CN108441571B

CN108441571B - 玉米分子标记在鉴定和调控玉米粗缩病抗性性状中的应用

Info

Publication number: CN108441571B
Application number: CN201710077816.8A
Authority: CN
Inventors: 徐明良; 刘保申; 刘庆彩; 邓穗宁; 陶永富
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2017-02-14
Filing date: 2017-02-14
Publication date: 2021-04-16
Anticipated expiration: 2037-02-14
Also published as: CN108441571A

Abstract

本发明公开了玉米分子标记在鉴定和调控玉米粗缩病抗性性状中的应用。本发明所公开的玉米分子标记，为以玉米的基因组DNA为模板、采用引物对A1进行扩增得到的DNA分子；A1能以玉米基因组为模板扩增得到含有序列5的第7418‑9965位的DNA片段。实验证明，本发明的玉米分子标记与玉米粗缩病抗性性状显著相关，可用于鉴玉米粗缩病抗性性状定；不含有序列5的第7418‑9965位的ZmGDI2基因可显著提高玉米对粗缩病的感病性，含有序列5的第7418‑9965位的ZmGDI1基因可显著提高玉米对粗缩病的抗病性，可利用ZmGDI2基因和ZmGDI1基因调控玉米对粗缩病的抗病性。

Description

玉米分子标记在鉴定和调控玉米粗缩病抗性性状中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，玉米分子标记在鉴定和调控玉米粗缩病抗性性状中的应用。

背景技术

玉米(Zea Mays L.)是我国的第一大粮食作物，在我国能源与粮食安全中占有举足轻重的位置。玉米粗缩病是一种世界性的病毒性病害，严重危害玉米的生产。自1954年在我国的新疆和甘肃地区发现以来，玉米粗缩病在我国各个产区，尤其是黄淮海地区，大面积爆发，引发大面积毁种或绝产，对玉米的生产造成严重威胁。2007年，山东省近5.33万hm²玉米因粗缩病绝产，2008年，山东省又遭受历史罕见的玉米粗缩病，全省发生面积达74万hm²。

在世界范围内导致玉米粗缩病的病原病毒是一种球状病毒，属呼肠孤病毒科，斐济病毒属，由10条双链RNA构成，主要由灰飞虱以持久性方式传播。分为四种：玉米粗缩病毒(Maize rough dwarf virus)，水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus)，里奥夸尔托病毒(Mal de RioCuarto virus)和South rice streaked dwarf virus。在我国，导致玉米粗缩病的的病原主要是水稻灰条矮缩病病毒。玉米粗缩病病毒宿主范围较广，主要是单子叶禾本科植物,如玉米、小麦、水稻等作物,以及狗尾草、马唐等杂草。灰飞虱在田间杂草上越冬并获毒，第二年春天将病毒传播至小麦和玉米上。

玉米粗缩病抗性鉴定的方法目前主要分为田间自然接种鉴定和室内接种鉴定两种。玉米在3-6叶期与带毒灰飞虱相遇最易感病。玉米在玉米感染粗缩病后的典型症状是在叶背出现白色蜡泪状脉突、手感粗糙、叶色深绿、叶片变短；植株显著矮化、茎间缩短；严重时不能抽穗或雌穗极小、变形、雄花少或无花粉。

路银贵等人对从美国引进的78份以及国内选育的69份玉米自交系进行了粗缩病抗性鉴定,发现E13和E115表现高抗，在国内自交系中，X178、P138、901141、9138和沈137的抗性表现较好。杨兴飞等人研究结果表明塘四平头群和P群总体最好，Reid群较差，旅大红骨和Lancaster群抗感病表现相差不大，说明玉米种质(遗传基础)对粗缩病的抗性起重要作用。

目前，粗缩病的防治主要依赖于化学防治和调整播期两种手段：化学防治污染环境并且增加成本；调整播期有很大的局限性，不仅浪费光温资源，又容易遭受后期的自然灾害，降低产量。所以筛选高抗粗缩病的玉米自交系是抗病育种的基础，但是目前市场推广的品种大部分处于高感或者中感水平，抗性较好的品种较少，玉米粗缩病抗性来源比较单一，主要来源于美国杂交种P78599。因此培育和推广种植抗病品种是对玉米粗缩病进行控制的持续有效手段。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何鉴定玉米的粗缩病抗性及如何调控玉米的粗缩病抗性。

为解决上述技术问题，本发明还提供了玉米分子标记或其多态性在鉴定或辅助鉴定玉米粗缩病抗性性状中的应用。

本发明所提供的玉米分子标记或其多态性在鉴定或辅助鉴定玉米粗缩病抗性性状中的应用中，所述玉米分子标记，为以玉米的基因组DNA为模板、采用引物对A1进行扩增得到的DNA分子或所述DNA分子的任意片段；所述A1能以玉米基因组为模板扩增得到序列5的第7418-9965位所示的DNA片段或其任意片段或含有序列5的第7418-9965位的DNA片段。

上述应用中，所述玉米分子标记可为序列表中序列5的第7036-10712位所示的DNA片段或序列6的第7033-8161位所示的DNA片段。

所述A1可由P1和P2组成；

所述P1为如下a1)至a4)中的任一种单链DNA：

a1)序列表中序列7所示的单链DNA；

a2)在a1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；

a3)与a1)或a2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；

a4)在严格条件下与a1)或a2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；

所述P2为如下b1)至b4)中的任一种单链DNA：

b1)序列表中序列8所示的单链DNA；

b2)在b1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；

b3)与b1)或b2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；

b4)在严格条件下与b1)或b2)限定的单链DNA杂交的单链DNA。

a2)所述单链DNA可为在序列7所示的单链DNA的5′端和/或3′端添加一至十个核苷酸得到的单链DNA。b2)所述单链DNA可为在序列8所示的单链DNA的5′端和/或3′端添加一至十个核苷酸得到的单链DNA。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的核苷酸序列具有85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

上述85％以上同一性，可为85％、90％或95％以上的同一性。

上述应用中，所述玉米分子标记可为序列表中序列5所示的DNA分子或序列6所示的DNA分子。

为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定玉米基因型的方法，所述基因型为RR基因型、RS基因型和SS基因型。

本发明所提供的鉴定玉米基因型的方法包括如下Ⅰ或Ⅱ或Ⅲ或Ⅵ：

Ⅰ、检测待测玉米基因组DNA中对应于序列表中序列5所示的DNA片段，如所述待测玉米基因组中两条染色体均为下述g1)的染色体，所述待测玉米为RR基因型；如所述待测玉米基因组中两条染色体均为下述g2)的染色体，所述待测玉米为SS基因型；如所述待测玉米基因组中两条染色体中一条为下述g1)的染色体，另一条为下述g2)的染色体，所述待测玉米为RS基因型；

g1)对应于序列5所示的DNA片段含有序列5的第7418-9965位所示的DNA片段；

g2)对应于序列5所示的DNA片段不含序列5的第7418-9965位所示的DNA片段；

Ⅱ、如下K1)和K2)：

K1)以待测玉米基因组DNA为模板，采用所述A1进行PCR扩增得到PCR产物；

K2)检测步骤K1)得到的PCR产物，根据所述PCR产物确定玉米基因型：

所述PCR产物含有B1且不含B2，所述待测玉米的基因型为RR基因型；所述PCR产物含有所述B1和所述B2，所述待测玉米的基因型为RS基因型；所述PCR产物含有所述B2且不含所述B1，所述待测玉米的基因型为SS基因型；

所述B1为一个含有b1的DNA分子，所述B2为一个不含有所述b1的DNA分子；所述b1为序列5的第7418-9965位所示的DNA片段或其任一片段；

Ⅲ、如下L1)和L2)：

L1)以待测玉米基因组DNA为模板，采用所述A1进行PCR扩增得到PCR产物；

L2)下述L21)或L22)：

L21)检测步骤L1)得到的PCR产物的大小，根据所述PCR产物的大小确定玉米基因型：

所述PCR产物含有1129bp和3677bp的DNA片段的所述待测玉米的基因型为RS基因型；所述PCR产物含有3677bp的DNA片段且不含有1129bp的DNA片段的所述待测玉米的基因型为RR基因型；所述PCR产物不含有3677bp的DNA片段且含有1129bp的DNA片段的所述待测玉米的基因型为SS基因型；

L22)检测步骤L1)得到的PCR产物的序列，根据所述PCR产物确定玉米基因型：

所述PCR产物含有序列5的第7036-10712位和序列6的第7033-8161位所示的DNA片段的所述待测玉米的基因型为RS基因型；所述PCR产物含有序列5的第7036-10712位所示的DNA片段、不含序列6的第7033-8161位所示的DNA片段，所述待测玉米的基因型为RR基因型；所述PCR产物含有序列6的第7033-8161位所示的DNA片段、不含序列5的第7036-10712位所示的DNA片段，所述待测玉米的基因型为SS基因型。

上述方法中，所述检测步骤K1)得到的PCR产物可为检测所述PCR产物的大小或序列，根据所述PCR产物确定玉米基因型为根据所述PCR产物的大小或序列进行确定。

上述方法中，采用所述A1进行PCR扩增的反应体系中所述P1和所述P2的浓度均可为0.4μM。

上述方法中，采用所述A1进行PCR扩增的退火温度可为60℃。采用所述A1进行PCR扩增的退火条件可为60℃15s。采用所述A1进行PCR扩增的变性、退火和延伸条件可为98℃10s，60℃15s，72℃2min。采用所述A1进行PCR扩增的变性、退火和延伸的循环数可为35。

为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定玉米粗缩病抗性性状的方法。

本发明所提供的鉴定玉米粗缩病抗性性状的方法，包括：利用所述鉴定玉米基因型的方法鉴定待测玉米的基因型，根据待测玉米的基因型确定所述待测玉米的粗缩病抗性性状：RR基因型待测玉米的粗缩病抗性高于或候选高于SS基因型待测玉米的粗缩病抗性，RR基因型待测玉米的粗缩病抗性高于或候选高于RS基因型待测玉米的粗缩病抗性。

为解决上述技术问题，本发明还提供了下述H1、H2、H3或H4的产品：

H1、所述玉米分子标记；

H2、所述玉米分子标记编码的蛋白质；

H3、所述蛋白质的编码基因；

H4、所述A1。

上述产品中，所述蛋白质为名称为ZmGDI1或ZmGDI2的蛋白质；所述ZmGDI1可为如下M11)或M12)：

M11)氨基酸序列是序列3的蛋白质；

M12)将序列表中序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

所述ZmGDI2可为如下M21)或M22)：

M21)氨基酸序列是序列4的蛋白质；

M22)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。

上述M12)中的ZmGDI1蛋白质和上述M22)中的ZmGDI2蛋白质，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加均可为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述M12)中的ZmGDI1蛋白质和上述M22)中的ZmGDI2蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述M12)中的ZmGDI1蛋白质的编码基因可通过将序列1的第136-1428位所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上标签的编码序列得到。

上述M22)中的ZmGDI2蛋白质的编码基因可通过将序列2的第136-1473位所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上标签的编码序列得到。

