
93.前記プロモーターが、配列番号257と少なくとも85%同一の核酸配列を含む、実施形態80~92のいずれか1つに記載の方法。
94.前記タバコ植物が、BU64植物、CC101植物、CC200植物、CC13植物、CC27植物、CC33植物、CC35植物、CC37植物、CC65植物、CC67植物、CC301植物、CC400植物、CC500植物、CC600植物、CC700植物、CC800植物、CC900植物、CC1063植物、Coker176植物、Coker319植物、Coker371Gold植物、Coker48植物、CU263植物、DF911植物、Galpao植物、GL26H植物、GL338植物、GL350植物、GL395植物、GL600植物、GL737植物、GL939植物、GL973植物、GF157植物、GF318植物、RJR901植物、HB04P植物、K149植物、K326植物、K346植物、K358植物、K394植物、K399植物、K730植物、NC196植物、NC37NF植物、NC471植物、NC55植物、NC92植物、NC2326植物、NC95植物、NC925植物、PVH1118植物、PVH1452植物、PVH2110植物、PVH2254植物、PVH2275植物、VA116植物、VA119植物、KDH959植物、KT200植物、KT204LC植物、KY10植物、KY14植物、KY160植物、KY17植物、KY171植物、KY907植物、KY907LC植物、KTY14xL8 LC植物、Little Crittenden植物、McNair373植物、McNair944植物、雄性不稔KY14xL8植物、Narrow Leaf Madole植物、MS KY171植物、Narrow Leaf Madole(phph)植物、MS Narrow Leaf Madole植物、MS TND950植物、PD7302LC植物、PD7305LC植物、PD7309LC植物、PD7312LC植物、PD7318LC植物、PD7319LC植物、MSTKS2002植物、TKF2002植物、TKF6400植物、TKF4028植物、TKF4024植物、KT206LC植物、KT209LC植物、KT210LC植物、KT212LC植物、NC100植物、NC102植物、NC2000植物、NC291植物、NC297植物、NC299植物、NC3植物、NC4植物、NC5植物、NC6植物、NC7植物、NC606植物、NC71植物、NC72植物、NC810植物、NC BH129植物、NC2002植物、Neal Smith Madole植物、OXFORD207植物、‘Perique’植物、PVH03植物、PVH09植物、PVH19植物、PVH50植物、PVH51植物、R610植物、R630植物、R7-11植物、R7-12植物、RG17植物、RG81植物、RGH51植物、RGH4植物、RGH51植物、RS1410植物、Speight168植物、Speight172植物、Speight179植物、Speight210植物、Speight220植物、Speight225植物、Speight227植物、Speight234植物、Speight G-28植物、Speight G-70植物、Speight H-6植物、Speight H20植物、Speight NF3植物、TI1406植物、TI1269植物、TN86植物、TN86LC植物、TN90植物、TN90LC植物、TN97植物、TN97LC植物、TND94植物、TND950植物、TR(Tom Rosson)Madole植物、VA309植物、およびVA359植物からなる群より選択される、実施形態80~93のいずれか1つに記載の方法。
95.前記タバコ植物が、熱風乾燥種タバコ植物、明色種タバコ植物、バーレー種タバコ植物、バージニア種タバコ植物、メリーランド種タバコ植物、ガルパオ種タバコ植物、暗色種タバコ植物、オリエンタル種タバコ植物、およびトルコ種タバコ植物からなる群より選択される、実施形態80~93のいずれか1つに記載の方法。
96.前記タバコ植物が、ハイブリッドタバコ植物である、実施形態80~95のいずれか1つに記載の方法。
97.前記タバコ植物が、雌性不稔タバコ植物である、実施形態80~95のいずれか1つに記載の方法。
98.前記タバコ植物が、雄性不稔タバコ植物である、実施形態80~97のいずれか1つに記載の方法。
99.前記雄性不稔タバコ植物が、細胞質雄性不稔タバコ植物である、実施形態95に記載の方法。
100.前記腋芽成長抑制生成物が、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される、実施形態80~99のいずれか1つに記載の方法。
101.前記ポリペプチドが、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも70%同一または類似のアミノ酸配列を含む、実施形態100に記載の方法。
102.前記低分子RNAが、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む、実施形態100に記載の方法。
実施例1.タバコ植物の開発
