CN108473492B - 用于医学应用的一种1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶的衍生物的新型结晶盐形式 - Google Patents

用于医学应用的一种1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶的衍生物的新型结晶盐形式 Download PDF

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Abstract

本发明涉及有机化学、药理学和医学，并且涉及使用3‑(1,2,4‑三唑并[4,3‑a]吡啶‑3‑基乙炔基)‑4‑甲基‑N‑(4‑((4‑甲基哌嗪‑1‑基)甲基)‑3‑三氟甲基苯基)苯甲酰胺的新型盐形式预防和治疗与多种激酶(特别是Abl激酶)的活性破坏有关的人和动物的疾病，例如，诸如白血病、急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、乳腺癌、非小细胞肺癌、胃肠道间质瘤、卵巢癌、淋巴瘤的疾病。具有抑制激酶(特别是Abl激酶)的活性的能力的该化合物与甲磺酸的盐(式(I))或其水合物、溶剂化物以及多晶型变体(polymorphic modification)。本发明还涉及包含治疗有效量的本发明的盐的药物组合物，涉及用于制备本发明的结晶盐的方法，以及用于治疗受试者的肿瘤疾病的方法。

Description

用于医学应用的一种1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶的衍生物的 新型结晶盐形式
相关申请的交叉引用
本申请要求于2016年4月18日提交的俄罗斯专利申请RU2016114904的权益，其通过引用整体并入本文。
技术领域
本公开涉及有机化合物化学、药理学和医学，特别涉及化合物的盐形式，以及涉及与该化合物的游离碱相比具有改进的物理化学性质和高功效和安全性的化合物盐的结晶(多晶型)形式。
背景技术
为了药物生产的目的，使药物物质处于方便用于治疗和处理的形式是重要的。不仅从创造商业上可行的生产工艺的观点来看这是重要的，而且从随后生产含有该活性物质的药物的观点来看这也是重要的。此外，还有非常重要的因素，例如活性成分的化学稳定性、它们的固体形式的稳定性以及它们在储存期间的稳定性。药物物质和含有这些物质的药用组合物应具有贮存可接受的时间段而不会明显改变其活性物质的物理化学特性(如化学组成、密度、吸湿性和溶解度)的能力。在这方面，使用无定形形式的物质作为药物通常是不希望的。例如，无定形形式具有不稳定的物理化学特性，例如溶解度、吸湿性、易碎性、结块等。因此，希望有药物作为其一种或多种结晶且稳定的形式来产生商业上可行且药学上可接受的药用组合物。
包括药物活性化合物的固体物质通常可以以多于一种结晶形式存在；这种现象被称为多晶型。当化合物可以结晶为多个不同的固相(其在它们的晶体堆积方面彼此不同)时，发生多晶型现象。通常，多晶型变体(polymorphous modification)(多晶型物)具有不同的物理特性，包括溶解度以及物理和/或化学稳定性。一种药用物质的不同固体盐形式和同一药用物质，以及此外，一种固体盐形式的不同多晶型物和同一固体盐形式可以在释放药物物质的速率上不同，以及在盐形式的固态的稳定性上不同，以及在它们用于生产药物药剂的适合性上不同。
选择用于相应药物物质的生产的合适的盐形式是药物开发的临床前阶段的重要事件。改变活性药物物质的盐形式是改变该物质的化学和生物特性而不改变该物质本身的化学结构的一种方法。特定盐形式的选择可以深深影响该药物的物理化学性质(例如溶解速率、溶解度、稳定性和吸湿性)。用药物物质的一种盐形式替换另一种盐形式可以改变药物的功效和/或安全性，这对于最佳药物成分的大规模生产而言是特别重要的考虑。然而，没有可靠的方法来准确预测改变活性药物的盐形式对其安全性和/或其生物活性的影响。此外，即使研究活性药物物质的不同盐形式的物理化学性质，也不允许本领域技术人员明确地鉴定出具有期望的药代动力学性质、功效和安全性的盐形式。简而言之，没有可靠的方法来预测特定盐类型对药物药剂中原始化合物行为的影响(Berge等,PharmaceuticalSalts,JournalPharm.Sci.,1977,第.66卷,1号；Verbeeck等Generic substitution:Theuse of medicinal products containing different salts and implications forsafety and efficacy European Journal Pharm.Sci.,28,2006,1-6.)。
药代动力学参数是定义固体盐形式(或特定多晶型变体)用作药物药剂的适用性的最重要特征之一。取决于盐形式和其多晶型变体的组成，药物在人类和动物血液中的平均日浓度和平均最大浓度可以大幅变化。通常，在水中具有较高溶解度的药物物质盐形式是那些在人类和动物的血液和组织中提供较高的最大药物浓度的形式。由于动物血液中较高的最大药物浓度通常与药物引起的毒性作用的增加相关联，因此改变药物物质的盐形式可以导致药物安全性特征的变化。
对于口服药物而言固体盐形式通常是优选的，因为这些盐形式特别倾向于显示出最理想的物理特性。在碱性药物物质的情况下，盐形式可以通过与合适的酸反应获得。如上所述，不同的酸在其对相应的盐形式的性质(例如储存过程中的稳定性、容易的生产和纯化过程、药代动力学参数等)的影响方面不同，并且不能以令人满意的准确性来预测这些性质。例如，一些盐在环境温度下是固体物质，而其他盐是液体、粘性油或树脂。此外，一些盐形式在极端条件下耐受热和光的影响，而其他盐形式在温和的多的条件下容易分解。当药物分子具有多于一个碱性部位时，出现额外的不确定性，导致多种潜在的与给定的酸的盐形式。因此，开发用于药物组合物的碱性药物物质的合适盐形式是非常重要的过程，其远非总是可预测的。
蛋白激酶代表了参与调节关键细胞过程的重要蛋白家族。蛋白激酶的活性受损可导致不同的疾病。治疗与受损的蛋白激酶活性有关的疾病的潜在方法是使用低分子量化学化合物来抑制激酶活性。批准用于临床实践的此类抑制剂的实例包括：伊马替尼、尼罗替尼、达沙替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼、吉非替尼、厄洛替尼和克里唑替尼。目前许多蛋白激酶抑制剂候选药物正处于临床试验阶段或处于临床前开发阶段。
BCR-ABL是融合蛋白，是由在染色体9和染色体22(费城染色体)之间相互易位而形成的杂合基因BCR-ABL1的产物。BCR-ABL是对致癌细胞转化负责的组成性激活酪氨酸激酶(即癌蛋白)。这种酪氨酸激酶的持久性活性使得细胞能够不受生长因子的影响而分裂并导致过度增殖。BCR-ABL是造成大多数慢性髓性白血病病例和20-50％的成人急性B-细胞淋巴细胞白血病病例发展的关键致病因子。因此，抑制BCR-ABL杂合蛋白的激酶活性是用于对抗不同肿瘤疾病，并且特别是慢性髓性白血病的前瞻性策略。
国际专利申请PCT/RU2012/000423(WO/2012/173521)描述了1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶的衍生物，它们是Abl激酶及其突变体形式以及其他治疗上重要的激酶的高效和选择性的抑制剂。所描述的化合物包括3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺。
通过体外和体内研究，已经显示WO/2012/173521中公开的化合物具有用作治疗肿瘤疾病，特别是人和动物的急性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、肝细胞癌、非小细胞肺癌以及胃肠道间质瘤的药物的潜力。
发明内容
本公开提供了甲磺酸与3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基))甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐。
在一些具体实施方式中，所述盐为3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐。
在一些具体实施方式中，所述盐为结晶的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱基本上如图29所示。
在一些具体实施方式中，所述盐通过在220℃具有吸热转变的DSC曲线表征。
在一些具体实施方式中，所述盐为3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的多晶型变体I。
在一些具体实施方式中，所述盐包含空间群P21/n的单斜晶体。
在一些具体实施方式中，所述盐包含单斜晶体，所述单斜晶体具有通过使用CuKα1辐射、在25±5℃的粉末X射线衍射确定的晶胞参数
Figure GDA0002273044290000031
以及β＝108.9±0.1°。
在一些具体实施方式中，所述盐包含单斜晶体，所述单斜晶体具有通过使用CuKα1辐射、在25±5℃的粉末X射线衍射确定的晶胞参数
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有衍射角值(2θ)的峰，所述有衍射角值(2θ)的峰包括选自16.9、17.2、17.4、18.7、和/或20.8的相对强度为约20％或更大的至少1个峰、至少2个峰、至少3个峰或者至少2个、3个或4个峰。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有16.9、17.2、17.4、18.7、和/或20.8的衍射角值(2θ)的峰，每个峰具有约20％或更大的相对强度。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有18.7的衍射角值(2θ)的峰作为具有最高相对强度的峰。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个有选自以下的衍射角值(2θ)的峰：7.2、11.8、12.5、13.4、14.5、16.2、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、21.4、23.2、24.1、24.5、25.4和27.1。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：7.2、11.8、12.5、13.4、14.5、16.2、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、21.4、23.2、24.1、24.5、25.4和27.1。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有至少4个、5个、6个、7个或8个有选自以下的衍射角值(2θ)的峰：11.8；14.5；16.2；16.9；17.2；17.4；18.7；20.8和23.0。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：11.8；14.5；16.2；16.9；17.2；17.4；18.7；20.8和23.0。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有选自以下的衍射角值(2θ)的至少3个、4个、5个或6个峰(或至少4个、至少5个、至少6个峰)：14.5；16.9；17.2；17.4；18.7；和20.8。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：14.5；16.9；17.2；17.4；18.7；和20.8。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱基本上如图49(a)所示。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱基本上如表6中所示的。
在一些具体实施方式中，所述盐为3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的多晶型变体II。
在一些具体实施方式中，所述盐包含空间群P21/c的单斜晶体。
在一些具体实施方式中，所述盐包含单斜晶体，所述单斜晶体具有通过使用CuKα1辐射在25±5℃的粉末X射线衍射确定的晶胞参数和
Figure GDA0002273044290000052
Figure GDA0002273044290000053
以及β＝117.8±0.1。
在一些具体实施方式中，所述盐包含单斜晶体，所述单斜晶体具有通过使用CuKα1辐射在25±5℃的粉末X射线衍射确定的晶胞参数
Figure GDA0002273044290000054
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有衍射角值(2θ)的峰，所述有衍射角值(2θ)的峰包括至少3个、4个、5个或6个选自11.9、14.7、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0和22.6的相对强度为约20％或更大的峰。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有选自17.6或21.2的衍射角值(2θ)的峰作为具有最高相对强度的峰。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有至少3个、4个、5个、6个、7个或8个有选自以下的衍射角值(2θ)的峰：7.3、11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0、22.6和26.1。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有选自以下的衍射角值(2θ)的峰：7.3、11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0、22.6和26.1。
在一些具体实施方式中，所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有以下衍射角值(2θ)的至少3个峰(例如至少4个、5个或6个)作为特征峰：17.4；17.6；19.4；19.7；21.2；22.0；22.6和25.9。
还提供了一种制备结晶的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的方法，包括：
(1)使3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺与甲磺酸反应以形成3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐；以及
(2)冷却溶解在丙酮和乙醇(约5:1v/v)中的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的溶液至约10℃的温度以形成结晶盐。
此外，提供了通过这种方法制备或能够获得的结晶的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐。
进一步提供了制备结晶的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的方法，包括：
(1)使3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺与甲磺酸反应以形成3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐；以及
(2)浓缩溶解在丙酮和乙醇(约5:1v/v)中的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的溶液，然后冷却所述溶液至约20-25℃的温度以形成结晶盐。
还提供了通过这种方法制备或能够获得的结晶的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐。
在一些具体实施方式中，所述盐是基本上分离的。在一些具体实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺作为如以上定义的形式的单甲磺酸盐或其任何具体实施方式存在。
还提供了组合物，其包含如以上定义的盐或其任何具体实施方式以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
还提供了一种治疗需要这种治疗的受试者的肿瘤疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如以上定义的盐或其任何具体实施方式、包含此类盐的组合物。
在一些具体实施方式中，所述肿瘤疾病是急性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、肝细胞癌、非小细胞肺癌或胃肠道间质瘤。
附图说明
图1.3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐以100mg的规模结晶。
图2.加入甲基叔丁基醚之后，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐以100mg的规模结晶。
图3.游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-194-1(多晶型变体I)；
b)样品—HAL-G-194-2(多晶型变体II)。
图4.通过偏光显微术获得的游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的样品晶体(样品—HAL-G-194-1，多晶型变体I)的照片。
图5.游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的1H核磁共振波谱。
a)样品—HAL-G-194-1(多晶型变体I)；
b)样品—HAL-G-194-2(多晶型变体II)。
