CN108424939A - 一种制备甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型a形式晶体的方法 - Google Patents

一种制备甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型a形式晶体的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种制备甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型A形式晶体的方法，属于药物化学技术领域。本发明先经果胶酶催化斯替夫苷生成甜菊醇单葡萄糖酯，收集甜菊醇单葡萄糖酯粗品后，采用了重复结晶的方法制备具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体，既可以在制备甜菊醇单葡萄糖酯的过程中获取高纯度的甜菊醇单葡萄糖酯又可以稳定地获得目标晶型，该方法所选试剂低毒环保，具有工艺简单、可操作性强，晶体结晶度高、稳定性好等优点。

Description

一种制备甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型A形式晶体的方法
技术领域
本发明涉及一种制备甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型A形式晶体的方法，属于药物化学技术 领域。
背景技术
甜菊醇单葡萄糖酯(13-hydroxy ent-kaur-16-en-19-oic acid-β-D-glucopyranosyl ester，steviol mono-glucosyl ester,SteE)，其结构式如下式Ⅰ所示：
甜菊醇单葡萄糖酯在甜叶菊中的含量很低，因而直接从甜叶菊中提取在经济上并不可取。 目前有关合成甜菊醇单葡萄糖酯的报道中，甜菊醇单葡萄糖酯的产率基本在10％以内。例如， Yutaka等在发酵罐中使用Eucalyptusperriniana细胞混悬溶液对甜菊醇进行转糖基反应，主要产 物为甜茶苷(rubusoside，Ru)，而副产物甜菊醇单葡萄糖酯的生物转化率仅为9.7％。Nakano等发 现用来自于Aspergillus niger酶制剂Rhozyme HP150可以将29.4％的悬钩子苷分解成质量比为9:1 的甜菊醇和甜菊醇单葡萄糖酯，甜菊醇单葡萄糖酯的产率约为6.86％。而Chaturvedula等以甜菊 醇为原料三步反应(第一步乙酰化保护羟基,第二步和乙酰溴-α-D-葡萄糖酯化，第三步使用三乙 胺脱乙酰化)合成出了甜菊醇单葡萄糖酯。生物转化法合成甜菊醇单葡萄糖酯的主要问题是产量 太低，分离纯化复杂，化学法虽然可以直接获取甜菊醇单葡萄糖酯但甜菊醇高昂的成本和最终 产物的得率都将影响方法的实用性。
在晶体的制备中不同方法会产生不同的晶型，也可能导致其形态、稳定性、吸湿性和溶解 性存在差异，从而影响储存条件、口感和感官评定。而目前大多数化合物晶体都是通过溶液生 长法制备，在制备过程中倘若降温速度快，溶液迅速进入低温环境，溶液四周受热不均匀，内 外温度梯度越大，晶体生长速度越慢，在这过程中容易生成极细小的晶体(或处于无定形态)； 溶液若慢速降温，则形成的晶体一般比较粗大，晶面由下向上推进的速度慢，溶液中溶质迁移 时间充足，所以一般溶液中会出现少量结晶，继续降温结晶生长，得到颗粒大的晶体。而重复 结晶能够改变晶体形态和大小分布、强化结晶、提高非晶相冷却浓缩液的玻璃化转变温度，这 些都对晶体的稳定性、纯度、生物利用度、溶解性等有着重要的影响。
目前，不少甜菊糖苷的晶型制备已被报道并且获得专利授权，例如甜菊糖A苷的晶型就有 多个专利报道，如专利US20070292582A1、WO2010118218A1、CN103739639A和CN103739640A 等。此外，还有专利CN105669794A和CN105646616A分别报道了甜菊糖B苷晶型G和其钠盐晶 型A，专利CN105669795A报道了甜菊糖C苷晶型V，专利CN105037458A报道了甜菊糖D苷晶型 A。这些晶型均表现出结晶度高、溶解性好和稳定性高等优点，但未见有关甜菊醇单葡萄糖酯 晶型的研究报道。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型A形式晶体的制备方法，采用 重复结晶的方法既可以在制备甜菊醇单葡萄糖酯的过程中获取高纯度的甜菊醇单葡萄糖酯又 可以稳定地获得目标晶型，该方法具有工艺简单、可操作性强，晶体结晶度高、稳定性好等 优点。