所述ZmGDI1的编码基因可为如下m11)-m14)中任一种：

m11)核苷酸序列是序列表中序列1的第136-1428位核苷酸的cDNA分子或DNA分子；

m12)核苷酸序列是序列表中序列1的DNA分子cDNA分子或DNA分子；

m13)与m11)或m12)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码所述ZmGDI1的cDNA分子或基因组DNA分子；

m14)在严格条件下与m11)或m12)限定的核苷酸序列杂交，且编码所述ZmGDI1的cDNA分子或基因组DNA分子；

所述ZmGDI2的编码基因可为如下m21)-m24)中任一种：

m21)核苷酸序列是序列表中序列2的第136-1473位核苷酸的cDNA分子或DNA分子；

m22)核苷酸序列是序列表中序列2的DNA分子cDNA分子或DNA分子；

m23)与m21)或m22)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码所述ZmGDI2的cDNA分子或基因组DNA分子；

m24)在严格条件下与m21)或m22)限定的核苷酸序列杂交，且编码所述ZmGDI2的cDNA分子或基因组DNA分子。

其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。

其中，序列1的第136-1428位所示的DNA分子编码序列3所示的ZmGDI1。序列2的第136-1473位所示的DNA分子编码序列4所示的ZmGDI2。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的编码所述ZmGDI1或所述ZmGDI2的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的所述ZmGDI1或所述ZmGDI2的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码所述ZmGDI1或所述ZmGDI2且具有所述ZmGDI1或所述ZmGDI2功能，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

上述75％以上同一性，可为75％、80％、85％、90％或95％以上的同一性。

为解决上述技术问题，本发明还提供了下述任一应用：

X1、所述玉米分子标记在玉米育种中的应用；

X2、所述鉴定玉米基因型的方法在鉴定玉米粗缩病抗性性状中的应用；

X3、所述鉴定玉米基因型的方法或所述鉴定玉米粗缩病抗性性状的方法在玉米育种中的应用；

X4、序列5所示的DNA分子或所述ZmGDI1或所述ZmGDI1的编码基因在培育粗缩病抗性植物中的应用；

X5、序列5所示的DNA分子或所述ZmGDI1或所述ZmGDI1的编码基因在制备提高植物粗缩病抗性产品中的应用；

X6、序列5所示的DNA分子或所述ZmGDI1或所述ZmGDI1的编码基因在提高植物粗缩病抗性中的应用；

X7、序列5所示的DNA分子或所述ZmGDI1或所述ZmGDI1的编码基因在调控植物粗缩病抗性中的应用；

X8、序列6所示的DNA分子或所述ZmGDI2或所述ZmGDI2的编码基因在培育粗缩病敏感植物中的应用

X9、序列6所示的DNA分子或所述ZmGDI2或所述ZmGDI2的编码基因在制备降低植物粗缩病抗性产品中的应用；

X10、序列6所示的DNA分子或所述ZmGDI2或所述ZmGDI2的编码基因在降低植物粗缩病抗性中的应用；

X11、序列6所示的DNA分子或所述ZmGDI2或所述ZmGDI2的编码基因在调控植物粗缩病抗性中的应用。

为解决上述技术问题，本发明还提供了下述L或M的方法：

L、玉米育种方法，按照所述鉴定玉米基因型的方法鉴定玉米的基因型，选择RR或RS基因型的玉米作为亲本进行育种；

M、培育转基因植物的方法，为下述M1或M2：

M1、培育粗缩病敏感转基因植物的方法，包括M1a或/和M1b：

M1a、增加目的植物中所述ZmGDI2的活性或增加目的植物中所述ZmGDI2的含量或促进所述ZmGDI2的编码基因的表达，得到转基因植物；所述转基因植物粗缩病抗性低于所述目的植物；

M1b、降低目的植物中所述ZmGDI1的活性、降低目的植物中所述ZmGDI1的含量、抑制目的植物中所述ZmGDI1的编码基因的表达或敲除目的植物中所述ZmGDI1的编码基因，得到转基因植物；所述转基因植物粗缩病抗性低于所述目的植物；

M2、培育抗粗缩病转基因植物的方法，包括M2a和/或M2b：

M2a、增加目的植物中所述ZmGDI1的活性或增加目的植物中所述ZmGDI1的含量或促进所述ZmGDI1的编码基因的表达，得到转基因植物；所述转基因植物粗缩病抗性高于所述目的植物；

M2b、降低目的植物中所述ZmGDI2的活性、降低目的植物中所述ZmGDI2的含量、抑制目的植物中所述ZmGDI2的编码基因的表达或敲除目的植物中所述ZmGDI2的编码基因，得到转基因植物；所述转基因植物粗缩病抗性低于所述目的植物。

所述增加目的植物中所述ZmGDI2的含量可通过向所述目的植物中导入所述ZmGDI2的编码基因或所述ZmGDI2基因实现。所述增加目的植物中所述ZmGDI1的含量可通过向所述目的植物中导入所述ZmGDI1的编码基因或所述ZmGDI1基因实现。

本发明中，所述植物可为R1或R2：R1、单子叶植物或双子叶植物；R2、玉米。

所述1129bp和3677bp的DNA片段可通过电泳和/或测序检测。在利用电泳进行检测时，所述1129bp的DNA片段具体可体现为在1000bp与2000bp间有一条带，所述3677bp的DNA片段具体可体现为在3000bp与5000bp间有一条带。

实验证明，利用本发明的玉米分子标记可以鉴定玉米的粗缩病抗性性状：与两条染色体都含有序列5的第7418-9965位的RR基因型(即两条染色体均含有ZmGDI1基因)玉米相比，两条染色体都不含有序列5的第第7418-9965位的SS基因型(即两条染色体均含有ZmGDI2基因)和两条染色体一条含有序列5的第第7418-9965位、一条不含有序列5的第第7418-9965位的RS基因型(即一条染色体含有ZmGDI1基因、一条染色体含有ZmGDI2基因)的粗缩病抗性均显著降低，SS基因型与RS基因型玉米的粗缩病抗性无显著差异，表明，本发明的玉米分子标记与玉米粗缩病抗性性状显著相关，可用于鉴玉米粗缩病抗性性状定。

将ZmGDI2的编码基因导入粗缩病感病玉米中后与抗病玉米杂交并将其子代与该抗病玉米回交得到的RR基因型的含有ZmGDI2的编码基因的玉米粗缩病抗性显著下降，说明，来源于粗缩病感病玉米的ZmGDI2基因可显著提高玉米对粗缩病的感病性，来源于粗缩病抗病玉米的ZmGDI1基因可显著提高玉米对粗缩病的抗病性。表明，可利用ZmGDI2基因和ZmGDI1基因调控玉米对粗缩病的抗病性。

附图说明

图1为不同基因型玉米的病情指数。

图2为感病自交系HuangC(SS)和抗病自交系X178(RR)组配的近等基因系后代中玉米分子标记与玉米粗缩病抗性性状的相关性分析。图中小写字母为差异显著性分析结果，相同字母间差异不显著，不同字母间差异显著。

图3为pBCXUN-ZmGDI2示意图。

图4为阳性BC₂T₂F₁代材料的粗缩病抗性检测结果。

图5为阳性BC₂T₂F₁代材料的ZmGDI2编码基因表达量的检测结果。

图6为成套引物1鉴定玉米基因型的结果。其中，1：

Plus DNA Marker(北京全式金生物技术有限公司)；2：阴性对照(B73基因组DNA)；3：阳性对照(X178基因组DNA)；4-8：转基因植株，其中4-7是RR基因型的结果，8是RS类型RR基因型的结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

下述实施例中的pBCXUN载体是将pCXUN(Chen et al.；A Versatile ZeroBackground T-Vector System for Gene Cloning and Functional Genomics 2009，Plant Physol.150，1111-1121)载体的植物抗性基因HYG基因替换为PPT(BASTA)基因得到的载体。

其中，pCXUN载体中HYG基因的序列为：

tatttctttgccctcggacgagtgctggggcgtcggtttccactatcggcgagtacttctacacagccatcggtccagacggccgcgcttctgcgggcgatttgtgtacgcccgacagtcccggctccggatcggacgattgcgtcgcatcgaccctgcgcccaagctgcatcatcgaaattgccgtcaaccaagctctgatagagttggtcaagaccaatgcggagcatatacgcccggagtcgtggcgatcctgcaagctccggatgcctccgctcgaagtagcgcgtctgctgctccatacaagccaaccacggcct ccagaagaagatgttggcgacctcgtattgggaatccccgaacatcgcctcgctccagtcaatgaccgctgttatgcggccattgtccgtcaggacattgttggagccgaaatccgcgtgcacgaggtgccggacttcggggcagtcctcggcccaaagcatcagctcatcgagagcctgcgcgacggacgcactgacggtgtcgtccatcacagtttgccagtgatacacatggggatcagcaatcgcgcatatgaaatcacgccatgtagtgtattgaccgattccttgcggtccgaatgggccgaacccgctcgtctggctaagatcggccgcagcgatcgcatccatagcctccgcgaccggttgtagaacagcgggcagttcggtttcaggcaggtcttgcaacgtgacaccctgtgcacggcgggagatgcaataggtcaggctctcgctaaactccccaatgtcaagcacttccggaatcgggagcgcggccgatgcaaagtgccgataaacataacgatctttgtagaaaccatcggcgcagctatttacccgcaggacatatccacgccctcctacatcgaagctgaaagcacgagattcttcgccctccgagagctgcatcaggtcggagacgctgtcgaacttttcgatcagaaacttctcgacagacgtcgcggtgagttcaggctttttcat。

pBCXUN载体中PPT(BASTA)基因的序列为：

tcagatctcggtgacgggcaggaccggacggggcggaaccggcaggctgaagtccagctgccagaaacccacgtcatgccagttcccgtgcttgaagccggccgcccgcagcatgccgcggggggcatatccgagcgcctcgtgcatgcgcacgctcgggtcgttgggcagcccgatgacagcgaccacgctcttgaagccctgtgcctccagggacttcagcaggtgggtgtagagcgtggagcccagtcccgtccgctggtggcggggggagacgtacacggtagactcggccgtccagtcgtaggcgttgcgtgccttccaggggccagcgtaggcgatgccggcgacctcgccgtccacctcggcgacgagccagggatagcgctcccgcagacggacgaggtcgtccgtccactcctgcggttcctgcggctcggtacggaagttgaccgtgcttgtctcgatgtagtggttgacgatggtgcagaccgccggcatgtccgcctcggtggcacggcggatgtcggccgggcgtcgttctgggctcatagatccggtgcagattatttggattgagagtgaatatgagactctaattggataccgagg。

实施例1、玉米分子标记在鉴定玉米粗缩病抗性性状中的应用

本实施例提供的玉米分子标记为以引物对A1进行扩增得到的DNA分子；A1为由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA(名称分别为P1和P2)组成的引物对。A1能以玉米基因组为模板扩增得到序列5的第7036-10712位所示的DNA片段或序列6的第7033-8161位所示的DNA片段。与序列5的第7036-10712位所示的DNA片段相比，序列6的第7033-8161位所示的DNA片段中缺少序列5的第7418-9965位。

1、现有自交系中玉米分子标记与玉米粗缩病抗性性状的相关性分析

1.1、待测玉米

检测对象为619份不同来源的玉米自交系(表1)。

1.2、基因型的鉴定

取幼苗期的玉米叶片提取基因组DNA,利用北京擎科新业生物技术有限公司的I-52X High-Fidelity Master Mix(货号：TP001)和引物对A1进行PCR扩增。