图6.游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的样品(样品-HAL-G-194-1，多晶型变体I)的DSC(差示扫描量热法)曲线。
图7.游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的样品(样品-HAL-G-194-1，多晶型变体I)的TGA(热重分析)曲线。
图8.示出通过重量吸湿分析的游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺(样品-HAL-G-194-1，多晶型变体I)的吸湿性的图。
图9.盐酸和游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-194-1(游离碱，多晶型变体I)；
b)样品—HAL-G-196-2(HCl盐，多晶型变体I)；
c)样品—HAL-G-196-3(HCl盐，多晶型变体II)。
图10.盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的1H核磁共振波谱。
a)样品—HAL-G-196-2(多晶型变体I)；
b)样品—HAL-G-196-3(多晶型变体II)。
图11.酸盐和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-2，多晶型变体I)的TGA曲线。
图12.酸盐和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品的DSC曲线。
a)样品—HAL-G-196-2(多晶型变体I)；
b)样品—HAL-G-194-3(多晶型变体II)。
图13.示出通过重量吸湿分析的盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-2，多晶型变体I)的吸湿性的图。
图14.硫酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(样品-HAL-G-96-6)的X射线粉末衍射图谱。
图15.硫酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-6)的1H核磁共振谱。
图16.硫酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-6)的DSC曲线。
图17：氢溴酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-196-7(多晶型变体I)；
b)样品—HAL-G-196-8(多晶型变体II)。
图18.氢溴酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品的1H核磁共振波谱。
a)样品—HAL-G-196-7(多晶型变体I)；
b)样品—HAL-G-196-8(多晶型变体II)。
图19.氢溴酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的DSC曲线。
a)样品—HAL-G-196-7(多晶型变体I)；
b)样品—HAL-G-196-8(多晶型变体II)。
图20.氢溴酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-7，多晶型变体I)的TGA曲线。
图21.磷酸和游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-196-13；
b)样品—HAL-G-198-3(HAL-G-196-13的去溶剂化后)；
图22.磷酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-13)的1H核磁共振波谱。
图23.磷酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-13)的DSC曲线。
图24.磷酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-13)的TGA曲线。
图25.酒石酸和游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-196-16；
b)样品—HAL-G-198-1(HAL-G-196-16的去溶剂化后)。
图26.酒石酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-16)的1H核磁共振波谱。
图27.酒石酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-16)的DSC曲线。
图28.酒石酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-16)的TGA曲线。
图29.甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-196-19；
b)样品—HAL-G-196-20；
c)样品—HAL-G-196-21。
图30.通过偏光显微术获得的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品晶体(样品-HAL-G-196-21)的照片。
图31.甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-19)的1H核磁共振波谱。
图32.甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-21)的DSC曲线。
图33.4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-196-23；
b)样品—HAL-G-196-24。
图34.通过偏光显微术获得的4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的晶体(样品-HAL-G-196-24)的照片。
图35.4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-24)的1H核磁共振波谱。
图36.4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-24)的DSC曲线。
图37.示出通过重量吸湿分析的4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-24)的吸湿性的图。
图38.苹果酸和游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-196-25；
b)样品—HAL-G-198-26。
图39.苹果酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-25)的1H核磁共振波谱。
图40.苹果酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-25)的DSC。
图41.苹果酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-25)的TGA曲线(热重分析)。
图42.富马酸和游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)样品—HAL-G-196-28；
b)样品—HAL-G-198-29。
图43.富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品-HAL-G-196-29)的1H核磁共振波谱。
图44.富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品的DSC曲线。
a)样品—HAL-G-196-28；
b)样品—HAL-G-198-29。
图45.富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品的TGA曲线。
a)样品—HAL-G-196-28；
b)样品—HAL-G-198-29。
图46.通过偏光显微术获得的富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的晶体(样品-HAL-G-196-29)的照片。
图47.甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体I)的样品的1H和13С核磁共振波谱：
a)1H-NMR波谱(Bruker DRX 500，13400，500.13MHz，DMSO-d 6)；
b)13C-NMR波谱(Bruker DRX 500，125.76MHz，DMSO-d 6)。
图48.甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体II)的样品的1H和13С核磁共振波谱：
a)1H-NMR波谱(Bruker DRX 500，13，500.13MHz，DMSO-d 6)；
b)13C-NMR波谱(Bruker DRX 500，13，125.76MHz，DMSO-d 6)。
图49.甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱。
a)多晶型变体I；
b)多晶型变体II。
图50.甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的晶胞的全视图。
a)多晶型变体I；
b)多晶型变体II。
图51.示出游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺以及甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的多晶型变体的溶解的动力学的图。
图52.单次口服施用后C57BL/6小鼠血浆中3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的浓度的平均值。基于从三只动物获得的个体数据确定每个时间点的平均值。
a)以50mg/kg的剂量口服施用游离碱；
b)以59mg/kg甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体I)的剂量(相当于50mg/kg游离碱的剂量)口服施用该盐。
具体实施方式
本公开描述了激酶抑制剂的新型盐形式(特别是Abl激酶抑制剂的新型盐形式)，其含有药理学上可接受的平衡离子，具有结晶性、在水中的高溶解度、和恒定组成，允许生产和纯化工艺的放大，并且在临床应用方面对于治疗与不同激酶受损的活性相关的疾病是有用的。
技术成果是开发和生产激酶抑制剂的新型盐形式(特别是Abl激酶抑制剂的新型盐形式)，包括其新型多晶型变体(结晶形式)，所述新型多晶型变体具有：在水中的高溶解度；对Abl激酶(以及该酶的临床上重要的突变体形式)的高抑制活性；高的平均日浓度；以及在人类和动物血液中的高AUC参数值(浓度与时间的曲线下面积)；以及治疗与蛋白激酶受损的活性有关的疾病(特别是急性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、肝细胞癌、非小细胞肺癌和胃肠道间质瘤)的良好的安全性和功效特征。
技术成果还是激酶抑制剂的新型盐形式的开发和生产，其特征在于生产和纯化工艺容易放大、使用低毒性溶剂以及用最少量的产品纯化阶段得到高纯度终产物。
表明的技术成果是通过以下实现的：获得具有抑制蛋白激酶(特别是Abl激酶)的酶活性能力的甲磺酸和碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐：
Figure GDA0002273044290000121
或其水合物、溶剂化物、以及多晶型变体。
本发明的一个优选实施方式是甲磺酸和碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的多晶型变体，其为结晶相，所述结晶相具有：通过使用波长为
Figure GDA0002273044290000122
的CuKα1辐射的在25±5℃的粉末X射线衍射方法获得的如下晶胞参数：
Figure GDA0002273044290000123
β＝108.9±0.1°、
Figure GDA0002273044290000124
空间群P21/n；以及在德拜X射线粉末图谱(Debye X-ray powerpattern)中具有衍射角值(2θ)3.6、7.2、11.4、11.8、12.5、13.4、14.5、16.2、16.5、16.9、17.2、17.4、17.8、18.1、18.4、18.7、20.8、21.4、22.7、22.8、23.0、23.2、23.4、24.1、24.5、25.4、25.9、26.0、26.2、26.7、27.1、28.4、33.0、33.3和36.7的特征峰。
本发明的另一个优选实施方式是甲磺酸和碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的多晶型变体，其为结晶相，所述结晶相具有：通过使用波长为
Figure GDA0002273044290000125
的CuKα1辐射的在25±5℃的粉末X射线衍射方法获得的如下晶胞参数：
Figure GDA0002273044290000126
和
Figure GDA0002273044290000127
β＝117.8±0.1、
Figure GDA0002273044290000128
空间群P21/c；以及在德拜X射线粉末图谱中具有衍射角值(2θ)7.1、7.3、11.6、11.8、12.7、12.9、13.1、14.2、14.6、16.9、17.2、17.4、17.6、18.1、18.3、19.4、19.7、20.8、21.2、21.6、22.0、22.5、22.6、23.2、23.4、23.8、24.9、25.1、25.6、25.9、26.1、26.6、28.3、28.8、29.6和30.1的特征峰。
表明的技术成果还通过以下实现：使用根据本发明的盐或其水合物、溶剂化物或多晶型变体以获得用于预防和/或治疗人或动物中的与激酶活性相关的紊乱的药物组合物。在一些实施方式中，激酶选自包括以下的组：受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，特别是Abl激酶、c-Src、Yes、Lyn、Lck、EGFR1(Flt-1)、VEGFR2、VEGFR3、PDGFR激酶。
本发明还包括通过将根据本发明的药物组合物引入体内来预防和/或治疗身体内与激酶活性相关的紊乱的方法。这类与激酶活性相关的紊乱可以包括肿瘤、慢性病、炎症和/或其他疾病，特别是急性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、肝细胞癌、非小细胞肺癌和胃肠道间质瘤。在一些实施方式中，所治疗的受试者可以是人类或动物。在一些实施方式中，动物可以是猫、犬或马。
表明的技术成果通过获得根据本发明的结晶化合物的方法来实现，该方法包括下列阶段：
a.将甲磺酸或其水合物(在有机溶剂中)的溶液引入到碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺在有机溶剂或溶剂混合物中的悬浮液或溶液中。甲磺酸或其水合物的溶液的引入可以在室温进行或者伴随各组分的加热或冷却进行；本领域技术人员也可以使用混合试剂的相反顺序。
b.从溶液中结晶所得到的盐。
c.从溶剂中分离盐晶体。
在一些实施方式中，在阶段(a)中使用的作为用于悬浮3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的介质的溶剂可以是丙酮。
在实施方式中，在阶段(a)中用来制备甲磺酸或其水合物的溶液的溶剂可以是乙醇。
在一些实施方式中，可以在阶段(c)之后进行附加的盐的重结晶。
在一些其它的实施方式中，在从溶液获得盐的情况中，执行引发晶体形成的附加步骤。可以通过将少量相同的盐引入到溶液中或通过其他方式来实现晶体形成的引发。
在特定情况下，本领域技术人员可以附加地通过如下方式应用纯化3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的碱的步骤：用硫酸、盐酸、苯磺酸、4-甲基-苯磺酸、2-甲基-苯磺酸、甲磺酸、柠檬酸、磷酸、三氟乙酸、4-硝基-苯磺酸、四氟硼酸、六氟磷酸或另一种酸将所述碱转化成盐，并且随后使用该盐来获得碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺，其被用于获得与甲磺酸的盐。
游离碱3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺是已知的并且在专利WO/2012/173521中进行了描述。
定义(术语)
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员在考虑到本公开提供的上下文时所通常理解的相同的含义。
除非另有明确说明，对于术语“例如”和“诸如”及其语法上的等同词、短语“并且没有限制”，理解为遵循(follow)。
除非上下文另有明确规定，单数形式“一个(a、an)”和“该(the)”包括复数的指示物。
术语“约(about)”意思是“大约(approximately)”(例如，所示值的上或下大约10％)。
当提及温度使用时，术语《℃》意指摄氏温标(the centigrade scale or theCelsius temperature scale)。
术语《IC50》是指足以实现激酶活性的半最大抑制的测试化合物的浓度。
本文中使用的术语《调节》是指激酶催化活性的改变。具体而言，调节是指激酶催化活性的激活或抑制。
术语《多晶型变体》是指由于晶格中分子的不同排列和/或构象而具有几种不同形式的物质的固相。多晶型变体可能具有不同的化学和物理性质。术语《多晶型变体》包括化合物的溶剂化物(即含有溶剂或水的结晶形式)以及不同的非溶剂化结晶形式。
术语《溶剂化物》用于描述含有根据本发明的化合物和一个或多个药学上可接受的溶剂(例如乙醇)分子的分子复合物。当溶剂是水时使用术语《水合物》。
