CN112714792A - 经优化的组织优选性启动子和其用途 - Google Patents
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Abstract
本公开提供了优先地在烟草腋芽中具有活性的启动子的鉴定。还提供了以下烟草植物，所述烟草植物包括减少的烟杈生长或不包括烟杈生长。还提供了用于生产以下烟草植物的方法和组合物，所述烟草植物包括减少的烟杈生长或不包括烟杈生长。
Description
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119要求于2018年8月2日提交的美国临时申请第62/713,819号的权益，所述美国临时申请以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本公开提供了用于完善对植物中的烟杈的减少或消除有用的核酸和蛋白质的表达的方法和组合物。
序列表的并入
包含在大小为733,397字节(在
中测量)并且于2019年8月1日创建的命名为“P34633WO00_SL.TXT”的文件中的序列表与本文一起以电子方式提交并且以全文引用的方式并入。
背景技术
烟草是表现出异常强烈的顶端优势的植物种类。来自茎顶端分生组织(SAM)的分子信号介导有效抑制腋芽生长的激素信号。在SAM去除(也称为“打顶(topping)”)后，发生生理和分子变化，从而使得从腋分生组织(芽)中生长出新芽(或“烟杈(sucker)”)。烟杈生长导致产率和叶片质量损失。一直通过手动去除和化学药品的施加来控制烟杈。马来酰肼(maleic hydrazide)和氟节胺(flumetralin)常规地用在经打顶的植物上以抑制腋芽生长(“分杈”)。然而，用于控制烟杈的劳动力和化学药剂非常昂贵。通过常规育种、突变育种和转基因方法控制烟草中的分杈已成为几十年的主要目标，但是迄今为止，通过这些方法尚未实现分杈的成功抑制或消除。最近的分子工作产生了具有减少的或消除的烟杈的转基因植物，但是腋芽降解基因的渗漏表达可能导致种子和胚胎死亡，并且阻止转基因植物连续世代的生产。因此，用于防止腋芽降解基因在不期望的组织和/或器官中表达的方法和组合物的开发将引起化学药剂的使用减少并且将减少与烟草生产相关联的成本和劳动力。
发明内容
一方面，本公开提供了一种核酸分子，所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接。
一方面，本公开提供了一种烟草植物，所述烟草植物包括核酸分子，所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接，其中当在相当的条件下生长时，与相同品种的对照烟草植物相比，所述烟草植物在打顶后不包括烟杈或包括减少的烟杈。
一方面，本公开提供了一种植物或种子，所述植物或种子包括核酸分子，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码。
一方面，本公开提供了一种用于控制烟草植物中的打顶诱导的烟杈的方法，所述方法包括：(a)将核酸分子引入到烟草细胞，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(i)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(ii)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(iii)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码；以及(b)由所述烟草细胞再生烟草植物，其中与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，所述烟草植物不包括或包括减少的打顶诱导的烟杈。
一方面，本公开提供了一种生长烟草植物的方法，所述方法包括种植烟草种子，所述烟草种子包括核酸分子，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ IDNO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码，其中与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，所述烟草种子发芽成不包括或包括减少的打顶诱发的烟杈的烟草植物。
序列简要说明
SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83-160、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225-228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和257-260是核酸序列。
SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和256是多肽序列。
本文中提供的SEQ ID NO的另外的描述可以在表1中找到。
表1.序列描述
附图说明
图1是二元载体p45-2-7(SEQ ID NO:112)的质粒图谱。
图2描绘了顺式调控元件芽休眠元件(SEQ ID NO:258)、糖抑制元件(SEQ ID NO:259)和腋芽Up2元件(SEQ ID NO:260)在启动子序列p1 2.5kb(SEQ ID NO:113)和p1 2.4kb(SEQ ID NO:257)中的位置。
图3示出了与烟草中的β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)融合的启动子SEQ ID NO:113的表达谱式。GUS累积的暗区展现出打顶后SEQ ID NO:113具有活性的地方。SEQ ID NO:113在打顶时(0h)在茎顶端分生组织(SAM)中不具有活性。然而，SEQ ID NO:113在打顶时(0h)、打顶后24小时(24h)和打顶后72小时(72h)在腋分生组织中具有活性。SEQ ID NO:113在打顶后7天(7d)不具有活性。h＝小时。
图4示出了与烟草中的GUS融合的启动子SEQ ID NO:257的表达谱式。GUS累积的暗区展现出打顶后SEQ ID NO:257具有活性的地方。SEQ ID NO:257在打顶时(0h)在茎顶端分生组织(SAM)中不具有活性。然而，SEQ ID NO:257在打顶时(0h)、打顶后24小时(24h)、打顶后72小时(72h)和打顶后7天(7d)在腋分生组织中具有活性。图4A和4B示出了包括SEQ IDNO:257::GUS构建体的不同的独立烟草品系。h＝小时。
图5示出了烟草幼苗中的SEQ ID NO:113::GUS和SEQ ID NO:257::GUS构建体的表达谱式。利用任一种构建体均未检测到GUS染色。
图6示出了烟草的柱头、花药和花粉粒中的SEQ ID NO:113::GUS的表达谱式。在这些组织中的任何组织中均未检测到GUS染色。
图7示出了来自三个独立的烟草品系的野生型(对照)烟草植物和T0烟草植物的照片，所述烟草品系包括SEQ ID NO:113::芽孢杆菌RNA酶(SEQ ID NO:79)构建体。与打顶后两周的野生型相比，包括SEQ ID NO:113::芽孢杆菌RNA酶构建体的烟草品系表现出减少的分杈。h＝小时。
图8示出了来自一个烟草品系的野生型(对照)烟草植物和T1烟草植物的照片，所述烟草品系包括SEQ ID NO:257::芽孢杆菌RNA酶(SEQ ID NO:79)构建体。图8A示出了打顶时的植物。图8B示出了打顶后四周的植物。与野生型植物相比，包括SEQ ID NO:257::芽孢杆菌RNA酶构建体的植物表现出减少的分杈。
具体实施方式
除非另外定义，否则所使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。在以单数形式提供术语的情况下，本发明的发明人还设想了以所述术语的复数形式描述的本公开的各个方面。在通过引用并入的参考文献中所使用的术语和定义存在差异的情况下，本申请中使用的术语应具有本文给出的定义。所使用的其它技术术语在其被使用的领域中具有其普通含义，如各种领域特定词典所例示的，例如“American
科学词典)”(《美国传统词典(American HeritageDictionaries)》的编辑,2011,波士顿和纽约霍顿米夫林出版公司(Houghton MifflinHarcourt))、“麦格劳-希尔科学技术术语词典(McGraw-Hill Dictionary of Scientificand Technical Terms)”(第6版,2002,纽约麦格劳-希尔出版公司(McGraw-Hill))或“牛津生物学词典(Oxford Dictionary of Biology)”(第6版,2008,牛津和纽约牛津大学出版社(Oxford University Press))。
包含例如所有专利、公开的专利申请和非专利出版物的本文引用的任何参考文献以全文引用的方式并入本文中。
当呈现一组替代方案时，具体地设想了构成所述组替代方案的成员的任何和所有组合。例如，如果项选自由A、B、C和D组成的组，则本发明的发明人将单独地具体地设想每个替代方案(例如，单独的A、单独的B等)以及如A、B和D；和C；B和C；等组合。当用于两个或更多个项的列表中时，术语“和/或”意指所列项中的任何一项自身或与其它所列项中的任何一项或多项的组合。例如，表达“A和/或B”旨在意指A和B中的一个或两者，即单独的A、单独的B或A和B的组合。表达“A、B和/或C”旨在意指单独的A、单独的B、单独的C、A和B的组合、A和C的组合、B和C的组合、或A、B和C的组合。
当本文中提供数字范围时，所述范围应被理解为包含所述范围的边缘以及所述范围的限定边缘之间的任何数字。例如，“1与10之间”包含1与10之间的任何数字以及数字1和数字10。
如本文所使用的，除非上下文清楚地另外指明，否则单数形式“一个/种(a/an)”以及“所述”包含复数指示物。例如，术语“化合物”或“至少一种化合物”可以包含多种化合物，所述多种化合物包括其混合物。
本文提供的任何核酸分子均设想为与本文提供的任何方法一起使用。本文提供的任何核酸分子均设想为与本文提供的任何植物或种子一起使用。本文提供的任何核酸分子均设想为与本文提供的任何烟草植物或烟草种子一起使用。
一方面，本公开提供了一种核酸分子，所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接。
术语“多核苷酸”或“核酸分子”的使用并非旨在将本公开限制于包括脱氧核糖核酸(DNA)的多核苷酸。例如，还设想了核糖核酸(RNA)分子。本领域普通技术人员将认识到，多核苷酸和核酸分子可以包括核糖核苷酸以及核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸的组合。此类脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸包含天然存在的分子和合成类似物两者。本公开的多核苷酸还涵盖序列的所有形式，包含但不限于单链形式、双链形式、发夹、茎-环结构等。一方面，本文提供的核酸分子是DNA分子。另一方面，本文提供的核酸分子是RNA分子。一方面，本文提供的核酸分子是单链的。另一方面，本文提供的核酸分子是双链的。核酸分子可以对多肽或非编码RNA进行编码。
一方面，本文提供的核酸分子是质粒或载体。一方面，本文提供的质粒或载体是重组载体。如本文所使用的，术语“重组载体”是指通过基因重组的实验室方法(如分子克隆)形成的载体。另一方面，本文提供的质粒是合成质粒。如本文所使用的，“合成质粒”是能够与天然质粒(例如，Ti质粒)具有相同功能(例如，复制)的人工制造的质粒。不受限制地，本领域技术人员可以通过由单独核苷酸合成质粒或通过将来自不同预先存在的质粒的核酸分子拼接在一起来从头产生合成质粒。
如本文所使用的，术语“载体”或“质粒”可互换使用，并且是指与染色体DNA物理分离的环状双链DNA分子。一方面，本文提供的质粒或载体能够在体内复制。如本文所使用的，“转化载体”是能够转化植物细胞的质粒。一方面，本文提供的质粒是细菌质粒。另一方面，本文提供的质粒是农杆菌Ti质粒或源自农杆菌Ti质粒。
如本领域中通常理解的，术语“启动子”是指含有RNA聚合酶结合位点、转录起始位点和/或TATA盒并且帮助或促进相关可转录多核苷酸序列和/或基因(或转基因)的转录和表达的DNA序列。启动子可以合成地产生、变化或源自已知的或天然存在的启动子序列或其它启动子序列。启动子还可以包含包括两个或更多个异源序列的组合的嵌合启动子。因此，本申请的启动子可以包含与已知的或本文提供的其它一个或多个启动子序列在组合物方面类似但不相同的启动子序列的变体。
本领域中理解，启动子可以包括一个或多个“元件”，所述一个或多个元件在测定启动子何时、何处以及多长时间具有活性中起重要作用。如本文所使用的，“活性”启动子是指在可检测的水平下启动可操作连接的核酸分子的转录的启动子。本领域技术人员可以通过本领域已知的若干种方法中的任何一种来测定启动子是否具有活性。例如，测定启动子是否具有活性的示例性方法包含逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)、定量RT-PCR和RNA测序。这些和其它适合的方法可以用于通过检测与启动子可操作地连接的核酸分子的RNA转录物的累积来测定启动子是否具有活性。类似地，启动子的活性可以与视觉标志物可操作地连接，例如对β-葡糖醛酸糖苷酶、萤光素酶或绿色荧光蛋白进行编码的基因，以测定启动子是否具有活性。组织样本中的视觉标志物的存在指示启动子在所述组织中具有活性。
一方面，本文提供的启动子元件是芽休眠元件(SEQ ID NO:258)。另一方面，本文提供的启动子元件是糖抑制元件(SEQ ID NO:259)。另一方面，本文提供的启动子元件是腋芽up2元件(SEQ ID NO:260)。
一方面，本文提供的启动子包括三个或更少芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括两个或更少芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个或零个芽休眠元件。一方面，本文提供的启动子包括三个芽休眠元件。一方面，本文提供的启动子包括两个芽休眠元件。一方面，本文提供的启动子包括一个芽休眠元件。一方面，本文提供的启动子包括零个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括至少三个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括至少五个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个到五个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个到四个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个到三个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个到两个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到五个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到四个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到三个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括两个到五个芽休眠元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到四个芽休眠元件。
一方面，本文提供的启动子包括三个或更少糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括两个或更少糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个或零个糖抑制元件。一方面，本文提供的启动子包括三个糖抑制元件。一方面，本文提供的启动子包括两个糖抑制元件。一方面，本文提供的启动子包括一个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括至少三个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括至少五个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个到五个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个到四个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个到三个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个到两个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到五个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到四个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到三个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括两个到五个糖抑制元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到四个糖抑制元件。
另一方面，本文提供的启动子包括一个或零个腋芽up2元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个腋芽up2元件。另一方面，本文提供的启动子包括零个腋芽up2元件。另一方面，本文提供的启动子包括至少一个腋芽up2元件。另一方面，本文提供的启动子包括至少两个腋芽up2元件。另一方面，本文提供的启动子包括至少五个腋芽up2元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到五个腋芽up2元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到四个腋芽up2元件。另一方面，本文提供的启动子包括一个到三个腋芽up2元件。
如本文所使用的，“可操作地连接”是指两个或更多个元件之间的功能连接。例如，所关注多核苷酸与调节序列(例如，启动子)之间的可操作连接是允许所关注多核苷酸表达的功能连接。可操作地连接的元件可以是连续的或非连续的。一方面，本文提供的启动子与异源核酸分子可操作地连接。另一方面，本文提供的启动子与对至少一种腋芽降解产物进行编码的异源核酸分子可操作地连接。
如本文所使用的，术语“异源”是指两个或更多个DNA分子或序列(如启动子和相关可转录DNA序列、编码序列或基因)的组合，当此类组合是人造的并且在自然界中通常找不到时。
如本文所使用的，关于两个或更多个核苷酸或蛋白质序列的术语“同一性百分比”或“相同百分比”通过以下来计算：(i)在比较窗口(一个或多个“可比对”区)中比较两个最佳比对的序列(核苷酸或蛋白质)；(ii)测定两个序列中相同核酸碱基(对于核苷酸序列)或氨基酸残基(对于蛋白质)出现的位置数以产生匹配位置数；(iii)将匹配位置数除以比较窗口中的位置总数；以及然后(iv)将这个商数乘以100％以得出同一性百分比。如果在没有指定特定比较窗口的情况下相对于参考序列计算“同一性百分比”，则通过将超过比对区的匹配位置数除以参考序列的总长度来测定同一性百分比。因此，出于本申请的目的，当两个序列(查询和主题)被最佳地比对(允许其比对中存在空位)时，查询序列的“同一性百分比”等于两个序列之间的相同位置数除以查询序列中超过其长度(或比较窗口)的位置总数，然后乘以100％。当提及蛋白质的序列同一性的百分比时，认识到不相同的残基位置通常因保守氨基酸取代而不同，其中氨基酸残基被具有类似化学性质(例如，电荷或疏水性)的其它氨基酸残基取代，因此不改变分子的功能性质。当序列的保守性取代不同时，可以向上调整序列同一性百分比以校正取代的保守性质。因此类保守取代而不同的序列被称为具有“序列类似性”或“类似性”。
对于用于计算同一性百分比的最佳序列比对，本领域已知各种成对或多个序列比对算法和程序，如ClustalW或Basic Local Alignment
(BLASTTM)等，其可以用于比较两个或更多个核苷酸或蛋白质序列之间的序列同一性或类似性。尽管本领域中已知其它比对和比较方法，但是两个序列之间的比对和同一性百分比(包含上述同一性百分比范围)可以由ClustalW算法测定，参见例如，Chenna等人,“使用Clustal系列程序进行多个序列比对(Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs),”《核酸研究(Nucleic Acids Research)》31:3497-3500(2003)；Thompson等人,“Clustal W：通过序列加权、位置特异性空位罚分和权重矩阵选择改进渐进式多序列比对的灵敏度(Clustal W:Improving the sensitivity of progressive multiple sequencealignment through sequence weighting,position-specific gap penalties andweight matrix choice),”《核酸研究》22:4673-4680(1994)；Larkin MA等人,“Clustal W和Clustal X版本2.0(Clustal W and Clustal X version 2.0),”《生物信息学(Bioinformatics)》23:2947-48(2007)；以及Altschul等人,“基本局部比对搜索工具(Basic local alignment search tool)”《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》215:403-410(1990)，所述参考文献的全部内容和公开通过引用并入本文中。
当两个序列最佳比对时，所述比对可以产生空位，其中一个序列与其它序列相比似乎是“丢失的”核苷酸。此类空位被称为“缺失”。缺失可以是内部的(例如，两个序列在缺失的两侧上彼此比对)或外部的(例如，两个序列在缺失的仅一侧上彼此比对)。