PCR反应体系：

PCR反应程序：

对得到的PCR产物进行电泳与测序，将PCR产物中含有序列5的第7036-10712位所示的DNA片段且不含有序列6的第7033-8161位所示的DNA片段的玉米定义为RR基因型；将PCR产物中含有序列6的第7033-8161位所示的DNA片段且不含有序列5的第7036-10712位所示的DNA片段的玉米定义为SS基因型；将PCR产物中含有序列5的第7036-10712位所示的DNA片段和序列6的第7033-8161位所示的DNA片段的玉米定义为RS基因型。各玉米的基因型如表1所示。在进行电泳时，利用北京全式金生物技术有限公司的Trans2K Plus DNA Marker(货号BM111-01)作为DNA分子量标准，序列5的第7036-10712位所示的DNA片段显示为在3000bp与5000bp间有一条带，序列6的第7033-8161位所示的DNA片段显示为在1000bp与2000bp间有一条带。

表1、各玉米自交系的基因型

1.3、抗性的鉴定

按照如下方法检测各玉米自交系的粗缩病抗性：

共对表1中183个玉米自交系进行了抗病性检测。其中，NT411，HuangC,X178记载在文献(Tao et al.,Identification and fine-mapping of a QTL,qMrdd1,that confersrecessive resistance to maize rough dwarf disease,BMC Plant Biology 2013,13:145)中，F7和FAP1360A记载在文献(Tao et al.,Combined linkage and associationmapping reveals candidates for Scmv1,a major locus involved in resistance tosugarcane mosaic virus(SCMV)in maize BMC Plant Biology 2013,13:162)，177,268,501,1323,3411,5237,7381,9782,4F1,835a,A619,B11,B110,By4839,By4944,By813,By843,BZN,CIMBL102,CIMBL110,CIMBL111,CIMBL114,CIMBL117,CIMBL123,CIMBL124,CIMBL144,CIMBL148,CIMBL149,CIMBL16,CIMBL29,CIMBL31,CIMBL39,CIM BL5,CIMBL58,CIMBL65,CIMBL82,CIMBL88,CIMBL91,CIMBL93,CML113,CML148,CML162,CML165,CML166,CML170,CML20,CML228,CML286,CML304,CML305,CML31,CML428,CML471,CML493,CML50,CML51,D863F,Dan3130,Dan360,Dan599,DE.EX,DH29,FCD0602,GEMS11,GEMS12,GEMS13,GEMS14,GEMS15,GEMS16,GEMS17,GEMS18,GEMS20,GEMS21,GEMS23,GEMS28,GEMS41,GEMS47,GEMS48,G EMS50,GEMS51,GEMS52,GEMS55,GEMS57,GEMS59,GEMS6,GEMS62,GEMS65,GEMS9,GY1032,Gy386,IRF291,IRF314,J4112,JH59,Ji846,Liao138,Liao5114,LK11,P138,Qi319,Ry684,Ry729,Shen137,SW92E114,Sy1128,U8112,XZ698,Ye478,Yu374,ZaC546,ZH68,Zheng29,Zheng30,Zhi41,Zh ong69,ZZ01,ZZ03记载在文献(Yang et al.,Characterization of a global germplasm collection and its potentialutilization for analysis of complex quantitative traits in maize,Mol Breeding(2011)28:511–526)中，W22记载在文献(Hsiao-Yi Hunga et al.,ZmCCT and the geneticbasis of day-length adaptation underlying the postdomestication spread ofmaize,PNAS,Published online June 18,2012,E1913–E1921)中，BM,Tie7922,旱21记载在文献(刘志斋等，基于40个核心SSR标记揭示的820份中国玉米重要自交系的遗传多样性与群体结构，中国农业科学2012,45(11):2107-2138)中，邢抗36记载在文献(田志刚等，邢抗系列抗虫玉米品种(系)的特性鉴定及分析，河北农业科学，2004年12月，第8卷第4期)中，835,多黄29,海9-21,黄早4,金黄96B,品1p6co,齐318,中黄68记载在文献(史利玉等，玉米抗粗缩病毒SCAR分子标记的开发，中国农业科学，2011，44(9)：1763—177)中，698-3,ca339,CL1165记载在文献(李新海，玉米抗粗缩病全基因组关联与连锁分析，中国农业科学院博士学位论文，2013年6月)中，旱23,黄野4记载在文献(路银贵等，国内及国外玉米自交系抗粗缩病性鉴定及分析，河北农业科学,2001,5(4):22-25.)，青农105,中江玉703记载在文献(蒋飞.玉米抗粗缩病材料的鉴定与筛选，山东农业大学,2011)中。

抗病性检测利用的是人工培养的携带RBSDV的带毒灰飞虱，该带毒灰飞虱为河北省农科院植保所产品。将两叶一心期的玉米幼苗用防虫网罩住，将四龄的带毒灰飞虱接种于防虫网内，按7头/株的量接种。接种后四天除去防虫网，将玉米幼苗移栽到温室中。在成熟期观察玉米表型，按发病级别分为0,0.25,0.5,0.75和1共5个等级，统计粗缩病病级并计算病情指数。每个玉米自交系接种30株。每个玉米自交系均利用未接种带毒灰飞虱的同种玉米作为对照。粗缩病分级标准如表3，病情指数如表2所示。

表2、玉米基因型与粗缩病抗性

注：NA表示没有表型，原因是没有出苗。

表3、粗缩病分级标准

分级	节间缩短	株高	蜡突	雌穗	雄穗
						0	正常	正常	没有	正常	正常
0.25	轻微	4/5	没有	正常	正常
						0.5	明显	2/3	有	正常	正常
0.75	严重1	1/2	有	畸形	畸形
						1	严重2	<1/2	有	没有	没有

表3中，“节间缩短”列中，“正常”是指与未接种带毒灰飞虱的同种玉米自交系的正常节间，“轻微”是指为“正常”节间的1～4/5(不包括1，包括4/5)的节间，“明显”是指为“正常”节间的4/5～2/3(不包括4/5，包括2/3)的节间，“严重1”是指为“正常”节间的2/3～1/2(不包括2/3，包括1/2)的节间，“严重2”是指小于等于“正常”节间的1/2的节间。

“株高”列中，“正常”是指与未接种带毒灰飞虱的同种玉米自交系的正常株高，“4/5”是指为“正常”株高的1～4/5(不包括1，包括4/5)的株高，“2/3”是指为“正常”株高的4/5～2/3(不包括4/5，包括2/3)的株高，“1/2”是指为“正常”株高的4/5～2/3(不包括4/5，包括2/3)的株高，“<1/2”是指小于等于“正常”株高的1/2的株高。

“雌穗”列中，“正常”是指与未接种带毒灰飞虱的同种玉米自交系表型相同，有相似大小的果穗和花丝。

“雄穗”列中，“正常”是指与未接种带毒灰飞虱的同种玉米自交系表型相同，能正常大量散粉。

病情指数计算：

病情指数(DSI)＝∑(个体分级×各个分级的个体数)×100/(1×总株数)

计算具有病情指数的相同基因型玉米的平均病情指数，结果如表4和图1所示。

表4、各基因型的病情指数

年份、地点	RR基因型	SS基因型
			2013年济宁	26.437±4.827	53.377±2.467
2014年济宁	6.760±1.219	10.267±0.795
			2014年泰安	5.691±1.169	15.373±1.077
2015年开封	79.833±4.514	95.513±0.895

结果显示，RR基因型玉米的病情指数均显著低于SS基因型玉米，表明，本发明的玉米分子标记与玉米粗缩病抗性性状显著相关，可用于鉴玉米粗缩病抗性性状定。

2、感病自交系HuangC和抗病自交系X178组配的近等基因系后代中玉米分子标记与玉米粗缩病抗性性状的相关性分析

2.1感病自交系HuangC(SS)和抗病自交系X178(RR)组配的近等基因系后代

将感病自交系HuangC(SS基因型)和抗病自交系X178(RR基因型)杂交，得到F1，F1自交得到F2，之后利用单粒传法自交至F8，保证背景基本纯合后。利用实施例1中的引物对A1对F8的基因组DNA进行鉴定，筛选RS基因型植株。将RS基因型的单株进行自交，得到的后代可以分离出RR、SS和RS三种基因型，即HuangC和X178的近等基因系后代。

按照步骤1中的方法鉴定HuangC和X178的近等基因系后代的基因型，然后于2013年、2014年、2016年进行不同基因型的粗缩病抗性检测，抗病性检测利用的是人工培养的携带RBSDV的带毒灰飞虱，该带毒灰飞虱为河北省农科院植保所产品。将两叶一心期的玉米幼苗用防虫网罩住，将四龄的带毒灰飞虱接种于防虫网内，按7头/株的量接种。接种后四天除去防虫网，将玉米幼苗移栽到温室中。在成熟期观察玉米表型，按发病级别分为0,0.25,0.5,0.75和1共5个等级，统计粗缩病病级(表3)并计算病情指数。每种近等基因系均利用未接种带毒灰飞虱的同种玉米作为对照。

计算具有病情指数的相同基因型玉米的平均病情指数，结果如表5和图2所示。

表5、各基因型的病情指数

年份、地点	RR基因型	SS基因型	RS基因型
				2013年	36.111±9.311	72.500±8.949	60.795±5.995
2014年	1.923±1.081	9.167±4.401	11.250±3.435
				2016年	56.457±2.882	78.448±2.742	74.508±2.167

结果显示，RR基因型玉米的病情指数均显著低于SS基因型和RS基因型的玉米，SS基因型和RS基因型的玉米的病情指数没有显著差异。表明，本发明的玉米分子标记与玉米粗缩病抗性性状显著相关，可用于鉴玉米粗缩病抗性性状定。

实施例2、玉米分子标记在调控玉米粗缩病抗性性状中的应用

将来源于抗病玉米自交系X178的含有序列5的第7036-10712位所示的DNA片段的完整基因的基因组DNA命名为ZmGDI1基因，将ZmGDI1基因编码的蛋白质命名为ZmGDI1，将ZmGDI1基因中的CDS序列命名为ZmGDI1编码基因，ZmGDI1基因的序列为序列表中序列5，ZmGDI1的序列为序列表中序列3，ZmGDI1编码基因的序列为序列表中序列1的第136-1428位。从实施例1的结果可知，ZmGDI1基因为隐性粗缩病抗病基因。

将来源于感玉米粗缩病的玉米自交系B73的含有序列6的第7033-8161位所示的DNA片段的完整基因的基因组DNA命名为ZmGDI2基因，将ZmGDI2基因编码的蛋白质命名为ZmGDI2，将ZmGDI2基因中的CDS序列命名为ZmGDI2编码基因，ZmGDI2基因的序列为序列表中序列6，ZmGDI2的序列为序列表中序列4，ZmGDI2编码基因的序列为序列表中序列2的第136-1473位。从实施例1的结果可知，ZmGDI2基因为显性粗缩病感病基因。

对实施例中的部分抗病自交系进行检测，发现X178、7381、NT411、Shen137均含有序列5所示的ZmGDI1基因不含有序列6所示的ZmGDI2基因；对实施例中的部分感病自交系进行检测，发现HuangC、F7、FAP1360A、Zheng29均含有序列6所示的ZmGDI2基因不含有序列5所示的ZmGDI1基因。

1、转基因材料的制备

利用限制性内切酶XcmI在pBCXUN载体的XcmI的识别序列中插入序列2的第136-1473位所示的ZmGDI2编码基因，得到重组载体，将该重组载体命名为pBCXUN-ZmGDI2。

pBCXUN-ZmGDI2示意图如图2所示。pBCXUN-ZmGDI2能表达序列4所示的ZmGDI2蛋白质。

将pBCXUN-ZmGDI2导入农杆菌EH105中，得到重组菌，将该重组菌命名为EH105-pBCXUN-ZmGDI2；将pBCXUN载体导入农杆菌EH105中，得到重组菌，作为对照菌株。

