CN108440667A - 一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体及制备方法与应用 - Google Patents

一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体及制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体及制备方法与应用。本发明首先培养幽门螺旋杆菌，提取幽门螺旋杆菌脂多糖；将幽门螺旋杆菌脂多糖和佐剂混合制成抗原，对蛋鸡进行初次免疫和加强免疫，加强免疫共计3～5次；从第一次加强免疫开始，收集鸡蛋，分离，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。应用本发明制得的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体添加于食品或制备成保健食品，可用于辅助防治因幽门螺杆菌感染引起的胃溃疡或胃癌；亦可制成药品，用于防治因幽门螺杆菌感染引起的胃溃疡或胃癌。

Description

一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体及制备方法与应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体及制备方法与应用。
背景技术
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)是科学家Barry Marshall和Robin Warren发现的，该菌能够感染胃部组织并且引发溃疡，而这两位研究者也因发现了幽门螺杆菌而获得了2005年的诺贝尔生理学及医学奖。
幽门螺旋杆菌，又称幽门螺杆菌，是胃溃疡和胃癌的致病因子。据估计，一半的世界人口感染上幽门螺旋杆菌。很多感染者产生胃炎症状，而且每5名感染者当中，就有1人在他们的生命的某个时刻患上胃溃疡，在很多情形下，这是一种病情进展快速的致命性疾病。胃炎和胃溃疡可利用抗生素加以治疗；这些治疗经常需要使用两到三种不同类型的抗生素，而且仍然不能够治愈所有的病人。在最糟糕的情形下，长期的幽门螺旋杆菌炎症能够导致胃癌产生。胃癌是一种高度致死性的很难治疗的癌症。在全世界，胃癌每年影响着100万人，每年有超过70万人死于胃癌。
日前，来自西澳大学等多个机构的研究人员通过研究深入阐明了幽门螺杆菌重要生物分子的精细结构，该菌是诱发机体胃溃疡的重要致病菌，相关研究刊登于国际杂志PLoS Pathogens上，研究人员表示，他们深入解析了负责幽门螺杆菌脂多糖产生的酶类及其结构，特殊的脂多糖分子就好像一个保护盾一样能够覆盖到整个细菌细胞表面，相比其它细菌而言其有着一定的特性，脂多糖能够帮助细菌入侵机体天然的免疫系统来诱发长期的感染。
利用幽门螺杆菌脂多糖免疫产蛋母鸡，使母鸡体内产生抗体，并产生在蛋黄内含有抗体的鸡蛋。该产品是鸡在反复摄取幽门螺杆菌脂多糖抗原后，当鸡体内产生抗体时产下的蛋。鸡蛋中的蛋黄中就存在抗幽门螺杆菌脂多糖的抗体。该抗体可以对抗幽门螺杆菌的内毒素，阻止幽门螺杆菌吸附到胃黏膜上，预防其入侵机体天然的免疫系统和诱发相应的感染，对于胃溃疡和胃癌有预防和治疗作用。
发明内容
为了克服现有技术的的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法。
本发明的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体，该抗体机理明确，可安全、有效地预防胃溃疡和胃癌的抗幽门螺杆菌脂多糖。
本发明的再一目的在于提供上述幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，包含如下步骤：
培养幽门螺旋杆菌，提取幽门螺旋杆菌脂多糖；将幽门螺旋杆菌脂多糖和佐剂混合制成抗原，对蛋鸡进行初次免疫和加强免疫，加强免疫共计3～5次；从第一次加强免疫开始，收集鸡蛋，分离，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体；
所述的幽门螺旋杆菌脂多糖的制备方法，包含如下步骤：
(1)将幽门螺旋杆菌菌苔洗涤后，用水混悬，反复冻融至菌体裂解，得到裂解液；将裂解液与质量分数为90％的苯酚溶液分别预热至67.5～68.5℃后混合，67.5～68.5℃剧烈搅拌30～60min，得到混合液；将混合液冰浴至4℃以下，离心，得到酚相；
(2)步骤(1)制得的酚相加等体积无热原水洗涤，收集水相透析去除苯酚；浓缩；然后加入DNase和RNase酶解，沸水浴使酶失活，冷却后离心，弃沉淀，收集上清，加入丙酮沉淀，得到幽门螺旋杆菌脂多糖；