発現ベクター、p45-2-7(配列番号112、図1)を骨格として使用して、複数の形質転換ベクターを生成する。p45-2-7は、CsVMVプロモーター、NOSターミネーター、およびActin2プロモーターおよびNOSターミネーターに作動可能に連結されたカナマイシン選択マーカー(NPTII)を含むカセットを含有する。目的の導入遺伝子を含む核酸ベクターを、アグロバクテリウム形質転換を介してタバコの葉ディスク(leaf disc)に導入する。例えば、Mayo et al.,2006,Nat Protoc.1:1105-11 and Horsch et al.,1985,Science 227:1229-1231を参照されたい。
Narrow Leaf Madole(NLM)タバコ植物を、Magenta(商標)GA-7箱で成長させ、葉ディスクを切断し、ペトリ皿(Petri plate)に配置する。形質転換ベクターを含むAgrobacterium tumefaciens細胞は、50mLの遠心チューブ中の20mLの細胞懸濁液を3500RPMで10分間遠心分離することによって収集される。上清を除去し、Agrobacterium tumefaciens細胞ペレットを40mLの液体再懸濁培地に再懸濁する。タバコの葉は、主脈(midrib)を避けて、#15かみそり刃で8つの0.6cmのディスクに切断し、ペトリ皿に逆さまに置く。B5ビタミンを含むムラシゲ・スクーグ(Murashige & Skoog、MS)液再懸濁培地を薄く(thin layer)ペトリ皿に添加し、葉ディスクを極細針(fine point needle)で均一に突き刺す。約25mLのAgrobacterium tumefaciens懸濁液をペトリ皿に添加し、葉ディスクを懸濁液中で10分間インキュベートする。
葉ディスクを共培養ペトリ皿(1/2MS培地)に移し、ディスクを共培養TOM培地(20g/Lのスクロース、1mg/Lのインドール-3-酢酸、および2.5mg/Lの6-ベンジルアミノプリン(BAP)を含むMS培地)上に重ねた濾紙と接触させて逆さまに配置する。ペトリ皿をパラフィルムで密封して、18時間オン、6時間オフの光周期で、薄暗い光(60~80mE/ms)の中、摂氏24度で3日間インキュベートする。インキュベーション後、葉ディスクを再生/選択TOMK培地のペトリ皿(TOM培地+300mg/Lカナマイシン)に移す。葉ディスクは、シュートが切除可能になるまで、18時間オン、6時間オフの光周期で、薄暗い光の中、摂氏24度で、新鮮なTOMK培地に週2回継代培養される。葉からのシュートを、ピンセットで除去し、100mg/Lのカナマイシンを含むMS基本培地に入れる。100mg/Lのカナマイシンを含むMS基本培地上の芽苗を、18時間オン、6時間オフの光周期で、高強度の照明(6080mE/ms)を用いて、摂氏24度でインキュベートして発根を誘導する。
シュートと根の両方を含む小植物(plantlet)が十分に大きく成長する(例えば、Magenta(商標)GA-7箱の約半分の高さに達する)と、それらは土壌に移される。樹立した苗を、さらなる分析のために温室に移し、種子を作らせる。吸枝発生表現型の評価は、改変植物(T0、T1、T2、または後世代)および対照植物をレイバイ期(layby stage)まで成長させることによって行われる。対照植物は、形質転換されていないNLM植物、またはp45-2-7ベクターなしで形質転換されたNLM植物のいずれかである。レイバイ期に達した植物は、手で摘心され(茎頂分裂組織および周囲の組織が除去される)、摘心後の特定の時点で腋芽の成長が評価される。観察は、典型的には、摘心の時点(すなわち、0時間)、摘心24時間後(すなわち、1日後)、摘心7~8日後(すなわち、1週間後)、および/または摘心14~15日後(すなわち、2週間後)に行われる。観察は、腋芽の成長の有無および全体的な植物の外観を定性的に検査することを含む。観察はまた、摘心後の特定の時点で、全ての腋芽の新鮮重量を定量的に測定すること、および/または摘心後の特定の時点で、全ての腋芽の伸長の長さを測定することを含む。
実施例2.腋芽優先的プロモーターの発現パターン
米国特許出願公開第2017/0260535号(参照により本明細書に援用される)に記載されているように、腋芽成長抑制生成物が組織依存的な様式で発現する場合(例えば、腋芽においてのみ)、腋芽成長抑制生成物の発現をより良く利用して、改変植物における吸枝の伸長を低減または排除することができる。配列番号113は、腋芽優先的発現を有するプロモーターとして以前に同定された。US2017/0260535も参照されたい。プロモーターP1の配列(配列番号113)は、3つの糖抑制エレメント、1つの腋芽up2エレメント、および3つの芽休眠エレメントを含むいくつかのシス制御エレメントを含む。図2および表2を参照されたい。配列番号257は、1つの糖抑制エレメントの欠失を含む配列の5’末端からの100ヌクレオチド欠失を除いて、配列番号113と同一である。表2を参照されたい。
(表2)腋芽優先的プロモーターのシスエレメント
Figure 0007416761000013
