CN108419678A - 一种砂质植物组织培养基及其制备方法与应用 - Google Patents

一种砂质植物组织培养基及其制备方法与应用 Download PDF

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    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
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Abstract

本发明公开了一种砂质植物组织培养基及其制备方法与应用。砂质植物组织培养基由河砂、营养液、植物生长调节剂、抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和杀菌剂组成，以1L计，营养液10~200ml/L，植物生长调节剂6‑BA、NAA、IBA、IAA等各0.01~10.0ml/L、抗坏血酸0.1~5.0g/L，聚乙烯吡咯烷酮1~5g/L，杀菌剂3~15g/L，其余为河砂；所述的营养液包括MS营养液、蔗糖、Zt、6‑BA和NAA。制备方法包括前处理、培养基配制和配制后的处理等步骤，应用为所述的砂质植物组织培养基可以在培养藤本植物、草本植物和木本植物的组织培养中的广泛应用。本发明是利用细净的河沙作为固体介质，替代琼脂，可降低培养基的成本，河沙循环多次利用，且不需要精确地调节植物组织培养基中营养液、植物生长激素和植物有机营养液的酸碱度。

Description

一种砂质植物组织培养基及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于栽培技术领域，进一步属于植物组织培养、植物组织快速繁殖和现代无土栽培技术领域，具体涉及一种砂质植物组织培养基及其制备方法与应用。
背景技术
在植物组织培养中，培养基主要有固体、液体和半固体培养基三种。其中：液体培养基为液态，用各种营养成分加水配成，或用天然物质的浸汁(麦芽汁、豆芽汁等)制成；固体培养基呈固态，是在液体培养基中加入琼脂作为固体培养基质；半固体培养基呈稀糊状，是在液体培养基中加入0.2～0.5%琼脂制成。
但是针对固体培养基制作和应用中，在配制固体培养基时需要加入适量的琼脂，而琼脂等凝固剂的成本高，也不能循环多次利用，并且在配制固体培养基的过程中，加入各种植物营养液、植物生长调节剂、糖类、植物有机营养液之后，固体培养基本身容易霉变；同时，在配制固体培养基时，需要对琼脂（该琼脂无法循环多次利用）、大量元素营养液、微量元素营养液、糖液、有机添加物质和激素等培养液的酸碱度用酸液或碱液进行精确调节，如果固体培养基液的酸碱度调控不准，容易导致固体培养基消毒灭菌冷却之后过硬或太软，不利于植物组织培养，甚至导致组织培养失败。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种砂质植物组织培养基；第二目的在于提供所述的砂质植物组织培养基的制备方法；第三目的在于提供所述的砂质植物组织培养基的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的砂质植物组织培养基有河砂、植物生长调节剂、营养液、抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和杀菌剂组成，以1L计，营养液10~200ml/L，蔗糖10~30g/L，植物生长调节剂0.04~40ml/L，抗坏血酸0.1~5.0g/L，聚乙烯吡咯烷酮1~5g/L，杀菌剂1~15g/L，其余为河砂。
本发明的第二目的是这样实现的，包括河砂前处理、砂质培养基配制和配制后处理步骤，具体包括：
A、河砂前处理：将河砂经清水洗净，去除泥土和杂物，晒干或晾干，过10~50目筛得到细净河砂备用；
B、砂质培养基配制：按原料配方配比将植物生长调节剂、营养液、抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和杀菌剂加入到A步骤处理后的细净河砂中，混合均匀得到目标物砂质植物组织培养基；
C、配制后处理：将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶中，盖紧瓶盖后灭菌备用。
本发明的第三目的是这样实现的，所述的砂质植物组织培养基在制备藤本植物、草本植物和木本植物组织培养基中的应用。
所述的藤本植物包括葡萄、猕猴桃等藤本植物的外植体接种、丛生芽诱导、不定根诱导培养。
所述的草本植物包括重楼、白芨、草莓、紫丹参、铁皮石斛、大花蕙兰、蝴蝶兰、菊花等草本植物的外植体接种、丛生芽诱导、不定根诱导培养。
所述的木本植物包括蓝莓、杜鹃、山茶、油茶、构树等的外植体接种、丛生芽诱导、不定根诱导培养。
本发明利用细净、干燥的河砂与植物组织培养营养液、植物生长调节剂、抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮及杀菌剂组成，制作成新型固体砂质培养基。在本发明中，利用细净、干燥的河砂代替琼脂制作固体培养基介质，不仅可以减少琼脂等凝固剂的成本，河砂还可以循环多次利用，而且用细净河砂代替琼脂作固体介质中，加入各种植物营养液、植物生长调节剂、糖类、植物有机营养液之后，能供给植物组织培养材料正常生长所需要的各种养分、也不需要用酸液或碱液进行精确调节培养基的酸碱度，还可以避免固体培养基消毒灭菌冷却之后过硬或太软不利于植物组织培养的限制，而且利用河沙的颗粒状结构来增强基质的透气性，达到植物组织培养中固定、保湿、透气的目的，满足植物的组织培养过程中水分、养分、激素和透气等功能，更有利于植物的植物组织培养、植物组培快速繁殖和现代无土栽培。