利用农杆菌介导法将EH105-pBCXUN-ZmGDI2转化感玉米粗缩病的玉米材料B73(Yang X,Gao S,Xu S,et al.Characterization of a global germplasm collectionand its potential utilization for analysis of complex quantitative traits inmaize[J].Molecular Breeding,2011,28(4):511-526.)幼胚，利用除草剂抗性对转化阳性愈伤进行筛选，最后得到T₀代-T₂代转基因阳性植株。同时利用对照菌株设置转空载体对照。

将T₂代转基因阳性植株与抗病自交系X178(刘志斋,吴迅,刘海利,等.基于40个核心SSR标记揭示的820份中国玉米重要自交系的遗传多样性与群体结构[J].中国农业科学,2012,45(11):2107-2138.)进行杂交，其子代为T₂F₁代。将利用成套引物1鉴定的RR基因型且BAR基因引物鉴定阳性的T₂F₁代的材料继续与X178回交，产生BC₁T₂F₁代材料；利用成套引物1和BAR基因引物进行筛选，将RR基因型的BAR基因引物鉴定阳性的BC₁T₂F₁代材料继续与X178回交，得到的BC₂T₂F₁材料；利用成套引物1和BAR基因引物进行筛选，得到RR基因型的BAR基因引物鉴定阳性的BC₂T₂F₁代材料，该材料含有ZmGDI1基因不含有ZmGDI2基因。

成套引物1用于检测玉米材料是否带有ZmGDI1基因和ZmGDI2基因，成套引物1由引物GDI-F(CCTGCTACAATACCTCTGTTGA)、引物GDI-R1(GTTCGGACTGTGGATTATCG)和引物GDI-R2(GTACCTGGACATCGTCGAAG)组成，2X Taq Mix为北京艾德莱生物科技有限公司产品。在利用成套引物1在按照如下反应体系和反应条件进行PCR扩增鉴定待测玉米材料时，如PCR扩增产物含有630bp的条带不含有413bp的条带，待测玉米为RR基因型，如PCR扩增产物含有413bp的条带不含有630bp的条带，待测玉米为SS基因型，如PCR扩增产物含有413bp的条带和630bp的条带，待测玉米为RS基因型(图6)。

PCR反应体系：

PCR反应条件：

利用BAR基因引物鉴定时，以ddH₂O为空白对照，玉米材料B73基因组DNA为阴性对照，重组载体pBCXUN-ZmGDI2为阳性对照，得到351bp的材料为BAR基因引物鉴定阳性玉米。BAR基因引物序列为：BAR-F：5’-GGTGGACGGCGAGGTCGCCG-3’；BAR-R：5’-TCGGTGACGGGCAGGACCGG-3’。

2、粗缩病抗性检测

对以上RR基因型的BAR基因引物鉴定阳性的BC₂T₂F₁代材料进行粗缩病抗性检测，以同代阴性植株(即BC₂T₂F₁代中BAR基因引物未扩增出目的条带的RR基因型材料)作为阴性对照。抗病性检测利用的是人工培养的携带RBSDV的带毒灰飞虱，该带毒灰飞虱为河北省农科院植保所产品。将两叶一心期的玉米幼苗用防虫网罩住，将四龄的带毒灰飞虱接种于防虫网内，按7头/株的量接种。接种后四天除去防虫网，将玉米幼苗移栽到温室中。在成熟期观察玉米表型，按发病级别分为0,0.25,0.5,0.75和1共5个等级，统计粗缩病病级(表3)并计算病情指数。每个转基因事件接种60株，共接种两个转基因事件的玉米材料(OE-1和OE-2)。一个转基因事件是指得到一个T₀代转基因阳性植株的外源基因的插入，每个T₀代转基因及其后代属于同一个转基因事件。

利用引物TS-R/TS-F(序列见表6)对RR基因型的BAR基因引物鉴定阳性的BC₂T₂F₁代材料OE-1和OE-2的cDNA进行扩增,测序后发现阳性的BC₂T₂F₁代材料OE-1和OE-2均可扩增出序列2的第383-1110位所示的ZmGDI2编码基因片段，而同代阴性对照则不能扩增出该DNA片段。

抗病性状检测结果如图3所示，可以看出，阳性BC₂T₂F₁代材料OE-1和OE-2的病情指数均显著高于其同世代中不带有转ZmGDI2基因插入片段的同胞植株。这些结果表明ZmGDI2编码基因、ZmGDI2基因及ZmGDI2可以降低抗粗缩病玉米的粗缩病抗性，而ZmGDI1编码基因、ZmGDI1基因及ZmGDI1可以提高抗粗缩病玉米的粗缩病抗性，并且ZmGDI2基因为显性粗缩病感病基因，ZmGDI1基因为隐性粗缩病抗病基因。

3、ZmGDI2编码基因表达量的检测

分别提取阳性BC₂T₂F₁代材料OE-1和OE-2的总RNA，反转录得到cDNA作为模板，用下表6的引物TS-F和TS-R进行RT-PCR扩增，以ZmGAPDH为内参，GAPDH2LP和GAPDH2RP为内参引物。以同世代中不带有转ZmGDI2基因插入片段的同胞植株作为阴性对照(CK)，利用感病玉米HuangC作为阳性对照。

表6、RT-PCR所用引物与内参

结果如图4所示：与阴性对照相比，在阳性BC₂T₂F₁代材料中ZmGDI2编码基因的表达量明显提高。图4中，L1与L2分别表示阳性BC₂T₂F₁代材料OE-1和OE-2。