步骤(1)中所述的幽门螺旋杆菌菌苔，通过下述方法制备得到：
幽门螺杆菌采用ECY无血培养基在微需氧环境下培养，灭菌生理盐水洗下生长良好的菌苔，得到抗幽门螺旋杆菌苔；
步骤(1)中所述的洗涤优选为采用生理盐水洗涤3～5次；
步骤(1)中所述的水的用量优选为3～5倍菌苔体积；
步骤(1)中所述的反复冻融的条件优选为-20℃以下及20～40℃冻融5～6次；
步骤(1)中所述的苯酚溶液与裂解液的体积比优选为1:1；
步骤(2)中所述的洗涤的次数优选为2～3次；
步骤(2)中所述的透析的具体操作优选为：收集水相装于透析袋中，流水透析12h去酚，再用注射用水透析60h；
步骤(2)中所述的浓缩优选为采用质量分数为50％的聚乙二醇6000浓缩，浓缩后的体积优选不超过原体积的1/4；
步骤(2)中所述的酶解的条件优选为DNase和RNase在体系中的终浓度为30～50μg/mL，36.5～37.5℃酶解4～8h；
步骤(2)中所述的失活的条件优选为沸水浴加热10～30min；
步骤(2)中所述的冷却优选为冷却至20～40℃；
步骤(2)中所述的丙酮的用量优选为上清2倍体积；
所述的免疫的具体操作优选为：
选取20周龄产蛋母鸡；初次免疫使用弗氏完全佐剂和幽门螺旋杆菌脂多糖等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射；初次免疫两周后进行第一次加强免疫，使用弗氏不完全佐剂和脂多糖等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫3～5次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋；
所述的幽门螺旋杆菌脂多糖的初始浓度优选为0.5～1mg/mL；
所述的注射的用量为每只母鸡注射0.5mL；
所述的分离的具体操作优选为：
分离所收集的鸡蛋的卵黄，加入无水乙醇脱水，减压干燥得到粗品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体，或者将卵黄进一步纯化，得到成品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体；
所述的纯化的具体操作优选为：
(1)用6～9倍卵黄体积的水溶解稀释卵黄，20～40℃搅拌30min～2h，得到溶解液；然后加入硅藻土和0.6～1.3倍溶解液体积的乙醇，调节pH至6.5～7.5，搅拌30min～1h，过滤弃去残渣，得到清液；
(2)向步骤(1)制得的清液中加入硅藻土和1.5～2.5倍溶解液体积的乙醇，调节pH值至5.0～5.4，搅拌30min～1h，过滤弃去上清液，得到固体组分；在固体组分中加入6～9倍固体组分质量的水溶解，20～40℃搅拌30min～2h，过滤弃去残渣，得到清液；
(3)将步骤(2)制得的清液超滤浓缩，干燥，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体；
步骤(1)中所述的卵黄的收集优选为：将鸡蛋清洗消毒后打破，用蛋黄分离器小心分离卵黄；
步骤(1)中所述的硅藻土的用量为按溶解液计终浓度5～20g/L；
步骤(2)中所述的硅藻土的用量为按溶解液计终浓度5～20g/L；
步骤(1)和步骤(2)中所述的乙醇优选为预先冷却至0～15℃的乙醇；
步骤(3)中所述的超滤浓缩优选为用超滤器进行超滤浓缩，浓缩倍数为3～5倍，或加入PBS进行超滤；
步骤(3)中所述的干燥优选为冷冻干燥；
一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体通过上述制备方法制备得到；
所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体在制备预防或治疗胃溃疡和胃癌产品中的应用；
所述的产品优选为食品添加剂、保健品或药品；
一种酸奶，包含上述抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体；
所述的酸奶的制备方法，包含如下步骤：
(1)将奶粉120～130g和上述粗品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体或成品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体5～10g混合，然后加入70℃～80℃，940～1060mL温开水，得到乳液；
(2)均质：将步骤(1)制得的乳液9～11MPa均质1～2min；
(3)灭菌：将步骤(2)中均质后的乳液在88～92℃的水浴保温9～10min进行杀菌处理，然后将其冷却至38～42℃，得到料液；