本发明主要针对传统的植物组织培养中，在配制固体培养基时需要加入适量的琼脂，加入糖类、植物有机营养液之后，固体培养基本身容易霉变，在配制固体培养基时，需要对琼脂、大量元素营养液、微量元素营养液、糖液、有机添加物质和激素等培养液的酸碱度用酸液或碱液进行精确调节，如果固体培养基液的酸碱度调控不准，容易导致固体培养基消毒灭菌冷却之后过硬或过软，不利于植物组织培养或导致组织培养失败等诸多问题。
本发明是利用细净的河沙作为固体介质，替代琼脂，不仅可以降低成本，而且利用河沙来吸附植物组织培养的营养液、植物生长激素和植物有机营养液，同时，在配制固体培养基时不需要很精确地调节营养液、植物生长激素和植物有机营养液的酸碱度，培养基就以提供植物组织培养的支撑固体介质、养分溶液和有机成分，供给植物组织培养材料的正常生长，并且同时利用河沙的颗粒状结构来增强基质的透气性，达到植物组织培养中固定、保湿、透气的目的，满足植物的组织培养过程中水分、养分、激素和透气等功能，因此，本发明所述的砂质植物组织培养基更有利于植物的组织培养，目前，发明人已经在铁皮石斛、白芨、马蹄莲、大花蕙兰等植物的组织培养过程中进行了广泛的验证，具有传统固体琼脂培养基无法替代的效果。本发明适用于植物组织培养、植物组培快速繁殖和现代无土栽培的全部环节，不仅可以用于外植体接种培养、丛生芽诱导，而且适用于植物组织培养中的生根培养全过程。
附图说明
图1为本发明砂质植物组织培养基用于铁皮石斛培养的示意图；
图2为本发明砂质植物组织培养基用于大花蕙兰培养的示意图；
图3为本发明砂质植物组织培养基用于马蹄莲培养的示意图；
图4为本发明砂质植物组织培养基用于大花卉兰不定根诱导示意图；
图5为本发明砂质植物组织培养基用于草莓不定根诱导示意图；
图6为本发明砂质植物组织培养基用于紫丹参不定根诱导示意图；
图7为本发明砂质植物组织培养基用于白芨丛不定根诱导示意图；
图8为本发明砂质植物组织培养基用于菊花组培快繁示意图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的砂质植物组织培养基有河砂、植物生长调节剂、营养液、抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和杀菌剂组成，以1L计，营养液10~200ml/L，蔗糖10~30g/L，植物生长调节剂0.04~40ml/L，抗坏血酸0.1~5.0g/L，聚乙烯吡咯烷酮1~5g/L，杀菌剂1~15g/L，其余为河砂。
所述的植物生长调节剂为6-BA、NAA、IBA、IAA、Zt和Kt。
所述的植物生长调节剂中6-BA为0.0~10.0mg/L，NAA为0.0~10.0mg/L、IBA为0.01~10.0mg/L，IAA为0.01~10.0mg/L， Zt为1~5mg/L，Kt为1~5mg/L。
所述的杀菌剂为百菌清、多菌灵、甲基托布津、敌克松、五氯硝基苯、粉锈宁、恶霉灵、苯菌灵和噻菌灵中的一种或几种。
所述的杀菌剂为百菌清和多菌灵。
所述的杀菌剂中百菌清为1~15g/L，多菌灵为1~15g/L。
本发明所述的砂质植物组织培养基的制备方法，包括河砂前处理、砂质培养基配制和配制后处理步骤，具体包括：
A、河砂前处理：将河砂经清水洗净，去除泥土和杂物，晒干或晾干，过10~50目筛得到细净河砂备用；
B、砂质培养基配制：按原料配方配比将植物生长调节剂、营养液、抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和杀菌剂加入到A步骤处理后的细净河砂中，混合均匀得到目标物砂质植物组织培养基；
C、配制后处理：将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶中，盖紧瓶盖后灭菌备用。
A步骤中所述的清洗是经清水漂洗干净，无泥浆、无杂物。
C步骤中所述的灭菌为高压灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15~60min。
本发明所述的砂质植物组织培养基的应用为所述的砂质植物组织培养基在制备藤本植物、草本植物和木本植物组织培养基中的应用。
实施例1
1.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
1.2新型砂质植物组织培养培养基的配制与后处理
根据铁皮石斛丛生芽诱导培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA0.1mg/L +6-BA 2.0 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L。各种铁皮石斛丛生芽诱导培养基配方培养液与河砂充分混合，干湿适度，将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
1.3接种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于铁皮石斛丛生芽诱导）
在超净工作台内，用无菌接种工具将铁皮石斛的愈伤组织原球茎或丛生苗幼苗接种在灭菌冷却后的目标培养基中，每瓶接种3-5丛，盖紧瓶盖，移入培养室内培养，经过20-60天后，长出大量的铁皮石斛丛生芽苗，并且丛生芽苗叶色浓绿、生长健壮。
实施例2
2.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
2.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据铁皮石斛不定芽诱导培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA1.0mg/L +6-BA 0.1 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L。各种铁皮石斛不定根诱导培养基配方培养液与河砂充分混合，干湿适度，将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