术语《粉末X射线衍射图谱》或《PXRD图谱》指的是实验观察到的衍射图或来源于该衍射图的参数。通常，粉末X射线衍射图谱通过峰的位置(横坐标)和峰的强度(纵坐标)表征。术语“峰强度”是指在给定的X射线衍射图谱中信号的相对强度。影响峰的相对强度的因素是(1)样品的厚度和(2)择优取向(即由结晶颗粒的非随机取向产生的效应)。本文使用的术语“峰位置”是指在粉末衍射实验中测量和观察到的X射线反射的位置。峰位置与晶胞的尺寸直接相关。由它们各自位置标识的峰是从甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的多种多晶型形式(polymorphic forms)的衍射图谱中获得的。
《2θ值》或《2θ》指峰位置(以度为单位)，其是从实验性X射线衍射数据得出的，并且基本上是粉末X射线衍射中的横坐标测量单位。一般来说，在X射线衍射实验中，入射光束以θ的角度(相对于法线)落在样品上，并以2θ的角度(相对于入射光束)反射。应当注意的是，本申请中所有提及特定多晶型形式(polymorph forms)的特定2θ值都假定2θ值是使用相同质量的衍射仪并且在本文概述的实验条件下测量的。用我们的衍射仪和概述的条件，我们评估2θ精度为±0.1-0.2度。
术语激酶的《异常活性》是指在没有病理的情况下，与细胞中激酶活性的基本水平实质性不同的激酶活性。异常活性可以由激酶表达水平的改变、导致激酶活化的过程的受损、涉及降解途径的调节的紊乱或其他因素引起。
术语《辅助物质》是指药物产品的组合物中包括或者在药物生产过程中使用以实现药物产品的所需物理化学性质的任何药学上可接受的无机或有机来源的物质。
术语《AUC》是指表征在所有观察次数期间血浆中的药物的总浓度的药代动力学参数。从数学的角度来看，AUC被定义为血浆中的药物浓度相对于时间的图(药代动力学曲线)的从0到∞的积分，并且等于由药代动力学曲线和坐标轴限定的面积。
在本公开中可能会使用下列缩写：
Figure GDA0002273044290000141
(埃)；aq.(水)；AUC(曲线下面积)；br(宽峰)；cryst.(结晶的)；d(双峰)；dd(双重双峰)；DCM(二氯甲烷)；DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；DMSO(二甲基亚砜)；DSC(差示扫描量热法)；eq.(等同物)；Et(乙基)；EtOAc(乙酸乙酯)；Fig.(图)；g(克)；h(小时)；HCl(盐酸)；HPLC(高效液相色谱)；Hz(赫兹)；J(耦合常数)；kg(千克)；L(升)；m(多峰)；M(摩尔的)；MHz(兆赫兹)；MS(质谱)；Me(甲基)；MeCN(乙腈)；MeOH(甲醇)；mg(毫克)；min.(分钟)；mL(毫升)；mmol(毫摩尔)；MTD(最大耐受剂量)；N(正常)；NaHCO3(碳酸氢钠)；NaOH(氢氧化钠)；Na2SO4(硫酸钠)；NH4Cl(氯化铵)；nm(纳米)；nM(纳摩尔的)；NMR(核磁共振波谱法)；NMT(不超过)；Ph.Eur.(欧洲药典)，PPTS(对甲苯磺酸吡啶盐)；RP-HPLC(反相高效液相色谱法)；rt(室温)；s(单峰)；t(三峰或叔)；tert(叔)；TGA(热重分析)；tt(三重三峰)；t-Bu(叔丁基)；THF(四氢呋喃)；μg(微克)；μL(微升)；μM(微摩尔的)；wt％(重量百分比)，w/v(重量/体积比—以g/100mL计的重量)。
通过实施发明来客观实现技术成果的可能性通过实施例中所示出的可靠数据来确认，这些实施例含有在根据本领域所接受的方法进行的研究过程中获得的实验结果。可以通过附图来说明本发明的特征。
本领域技术人员应该理解的是，实施例和包括在专利申请中的所有实例不是限制性的，并且仅示出用于说明本发明。
治疗应用
本文所述的盐和其多晶型变体可通过将治疗有效量的根据本发明的盐施用到需要治疗的受试者的身体中来用于治疗。术语“治疗有效量”意指在研究人员、兽医、医师或其他临床医师正在探索的治疗受试者中引起生物或医学反应的化合物的量。取决于年龄、体重和普通患者的状况、疾病的严重程度、药物施用的程序、治疗与其他药物的组合等，化合物的精确需要量可以在受试者与受试者之间变化。
术语“治疗”(“treating”or“treatment”)是指下列中的一种或多种：(1)抑制疾病；例如抑制正在经历或显示出该疾病(disease)、状况(condition)或紊乱(disorder)的病理或症状的个体中的疾病、状况或紊乱(即阻止病理和/或症状的进一步发展)；和(2)改善疾病；例如改善正在经历或显示出该疾病、状况或紊乱的病理或症状的个体中的疾病、状况或紊乱(即逆转病理和/或症状)，例如降低疾病的严重程度。在一个具体实施方式中，治疗包括预防或降低发展疾病的风险；例如预防或降低可能倾向于患疾病、状况或紊乱但尚未经历或显示出疾病的病理或症状的个体中发展疾病、状况或紊乱的风险。
可互换使用的术语“个体”或“患者”是指(例如，作为治疗的受试者)任何哺乳动物，例如小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、犬、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，并且最优选人类。
短语“治疗有效量”是指在研究人员、兽医、医师或其他临床医师正在探索的组织、系统、动物、个体或人中引发生物学或医学反应的活性化合物或药剂的量。
根据本发明的盐或其多晶型变体或含有该盐或其多晶型变体的药物组合物可以以任何量和任何有效治疗或预防疾病的方式引入患者体内。
在将盐或其多晶型变体与合适的药学上可进入的载体以期望的剂量混合后，可将药物组合物经口、肠胃外、局部等引入人体或动物内。
盐或其多晶型变体的施用可以一天、一周(或任何其他时间间隔)进行一次或几次或不时地进行。此外，可以在一段时间(例如2-10天)内每天施用该化合物，接着在一段时间(例如1-30天)内不进行化合物施用。
在这种情况下，当根据本发明的盐或其多晶型变体被用作联合治疗方案的一部分时，联合治疗的每种组分的剂量在治疗所需的时间段内被施用。构成联合治疗的化合物可以一次(作为所有组分的一个剂量)或几次(作为多个组分的多个单独剂量)施用。
本文提供了治疗患者的细胞增殖紊乱的方法。该方法包括向患者施用治疗有效量的在本公开中描述的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的结晶盐和多晶型形式，或其任何具体实施方式。
“细胞增殖紊乱”意指其中机体以反常地加速的速率产生细胞的紊乱，并且可以包括癌症。
癌症的非限制性实例包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠直肠癌、宫颈癌、胃肠癌、泌尿系统癌症、头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌和睾丸癌。
更具体地，可以通过本文所描述的化合物、组合物和方法治疗的癌症包括但不限于下列：
1)神经系统癌症，包括例如：头颅的癌症，例如骨瘤、血管瘤、肉芽肿瘤、黄瘤和畸形性骨炎；脑膜的癌症，例如脑膜瘤、脑膜肉瘤和神经胶质瘤病；大脑的癌症，例如星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤(松果体瘤)、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、少突胶质细胞瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤和先天性肿瘤；和脊髓的癌症，例如神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤和肉瘤。
2)乳腺癌症，包括例如：ER+乳腺癌、ER-乳腺癌、her2-乳腺癌、her2+乳腺癌、间质瘤(如纤维腺瘤、叶状肿瘤和肉瘤)和上皮性肿瘤(如大导管乳头状瘤)；乳腺的癌，包括原位(非侵袭性)癌，其包括原位导管癌(包括佩吉特氏病)和小叶原位癌，和侵袭性(浸润性)癌，包括但不限于侵袭性导管癌、侵袭性小叶癌、髓样癌、胶质(粘液)癌、管状癌和侵袭性乳头状癌；和其他恶性肿瘤。乳腺癌症的其他实例可以包括鲁米那A、鲁米那B、基底A、基底B和三阴性乳腺癌，该三阴性乳腺癌是雌激素受体阴性(ER-)、孕酮受体阴性和her2阴性(her2-)。在一些具体实施方式中，乳腺癌可能具有高风险Oncotype得分。
3)贲门癌症，包括例如：肉瘤，例如血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和脂肪肉瘤；粘液瘤；横纹肌瘤；纤维瘤；脂肪瘤和畸胎瘤。
4)肺部癌症，包括例如：支气管癌，例如鳞状细胞、未分化的小细胞、未分化的大细胞和腺癌；肺泡和细支气管癌；支气管腺瘤；肉瘤；淋巴瘤；软骨瘤性错构瘤；和间皮瘤。
5)胃肠癌症，包括例如：食管的癌症，例如鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤和淋巴瘤；胃的癌症，例如癌、淋巴瘤和平滑肌肉瘤；胰腺的癌症，例如导管腺癌、胰岛瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌肿瘤和舒血管肠肽瘤；小肠的癌症，例如腺癌、淋巴瘤、类癌肿瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤和纤维瘤；大肠的癌症，例如腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤和平滑肌瘤。
6)泌尿生殖道癌症，包括例如：肾脏的癌症，例如腺癌、维尔姆斯肿瘤(肾母细胞瘤)、淋巴瘤和白血病；膀胱和尿道的癌症，例如鳞状细胞癌、移行细胞癌和腺癌；前列腺的癌症，例如腺癌和肉瘤；睾丸的癌症，例如精原细胞瘤、畸胎瘤(teratoma)、胚胎癌、畸胎癌(teratocarcinoma)、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤和脂肪瘤。
7)肝脏癌症，包括例如：肝瘤，例如肝细胞癌；胆管癌；肝母细胞瘤；血管肉瘤；肝细胞腺瘤；和血管瘤。
8)骨骼癌症，包括例如：骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤。
9)妇科癌症，包括例如：子宫的癌症，例如子宫内膜癌；宫颈的癌症，例如宫颈癌和宫颈肿瘤前病变(pre tumor cervical dysplasia)；卵巢的癌症，例如卵巢癌，包括浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌、颗粒细胞卵泡膜细胞肿瘤、支持-间质细胞瘤、无性细胞瘤和恶性畸胎瘤；外阴的癌症，例如鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤和黑素瘤；阴道的癌症，例如透明细胞癌，鳞状细胞癌，葡萄状肉瘤和胚胎性横纹肌肉瘤；和输卵管的癌症，例如癌。
10)血液系统癌症，包括例如：血液的癌症，例如急性髓性白血病，慢性髓性白血病，急性淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，骨髓增殖性疾病，多发性骨髓瘤和骨髓增生异常综合征，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤(恶性淋巴瘤)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
11)皮肤癌症，例如包括：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、痣发育异常痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤和银屑病。
12)肾上腺癌症，例如包括神经母细胞瘤。
13)胰腺的癌症，例如包括：外分泌胰腺癌症，如腺癌(M8140/3)、腺鳞癌、印戒细胞癌、肝样癌、胶质癌、未分化癌和具有破骨细胞样巨细胞的未分化癌；和外分泌胰腺肿瘤。
癌症可以是实体肿瘤，所述实体肿瘤可以是或可以不是转移性的。癌症也可能如在白血病中作为弥漫性组织发生。因此，如本文所提供的术语“肿瘤细胞”包括罹患以上认定的紊乱中的任何一种的细胞。
在一些具体实施方式中，癌症可以包括急性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、肝细胞癌、非小细胞肺癌和胃肠道间质瘤。
本公开中所述的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的结晶盐和多晶型形式或本文所述的其任何具体实施方式也可用于治疗非癌症细胞增殖性紊乱，例如新生儿血管瘤病、继发性进行性多发硬化症、慢性进行性骨髓退行性疾病、神经纤维瘤病、神经节瘤病、瘢痕瘤形成、骨的佩吉特病、乳腺的纤维囊性病、子宫肌瘤、佩罗尼病、掌腱膜挛缩症(dupuytren'sdisease)、再狭窄和肝硬化。
本文所述的化合物(即本发明中所述的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的结晶盐和多晶型形式，或其任何具体实施方式)可与一种或多种其他药物组合用于治疗、预防、控制、改善或减轻本文所述化合物或其他药物对其可以具有效用的疾病或状况的风险，其中药物组合在一起比单独使用任一种药物更安全或更有效。这种/些其他药物可以通过其通常使用的途径和量与本文所述的化合物同时或相继施用。当如本文所述的化合物与一种或多种其他药物同时使用时，可以设想到含有此类其他药物和本文所述化合物的单位剂型的药物组合物。然而，联合疗法还可以包括其中本文所述的化合物和一种或多种其他药物以不同的重叠时间表施用的疗法。还构思了，当与一种或多种其他活性成分组合使用时，本文所述的化合物和其他活性成分可以以比各自单独使用时更低的剂量使用。因此，本文所述的化合物的药物组合物包括除了本文所述的化合物之外还包含一种或多种其他活性成分的那些药物组合物。上述组合不仅包括本文所述的化合物与一种其他活性化合物的组合，而且还包括本文所述的化合物与两种或更多种其他活性化合物的组合。
同样地，如本文所述的化合物可以与用于预防、治疗、控制、改善或降低本文所述的化合物对其有用的疾病或状况的风险的其他药物组合使用。这些其他药物可以通过其通常使用的途径以及量与本文所述的化合物同时或相继施用。当如本文所述的化合物与一种或多种其他药物同时使用时，除了本文所述的化合物之外还含有此类其他药物的药物组合物被设想到。因此，除了如本文所述的化合物，即3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的结晶盐和多晶型形式或其任何具体实施方式之外，药物组合物可以含有一种或多种其他活性成分。
本文所述的化合物与第二种活性成分的重量比可以变化，并取决于每种成分的有效剂量。通常将使用各自的有效剂量。因此，例如，当本文所述的化合物与另一种制剂组合时，本文所述的化合物与其他制剂的重量比通常范围为约1000:1至约1:1000，包括约200:1至约1:200。本文所述的化合物与其他活性成分的组合通常也在上述范围内，但在每一种情况下，应使用每一种活性成分的有效剂量。在这样的组合中，本文所述的化合物和其他活性制剂可以分别施用或联合施用。另外，一种组分的施用可以在其他一种或多种制剂的施用之前、与其他一种或多种制剂的施用同时或在其他一种或多种制剂的施用之后。
本文所述的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的结晶盐和多晶型形式或其任何具体实施方式可以进一步与其他治疗癌症的方法(例如通过化学疗法、辐射或手术)联合使用。该化合物可以与一种或多种抗癌药物联合施用，如化疗药物.阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷、贝伐单抗、贝沙罗汀、博来霉素、bortezombi、硼替佐米、白消安静脉内、白消安口服、卡普睾酮、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、达肝素钠、达沙替尼、柔红霉素、地西他滨、Denileukin、地尼白介素(denileukin diftitox)、右丙亚胺、多西他赛、阿霉素、屈他雄酮丙酸酯、依库丽单抗、表柔比星、厄洛替尼、雌莫司汀、依托泊苷磷酸盐、依托泊苷、依西美坦、柠檬酸芬太尼(fentanyl citrate)、非格司亭、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉姆单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)、醋酸戈舍瑞林、醋酸组胺瑞林(histrelin acetate)、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、干扰素α2a、依立替康、甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate)、来那度胺、来曲唑、亚叶酸、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、氮芥、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、甲氨蝶呤、甲氧沙林、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、苯丙酸诺龙(nandrolone phenpropionate)、奈拉滨、nofetumomab、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸盐、帕尼单抗、培门冬酶、培非格司亭、培美曲塞二钠、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、丙卡巴肼、奎纳克林、拉布立酶、利妥昔单抗、鲁索替尼(ruxolitinib)、索拉非尼、链脲佐菌素、舒尼替尼、马来酸舒尼替尼、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、睾内酯、沙利度胺、硫鸟嘌呤、噻替派、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维甲酸、乌拉莫司汀、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、伏立诺他和唑来膦酸盐。