上述实验结果表明，来源于粗缩病感病玉米的ZmGDI2基因可显著提高玉米对粗缩病的感病性，来源于粗缩病抗病玉米的ZmGDI1基因可显著提高玉米对粗缩病的抗病性。

<110> 中国农业大学

<120> 玉米分子标记在鉴定和调控玉米粗缩病抗性性状中的应用

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1687

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 1

ctactaccct cccacctgcg agactgcaac gccgttgctt caactcgact ccagcatccc 60

tcgtccccgc atcaccgcgc cgccgacact ccgctcgctt tcgctcccga gacccgggcc 120

tgccgagccg ccgccatgga cgaggagtac gacgtgatcg ttctgggcac ggggctcaag 180

gagtgcatcc tcagcggtct cctctctgtc gacggcctca aggttctaca catggataga 240

aatgattact acggaggaga ttccacctcc ctaaacctga accagctctg gaagaggttt 300

aggggggaag acaagccacc ggcacatcta ggtgcaagca gagattacaa tgtagacatg 360

gttccaaagt ttatgatggc aaacgggact ttggttcgca ctctcattca cactgatgtg 420

acaaaatatt tgtcattcaa agctgttgat ggaagctatg tcttcagcaa acggaagatt 480

cacaaggttc ctgccaccga tatggaggct ctaaaatctc ctttgatggg tctatttgag 540

aaacgtagag caaggaactt ttttgtttac gtccaaaatt acaatgaagc tgatccagtg 600

acacatcagg ggttggacct cacaaggatt acaactagag aattgatttt gaaacatgga 660

ttgagtgatg acactgtgga ttttattggc catgcactcg ctctgcacag ggatgatcgt 720

tacctaaatg aacctgccct tgatactgta aaaaggatga agctttacgc tgagtctctt 780

gcacgttttc aaggaggctc gccttatatt tatccattat atgggttggg tgagctgcca 840

caggcttttg cacgtctaag tgctgtttat ggtggtacat atatgttaaa taaaccagag 900

tgcaaggttg aatttgatat cgaagggaaa gtgtgtggtg ttacttcaga aggtgaaacg 960

gcgaaatgca aaaaggttgt ctgtgatcct tcttacttgc ctagcaagat tcttatgccg 1020

tgggaattca gtagtttaaa tgaggtaacc agtctaccac gccgcttcaa gaacatagat 1080

atgcacgggt atgttttctg ttgctcatat acacataatg ttgcgccaaa agggaagttc 1140

attgcatttg tgtctgcgga agctgagacc gataatccac agtccgaact aaagcctgga 1200

attgatctac ttggtcaagt agatgaactg ttttttgata tgtatgacag atacaaacct 1260

gtcaatgaac catctcttga taattgcttt gtttcaatga gttatgatgc tactacacac 1320

tttgagacaa ctgtgacaga tgttctcagt atgtacacag caattactgg aaagaccgtt 1380

gatctcagtg tggacctgag cgctgccagc gcagctgaag aatactagag attttcctat 1440

tagagatacc atactctaaa gaagaacggt gttaacacag gccctgcctg gtggcttgcc 1500

aggtttagat ctatgctgca gctgcagcca attaaacgga cagaacatat caccctatag 1560

catttacatg gcgtttaaac acaagaccgt ttaggatgat ggtggtggtt cctttgttcc 1620

ttgcattatt gatcggatgg ttaactttta actgtgctca cgtttgctac aacctgctcg 1680

ttcttgt 1687

<210> 2

<211> 1703

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 2

ctactaccct cccacctgcg agactgcaac gccgttgctt caactcgact ccagcatccc 60

tcgtccccgc atcaccgcgc cgccgacact ccgctcgctt tcgctcccga gacccgggcc 120

tgccgagccg ccgccatgga cgaggagtac gacgtgatcg ttctgggcac ggggctcaag 180

gagtgcatcc tcagcggtct cctctctgtc gacggcctca aggttctaca catggataga 240

aatgattact acggaggaga ttccacctcc ctaaacctga accagctctg gaagaggttt 300

aggggggaag acaagccacc ggcacatcta ggtgcaagca gagattacaa tgtagacatg 360

gttccaaagt ttatgatggc aaacgggact ttggttcgca ctctcattca cactgatgtg 420

acaaaatatt tgtcattcaa agctgttgat ggaagctatg tcttcagcaa acggaagatt 480

cacaaggttc ctgccaccga tatggaggct ctaaaatctc ctttgatggg tctatttgag 540

aaacgtagag caaggaactt ttttgtttac gtccaaaatt acaatgaagc tgatccagtg 600

acacatcagg ggttggacct cacaaggatt acaactagag aattgatttt gaaacatgga 660

ttgagtgatg acactgtgga ttttattggc catgcactcg ctctgcacag ggatgatcgt 720

tacctaaatg aacctgccct tgatactgta aaaaggatga agctttacgc tgagtctctt 780

gcacgttttc aaggaggctc gccttatatt tatccattat atgggttggg tgagctgcca 840

caggcttttg cacgtctaag tgctgtttat ggtggtacat atatgttaaa taaaccagag 900

tgcaaggttg aatttgatat cgaagggaaa gtgtgtggtg ttacttcaga aggtgaaacg 960

gcgaaatgca aaaaggttgt ctgtgatcct tcttacttgc ctagcaaggt aaggaagatt 1020

ggaaaagttg cacgtgcaat cgctattatg agccacccaa ttccaaacac aaatgagtcc 1080

cactcgattc agattatttt gccgcagaag caacttgggc gcaagtcaga catgtatgtt 1140

ttctgttgct catatacaca taatgttgcg ccaaaaggga agttcattgc atttgtgtct 1200

gcggaagctg agaccgataa tccacagtcc gaactaaagc ctggaattga tctacttggt 1260

caagtagatg aactgttttt tgatatgtat gacagataca aacctgtcaa tgaaccatct 1320

cttgataatt gctttgtttc aatgagttat gatgctacta cacactttga gacaactgtg 1380

acagatgttc tcagtatgta cacagcaatt actggaaaga ccgttgatct cagtgtggac 1440

ctgagcgctg ccagcgcagc tgaagaatac tagagatttt cctattagag ataccatact 1500

ctaaagaaga acggtgttaa cacaggccct gcctggtggc ttgccaggtt tagatctatg 1560

ctgcagctgc agccaattaa acggacagaa catatcaccc tatagcattt acatggcgtt 1620

taaacacaag accgtttagg atgatggtgg tggttccttt gttccttgca ttattgatcg 1680

gatggttaac ttttaactgt gct 1703

<210> 3

<211> 430

<212> PRT

<213> 玉米

<400> 3

Met Asp Glu Glu Tyr Asp Val Ile Val Leu Gly Thr Gly Leu Lys Glu

1 5 10 15

Cys Ile Leu Ser Gly Leu Leu Ser Val Asp Gly Leu Lys Val Leu His

20 25 30

Met Asp Arg Asn Asp Tyr Tyr Gly Gly Asp Ser Thr Ser Leu Asn Leu

35 40 45

Asn Gln Leu Trp Lys Arg Phe Arg Gly Glu Asp Lys Pro Pro Ala His

50 55 60

Leu Gly Ala Ser Arg Asp Tyr Asn Val Asp Met Val Pro Lys Phe Met

65 70 75 80

Met Ala Asn Gly Thr Leu Val Arg Thr Leu Ile His Thr Asp Val Thr

85 90 95

Lys Tyr Leu Ser Phe Lys Ala Val Asp Gly Ser Tyr Val Phe Ser Lys

100 105 110

Arg Lys Ile His Lys Val Pro Ala Thr Asp Met Glu Ala Leu Lys Ser

115 120 125

Pro Leu Met Gly Leu Phe Glu Lys Arg Arg Ala Arg Asn Phe Phe Val

130 135 140

Tyr Val Gln Asn Tyr Asn Glu Ala Asp Pro Val Thr His Gln Gly Leu

145 150 155 160

Asp Leu Thr Arg Ile Thr Thr Arg Glu Leu Ile Leu Lys His Gly Leu

165 170 175

Ser Asp Asp Thr Val Asp Phe Ile Gly His Ala Leu Ala Leu His Arg

180 185 190

Asp Asp Arg Tyr Leu Asn Glu Pro Ala Leu Asp Thr Val Lys Arg Met

195 200 205

Lys Leu Tyr Ala Glu Ser Leu Ala Arg Phe Gln Gly Gly Ser Pro Tyr

210 215 220

Ile Tyr Pro Leu Tyr Gly Leu Gly Glu Leu Pro Gln Ala Phe Ala Arg

225 230 235 240

Leu Ser Ala Val Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Leu Asn Lys Pro Glu Cys

245 250 255

Lys Val Glu Phe Asp Ile Glu Gly Lys Val Cys Gly Val Thr Ser Glu

260 265 270

Gly Glu Thr Ala Lys Cys Lys Lys Val Val Cys Asp Pro Ser Tyr Leu

275 280 285

Pro Ser Lys Ile Leu Met Pro Trp Glu Phe Ser Ser Leu Asn Glu Val

290 295 300

Thr Ser Leu Pro Arg Arg Phe Lys Asn Ile Asp Met His Gly Tyr Val

305 310 315 320

Phe Cys Cys Ser Tyr Thr His Asn Val Ala Pro Lys Gly Lys Phe Ile

325 330 335

Ala Phe Val Ser Ala Glu Ala Glu Thr Asp Asn Pro Gln Ser Glu Leu

340 345 350

Lys Pro Gly Ile Asp Leu Leu Gly Gln Val Asp Glu Leu Phe Phe Asp

355 360 365

Met Tyr Asp Arg Tyr Lys Pro Val Asn Glu Pro Ser Leu Asp Asn Cys

370 375 380

Phe Val Ser Met Ser Tyr Asp Ala Thr Thr His Phe Glu Thr Thr Val

385 390 395 400

Thr Asp Val Leu Ser Met Tyr Thr Ala Ile Thr Gly Lys Thr Val Asp

405 410 415

Leu Ser Val Asp Leu Ser Ala Ala Ser Ala Ala Glu Glu Tyr

420 425 430

<210> 4

<211> 445

<212> PRT

<213> 玉米

<400> 4

Met Asp Glu Glu Tyr Asp Val Ile Val Leu Gly Thr Gly Leu Lys Glu

1 5 10 15

Cys Ile Leu Ser Gly Leu Leu Ser Val Asp Gly Leu Lys Val Leu His

20 25 30

Met Asp Arg Asn Asp Tyr Tyr Gly Gly Asp Ser Thr Ser Leu Asn Leu

35 40 45

Asn Gln Leu Trp Lys Arg Phe Arg Gly Glu Asp Lys Pro Pro Ala His

50 55 60

Leu Gly Ala Ser Arg Asp Tyr Asn Val Asp Met Val Pro Lys Phe Met

65 70 75 80

Met Ala Asn Gly Thr Leu Val Arg Thr Leu Ile His Thr Asp Val Thr

85 90 95

Lys Tyr Leu Ser Phe Lys Ala Val Asp Gly Ser Tyr Val Phe Ser Lys

100 105 110

Arg Lys Ile His Lys Val Pro Ala Thr Asp Met Glu Ala Leu Lys Ser

115 120 125

Pro Leu Met Gly Leu Phe Glu Lys Arg Arg Ala Arg Asn Phe Phe Val

130 135 140

Tyr Val Gln Asn Tyr Asn Glu Ala Asp Pro Val Thr His Gln Gly Leu

145 150 155 160

Asp Leu Thr Arg Ile Thr Thr Arg Glu Leu Ile Leu Lys His Gly Leu

165 170 175

Ser Asp Asp Thr Val Asp Phe Ile Gly His Ala Leu Ala Leu His Arg

180 185 190

Asp Asp Arg Tyr Leu Asn Glu Pro Ala Leu Asp Thr Val Lys Arg Met

195 200 205

Lys Leu Tyr Ala Glu Ser Leu Ala Arg Phe Gln Gly Gly Ser Pro Tyr

210 215 220

Ile Tyr Pro Leu Tyr Gly Leu Gly Glu Leu Pro Gln Ala Phe Ala Arg

225 230 235 240

Leu Ser Ala Val Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Leu Asn Lys Pro Glu Cys