2.3接种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于铁皮石斛不定根诱导）
在超净工作台内，用无菌接种工具将铁皮石斛的愈伤组织原球茎或丛生苗幼苗接种在灭菌冷却后的目标培养基中，每瓶接种3-5丛铁皮石斛丛生芽苗，盖紧瓶盖，移入培养室内培养，经过20-60天后，长出大量的铁皮石斛不定根组培苗，并且根系完整、每株有不定根5-7条，长约3-8cm,组培苗叶色浓绿、生长健壮。
实施例3
3.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
3.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据大花卉兰丛生芽诱导培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA2.0 mg/L + NAA 0.5 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L。将各种大花卉兰丛生芽诱导培养基配方培养液与河砂充分混合，干湿适度，将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
3.3接种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于大花蕙兰丛生芽诱导）
在超净工作台内，用无菌接种工具将大花卉兰的愈伤组织原球茎或丛生苗幼苗接种在灭菌冷却后的目标培养基中，每瓶接种3-5丛大花卉兰丛生芽苗，盖紧瓶盖，移入培养室内培养，经过20-60天后，长出大量的大花卉兰丛生芽苗，并且丛生芽苗叶色浓绿、生长健壮。
实施例4
4.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
4.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据大花卉兰不定芽诱导培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA3.0mg/L +6-BA 0.5 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L。各种铁皮石斛不定根诱导培养基配方培养液与河砂充分混合，干湿适度，将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
4.3接种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于大花卉兰不定根诱导）
在超净工作台内，用无菌接种工具将大花卉兰的愈伤组织原球茎或丛生苗幼苗接种在灭菌冷却后的目标培养基中，每瓶接种3-5丛大花卉兰丛生芽苗，盖紧瓶盖，移入培养室内培养，经过20-60天后，长出大量的大花卉兰不定根组培苗，并且根系完整、每株有不定根3-5条、长约3-8cm乳白色的肉质根，同时组培苗叶色浓绿、生长健壮、长势良好。
实施例5
5.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
5.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据葡萄组培快繁培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.1 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导葡萄茎尖；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA 1.5 mg/L + IBA 0.1mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导葡萄丛生芽；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + IBA 1.2 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导葡萄不定根。将各种培养基配方培的养液与河砂充分混合，干湿适度，分别将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
5.3接种转种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于葡萄组培快繁）
在超净工作台内，用无菌接种工具将无菌的葡萄茎尖接种于茎尖愈伤诱导培养基中，每瓶接种3-5个点；将葡萄愈伤组织接种于丛生芽诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；将葡萄丛生芽苗接种于不定根诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；盖紧瓶盖，移入培养室内培养。经过30-60天后，葡萄茎尖诱导成愈伤组织的诱导率达95% ；葡萄愈伤分化成丛生芽苗的分化率达100%；葡萄不定根诱导的生根率达90.3% 。并且经砂质培养基组织培养得到的葡萄组培苗根系完整、有不定根4-8条，长约3-10cm、组培苗叶色浓绿、生长健壮、长势良好。
实施例6
6.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