药物组合物
本发明的另一方面涉及药物组合物，其含有根据本发明的盐或其多晶型变体和一种或若干种药学上可接受的载体、佐剂、溶剂和/或赋形剂，例如可与本发明的盐或其多晶型变体一起施用的那些。“药学上可接受的”是指载体、佐剂、溶剂或赋形剂不会抑制本文所述的盐或其多晶型变体的药理活性并且其以在药物组合物中使用的量是无毒的。
药物组合物含有本文所述的盐和药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体可以包括适用于某些剂型的溶剂、稀释剂、分散剂、混悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、粘合剂、润滑剂等。可用作药学上可接受的载体的材料包括但不限于：单糖和寡糖以及它们的衍生物；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和用于栓剂的蜡；植物油，如花生黄油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，如丙二醇；复合酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲物质，如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗溶液；林格溶液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液。药物组合物还可以包含其他无毒相容的润滑剂，如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、分离液、成膜剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。
本文所述的组合物还包括剂型，即针对以治疗有效剂量以某种方式引入体内而优化的药物组合物，例如，以适当的剂量通过口服、局部、肺部(例如作为吸入气雾剂)、静脉内、鼻内、皮下、肌内和注射施用而引入。
本发明的剂型可以含有通过使用脂质体的方法、微胶囊化方法、用于获得药物纳米形式的方法或通过制药学中已知的其他方法获得的药物组合物。
为获得例如片剂形式的组合物，将活性物质与一种或若干种药用赋形剂(如明胶、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石、二氧化硅、阿拉伯树胶、甘露糖醇、微晶纤维素、羟丙甲纤维素或类似化合物)混合。
片剂可以用蔗糖、纤维素衍生物或其他适于制备包衣的物质包衣。片剂可以通过不同的方式获得，例如直接压片、干法或湿法制粒或热熔法。
明胶胶囊形式的药物组合物可通过将活性物质与溶剂混合并用所得混合物填充软胶囊或固体胶囊来获得。
对于胃肠外施用，本领域技术人员可以使用水性悬浮液、等渗盐水溶液或含有药理上相容的试剂(例如丙二醇或丁二醇)的注射用无菌溶液。
药物组合物的实例
本发明中所述的物质可以作为以下制剂用于预防和/或治疗人或动物中的疾病(“物质”是指活性成分)：
Figure GDA0002273044290000201
Figure GDA0002273044290000202
Figure GDA0002273044290000211
Figure GDA0002273044290000212
Figure GDA0002273044290000213
Figure GDA0002273044290000214
这些组合物可以根据标准制药程序制备。片剂(I)-(II)可以使用诸如醋酸邻苯二甲酸纤维素用肠溶性包衣覆盖。气雾剂组合物(I)可以与标准分散器组合使用。脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇多油酸酯、聚山梨醇酯80、聚甘油油酸酯或油酸可代替脱水山梨糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂用作悬浮剂。
实施例
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺盐形式的研究
合成了3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的多种盐形式，目标是鉴定具有下列特征的一种或多种盐形式：结晶性、在水中的高溶解度(大于10g/L)和固定的组成。另外，该研究旨在鉴定一种盐形式，其生产容易放大并可在低毒有机溶剂中进行。
在极性无毒(2级和3级)有机溶剂中获得多种3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺盐形式。根据药理学可接受性和酸强度(pKa不高于5.0)选择平衡离子。基于3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺是具有约6.4的pKa的碱的事实选择最小的酸强度。
在第一阶段，测试初始碱在选定的有机溶剂中的溶解度。本试验中使用的最大选定溶剂体积为1.25mL/1mg碱。测试初始碱在多种有机溶剂中的溶解度的结果在表1中给出。低毒性(3级)、低沸点(T沸点<100℃)、极性的溶剂(其中碱以不低于10mg/mL可溶)被选择用于进一步研究。
在第二阶段，尝试从100mg 3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的碱和多种酸获得盐。对于该研究阶段，选择多种溶剂/酸对，其中测试样品完全溶解在溶剂中并且加入酸后形成沉淀，或者加入酸后体系均匀并且将系统冷却至室温后形成沉淀。在大多数情况下，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的成盐在加入酸后立即发生或者在冷却溶液后发生(见图1)。在冷却溶液后没有形成沉淀的情况下，将甲基叔丁基醚加入到盐溶液中以引发结晶过程(见图2)。
表1—3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺在多种溶剂中的溶解度
Figure GDA0002273044290000231
使用X射线粉末衍射的方法研究得到的所有样品的结晶性(以研究结晶性结构)。使用带X'Celerator检测器的CubiX-Pro XRD X射线粉末衍射仪(阳极电压45kV，电流40mA)在25℃(±5℃)的温度和≈70％的相对空气湿度获得衍射图谱。测量步长0.02°2θ，角度范围3-45°2θ。使用X'Pert HighScore Plus软件包详细研究获得的衍射图谱。
使用X射线粉末衍射法研究样品的结晶性表明，所研究的样品HAL-G-194-1、HAL-G-196-1、HAL-G-196-2、HAL-G-196-4、HAL-G-196-5、HAL-G-196-6、HAL-G-196-7、HAL-G-196-8、HAL-G-196-9、HAL-G-196-13、HAL-G-196-16、HAL-G-196-17、HAL-G-196-25、HAL-G-196-28、HAL-G-196-29、HAL-G-196-30、HAL-G-196-3、HAL-G-196-19、HAL-G-196-20、HAL-G-196-21、HAL-G-196-23、HAL-G-196-24、HAL-G-196-26、HAL-G-196-35呈现出多个单独的结晶相或相的混合体(见图1和图2)。使用高效液相色谱法(HPLC)(使用具有Phenomenex Luna柱(5μM，4.6×250mm)的Agilent 1100系列仪器获得色谱图。流动相(10mM KH2PO4 pH＝3)：乙腈体积比为60:40。流速1.0mL/min。检测在254nm下进行。运行时间为16分钟)研究这些样品的溶解度。样品还使用下列方法进行研究：偏光显微术(Leica DMRB偏光显微镜，分辨率1600×1200)—确认结晶性，离子色谱法—确认阴离子和阳离子化学计量比，差示扫描量热法(DSC)和热重分析法(TGA)—确认组成和样品温度稳定性的研究；1H NMR(500MHz BrukerAVANCE 500,13MHz，溶剂DMSO-d6)—确定结构、评估有机溶剂的纯度和含量；重量吸湿—评估吸湿性。使用Mettler 822e DSC装置进行DSC。根据ISO 11357-1标准基于标准物质相变(C6H12；Hg；苯甲酸；Ga；KNO3；In；Sn；Bi；CsCl；纯度等级99.99％)校准测量系统。温度校准常规误差(根据In确定)为0.1°。样品在标准铝电解槽中在人造气流中在30-300°С的温度范围内以10°/min的加热速度进行测试。使用Mettler 851e SDTA/TGA TG分析仪进行TG测量。使用标准物质熔点(Ag；Al；Bi；In；Sn；纯度等级99.99％)来校准设备。称重误差为NMT0.1％(使用CaC2O4·2H2O标准测定)。在标准开放铝容器中在人造气流中在30-150°С的温度范围内以10°/min的加热速度进行测试。为避免脱水，在测量之前，材料未经机械处理。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺游离碱(多晶型变体I)的物理和化学性质的研究
基于X射线粉末衍射数据(见图3)，HAL-G-194-1游离碱样品是单独的结晶相，这也通过偏光显微术进行了确认(见图4)。使用1H NMR波谱法确认化合物的结构(见图5)。游离碱在去离子水中的表观溶解度小于1mg/mL(见表2)。
表2—3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺游离碱和多种盐形式在水中的表观溶解度
Figure GDA0002273044290000241
基于HPLC分析，游离碱在去离子水中的平衡溶解度为约2.3×10 4mg/mL(见表3)。
表3—3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺游离碱和多种盐形式在水中的平衡溶解度
Figure GDA0002273044290000242
图6和图7中给出了使用DSC和TG方法测试样品的结果。游离碱样品的DSC分析表明，样品在加热高达198℃时没有经历变体，游离碱在211℃熔化(见图6)。在TG分析期间，没有鉴定到样品的重量损失(见图7)。对3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱进行的吸湿性研究显示，在90％的相对空气湿度样品吸附小于3％质量的水(见图8)。当样品在7天的时间段内保持在60℃的温度时，杂质含量保持不变(见表4)。
表4—3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和多种盐形式的稳定性(在T＝60℃7天)
Figure GDA0002273044290000251
对悬浮于溶剂(丙酮)中的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱多晶型变体在6天内的稳定性研究表明，HAL-G-194-1样品的结晶结构发生了改变(见图3、表5)。使用1H NMR波谱法确认所接收样品的结构和纯度(见图5)。
表5—3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱多晶型变体和多种盐形式的稳定性(悬浮在丙酮中6天)
Figure GDA0002273044290000252
盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体I)的物理和化学性质的研究
在四氢呋喃(THF)中得到盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-2)。基于X射线粉末衍射(见图9)，该盐被鉴定为单独的结晶相。在在乙醇中制备的盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-1样品)中显示出相同的结晶相。用1HNMR波谱法确认了化合物结构(见图10)。应当注意的是，HAL-G-196-1和HAL-G-196-2样品的1H NMR波谱含有残留溶剂的信号。使用离子色谱法来确定阴离子和阳离子的化学计量比，并确认了单盐酸盐的形成。DSC分析(见图11)导致两个吸热转变的鉴定—第一个(T＝139℃)对应于溶剂损失，而第二个(T＝180℃)对应于样品熔化。在TG分析过程中，观察到3.6％的样品重量损失，这可能是由残留溶剂量的损失引起的(见图12)。样品吸湿性的研究表明，HAL-G-196-2样品可能是二水合物，因为它解吸并吸附了水，水的体积对应于二水合物(见图13)。进一步的开发被认为是不可行的。
盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体II)的物理和化学性质的研究
加入甲基叔丁基醚(MTBE)后从丙酮介质中得到盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-3)。基于X射线粉末衍射(见图9)，该盐被鉴定为单独的结晶相，其不同于HAL-G-196-1和HAL-G-196-2的结晶相。化合物结构通过1H NMR波谱法确认(见图10)。使用离子色谱法来确定阴离子和阳离子的化学计量比，并确认了单盐酸盐的形成。DSC分析(见图11)导致对应于样品熔化的一个吸热转变(T＝190℃)的鉴定。在TG分析期间，没有观察到样品重量损失。HAL-G-196-3样品在去离子水中的表观溶解度总计约为3mg/mL(见表2)。通过HPLC分析，测量盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体II)在去离子水中的平衡溶解度为约37.1mg/mL(见表3)。样品吸湿性的研究表明，在相对空气湿度为90％的条件下，HAL-G-196-3样品吸附小于8％质量的水(见图13)。当样品在60℃的温度保持7天时，杂质含量保持不变(见表4)。在6天的时间段内HAL-G-196-3样品悬浮于溶剂(丙酮)后稳定性的研究表明HAL-G-196-3样品的结晶结构保持不变(见表5)。因此，盐酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的这种形式的盐具有符合进一步开发该盐形式的要求的物理和化学性质。
硫酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的物理和化学性质的研究
在丙酮介质中获得硫酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-6)。基于X射线粉末衍射(见图14)，发现样品含有结晶相的组合，因为峰的漫散性质以及无法使用一个晶胞的相位反射来建立和描述衍射图谱证实了若干结晶相的存在以及可能地在测试样品中无定形相的显著份额。通过1H NMR波谱法确认了化合物的结构(见图15)。应当提及的是，HAL-G-196-6样品的1H NMR波谱含有残留溶剂的信号。使用离子色谱法确定阴离子和阳离子化学计量比，其确认了单硫酸盐的形成。DSC分析(见图16)导致一个吸热转变的鉴定，其可能对应于溶剂损失。没有对应于物质熔化的明显吸热转变证明在测试样品中有相当大比例的无定形相。硫酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐在去离子水中的表观溶解度为约1mg/mL(见表2)。由于该盐的低溶解度，进一步的开发被认为是不可行的。
溴化氢和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体I)的物理和化学性质的研究
通过从乙醇介质中结晶获得溴化氢和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-7)。基于X射线粉末衍射(见图17)，该盐被鉴定为单独的结晶相。通过1H NMR波谱法确认了化合物结构(见图18)。HAL-G-196-7样品的1H NMR波谱含有残留溶剂的信号。使用离子色谱法确定阴离子和阳离子化学计量比，其确认了单氢溴酸盐的形成。DSC分析(见图19)导致两个吸热转变的鉴定—第一个(T＝129℃)对应于溶剂损失，而第二个(T＝190℃)对应于样品熔化。在TG分析过程中，观察到1.7％的样品重量损失，这可能是由残留溶剂量的损失引起的(见图20)。氢溴酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐在去离子水中的表观溶解度为约5mg/mL(见表2)。样品吸湿性的研究表明，在90％的相对空气湿度，样品吸附了超过10％质量的水并在空气中融化。由于这种盐形式的高吸湿性，进一步的开发被认为是不可行的。
溴化氢和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体II)的物理和化学性质的研究
通过从四氢呋喃(THF)介质中结晶获得溴化氢和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-8)。基于X射线粉末衍射(见图17)，该盐被鉴定为单独的结晶相。当溴化氢和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐从丙酮中结晶(HAL-G-196-9样品)时，获得了相同的结晶相。通过1H NMR波谱法(见图18)确认了化合物结构。HAL-G-196-8和HAL-G-196-9二者的1HNMR波谱均含有残留溶剂的信号。使用离子色谱法来确定样品HAL-G-196-8和HAL-G-196-9中的阴离子和阳离子化学计量比，并确认了单氢溴酸盐的形成。DSC分析(见图19)导致一个吸热转变(T＝224℃)的鉴定，其对应于样品熔化。TG分析显示没有样品重量损失。溴化氢和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐在去离子水中的表观溶解度小于1mg/mL(见表2)。由于该盐的低溶解度，进一步的开发被认为是不可行的。
磷酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的物理和化学性质的研究