一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少85％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少90％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少91％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少92％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少93％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少94％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少95％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少96％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少97％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少98％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQID NO:257至少99％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:257至少99.5％相同的核酸序列。一方面，本文提供的启动子包括SEQ ID NO:257。另一方面，本文提供的启动子基本上由SEQ ID NO:257组成。另一方面，本文提供的启动子由SEQ ID NO:257组成。
一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少1个核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少5个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少10个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少25个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少50个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少75个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ IDNO:113相比包括至少100个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少150个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少200个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少250个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少300个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少350个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少400个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少450个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少500个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少600个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少700个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少800个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少900个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少1000个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少1250个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少1500个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少1750个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少2000个连续核苷酸缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQID NO:113相比包括至少2250个连续核苷酸缺失。
一方面，本文提供的启动子包括至少一个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少一个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少一个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少一个糖抑制元件缺失。一方面，本文提供的启动子包括至少两个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括所述至少两个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少两个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少两个糖抑制元件缺失。一方面，本文提供的启动子包括至少三个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括所述至少三个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少三个糖抑制元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括至少三个糖抑制元件缺失。
一方面，本文提供的启动子包括至少一个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少一个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少一个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少一个芽休眠元件缺失。一方面，本文提供的启动子包括至少两个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少两个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少两个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQID NO:113相比包括所述至少两个芽休眠元件缺失。一方面，本文提供的启动子包括至少三个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少三个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少三个芽休眠元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少三个芽休眠元件缺失。
一方面，本文提供的启动子包括至少一个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少一个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少一个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少一个腋芽up2元件缺失。一方面，本文提供的启动子包括至少两个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少两个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少两个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少两个腋芽up2元件缺失。一方面，本文提供的启动子包括至少三个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少三个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少三个腋芽up2元件缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少三个腋芽up2元件缺失。
一方面，本文提供的启动子包括至少一个糖抑制元件和至少一个腋芽up2元件的缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少一个糖抑制元件和至少一个腋芽up2元件的缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少一个糖抑制元件和至少一个腋芽up2元件的缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少一个糖抑制元件和至少一个腋芽up2元件的缺失。
一方面，本文提供的启动子包括至少一个糖抑制元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少一个糖抑制元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少一个糖抑制元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少一个糖抑制元件和至少一个芽休眠元件的缺失。
一方面，本文提供的启动子包括至少一个腋芽up2元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少一个腋芽up2元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少一个腋芽up2元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少一个腋芽up2元件和至少一个芽休眠元件的缺失。
一方面，本文提供的启动子包括至少一个糖抑制元件、至少一个腋芽up2元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的启动子与SEQ ID NO:113相比包括至少一个糖抑制元件、至少一个腋芽up2元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的缺失包括所述至少一个糖抑制元件、至少一个腋芽up2元件和至少一个芽休眠元件的缺失。另一方面，本文提供的缺失与SEQ ID NO:113相比包括所述至少一个糖抑制元件、至少一个腋芽up2元件和至少一个芽休眠元件的缺失。
一方面，本文提供的缺失包括以下的缺失：(a)至少一个糖抑制元件；(b)腋芽up2元件；(c)至少一个芽休眠元件；或(d)(a)、(b)和(c)的任何组合。
如本文所使用的，关于两个核苷酸序列的术语“互补性百分比”或“互补百分比”与同一性百分比的概念类似，但是是指当查询序列和主题序列呈线性排列且最佳地碱基配对而无需二次折叠结构(如环、茎或发夹)时，与核苷酸主题序列最佳地碱基配对或杂交的查询序列的核苷酸的百分比。此类互补性百分比可以位于两条DNA链、两条RNA链或DNA链与RNA链之间。可以通过以下计算“互补性百分比”：(i)在比较窗口上以线性和完全展开的布置(即，没有折叠或二级结构)对两个核苷酸序列进行最佳碱基配对或杂交；(ii)在比较窗口上测定在两个序列之间进行碱基配对的位置数以得出互补位置数；(iii)将所述互补位置数除以比较窗口中的位置总数；以及(iv)将此商数乘以100％以得出两个序列的互补性百分比。可以基于已知的核苷酸碱基对(如G-C、A-T和A-U)通过氢结合测定两个序列的最佳碱基配对。如果在没有指定特定比较窗口的情况下相对于参考序列计算“互补性百分比”，则通过将两个线性序列之间的互补位置数除以参考序列的总长度来测定同一性百分比。因此，出于本申请的目的，当两个序列(查询和主题)被最佳地碱基配对(允许错配或非碱基配对的核苷酸)时，查询序列的“互补性百分比”等于两个序列之间的碱基配对的位置数除以超过其长度的查询序列中的位置总数，然后乘以100％。
一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:113具有至少80％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:113具有至少85％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:113具有至少90％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区。一方面，本文提供的启动子包括与SEQ ID NO:113具有至少95％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区。一方面，本文提供的启动子包括与SEQID NO:113具有100％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区。
一方面，本文提供的启动子包括50个核苷酸到2450个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括100个核苷酸到2450个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括250个核苷酸到2450个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括500个核苷酸到2450个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括1000个核苷酸到2450个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括2000个核苷酸到2450个核苷酸。
一方面，本文提供的启动子包括至少50个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少75个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少100个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少200个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少300个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少400个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少500个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少600个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少700个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少800个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少900个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1000个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1100个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1200个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1300个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1400个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1500个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1600个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1700个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1800个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少1900个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少2000个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少2100个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少2200个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少2300个核苷酸。另一方面，本文提供的启动子包括至少2400个核苷酸。
如本文所使用的，“腋芽降解产物”是指可以起到抑制腋芽生长和/或发育的作用的任何核酸或蛋白质。一方面，本公开提供了对至少一种腋芽降解产物进行编码的核酸分子。一方面，腋芽降解产物抑制腋芽的生长。另一方面，腋芽降解产物抑制腋芽的发育。不受限制地，抑制腋芽的发育可以包括减慢正常发育的进展或阻止腋芽继续正常发育。一方面，腋芽降解产物包括RNA。另一方面，腋芽降解产物包括多肽。另一方面，腋芽降解产物包括小RNA分子。一方面，腋芽降解产物选自由小RNA分子和多肽组成的组。一方面，本文提供的核酸分子对腋芽降解产物进行编码。另一方面，本文提供的异源核酸分子对至少一种腋芽降解产物进行编码。
如本文所使用的，术语“多肽”是指至少两个共价连接的氨基酸的链。多肽可以由本文提供的多核苷酸进行编码。多肽的实例是蛋白质。本文提供的蛋白质可以由本文提供的核酸分子进行编码。
一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少75％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。
一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少70％类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少75％类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少80％类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少85％类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少90％类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少95％类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。另一方面，本文提供的多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列100％类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。
如本文所使用的，“小RNA分子”是指任何非编码RNA分子。一方面，小RNA分子的长度为18个核苷酸到30个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为18个核苷酸到24个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为18个核苷酸到22个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为18个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为19个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为20个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为21个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为22个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为23个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为24个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为25个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为26个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为27个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为28个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少18个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少19个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少20个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少21个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少22个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少23个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少24个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少25个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少26个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少27个核苷酸。另一方面，小RNA分子的长度为至少28个核苷酸。
一方面，本文提供的小RNA分子是微小RNA(miRNA)。另一方面，本文提供的小RNA分子是小干扰RNA(siRNA)。另一方面，本文提供的小RNA分子是异色siRNA(hc-siRNA)。另一方面，本文提供的小RNA分子是Piwi相互作用RNA(piRNA)。另一方面，本文提供的小RNA分子是发夹双链RNA(hp-dsRNA)。另一方面，本文提供的小RNA分子是反式作用siRNA(ta-siRNA)。另一方面，本文提供的小RNA分子是天然存在的反义siRNA(nat-siRNA)。另一方面，本文提供的小RNA分子是Cas9引导RNA(gRNA)。另一方面，本文提供的小RNA分子是Cpf1-gRNA。另一方面，本文提供的小RNA分子是CasX-gRNA。另一方面，本文提供的小RNA分子是Csm1-gRNA。