(4)接种：在无菌条件下，将发酵剂按照1g/1000mL的比例接种到步骤(3)制得的料液中，并将其搅拌均匀，得到接种料液；
(5)发酵：在无菌条件下，将步骤(4)制得接种料液42℃发酵4～5h；
(6)后发酵：将步骤(5)中发酵后的接种料液在1～4℃的条件下进行后发酵，后发酵至少保持24h，得到酸奶；
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明使用幽门螺杆菌的脂多糖作为抗原，制备出特异性对抗幽门螺杆菌脂多糖的卵黄抗体，可以特异性的对抗脂多糖对幽门螺杆菌的保护作用，阻止幽门螺杆菌侵入人体免疫系统导致感染。
(2)本发明使用乙醇分级沉淀的方法纯化卵黄抗体，在获得高纯度卵黄抗体的同时，可以有效的去除和灭活可能存在的致病菌，并对可能带入的病毒污染进行灭活，可以有效的消除卵黄抗体使用的风险。
(3)应用本发明制得的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体(粗品和成品)添加于食品或制备成保健食品，可用于辅助防治因幽门螺杆菌感染引起的胃溃疡或胃癌；成品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体可制成药品，用于防治因幽门螺杆菌感染引起的胃溃疡或胃癌。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体的制备
(1)幽门螺杆菌J99(ATCC700824)按照常规方法采用ECY无血培养基、微需氧环境下培养，然后以灭菌生理盐水洗下生长良好的菌苔，菌苔经生理盐水洗涤3次后用4倍菌苔体积的注射用水混悬，-20℃及30℃反复冻融5次后，与等体积的质量分数为90％的苯酚溶液分别预热至68℃后混合，68℃剧烈搅拌30min，得到混合液；将混合液冰浴至2℃离心，得到酚相；
(2)步骤(1)制得的酚相加等体积无热原水重复洗涤2次，收集水相溶液装于透析袋中，流水透析12h去酚，再用注射用水透析60h；然后采用质量分数为50％的聚乙二醇6000浓缩至原体积的1/4；加入DNase和RNase(终浓度分别为50μg/mL)，37℃下酶解4h，100℃水浴加热10min使酶失活，冷却至30℃后离心，弃沉淀，收集上清，加入2倍体积丙酮沉淀，得到幽门螺旋杆菌脂多糖；
(3)将步骤(2)制得的幽门螺旋杆菌脂多糖用生理盐水配制成浓度为0.6mg/mL的溶液作为免疫抗原，选取20周龄产蛋母鸡；初次免疫使用弗氏完全佐剂和免疫抗原等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5mL；初次免疫两周后进行第一次加强免疫，使用弗氏不完全佐剂和免疫抗原等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5mL，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫4次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋，并存放于4℃；
(4)将步骤(3)收集的鸡蛋清洗消毒后打破，用蛋黄分离器小心分离卵黄；然后用9倍卵黄体积的纯化水溶解稀释卵黄，30℃搅拌30min，得到溶解液；然后加入按溶解液计终浓度为16g/L的硅藻土和1.2倍溶解液体积的乙醇(预先冷却至15℃以下)，调节pH至7.0，搅拌30min，过滤弃去残渣，得到清液；
(5)向步骤(4)制得的清液中加入按溶解液计终浓度为10g/L的硅藻土和2.5倍溶解液体积的乙醇(预先冷却至15℃以下)，调节pH值至5.2，搅拌30min，过滤弃去上清液，得到固体组分；在固体组分中加入9倍固体组分质量的纯化水溶解，30℃搅拌30min，过滤弃去残渣，得到清液；
(6)将步骤(5)制得的清液用超滤器进行超滤浓缩，浓缩倍数为5倍；冷冻干燥，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。
实施例2抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体的制备
(1)幽门螺杆菌J99(ATCC700824)按照常规方法采用ECY无血培养基、微需氧环境下培养，然后以灭菌生理盐水洗下生长良好的菌苔，菌苔经生理盐水洗涤4次后用5倍菌苔体积的注射用水混悬，-22℃及20℃反复冻融6次后，与等体积的质量分数为90％的苯酚溶液分别预热至67.5℃后混合，67.5℃剧烈搅拌40min，得到混合液；将混合液冰浴至4℃离心，得到酚相；