配列番号113および257の発現パターンは、実施例1に記載の同じプラスミド骨格(p45-2-7)内のキメラプロモーター::β-グルクロニダーゼ(GUS)レポーター遺伝子によるタバコの形質転換によって分析される。キメラ遺伝子は、Agrobacterium媒介形質転換を介してNLM株に導入される。GUS染色を使用して、Crone et al.,2001,Plant Cell Environ.24:869-874の方法に従って、組織特異的プロモーターの発現を同定する。
簡潔に記載すると、候補プロモーター::GUS形質転換構築物を含む若い苗からの組織を、氷上の冷90%アセトン中に入れる。全ての試料を収穫して、試料を室温に20分間置く。試料を氷上に戻し、試料からアセトンを除去する。次に、染色緩衝液(0.2%のTritonX-100、50mMのNaHPO、pH7.2、2mMのフェロシアン化カリウム)を試料に添加する。X-Glucを染色緩衝液に添加し、最終濃度2mMにする。試料から染色緩衝液を除去し、X-Glucを含む新鮮な染色緩衝液を添加する。次いで、試料を真空下、氷上で15~20分間浸潤する。試料を摂氏37度で2~18時間インキュベートした後、染色緩衝液を除去する。試料を、1回の洗浄あたり30分間、暗中でエタノール系列(すなわち、10%、30%、50%、70%、95%)を通して洗浄する。最後に、試料を100%エタノールに移す。
GUS陽性植物組織を、低倍率で明視野顕微鏡(Leica Q500MC; Cambridge,England)で検査し、デジタルカメラで撮影する。配列番号113および257を使用した実験の結果を、それぞれ図3および図4に示す。配列番号257についての2つの独立した改変株を図4に示す。これらのプロモーター配列を使用して、植物の残りの部分における発現を制限しながら、腋芽内でのみ、または主に腋芽内で目的の配列の発現を駆動することができる。
配列番号113および257によって駆動される発現を示すGUS陽性発現は、腋芽に集中している。いずれのプロモーターも、苗において活性を有さないように見え(図5)、配列番号113は、柱頭または葯において活性を有さない(図6)。配列番号113の指示下でのGUSの発現は、摘心後に減少し、通常これらのプロモーターによって調節されている内因性遺伝子に対して観察される遺伝子の発現パターンと一致する。しかしながら、配列番号257の指示下でのGUSの発現は、配列番号113と比較してより強く、より高いレベルでより長期間持続する。注目すべきことに、図3に示されるように、24時間染色した場合でも、配列番号113によって駆動されるとき、摘心7日後の腋生分裂組織では、ほとんどGUSの発現が観察されない。対照的に、GUSの発現を駆動するために配列番号257を使用した両方の改変株は、5~7時間だけ染色した場合でも、摘心7日後に強い活性を示す(図4)。
実施例3.バルナーゼの発現を駆動する腋芽優先的プロモーター
実施例1および2に記載されるように、配列番号113または配列番号257のいずれかを用いて、バルナーゼ(配列番号79)の発現を駆動する2つの構築物を作製した。実施例1に記載されるように、タバコ植物を生成した。
バルナ―ゼの発現を駆動する配列番号113を含むタバコ植物(T0世代)、および対照タバコ植物を、レイバイ期まで成長させ、次いで植物を摘心して、茎頂分裂組織を除去する。吸枝の成長を、摘心時および摘心の2週間後に観察する(図7)。配列番号113::バルナ―ゼ構築物を発現する植物は、対照と比較して、吸枝の低減を示す。しかしながら、配列番号113::バルナ―ゼ株のT1世代の種子は、発芽不良を示し、さらなる表現型分析がなされない。
対照的に、バルナーゼの発現を駆動する配列番号257を含むT1世代の種子は、良好な発芽を示す。バルナ―ゼの発現を駆動する配列番号257を含むタバコ植物(T1世代)、および対照タバコ植物を、レイバイ期まで成長させ、次いで植物を摘心して、茎頂分裂組織を除去する。摘心の時点でおよび摘心の4週間後に、成長した吸枝を観察する(図8)。配列番号257::バルナ―ゼ構築物を発現する植物は、対照と比較して、吸枝の低減を示す。配列番号257::バルナ―ゼ構築物を含む改変植物は、配列番号113::バルナ―ゼ構築物を含む改変植物と比較して、吸枝の優れた低減およびT1種子の優れた発芽を示す。

Claims (22)

  1. 腋芽組織において活性を有するプロモーターを含む核酸分子であって、前記プロモーターが、
    (a)配列番号257を含み、か
    )異種核酸分子に作動可能に連結されている、
    核酸分子。
  2. 前記異種核酸分子が、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする、請求項1に記載の核酸分子。
  3. 前記少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物が、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される、請求項に記載の核酸分子。
  4. 前記ポリペプチドが、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、請求項に記載の核酸分子。
  5. 前記低分子RNAが、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む、請求項に記載の核酸分子。