一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少18个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少19个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少20个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少21个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少22个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少23个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少24个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少25个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少26个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少27个连续核苷酸。另一方面，本文提供的小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少28个连续核苷酸。
一方面，本公开提供了一种烟草植物，所述烟草植物包括核酸分子，所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接，其中当在相当的条件下生长时，与相同品种的对照烟草植物相比，所述烟草植物在打顶后不包括烟杈或包括减少的烟杈。
另一方面，本公开提供了一种植物，所述植物包括核酸分子，所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接，其中当在相当的条件下生长时，与相同品种的对照植物相比，所述植物在打顶后不包括烟杈或包括减少的烟杈。
在又另一方面，本公开提供了一种植物或种子，所述植物或种子包括核酸分子，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ IDNO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码。一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物不包括或包括减少的烟杈。
如本文所使用的，“植物”是指完整植物。来源于植物的细胞或组织培养物可以包括任何植物成分或植物器官(例如，叶、茎、根等)、植物组织、种子、植物细胞和/或其子代。子代植物可以来自任何杂交后代，例如，F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7等。植物细胞是植物的生物细胞，取自植物或通过取自植物的细胞的培养而获得。如本文所使用的，“幼苗”是指等于或少于发芽后14天的植物。
一方面，本文提供的植物成分包含但不限于叶、茎、根、种子、花、花粉、花药、胚珠、花梗、果实、分生组织、子叶、下胚轴、荚、胚芽、胚乳、外植体、愈伤组织、组织培养物、芽、细胞和原生质体。在另外的方面，本公开提供了不是生殖材料并且不介导植物的自然繁殖的植物细胞、组织和器官。另一方面，本公开也提供了是生殖材料并且介导植物的自然繁殖的植物细胞、组织和器官。另一方面，本公开提供了不能通过光合作用维持其自身的植物细胞、组织和器官。另一方面，本公开提供了体植物细胞。与种系细胞相比，体细胞不介导植物繁殖。
提供的细胞、组织和器官可以来自种子、果实、叶、子叶、下胚轴、分生组织、胚芽、胚乳、根、芽、茎、荚、花、花序、花柄、花梗、花柱、柱头、花托、花瓣、萼片、花粉、花药、花丝、子房、胚珠、果皮、韧皮部和维管组织。另一方面，本公开提供了植物叶绿体。在另外的方面，本公开提供了表皮细胞、气孔细胞、毛状体细胞、根毛或贮藏根。
一方面，本公开提供了烟草原生质体细胞。另一方面，本公开提供了烟草愈伤组织细胞。另一方面，本公开提供了烟草种子细胞。另一方面，本公开提供了烟草种子细胞。另一方面，本公开提供了烟草果实细胞。另一方面，本公开提供了烟草叶细胞。另一方面，本公开提供了烟草子叶细胞。另一方面，本公开提供了烟草下胚轴细胞。另一方面，本公开提供了烟草分生组织细胞。另一方面，本公开提供了烟草胚芽细胞。另一方面，本公开提供了烟草根细胞。另一方面，本公开提供了烟草芽细胞。另一方面，本公开提供了烟草茎细胞。另一方面，本公开提供了烟草花细胞。另一方面，本公开提供了烟草花序细胞。另一方面，本公开提供了烟草花柄细胞。另一方面，本公开提供了烟草花梗细胞。另一方面，本公开提供了烟草花柱细胞。另一方面，本公开提供了烟草柱头细胞。另一方面，本公开提供了烟草花托细胞。另一方面，本公开提供了烟草花瓣细胞。另一方面，本公开提供了烟草萼片细胞。另一方面，本公开提供了烟草花粉细胞。另一方面，本公开提供了烟草花药细胞。另一方面，本公开提供了烟草花丝细胞。另一方面，本公开提供了烟草子房细胞。另一方面，本公开提供了烟草胚珠细胞。另一方面，本公开提供了烟草果皮细胞。另一方面，本公开提供了烟草韧皮部细胞。
烟草是本领域中已知的来自茄科家族的植物。非限制性示例性烟草物种包含渐尖叶烟草(Nicotiana acuminata)、非洲烟草(Nicotiana africana)、花烟草(Nicotianaalata)、渐窄叶烟草(Nicotiana attenuata)、本氏烟(Nicotiana benthamiana)、克利夫兰烟(Nicotiana clevelandii)、稀少烟草(Nicotiana exigua)、粉蓝烟草(Nicotianaglauca)、粘毛烟草(Nicotiana glutinosa)、蓝格斯多夫烟草(Nicotiana langsdorffii)、长花烟草(Nicotiana longiflora)、西方烟(Nicotiana occidentalis)、欧布特斯烟草(Nicotiana obtusifolia)、耳状烟草(Nicotiana otophora)、白花丹叶烟草(Nicotianaplumbaginifolia)、夸德瑞伍氏烟草(Nicotiana quadrivalvis)、黄花烟草(Nicotianarustica)、澳洲烟草(Nicotiana suaveolens)、美花烟草(Nicotiana sylvestris)、普通烟草和绒毛状烟草(Nicotiana tomentosiformis)。一方面，烟草是指普通烟草。
一方面，本文提供的植物是烟草植物。另一方面，本文提供的种子是烟草种子。另一方面，本文提供的叶是烟草叶。另一方面，本文提供的植物细胞是烟草细胞。另一方面，本文提供的植物组织是烟草组织。另一方面，本文提供的植物器官是烟草器官。在另外的方面，本文提供的植物成分是烟草成分。
一方面，本文提供的植物是经修饰的植物。另一方面，本文提供的种子是经修饰的种子。在另外的方面，本文提供的植物成分是经修饰的成分。一方面，本文提供的植物细胞是经修饰的植物细胞。另一方面，本文提供的植物基因组是经修饰的植物基因组。如本文所使用的，“经修饰的”是指已经受诱变、基因组编辑、基因转化或其组合的植物、种子、植物成分、植物细胞和植物基因组。一方面，本公开提供了烟草植物。另一方面，本公开提供了烟草种子。在另外的方面，本公开提供了烟草叶。在仍另外的方面，本公开提供了经修饰的经烘干的烟草叶。
一方面，本公开提供了包括本文提供的任何核酸分子的烟草植物。另一方面，本公开提供了包括本文提供的任何核酸分子的烟草种子。在另外的方面，本公开提供了包括本文提供的任何核酸分子的烟草叶。在仍另外的方面，本公开提供了包括本文提供的任何核酸分子的经烘干的烟草叶。一方面，本公开提供了包括本文提供的任何核酸分子的植物。另一方面，本公开提供了包括本文提供的任何核酸分子的种子。在另外的方面，本公开提供了包括本文提供的任何核酸分子的叶。
如本文所使用的，“分杈”是指在叶与花柄之间生长的腋分生组织的腋(或侧生)芽(“烟杈”)的发育和/或生长。腋芽是包括腋分生组织、周围叶组织和周围茎组织的胚芽。一方面，分杈通过对植物进行打顶诱导。
双子叶植物的茎顶端和腋分生组织包括三个不同的细胞层：L1层(最外层)、L2层(中间层)和L3层(最内层)。L1和L2层构成被膜，并且它们背斜地分裂(分裂平面垂直于分生组织的表面)。L3层或本体向所有方向分裂。L1层最终产生表皮组织；L2层产生基本组织(例如，柔组织、厚角组织、厚壁组织)；并且L3层通常产生维管组织(例如，木质部、韧皮部)。
茎顶端和腋分生组织具有两个主要功能：维持其自身为一组多能细胞，并且产生植物的侧生地上器官(例如，茎、叶、花)。如果分生组织出于任何原因无法维持其自身，则其将最终耗尽其多能细胞并且停止产生另外的器官。一方面，当在相当的条件下生长时，与相同品种的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物表现出抑制的或消除的腋分生组织生长；抑制的或消除的腋分生组织维持；或其组合。
一方面，本文提供的启动子在腋分生组织中具有活性。另一方面，本文提供的启动子在腋芽组织中具有活性。一方面，本文提供的启动子在打顶后至少7天在腋分生组织中具有活性。另一方面，本文提供的启动子在打顶后至少7天在腋芽组织中具有活性。一方面，本文提供的启动子在烟草植物幼苗中不具有活性。另一方面，本文提供的启动子在植物幼苗中不具有活性。另一方面，本文提供的启动子在烟草种子中不具有活性。另一方面，本文提供的启动子在种子中不具有活性。在另外的方面，本文提供的启动子在烟草胚芽中不具有活性。另一方面，本文提供的启动子在植物胚芽中不具有活性。一方面，本文提供的启动子在烟草花粉细胞中不具有活性。另一方面，本文提供的启动子在花粉细胞中不具有活性。一方面，本文提供的启动子在烟草卵细胞中不具有活性。另一方面，本文提供的启动子在植物卵细胞中不具有活性。一方面，本文提供的启动子在茎顶端分生组织中不具有活性。
如本文所使用的，“打顶”是指当植物接近成熟时去除花柄尖端，包含SAM、花以及直至若干个邻近的叶。对烟草植物进行打顶导致顶端优势损失。打顶之前，通过SAM发出的荷尔蒙信号使分杈在很大程度上保持休眠；打顶去除荷尔蒙信号并且可以允许烟杈的外生长(“打顶诱导的分杈”)。如果分杈被充分地控制，则打顶增加产率、增加每英亩价值并且引起对烟草叶的物理和化学性质的期望的修饰。
如本文所使用的，“相当的生长条件”是指用于生长两种或更多种植物基因型并在其之间进行有意义的比较的类似的环境条件和/或农艺实践，使得环境条件或农艺实践均不会导致或解释在两种或更多种植物基因型之间所观察到的任何差异。环境条件包含例如光照、温度、水、湿度和营养(例如，氮和磷)。农艺实践包含例如播种、修剪、根切、移栽、打顶和分杈。参见《烟草、生产、化学和技术(Tobacco,Production,Chemistry andTechnology)》第4B和4C章,Davis和Nielsen,编辑,牛津布莱克威尔出版公司(BlackwellPublishing),(1999),第70-103页。
如本文所使用的，“减少的打顶诱导的分杈”或“减少的分杈”是指烟杈数量的减少；当在相当的条件下生长时，与打顶后对照植物相比烟杈大小减少(例如，干生物量、鲜重、长度、直径)和/或烟杈对农艺性状的影响减少(例如，植物的产率、质量和整体生产力)。如本文所使用的，烟杈数量、烟杈大小和/或烟杈对农艺性状的影响的“减少”是指统计上显著的减少。如本文所使用的，“统计上显著的”是指当使用统计显著性的适当度量(例如，单尾两样本t检验)时p值小于0.05。
除非另外说明，否则本文提及的烟草植物、品种、栽培品种或品系的烟杈长度、烟杈生物量、烟杈数量、叶产率或叶等级指数值的测量结果是指平均测量结果，包含例如单一植物的平均多片叶(例如，2片、3片、4片、5片、6片、7片、8片、9片、10片、11片、12片、13片、14片、15片、16片、17片、18片、19片或20片或更多片叶)的平均值或来自单一品种、栽培品种或品系的烟草植物种群的平均测量结果。用于测定平均测量结果(例如，鲜重、干生物量或叶分级)的烟草植物种群或烟草叶的集合可以是任何大小，例如5、10、15、20、25、30、35、40或50。遵循用于测定平均测量结果或等级指数值的行业接受的标准协议。
一方面，减少的分杈包括烟杈干生物量的减少。一方面，减少的分杈包括烟杈鲜重的减少。另一方面，减少的分杈包括烟杈长度的减少。在仍另外的方面，减少的分杈包括存在的烟杈数量的减少。一方面，减少的分杈包括烟杈干生物量的减少、烟杈鲜重的减少、烟杈长度的减少、烟杈直径的减少、总烟杈数量的减少或其任何组合。
一方面，烟杈的数量在打顶后一周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后两周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后三周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后四周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后五周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后六周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后七周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后八周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后九周进行计数。另一方面，烟杈的数量在打顶后十周进行计数。
一方面，烟杈鲜重在打顶后一周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后两周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后三周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后四周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后五周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后六周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后七周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后八周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后九周进行测量。另一方面，烟杈鲜重在打顶后十周进行测量。
一方面，烟杈干生物量在打顶后一周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后两周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后三周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后四周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后五周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后六周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后七周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后八周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后九周进行测量。另一方面，烟杈干生物量在打顶后十周进行测量。
烟杈的长度测量为烟杈基座(其与植物主茎连接)与烟杈的距烟杈基座最远的部分之间的距离。一方面，烟杈长度在打顶后一周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后两周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后三周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后四周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后五周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后六周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后七周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后八周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后九周进行测量。另一方面，烟杈长度在打顶后十周进行测量。
烟杈的直径在与植物的主茎邻接的底座处进行测量。一方面，烟杈直径在打顶后一周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后两周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后三周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后四周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后五周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后六周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后七周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后八周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后九周进行测量。另一方面，烟杈直径在打顶后十周进行测量。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少10％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少15％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少20％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少25％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少30％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少35％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少40％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少45％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少50％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少55％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少60％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少65％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少70％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少75％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少80％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少85％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少90％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了至少95％。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了1％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了1％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了1％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了1％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了5％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了5％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了5％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了5％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了10％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了10％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了10％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了10％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了25％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了25％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了25％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了50％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了50％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈鲜重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈鲜重生物量减少了75％到100％。