(2)步骤(1)制得的酚相加等体积无热原水重复洗涤3次，收集水相溶液装于透析袋中，流水透析12h去酚，再用注射用水透析60h；然后采用质量分数为50％的聚乙二醇6000浓缩至原体积的1/4；加入DNase和RNase(终浓度分别为30μg/mL)，37.5℃下酶解8h，100℃水浴加热30min使酶失活，冷却至20℃后离心，弃沉淀，收集上清，加入2倍体积丙酮沉淀，得到幽门螺旋杆菌脂多糖；
(3)将步骤(2)制得的幽门螺旋杆菌脂多糖用生理盐水配制成浓度为0.5mg/mL的溶液作为免疫抗原，选取20周龄产蛋母鸡；初次免疫使用弗氏完全佐剂和免疫抗原等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5mL；初次免疫两周后进行第一次加强免疫，使用弗氏不完全佐剂和免疫抗原等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5mL，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫5次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋，并存放于4℃；
(4)将步骤(3)收集的鸡蛋清洗消毒后打破，用蛋黄分离器小心分离卵黄；然后用6倍卵黄体积的纯化水溶解稀释卵黄，20℃搅拌60min，得到溶解液；然后加入按溶解液计终浓度为20g/L的硅藻土和1.3倍溶解液体积的乙醇(预先冷却至15℃以下)，调节pH至7.5，搅拌60min，过滤弃去残渣，得到清液；
(5)向步骤(4)制得的清液中加入按溶解液计终浓度为5g/L的硅藻土和1.5倍溶解液体积的乙醇(预先冷却至15℃以下)，调节pH值至5.0，搅拌60min，过滤弃去上清液，得到固体组分；在固体组分中加入6倍固体组分质量的纯化水溶解，20℃搅拌60min，过滤弃去残渣，得到清液；
(6)将步骤(5)制得的清液用超滤器进行超滤浓缩，浓缩倍数为3倍；冷冻干燥，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。
实施例3抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体的制备
(1)幽门螺杆菌J99(ATCC700824)按照常规方法采用ECY无血培养基、微需氧环境下培养，然后以灭菌生理盐水洗下生长良好的菌苔，菌苔经生理盐水洗涤5次后用3倍菌苔体积的注射用水混悬，-30℃及40℃反复冻融5次后，与等体积的质量分数为90％的苯酚溶液分别预热至68.5℃后混合，68.5℃剧烈搅拌60min，得到混合液；将混合液冰浴至0℃离心，得到酚相；
(2)步骤(1)制得的酚相加等体积无热原水重复洗涤2次，收集水相溶液装于透析袋中，流水透析12h去酚，再用注射用水透析60h；然后采用质量分数为50％的聚乙二醇6000浓缩至原体积的1/4；加入DNase和RNase(终浓度分别为40μg/mL)，36.5℃下酶解6h，100℃水浴加热20min使酶失活，冷却至40℃后离心，弃沉淀，收集上清，加入2倍体积丙酮沉淀，得到幽门螺旋杆菌脂多糖；
(3)将步骤(2)制得的幽门螺旋杆菌脂多糖用生理盐水配制成浓度为1mg/mL的溶液作为免疫抗原，选取20周龄产蛋母鸡；初次免疫使用弗氏完全佐剂和免疫抗原等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5mL；初次免疫两周后进行第一次加强免疫，使用弗氏不完全佐剂和免疫抗原等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5mL，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫3次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋，并存放于4℃；
(4)将步骤(3)收集的鸡蛋清洗消毒后打破，用蛋黄分离器小心分离卵黄；然后用8倍卵黄体积的纯化水溶解稀释卵黄，40℃搅拌2h，得到溶解液；然后加入按溶解液计终浓度为5g/L的硅藻土和0.6倍溶解液体积的乙醇(预先冷却至15℃以下)，调节pH至6.5，搅拌45min，过滤弃去残渣，得到清液；
(5)向步骤(4)制得的清液中加入按溶解液计终浓度为20g/L的硅藻土和2倍溶解液体积的乙醇(预先冷却至15℃以下)，调节pH值至5.4，搅拌40min，过滤弃去上清液，得到固体组分；在固体组分中加入8倍固体组分质量的纯化水溶解，40℃搅拌120min，过滤弃去残渣，得到清液；
(6)将步骤(5)制得的清液用超滤器进行超滤浓缩，浓缩倍数为4倍；冷冻干燥，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。