通过从乙醇介质中结晶获得磷酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-13)。基于X射线粉末衍射(见图21)，该盐被鉴定为单独的结晶相。通过1H NMR波谱法(见图22)确认了化合物结构。HAL-G-196-13样品的1H NMR波谱含有残留溶剂的信号。使用离子色谱法确定的阴离子和阳离子化学计量比证实了磷酸二氢盐的形成。DSC分析(见图23)导致两个吸热转变的鉴定—第一个(T＝131℃)对应于溶剂损失，第二个(T＝235℃)对应于样品熔化。在TG分析过程中，观察到3％的样品重量损失，这可能是由残留溶剂量的损失引起的(见图24)。HAL-G-196-13样品被鉴定为可能是在结晶结构中含有乙醇的溶剂化物，这通过X射线粉末衍射数据(见图21)证实。由于该盐的晶体结构中的高溶剂含量，进一步的开发被认为是不可行的。
酒石酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的物理和化学性质的研究
通过从乙醇介质中结晶获得酒石酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-16)。基于X射线粉末衍射(见图25)，该盐被鉴定为单独的结晶相。当酒石酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐从THF介质中结晶(HAL-G-196-17样品)时，获得同样的结晶相。通过1H NMR波谱法(见图26)确认了化合物结构。HAL-G-196-8和HAL-G-196-9样品的1HNMR波谱含有残留溶剂的信号。使用离子色谱法确定的HAL-G-196-16和HAL-G-196-17样品中的阴离子和阳离子化学计量比证实了每个样品的单酒石酸盐的形成。DSC分析(见图27)导致一个吸热转变(T＝161℃)的鉴定，对应于溶剂损失和样品熔化。在HAL-G-196-16样品的TG分析过程中，观察到在30-100℃的温度范围的0.8％的失重，然后是在130-170℃的温度范围内0.7％的另外的失重，这可能是由样品的部分降解导致的(见图28)。HAL-G-196-16样品被鉴定为可能是在晶体结构中含有乙醇的溶剂化物，这通过X射线粉末衍射数据(见图25)证实。由于该盐的晶体结构中的高溶剂含量，进一步的开发被认为是不可行的。
甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的物理和化学性质的研究
通过从丙酮介质中结晶得到甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-21)。基于X射线粉末衍射(见图29)，该盐被鉴定为单独的结晶相，这也通过偏光显微术证实(见图30)。当甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐从THF介质(HAL-G-196-20样品)和乙醇介质(HAL-G-196-19样品)中结晶时，获得了相同的结晶相。通过1H NMR波谱法(见图31)确认了化合物结构。使用离子色谱法测定了HAL-G-196-19、HAL-G-196-20和HAL-G-196-21样品中的阴离子和阳离子化学计量比，并确认每个样品形成了单甲磺酸盐。这些样品的DSC分析(见图32)导致对应于样品熔化的一个吸热转变(T＝220℃)的鉴定。在TG分析过程中，没有观察到样品重量损失。对甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品的吸湿性研究显示，在90％的相对空气湿度，样品吸附少于2％质量的水。甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐在去离子水中的表观溶解度大于46mg/mL(见表2)。根据通过HPLC分析获得的数据(见表3)，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐在去离子水中的平衡溶解度超过100mg/mL。当样品在7天的时间段内保持在60℃的温度时，杂质含量保持不变(见表4)。在6天的时间段内用溶剂(丙酮)处理的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的稳定性研究显示样品的结晶结构保持不变(见表5)。因此，甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐具有符合作为盐形式用于进一步开发的要求的物理和化学性质。
4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的物理和化学性质的研究
通过从丙酮介质中结晶得到4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-24)。基于X射线粉末衍射(见图33)，该盐被鉴定为单独的结晶相，这也通过偏光显微术证实(见图34)。当4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐经由从THF介质结晶获得(HAL-G-196-23样品)时，获得了同样的结晶相。通过1H NMR波谱法(见图35)确认了化合物结构。使用离子色谱法确定了HAL-G-196-23和HAL-G-196-24样品中的阴离子和阳离子化学计量比，并确认每个样品形成了单甲苯磺酸盐。HAL-G-196-24样品的DSC分析(见图36)导致对应于样品熔化的一个吸热转变(T＝184℃)的鉴定。在TG分析过程中，没有观察到样品重量损失。样品吸湿性的研究表明，在90％的相对空气湿度，HAL-G-196-24样品吸附的水分少于4％质量(见图37)。4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐在去离子水中的表观溶解度小于1mg/mL(见表2)。根据通过HPLC分析获得的数据，4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐在去离子水中的平衡溶解度为2.2mg/mL(见表3)。当样品在7天的时间段内保持在60℃的温度时，杂质含量保持不变(见表4)。在6天内用溶剂(丙酮)处理的4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的稳定性研究显示样品的晶体结构保持不变(见表5)。因此，4-甲基苯磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐具有符合作为盐形式用于进一步开发的要求的物理和化学性质。
苹果酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的物理和化学性质的研究
通过从乙醇介质中结晶获得了苹果酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-25)。基于X射线粉末衍射(见图38)，该盐被鉴定为单独的结晶相。通过从THF介质中结晶获得了苹果酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的同样的结晶相(HAL-G-196-26样品)。通过1H NMR波谱法(见图39)确认了化合物结构。使用离子色谱法确定的样品HAL-G-196-19、HAL-G-196-25和HAL-G-196-26中的阴离子和阳离子化学计量比确认了每种样品的单苹果酸盐的形成。HAL-G-196-25样品的1H NMR波谱含有残留溶剂的信号。DSC分析(见图40)导致两个吸热转变的鉴定—第一个(T＝128℃)对应于溶剂损失和样品熔化，第二个(T＝205℃)对应于随后的样品降解。在TG分析过程中，观察到在80-130℃的温度范围内2％的样品重量损失，这可能是由于盐熔化过程中残留溶剂的损失引起的(见图41)。随后的重量损失可能与熔化的样品的降解有关。基于所进行的研究，了解到HAL-G-196-25样品是溶剂化物。由于该盐的晶体结构的高溶剂含量，进一步的开发被认为是不可行的。
富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(单富马酸盐)的物理和化学性质的研究
从乙醇介质中获得富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-28)。基于X射线粉末衍射(见图42)，该盐被鉴定为单独的结晶相。通过1H NMR波谱法(见图43)确认了化合物结构。使用离子色谱法确定的HAL-G-196-28样品中的阴离子和阳离子化学计量比证实形成了单富马酸盐。HAL-G-196-28样品的1H NMR波谱包含残留溶剂信号。DSC分析(见图44)导致一个吸热转变(T＝148℃)的鉴定，该吸热转变对应于溶剂损失和盐熔化，其可能伴随着部分样品降解。在TG分析过程中，观察到在95-170℃的温度范围内3.5％的样品重量损失，这可能是由盐熔化过程中残留溶剂的损失引起的(见图45)。基于所进行的研究，了解到HAL-G-196-28样品是溶剂化物。由于该盐的晶体结构中的高溶剂含量，进一步的开发被认为是不可行的。
富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(半富马酸盐)的物理和化学性质的研究
通过从THF介质中结晶获得富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-29)。基于X射线粉末衍射(见图42)，该盐被鉴定为单独的结晶相，这也通过偏光显微术证实(见图46)。在通过从丙酮介质中结晶获得的富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(HAL-G-196-30样品)中鉴定到同样的结晶相。通过1H NMR波谱法(见图43)确认了化合物结构。使用离子色谱法确定的HAL-G-196-29和HAL-G-196-30样品中的阴离子和阳离子化学计量比证实了半富马酸盐的形成。HAL-G-196-29样品的DSC分析(见图44)导致对应于溶剂损失和样品熔化的一个吸热转变(T＝244℃)的鉴定。在TG分析过程中，观察到1％的样品重量损失，这可能是由残留溶剂量的损失引起的(见图45)。对富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品吸湿性研究显示，在90％的相对空气湿度，样品吸附少于4％质量的水。富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐在去离子水中的表观溶解度小于1mg/mL(见表2)。根据通过HPLC分析获得的数据，富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐在去离子水中的平衡溶解度为7.4×10-3mg/mL(参见表3)。当样品在7天的时间段内保持在60℃的温度时，杂质含量保持不变(见表4)。当在6天内用溶剂(丙酮)处理时，富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的稳定性研究显示，样品的结晶结构保持不变(见表5)。因此，富马酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的半富马酸盐具有满足作为盐形式用于进一步开发的要求的物理和化学性质。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐形式鉴定的结果
总之，在鉴定3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐形式的研究过程中，研究了含有12个平衡离子并用4种不同溶剂获得的多种盐形式的多于50种样品。所进行的研究表明，四种酸(盐酸、甲磺酸、4-甲基苯磺酸和富马酸)的盐具有有利的物理和化学性质，即结晶性、与游离碱相比在水中的高溶解度以及制备后的高纯度和温度稳定性。另外，这些盐可以使用低毒性有机溶剂和易于放大的方法制备并含有药理学上可接受的阴离子。
然而，所鉴定的盐在其在水中的溶解度方面令人惊讶地表现出显著差异：例如，富马酸盐的溶解度(7.4×10-3mg/mL)与游离碱的溶解度(2.3×10-4mg/mL)是可比的；而4-甲基苯磺酸盐(2.4mg/mL)、盐酸盐(37.1mg/mL)和甲磺酸盐(超过100mg/mL)的溶解度具有比游离碱形式的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的溶解度大10,000倍的溶解度。然而，只有甲磺酸盐可以通过从丙酮或乙醇中结晶获得，而不添加甲基叔丁基醚或者无溶液在低于室温下的额外冷却。
因此，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的优选的结晶盐形式(其可使用易于放大的方法在低毒性有机溶剂中获得，并且其含有药学上可接受的具有结晶性的阴离子且在水中的溶解度高)被鉴定为3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的多晶型变体的获得和描述实施例：
为了进一步研究3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的目的，开发了其制备方法。在方法开发期间，发现3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐可以以两种多晶型变体存在。我们揭示的这些相形成中的差异可以总结为：在某些情况下，当在丙酮中制备3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐时，沉淀物没有自发形成。在盐从更浓缩的溶液中结晶后，发现可以形成相的组合或任何单独的相。将X-射线粉末衍射法应用于两种多晶型变体以研究结构结晶性。使用装备有镍滤波片(辐射CuKα1，
Figure GDA0002273044290000321
)和位置灵敏探测器LynxEye的配置为Bragg-Brentano几何的X射线粉末衍射仪Bruker D8 Advance(管压40kV，管流40mA)，测量步长为0.02°2θ，角度范围为4-65°2θ，在25℃(±5℃)和约70％的相对空气湿度获得3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐样品的样品衍射图谱。使用Bruker TOPAS5软件包详细研究获得的衍射图谱。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体I)的合成
将3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺(53.2g，0.10mol)在丙酮(1,050mL，以20mL/g的量)中的悬浮液加热至沸腾并在剧烈搅拌下煮10分钟。然后，在继续加热并搅拌混合物的同时，将新鲜制备(即将添加之前)的甲磺酸(10.1g，0.105mol)在200mL乙醇(乙醇的量以获得的溶液的浓度为0.5mol/L的方式计算)中的溶液以单份加入。将得到的反应混合物煮15分钟，然后以约10℃/小时的速率冷却至20℃，然后在+10℃的温度静置12小时以允许结晶和形成沉淀。通过过滤收集沉淀物，用丙酮(3×150mL)洗涤并在温度为60℃的柜中干燥至恒重。收率：85-90％。
NMR 1H(500MHz，DMSO-d6)波谱：2.36–2.45(m,1Н,Н哌嗪),2.41(c,3Н,Ме),2.67(с,3Н,Ме),2.86(с,3Н,Me),2.94(d,J＝11.2Hz,1Н,Н哌嗪),3.08(t,J＝10.7Hz,1Н,Н哌嗪),2.94(d,J＝10.7Hz,1Н,Н哌嗪),4.06(c,2H,СН2(苄基)),7.24(t,J＝6.8Hz,1H,Н(芳香族)),7.53–7.63(m,2H,Н(芳香族)),7.73(d,J＝8.6Hz,1Н,Н(芳香族)),7.96(d,J＝9.2Hz,1Н,Н(芳香族)),8.03(dd,J1＝8.6Hz,J2＝1.6Hz,1H,Н(芳香族)),8.12(d,J＝8.6Hz,1Н,Н(芳香族)),8.25(с,1H,Н(芳香族)),8.40(с,1H,Н(芳香族)),8.65(d,J＝6.8 1Н,Н(芳香族)),10.60(c,1H,NH酰胺)。
质谱，m/z:533.2263
在图47中给出了3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体I)的NMR 1H和13С波谱。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体II)的合成
将3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺(17.73g，0.033mol)在350mL丙酮中的悬浮液加热至沸腾并在剧烈搅拌下煮10分钟。然后，在继续加热并搅拌混合物的同时，加入新鲜制备(即将添加之前)的甲磺酸(3.36g，0.035mol)在70mL乙醇中的溶液。将反应混合物煮15分钟，然后冷却至20℃；没有沉淀形成。将溶液在低压下蒸发至初始体积的一半，并使其在20-25℃的温度下放置24小时。通过过滤收集形成的沉淀，用丙酮(3×150mL)洗涤并在温度为45℃的柜中干燥至恒重。收率：85-90％。
NMR 1H(500MHz，DMSO-d6)波谱：2.35-2.43(m,1Н,Н哌嗪),2.41(c,3Н,Ме),2.66(с,3Н,Ме),2.87(с,3Н,Me),2.95(d,J＝11.3Hz,1Н,Н哌嗪),3.10(t,J＝10.5Hz,1Н,Н哌嗪),2.94(d,J＝10.5Hz,1Н,Н哌嗪),4.05(c,2H,СН2(苄基)),7.26(t,J＝6.9Hz,1H,Н(芳香族)),7.52–7.61(m,2H,Н(芳香族)),7.73(d,J＝8.6Hz,1Н,Н(芳香族)),7.96(д,J＝9.1Hz,1Н,Н(芳香族)),8.03(dd,J1＝8.6Hz,J2＝1.6Hz,1H,Н(芳香族)),8.12(d,J＝8.6Hz,1Н,Н(芳香族)),8.27(с,1H,Н(芳香族)),8.41(с,1H,Н(芳香族)),8.65(d,J＝6.9 1Н,Н(芳香族)),10.62(c,1H,NH酰胺)。
