CN108441535A - 三酶一酵桑蚕肽的生产方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的三酶一酵桑蚕肽的生产方法，与现有技术相比，本发明首先经过唾液淀粉酶酶解，先分解淀粉等，以免影响胃蛋白酶及胰蛋白酶对桑蚕中蛋白质等的酶解，提高得肽率。然后控制胃蛋白酶和胰蛋白酶的酶解温度、pH环境及酶解时间等，提高酶解效率并且保证肽分子量较小。经过3次酶解后进行链霉菌发酵，进一步分解为小肽，使制备的桑蚕肽分子量更小，溶解度更高，更容易被人以吸收。然后经过分离，超滤，浓缩后再溶解，层析柱纯化，得到的产品活性肽获得率高，损失量<1％，相对分子质量小于2KD的小分子肽>90％。

Description

三酶一酵桑蚕肽的生产方法
技术领域
本发明涉及桑蚕肽的生产方法，具体涉及三酶一酵桑蚕肽的生产方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解，最后利用链霉菌发酵，整个过程仿生酶解，得到桑蚕肽。
背景技术
一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基可以缩合成肽，形成的酰胺基在蛋白质化学中称为肽键。氨基酸的分子最小，蛋白质最大，两个或以上的氨基酸脱水缩合形成若干个肽键从而组成一个肽，多个肽进行多级折叠就组成一个蛋白质分子。
近年来的研究表明蛋白质在动物消化道中消化酶作用下的水解终产物大部分是2或3个氨基酸残基组成的小肽它们以完整形式被吸收进入循环系统从而被组织利用。
桑蚕的蛋白质含量高达45％～50％，且氨基酸组成合理，是一种优质的蛋白原料。此外，桑蚕还具有很多药理作用，例如保护肝脏、提高免疫力、促进生长、降低血糖和血压、抗癌等。然而由于蚕蛹蛋白的溶解性、乳化性和起泡能力等功能特性较差，而且具有特殊气味，很大程度上限制了它在食品工业中的应用。
现有蚕蛹肽的制备工艺中，由于后期精制纯化不完全，使得产品肽损失量大，脱盐率低，影响小肽产品的性质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种三酶一酵桑蚕肽的生产方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解，最后利用链霉菌发酵，整个过程仿生酶解，得到的桑蚕肽活性高，总肽含量高，安全度高。
本发明提供的三酶一酵桑蚕肽的生产方法，包括以下步骤：
1)将蚕蛹破碎，加水匀浆后，调节pH至6.5-7.5，加入唾液淀粉酶，于37-37.5℃保温条件下进行酶解反应；
2)然后调节pH至1.5-2.0，加入胃蛋白酶，于37-42℃保温条件下进行酶解反应；
3)然后调节pH至7.5-8.0，加入胰蛋白酶，于37-42℃保温条件下进行酶解反应；
4)向步骤3)制得的体系中加入链霉菌，发酵后，离心，分离后滤液超滤，得到的滤液真空干燥；
5)步骤4)干燥产物加水溶解，然后进行层析柱纯化，然后减压浓缩，干燥，即得桑蚕肽。
步骤1)中所述加水匀浆是指加入桑蚕质量1-4倍的水。
步骤1)中唾液淀粉酶的加入量是桑蚕质量的0.5-4％。
步骤1)中所述酶解反应进行1.5-3h；
步骤2)中胃蛋白酶的加入量是桑蚕质量的0.4-3.5％。
步骤2)中所述酶解反应进行2-4h；
步骤3)中胰蛋白酶的加入量是桑蚕质量的0.5-3％。
步骤3)中所述酶解反应进行3-5h；
步骤4)中链霉菌的加入量为桑蚕质量的0.05-0.8％。
步骤4)中发酵条件为32-37℃发酵20-30h。
步骤4)中所述离心是指在8000-10000r/min条件下离心15-20min。
步骤4)中所属超滤是指用截留相对分子质量为3KD的中空纤维膜进行超滤。
步骤5)中所述加水溶解是指加3-5倍的水溶解。
步骤5)中所述层析柱纯化是指利用DA-201C型大孔树脂柱层析，用水洗脱后，再用乙醇洗脱，收集脱液。
本发明首先经过唾液淀粉酶酶解，先分解淀粉等，以免影响胃蛋白酶及胰蛋白酶对桑蚕中蛋白质等的酶解，提高得肽率。然后控制胃蛋白酶和胰蛋白酶的酶解温度、pH环境及酶解时间等，提高酶解效率并且保证肽分子量较小。经过3次酶解后进行链霉菌发酵，进一步分解为小肽，使制备的桑蚕肽分子量更小，溶解度更高，更容易被人以吸收。然后经过分离，超滤，浓缩后再溶解，层析柱纯化，得到的产品活性肽获得率高，损失量<1％，相对分子质量小于2KD的小分子肽>90％。
与现有技术相比，本发明采用仿生酶解的方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解，最后利用链霉菌发酵。经过三次酶解和一次发酵，使桑蚕酶解完全，得到的桑蚕肽分子更小，产量更多，更有利于人体吸收，发挥其作用。
具体实施方式
实施例1
一种三酶一酵桑蚕肽的生产方法，包括以下步骤：
1)将桑蚕蛹破碎，加1倍量的水匀浆后，调节pH至7，加入桑蚕质量1％的唾液淀粉酶，于37℃保温条件下进行酶解反应3h；
2)然后调节pH至1.5，加入桑蚕质量0.6％的胃蛋白酶，于38℃保温条件下进行酶解反应4h；
3)然后调节pH至7.5，加入桑蚕质量0.4％的胰蛋白酶，于38℃保温条件下进行酶解反应4.5h；
4)向步骤3)制得的体系中加入桑蚕质量0.05％的链霉菌，36℃发酵25h发酵后，在10000r/min条件下离心15min，分离后滤液用截留相对分子质量为3KD的中空纤维膜进行超滤，得到的滤液真空干燥；
5)步骤4)干燥产物加加3倍的水溶解，然后进行利用DA-201C型大孔树脂柱层析，用水洗脱后，再用乙醇洗脱，收集脱液，然后减压浓缩，干燥，即得桑蚕肽。
利用HPLC对制备的小肽进行测定，可以得到，本申请制备的桑蚕肽，相对分子质量小于2KD的小分子肽91.3％。
实施例2
一种三酶一酵桑蚕肽的生产方法，包括以下步骤：
1)将桑蚕蛹破碎，加3.5倍量的水匀浆后，调节pH至7，加入桑蚕质量1.5％的唾液淀粉酶，于37.5℃保温条件下进行酶解反应2.5h；
2)然后调节pH至1.5，加入桑蚕质量2.5％的胃蛋白酶，于37.5℃保温条件下进行酶解反应2.5h；
3)然后调节pH至8，加入桑蚕质量2.5％的胰蛋白酶，于37.5℃保温条件下进行酶解反应5h；
4)向步骤3)制得的体系中加入桑蚕质量0.3％的链霉菌，35℃发酵28h发酵后，在8000r/min条件下离心20min，分离后滤液用截留相对分子质量为3KD的中空纤维膜进行超滤，得到的滤液真空干燥；
5)步骤4)干燥产物加加4倍的水溶解，然后进行利用DA-201C型大孔树脂柱层析，用水洗脱后，再用乙醇洗脱，收集脱液，然后减压浓缩，干燥，即得桑蚕肽。
利用HPLC对制备的小肽进行测定，可以得到，本申请制备的桑蚕肽，相对分子质量小于2KD的小分子肽90.4％。