实施例4抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体的细菌酶标染色
取幽门螺杆菌J99(ATCC700824)作酶标染色，涂片并热固定。将实施例1制得的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体用pH7.4、0.01mol/L的PBS分配成3个浓度(1:10、1:100、1:1000)(mg：mL)滴加于玻片上37℃作用30min后充分洗涤。滴加二抗(HRP酶标兔抗鸡IgY)(Promega Corporation)滴加DAB显色液并显微镜观察，并用未免疫鸡的IgY(免疫前鸡蛋卵黄纯化而来)作为阴性对照。结果表明阴性对照未被染色，3个浓度(1:10、1:100、1:1000)的染色强度分别为+++、+++、+，说明抗幽门螺旋杆菌脂多糖的抗体能和幽门螺杆菌结合。
实施例5抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体的效价测定
将实施例1制得的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体从1：10倍比稀释至1：51200检测其效价。ELISA操作步骤：
(1)将1mL 1mg/mL的幽门螺杆菌脂多糖(实施例1制得)用pH7.4、0.02mol/L的PBS包被液稀释为4mL，包被96孔酶联板，4℃放置24h(湿盒中)；
(2)加入抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体的不同稀释液(每组4平行孔)，37℃温育1h，洗涤；再加入HRP酶标兔抗鸡IgY二抗工作液，37℃温育1h，洗涤；邻苯二胺底物显色30min后滴1滴2mol/L硫酸终止反应，其中，洗涤液为含0.05wt％Tween-20的pH7.4、0.01mol/L PBS；
(3)于492nm比色；其中，阴性对照的一抗为未免疫鸡蛋黄提取物。
结果显示，实施例1制得的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的效价为1：12800。
实施例6抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体致病微生物检测
根据《中国药典》2015版附录1106“非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”的检验方法，对实施例1～3制得的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体进行控制菌检查，未检出耐胆盐革兰阴性菌，大肠埃希菌，沙门菌，铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，梭菌和白色念珠菌。
实施例7抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体禽流感病毒检测
实施例1～3制得的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体用纯化水配制成1mg/mL溶液，使用禽流感病毒胶体金检测试剂盒进行检测，试验结果显示禽流感病毒阴性。
实施例8
一种含抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体的酸奶，制备步骤如下:
(1)准备原料：主要原料包括奶粉和粗品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体(实施例1中所收集的鸡蛋的卵黄，加入无水乙醇脱水，减压干燥得到粗品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体)；
(2)配制乳液：称取奶粉125g和粗品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体8g混合，然后加入75℃，1000mL温开水配制成乳液；
(3)均质：将步骤(2)制得的乳液在均质机上均质2min，均质机的压力保持在10MPa；
(4)灭菌：将步骤(3)中均质后的乳液在90℃的水浴锅中保温10min进行杀菌处理，然后将其冷却至40℃，得到料液；
(5)接种：在无菌条件下，将发酵剂按照1g/1000ml的比例接种到料液中，并将其搅拌均匀，得到接种料液；
(6)发酵：在无菌条件下，将接种料液等量灌装于灭菌的玻璃瓶中并封口，然后将封口好的玻璃瓶放置于42℃恒温培养箱中发酵4h；