质谱，m/z:533.2268。
在图48中给出了3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体I)的NMR 1H和13С波谱。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体I)的结晶性的研究
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体I)为具有下列晶胞参数的单独的结晶相：
Figure GDA0002273044290000342
以及β＝108.9±0.1°,
Figure GDA0002273044290000344
P21/n空间群。独立部分的体积对应一个化学式单位(见图49a)。表6中给出了样品的德拜粉末图的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。在图50a中给出了多晶型变体I的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的晶胞的独立部分的一般外观。
表6—3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体I)样品的德拜粉末图上的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。强度是峰高(有背景调整)。位置对应于衍射图谱上的最大值，而不是反射的位置。
Figure GDA0002273044290000341
Figure GDA0002273044290000351
甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体I)的结晶性的辅助测试
众所周知，样品的纯度、微晶的尺寸、所研究样品中微应力的存在以及一系列其他因素可能对所研究样品的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度产生显著影响。为了说明德拜粉末图的类型，特别是为了说明特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度，对甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体I)的样品进行了辅助测试。通过使用如下的不同测量几何进行德拜粉末图的接收：x-射线透过率和Bragg-Brentano几何。表7和表8展示了样品的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。
表7—甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(2号样品，多晶型变体I)的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。强度是峰的高度(背景校正的)。位置对应于X射线衍射图谱上的最大值，而不是估计的反射的位置。
Figure GDA0002273044290000361
从表7中提供的数据可以明显看出，各种测量几何的使用对德拜粉末图中峰的位置和强度没有太大影响。
与2号样品相反，样品PF114-56-MsOH中微晶的小的尺寸和微应力的存在导致其X射线衍射图谱的线强烈变宽和失真(见表8)。此外，3号样品的X射线衍射图谱显示出杂质的峰，其体积比(根据杂质峰的强度与主相的比评估)总计为5％。
表8—甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(3号样品，多晶型变体I)的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。强度是峰的高度(背景校正的)。位置对应于X射线衍射图谱上的最大值，而不是估计的反射的位置。
Figure GDA0002273044290000372
Figure GDA0002273044290000381
不同样品的X射线衍射图谱的比较允许确定对所有样品来说是特征性的峰，并分析峰的位置和强度的可能变化(见表9)。
表9—甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(多晶型变体I)的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。强度是峰的高度(背景校正的)。位置对应于X射线衍射图谱上的最大值，而不是估计的反射的位置。
X射线粉末衍射图谱中最具信息性的区域是2θ的低角度区域。在这个区域中，反射的位置显著不同，而在衍射角度增大时，峰的数量增加并且它们的重叠变成实质性的。可以认为具有代表性的角度区域取决于所研究化合物的晶胞参数的值；对于所研究的具有5-50A晶胞参数的有机化合物，层间距离范围
Figure GDA0002273044290000391
可以被认为是代表性区域。在这种情况下，衍射角度范围将等于3-25°2θ。因此，为了表征为多晶型变体I的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐，使用相对强度为20％或更高的在衍射角(2θ)14.5、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、23.2处的峰是可能的。
从表9中提供的数据本领域技术人员可以看出，衍射角(2θ)14.5、16.9、17.2、18.7、20.8处的所有峰都具有高于20％的相对强度。然而，这些峰的强度会取决于测量方法、样品的纯度、盐晶体的大小、样品纹理化的影响和一系列其他参数而实质性地变化。由于这个原因，在为多晶型变体I的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线粉末衍射图谱中，衍射角(2θ)14.5、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、23.2处的一些峰会给出低于20％的强度。因此，为了表征为多晶型变体I的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐，使用选自14.5、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、23.2的衍射角(2θ)处的相对强度为20％或更高的两个、三个或四个峰是可能的。
通过分析在测量甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体I)的不同样品的过程中获得的X射线衍射图谱的峰，明显的是位于衍射角(2θ)18.7处的峰在所有情况中都具有最大的相对强度。因此，为了表征为多晶型变体I的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐，使用具有最大相对强度的在衍射角(2θ)18.7°处的峰是可能的。重要的是要注意，依据最强峰的位置的X射线衍射图谱表征并不总是可靠的，因为取决于样品纹理，最强峰可能是另一个峰，这在用具有不同几何的仪器测量多晶型变体II(见下文)期间观察到了。
考虑到上述的观察结果，为了表征为多晶型变体I的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐，使用表9中呈现的如下衍射角(2θ)处的整组峰是可能的：7.2、11.9、12.5、13.4、14.5、16.2、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、21.4、23.2、24.1、24.6、25.4、27.1。
样品纹理的作用、微晶尺寸的变化和排序对峰强度会有很强的影响。出于这个原因，观察到的峰的数量可能会显著降低。没有找到广泛使用的代表性采样搜索规则。1995年的美国药典提到X射线粉末衍射图谱的表征的要求。为了描述X射线衍射图谱，有必要选择10个最强的峰，并且它们的位置应该以达到±0.20°2θ的精确度确定。除此之外，对峰的相对强度采样的偏差不应超过20％。由于峰强度可能显著变化的事实，我们认为对于为多晶型变体I的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的表征，使用选自以下的衍射角(2θ)处的5个至10个最强的峰是合理的：7.2、11.9、12.5、13.4、14.5、16.2、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、21.4、23.2、24.1、24.6、25.4、27.1。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体II)的结晶性的研究
使用X射线粉末衍射研究3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体II)的样品的结晶性。结果表明该样品为单独的结晶相，具有如下晶胞参数：和
Figure GDA0002273044290000402
β＝117.8±0.1，
Figure GDA0002273044290000403
和P21/c空间群(见图49b)。表10中给出了盐样品德拜粉末图上的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。图50b中给出了为多晶型变体II的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的晶胞的独立部分的一般外观。
表10—3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺甲磺酸盐(多晶型变体II)的样品的德拜粉末图上的特征性视觉可区分的峰的位置和强度。强度是峰高(有背景调整)。位置对应于衍射图谱上的最大值，而不是反射的位置。
Figure GDA0002273044290000401
Figure GDA0002273044290000411
甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体II)的结晶性的辅助测试
为了说明3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体II)的德拜粉末图中的特征性、视觉可区分的峰的位置和强度，通过X射线衍射分析法进行盐结晶性的辅助测试。通过使用如下不同的测量几何进行德拜粉末图的接收：x-射线透过率和Bragg-Brentano几何。表11和表12展示了样品的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。
表11—甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品PF114-19-1-MsOH，多晶型变体II)的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。强度是峰的高度(背景校正的)。位置对应于X射线衍射图谱上的最大值，而不是估计的反射的位置。
Figure GDA0002273044290000421
由于X射线衍射图谱样品的强纹理，在具有不同几何的仪器上获得的读数差别很大。此外，Bragg-Brentano几何的测量导致峰强度的本质变化。因此，在以透射率几何测量时，衍射角(2θ)21.2处的峰是具有最大相对强度的峰，而以Bragg-Brentano几何测量时，这种峰的强度共计从43.7％直到最大值。
表12—甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的样品(样品A819419，多晶型变体II)的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。强度是峰的高度(背景校正的)。位置对应于X射线衍射图谱上的最大值，而不是估计的反射的位置。
峰位置(2θ) 相对强度，％ 峰位置(2θ) 相对强度，％
6.7 1.2 19.9 52.8
7.5 15.5 21.5 42.3
12.0 65.6 21.8 16.9
13.1 9.4 22.2 14.9
14.8 52.9 22.8 26.4
17.3 11.2 23.5 12.8
17.8 85.8 24.1 6.2
17.9 100 25.3 4.8
18.5 18.6 26.2 35.8
获得样品A819419的数据的仪器具有等于0.25°2θ的高的“零误差”。X射线衍射图谱显示线条强烈变宽，然而，由于仪器对变宽的贡献尚不清楚，所以精确地获得微晶的尺寸是不可能的。
比较不同样品的X射线衍射图谱允许确定对于所有样品是特征性的峰，并分析峰的位置和强度的可能变化(见表13)。
11.8；14.6；17.2；17.4；17.6；19.7；21.2；22.0和22.6。
表13—甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体II)的样品的德拜粉末图中的特征性、视觉上可区分的峰的位置和强度。强度是峰的高度(背景校正的)。位置对应于X射线衍射图谱上的最大值，而不是估计的反射的位置。11.9、14.7、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0、22.6和26.1
Figure GDA0002273044290000441
多晶型变体II的下列角度值的最强峰是特征性的：11.8；14.6；17.2；17.4；17.6；19.7；21.2；22.0和22.7。这些峰应存在于X射线衍射图谱上，并且其相对强度应高于10％。这种变体易于纹理化的事实决定了允许的强度的减小，因此峰的相对强度的范围比在多晶型变体I的情况时更宽。因此，对于为多晶型变体II的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的表征，使用在衍射角(2θ)11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0和22.7处的相对强度为10％或更高的峰是可能的。
从表13中提供的数据可以看出，衍射角(2θ)11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0和22.7处的所有峰的相对强度高于10％。然而，这些峰的强度会取决于测量方法、样品的纯度、盐晶体的尺寸、样品纹理化的作用和一系列其他参数而实质性地变化。出于这个原因，在为多晶型变体II的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的X射线衍射图谱中，在衍射角(2θ)11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0和22.7处的一些峰会具有低于10％的相对强度。因此，对于为多晶型变体II的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的表征，使用在在选自11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0和22.7的衍射角(2θ)处的具有20％或更高的相对强度的3个、4个、5个或6个峰是可能的。
通过分析在测量甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐(多晶型变体II)的不同样品的过程中获得的X射线衍射图谱，明显的是，取决于测量参数，最大相对强度可以属于衍射角(2θ)21.3处的峰或衍射角(2θ)17.6处的峰。因此，对于为多晶型变体II的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的表征，使用在选自17.6或21.2的衍射角(2θ)处具有最大相对强度的峰是可能的。
考虑到上述的观察结果，对于为多晶型变体II的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的表征，使用表13中示出的如下衍射角(2θ)处的整组峰是可能的：7.3、11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0、22.7、26.1。
由于峰强度可能显著变化的事实，我们认为，对于为多晶型变体I的甲磺酸和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐的表征，使用选自以下的衍射角(2θ)处的4个至8个峰是合理的：7.3、11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0、22.7、26.1。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺游离碱和3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺甲磺酸盐的溶解动力学研究
在3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的多晶型变体的进一步研究中，研究了游离碱和两种甲磺酸盐形式的多晶型变体的溶解动力学。使用USP装置1篮法进行溶解动力学研究(USP40,General Chapter<711>.Dissolution)，溶解介质体积—700mL，温度—37±1℃，桨式搅拌器的转速—100rpm。测试样品溶解速率计算为六次重复的平均值。使用蒸馏水作为3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺甲磺酸盐的多晶型变体的溶解介质，并且使用12.2mL甲磺酸在500mL水中的溶液用作游离碱的溶解介质。将含有100mg 3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺或者118mg 3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺甲磺酸盐(以游离碱计为100mg)的测试部分用于溶解。在测试开始后的780分钟(13小时)内，测量所制备溶液的pH。与用于测试3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺甲磺酸盐的多晶型变体的溶解的溶液的pH(pH 5.04—用于多晶型变体Ⅰ和pH 4.95—用于多晶型变体Ⅱ)相比，用于测试游离碱的溶解的溶液的pH更酸(pH 4.02)。