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少10％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少15％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少20％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少25％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少30％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少35％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少40％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少45％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少50％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少55％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少60％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少65％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少70％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少75％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少80％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少85％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少90％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了至少95％。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了1％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了1％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了1％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了1％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了5％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了5％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了5％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了5％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了10％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了10％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了10％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了10％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了25％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了25％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了25％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了50％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了50％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈干重生物量相比，本文提供的烟草植物的烟杈干重生物量减少了75％到100％。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少10％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少15％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少20％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少25％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少30％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少35％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少40％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少45％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少50％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少55％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少60％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少65％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少70％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少75％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少80％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少85％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少90％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了至少95％。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了1％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了1％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了1％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了1％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了5％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了5％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了5％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了5％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了10％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了10％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了10％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了10％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了25％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了25％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了25％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了50％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了50％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈长度相比，本文提供的烟草植物的烟杈长度减少了75％到100％。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少10％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少15％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少20％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少25％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少30％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少35％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少40％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少45％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少50％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少55％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少60％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少65％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少70％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少75％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少80％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少85％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少90％。另一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了至少95％。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了1％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了1％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了1％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了1％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了5％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了5％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了5％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了5％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了10％到25％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了10％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了10％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了10％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了25％到50％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了25％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了25％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了50％到75％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了50％到100％。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物的烟杈直径相比，本文提供的烟草植物的烟杈直径减少了75％到100％。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少1个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少2个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少3个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少4个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少5个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少6个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少7个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少8个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少9个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少10个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少15个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少20个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少30个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少40个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少50个总烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少60个总烟杈。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少10％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少15％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少20％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少25％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少30％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少35％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少40％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少45％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少50％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少55％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少60％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少65％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少70％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少75％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少80％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少85％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少90％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少至少95％的烟杈。
一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少1％到25％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少1％到50％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少1％到75％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少1％到100％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少5％到25％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少5％到50％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少5％到75％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少5％到100％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少10％到25％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少10％到50％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少10％到75％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少10％到100％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少25％到50％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少25％到75％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少25％到100％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少50％到75％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少50％到100％的烟杈。一方面，与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括少75％到100％的烟杈。