245 250 255

Lys Val Glu Phe Asp Ile Glu Gly Lys Val Cys Gly Val Thr Ser Glu

260 265 270

Gly Glu Thr Ala Lys Cys Lys Lys Val Val Cys Asp Pro Ser Tyr Leu

275 280 285

Pro Ser Lys Val Arg Lys Ile Gly Lys Val Ala Arg Ala Ile Ala Ile

290 295 300

Met Ser His Pro Ile Pro Asn Thr Asn Glu Ser His Ser Ile Gln Ile

305 310 315 320

Ile Leu Pro Gln Lys Gln Leu Gly Arg Lys Ser Asp Met Tyr Val Phe

325 330 335

Cys Cys Ser Tyr Thr His Asn Val Ala Pro Lys Gly Lys Phe Ile Ala

340 345 350

Phe Val Ser Ala Glu Ala Glu Thr Asp Asn Pro Gln Ser Glu Leu Lys

355 360 365

Pro Gly Ile Asp Leu Leu Gly Gln Val Asp Glu Leu Phe Phe Asp Met

370 375 380

Tyr Asp Arg Tyr Lys Pro Val Asn Glu Pro Ser Leu Asp Asn Cys Phe

385 390 395 400

Val Ser Met Ser Tyr Asp Ala Thr Thr His Phe Glu Thr Thr Val Thr

405 410 415

Asp Val Leu Ser Met Tyr Thr Ala Ile Thr Gly Lys Thr Val Asp Leu

420 425 430

Ser Val Asp Leu Ser Ala Ala Ser Ala Ala Glu Glu Tyr

435 440 445

<210> 5

<211> 11360

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 5

ctactaccct cccacctgcg agactgcaac gccgttgctt caactcgact ccagcatccc 60

tcgtccccgc atcaccgcgc cgccgacact ccgctcgctt tcgctcccga gacccgggcc 120

tgccgagccg ccgccatgga cgaggagtac gacgtgatcg ttctgggcac ggggctcaag 180

gagtgcatcc tcagcggtct cctctctgtc gacggcctca aggtgagcac cgaccacccg 240

cctcccggta acggcaatcg gacctcaccc cagtccccga gtccgatctg ccactctccc 300

ccgcacgtac ccggacgccg catgtggcct gcgcggtggg tctgccgcgg tgcgtcgtgg 360

tagtagatca ggcggtgctg gtccggcccc tgtctgatcc gggactggcg cgttcggatg 420

ggcgcttgtc taagctgtct acgcatctgg ctcctggcat tggtccgggg agttaaccag 480

ttgatgcaaa ccatcgtctg caaatgttgc cacaacttct tgcattctgt ggactgggaa 540

gatcagggca tggttagatt ctttaatgag gcaaactagt aacctggatt ctagggagat 600

tcactgcttc gaattttggt ctatcgtttg ttctttgttt ctgggatgta gaagtgttcc 660

catcctgtaa gacgatagat ggcatctata ttctgtcctc tgatatcact gcggcgagac 720

aggggtaact gaacggagag agaaagatgc ttaagttcaa tagtcagctt actgcgttaa 780

cttgaccgat gatggatttt ttaaattgat tttgaagaat tttgagtgac gcttttacag 840

gttctacaca tggatagaaa tgattactac ggaggagatt ccacctccct aaacctgaac 900

caggcaagaa gctataaatc tatgattttg gttctttttg aaactggaac atgtactgag 960

taatgtgttc cattttttgt gtgtgctggc aactcattct aatcccttta atcaccctta 1020

tctttttttt tggtgaacag ctctggaaga ggtttagggg ggaagacaag ccaccggcac 1080

atctaggtgc aagcagagat tacaatgtag acatggttcc aaaggtgtga taattcccga 1140

tcccaatgga ccgtacctag ctatgtgctt attgtttctt gccaaggcct catcatactt 1200

ggcaaatata ttgactaaaa acatatattt ccttatgctt gcacactcat tagttcctta 1260

cttgtcttat atatttgtta cactaccaga tacatcttcg gactggttag tctcatccag 1320

atagcattta caatcaatat actagctcag tgcccgtgcg ttgcaacggg atcatataat 1380

agctcgataa cttatatata caaatgtgtg ttatattgtt atgagattga ggacgacatc 1440

cacgagccgt ccaggatgac gttgaagaga aactcgggcc tgtgacgcac gaacactcac 1500

ctagtagtgt attatacaag atttaacaag acaatttaaa ggcaaaaatt caagaatgat 1560

ctttcataaa ctactgtaaa ttcatgacta aaagctcact gtaattgact tgcttgaaga 1620

acacaataat actactgtga atatgtgata caacttaatc acagtagtaa aattacatct 1680

gatgttgtat ttggtaaaaa aatatttttt cagagttcag agccaacaac taaactcagg 1740

tgttacaagg tacaacgaac cttactattc agattattat taatataaaa actcaagaca 1800

ggtgtaatcc tcaaacaatc ataagcaatg tgtataggaa ttttagacat aatggtgcct 1860

acaacatgct ttagtattca gattattaac acaaactcat gacataatga ccaaaaaata 1920

ttaacacaca aacatggata taatgttgtt taggaatttc agacatatat agaggtcaaa 1980

tagaggaatt ttagacaatg aacaactatc atcatcaata ggctagagtt caaattctta 2040

atatatgaac ttgacatata atagtgcctc tagcagtgtc gccttagttt aaaagcagta 2100

atatggcata aagaggagag gagagcagag aagagaggaa ataaacaata tctattgctt 2160

tccatataaa ctcataaagt tatatatatt ccaatcccat ggagagatga ggggaggaga 2220

gctacaaaaa ccaatcctgt tctgtttctc ctttcaggcc taaccctatg cagcagcata 2280

ttcatctaag aaaccaacaa cctgtaacat atcccttatt atcctaccca ttacaaactt 2340

gtcattaaaa ttaaattcag tactaactaa tattatctcg atcaatcttc aaggacatca 2400

agctcgattt tgctatgcta cagagaatgg tgcatgtgga cccttcttcc ttatatgcat 2460

caggtggtct aaagttggct ttaaccttta gcccacctta cattagagat ttggacatca 2520

aaagaaagct aaaacattct aaacctttta gatctctaag tttagaagag ggaggcaaac 2580

atgccctaga atattggaga tcgcagttgc tgctatcacc aagtaacaca ctaagatatc 2640

gaagaccaca actgctgcta tcaccgtgct tttacttcta ccttaacaac taagatctca 2700

atccatctta atttgtccaa ccgaactctg aatgaaaaaa aggaatcgca tttcaggaat 2760

gattgacgag ttagcacaat gcaggtttag aacctttggt tatttctaaa ataaagactc 2820

gcatgtatgg ctataacaat ttatactttt aaaaatggat acttattgag acctgataac 2880

cacatttagc tagcttagca ggagggagca tgctaactca taatgccttg taattactga 2940

atactgatga accagcggag ccatacctca ttaacatcct caagcagctc tgacaaacaa 3000

attaggggac atgacaaata aattagggga cactacctct gcgtatctgc acaagggccc 3060

aagagaggtg gggcccggcc ataggaacgg agctctcagc tcccacaccg tgcaccagtg 3120

aatgcgagca gctggtctgg ccttccagta atccgatctg catacagtgt gatccaggat 3180

tcacgtggat aaggatgaaa tcaagagagc gctagctagg atcacacgcc aatagcacaa 3240

ggaaggaagg aatgagcgaa cgaaccttga ggaaaacatc gccgacgggc ttctttgtgt 3300

ggctctctgt cgttggtcgc aacccccgcc actgccctca ctcgtcgcac atcgcgttgt 3360

ggtcacggtc ggggctgccc ttccgtccgg tcgaccggtt gagcatgggg cgatcaagca 3420

ggactcgagg aggaggtagc ggatttatgg cgacggatcg gggtagcggg gccgagtgtg 3480

ggttgttggc ttgttgcgcc cgtgggcgtg gcaggcgggg ggtgggggcg ggcggaggga 3540

tcatgagcta gagggggaga tcgtggaggg agttggcagt ttggaggaag atcatggggg 3600

attcctttgc gtgggcgtct gggagtgagc gggtgctcct aagatggctg agatcgacga 3660

tgaacatgag agcacgggac ggagacggcg ctagcaggaa gggctagagg gcgagggctc 3720

gctaggcaga gaaagcaagg gagactgacc ctaaagccaa gctgggtcag ggtaagaagc 3780

gtgcggcctc ctagcagcta cttgggccgc accaaagaaa cacagcccac gcgacctatg 3840

tcgtcatcac ggtttgcaca tttttatgac cataccggcc agccaacata gcttctacca 3900

gcttataagc cttccttctt tagagaaagc aatcatggtc aaatgttcct gctagtgtca 3960

aattgaggca actttttgcg cgagcagacg tgggtccggt gtgtgcaaaa ctaatggtgg 4020

ctgtcacgtg ggcgtccgta gtctgcaatg tgggcccaac gtccggagtg tgtgatggct 4080

tgcacgatag gaatggctga atgggaatgg gggattttgt catatgggac cggagtgccc 4140

caagtcagga gttgctcgac gtcccgcgtc acagaatgtg atggtttgcc ggacaacagc 4200

ggtggaggag ccattatggc ttagtgtggc atcagccata ccttactttt aataactctc 4260

atatcttcta ctataacatc aaaataagat gtggtgtggt ggatatgatg tctctaatag 4320

atgttttctt aacatatagt tgatggagat acaattcatt catcaaatga atatatatat 4380

atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat 4440

atatatatat atatatagct gaatgcccgt gcgttgcaac ggaaatatat aatacccgta 4500

tactacgata acttatatac aaaatatgtg ttataccgtt atgagaaaat gtttcataat 4560

caatttgtga ttctggccat acataaattt tgttatttat aatctatcta tttcaccact 4620

acattgcaac catcagtatc atgcagactt cgatatatgt cacgatttgc atggcctcat 4680

tattggagag cacgtttcac acataccgga agaaattcgc tcgtacatcg ttagtcatcg 4740

gacacgtacc accttacact tttccttaaa caaaaaggta agtgtgtgtg tttgcaagac 4800

taatggtcaa acattgtata accataaagt tagaatacta tattaatata ttaaataaat 4860

taatccaata gacatagatt aactcaatta acataggata aataaatatc taattataaa 4920

agtatgaaac atggtataat caatgttgtt actgcgtagt aaatattcat acgagactaa 4980

cacaactgga acggttcaat ttagaattaa aatggggaag ttacgaattt ccaaagtttc 5040

tatgtattta atataggatt aattaggaaa tcagttttat tgttgttttc atgacaaaac 5100

agaggtatta tgtgataaaa aataatatta tagaattata gaaattggaa taaactcatt 5160

tggatttaat atgaaatttc catgaattaa atgagtttct gcaattattt ttaaactaaa 5220

aattaatttc taaactcctt ttctctattt tctttatttc ctggaccgcg tcccaaattc 5280

cagaaagatc aggggccaag ctataaatgt ttttctagac tcagtgagca tacagagtga 5340

acgacaggtt aaacacaaat aaagtcttag ttgaagttgt acacaattca atatgagtca 5400

cgttggttag agggtggaag gctagacatt ctactcaata gatctaaggt tcgatccctg 5460

agtagcacag tttaattttt tttctgcgcc cggaacgggg gaggcagaac ggcagactac 5520

tcttaccttc ttaataagta gtatagatgt ttatgttaat ttcttgatga taaagtatgt 5580

gtatatcaaa ctctcctctc tgaccagttt atgatggcaa acgggacttt ggttcgcact 5640

ctcattcaca ctgatgtgac aaaatatttg tcattcaaag ctgttgatgg aagctatgtc 5700

ttcagcaaac ggaaggtaat ttcttaagtt tacactcatc catcctagtt ctatcttgta 5760

agttcagctt tgctggattt ctcacaagtg gtttctatat tgtaatcatg ccgccttatt 5820

gcattttcat cagattcaca aggttcctgc caccgatatg gaggctctaa aatctccttt 5880

gatgggtcta tttgagaaac gtagagcaag gaactttttt gtttacgtcc aaaattacaa 5940

tgaagctgat ccagtgacac atcaggggtt ggacctcaca aggattacaa ctagagaatt 6000

gattttgtga gtatcttgac catcctagca tcgtaatact tactggcatt gttgttcctt 6060

gtttgccatg ttattatgtg ttgtatgatt ctttgtatca ctccacctca tgttgctgca 6120

tggatgttgt atgattcttc acctactttt gcctctttct gctttcgtat agtatgataa 6180

tattttgtgc atcaataatg tacacaagtt aattgttgta atgttatatt gatgaacaga 6240

taaacaaaac tgctataacc gttcaacttc taaatgacac tttttcttaa agctgtaaag 6300

aggatgtgta atacttggca tgtcctcctt ttgcattata agtaacctta taagtcattt 6360