本发明所述制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，包括以下步骤：
(1)以斯替夫苷为底物用水或缓冲液配制成10-20g/L的反应液，
(2)加入果胶酶(EC 3.2.1.15)，50℃-60℃下加酶反应至甜菊醇单葡萄糖酯的产率不再 提高时停止反应，调节反应液pH至10-11并将反应液过滤，收集滤饼；
(3)将滤饼用甲醇溶解后过滤，对滤液浓缩得到甜菊醇单葡萄糖酯粗产品，将甜菊醇单 葡萄糖酯粗产品重结晶后可得具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。
步骤(2)反应方程式如下所示：
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)配置反应液用的缓冲液为pH 5.0-7.0范围内的醋 酸缓冲液、磷酸缓冲液或柠檬酸缓冲液。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)加入来源于Aspergillus niger的果胶酶(EC 3.2.1.15)。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)果胶酶的加酶量为5-25U/g斯替夫苷。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)每克滤饼用50mL的甲醇溶解后过滤。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中的重复结晶过程，是取一定量的甜菊醇单葡萄 糖酯粗产品与适量溶剂混合，在25℃至低于溶剂沸点1-2℃下搅拌，搅拌速率保持50-100rpm， 持续搅拌时间为1-2h，将溶液冷却，冷却温度在5℃至低于溶剂沸点10-20℃范围内，期间保 持低速搅拌且速率不高于30rpm，持续搅拌0.5-2h；待溶液中析出大量的白色固体时，升温至 低于溶剂沸点1-5℃并持续搅拌，搅拌速率在100-200rpm间，当析出的白色固体全部溶解时， 继续保持搅拌0.5-1h；将溶液降温至5℃至低于升温温度10℃以内，降温速度降温速度不高于 1℃/10min，将析出的甜菊醇单葡萄糖酯晶体溶液过滤，得到滤饼和滤液，将滤饼在30-65℃ 下真空干燥，可得到具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体，将滤液置于25-40℃内一定温 度下干燥或挥发，也可得到具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。其中，用于溶解甜菊 醇单葡萄糖酯粗产品的溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、水、乙酸甲酯或甲酸乙酯中的一种及 一种以上的混合。
本发明制备得到的甜菊醇单葡萄糖酯的晶型A形式晶体的Cu-Kα辐射的X-射线粉末衍射 光谱，以度表示的2θ角(误差范围为±1°)至少在5.9、6.6、7.4、8.9、9.9、11.7、13.1、15.2、 17.5和23.1处有衍射峰；具有分别与图5和图6所示相同的差式扫描热分析图以及热失重分析图 中的主要吸收峰或特征曲线；以表示的晶面间距d和以百分数表示的衍射峰的相对强度具有 如下特征：
本发明先经果胶酶催化斯替夫苷生成甜菊醇单葡萄糖酯，收集甜菊醇单葡萄糖酯粗品后， 采用了重复结晶的方法制备具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体，既可以在制备甜菊醇 单葡萄糖酯的过程中获取高纯度的甜菊醇单葡萄糖酯又可以稳定地获得目标晶型，该方法所 选试剂低毒环保，具有工艺简单、可操作性强，晶体结晶度高、稳定性好等优点。
附图说明
图1是本发明实施例1提供的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体的红外光谱(IR) 图；
图2是本发明实施例1提供的甜菊醇单葡萄糖酯的核磁图谱1H NMR(pridine-d5).