一方面，当在相当的条件下生长时，与对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括类似的或更高的叶产率质量。如本文所使用的，“类似的”是指10％以内。一方面，叶产率质量选自由鲜产率质量、干产率质量和经烘干的产率质量组成的组。另一方面，与对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括更高的叶产率质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的50％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的45％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的40％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的35％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的30％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的25％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的20％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的15％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的10％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的5％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的4％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的3％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的2％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的1％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶产率质量在对照烟草植物的叶产率质量的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少0.25％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少0.5％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少1％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少2.5％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少5％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少10％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少15％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少20％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少25％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少30％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少40％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少50％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少60％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少70％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少80％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少90％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少100％的干叶质量。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生比对照烟草植物的干叶质量多至少150％的干叶质量。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的0.25％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的0.5％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的1％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的2.5％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的5％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的10％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的15％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的20％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的25％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的30％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的40％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的50％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的60％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的70％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的80％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的90％到150％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的干叶质量为对照烟草植物的干叶质量的100％到150％。
一方面，本文提供的烟草植物产生的叶数量在相当的条件下生长的对照烟草植物的叶数量的75％以内。一方面，本文提供的烟草植物产生的叶数量在相当的条件下生长的对照烟草植物的叶数量的60％以内。一方面，本文提供的烟草植物产生的叶数量在相当的条件下生长的对照烟草植物的叶数量的50％以内。一方面，本文提供的烟草植物产生的叶数量在相当的条件下生长的对照烟草植物的叶数量的25％以内。一方面，本文提供的烟草植物产生的叶数量在相当的条件下生长的对照烟草植物的叶数量的15％以内。一方面，本文提供的烟草植物产生的叶数量在相当的条件下生长的对照烟草植物的叶数量的10％以内。一方面，本文提供的烟草植物产生的叶数量在相当的条件下生长的对照烟草植物的叶数量的5％以内。一方面，本文提供的烟草植物产生的叶数量在相当的条件下生长的对照烟草植物的叶数量的1％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，与对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物包括类似的植物高度。一方面，植物高度测量为植物正在生长的生长介质(例如，土壤)的最上表面与植物的最上叶的最上表面之间的距离。一方面，烟草植物包含等于或大于对照植物高度的高度。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少75％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少50％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少25％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少20％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少15％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少10％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少5％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少2.5％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少1％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少0.75％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少0.5％。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物的高度比对照烟草植物的高度高至少0.25％。
基于以下因素评估烟草等级：包含但不限于叶柄位置、叶大小、叶颜色、叶均匀性和完整性、成熟度、质地、弹性、光泽(与叶的强度和色彩深度以及光亮有关)、吸水性(烟叶吸收和保留周围水分的能力)和绿色细微差别或铸型。可以例如使用美国农业部(USDepartment of Agriculture)农业市场服务局(Agricultural Marketing Service)发布的官方标准等级来测定叶等级(7U.S.C.§511)。参见例如《白肋烟官方标准等级(OfficialStandard Grades for Burley Tobacco)》(美国类型(U.S.Type)31和外国类型(ForeignType)93),生效日期1990年11月5日(55F.R.40645)；《烤烟官方标准等级(OfficialStandard Grades for Flue-Cured Tobacco)》(美国类型11、12、13、14和外国类型92),生效日期1989年3月27日(54F.R.7925)；《宾夕法尼亚州宽叶烟草官方标准等级(OfficialStandard Grades for Pennsylvania Seedleaf Tobacco)》(美国类型41),生效日期1965年1月8日(29F.R.16854)；《俄亥俄州雪茄叶烟草官方标准等级(Official StandardGrades for Ohio Cigar-Leaf Tobacco)》(美国类型42、43和44),生效日期1963年12月8日(28F.R.11719和28F.R.11926)；《威斯康星州雪茄内包叶烟草官方标准等级(OfficialStandard Grades for Wisconsin Cigar-Binder Tobacco)》(美国类型54和55),生效日期1969年11月20日(34F.R.17061)；《威斯康星州雪茄内包叶烟草官方标准等级》(美国类型54和55),生效日期1969年11月20日(34F.R.17061)；《乔治亚州和佛罗里达州蔽光生长的雪茄外包叶烟草官方标准等级(Official Standard Grades for Georgia and FloridaShade-Grown Cigar-Wrapper Tobacco)》(美国类型62),生效日期1971年4月。可以根据行业接受的等级指数测定USDA等级指数值。参见例如Bowman等人,《烟草科学(TobaccoScience)》,32:39-40(1988)；《传统烟草文献库(Legacy Tobacco Document Library)》(贝茨文件#523267826-523267833,1988年7月1日,《建议的白肋烟等级指数备忘录(Memorandum on the Proposed Burley Tobacco Grade Index)》)；以及Miller等人,1990,《烟草国际(Tobacco Intern.)》,192:55-57(所有前述文献以全文引用的方式并入)。可替代地，叶等级可以通过高光谱成像来测定。参见例如WO 2011/027315(于2011年3月10日公开，并且以全文引用的方式并入)。
一方面，当在相当的条件下生长时，与对照烟草植物相比，本文提供的烟草植物产生的叶具有类似的或更高的USDA等级指数值。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约50％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约45％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约40％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约35％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约30％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约25％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约20％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约15％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约10％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约5％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约4％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约3％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约2％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约1％以内。一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的烟草植物产生的叶的USDA等级指数值在对照烟草植物的USDA等级指数值的约0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物需要减少的用于控制分杈的管理。如本文所使用的，“管理”是指手动去除烟杈、施加用于抑制或去除烟杈的化学药品(例如，马来酰肼、氟节胺)或两者。一方面，与在相当的条件下生长的对照植物相比，本文提供的植物需要减少的手动烟杈去除频率、减少的化学药品施加频率、减少的化学药品施加量或其组合。参见例如Fisher等人,“《打顶、管理烟杈和使用乙烯磷(Topping,Managing Suckers,and Using Ethephon)》,”第96-117页在北卡罗莱纳州立大学《2016年烤烟信息(2016Flue-Cured Tobacco Information)》中,其以全文引用的方式并入本文中。
一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶具有类似的叶化学特性。不受限制地，叶化学特性可以包括烟草植物或烟草叶中生物碱(例如，尼古丁、降烟碱、假木贼碱、新烟草碱)、苹果酸和还原糖(例如，右旋糖)或其组合的量。不受限制地，叶化学可以以毫克每克干叶质量或总干叶质量的百分比来测量。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的50％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的40％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的30％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的25％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的20％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的15％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的10％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的5％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的4％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的3％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的2％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的1％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的总生物碱水平在对照植物的总生物碱水平的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的50％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的40％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的30％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的25％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的20％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的15％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的10％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的5％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的4％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的3％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的2％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的1％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的尼古丁水平在对照植物的尼古丁水平的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的50％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的40％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的30％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的25％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的20％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的15％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的10％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的5％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的4％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的3％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的2％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的1％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的降烟碱水平在对照植物的降烟碱水平的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的50％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的40％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的30％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的25％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的20％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的15％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的10％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的5％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的4％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的3％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的2％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的1％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的假木贼碱水平在对照植物的假木贼碱水平的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的50％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的40％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的30％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的25％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的20％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的15％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的10％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的5％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的4％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的3％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的2％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的1％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的新烟草碱水平在对照植物的新烟草碱水平的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的50％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的40