6.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据草莓不定芽诱导培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA0.5mg/L + 活性炭3.0g/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L。将各种不定根诱导培养基营养液与河砂充分混合，干湿适度，将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
6.3接种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于草莓不定根诱导）
在超净工作台内，用无菌接种工具将无菌草莓的丛生苗幼苗接种在灭菌冷却后的目标培养基中，每瓶接种3-5丛草莓丛生芽苗，盖紧瓶盖，移入培养室内培养，经过20-30天后，长出大量的乳白色草莓不定根组培苗，并且根系完整、每株有不定根3-5条、长约3-8cm，同时组培苗叶色浓绿、生长健壮、长势良好。
实施例7
7.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
7.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据紫丹参不定芽诱导培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA0.2 mg/L + NAA 2.0 mg/L + 活性炭3.0g/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L。将各种不定根诱导培养基营养液与河砂充分混合，干湿适度，将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
7.3接种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于紫丹参不定根诱导）
在超净工作台内，用无菌接种工具将无菌紫丹参的丛生苗幼苗接种在灭菌冷却后的目标培养基中，每瓶接种3-5丛紫丹参丛生芽苗，盖紧瓶盖，移入培养室内培养，经过20-30天后，长出大量的乳白色紫丹参不定根组培苗，并且根系完整、每株有不定根3-5条、长约6-15cm，同时组培苗叶色浓绿、生长健壮、长势良好。
实施例8
8.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
8.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据白芨丛生芽诱导培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA 1.0mg/L + NAA 0.1 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵2 g/L + 抗坏血酸2.0g/L。将各种白芨丛生芽诱导培养基配方培养液与河砂充分混合，干湿适度，将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
8.3接种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于白芨丛生芽诱导）
在超净工作台内，用无菌接种工具将白芨的愈伤组织原球茎苗接种在灭菌冷却后的目标培养基中，每瓶接种3-5个点，盖紧瓶盖，移入培养室内培养，经过20-60天后，长出大量的白芨丛生芽苗，并且丛生芽苗叶色浓绿、生长健壮。
实施例9
9.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
9.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据白芨不定根诱导培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA 0.5mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵2 g/L + 抗坏血酸2.0g/L。将各种白芨不定根诱导培养基配方培养液与河砂充分混合，干湿适度，将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
9.3接种培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于白芨丛不定根诱导）
在超净工作台内，用无菌接种工具将白芨的丛生芽苗接种在灭菌冷却后的目标培养基中，每瓶接种3-5个丛，盖紧瓶盖，移入培养室内培养，经过40-60天后，长出大量的白芨不定根芽苗，根系5-7系，分化完整、并且丛生芽苗叶色浓绿、生长健壮。
实施例10
10.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
10.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据蝴蝶兰组培快繁培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA 5.0mg/L + NAA 1.0 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导蝴蝶兰花梗茎段；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA 7.0 mg/L + IBA0.1 mg/L + NAA 0.5 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导蝴蝶兰丛生芽；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA 1.0 mg/L＋IAA 0.5 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导蝴蝶兰不定根。将各种培养基配方培的养液与河砂充分混合，干湿适度，分别将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