Claims (10)

1.三酶一酵桑蚕肽的生产方法，其特征在于，所述生产方法包括以下步骤：
1)将蚕蛹破碎，加水匀浆后，调节pH至6.5-7.5，加入唾液淀粉酶，于37-37.5℃保温条件下进行酶解反应；
2)然后调节pH至1.5-2.0，加入胃蛋白酶，于37-42℃保温条件下进行酶解反应；
3)然后调节pH至7.5-8.0，加入胰蛋白酶，于37-42℃保温条件下进行酶解反应；
4)向步骤3)制得的体系中加入链霉菌，发酵后，离心，分离后滤液超滤，得到的滤液真空干燥；
5)步骤4)干燥产物加水溶解，然后进行层析柱纯化，然后减压浓缩，干燥，即得桑蚕肽。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤1)中所述加水匀浆是指加入桑蚕质量1-4倍的水。
3.根据权利要求1或2所述的生产方法，其特征在于，步骤1)中唾液淀粉酶的加入量是桑蚕质量的0.5-4％。
4.根据权利要求1-3任一项所述的生产方法，其特征在于，步骤1)中所述酶解反应进行1.5-3h。
5.根据权利要求1-4任一项所述的生产方法，其特征在于，步骤2)中胃蛋白酶的加入量是桑蚕质量的0.4-3.5％；所述酶解反应进行2-4h。
6.根据权利要求1-5任一项所述的生产方法，其特征在于，步骤3)中胰蛋白酶的加入量是桑蚕质量的0.5-3％；酶解反应进行3-5h。
7.根据权利要求1-6任一项所述的生产方法，其特征在于，步骤4)中链霉菌的加入量为桑蚕质量的0.05-0.8％。
8.根据权利要求1-7任一项所述的生产方法，其特征在于，步骤4)中发酵条件为32-37℃发酵20-30h。
9.根据权利要求1-8任一项所述的生产方法，其特征在于，步骤5)中所述加水溶解是指加3-5倍的水溶解。
10.根据权利要求1-9任一项所述的生产方法，其特征在于，步骤5)中所述层析柱纯化是指利用DA-201C型大孔树脂柱层析，用水洗脱后，再用乙醇洗脱，收集脱液。
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CN112409469A (zh) * 2020-11-04 2021-02-26 付俊 一种丝肽的提取方法

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