图3是本发明实施例1提供的甜菊醇单葡萄糖酯的核磁图谱13C NMR(400MHz,pridine-d5)
图4是本发明实施例1提供的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体的X-射线粉末衍 射(XRD)图；
图5是本发明实施例1提供的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体的差式扫描热分 析(DSC)图；
图6是本发明实施例1提供的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体的热失重分析 (TG)图；
图7是本发明实施例1提供的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体偏光显微图；
图8是本发明实施例1提供的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体在40℃、湿度 75％的下储存半年的高效液相(HPLC)图。
具体实施方式
所述斯替夫苷的转化率可参照国标(GB2870-2014)通过外标法测定，甜菊醇单葡萄糖的纯度 可通过JECFA法测得：
Xt：时间为t时St的转化率
C0：初始时间St的浓度(mg/mL)
Ct：时间为t时St的浓度(mg/mL)
C:St的初浓度，由外标曲线计算得到
C(St):反应结束后St的浓度(mg/mL)，由外标曲线计算得到
A(SteE)：甜菊醇单葡萄糖酯的峰面积
A(St)：St的峰面积。
纯度的测定及计算方法：
其中
ωi：甜菊醇单葡萄糖酯的质量分数
Ai：甜菊醇单葡萄糖酯的峰面积
A(1、2、3、n)：其它组分峰面积
收率的计算方法：
其中，
Xi：甜菊醇单葡萄糖酯的收率
mi：结晶后甜菊醇单葡萄糖酯的质量
M：初始甜菊醇单葡萄酯的质量。
实施例1制备甜菊醇单葡萄糖酯
将15g斯替夫苷溶解于1L磷酸缓冲液(pH 5，50mM)并置于一夹套反应器中，升温至60℃ 后加入果胶酶(25U/g斯替夫苷)，150rpm搅拌反应至甜菊醇单葡萄糖酯的转化率不再上升后 停止反应，产率为35.0％，将反应液的pH调至10后过滤，收集滤饼。每克滤饼用50mL甲 醇溶解并过滤，将收集的甲醇滤液减压浓缩、干燥，得到甜菊醇单葡萄糖酯粗产品。
在60℃下，加入适量甲醇溶解甜菊醇单葡萄糖酯粗产品并搅拌1h，搅拌速率为120rpm。 将溶液冷却至10℃，期间转速调为30rpm，并持续搅拌2h。当溶液中有大量白色固体析出时， 升温至60℃并将转速控制在100rpm，当析出的白色固体全部溶解时，继续搅拌0.5h。将溶液 温度降至5℃，期间降温速度控制为1℃/h，将析出甜菊醇单葡萄糖酯晶体的溶液过滤，取滤 饼在30℃下真空干燥，即得到的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。通过上述方法制备的甜菊醇单葡萄 糖酯晶体纯度98.7％，收率86.8％。化合物，δ＝5.46(s,1H)、5.01(s,1H)为17号碳上的氢， δ＝1.31(s,6H)为两个甲基，δ＝4.94是残余溶剂水在氘代吡啶中的吸收峰；13C NMR(400MHz, Pyr)δ177.24(s),158.15(s),103.24(s),96.24(s),80.17(s),79.70(s),79.55(s),74.41(s),71.52(s), 62.53(s),57.87(s),54.67(s),48.50(s),47.76(s),44.49(s),42.33(s),42.26(s),41.21(s),41.17(s), 40.25(s),38.81(s),28.95(s),22.65(s),21.21(s),19.91(s),16.15(s).