10.3接种、转种培养培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于蝴蝶兰组培快繁）
在超净工作台内，用无菌接种工具将无菌的蝴蝶兰花梗接种于茎尖愈伤诱导培养基中，每瓶接种3-5个点；将蝴蝶兰愈伤原球茎接种于丛生芽诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；将蝴蝶兰丛生芽苗接种于不定根诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；盖紧瓶盖，移入培养室内培养。经过30-60天后，蝴蝶兰花梗接诱导成愈伤组织的诱导率达95% ；蝴蝶兰花梗接原球茎愈伤分化成丛生芽苗的分化率达100%；蝴蝶兰丛生芽不定根的生根诱导率达94.3% 。并且通过砂质培养基组织培养得到的蝴蝶兰组培苗根系完整、有不定根4-8条，乳白色、肉质根长约3-10cm、组培苗叶色浓绿、生长健壮、长势良好。
实施例11
11.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
11.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据菊花组培快繁培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导菊花幼叶外植体；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA 2.0 mg/L + IBA0.2 mg/L + NAA 0.1mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导菊花丛生芽；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA 1.0 mg/L ＋IAA 0.1 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导菊花不定根。将各种培养基配方培的养液与河砂充分混合，干湿适度，分别将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
11.3接种、转种培养培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于菊花组培快繁）
在超净工作台内，用无菌接种工具将无菌的菊花幼叶或茎段接种于茎尖愈伤诱导培养基中，每瓶接种3-5个点；将菊花愈伤组织接种于丛生芽诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；将菊花丛生芽苗接种于不定根诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；盖紧瓶盖，移入培养室内培养。经过20-50天后，菊花幼叶或幼嫩茎段接种于愈伤诱导培养基中，经10-20天即诱导出菊花愈伤组织，愈伤组织的诱导率达95% ；菊花的愈伤组织接种于诱导丛生芽苗分化培养基中，经30-60天分化成丛生芽苗，丛生芽苗的分化率达100%；将菊花丛生芽接种于诱导不定根的培养基中，经过30-60天后不定根的生根诱导率达100% 。并且通过砂质培养基的组织基中培养得到的菊花组培苗根系完整、有不定根4-10条，根长约5-10cm、组培苗叶色浓绿、生长健壮、长势良好。
实施例12
12.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
12.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据构树组培快繁培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA1.5mg/L+ NAA 0.2 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导构树幼叶外植体；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA 1.5 mg/L + KT 0.2mg/L + NAA 0.5mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导构树丛生芽；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA 0.5 mg/L + 蔗糖15g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导构树不定根。将各种培养基配方培的养液与河砂充分混合，干湿适度，分别将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
12.3接种、转种培养培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于构树组培快繁）