tgttttcagg aaacatggat tgagtgatga cactgtggat tttattggcc atgcactcgc 6420

tctgcacagg gatgatcgtt acctaaatga acctgccctt gatactgtaa aaaggatgaa 6480

ggtatgtttt gagtgaagat gtgttaaact attgttcttt ttcatattat aatgtaattt 6540

tatcaaacta cttccttgca tatgtagcct tttttttata tattccagat ttctaagtat 6600

tcttggatgg gaacatgata caattttgtt gtctgtcttc tcttagcttt acgctgagtc 6660

tcttgcacgt tttcaaggag gctcgcctta tatttatcca ttatatgggt tgggtgagct 6720

gccacaggtc agctatttct caattccttg caccaactct agttgctttt attattgcac 6780

tttgatgctt ctaagaagct tccatgctaa gatgatgtct tatggttcag gcttttgcac 6840

gtctaagtgc tgtttatggt ggtacatata tgttaaataa accagagtgc aaggtaatgg 6900

cttgagcttt ttttactcct aattatcata gtctgcgaaa acagcttatc aaatatgatc 6960

tttttgctga tttcactata taatatgttt gtaggttgaa tttgatatcg aagggaaagt 7020

gtgtggtgtt acttcagaag gtgaaacggc gaaatgcaaa aaggttgtct gtgatccttc 7080

ttacttgcct agcaaggtaa atgccactgc ccgtataaaa ttgaactact ctgtttatta 7140

taggaattca ctgaaacctt gatatatttc aaccaaatct actggaattt aaacttccct 7200

gctacaatac ctctgttgac taatttccta tatggtgcta tcttgatttg gggttcactt 7260

tgtggttgtc aataggtaag gaagattgga aaagttgcac gtgcaatcgc tattatgagc 7320

cacccaattc caaacacaaa tgagtcccac tcgattcaga ttattttgcc gcagaagcaa 7380

cttgggcgca agtcagacat gtgggtctct tactcatcta tactatctat taagaggata 7440

gtgtagacca tatacatgcc cccgcctccc cctccgctca cgtcacatcc tcactcgcct 7500

gtctgccact cgcctgcctc ggtgtcctcc gcatcgtact ccatgtcgaa tcctaaggaa 7560

cgaagcccga tccgcttatg ggatatcgtg gccctgcaat cagtgaccgt ccaacagatg 7620

cgcggacagc tgtcggatca gaaaccctag cccgggaggc tctcgcctat tattagaatc 7680

cacctcgcac cccgcgagcg gtgacttccc tagggtttag tcgcgtcgcc gctgccgccg 7740

ccaaaacagc acatccctct ctcgacctca gccatggcgg aggtggagca gccaccggac 7800

gcggtgaagc acttcaaccg ctggaccttc gacgatgtcc aggtacgcca atggctctac 7860

acatctctca gccagctcag cccggggaat tcgaggggga aatcgacagg gatcaggtgg 7920

cgatctgggc tcgggcgggc gtataccttg ctggtggaag tgaggtctaa atcgacaggg 7980

acgacgcccg cgcgaggaga accccggagg agcacgacca tggggaggag gcgatcgggg 8040

ccctaggcgc cggcaaggag atccgggggt gccgaatttg gggcatcagc ggccgcgcgt 8100

gggtgctgct gcggcggggc tccctcgcgt ggcgcctctg tggcctccgc cgtatgcgtc 8160

gacgaaggtt gcctggacgg gggcggtgtt ttcctctctc actctctctc tctccacctc 8220

gctcttgtct gccttggctc gcacgtgctt gtgggacgag ttcgtcgaga aggagaggaa 8280

gagagaggag cggtttctct ctcctattct cagcccgtca gccgccgcgg cggacgtatc 8340

ggccgctatc aaacccggtt tttggtgggg acgtacgagt ccgcgaccca ccgaagccgc 8400

ggtaaaatgg aagcatttcc cggattctaa ggattgttaa ggccagagtc aatgtgtgcc 8460

agagtcaatg cgtggtgccg cacgtccaag gaagcgtttt ttcctttctg gcactggcag 8520

caaatcagcg ttcaccgatc ttgatcttcc atttgttagc agtagatact atactagcag 8580

caattctggt gccgagacta tcgggggatt cggacggcac tcctctaagg caaactagat 8640

cggcagatcg gtaaaattgc tgtaatcgtc caattgtcaa taggcacatt tgttccaaat 8700

gagcttacta gctgaatttt acctgctatg tctgtttcgt gatgcttcta ctcgagactc 8760

tgtaactaca tgagcgttca ataattttcc acgatatggc gaagtgattt tattagagcg 8820

tgcaaataac ggtttacacg aacgaacgac gtccgcacga aacatcacgt aaataacgtg 8880

cggaccagac gcactcggta aaatatttgg cacgagacaa agatccaaat ttcggttgtg 8940

aatcaaatat ttgtaattgg aaaattagcg ccataaaaat agcctcgttt aaaatctgcc 9000

ttctaaaaaa taaaaatacg aactcaggac ctcgaatgat gttactcaga tcatcgcaac 9060

tcagactgct tgcatgtttt tttcacacgt cgcatggttt acaaattgaa acttcatctt 9120

tcttatagaa aacactccta atgcatgcac ggtctcgccc aaggaaacct catagtcatg 9180

actcgcccaa ggaaacctca tagtcacgac tctctcgatg ccaacctcgg gcgggagacg 9240

caatcacgct ttggccaaag ccatccttgg gtgagagaat gcattcacgc ctcgcccgag 9300

gccgccctca agcgggagaa cgcattcatg gctcgctcga ggccaccctc gggcgggaga 9360

catagtcacg actcacttga ggccatcccc aggcaggaga cgcagccatg gcttgcctga 9420

gaccatcctc gggcaggaga cgctgtcacg tctcgctcgt ggccgacctt tggcgggaga 9480

catagtcata gctcgcccga ggcaaccctc ggacgggaga cgcaatcacg cctcgccaga 9540

ggccaacctc gggcgggaga cgcaatcacg ccttgtccga ggccacactt gggcgagaga 9600

cgtagtcaca ctcgcccgag gccatcctcg cgcgggaaac gcagtcgcga cacgtttgag 9660

gccaccctcg ggcgggagac gcactcacgc tcgcccgagg ccaaccttgg gcgggagatg 9720

cagtcacggc tcgttcgtga cctccctcgg gtgggagacg caagttctta tgactgatat 9780

ttataaatgg cacttctttg caaacttaat gactgatatt ttgcagattc ttatgccgtg 9840

ggaattcagt agtttaaatg aggtaaccag tctaccacgc cgcttcaaga acatagatat 9900

gcacgggtaa taaactttta acgaatagtt tgtgttccgt tgcaacgcac gggcaccata 9960

ctagtatttc aaatagtttt catttgatga gtgccttaat tcagtttgta ctgcttggtt 10020

gtgtgtttgt aacatgtatt cttaaaatgt ttcttaggta tgttttctgt tgctcatata 10080

cacataatgt tgcgccaaaa gggaagttca ttgcatttgt gtctgcggaa gctgagaccg 10140

ataatccaca gtccgaacta aagcctggaa ttgatctact tggtcaagta gatgaactgt 10200

tttttgatat gtatgacaga tacaaacctg tcaatgaacc atctcttgat aattgctttg 10260

tttcaatggt aagtttagga ttatgtaata acaaagtgat tacaagtccc agatatctta 10320

gatgtttatg gaagttatct tctttgcaga gttatgatgc tactacacac tttgagacaa 10380

ctgtgacaga tgttctcagt atgtacacag caattactgg aaaggtaagg ttcatgtccc 10440

ttttttttgt ggtcatcaaa gcagatgtat caaatactaa tatctacaat gctgtattgg 10500

gcctagaaca ataacaacaa gcaagttgga taggctagag ttcaattcaa atccaacatg 10560

aaccacaagt taaagttaag gcatatggat agctgttttt catgcattcc tattcatggc 10620

taaatctttg ggtatatact atcttttcaa gtctcctaaa taaggggctg tcgacccatc 10680

tcttccccat tcaacactgt acctggttcc gatatgacac atccattaga gggttacgct 10740

ctaacggact actttgggtt tcatccttat tagaatggtt aggtttaaca tcggattggg 10800

acttgttatg ttgagaaaac ataggtggat ttcaatactg tattgggcct gagagatcaa 10860

aacctactac tctactagtg aaatttgcta gctttacagg gcatggtcaa ttgtttgtta 10920

accttctgtc agcaatagat gatttgcctc aaacaaaatt agtcccttac tagacatctc 10980

tctttattat tgatactctg atgacattac tattttatgt ttactgaccc aaagatggat 11040

cgcacatctt taaatctctc catgtctgtg tcgcagaccg ttgatctcag tgtggacctg 11100

agcgctgcca gcgcagctga agaatactag agattttcct attagagata ccatactcta 11160

aagaagaacg gtgttaacac aggccctgcc tggtggcttg ccaggtttag atctatgctg 11220

cagctgcagc caattaaacg gacagaacat atcaccctat agcatttaca tggcgtttaa 11280

acacaagacc gtttaggatg atggtggtgg ttcctttgtt ccttgcatta ttgatcggat 11340

ggttaacttt taactgtgct 11360

<210> 6

<211> 8809

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 6

ctactaccct cccacctgcg agactgcaac gccgttgctt caactcgact ccagcatccc 60

tcgtccccgc atcaccgcgc cgccgacact ccgctcgctt tcgctcccga gacccgggcc 120

tgccgagccg ccgccatgga cgaggagtac gacgtgatcg ttctgggcac ggggctcaag 180

gagtgcatcc tcagcggtct cctctctgtc gacggcctca aggtgagcac cgaccacccg 240

cctcccggta acggcaatcg gacctcaccc cagtccccga gtccgatctg ccactctccc 300

ccgcacgtac ccggacgccg catgtggcct gcgcggtggg tctgccgcgg tgcgtcgtgg 360

tagtagatca ggcggtgctg gtccggcccc tgtctgatcc gggactggcg cgttcggatg 420

ggcgcttgtc taagctgtct acgcatctgg ctcctggcat tggtccgggg agttaaccag 480

ttgatgcaaa ccatcgtctg caaatgttgc cacaacttct tgcattctgt ggactgggaa 540

gatcagggca tggttagatt ctttaatgag gcaaactagt aacctggatt ctagggagat 600

tcactgcttc gaattttggt ctatcgtttg ttctttgttt ctgggatgta gaagtgttcc 660

catcctgtaa gacgatagat ggcatctata ttctgtcctc tgatatcact gcggcgagac 720

aggggtaact gaacggagag agaaagatgc ttaagttcaa tagtcagctt actgcgttaa 780

cttgaccgat gatggatttt ttaaattgat tttgaagaat tttgagtgac gcttttacag 840

gttctacaca tggatagaaa tgattactac ggaggagatt ccacctccct aaacctgaac 900

caggcaagaa gctataaatc tatgattttg gttctttttg aaactggaac atgtactgag 960

taatgtgttc cattttttgt gtgtgctggc aactcattct aatcccttta atcaccctta 1020

tctttttttt tggtgaacag ctctggaaga ggtttagggg ggaagacaag ccaccggcac 1080

atctaggtgc aagcagagat tacaatgtag acatggttcc aaaggtgtga taattcccga 1140

tcccaatgga ccgtacctag ctatgtgctt attgtttctt gccaaggcct catcatactt 1200

ggcaaatata ttgactaaaa acatatattt ccttatgctt gcacactcat tagttcctta 1260

cttgtcttat atatttgtta cactaccaga tacatcttcg gactggttag tctcatccag 1320

atagcattta caatcaatat actagctcag tgcccgtgcg ttgcaacggg atcatataat 1380

agctcgataa cttatatata caaatgtgtg ttatattgtt atgagattga ggacgacatc 1440

cacgagccgt ccaggatgac gttgaagaga aactcgggcc tgtgacgcac gaacactcac 1500

ctagtagtgt attatacaag atttaacaag acaatttaaa ggcaaaaatt caagaatgat 1560

ctttcataaa ctactgtaaa ttcatgacta aaagctcact gtaattgact tgcttgaaga 1620

acacaataat actactgtga atatgtgata caacttaatc acagtagtaa aattacatct 1680

gatgttgtat ttggtaaaaa aatatttttt cagagttcag agccaacaac taaactcagg 1740

tgttacaagg tacaacgaac cttactattc agattattat taatataaaa actcaagaca 1800

ggtgtaatcc tcaaacaatc ataagcaatg tgtataggaa ttttagacat aatggtgcct 1860

acaacatgct ttagtattca gattattaac acaaactcat gacataatga ccaaaaaata 1920

ttaacacaca aacatggata taatgttgtt taggaatttc agacatatat agaggtcaaa 1980

tagaggaatt ttagacaatg aacaactatc atcatcaata ggctagagtt caaattctta 2040

atatatgaac ttgacatata atagtgcctc tagcagtgtc gccttagttt aaaagcagta 2100