实施例2制备甜菊醇单葡萄糖酯晶体
制备甜菊醇单葡萄糖酯粗产品的过程同实施例1。
在25℃下，取1.2g甜菊醇单葡萄糖酯粗产品置于一夹套反应器中，加入10mL甲醇并搅 拌1h，搅拌速率为80rpm。将溶液冷却至10℃，期间转速调为30rpm，并持续搅拌2h。当溶 液中有大量白色固体析出时，升温至62℃并将转速控制在100rpm，当析出的白色固体全部溶 解时，继续搅拌0.5h。将溶液温度降至5℃，期间降温速度控制为1℃/h，将析出甜菊醇单葡 萄糖酯的溶液过滤，取滤饼在30℃下真空干燥，得到晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。 通过上述方法制备的甜菊醇单葡萄糖酯晶体纯度为97.3％，收率85.6％。
实施例3制备甜菊醇单葡萄糖酯粗产品
将20g斯替夫苷溶于1L水并置于一夹套反应器中，升温至55℃后加入果胶酶(25U/g斯 替夫苷)，150rpm搅拌反应至甜菊醇单葡萄糖酯的转化率不再上升后停止反应，甜菊醇单葡 萄糖酯的产率为30.4％。将反应液的pH调至11混匀后过滤，收集滤饼。每克滤饼用50mL 甲醇溶解并过滤，将收集的甲醇滤液减压浓缩得到甜菊醇单葡萄糖酯粗产品，收率为72.1％， 纯度为82.3％。
实施例4制备甜菊醇单葡萄糖酯晶体
制备甜菊醇单葡萄糖酯粗产品的过程同实施例3。
在45℃下，将1.2g甜菊醇单葡萄糖酯粗产品置于一夹套反应器中，加入25mL异丙醇并 不断搅拌，转速为100rpm，搅拌1h。将溶液冷却至10℃，期间转速调为15rpm，并持续搅拌 0.5h。当溶液中有大量白色固体析出时，升温至80℃并将转速控制在200rpm，当析出的白色 固体全部溶解时，继续搅拌1h。，将溶液温度降至5℃，期间降温速度控制为3℃/h，将析出 甜菊醇单葡萄糖酯的溶液过滤，取滤饼在40℃下真空干燥，即得到的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。 通过上述方法制备的甜菊醇单葡萄糖酯晶体纯度95.2％，晶体的收率最高可达81.3％。
实施例5制备甜菊醇单葡萄糖酯粗产品
将10g斯替夫苷溶于1L醋酸缓冲液(pH 5，50mM)并置于一夹套反应器中，升温至60℃ 后加入果胶酶(5U/g斯替夫苷)，150rpm搅拌反应至甜菊醇单葡萄糖酯的转化率不再上升后 停止反应，得到产率为31％甜菊醇单葡萄糖酯。将反应液的pH调至10.5混匀后过滤，收集 滤饼。每克滤饼用50mL甲醇溶解并过滤，将收集的甲醇滤液减压浓缩后甜菊醇单葡萄糖酯 的收率74.6％，粗品的纯度为83.4％。
实施例6制备甜菊醇单葡萄糖酯粗产品
将15g的斯替夫苷溶于1L柠檬酸缓冲液(pH 5.5，50mM)并置于一夹套反应器中，升温 至50℃后加入果胶酶(20U/g斯替夫苷)，150rpm搅拌反应至甜菊醇单葡萄糖酯的转化率不 再上升后停止反应，得到产率为34.2％的甜菊醇单葡萄糖酯。将反应液的pH调至10混匀后 过滤，收集滤饼。每克滤饼用50mL甲醇溶解后过滤，将收集的甲醇滤洗液减压浓缩后甜菊 醇单葡萄糖酯的收率75.3％，粗品的纯度为86.7％。
对比例1
将15g斯替夫苷溶于1L柠檬酸缓冲液(pH 5.5，50mM)并置于一夹套反应器中，升温至 75℃后加入果胶酶(20U/g斯替夫苷)，150rpm下反应，至甜菊醇单葡萄糖酯的转化率不再上 升后停止反应，得到产率为12.2％的甜菊醇单葡萄糖酯。将反应液的pH调至10后过滤，收 集滤饼。每克滤饼用50mL甲醇溶解后过滤，将收集的甲醇滤洗液减压浓缩后得到的甜菊醇 单葡萄糖酯收率43.2为％，粗品的纯度为54.8％。
对比例2
将15g斯替夫苷溶于1L醋酸缓冲液(pH 2，50mM)并置于一夹套反应器中，升温至50℃ 后加入果胶酶(20U/g斯替夫苷)，150rpm搅拌反应至甜菊醇单葡萄糖酯的转化率不再上升后 停止反应，此时甜菊醇单葡萄糖酯的产率为9％。将反应液的pH调至10混匀后过滤，收集 滤饼。每克滤饼用50mL甲醇溶解后过滤，将收集的甲醇滤液减压浓缩得到甜菊醇单葡萄糖 酯粗品，收率为39.3％，纯度为51.2％。
实施例7制备甜菊醇单葡萄糖酯粗产品