％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的30％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的25％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的20％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的15％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的10％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的5％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的4％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的3％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的2％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的苹果酸水平的1％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的苹果酸水平在对照植物的总苹果酸水平的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的50％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的40％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的30％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的25％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的20％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的15％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的10％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的5％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的4％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的3％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的2％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的1％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的还原糖水平在对照植物的还原糖水平的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的50％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的40％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的30％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的25％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的20％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的15％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的10％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的5％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的4％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的3％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的2％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的1％以内。另一方面，当在相当的条件下生长时，本文提供的植物或叶包括的右旋糖水平在对照植物的右旋糖水平的0.5％以内。
一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少50％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少60％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少70％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少80％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少90％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少95％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少96％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少97％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少98％。另一方面，当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，本文提供的植物或叶不包括或包括减少的烟杈并且进一步包括的尼古丁水平比对照植物的尼古丁水平低至少99％。
一方面，本公开提供了来自本文提供的任何植物的烟草叶。
从本公开的烟草植物、细胞、品系、品种或杂交体获得的烟草材料可以用于制造烟草产品。如本文所使用的，“烟草产品”被定义为旨在供人类使用或消费的由烟草制成或源自烟草的任何产品。一方面，本文提供的烟草产品包括来自本文提供的烟草植物的经烘干的成分。另一方面，本文提供的烟草产品包括来自本文提供的烟草植物的经烘干的烟草叶。一方面，本公开提供了一种烟草产品，所述烟草产品包括来自本文提供的任何烟草植物的经烘干的烟草材料。
生物碱化合物可以从本文提供的任何烟草植物或植物部分中提取或分离。一方面，本文提供的烟草产品包括提取自烟草植物或烟草植物部分的生物碱。另一方面，本文提供的烟草产品包括提取自烟草植物或烟草植物部分的尼古丁。另一方面，本文提供的烟草产品包括提取自烟草植物或烟草植物部分的新烟草碱。另一方面，本文提供的烟草产品包括提取自烟草植物或烟草植物部分的假木贼碱。一方面，本文提供的烟草产品包括提取自烟草植物或植物部分的降烟碱。
一方面，本文提供的经烘干的烟草材料包括风干烟草材料。另一方面，本文提供的经烘干的烟草材料包括明火烘干烟草材料。另一方面，本文提供的经烘干的烟草材料包括晒干烟草材料。另一方面，本文提供的经烘干的烟草材料包括烤烟材料。另一方面，本文提供的经烘干的烟草材料选自由以下组成的组：风干烟草材料、明火烘干烟草材料、晒干烟草材料和烤烟材料。
本文提供的烟草产品包含但不限于香烟产品(例如，香烟、比迪烟(bidicigarette)、丁香烟)、雪茄产品(例如，雪茄、雪茄烟外包叶(cigar wrapping tobacco)、小雪茄)、烟斗烟草产品、源自烟草的产品、源自烟草的尼古丁产品、无烟烟草产品(例如，湿鼻烟、干鼻烟、嚼用烟草、湿无烟烟草、细切嚼用烟草、长切嚼用烟草、袋装嚼用烟草)、膜剂、咀嚼片(例如，口香糖)、锭剂、溶解条、标签、片剂、形件、凝胶、消耗性单位、不溶性基质、中空形状、复原烟草、膨胀烟丝等。参见例如美国专利公开第US2006/0191548号。一方面，烟草产品选自由以下组成的组：香烟、丁香烟、比迪烟、雪茄、小雪茄、非通气型香烟(non-ventilated cigarette)、通风凹槽过滤嘴香烟(vented-recess filter cigarette)、烟斗烟草、鼻烟、嚼用烟草、湿无烟烟草、细切嚼用烟草、长切嚼用烟草和袋装嚼用烟草。另一方面，烟草产品选自由以下组成的组：口香糖、片剂、锭剂和溶解条。另一方面，本文提供的烟草产品是无烟烟草产品。
从本文提供的烟草植物或烟草植物部分中提取的生物碱化合物可以用于生产适于与不燃性产品一起使用的组合物。示例性不燃性产品包含电子烟(“电子烟(e-cigarettes)”)、电子吸烟器具、电子蒸气产品、雾化蒸气产品和加热烟草产品。一方面，本文提供的不燃性产品包括提取自本文提供的烟草植物或烟草植物部分的生物碱。一方面，本文提供的不燃性产品包括提取自本文提供的烟草植物或烟草植物部分的尼古丁。一方面，本文提供的不燃性产品包括提取自本文提供的烟草植物或烟草植物部分的假木贼碱。一方面，本文提供的不燃性产品包括提取自本文提供的烟草植物或烟草植物部分的新烟草碱。一方面，本文提供的不燃性产品包括提取自本文提供的烟草植物或烟草植物部分的降烟碱。
一方面，本文提供的不燃性产品是电子烟。另一方面，本文提供的不燃性产品是电子吸烟器具。另一方面，本文提供的不燃性产品是雾化蒸气产品。另一方面，本文提供的不燃性产品是加热烟草产品。另一方面，本文提供的不燃性产品是电子蒸气产品。一方面，本文提供的不燃性产品选自由以下组成的组：电子烟、电子吸烟器具、雾化蒸气产品和加热烟草产品。
如本文所使用的，“香烟”是指具有“棒”和“填充物”的烟草产品。香烟“棒”包含香烟纸、过滤嘴、滤棒成型纸(用于容纳过滤材料)、将香烟纸(包括填充物)固持到过滤嘴的接装纸以及将这些组件固持在一起的所有胶水。“填充物”包含：(1)所有烟草，包含但不限于复原烟草和膨胀烟丝；(2)非烟草替代品(包含但不限于草药、非烟草植物材料以及可能伴随卷在卷烟纸内的烟草的其它香料)；(3)盒；(4)调味剂；以及(5)所有其它添加剂(混合到烟草和替代品中并卷到香烟中)。
一方面，本公开提供了用于储存、运输或以其它方式容纳来自本文所述的烟草植物的经烘干或未经烘干的烟草叶的烟草叶容器。作为非限制性实例，容器可以是盒、袋、桶、板条箱或任何其它适合的容器。
另一方面，本公开提供了来自本文提供的任何烟草植物的经烘干的烟草叶捆。本文还提供了来自本文提供的任何烟草植物的未经烘干的烟草叶捆。捆可以是本领域已知的任何大小。一方面，捆包括至少1千克。另一方面，捆包括至少5千克。另一方面，捆包括至少10千克。另一方面，捆包括至少15千克。另一方面，捆包括至少20千克。另一方面，捆包括至少25千克。另一方面，捆包括至少30千克。另一方面，捆包括至少35千克。另一方面，捆包括至少40千克。另一方面，捆包括至少45千克。另一方面，捆包括至少50千克。另一方面，捆包括至少60千克。另一方面，捆包括至少70千克。另一方面，捆包括至少80千克。另一方面，捆包括至少90千克。另一方面，捆包括至少100千克。另一方面，捆包括至少125千克。另一方面，捆包括至少150千克。另一方面，捆包括至少175千克。另一方面，捆包括至少200千克。另一方面，捆包括至少225千克。另一方面，捆包括至少250千克。另一方面，捆包括至少275千克。另一方面，捆包括至少300千克。另一方面，捆包括至少350千克。另一方面，捆包括至少400千克。另一方面，捆包括至少450千克。另一方面，捆包括至少500千克。另一方面，捆包括至少600千克。另一方面，捆包括至少700千克。另一方面，捆包括至少800千克。另一方面，捆包括至少900千克。另一方面，捆包括至少1000千克。另一方面，捆包括至少1500千克。另一方面，捆包括至少2000千克。捆可以具有任何形状。捆形状的非限制性实例包含圆锥形、球形、矩形和立方形。
本文还提供了来自从本文所述的烟草植物采集并烘干的烟叶的烟草产品的容器。通过非限制性实例的方式，容器可以是盒、袋、小包(packet)、包(pack)、小袋(pouch)、罐或本领域已知的任何其它容器。
一方面，本文提供的烟草植物、种子、植物成分、植物细胞和植物基因组来自选自由以下组成的组的烟草类型：烤烟、晒干烟草、风干烟草、深色(dark)风干烟草和深色明火烘干烟草。另一方面，本文提供的烟草植物、种子、植物成分、植物细胞和植物基因组来自选自由以下组成的组的烟草类型：白肋烟草、马里兰(Maryland)烟草、浅色(bright)烟草、弗吉尼亚(Virginia)烟草、东方(Oriental)烟草、土耳其(Turkish)烟草和加尔宝
烟草。一方面，本文提供的烟草植物或种子是杂交植物或种子。一方面，本文提供的烟草植物选自由以下组成的组：烤烟品种烟草植物、浅色品种烟草植物、白肋品种烟草植物、弗吉尼亚品种烟草植物、马里兰品种烟草植物、加尔宝品种烟草植物、深色品种烟草植物、东方品种烟草植物和土耳其品种烟草植物。
如本文所使用的，“杂交体”通过杂交来自不同品种或物种的两种植物产生，使得子代包括来自每个亲本的遗传材料。技术人员认识到也可以产生更高阶的杂交体。例如，可以通过将品种C与品种D杂交以产生C x D杂交体来制备第一杂交体，并且可以通过将品种E与品种F杂交以产生E x F杂交体来制备第二杂交体。第一杂交体和第二杂交体可以进一步杂交以产生包括来自所有四个亲本品种的遗传信息的高阶杂交体(C x D)x(E x F)。一方面，本文提供的烟草植物是杂交烟草植物。另一方面，本文提供的烟草种子是杂交烟草种子。
一方面，本文提供的烟草品种是雄性不育的。另一方面，本文提供的烟草品种是细胞质雄性不育的(CMS)。一方面，本文提供的烟草植物是雄性不育的。另一方面，本文提供的烟草植物是细胞质雄性不育的。雄性不育烟草可以通过本领域已知的任何方法产生。在Wernsman,E.A.和Rufty,R.C,1987,第17章,《烟草》,第669-698页在:《品种演化(CultivarDevelopment)》.《作物种类(Crop Species)》中W.H.Fehr(编辑),纽约州纽约市麦克米伦出版社有限公司(MacMillan Publishing Go.,Inc.),第761页中描述了产生雄性不育烟草的方法。另一方面，本文提供的烟草品种是雌性不育的。作为非限制性实例，雌性不育植物可以通过使STIG1基因突变来制备。参见例如Goldman等人,1994,《EMBO杂志(EMBO Journal)》13:2976-2984。一方面，本文提供的烟草植物是雌性不育的。
一方面，本文提供的烟草品种是通过单倍体加倍产生的。当诱导单倍体品系以使其染色体补体加倍至在基因组内的所有基因座处纯合的二倍体状态时，发生单倍体加倍。
烤烟(也称为弗吉尼亚浅色烟草)占世界烟草产率的大约40％。烤烟通常也被称为“浅色烟草”，因为其在烘干过程中达到金黄色至深橙色。烤烟具有清淡的、鲜明的香气和味道。烤烟通常含糖量高而含油量低。主要的烤烟种植国家是阿根廷、巴西、中国、印度、坦桑尼亚和美国。一方面，本文提供的烟草植物或种子在选自由以下组成的组的烤烟背景下：CC13、CC 27、CC 33、CC35、CC 37、CC 65、CC 67、CC 700、GF 318、GL 338、GL 368、GL 939、K346、K 399、K326、NC 102、NC 196、NC 291、NC 297、NC 299、NC 471、NC 55、NC 606、NC 71、NC 72、NC 92、PVH 1118、PVH 1452、PVH 2110、斯佩特(SPEIGHT)168、斯佩特220、斯佩特225、斯佩特227、斯佩特236和基本上源自上述品种中的任何一种的任何品种。另一方面，本文提供的烟草植物或种子在选自由以下组成的组的烤烟背景下：科克尔(Coker)48、科克尔176、科克尔371-Gold、科克尔319、科克尔347、GL 939、K 149、K326、K 340、K 346、K 358、K394、K 399、K 730、NC 27NF、NC 37NF、NC 55、NC 60、NC 71、NC 72、NC 82、NC 95、NC 297、NC606、NC 729、NC 2326、McNair 373、McNair 944、Ox 207、Ox 414NF、里姆斯(Reams)126、里姆斯713、里姆斯744、RG 8、RG 11、RG 13、RG 17、RG 22、RG 81、RG H4、RG H51、斯佩特H-20、斯佩特G-28、斯佩特G-58、斯佩特G-70、斯佩特G-108、斯佩特G-l11、斯佩特G-l17、斯佩特168、斯佩特179、斯佩特NF-3、Va 116、Va 182和基本上源自上述品种中的任何一种的任何品种。参见WO 2004/041006A1。在另外的方面，本文提供的烟草植物、种子、杂交体、品种或品系在选自由K326、K346和NC196组成的组的任何烤烟背景下。
风干烟草包含白肋烟草、马里兰烟草和深色烟草。共同的因素是烘干主要不使用人工热源和湿度。白肋烟草的颜色为浅棕色至深棕色，含油量高，并且含糖量低。白肋烟草在烟仓中风干。主要的白肋烟草种植国家是阿根廷、巴西、意大利、马拉维和美国。马里兰烟草极度蓬松，具有良好的燃烧性能、低尼古丁和中性香气。主要的马里兰烟草种植国家包含美国和意大利。一方面，本文提供的烟草植物或种子在选自由以下组成的组的白肋烟草背景下：克莱(Clay)402、克莱403、克莱502、Ky 14、Ky 907、Ky 910、Ky 8959、NC 2、NC 3、NC4、NC 5、NC 2000、TN 86、TN 90、TN 97、R 610、R 630、R 711、R 712、NCBH 129、HB4488PLC、PD 7319LC、Bu 21×Ky 10、HB04P、Ky 14×L 8、Kt 200、Newton(牛顿)98、Pedigo(佩迪哥)561、Pf561和Va 509。在另外的方面，本文提供的烟草植物、种子、杂交体、品种或品系在选自由TN 90、KT 209、KT 206、KT212和HB 4488组成的组的白肋背景下。另一方面，本文提供的烟草植物或种子在选自由Md 10、Md 40、Md 201、Md 609、Md 872和Md 341组成的组的马里兰烟草背景下。
深色风干烟草与其它类型的区别主要在于其烘干工艺，其烘干工艺使深色风干烟草具有中度至深褐色颜色以及独特的香气。深色风干烟草主要用于生产嚼用烟草和鼻烟。一方面，本文提供的烟草植物或种子在选自由以下组成的组的深色风干烟草背景下：苏门答腊(Sumatra)、亚廷(Jatim)、多米尼加古巴诺(Dominican Cubano)、贝苏基(Besuki)、一个烟杈(One sucker)、格林河(Green River)、弗吉尼亚晒干(Virginia sun-cured)和巴拉圭帕萨多(Paraguan Passado)。
深色明火烘干烟草通常是在封闭的烘干烟仓的地板上用低燃烧的木材火进行烘干的。深色明火烘干烟草用于制造烟斗共混物、香烟、嚼用烟草、鼻烟和味道浓郁的雪茄。主要的深色明火烘干烟草种植区是美国的田纳西州、肯塔基州和弗吉尼亚州。一方面，本文提供的烟草植物或种子在选自由以下组成的组的深色明火烘干烟草背景下：窄叶马多尔(Narrow Leaf Madole)、改进型马多尔(Improved Madole)、汤姆·罗森(Tom Rosson)马多尔、牛顿的VH马多尔(Newton's VH Madole)、小克里滕登(Little Crittenden)、格林伍德(Green Wood)、小伍德(Little Wood)、小柄黑猛犸(Small Stalk Black Mammoth)、DT508、DT 518、DT 592、KY 171、DF 911、DF 485、TN D94、TN D950、VA 309和VA 359。
东方烟草也被称为希腊、香气和土耳其烟草，因为它们通常生长在地中海东部地区，如土耳其、希腊、保加利亚、马其顿、叙利亚、黎巴嫩、意大利和罗马尼亚。今天的东方品种特有的小植物和叶子大小以及其独特的香气特性是由于所述植物对其在过去数个世纪以来所生长的贫瘠土壤和压力气候条件的适应的结果。一方面，本文提供的烟草植物或种子在选自由以下组成的组的东方烟草背景下：伊兹密尔(Izmir)、卡泰里尼(Katerini)、萨姆松(Samsun)、巴斯马(Basma)和克鲁莫夫格勒(Krumovgrad)、特拉布宗(Trabzon)、泰萨利亚(Thesalian)、塔绍瓦(Tasova)、锡诺普(Sinop)、伊兹米特(Izmit)、亨代克(Hendek)、埃迪尔内(Edirne)、塞姆丁里(Semdinli)、阿德亚曼(Adiyanman)、亚伊拉达格(Yayladag)、伊斯肯德伦(Iskenderun)、迪兹杰(Duzce)、马其顿(Macedonian)、玛芙拉(Mavra)、普里莱普(Prilep)、巴夫拉(Bafra)、布尔萨(Bursa)、布贾克(Bucak)、比特利斯(Bitlis)、巴勒克希尔(Balikesir)和基本上源自上述品种中的任何一种的任何品种。
一方面，根据本领域已知的标准烟草育种技术，本文提供的烟草植物、种子、杂交体、品种或品系基本上源自以下或在以下的遗传背景下：BU 64、CC 101、CC 200、CC 13、CC27、CC 33、CC 35、CC 37、CC 65、CC 67、CC 301、CC 400、CC 500、CC 600、CC 700、CC 800、CC900、CC 1063、科克尔176、科克尔319、科克尔371金(Gold)、科克尔48、CU 263、DF911、加尔宝、GL 26H、GL 338、GL 350、GL 395、GL 600、GL 737、GL 939、GL 973、GF 157、GF 318、RJR901、HB 04P、K 149、K 326、K 346、K 358、K394、K 399、K 730、NC 196、NC 37NF、NC 471、NC55、NC 92、NC2326、NC 95、NC 925、PVH 1118、PVH 1452、PVH 2110、PVH 2254、PVH 2275、VA116、VA 119、KDH 959、KT 200、KT204LC、KY 10、KY 14、KY 160、KY 17、KY 171、KY 907、KY907LC、KTY14 x L8 LC、小克里滕登、McNair 373、McNair 944、雄性不育KY 14x L8、窄叶马多尔、MS KY171、窄叶马多尔(phph)、MS窄叶马多尔、MS TND950、PD 7302LC、PD 7305LC、PD7309LC、PD 7312LC、PD 7318LC、PD 7319LC、MSTKS 2002、TKF 2002、TKF 6400、TKF 4028、TKF 4024、KT206LC、KT209LC、KT210LC、KT212LC、NC 100、NC 102、NC 2000、NC 291、NC 297、NC 299、NC 3、NC 4、NC 5、NC 6、NC7、NC 606、NC 71、NC 72、NC 810、NC BH 129、NC 2002、尼尔·史密斯·马多尔(Neal Smith Madole)、牛津(OXFORD)207、‘珀里克(Perique)’、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R 610、R 630、R 7-11、R 7-12、RG 17、RG 81、RG H51、RGH 4、RGH 51、RS 1410、斯佩特168、斯佩特172、斯佩特179、斯佩特210、斯佩特220、斯佩特225、斯佩特227、斯佩特234、斯佩特G-28、斯佩特G-70、斯佩特H-6、斯佩特H20、斯佩特NF3、TI 1406、TI 1269、TN 86、TN86LC、TN 90、TN90LC、TN 97、TN97LC、TN D94、TN D950、TR(汤姆·罗森)马多尔、VA 309、VA 359或任何商业烟草品种。