atatggcata aagaggagag gagagcagag aagagaggaa ataaacaaat atctattgct 2160

ttccatataa actcataaag ttatatatat tccaatccca tggagagatg aggggaggag 2220

agctacaaaa accaatcctg ttctgtttct cctttcaggc ctaaccctat gcagcagcat 2280

attcatctaa gaaaccaaca acctgtaaca tatcccttat tatcctaccc attacaaact 2340

tgtcattaaa attaaattca gtactaacta atattatctc gatcaatctt caaggacatc 2400

aagctcgatt ttgctatgct acagagaatg gtgcatgtgg acccttcttc cttatatgca 2460

tcaggtggtc taaagttggc tttaaccttt agcccacctt ttcattagag atttggacat 2520

caaaagaaag ctaaaacatt ctaaaccttt tagatctcta agtttagaag agggaggcaa 2580

acatgcccta gaatattgga gatcgcagtt gctgctatca ccaagtaaca cactaagata 2640

tcgaagacca caactgctgc tatcaccgtg cttttacttc taccttaaca actaagatct 2700

caatccatct taatttgtcc aaccgaactc tgaatgaaaa aaaggaatcg catttcagga 2760

atgattgacg agttagcaca atgcaggttt agaacctttg gttatttcta aaataaagac 2820

tcgcatgtat ggctataaca atttatactt ttaaaaatgg atacttattg agacctgata 2880

accacattta gctagcttag caggagggag catgctaact cataatgcct tgtaattact 2940

gaatactgat gaaccagcgg agccatacct cattaacatc ctcaagcagc tctgacaaac 3000

aaattagggg acatgacaaa taaattaggg gacactacct ctgcgtatct gcacaagggc 3060

ccaagagagg tggggcccgg ccataggaac ggagctctca gctcccacac cgtgcaccag 3120

tgaatgcgag cagctggtct ggccttccag taatccgatc tgcatacagt gtgatccagg 3180

attcacgtgg ataaggatga aatcaagaga gcgctagcta ggatcacacg ccaatagcac 3240

aaggaaggaa ggaatgagcg aacgaacctt gaggaaaaca tcgccgacgg gcttctttgt 3300

gtggctctct gtcgttggtc gcaacccccg ccactgccct cactcgtcgc acatcgcgtt 3360

gtggtcacgg tcggggctgc ccttccgtcc ggtcgaccgg ttgagcatgg ggcgatcaag 3420

caggactcga ggaggaggta gcggatttat ggcgacggat cggggtagcg gggccgagtg 3480

tgggttgttg gcttgttgcg cccgtgggcg tggcaggcgg ggggtggggg cgggcggagg 3540

gatcatgagc tagaggggga gatcgtggag ggagttggca gtttggagga agatcatggg 3600

ggattccttt gcgtgggcgt ctgggagtga gcgggtgctc ctaagatggc tgagatcgac 3660

gatgaacatg agagcacggg acggagacgg cgctagcagg aagggctaga gggcgagggc 3720

tcgctaggca gagaaagcaa gggagactga ccctaaagcc aagctgggtc agggtaagaa 3780

gcgtgcgggc ctcctagcag ctacttgggc cgcaccaaag aaacacagcc cacgcgacct 3840

atgtcgtcat cacggtttgc acatttttat gaccataccg gccagccaac atagcttcta 3900

ccagcttata agccttcctt ctttagagaa agcaatcatg gtcaaatgtt cctgctagtg 3960

tcaaattgag gcaacttttt gcgcgagcag acgtgggtcc ggtgtgtgca aaactaatgg 4020

tggctgtcac gtgggcgtcc gtagtctgca atgtgggccc aacgtccgga gtgtgtgatg 4080

gcttgcacga taggaatggc tgaatgggaa tgggggattt tgtcatatgg gaccggagtg 4140

ccccaagtca ggagttgctc gacgtccccg cgtcacagaa tgtgatggtt tgccggacaa 4200

cagcggtgga ggagccatta tggcttagtg tggcatcagc cataccttac ttttaataac 4260

tctcatatct tctactatac catcaaaatt cgatgtggtg tggtggatat gccgtctctc 4320

ctagatgttt tcatacccac ttgctgatat atatatatat atatatatat atatatatat 4380

atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat 4440

atatatatat atagctgaat gcccgtgcgt tgcaacggaa atatataata cccgtatact 4500

acgataactt atatacaaaa tatgtgttat accgttatga gaaaatgttt cataatcaat 4560

ttgtgattct ggccatacat aaattttgtt atttataatc tatctatttc accactacat 4620

tgcaaccatc agtatcatgc agacttcgat atatgtcacg atttgcatgg cctcattatt 4680

ggagagcacg tttcacacat accggaagaa attcgctcgt acatcgttag tcatcggaca 4740

cgtaccacct tacacttttc cttaaacaaa aaggtaagtg tgtgtgtttg caagactaat 4800

ggtcaaacat tgtataacca taaagttaga atactatatt aatatattaa ataaattaat 4860

ccaatagaca tagattaact caattaacat aggataaata aatatctaat tataaaagta 4920

tgaaacatgg tataatcaat gttgttactg cgtagtaaat attcatacga gactaacaca 4980

actggaacgg ttcaatttag aattaaaatg gggaagttac gaatttccaa agtttctatg 5040

tatttaatat aggattaatt aggaaatcag ttttattgtt gttttcatga caaaacagag 5100

gtattatgtg ataaaaaata atattataga attatagaaa ttggaataaa ctcatttgga 5160

tttaatatga aatttccatg aattaaatga gtttctgcaa ttatttttaa actaaaaatt 5220

aatttctaaa ctccttttct ctattttctt tatttcctgg actgcgtccc aaattccaga 5280

aagatcaggg gccaagctat aaatgttttt ctagactcag tgagcataca gagtgaacga 5340

cgggttaaac acaaataaag tcttagttga agttgtacac aattcaatat gagtcacgtt 5400

ggttagaggg tggaaggcta gacattctac tcaatagatc taaggttcga tccctgagta 5460

gcacagttta attttttttc tgcgcccgga acgggggagg cagaacggca gactactctt 5520

accttcttaa taagtagtat agatgtttat gttaatttct tgatgataaa gtatgtgtat 5580

atcaaactct cctctctgac cagtttatga tggcaaacgg gactttggtt cgcactctca 5640

ttcacactga tgtgacaaaa tatttgtcat tcaaagctgt tgatggaagc tatgtcttca 5700

gcaaacggaa ggtaatttct taagtttaca ctcatccatc ctagttctat cttgtaagtt 5760

cagctttgct ggatttctca caagtggttt ctatattgta atcatgccgc cttattgcat 5820

tttcatcaga ttcacaaggt tcctgccacc gatatggagg ctctaaaatc tcctttgatg 5880

ggtctatttg agaaacgtag agcaaggaac ttttttgttt acgtccaaaa ttacaatgaa 5940

gctgatccag tgacacatca ggggttggac ctcacaagga ttacaactag agaattgatt 6000

ttgtgagtat cttgaccatc ctagcatcgt aatacttact ggcattgttg ttccttgttt 6060

gccatgttat tatgtgttgt atgattcttt gtatcactcc acctcatgtt gctgcatgga 6120

tgttgtatga ttcttcacct acttttgcct ctttctgctt tcgtatagta tgataatatt 6180

ttgtgcatca ataatgtaca caagttaatt gttgtaatgt tatattgatg aacagataaa 6240

caaaactgct ataaccgttc aacttctaaa tgacactttt tcttaaagct gtaaagagga 6300

tgtgtaatac ttggcatgtc ctccttttgc attataagta accttataag tcattttgtt 6360

ttcaggaaac atggattgag tgatgacact gtggatttta ttggccatgc actcgctctg 6420

cacagggatg atcgttacct aaatgaacct gcccttgata ctgtaaaaag gatgaaggta 6480

tgttttgagt gaagatgtgt taaactattg ttctttttca tattataatg taattttatc 6540

aaactacttc cttgcatatg tagccttttt tttatatatt ccagatttct aagtattctt 6600

ggatcgggaa catgatacaa ttttgttgtc tgtcttctct tagctttacg ctgagtctct 6660

tgcacgtttt caaggaggct cgccttatat ttatccatta tatgggttgg gtgagctgcc 6720

acaggtcagc tatttctcaa ttccttgcac caactctagt tgcttttatt attgcacttt 6780

gatgcttcta agaagcttcc atgctaagat gatgtcttat ggttcaggct tttgcacgtc 6840

taagtgctgt ttatggtggt acatatatgt taaataaacc agagtgcaag gtaatggctt 6900

gagctttttt tactcctaat tatcatagtc tgcgaaaaca gcttatcaaa tatgatcttt 6960

ttgctgattt cactatataa tatgtttgta ggttgaattt gatatcgaag ggaaagtgtg 7020

tggtgttact tcagaaggtg aaacggcgaa atgcaaaaag gttgtctgtg atccttctta 7080

cttgcctagc aaggtaaatg ccactgcccg tataaaattg aactactctg tttattatag 7140

gaattcactg aaaccttgat atatttcaac caaatctact ggaatttaaa cttccctgct 7200

acaatacctc tgttgactaa tttcctatat ggtgctatct tgatttgggg ttcactttgt 7260

ggttgtcaat aggtaaggaa gattggaaaa gttgcacgtg caatcgctat tatgagccac 7320

ccaattccaa acacaaatga gtcccactcg attcagatta ttttgccgca gaagcaactt 7380

gggcgcaagt cagacatgtg ggtctcttac tcatatttca aatagttttc atttgatgag 7440

tgccttaatt cagtttgtac tgcttggttg tgtgtttgta acatgtattc ttaaaatgtt 7500

tcttaggtat gttttctgtt gctcatatac acataatgtt gcgccaaaag ggaagttcat 7560

tgcatttgtg tctgcggaag ctgagaccga taatccacag tccgaactaa agcctggaat 7620

tgatctactt ggtcaagtag atgaactgtt ttttgatatg tatgacagat acaaacctgt 7680

caatgaacca tctcttgata attgctttgt ttcaatggta agtttaggat tatgtaataa 7740

caaagtgatt acaagtccca gatatcttag atgtttatgg aagttatctt ctttgcagag 7800

ttatgatgct actacacact ttgagacaac tgtgacagat gttctcagta tgtacacagc 7860

aattactgga aaggtaaggt tcatgtccct tttttttgtg gtcatcaaag cagatgtatc 7920

aaatactaat atctacaatg ctgtattggg cctagaacaa taacaacaag caagttggat 7980

aggctagagt tcaattcaaa tccaacatga accacaagtt aaagttaagg catatggata 8040

gctgtttttc atgcattcct attcatggct aaatctttgg gtatatacta tcttttcaag 8100

tctcctaaat aaggggctgt cgacccatct cttccccatt caacactgta cctggttccg 8160

atatgacaca tccattagag ggttacgctc taacggacta ctttgggttt catccttatt 8220

agaatggtta ggtttaacat cggattggga cttgttatgt tgagaaaaca taggtggatt 8280

tcaatactgt attgggcctg agagatcaaa acctactact ctactagtga aatttgctag 8340

ctttacaggg catggtcaat tgtttgttaa ccttctgtca gcaatagatg atttgcctca 8400

aacaaaatta gtcccttact agacatctct ctttattatt gatactgtga tgacattact 8460

attttatgtt tactgaccca aagatggatc gcacatcttt aaatctctcc atgtctgtgt 8520

cgcagaccgt tgatctcagt gtggacctga gcgctgccag cgcagctgaa gaatactaga 8580

gattttccta ttagagatac catactctaa agaagaacgg tgttaacaca ggccctgcct 8640

ggtggcttgc caggtttaga tctatgctgc agctgcagcc aattaaacgg acagaacata 8700

tcaccctata gcatttacat ggcgtttaaa cacaagaccg tttaggatga tggtggtggt 8760

tcctttgttc cttgcattat tgatcggatg gttaactttt aactgtgct 8809

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223>

<400> 7

agaaggtgaa acggcgaaat gc 22

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223>

<400> 8

tcggaaccag gtacagtgtt ga 22

Claims

1.下述任一应用：

X1、ZmGDI2或所述ZmGDI2的编码基因在培育粗缩病敏感玉米中的应用；

所述ZmGDI2的序列为序列表中序列4；

所述ZmGDI2的编码基因，为如下m21)或m22)：

m22)核苷酸序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；

X2、所述ZmGDI2或所述ZmGDI2的编码基因在制备降低玉米粗缩病抗性产品中的应用；

X3、所述ZmGDI2或所述ZmGDI2的编码基因在降低玉米粗缩病抗性中的应用；

X4、所述ZmGDI2或所述ZmGDI2的编码基因在调控玉米粗缩病抗性中的应用。

2.培育粗缩病敏感转基因玉米的方法，包括：增加目的玉米中权利要求1中所述ZmGDI2的活性或增加目的玉米中权利要求1中所述ZmGDI2的含量或促进权利要求1中所述ZmGDI2的编码基因的表达，得到转基因玉米；所述转基因玉米粗缩病抗性低于所述目的玉米。