在超净工作台内，用无菌接种工具将无菌的构树幼叶或茎段接种于茎尖愈伤诱导培养基中，每瓶接种3-5个点；将构树愈伤组织接种于丛生芽诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；将构树丛生芽苗接种于不定根诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；盖紧瓶盖，移入培养室内培养。经过20-50天后，构树幼叶或幼嫩茎段接种于愈伤诱导培养基中，经10-20天即诱导出构树愈伤组织，愈伤组织的诱导率达95% ；构树的愈伤组织接种于诱导丛生芽苗分化培养基中，经30-60天分化成丛生芽苗，丛生芽苗的分化率达100%；将构树丛生芽接种于诱导不定根的培养基中，经过30-60天后不定根的生根诱导率达100% 。并且通过砂质培养基组织培养得到的构树组培苗根系完整、有不定根3-6条，根长约5-8cm、组培苗叶色浓绿、生长健壮、长势良好。
实施例13
13.1前处理
取回当地的细河砂，放于清水中清洗，洗去泥土和杂物，晒干或晾干，通过10 - 50目的网筛过筛得到细净、干燥的河砂；
13.2砂质植物组织培养基的配制与后处理
根据马蹄莲组培快繁培养基配方，取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA1.5mg/L + NAA 0.1 mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导马蹄莲带芽的块茎外植体；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + 6-BA0.5 mg/L + KT 2.0mg/L + NAA 0.1mg/L + 蔗糖25g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L +抗坏血酸2.0g/L，用于诱导马蹄莲丛生芽；取洁净备用的河砂1升，加入MS营养液 + NAA0.5 mg/L + 蔗糖10g/L + 百菌清2 g/L + 多菌灵5 g/L + 抗坏血酸2.0g/L，用于诱导马蹄莲不定根。将各种培养基配方培的养液与河砂充分混合，干湿适度，分别将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶内，每瓶50cm3，盖紧瓶盖放于高压灭菌器内灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15-60分钟，灭菌后取出移至超净工作台内备用。
13.3接种、转种培养培养（本实施例制备得到的砂质植物组织培养基应用于马蹄莲组培快繁）
在超净工作台内，用无菌接种工具将无菌的带芽眼马蹄莲块茎接种于愈伤诱导培养基中，每瓶接种3-5个点；将马蹄莲愈伤组织接种于丛生芽诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；将马蹄莲丛生芽苗接种于不定根诱导目标培养基中，每瓶接种3-5个；盖紧瓶盖，移入培养室内培养。经过20-50天后，马蹄莲茎段诱导出愈伤组织，愈伤组织的诱导率达90% ；马蹄莲的愈伤组织接种于诱导丛生芽苗分化培养基中，经30-60天分化成丛生芽苗，丛生芽苗的分化率达100%；将马蹄莲丛生芽接种于诱导不定根的培养基中，经过30-60天后不定根的生根诱导率达100%，并且通过砂质培养基组织培养得到的马蹄莲组培苗根系完整、不定根4-6条，根长约3-10cm、马蹄莲组培苗叶色浓绿、生长健壮、长势良好。

Claims (10)

1.一种砂质植物组织培养基，其特征在于所述的砂质植物组织培养基有河砂、植物生长调节剂、营养液、抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和杀菌剂组成，以1L计，营养液10~200ml/L，蔗糖10~30g/L，植物生长调节剂0.04~40ml/L，抗坏血酸0.1~5.0g/L，聚乙烯吡咯烷酮1~5g/L，杀菌剂1~15g/L，其余为河砂。
2.根据权利要求1所述的砂质植物组织培养基，其特征在于所述的植物生长调节剂为6-BA、NAA、IBA、IAA、Zt和Kt。
3.根据权利要求2所述的砂质植物组织培养基，其特征在于所述的植物生长调节剂中6-BA为0.0~10.0mg/L，NAA为0.0~10.0mg/L、IBA为0.01~10.0mg/L，IAA为0.01~10.0mg/L，Zt为1~5mg/L，Kt为1~5mg/L。
4.根据权利要求1所述的砂质植物组织培养基，其特征在于所述的杀菌剂为百菌清、多菌灵、甲基托布津、敌克松、五氯硝基苯、粉锈宁、恶霉灵、苯菌灵和噻菌灵中的一种或几种。
5.根据权利要求1或4所述的砂质植物组织培养基，其特征在于所述的杀菌剂为百菌清和多菌灵。
6.根据权利要求5所述的砂质植物组织培养基，其特征在于所述的杀菌剂中百菌清为1~15g/L，多菌灵为1~15g/L。
7.一种权利要求1~6所述的砂质植物组织培养基的制备方法，其特征在于包括河砂前处理、砂质培养基配制和配制后处理步骤，具体包括：
A、河砂前处理：将河砂经清水洗净，去除泥土和杂物，晒干或晾干，过10~50目筛得到细净河砂备用；
B、砂质培养基配制：按原料配方配比将植物生长调节剂、营养液、抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和杀菌剂加入到A步骤处理后的细净河砂中，混合均匀得到目标物砂质植物组织培养基；
C、配制后处理：将目标物砂质植物组织培养基分装于培养瓶中，盖紧瓶盖后灭菌备用。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的清洗是经清水漂洗干净，无泥浆、无杂物。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于C步骤中所述的灭菌为高压灭菌，灭菌温度为121℃、灭菌时间15~60min。
10.一种权利要求1所述的砂质植物组织培养基的应用，其特征在于所述的砂质植物组织培养基在制备藤本植物、草本植物和木本植物组织培养基中的应用。
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