一方面，本文提供的烟草植物选自由以下组成的组：BU 64植物、CC 101植物、CC200植物、CC 13植物、CC 27植物、CC 33植物、CC 35植物、CC 37植物、CC 65植物、CC 67植物、CC 301植物、CC 400植物、CC 500植物、CC 600植物、CC 700植物、CC 800植物、CC 900植物、CC 1063植物、科克尔176植物、科克尔319植物、科克尔371金植物、科克尔48植物、CU263植物、DF911植物、加尔宝植物、GL 26H植物、GL 338植物、GL 350植物、GL 395植物、GL600植物、GL 737植物、GL 939植物、GL 973植物、GF 157植物、GF 318植物、RJR 901植物、HB04P植物、K 149植物、K 326植物、K 346植物、K 358植物、K394植物、K 399植物、K 730植物、NC 196植物、NC 37NF植物、NC 471植物、NC 55植物、NC 92植物、NC2326植物、NC 95植物、NC925植物、PVH 1118植物、PVH 1452植物、PVH 2110植物、PVH 2254植物、PVH 2275植物、VA116植物、VA 119植物、KDH 959植物、KT 200植物、KT204LC植物、KY 10植物、KY 14植物、KY160植物、KY 17植物、KY 171植物、KY 907植物、KY 907LC植物、KTY14 x L8 LC植物、小克里滕登植物、McNair 373植物、McNair 944植物、雄性不育KY 14x L8植物、窄叶马多尔植物、MS KY171植物、窄叶马多尔(phph)植物、MS窄叶马多尔植物、MS TND950植物、PD 7302LC植物、PD 7305LC植物、PD 7309LC植物、PD 7312LC植物、PD 7318LC植物、PD 7319LC植物、MSTKS 2002植物、TKF 2002植物、TKF 6400植物、TKF 4028植物、TKF 4024植物、KT206LC植物、KT209LC植物、KT210LC植物、KT212LC植物、NC 100植物、NC 102植物、NC 2000植物、NC291植物、NC 297植物、NC 299植物、NC 3植物、NC 4植物、NC 5植物、NC 6植物、NC7植物、NC606植物、NC 71植物、NC 72植物、NC 810植物、NC BH 129植物、NC 2002植物、尼尔·史密斯·马多尔植物、牛津207植物、‘珀里克’植物、PVH03植物、PVH09植物、PVH19植物、PVH50植物、PVH51植物、R 610植物、R 630植物、R 7-11植物、R 7-12植物、RG 17植物、RG 81植物、RGH51植物、RGH 4植物、RGH 51植物、RS 1410植物、斯佩特168植物、斯佩特172植物、斯佩特179植物、斯佩特210植物、斯佩特220植物、斯佩特225植物、斯佩特227植物、斯佩特234植物、斯佩特G-28植物、斯佩特G-70植物、斯佩特H-6植物、斯佩特H20植物、斯佩特NF3植物、TI1406植物、TI 1269植物、TN 86植物、TN86LC植物、TN 90植物、TN90LC植物、TN 97植物、TN97LC植物、TN D94植物、TN D950植物、TR(汤姆·罗森)马多尔植物、VA 309植物和VA 359植物。
所有上述提及的深色风干、白肋、马里兰、深色明火烘干或东方类型的特定品种仅出于示例性目的而列出。在本申请中还设想了任何另外的深色风干、白肋、马里兰、深色明火烘干、东方品种。
一方面，本公开提供了一种用于控制烟草植物中的打顶诱导的烟杈的方法，所述方法包括：(a)将核酸分子引入到烟草细胞，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(i)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(ii)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(iii)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码；以及(b)由所述烟草细胞再生烟草植物，其中与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，所述烟草植物不包括或包括减少的打顶诱导的烟杈。
本文还提供了使用本领域已知的任何适合的转化方法利用本文所述的重组构建体或表达盒转化烟草植物。用于将多核苷酸序列引入到烟草植物中的方法是本领域已知的，并且包含但不限于稳定转化方法、瞬时转化方法和病毒介导的方法。“稳定转化”是指引入到植物中的所关注的核苷酸构建体整合到植物的基因组中并且能够被其子代继承的转化。“瞬时转化”旨在意指将序列引入到植物中并且仅在植物中临时表达或仅在植物中瞬时存在。
一方面，本文提供的方法和组合物包括将一种或多种多核苷酸引入到一种或多种植物细胞中。一方面，本文提供的植物基因组被修饰成包含引入的核酸分子或重组载体。如本文所使用的，“植物基因组”是指植物细胞的核基因组、线粒体基因组或质粒(例如，叶绿体)基因组。另一方面，本文提供的多核苷酸被整合到人工染色体中。一方面，包括本文提供的多核苷酸的人工染色体被整合到植物细胞中。
将核酸分子(例如，转基因、重组载体、重组DNA构建体、重组多核苷酸、表达构建体)引入到本公开的植物细胞中的适合的方法包含显微注射、电穿孔、农杆菌介导的转化(美国专利第5,104,310号、第5,149,645号、第5,177,010号、第5,231,019号、第5,463,174号、第5,464,763号、第5,469,976号、第4,762,785号、第5,004,863号、第5,159,135号、第5,563,055和5,981,840)、直接基因转移和弹道粒子加速(也被称为生物弹道递送(biolisticdelivery)；参见例如美国专利第4,945,050号、第5,141,131号、第5,886,244号、第5,879,918号和第5,932,782号)。一方面，将核酸分子引入到烟草细胞的方法包括农杆菌介导的转化。另一方面，将核酸分子引入到烟草细胞的方法包括电穿孔。一方面，将核酸分子引入到烟草细胞的方法包括农杆菌介导的转化。一方面，将核酸分子引入到烟草细胞的方法包括生物弹道递送。
本文提供的核酸分子可以通过使植物与病毒或病毒核酸接触而引入到植物中。通常，此类方法涉及将本公开的表达盒并入在病毒DNA或RNA分子内。应认识到，在本文提供的表达盒中使用的启动子也涵盖用于通过病毒RNA聚合酶转录的启动子。用于将多核苷酸引入到植物中并表达在其中编码的涉及病毒DNA或RNA分子的蛋白质的方法是本领域已知的。参见例如美国专利第5,889,191号、第5,889,190号、第5,866,785号、第5,589,367号、第5,316,931号。
可以随后使用克隆方法繁殖的任何植物组织(无论是通过器官发生还是胚胎发生)都可以用本文提供的重组构建体或表达盒转化。“器官发生”是指从分生组织中心依次生长出芽和根的过程。“胚芽发生”是指从体细胞或配子以一致的方式(而不是顺序地)一起生长芽和根的过程。适合于本文所述的各种转化方案的示例性组织包含但不限于原生质体细胞、愈伤组织细胞、现有的分生组织(例如，顶端分生组织、腋芽和根分生组织)和诱导的分生组织(例如，子叶分生组织和下胚轴分生组织)、下胚轴、子叶、叶盘、花粉、胚芽等。一方面，经转化的细胞包括原生质体细胞。另一方面，经转化的细胞包括愈伤组织细胞。
一方面，本公开提供了一种生长烟草植物的方法，所述方法包括种植烟草种子，所述烟草种子包括核酸分子，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；(b)包括与SEQ IDNO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及(c)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码，其中与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，所述烟草种子发芽成不包括或包括减少的打顶诱发的烟杈的烟草植物。
如本文所使用的，“种植”是指提供种子与适合于诱导种子发芽的条件。一方面，烟草种子在田地中种植。另一方面，烟草种子在温室中种植。另一方面，烟草种子在生长室中种植。另一方面，烟草种子在实验室中种植。另一方面，烟草种子在水培生长系统中种植。另一方面，烟草种子在盆中种植。一方面，烟草种子在户外种植。另一方面，烟草种子在室内种植。另一方面，烟草种子在生长培养基中种植。生长培养基的非限制性实例包含土壤、粘土、沙土、壤土、堆肥、粪肥、覆盖物及其组合。
设想了以下示例性非限制性实施例：
1.一种核酸分子，其包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：
(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；
(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及
(c)与异源核酸分子可操作地连接。
2.根据实施例1所述的核酸分子，其中所述启动子包括50个核苷酸到2450个核苷酸。
3.根据实施例1所述的核酸分子，其中所述启动子包括至少50个核苷酸。
4.根据实施例1所述的核酸分子，其中所述启动子包括至少500个核苷酸。
5.根据实施例1所述的核酸分子，其中所述启动子包括至少1000个核苷酸。
6.根据实施例1所述的核酸分子，其中所述启动子包括至少2000个核苷酸。
7.根据实施例1到6中任一项所述的核酸分子，其中所述启动子包括两个或更少糖抑制元件。
8.根据实施例1到6中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括至少一个糖抑制元件的缺失。
9.根据实施例1到6中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括至少两个糖抑制元件的缺失。
10.根据实施例1到9中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括腋芽up2元件的缺失。
11.根据实施例1到10中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括至少一个糖抑制元件和至少一个腋芽up2元件的缺失。
12.根据实施例1到11中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括至少一个芽休眠元件的缺失。
13.根据实施例1到12中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括与SEQ ID NO:113相比至少75个连续核苷酸的缺失。
14.根据实施例1到13中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括与SEQ ID NO:113相比至少100个连续核苷酸的缺失。
15.根据实施例1到14中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括与SEQ ID NO:113相比至少200个连续核苷酸的缺失。
16.根据实施例1到15中任一项所述的核酸分子，其中所述缺失包括与SEQ ID NO:113相比至少500个连续核苷酸的缺失。
17.根据实施例1到16中任一项所述的核酸分子，其中所述启动子包括与SEQ IDNO:257至少85％相同的核酸序列。
18.根据实施例1到17中任一项所述的核酸分子，其中所述异源核酸分子对至少一种腋芽降解产物进行编码。
19.根据实施例18所述的核酸分子，其中所述至少一种腋芽降解产物选自由小RNA分子和多肽组成的组。
20.根据实施例19所述的核酸分子，其中所述多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少70％相同或类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。
21.根据实施例19所述的核酸分子，其中所述小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少18个连续核苷酸。
22.一种烟草植物，其包括核酸分子，所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：
(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；
(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及
(c)与异源核酸分子可操作地连接，
其中当在相当的条件下生长时，与相同品种的对照烟草植物相比，所述烟草植物在打顶后不包括烟杈或包括减少的烟杈。
23.根据实施例22所述的烟草植物，其中所述启动子包括50个核苷酸到2450个核苷酸。
24.根据实施例22所述的烟草植物，其中所述启动子包括至少50个核苷酸。
25.根据实施例22所述的烟草植物，其中所述启动子包括至少500个核苷酸。
26.根据实施例22所述的烟草植物，其中所述启动子包括至少1000个核苷酸。
27.根据实施例22所述的烟草植物，其中所述启动子包括至少2000个核苷酸。
28.根据实施例22到27中任一项所述的烟草植物，其中所述启动子包括两个或更少糖抑制元件。
29.根据实施例22到27中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括至少一个糖抑制元件的缺失。
30.根据实施例22到27中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括至少两个糖抑制元件的缺失。
31.根据实施例22到30中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括腋芽up2元件的缺失。
32.根据实施例22到31中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括至少一个糖抑制元件和至少一个腋芽up2元件的缺失。
33.根据实施例22到32中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括至少一个芽休眠元件的缺失。
34.根据实施例22到33中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括与SEQ IDNO:113相比至少75个连续核苷酸的缺失。
35.根据实施例22到34中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括与SEQ IDNO:113相比至少100个连续核苷酸的缺失。
36.根据实施例22到35中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括与SEQ IDNO:113相比至少200个连续核苷酸的缺失。
37.根据实施例22到36中任一项所述的烟草植物，其中所述缺失包括与SEQ IDNO:113相比至少500个连续核苷酸的缺失。
38.根据实施例22到37中任一项所述的烟草植物，其中所述启动子包括与SEQ IDNO:257至少85％相同的核酸序列。
39.根据实施例22到38中任一项所述的烟草植物，其中所述启动子在腋分生组织中具有活性。
40.根据实施例22到39中任一项所述的烟草植物，其中所述启动子在所述打顶后至少7天在腋分生组织中具有活性。
41.根据实施例22到40中任一项所述的烟草植物，其中所述启动子在烟草植物幼苗中不具有活性。
42.根据实施例22到41中任一项所述的烟草植物，其中所述启动子在茎顶端分生组织中不具有活性。
43.根据实施例22到42中任一项所述的烟草植物，其中所述无烟杈或减少的烟杈在所述打顶后一周进行测量。
44.根据实施例22到43中任一项所述的烟草植物，其中所述无烟杈或减少的烟杈在所述打顶后四周进行测量。
45.根据实施例22到44中任一项所述的烟草植物，其中所述减少的烟杈包括少至少10％的烟杈。
46.根据实施例22到45中任一项所述的烟草植物，其中所述减少的烟杈包括所述烟杈的减少的干生物量、所述烟杈的减少的鲜重、所述烟杈的减少的长度、所述烟杈的减少的直径、减少的总烟杈数量或其任何组合。
47.根据实施例22到46中任一项所述的烟草植物，其中与所述对照烟草植物相比，所述烟草植物包括更高的叶产率质量。
48.根据实施例22到47中任一项所述的烟草植物，其中所述烟草植物的高度等于或大于所述对照植物的高度。
49.根据实施例22到48中任一项所述的烟草植物，其中所述烟草植物选自由以下组成的组：BU 64植物、CC 101植物、CC 200植物、CC 13植物、CC 27植物、CC 33植物、CC 35植物、CC 37植物、CC 65植物、CC 67植物、CC 301植物、CC 400植物、CC 500植物、CC 600植物、CC 700植物、CC 800植物、CC 900植物、CC 1063植物、科克尔176植物、科克尔319植物、科克尔371金植物、科克尔48植物、CU 263植物、DF911植物、加尔宝植物、GL 26H植物、GL338植物、GL 350植物、GL 395植物、GL 600植物、GL 737植物、GL 939植物、GL 973植物、GF157植物、GF 318植物、RJR 901植物、HB 04P植物、K 149植物、K 326植物、K 346植物、K 358植物、K394植物、K 399植物、K 730植物、NC 196植物、NC 37NF植物、NC 471植物、NC 55植物、NC 92植物、NC2326植物、NC 95植物、NC 925植物、PVH 1118植物、PVH 1452植物、PVH2110植物、PVH 2254植物、PVH 2275植物、VA 116植物、VA 119植物、KDH 959植物、KT 200植物、KT204LC植物、KY 10植物、KY 14植物、KY 160植物、KY 17植物、KY 171植物、KY 907植物、KY 907LC植物、KTY14 x L8 LC植物、小克里滕登植物、McNair 373植物、McNair 944植物、雄性不育KY 14x L8植物、窄叶马多尔植物、MS KY171植物、窄叶马多尔(phph)植物、MS窄叶马多尔植物、MS TND950植物、PD 7302LC植物、PD 7305LC植物、PD 7309LC植物、PD7312LC植物、PD 7318LC植物、PD 7319LC植物、MSTKS 2002植物、TKF 2002植物、TKF 6400植物、TKF 4028植物、TKF 4024植物、KT206LC植物、KT209LC植物、KT210LC植物、KT212LC植物、NC 100植物、NC 102植物、NC 2000植物、NC 291植物、NC 297植物、NC 299植物、NC 3植物、NC 4植物、NC 5植物、NC 6植物、NC7植物、NC 606植物、NC 71植物、NC 72植物、NC 810植物、NC BH 129植物、NC 2002植物、尼尔·史密斯·马多尔植物、牛津207植物、‘珀里克’植物、PVH03植物、PVH09植物、PVH19植物、PVH50植物、PVH51植物、R 610植物、R 630植物、R 7-11植物、R 7-12植物、RG 17植物、RG 81植物、RG H51植物、RGH 4植物、RGH 51植物、RS 1410植物、斯佩特168植物、斯佩特172植物、斯佩特179植物、斯佩特210植物、斯佩特220植物、斯佩特225植物、斯佩特227植物、斯佩特234植物、斯佩特G-28植物、斯佩特G-70植物、斯佩特H-6植物、斯佩特H20植物、斯佩特NF3植物、TI 1406植物、TI 1269植物、TN 86植物、TN86LC植物、TN 90植物、TN90LC植物、TN 97植物、TN97LC植物、TN D94植物、TN D950植物、TR(汤姆·罗森)马多尔植物、VA 309植物和VA 359植物。
50.根据实施例22到49中任一项所述的烟草植物，其中所述烟草植物选自由以下组成的组：烤烟品种烟草植物、浅色品种烟草植物、白肋品种烟草植物、弗吉尼亚品种烟草植物、马里兰品种烟草植物、加尔宝品种烟草植物、深色品种烟草植物、东方品种烟草植物和土耳其品种烟草植物。
51.根据实施例22到50中任一项所述的烟草植物，其中所述烟草植物是杂交烟草植物。
52.根据实施例22到51中任一项所述的烟草植物，其中所述烟草植物是雌性不育烟草植物。
53.根据实施例22到52中任一项所述的烟草植物，其中所述烟草植物是雄性不育烟草植物。
54.根据实施例53所述的烟草植物，其中所述雄性不育烟草植物是细胞质雄性不育烟草植物。
55.根据实施例22到54中任一项所述的烟草植物，其中所述异源核酸分子对至少一种腋芽降解产物进行编码。
56.根据实施例55所述的烟草植物，其中所述至少一种腋芽降解产物选自由小RNA分子和多肽组成的组。
57.根据实施例56所述的烟草植物，其中所述多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少70％相同或类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。
58.根据实施例56所述的烟草植物，其中所述小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少18个连续核苷酸。
59.一种根据实施例22到58中任一项所述的烟草植物的烟草叶。
60.一种烟草产品，其包括来自根据实施例22到58中任一项所述的烟草植物的经烘干的烟草材料。
61.一种烟草产品，其包括提取自根据权利要求22所述的烟草植物或其部分的生物碱。
62.根据权利要求60或61所述的烟草产品，其中所述生物碱选自由以下组成的组：尼古丁、降烟碱、新烟草碱和假木贼碱。
63.根据实施例60所述的烟草产品，其中所述烟草产品选自由以下组成的组：香烟、丁香烟、比迪烟、雪茄、小雪茄、非通气型香烟、通风凹槽过滤嘴香烟、烟斗烟草、鼻烟、嚼用烟草、湿无烟烟草、细切嚼用烟草、长切嚼用烟草和袋装嚼用烟草产品。
64.根据实施例60所述的烟草产品，其中所述烟草产品选自由以下组成的组：口香糖、片剂、锭剂和溶解条。
65.根据实施例60到64中任一项所述的烟草产品，其中所述烟草产品是无烟烟草产品。
66.根据权利要求61或62所述的烟草产品，其中所述烟草产品选自由以下组成的组：电子烟、电子吸烟器具、雾化蒸气产品和加热烟草产品。
67.根据实施例60或62到66中任一项所述的烟草产品，其中所述经烘干的烟草材料选自由以下组成的组：风干烟草材料、明火烘干烟草材料、晒干烟草材料和烤烟材料。
68.一种植物或种子，其包括核酸分子，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：