(7)后发酵：将步骤(6)中发酵后的玻璃瓶放入4℃的冰箱中进行后发酵，后发酵至少保持24h，得到含抗幽门螺杆菌脂多糖卵黄抗体的酸奶。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于包含如下步骤：
培养幽门螺旋杆菌，提取幽门螺旋杆菌脂多糖；将幽门螺旋杆菌脂多糖和佐剂混合制成抗原，对蛋鸡进行初次免疫和加强免疫，加强免疫共计3～5次；从第一次加强免疫开始，收集鸡蛋，分离，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。
2.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：
所述的幽门螺旋杆菌脂多糖的制备方法，包含如下步骤：
(1)将幽门螺旋杆菌菌苔洗涤后，用水混悬，反复冻融至菌体裂解，得到裂解液；将裂解液与质量分数为90％的苯酚溶液分别预热至67.5～68.5℃后混合，67.5～68.5℃剧烈搅拌30～60min，得到混合液；将混合液冰浴至4℃以下，离心，得到酚相；
(2)步骤(1)制得的酚相加等体积无热原水洗涤，收集水相透析去除苯酚；浓缩；然后加入DNase和RNase酶解，沸水浴使酶失活，冷却后离心，弃沉淀，收集上清，加入丙酮沉淀，得到幽门螺旋杆菌脂多糖。
3.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：
所述的免疫的具体操作为：
选取20周龄产蛋母鸡；初次免疫使用弗氏完全佐剂和幽门螺旋杆菌脂多糖等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射；初次免疫两周后进行第一次加强免疫，使用弗氏不完全佐剂和脂多糖等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫3～5次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋。
4.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：
所述的幽门螺旋杆菌脂多糖的初始浓度为0.5～1mg/mL。
5.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：
所述的分离的具体操作为：
分离所收集的鸡蛋的卵黄，加入无水乙醇脱水，减压干燥得到粗品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体，或者将卵黄进一步纯化，得到成品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。
6.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：
所述的纯化的具体操作为：
(1)用6～9倍卵黄体积的水溶解稀释卵黄，20～40℃搅拌30min～2h，得到溶解液；然后加入硅藻土和0.6～1.3倍溶解液体积的乙醇，调节pH至6.5～7.5，搅拌30min～1h，过滤弃去残渣，得到清液；
(2)向步骤(1)制得的清液中加入硅藻土和1.5～2.5倍溶解液体积的乙醇，调节pH值至5.0～5.4，搅拌30min～1h，过滤弃去上清液，得到固体组分；在固体组分中加入6～9倍固体组分质量的水溶解，20～40℃搅拌30min～2h，过滤弃去残渣，得到清液；
(3)将步骤(2)制得的清液超滤浓缩，干燥，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。
7.根据权利要求6所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的硅藻土的用量为按溶解液计终浓度5～20g/L。
8.根据权利要求6所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的硅藻土的用量为按溶解液计终浓度5～20g/L。
9.一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体，其特征在于通过权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到。
10.权利要求9所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体在制备预防或治疗胃溃疡和胃癌产品中的应用。
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