将10g斯替夫苷溶于1L磷酸缓冲液(pH6，50mM)并置于一夹套反应器中，升温至50℃ 后加入果胶酶(5U/g斯替夫苷)，150rpm搅拌反应至甜菊醇单葡萄糖酯的转化率不再上升后 停止反应，得到产率为32.2％的甜菊醇单葡萄糖酯。将反应液的pH调至10后过滤，收集滤 饼。每克滤饼用50mL甲醇溶解后过滤，将收集的甲醇滤液减压浓缩得到甜菊醇单葡萄糖酯 粗品，收率73.5％，纯度为84.7％。
实施例8制备甜菊醇单葡萄糖酯晶体
制备甜菊醇单葡萄糖酯粗产品的过程同实施例7。
在50℃下，将0.6g甜菊醇单葡萄糖酯粗产品置于一夹套反应器中，加入15mL乙酸甲酯 混合后搅拌，转速为50rpm，搅拌1h。将溶液冷却至8℃，期间转速调为10rpm，并持续搅拌 1.2h。当溶液中有大量白色固体析出时，升温至55℃并将转速控制在120rpm，当析出的白色 固体全部溶解时，继续搅拌0.6h。将溶液温度降至5℃，期间降温速度控制为3℃/h，将析出 甜菊醇单葡萄糖酯的溶液过滤，取滤饼在40℃下真空干燥，即得到的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。 通过上述方法制备的甜菊醇单葡萄糖酯晶体纯度为96.3％，收率为82.5％。
实施例9制备甜菊醇单葡萄糖酯晶体
制备甜菊醇单葡萄糖酯粗产品的过程同实施例7。
在50℃下，将1.3g甜菊醇单葡萄糖酯粗产品样品与25mL甲醇溶液(甲醇：水＝9:1，V:V) 在一夹套反应器中混合，不断搅拌，转速为50rpm，搅拌1.5h。将溶液冷却至10℃，期间转 速调为10rpm，并持续搅拌0.6h。当溶液中有大量白色固体析出时，升温至62℃并将转速控 制在120rpm，当析出的白色固体全部溶解时，继续搅拌0.5h。将溶液温度降至5℃，期间降 温速度控制为3℃/h，将析出甜菊醇单葡萄糖酯的溶液过滤，取滤饼在40℃下真空干燥，即 得到的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。通过上述方法制备的甜菊醇单葡萄糖酯晶体纯度为96.5％， 收率83.7％。
对上述实施例制得的甜菊醇单葡萄糖酯晶体进行X-射线粉末衍射分析(XRD)、差示扫描量 热分析(DSC)、热失重分析(TG)等。经测定，实施例1-9得到的晶体均具有晶型A形式的甜 菊醇单葡萄糖酯晶体的结构特征，具体分析方法与表征与实施例1相同，下述以实施例1进行 具体说明。
(1)XRD分析其采用德国布鲁克AXS有限公司BrukerD8Advance型的衍射仪于室温进 行检测，使用Cu-Kα射线2θ角扫描从3度到50度,扫描速度为4度/分。其分析结果见图4，XRD谱图显示上述实施例1制得的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体具有良好的结晶度。
在样品粉末X射线粉末衍射图谱中，由特定晶型得到的衍射谱图往往是特征性的。因为结 晶条件、粒径、混合物的相对含量和其它测试条件的差异，衍射谱图可能会产生择优取向效果, 从而导致谱图中某些谱带，尤其是在低角度的相对强度发生变化。因此，衍射峰的相对强度对 所针对的晶体并非是特征性的，判断是否与已知的晶型相同时，更应该注意的是峰的位置而不 是它们的相对强度。另外，判断晶型是否一样时应注意保持整体观念，因为并不是一条衍射线 代表一个物相，而是一套特定的“dI/I1”数据才代表某一物相。还应指出的是，在混合物的鉴定 中，由于含量下降等因素会造成部分衍射线的缺失，此时，无需依赖高纯试样中观察到的全部 谱带，甚至一条谱带也可能对给定的晶体是特征性的。
(2)DSC分析：其采用美国TA仪器公司的DSC Q2000型差示扫描量热仪进行检测，气氛为氮气,加热速度为10摄氏度/分钟。其分析结果见图5，可以看到所述晶型A其在40-90℃有较为明显的的吸热峰。
(3)TG分析：其采用瑞士梅特勒-托利多国际贸易公司的TGA-1100SF型热重分析仪检测， 温度范围50-500℃，扫描速率：10K/min，吹扫气：25L/min。其分析结果见图6，所述晶型 A的热重分析在235±10℃开始分解。
(4)偏光显微镜照片：其采用卡尔.蔡司公司的偏光显微镜进行实验，测试放大倍数倍。 其分析结果见图7。偏光照片显示，上述实施例制得的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶 体为柱状晶体，具有良好的形貌特征。