(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；
(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及
(c)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码。
69.根据实施例68所述的植物或种子，其中所述启动子包括50个核苷酸到2450个核苷酸。
70.根据实施例68所述的植物或种子，其中所述启动子包括至少50个核苷酸。
71.根据实施例68所述的植物或种子，其中所述启动子包括至少500个核苷酸。
72.根据实施例68所述的植物或种子，其中所述启动子包括至少1000个核苷酸。
73.根据实施例68所述的植物或种子，其中所述启动子包括至少2000个核苷酸。
74.根据实施例68到73中任一项所述的植物或种子，其中所述启动子包括与SEQID NO:257至少85％相同的核酸序列。
75.根据实施例68到73中任一项所述的植物或种子，其中所述植物或种子是烟草植物或烟草种子。
76.根据实施例68到74中任一项所述的植物，其中当在相当的条件下生长时，与对照植物相比，所述植物不包括或包括减少的烟杈。
77.根据实施例68到75中任一项所述的植物或种子，其中所述腋芽降解产物选自由小RNA分子和多肽组成的组。
78.根据实施例77所述的植物或种子，其中所述多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少70％相同或类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。
79.根据实施例77所述的植物或种子，其中所述小RNA分子包括与选自由SEQ IDNO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少18个连续核苷酸。
80.一种用于控制烟草植物中的打顶诱导的烟杈的方法，所述方法包括：
(a)将核酸分子引入到烟草细胞，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：
(i)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；
(ii)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及
(iii)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码；以及
(b)由所述烟草细胞再生烟草植物，其中与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，所述烟草植物不包括或包括减少的打顶诱导的烟杈。
81.根据实施例80所述的方法，其中所述引入包括农杆菌介导的转化。
82.根据实施例80所述的方法，其中所述引入包括电穿孔。
83.根据实施例80所述的方法，其中所述引入包括所述核酸分子的生物弹道递送。
84.根据实施例80到83中任一项所述的方法，其中所述烟草细胞是原生质体细胞。
85.根据实施例80到83中任一项所述的方法，其中所述烟草细胞是愈合组织细胞。
86.根据实施例80到83中任一项所述的方法，其中所述烟草细胞选自由以下组成的组：种子细胞、果实细胞、叶细胞、子叶细胞、下胚轴细胞、分生组织细胞、胚芽细胞、胚乳细胞、根细胞、芽细胞、茎细胞、花细胞、花序细胞、花柄细胞、花梗细胞、花柱细胞、柱头细胞、花托细胞、花瓣细胞、萼片细胞、花粉细胞、花药细胞、花丝细胞、子房细胞、胚珠细胞、果皮细胞和韧皮部细胞。
87.一种生长烟草植物的方法，所述方法包括种植烟草种子，所述烟草种子包括核酸分子，其中所述核酸分子包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：
(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；
(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及
(c)与异源核酸分子可操作地连接，所述异源核酸分子对腋芽降解产物进行编码，
其中与在相当的条件下生长的对照烟草植物相比，所述烟草种子发芽成不包括或包括减少的打顶诱导的烟杈的烟草植物。
88.根据实施例80到87中任一项所述的方法，其中所述启动子包括50个核苷酸到2450个核苷酸。
89.根据实施例80到87中任一项所述的方法，其中所述启动子包括至少50个核苷酸。
90.根据实施例80到87中任一项所述的方法，其中所述启动子包括至少500个核苷酸。
91.根据实施例80到87中任一项所述的方法，其中所述启动子包括至少1000个核苷酸。
92.根据实施例80到87中任一项所述的方法，其中所述启动子包括至少2000个核苷酸。
93.根据实施例80到92中任一项所述的方法，其中所述启动子包括与SEQ ID NO:257至少85％相同的核酸序列。
94.根据实施例80到93中任一项所述的方法，其中所述烟草植物选自由以下组成的组：BU 64植物、CC 101植物、CC 200植物、CC 13植物、CC 27植物、CC 33植物、CC 35植物、CC 37植物、CC 65植物、CC 67植物、CC 301植物、CC 400植物、CC 500植物、CC 600植物、CC700植物、CC 800植物、CC 900植物、CC 1063植物、科克尔176植物、科克尔319植物、科克尔371金植物、科克尔48植物、CU 263植物、DF911植物、加尔宝植物、GL 26H植物、GL 338植物、GL 350植物、GL 395植物、GL 600植物、GL 737植物、GL 939植物、GL 973植物、GF 157植物、GF 318植物、RJR 901植物、HB 04P植物、K 149植物、K 326植物、K 346植物、K 358植物、K394植物、K 399植物、K 730植物、NC 196植物、NC 37NF植物、NC 471植物、NC 55植物、NC92植物、NC2326植物、NC 95植物、NC 925植物、PVH 1118植物、PVH 1452植物、PVH 2110植物、PVH 2254植物、PVH 2275植物、VA 116植物、VA 119植物、KDH 959植物、KT 200植物、KT204LC植物、KY 10植物、KY 14植物、KY 160植物、KY 17植物、KY 171植物、KY 907植物、KY907LC植物、KTY14 x L8 LC植物、小克里滕登植物、McNair 373植物、McNair 944植物、雄性不育KY 14x L8植物、窄叶马多尔植物、MS KY171植物、窄叶马多尔(phph)植物、MS窄叶马多尔植物、MS TND950植物、PD 7302LC植物、PD 7305LC植物、PD 7309LC植物、PD 7312LC植物、PD 7318LC植物、PD 7319LC植物、MSTKS 2002植物、TKF 2002植物、TKF 6400植物、TKF 4028植物、TKF 4024植物、KT206LC植物、KT209LC植物、KT210LC植物、KT212LC植物、NC 100植物、NC 102植物、NC 2000植物、NC 291植物、NC 297植物、NC 299植物、NC 3植物、NC 4植物、NC5植物、NC 6植物、NC7植物、NC 606植物、NC 71植物、NC 72植物、NC 810植物、NC BH 129植物、NC 2002植物、尼尔·史密斯·马多尔植物、牛津207植物、‘珀里克’植物、PVH03植物、PVH09植物、PVH19植物、PVH50植物、PVH51植物、R 610植物、R 630植物、R 7-11植物、R 7-12植物、RG 17植物、RG 81植物、RG H51植物、RGH 4植物、RGH 51植物、RS 1410植物、斯佩特168植物、斯佩特172植物、斯佩特179植物、斯佩特210植物、斯佩特220植物、斯佩特225植物、斯佩特227植物、斯佩特234植物、斯佩特G-28植物、斯佩特G-70植物、斯佩特H-6植物、斯佩特H20植物、斯佩特NF3植物、TI 1406植物、TI 1269植物、TN 86植物、TN86LC植物、TN 90植物、TN90LC植物、TN 97植物、TN97LC植物、TN D94植物、TN D950植物、TR(汤姆·罗森)马多尔植物、VA 309植物和VA 359植物。
95.根据实施例80到93中任一项所述的方法，其中所述烟草植物选自由以下组成的组：烤烟品种烟草植物、浅色品种烟草植物、白肋品种烟草植物、弗吉尼亚品种烟草植物、马里兰品种烟草植物、加尔宝品种烟草植物、深色品种烟草植物、东方品种烟草植物和土耳其品种烟草植物。
96.根据实施例80到95中任一项所述的方法，其中所述烟草植物是杂交烟草植物。
97.根据实施例80到95中任一项所述的方法，其中所述烟草植物是雌性不育烟草植物。
98.根据实施例80到97中任一项所述的方法，其中所述烟草植物是雄性不育烟草植物。
99.根据实施例95所述的方法，其中所述雄性不育烟草植物是细胞质雄性不育烟草植物。
100.根据实施例80到99中任一项所述的方法，其中所述腋芽降解产物选自由小RNA分子和多肽组成的组。
101.根据实施例100所述的方法，其中所述多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少70％相同或类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。
102.根据实施例100所述的方法，其中所述小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少18个连续核苷酸。
实例
实例1.烟草植物的发育
表达载体p45-2-7(SEQ ID NO:112；图1)用作用于产生多个转化载体的主链。p45-2-7含有CsVMV启动子、NOS终止子和盒，所述盒包括与肌动蛋白2启动子和NOS终止子可操作地连接的卡那霉素选择标志物(NPT II)。通过农杆菌转化将包括所关注转基因的核酸载体引入到烟草叶盘中。参见例如Mayo等人,2006,《自然实验手册(Nat Protoc.)》1:1105-11和Horsch等人,1985,《科学(Science)》227:1229-1231。
使窄叶马多尔(NLM)烟草植物在MagentaTMGA-7盒中生长，并且切开叶盘并放入皮氏(Petri)培养皿中。通过在50mL离心管中以3500RPM将20mL细胞悬浮液离心10分钟来收集包括转化载体的根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)细胞。去除上清液，并将根瘤农杆菌细胞沉淀物重新悬浮于40mL液体重悬浮介质中。用#15剃刀刀片将避开中脉的烟叶切成八个0.6cm的盘，并且在皮氏培养皿中倒置放置。将穆拉希吉和斯科格(Murashige&Skoog(MS))薄层与B5维生素液体重悬浮介质添加到皮氏培养皿中，并且用细针均匀地戳叶盘。将约25mL根瘤农杆菌悬浮液添加到皮氏培养皿中，并且将叶盘在悬浮液中温育10分钟。
将叶盘转移到共培养皮氏培养皿(1/2MS培养基)中，将盘倒置与覆盖在共培养TOM培养基上的滤纸接触(MS培养基具有20g/L蔗糖；1mg/L吲哚-3-乙酸；以及2.5mg/L 6-苄基氨基嘌呤(BAP))。将皮氏培养皿用石蜡膜密封，然后在24摄氏度下在暗光(60-80mE/ms)下以18小时打开、6小时关闭的光周期温育三天。温育后，将叶盘转移到再生/选择TOM K培养基皮氏培养皿(TOM培养基加300mg/L卡那霉素)。将叶盘每两周在24摄氏度下在暗光下以18小时打开、6小时关闭的光周期传代培养到新鲜的TOM K培养基中，直到芽变得可切除为止。用镊子从叶上去除芽并且插入具有100mg/L卡那霉素的MS基础培养基中。将在具有100mg/L卡那霉素的MS基础培养基上的芽在24摄氏度下以高强度光照(6080mE/ms)以18小时打开、6小时关闭的光周期温育以诱导生根。
当含有芽和根两者的小植物生长到足够大(例如，达到MagentaTMGA-7盒高度的一半)时，将它们转移到土壤中。将已建立的幼苗转移到温室中进行进一步分析并结实。通过生长经修饰的植物(T0、T1、T2或后代)和对照植物至最后一遍田间操作阶段(layby stage)来进行分杈表型的评估。对照植物是尚未转化的NLM植物或已用空p45-2-7载体转化的NLM植物。对达到最后一遍田间操作阶段的植物进行手动打顶(去除茎顶端分生组织和周围组织)，并且在打顶后的特定时间点评估腋芽生长。通常在打顶(即，0小时)时、打顶后24小时(即，1天)、打顶后7-8天(即，1周)和/或14-15天(即，2周)进行观察。观察包括定性地检查腋芽生长的存在或缺乏和整体植物外观。观察还包括在打顶后的特定时间点定量地测量所有腋芽的鲜重和/或在打顶后的特定时间点测量所有腋芽外生长的长度。
实例2.腋芽优选性启动子的表达谱式
如通过引用并入本文中的美国专利申请公开2017/0260535中所指出的，如果腋芽降解产物以组织依赖性方式表达(例如，仅在腋芽中)，则腋芽降解产物的表达可以更好地用于减少或消除经修饰的植物中的烟杈外生长。SEQ ID NO:113先前被鉴定为具有腋芽优选性表达的启动子。参见US 2017/0260535。启动子P1的序列(SEQ ID NO:113)包括若干个顺式调节元件，其包含三个糖抑制元件、一个腋芽up2元件和三个芽休眠元件。参见图2和表2。SEQ ID NO:257与SEQ ID NO:113相同，除了从序列的5'端的100个核苷酸缺失外，所述核苷酸缺失包含一个糖抑制元件的缺失。参见图2。
表2.腋芽优选性启动子顺式元件
| <u>顺式调节元件名称</u> | <u>顺式调节元件核苷酸序列</u> |
| 芽休眠元件 | CACGTG(SEQ ID NO:258) |
| 糖抑制元件 | TTATCC(SEQ ID NO:259) |
| 腋芽生长Up2元件 | AAACCCTA(SEQ ID NO:260) |
通过用实例1中所述的相同质粒主链(p45-2-7)内的嵌合启动子::β-葡萄糖醛酸酶(GUS)报告基因转化烟草来分析SEQ ID NO:113和257的表达谱式。通过农杆菌介导的转化将嵌合基因引入到NLM品系中。遵循Crone等人,2001,《植物细胞环境(Plant CellEnviron.)》24:869–874的方法使用GUS染色来鉴定组织特异性启动子的表达。
简而言之，将来自包括候选启动子::GUS转化构建体的年轻幼苗的组织置于冰上的冷90％丙酮中。在采集所有样品时，将样品在室温下放置20分钟。将样品放回冰上并且从样品中去除丙酮。接下来，将染色缓冲液(0.2％Triton X-100；50mM NaHPO4，pH7.2；2mM亚铁氰化钾)添加到样品中。将X-Gluc添加到染色缓冲液中达到最终浓度2mM。从样品中去除染色缓冲液，并且加入具有X-Gluc的新鲜染色缓冲液。然后将样品在冰上在真空下浸润15到20分钟。在去除染色缓冲液之前，将样品在37摄氏度温育2-18小时。将样品在黑暗中通过乙醇系列(即，10％、30％、50％、70％、95％)洗涤，每次洗涤30分钟。最后，将样品转移到100％乙醇中。
使用亮场显微镜(英国剑桥莱卡Q500MC)以低放大率检查GUS阳性植物组织并且用数码相机拍照。图3和4中分别示出了使用SEQ ID NO:113和257的实验的结果。图4中示出了SEQ ID NO:257的两个独立的经修饰的品系。这些启动子序列可以用于排他性地或主要在腋芽内驱动所关注序列的表达，同时限制在其余植物中的表达。
指示由SEQ ID NO:113和257驱动的表达的GUS阳性表达集中在腋芽中。两个启动子在幼苗中似乎均不具有活性(图5)，并且SEQ ID NO:113在柱头或花药中不具有活性(图6)。在SEQ ID NO:113指导下的GUS表达在打顶后降低，这与观察到的通常由这些启动子调节的内源基因的基因表达谱式一致。然而，与SEQ ID NO:113相比，在SEQ ID NO:257指导下的GUS表达更强并且在更高水平下持续更长的时间段。值得注意的是，如图3中示出的，当由SEQ ID NO:113驱动时，即使在染色持续24小时时，打顶后7天在腋分生组织中观察到很少的GUS表达。相比之下，即使在染色持续仅5到7小时时，使用SEQ ID NO:257驱动GUS表达的两个经修饰的品系在打顶后7天仍示出强的活性(图4)。
实例3.驱动芽孢杆菌RNA酶表达的腋芽优选性启动子
如实例1和实例2所述产生两个构建体，其中SEQ ID NO:113或SEQ ID NO:257驱动芽孢杆菌RNA酶(SEQ ID NO:79)的表达。如实例1所述产生烟草植物。
包括驱动芽孢杆菌RNA酶的表达的SEQ ID NO:113的烟草植物(T0代)和对照烟草植物生长到最后一遍田间操作阶段，然后对植物打顶以去除茎顶端分生组织。在打顶时和打顶后两周观察到烟杈生长(图7)。与对照相比，表达SEQ ID NO:113::芽孢杆菌RNA酶构建体的植物表现出烟杈减少。但是，SEQ ID NO:113::芽孢杆菌RNA酶品系的T1代种子表现出不良发芽，阻止了进一步表型分析。
相比之下，包括驱动芽孢杆菌RNA酶的表达的SEQ ID NO:257的T1代种子表现出良好的发芽。包括驱动芽孢杆菌RNA酶的表达的SEQ ID NO:257的烟草植物(T1代)和对照烟草植物生长到最后一遍田间操作阶段，然后对植物打顶以去除茎顶端分生组织。在打顶时和打顶后四周观察到烟杈生长(图8)。与对照相比，表达SEQ ID NO:257::芽孢杆菌RNA酶构建体的植物表现出烟杈减少。与包括SEQ ID NO:113::芽孢杆菌RNA酶构建体的经修饰的植物相比，包括SEQ ID NO:257::芽孢杆菌RNA酶构建体的经修饰的植物表现出优越的烟杈减少和优越的T1种子发芽。
Claims (24)
1.一种核酸分子，其包括在腋芽组织中具有活性的启动子，其中所述启动子：
(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；
(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及
(c)与异源核酸分子可操作地连接。
2.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述启动子包括50个核苷酸到2450个核苷酸。
3.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述缺失包括以下的缺失：
(a)至少一个糖抑制元件；
(b)腋芽up2元件；
(c)至少一个芽休眠元件；或者
(d)(a)、(b)和(c)的任何组合。
4.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述启动子包括与SEQ ID NO:257至少85％相同的核酸序列。
5.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述异源核酸分子对至少一种腋芽降解产物进行编码。
6.根据权利要求5所述的核酸分子，其中所述至少一种腋芽降解产物选自由小RNA分子和多肽组成的组。
7.根据权利要求6所述的核酸分子，其中所述多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少70％相同或类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。
8.根据权利要求6所述的核酸分子，其中所述小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少18个连续核苷酸。
9.一种烟草植物，其包括核酸分子，所述核酸分子包括启动子，其中所述启动子：
(a)包括与SEQ ID NO:113具有至少75％同一性的序列，其中所述同一性基于并限制于所述序列与SEQ ID NO:113之间的一个或多个整个可比对区；
(b)包括与SEQ ID NO:113相比至少50个连续核苷酸的缺失；以及
(c)与异源核酸分子可操作地连接，
其中当在相当的条件下生长时，与相同品种的对照烟草植物相比，所述烟草植物在打顶(topping)后不包括烟杈(sucker)或包括减少的烟杈。
10.根据权利要求9所述的烟草植物，其中所述启动子包括50个核苷酸到2450个核苷酸。
11.根据权利要求9所述的烟草植物，其中所述缺失包括以下的缺失：
(a)至少一个糖抑制元件；
(b)腋芽up2元件；
(c)至少一个芽休眠元件；或者
(d)(a)、(b)和(c)的任何组合。
12.根据权利要求9所述的烟草植物，其中所述启动子包括与SEQ ID NO:257至少85％相同的核酸序列。
13.根据权利要求9所述的烟草植物，其中所述启动子在所述打顶后至少7天在腋分生组织中具有活性。
14.根据权利要求9所述的烟草植物，其中所述启动子在以下中不具有活性：
(a)烟草植物幼苗；
(b)茎顶端分生组织；或者
(c)(a)和(b)两者。
15.根据权利要求9所述的烟草植物，其中所述减少的烟杈包括所述烟杈的减少的干生物量、所述烟杈的减少的鲜重、所述烟杈的减少的长度、所述烟杈的减少的直径、减少的总烟杈数量或其任何组合。
16.根据权利要求9所述的烟草植物，其中所述烟草植物选自由以下组成的组：烤烟品种烟草植物、浅色(bright)品种烟草植物、白肋(Burley)品种烟草植物、弗吉尼亚(Virginia)品种烟草植物、马里兰(Maryland)品种烟草植物、加尔宝
品种烟草植物、深色(dark)品种烟草植物、东方(Oriental)品种烟草植物和土耳其(Turkish)品种烟草植物。
17.根据权利要求9所述的烟草植物，其中所述异源核酸分子对至少一种腋芽降解产物进行编码。
18.根据权利要求17所述的烟草植物，其中所述至少一种腋芽降解产物选自由小RNA分子和多肽组成的组。
19.根据权利要求18所述的烟草植物，其中所述多肽包括与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少70％相同或类似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、58、60、62、68、70、72、74、76、78、80、82、161-185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253和255。
20.根据权利要求18所述的烟草植物，其中所述小RNA分子包括与选自由SEQ ID NO:83-101组成的组的多核苷酸相同或互补的至少18个连续核苷酸。
21.一种烟草产品，其包括来自根据权利要求9所述的烟草植物的经烘干的烟草材料。
22.根据权利要求21所述的烟草产品，其中所述烟草产品选自由以下组成的组：香烟、丁香烟、比迪烟(bidi cigarette)、雪茄、小雪茄、非通气型香烟(non-ventilatedcigarette)、通风凹槽过滤嘴香烟(vented recess filter cigarette)、烟斗烟草、鼻烟、嚼用烟草、湿无烟烟草、细切嚼用烟草、长切嚼用烟草和袋装嚼用烟草产品。
23.根据权利要求21所述的烟草产品，其中所述烟草产品选自由以下组成的组：口香糖、片剂、锭剂和溶解条。
24.根据权利要求21所述的烟草产品，其中所述经烘干的烟草材料选自由以下组成的组：风干烟草材料、明火烘干烟草材料、晒干烟草材料和烤烟材料。
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