  6. プロモーターを含む核酸分子を含むタバコ植物であって、前記プロモーターが、
    (a)配列番号257を含み、か
    )異種核酸分子に作動可能に連結されており、
    前記タバコ植物が、同等の条件下で成長した場合の同じ品種の対照タバコ植物と比較して、摘心後に吸枝を含まないかまたは減少した吸枝を含み、
    前記対照タバコ植物が、前記異種核酸分子に作動可能に連結されている前記プロモーターを欠いている、タバコ植物。
  7. 前記プロモーターが、前記摘心の少なくとも7日後に腋生分裂組織において活性を有する、請求項に記載のタバコ植物。
  8. 前記プロモーターが、
    (a)タバコ苗植物、
    (b)茎頂分裂組織、または
    (c)(a)および(b)の両方
    において活性を有さない、請求項に記載のタバコ植物。
  9. 前記吸枝の減少が、前記吸枝の乾燥生物量の低減、前記吸枝の新鮮重量の低減、前記吸枝の長さの低減、前記吸枝の直径の低減、総吸枝数の減少、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項に記載のタバコ植物。
  10. 熱風乾燥種タバコ植物、明色種タバコ植物、バーレー種タバコ植物、バージニア種タバコ植物、メリーランド種タバコ植物、ガルパオ種タバコ植物、暗色種タバコ植物、オリエンタル種タバコ植物、およびトルコ種タバコ植物からなる群より選択される、請求項に記載のタバコ植物。
  11. 前記異種核酸分子が、少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物をコードする、請求項に記載のタバコ植物。
  12. 前記少なくとも1つの腋芽成長抑制生成物が、低分子RNAおよびポリペプチドからなる群より選択される、請求項11に記載のタバコ植物。
  13. 前記ポリペプチドが、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161~185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、および255からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、請求項12に記載のタバコ植物。
  14. 前記低分子RNAが、配列番号83~101からなる群より選択されるポリヌクレオチドと同一または相補的な少なくとも18個の連続するヌクレオチドを含む、請求項12に記載のタバコ植物。
  15. 請求項6~14のいずれか一項に記載のタバコ植物に由来する乾燥タバコ材料を含む、タバコ製品。
  16. 紙巻タバコ(cigarette)、クレテック(kretek)、ビディシガレット(bidi cigarette)、葉巻(cigar)、シガリロ(cigarillo)、非通気式紙巻タバコ(non-ventilated cigarette)、通気式リセスフィルター紙巻タバコ(vented recess filter cigarette)、パイプタバコ(pipe tobacco)、嗅ぎタバコ(snuff)、噛みタバコ(chewing tobacco)、湿性無煙タバコ(moist smokeless tobacco)、ファインカット噛みタバコ(fine cut chewing tobacco)、ロングカット噛みタバコ(long cut chewing tobacco)、およびポーチ噛みタバコ(pouched chewing tobacco)製品からなる群より選択される、請求項15に記載のタバコ製品。
  17. ガム(gum)、タブレット(tablet)、ロゼンジ(lozenge)、および溶解性ストリップ(dissolving strip)からなる群より選択される、請求項15に記載のタバコ製品。
  18. 前記乾燥タバコ材料が、空気乾燥(air-cured)タバコ材料、火力乾燥(fire-cured)タバコ材料、日干乾燥(sun-cured)タバコ材料、および熱風乾燥(flue-cured)タバコ材料からなる群より選択される、請求項15に記載のタバコ製品。
  19. 請求項1~5のいずれか一項に記載の核酸分子を含む、タバコの葉。
  20. 請求項19に記載のタバコの葉を含む乾燥タバコ材料であって、空気乾燥タバコ材料、火力乾燥タバコ材料、日干乾燥タバコ材料、および熱風乾燥タバコからなる群より選択される、前記乾燥タバコ材料。
  21. バーレータバコ(Burley tobacco)、メリーランドタバコ(Maryland tobacco)、明色タバコ(bright tobacco)、バージニアタバコ(Virginia tobacco)、オリエンタルタバコ(Oriental tobacco)、トルコタバコ(Turkish tobacco)、およびガルパオタバコ(Galpao tobacco)からなる群より選択されるタバコのタイプに由来する、請求項20に記載の乾燥タバコ材料。
  22. 請求項20に記載の乾燥タバコ材料を含む、乾燥タバコ葉の俵(bale)。
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