(5)HPLC分析：
对上述实施例制得的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体，40℃、相对湿度75％存储 半年后进行HPLC分析，分析其采用美国waters有限公司的waters2695液相色谱仪测定。
样品溶液配制方法：精确称量25-50毫克具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体样品， 放入25毫升的容量瓶中，然后加入水—乙腈(7:3，v/v)溶液，进行溶解并定容至刻度。
磷酸钠缓冲液(规格:10mmol/L,pH值2.6)的配置方法：将3.12克磷酸二氢钠溶解到2升水 中，加入磷酸，将pH值调至2.6。色谱柱：Kromasil公司的C18型色谱柱。
进样量10μL。流速1.0mL/min。柱温40℃。检测器：210nm紫外检测。流动相：乙腈 和磷酸钠缓冲液(规格：10mmol/L，pH2.6)的比例为32：68。
其分析结果见图8，上述实施例制得的具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体经HPLC 分析显示在40℃、RH75％条件下储存半年后，纯度仍高达98.6％。其纯度变化约为0.1％。
上述实施例中所用的甜菊醇单葡萄糖酯由甜菊糖苷中斯提夫苷的酶促水解制得。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人， 在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以 权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以斯替夫苷为底物用水或缓冲液配制成10-20g/L的反应液，
(2)加入果胶酶(EC 3.2.1.15)，50℃-60℃下加酶反应至甜菊醇单葡萄糖酯的产率不再提高时停止反应，调节反应液pH至10-11并将反应液过滤，收集滤饼；
(3)将滤饼用甲醇溶解后过滤，对滤液浓缩得到甜菊醇单葡萄糖酯粗产品，将甜菊醇单葡萄糖酯粗产品重结晶后可得具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。
2.根据权利要求1所述的一种制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，其特征在于，步骤(1)配置反应液用的缓冲液为pH 5.0-7.0范围内的醋酸缓冲液、磷酸缓冲液或柠檬酸缓冲液。
3.根据权利要求1或2所述的一种制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，其特征在于，步骤(2)加入来源于Aspergillus niger的果胶酶(EC 3.2.1.15)。
4.根据权利要求1～3任一所述的一种制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，其特征在于，步骤(2)果胶酶的加酶量为5-25U/g斯替夫苷。
5.根据权利要求1～4任一所述的一种制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，其特征在于，步骤(3)中的重复结晶过程，是取一定量的甜菊醇单葡萄糖酯粗产品与适量溶剂混合，在25℃至低于溶剂沸点1-2℃下搅拌一段时间，将溶液冷却到5℃至低于溶剂沸点10-20℃范围内，期间低速搅拌，待溶液中析出大量的白色固体时，升温至低于溶剂沸点1-5℃并持续搅拌，当析出的白色固体全部溶解时，继续保持搅拌一段时间；将溶液降温至5℃至低于升温温度10℃以内，将析出的甜菊醇单葡萄糖酯晶体溶液过滤，得到滤饼和滤液，将滤饼真空干燥，可得到具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体，将滤液干燥或挥发，也可得到具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。