溶解动力学研究的结果示出于图51中。根据展示的数据，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐样品中包含的95％的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺在不到一分钟内转移至溶液中，并且盐的全部溶解发生在不到4分钟内。相比之下，即使在780分钟(13小时)的溶解时间段内，少于90％的游离碱溶解在含有12.2mL甲磺酸的溶液中。
因此，对3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的合成和结晶结构确定进行的研究表明，该化合物可以至少以两种多晶型变体存在。每种多晶型变体可以使用易于放大的方法在低毒性有机溶剂中获得，含有药学上可接受的阴离子，具有结晶性，并且在水中具有高溶解度。两种多晶型变体中的阳离子化学结构均匹配并对应于3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺阳离子，两种化合物都是甲磺酸盐，并含有质子化形式的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺和甲磺酸根阴离子。两个多晶型变体中的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺均在带有甲基的哌嗪环的氮原子上质子化。两种多晶型变体均不含溶剂分子。多晶型变体的结构中的差异主要与芳香族杂环与分子的其余部分相比的相互位置有关(见图50)。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐的药代动力学特征的研究
为了分析3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺盐形式作为药物的适用性，进行了其药代动力学特征的研究。
在对C57BL/6品系小鼠以50mg/kg的剂量单次施用游离碱和以59mg/kg的剂量(相当于以游离碱计的50mg/kg)单次施用3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体I)后，研究3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的药代动力学。研究结果在图52和表14和表15中给出。
表14—当将游离碱以50mg/kg的剂量施用到C57BL/6品系小鼠时，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的主要药代动力学参数。基于从三只动物获得的个体数据确定每个时间点的平均值。
T<sub>1/2</sub> T<sub>最大</sub> C<sub>最大</sub> AUC<sub>0–24</sub> AUC<sub>0–24</sub>/24 AUC<sub>0–∞</sub>
(h) (h) (ng/mL) (ng·h/mL) (ng/mL) (ng·h/mL)
2.4 2 1,490 10,856 452 10,868
表15—当将3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(多晶型变体I)*以59mg/kg的剂量(相当于以游离碱计50mg/kg)施用到C57BL/6品系小鼠时，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的主要药代动力学参数。基于从三只动物获得的个体数据确定每个时间点的平均值。
药代动力学研究带来了意想不到的结果，其中在施用游离碱后，最大3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺动物血浆浓度(C最大＝1490ng/mL)超过施用盐形式后鉴定的最大浓度(C最大＝1,099ng/mL)多于三分之一。此外，尽管盐形式具有比游离碱的溶解速率高的多的溶解速率这一事实，但盐形式的最大浓度达到时间(T最大)长达游离碱的最大浓度达到时间的两倍。尽管口服施用盐形式后3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的最大血浆浓度较小，但是盐形式的施用提供了较高的物质浓度平均值(AUCt/t)。考虑到游离碱和盐形式之间的溶解度差异，这些结果是意想不到的，因为最大动物血浆浓度(C最大)和平均动物血浆浓度(AUCt/t)通常与用于物质施用的盐形式的溶解度相关，而达到最大血浆浓度的时间(T最大)通常与所用盐形式的溶解速率负相关。
因此，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐的药代动力学参数的研究提供了意想不到的结果，其中观察到其药代动力学特征的显著差异，但却不是以基于溶解动力学差异可以解释的方式。药代动力学性质的差异可以导致药物候选物的功效、施用安全性和/或其它性质的变化。为了进一步评价所开发的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺盐形式的可用性，进行了3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐的急性毒性和功效的研究。
在化合物急性毒性研究实验中研究3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐的安全性
为了研究3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐的安全性，进行了急性毒性研究。
使用口服施用途径研究了3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和其与甲磺酸的盐对2-3月龄的CD-1品系小鼠的急性毒性。对于每个药物剂量研究，使用六只的一组动物。该研究包括具有相同动物头数的对照组，其接受0.5％甲基纤维素水溶液的等效溶剂剂量。随访期为28天。实验室小鼠生存性分析允许进行Bliss分析并确定所研究药物的致死剂量。表16中给出了针对游离碱和甲磺酸盐的急性毒性研究结果和计算出的半致死剂量。
表16—当对雄性小鼠以游离碱和甲磺酸盐的形式口服施用时，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的致死剂量
Figure GDA0002273044290000481
以上给出的数据表明，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的半致死剂量(LD50是导致试验组一半的动物死亡的剂量)高达游离碱的致死剂量的约两倍。对于导致试验组中90％动物死亡的剂量，观察到类似的更显著的效果(见表16)。3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺作为游离碱和盐形式施用二者均引起动物中毒的类似症状：呼吸困难、乏力、下垂的皮毛、腹泻、腹胀、在一些动物中—局部性脱毛；然而，当该物质以3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的形式施用时，不会导致这种作用发展的剂量为两倍高。
因此，对3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐的安全性研究提供了意想不到的结果，表明盐形式的特征在于显著更高的安全性，这通过以下显示：在通过实验室动物生物体施用后不造成可观察到的影响的更高的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺剂量，以及与游离碱相比盐形式的半致死剂量(LD50)增加到几乎两倍。3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的良好的安全特性使得该盐形式作为候选药物与其游离碱相比更有吸引力。
使用BCR/ABL诱导的慢性髓系白血病模型研究3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐的功效
为了评估3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐用于治疗慢性髓系白血病(CML)的功效，进行了化合物对小鼠中BCR/ABL诱导的CML类疾病的活性的研究。在该研究中使用了C57BL/6N品系小鼠。受试动物接受亚致死剂量的辐射，然后静脉移植供体Sca1+骨髓细胞，由于逆转录转导而表达p185-T315IBCR/ABL。移植表达p185-T315IBCR/ABL的细胞后第11天开始治疗。
研究了用3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺作为游离碱和甲磺酸盐口服施用进行治疗的功效。口服施用3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺游离碱(剂量为50mg/kg)、3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐(以以游离碱计的剂量8.5mg/kg、21mg/kg、34mg/kg和50mg/kg)对所处理的动物的平均存活的影响的研究结果在表17中给出。
如所呈现的数据所示，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺以游离碱和盐形式施用两者均导致所处理的动物的平均存活增加。对于用3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐处理的动物，观察到小鼠平均寿命对所施用的盐形式的s型依赖性。以40mg/kg的剂量(相当于以游离碱计34mg/kg)施用3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐与施用50mg/kg的游离碱具有相同的治疗效果。与对照组相比，以59mg/kg的剂量(相当于以游离碱计50mg/kg)施用3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐确保动物的生命增加到几乎两倍。该指标显示的盐形式的功效大于游离碱的功效。
表17—在BCR/ABL诱导的慢性髓系白血病模型中，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐对实验室动物的平均存活的影响
Figure GDA0002273044290000501
因此，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的游离碱和甲磺酸盐的功效的研究给出了意想不到的结果，表明盐形式的施用更有效，这表现在与接受等价剂量的游离碱的组相比，接受盐形式的组中的动物的平均存活时间更长。因此，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的更高的功效使得这种盐形式作为候选药物与游离碱相比更具吸引力。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的生物活性的研究
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐及其结晶形式的生物活性(为本公开的主题)已经在多种实验中进行了研究。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对人类激酶活性的作用的研究
在纳摩尔浓度范围内的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐抑制Bcr-Abl酪氨酸激酶，使该酶的临床上重要的突变体形式失活。Bcr-Abl激酶抑制实验的结果汇总在表18中。3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对野生型Bcr-Abl的半最大抑制浓度(IC50)范围为0.49-3.1nM(基于3次独立实验的结果)。对于具有T315I突变的Bcr-Abl的IC50范围为0.78-21nM(基于3次独立实验的结果)。
表18—3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对Bcr-Abl酪氨酸激酶(包括该酶临床上重要的突变形式)活性的作用
激酶 IC50,nM 激酶 IC50,nM
Bcr-Abl 0.49–3.1* Bcr-Abl(H396P) 1.0
Bcr-Abl(T315I) 0.78–21* Bcr-Abl(M351T) 2.8
Bcr-Abl(E255K) 9.5 Bcr-Abl(Q252H) 12
Bcr-Abl(F317I) 2.0 Bcr-Abl(Y253F) 4.1
Bcr-Abl(G250E) 7.4
在100nM的浓度下，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐显著(超过50％抑制)抑制(测试的337种激酶中的)下列人类酪氨酸激酶中的每一种的活性：ABL1、ABL2/ARG、BLK、DDR1、DDR2、EPHA2、EPHA8、EPHB2、FGR、FLT4/VEGFR3、FMS、FRK/PTK5、FYN、HCK、KDR/VEGFR2、LCK、LYN、LYN B、P38a/MAPK14、PDGFRa、PDGFRb、RAF1、RET、RIPK3、ZAK/MLTK，其中对于下列激酶超过90％的活性被抑制：ABL1、ABL2/ARG、DDR1、DDR2、FMS、FRK/PTK5、LCK、LYN、LYN B、PDGFRa、RET。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对多种肿瘤细胞系的细胞毒性的研究
在费城染色体阳性(Ph+)慢性髓性白血病(CML)和Ph+急性淋巴细胞白血病(ALL)模型中，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对未成熟的淋巴细胞(包括T315I突变细胞)显示出细胞毒性。在该实验期间，该药物对人类肿瘤细胞系K562(IC50 8nM)、KCL-22(IC509nM)和BV-173(IC50 5nM)(代表Ph+CML模型)以及Tom-1(IC50 5nM)、SupB15(IC50 50nM)细胞系(代表Ph+ALL模型)显示出毒性。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对于通过鼠科造血BaF3品系BCR-ABL基因或其以下突变体形式[1]的逆转录转导获得的模型肿瘤细胞系也显示出毒性：BaF3/BCR-ABL(IC50 5nM)、BaF3/BCR-ABL Y253F(IC50 25nM)、BaF3/BCR-ABL E255K(IC50 25nM)、BaF3/BCR-ABL F317L(IC50 250nM)和BaF3/BCR-ABL T315I(IC50 75nM)。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对人类肿瘤细胞系(包括但不限于急性淋巴细胞白血病细胞系(CCRF-CEM)、乳腺癌细胞系(MDA-MB-468)、卵巢癌细胞系(SKOV-3)和淋巴瘤细胞系(SR，EL4))也显示出细胞毒性。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐在异种移植慢性白血病模型中的功效的研究
在使用皮下植入K562细胞系细胞的除去胸腺的小鼠的异种移植模型的研究中，评估了以每天25mg/kg和40mg/kg(相应地，以游离碱计21mg/kg和34mg/kg)的剂量施用3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对肿瘤大小的作用。肿瘤大小已经达到500mm3后开始治疗，治疗持续时间为14天，随访期为240天。将3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐以每天25mg/kg的剂量(以游离碱计21mg/kg)施用导致肿瘤大小减小至不可测量的大小，随后在随访的第35天后增殖。将药物以每天40mg/kg的剂量(以游离碱计34mg/kg)施用在所有小鼠中导致在整个240天的随访期期间肿瘤消除而没有复发。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐在急性白血病模型中的功效的研究
在急性白血病小鼠模型中评估了3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的功效。为了诱发该病理，使用从患有诱发的急性白血病的C57BL/6N品系小鼠中获得的骨髓细胞。给予亚致死剂量的放射后，将细胞注射到动物的尾静脉。在病理诱发后第5天开始治疗并持续2周。研究结果表明，将3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐以40mg/kg的剂量(相当于以游离碱计的34mg/kg)口服施用导致与未接受治疗的对照组相比动物平均寿命增加超过25％。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐在肠道实体瘤模型中的功效的研究
在肠道实体瘤模型中研究了3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的功效。为了诱发病理，使用HCT116细胞系细胞。将200μL(2.5×107个细胞/mL)的量的细胞皮下注射到除去胸腺的雌性小鼠(SCID)的右侧。在肿瘤已经达到200mm3的大小后，所有小鼠的肿瘤大小随机化并在对照组和治疗组之间分配。在随机化后的第二天开始3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐以25mg/kg的剂量(相当于以游离碱计21mg/kg)的口服施用并持续20天。为了确定治疗完成(20天)后肿瘤生长抑制的功效，计算治疗组/对照组之间的平均大小比(％T/C)。研究结果表明，药物以25mg/kg的剂量施用导致几乎完全的肿瘤非播散(T/C<35％)。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐在非小细胞肺癌模型中的功效的研究