6.根据权利要求5所述的一种制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，其特征在于，其中，用于溶解甜菊醇单葡萄糖酯粗产品的溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、水、乙酸甲酯或甲酸乙酯中的一种及一种以上的混合。
7.根据权利要求5所述的一种制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，其特征在于，将滤饼在30-65℃下真空干燥，得到具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体，将滤液置于25-40℃内一定温度下干燥或挥发，得到具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。
8.根据权利要求5～7任一所述的一种制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，其特征在于，步骤(3)中的重复结晶过程，是取一定量的甜菊醇单葡萄糖酯粗产品与适量溶剂混合，在25℃至低于溶剂沸点1-2℃下搅拌，搅拌速率保持50-100rpm，持续搅拌时间为1-2h，将溶液冷却，冷却温度在5℃至低于溶剂沸点10-20℃范围内，期间保持搅拌速率不高于30rpm，持续搅拌0.5-2h；待溶液中析出大量的白色固体时，升温至低于溶剂沸点1-5℃并持续搅拌，搅拌速率在100-200rpm间，当析出的白色固体全部溶解时，继续保持搅拌0.5-1h；将溶液降温至5℃至低于升温温度10℃以内，降温速度降温速度不高于1℃/10min，将析出的甜菊醇单葡萄糖酯晶体溶液过滤，得到滤饼和滤液，将滤饼在30-65℃下真空干燥，可得到具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体，将滤液置于25-40℃内一定温度下干燥或挥发，也可得到具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体。
9.甜菊醇单葡萄糖酯的晶型A形式晶体，其特征在于，使用Cu-Kα射线测量得到的X-射线粉末衍射分析，以角度表示的2θ值(误差范围为±1°)，以表示的晶面间距d和以百分数表示的衍射峰的相对强度具有如下特征：
10.权利要求9所述甜菊醇单葡萄糖酯的晶型A形式晶体在食品、药品和护肤品中的应用。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102712940A (zh) * 2010-01-19 2012-10-03 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用酶从甜菊苷中制备甜菊醇的方法
WO2017073717A1 (ja) * 2015-10-30 2017-05-04 サントリーホールディングス株式会社 Ａｏｂｇｌ１ホモログを用いたステビオール配糖体およびステビオールの製造方法
CN107188800A (zh) * 2017-07-19 2017-09-22 江南大学 具有晶型a形式的甜菊醇晶体、其制备方法及应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102712940A (zh) * 2010-01-19 2012-10-03 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用酶从甜菊苷中制备甜菊醇的方法
WO2017073717A1 (ja) * 2015-10-30 2017-05-04 サントリーホールディングス株式会社 Ａｏｂｇｌ１ホモログを用いたステビオール配糖体およびステビオールの製造方法
CN107188800A (zh) * 2017-07-19 2017-09-22 江南大学 具有晶型a形式的甜菊醇晶体、其制备方法及应用

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