在该研究中使用除去胸腺的雄性小鼠。在氯胺酮/甲苯噻嗪麻醉下，将A549(1×107个细胞)用0.2mL的基质胶溶液(BD Pharmingen)注射到小鼠左腿中。在注射后一周内，将小鼠在肿瘤大小随机的治疗组和对照组之间分配。在随机化的第二天开始3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐以25mg/kg的剂量(相当于以游离碱计21mg/kg)的口服施用并持续20天。为了确定肿瘤生长抑制的功疗，计算了治疗组/对照组的平均大小比(％T/C)。研究结果表明，药物以25mg/kg的剂量施用导致几乎完全的肿瘤非播散(T/C<35％)。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的药代动力学的详细研究
在3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐在大鼠和犬中的药代动力学的研究中，发现口服施用后药物的生物利用度非常高：在剂量范围为2mg/kg至22mg/kg(以游离碱计2mg/kg至19mg/kg)时在犬中的生物利用度F＝45.9％-66.1％，在剂量范围为5mg/kg至80mg/kg(以游离碱计4.2mg/kg至68mg/kg)时在大鼠中的生物利用度F＝13.8％-59.5％。
在以5-50mg/kg的剂量范围对小鼠口服施用后2-4小时的时间段内，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐被吸收，达到相应的最大浓度82ng/mL至1099ng/mL。
浓度-时间曲线(AUC)下的面积贯穿从5mg/kg至50mg/kg的整个剂量范围从372ng*h/mL至12,104ng*h/mL线性变化。在以5mg/kg至80mg/kg的剂量范围向大鼠口服施用作为甲磺酸盐的药物后，药物在2.3-5.3小时内达到相应的最大浓度72ng/mL至1,250ng/mL。AUC贯穿5mg/kg至80mg/kg的整个剂量范围从430ng*h/mL至21,124ng*h/mL线性变化。
在以2mg/kg至45mg/kg的剂量范围对犬进行3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的口服施用后，从胃肠道吸收3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺相对缓慢，3-8.5小时后达到31.8ng/mL至224ng/mL范围内的最大血浆浓度。AUC贯穿从2mg/kg至22mg/kg的整个剂量范围从420ng*h/mL至5,480ng*h/mL线性变化，并且在随后剂量增加至45mg/kg期间不变(5,173ng*h/mL)。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺从全身血流中非常缓慢地消除；在犬中的半衰期约7小时，在大鼠和小鼠中为约3小时。静脉施用后的清除率非常高：犬为2.12L/h/kg，大鼠为1.61L/h/kg。大的表观分布容积(犬的Vd＝14.1L/kg，大鼠的为6.16L/kg)表明了在组织中药物的广泛分布。
对大鼠组织中的药物分布的研究揭示了物质在肺(大约比血浆高71倍)、脾脏(比血浆高45倍)、肾脏(比血浆高34倍)、骨髓(比血浆高27倍)、肝脏(比血浆高21倍)中的高浓度。暴露在脑中的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的浓度约占血浆暴露的20％。
根据使用细胞色素酶药物的研究，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺代谢涉及细胞色素P450亚型CYP3A4的参与，但不涉及下列细胞色素P450亚型：CYP1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6。3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺在大鼠、犬和人类的肝细胞中的新陈代谢的研究显示出相似的代谢物谱的形成，其中鉴定到两种谷胱甘肽缀合物(N-去甲基-衍生物和N-氧化物)。在大鼠和犬的血浆中鉴定到由3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的酰胺键的水解产生的羧酸产物。动物血浆中的这些代谢物的定量测定表明，代谢物的浓度-时间曲线下面积从未超过3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺自身暴露的浓度-时间曲线下面积的10％。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的安全性研究
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺药物(以甲磺酸盐的形式)是扩展的临床前安全性评估试验的主题，扩展的临床前安全性评估试验包括药物对离子hERG通道的作用的研究、单次和重复施用后药物毒性的评估以及化合物的变应性能力和免疫毒性的研究。
甲磺酸盐形式的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺药物(0.1-10μM)以7.8μM的IC50值抑制钾hERG通道。
急性毒性研究的结果表明，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐对小鼠的LD10为800mg/kg(相当于以游离碱计678mg/kg)，并且对于大鼠为2,000mg/kg(相当于以游离碱计1,695mg/kg)。对犬单次施用时该药物的MTD为45mg/kg(以游离碱计38mg/kg)。
根据2个独立研究的数据，对大鼠在28天内每日胃内施用，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的MTD达50-73mg/kg(以游离碱计42-62mg/kg)，其对应于第28天的C最大661±289ng/mL和AUC24 8,596±2,209ng*h/mL(对于50mg/kg的剂量)。
为了鉴定变应性性质，使用下列方法：使用豚鼠全身过敏反应模型和主动皮肤过敏反应模型来评价过敏原性活性；评价在表皮和结膜药物应用后豚鼠中的速发型过敏(ITH)反应和迟发型过敏(DTH)反应；评价小鼠中的DTH反应；在小鼠中研究对A伴刀豆球蛋白的炎症反应；测量嗜酸性粒细胞血细胞计数，评价对吞噬细胞嗜中性粒细胞活性的影响(硝基蓝四唑试验(NBT))，以及使用皮下注射药物的豚鼠模型的白细胞特异性溶解反应情况。在所研究的任何模型中，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐没有显示出任何可检测的变应性活性。
3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐的免疫毒性作用的研究表明，与对照组相比，对小鼠进行药物的单次胃内施用对于试验动物的血液中的血凝素和溶血素水平没有影响。对小鼠进行药物的胃内施用(21天)对血液中的血凝素和溶血素水平没有影响，在迟发型超敏反应试验中没有影响，在花环试验中没有影响，并且没有改变从血液中分离的中性粒细胞的吞噬活性。因此，进行的研究表明3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐没有毒性免疫作用。
利用Ames试验进行的基因毒性试验、在黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中诱发体细胞嵌合体的试验和使用鼠科骨髓细胞的中期染色体畸变分析的结果表明，3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的甲磺酸盐在任何模型中在所测试的所有剂量(浓度)下都没有基因毒性作用。

Claims (36)

1.一种甲磺酸与3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基))甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺的盐。
2.根据权利要求1所述的盐，其为3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐。
3.一种盐，其为结晶3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱基本上如图29所示。
4.根据权利要求3所述的盐，其中所述盐通过在220℃具有吸热转变的DSC曲线表征。
5.一种盐，其为结晶3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有衍射角值(2θ)的峰，所述有衍射角值(2θ)的峰包括至少2个、3个或4个选自14.5、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8和/或23.2的相对强度为约20％或更大的峰。
6.根据权利要求5所述的盐，其中所述盐包含空间群P21/n的单斜晶体。
7.根据权利要求6所述的盐，其中所述盐包含单斜晶体，所述单斜晶体具有通过使用CuKα1辐射、在25±5℃的粉末X射线衍射确定的晶胞参数
Figure FDA0002178777630000011
以及β＝108.9±0.1°。
8.根据权利要求7所述的盐，其中所述盐包含单斜晶体，所述单斜晶体具有通过使用CuKα1辐射、在25±5℃的粉末X射线衍射确定的晶胞参数
Figure FDA0002178777630000013
9.根据权利要求5所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有14.5、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8和/或23.2的衍射角值(2θ)的峰，每个峰具有约20％或更大的相对强度。
10.根据权利要求5所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有18.7的衍射角值(2θ)的峰作为具有最高相对强度的峰。
11.根据权利要求5所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个有选自以下的衍射角值(2θ)的峰：7.2、11.8、12.5、13.4、14.5、16.2、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、21.4、23.2、24.1、24.5、25.4和27.1。
12.根据权利要求11所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：7.2、11.8、12.5、13.4、14.5、16.2、16.9、17.2、17.4、18.7、20.8、21.4、23.2、24.1、24.5、25.4和27.1。
13.根据权利要求5所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有至少3个、4个、5个、6个、7个或8个有选自以下的衍射角值(2θ)的峰：11.8；14.5；16.2；16.9；17.2；17.4；18.7；20.8和23.0。
14.根据权利要求13所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：11.8；14.5；16.2；16.9；17.2；17.4；18.7；20.8和23.0。
15.根据权利要求5所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有选自以下的衍射角值(2θ)的至少3个、4个、5个或6个峰：14.5；16.9；17.2；17.4；18.7；和20.8。
16.根据权利要求15所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：14.5；16.9；17.2；17.4；18.7；和20.8。
17.根据权利要求5所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱基本上如图49(a)所示。
18.根据权利要求5所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱基本上如表6中所示的。
19.一种盐，其为结晶3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有衍射角值(2θ)的峰，所述有衍射角值(2θ)的峰包括少3个、4个、5个或6个选自11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0和22.6的相对强度为约20％或更大的峰。
20.根据权利要求19所述的盐，其中所述盐包含空间群P21/c的单斜晶体。
21.根据权利要求20所述的盐，其中所述盐包含单斜晶体，所述单斜晶体具有通过使用CuKα1辐射、在25±5℃的粉末X射线衍射确定的晶胞参数
Figure FDA0002178777630000021
和以及β＝117.8±0.1。
22.根据权利要求21所述的盐，其中所述盐包含单斜晶体，所述单斜晶体具有通过使用CuKα1辐射、在25±5℃的粉末X射线衍射确定的晶胞参数
Figure FDA0002178777630000024
23.根据权利要求19所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有选自17.6或21.2的衍射角值(2θ)的峰作为具有最高相对强度的峰。
24.根据权利要求19所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有选自以下的衍射角值(2θ)的至少3个、4个、5个、6个、7个或8个峰：7.3、11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0、22.6和26.1。
25.根据权利要求24所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：7.3、11.8、14.6、17.2、17.4、17.6、19.7、21.2、22.0、22.6和26.1。
26.根据权利要求19所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有有选自以下的衍射角值(2θ)的至少3个峰：17.4；17.6；19.4；19.7；21.2；22.0；22.6和25.9。
27.根据权利要求26所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有至少3个有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：17.4；17.6；19.4；19.7；21.2；22.0；22.6和25.9。
28.根据权利要求19所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有至少3个、4个、5个或6个有选自以下的衍射角值(2θ)的峰：17.4；17.6；19.7；21.2；22.0；和22.6。
29.根据权利要求28所述的盐，其中所述盐通过使用CuKα1辐射在25±5℃获得的X射线粉末图谱表征，所述X射线粉末图谱具有至少3个有下列衍射角值(2θ)的峰作为特征峰：17.4；17.6；19.7；21.2；22.0；和22.6。
30.一种制备结晶3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的方法，包括：
(1)使3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺与甲磺酸反应以形成3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐；以及
(2)冷却溶解在丙酮和乙醇中的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的溶液至约10℃的温度以形成结晶盐。
31.根据权利要求30所述的方法，其中在步骤(2)中丙酮和乙醇的比为约5:1v/v。
32.一种制备结晶3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的方法，包括：
(1)使3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺与甲磺酸反应以形成3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐；以及
(2)浓缩溶解在约5:1v/v的丙酮和乙醇的混合物中的3-(1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺单甲磺酸盐的溶液，然后冷却所述溶液至约20-25℃的温度以形成结晶盐。
33.根据权利要求1至5中任一项所述的盐，其是基本上分离的。
34.一种组合物，其包含权利要求1至5中任一项所述的盐以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
35.权利要求1至5中任一项所述的盐在制备用于治疗需要这种治疗的受试者的肿瘤疾病的药物中的用途，当所述药物被使用时，有效量的所述盐被施用至所述受试者。
36.根据权利要求35所述的用途，其中所述肿瘤疾病是急性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、肝细胞癌、非小细胞肺癌或胃肠道间质瘤。
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