CN108410751A - 一种粪产碱杆菌及其在偶氮染料降解脱色中的应用 - Google Patents

一种粪产碱杆菌及其在偶氮染料降解脱色中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种粪产碱杆菌，命名为粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ‑010，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14108。本发明公开了该菌株在偶氮染料降解脱色中的应用，该应用方法的步骤为：1、斜面培养；2、种子培养；3、降解脱色：将培养好的种子离心收集菌体，将收集的菌体全部转移到脱色培养基中，在温度30‑45℃、pH值6.0‑9.0的条件下对偶氮染料进行降解脱色4‑24小时，脱色率达92.62％‑99.17％。本发明首次获得对偶氮染料具有广谱降解脱色作用的粪产碱杆菌，且其对于染料污染的治理以及人类健康的保障都有重要意义。

Description

一种粪产碱杆菌及其在偶氮染料降解脱色中的应用
技术领域
本发明涉及环境微生物技术领域，尤其是一种粪产碱杆菌及其在偶氮染料降解脱色中的应用。
背景技术
合成染料广泛应用于纺织印染、造纸、皮革、化妆品、制药等行业，我国是染料生产大国，每年生产的染料达150万吨以上，每年有10％-20％的染料随着废水被排放到环境中。在印染行业使用的染料就超过1000种，由于纺织等工业的需要，实际应用的合成染料大多数为抗光照、抗氧化的难降解化合物。
合成染料种类繁多，按分子中的基本化学结构可将染料划分为偶氮染料、蒽醌染料、三苯甲烷染料、菁染料、硫化染料、靛旋染料和杂环染料等。偶氮染料因其分子结构中含有一个或多个偶氮双键(-N＝N-)而得名，因其生产成本低廉，生产工艺成熟，得到迅速发展，成为种类最多、使用最广的一类合成染料，约占市场染料的60％-70％。
偶氮根据双键数目的不同又细分为单偶氮染料(如酸性大红3R、甲基橙)、双偶氮染料(如氨基黑10B、刚果红)和多偶氮染料(如酸性黑210、天狼猩红)。除偶氮双键外，一般还有苯基或萘基，以及各种取代基如氯(-Cl)、甲基(-CH3)、硝基(-NO2)、氨基(-NH2)、羟基(-OH)和羧基(-COOH)，使得偶氮基团与其他芳香环系统相连接构成共轭体系，如此复杂的化学结构导致偶氮染料具有色牢度强、化学稳定性高的特点。但是，相当一部分的偶氮染料为极难降解的有毒化合物，具有致癌、致畸和致突变的作用(即三致作用)，严重影响接触者的健康。
对偶氮类染料进行生物降解脱色，对于染料污染治理及人类健康都具有重要意义。郭建博等分离了具有降解偶氮类染料的芽孢杆菌Gracilibacillus sp(郭建博，周集体，王栋，等.降解偶氮染料耐盐菌GTY的分离鉴定及特性研究.环境科学学报，2007,27(2):201-205)；张胜琴等从污水处理厂的活性污泥中筛选获得了酸性大红GR脱色菌巴斯德葡萄球菌Staphylococcus pasteuri(张胜琴，陈必强，杨光，等.耐碱的偶氮染料脱色菌筛选及其特性研究.中国生物工程杂志,2010,30(5):76-80)。
粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)是一种具有良好脱氮作用的菌种(①李建华，刘文静，高桥润一，等.异养硝化-好氧反硝化粪产碱杆菌处理高氨氮污泥厌氧硝化液.环境工程学报，2016,10(4):1621-1626；②方海洋，王智，李建华，等.异养硝化-好氧反硝化菌粪产碱杆菌的脱氮特性.环境工程学报，2015,9(2):983-988)，并具有降解烟嘧磺隆、赭曲霉毒素A、苯酚等环境污染物的作用。然而，对于偶氮类染料降解脱色具有广谱作用的粪产碱杆菌则尚未见报道。本发明旨在提供一株对偶氮类染料具有明显降解脱色效果的菌株，及其相关的降解脱色工艺，对于治理染料污染、保障人类健康都具有重要意义。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种粪产碱杆菌，该粪产碱杆菌对偶氮类染料具有明显降解脱色效果，有益于治理染料污染，保障人类健康。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种粪产碱杆菌，其特征在于：命名为粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010，于2017年05月09日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.14108。
发明目的二：本发明还提供了一种粪产碱杆菌，其特征在于：所述粪产碱杆菌WZ-010，在偶氮染料降解脱色中的应用。
进一步的，所述粪产碱杆菌WZ-010在酸性大红3R、酸性大红GR、酸性红88、甲基橙、氨基黑10B、活性艳红X-3B、苋菜红、天狼猩红染料降解脱色中的应用。
发明目的三：本发明提供了一种粪产碱杆菌在偶氮染料降解脱色中的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)斜面培养：将粪产碱杆菌接种到斜面培养基上，在30℃条件下培养48小时；
(2)种子培养：将斜面上长好的菌种接种到新鲜的种子培养基中，在30℃条件下静置培养24小时；
(3)降解脱色：取培养好的种子，离心收集菌体，将收集到的菌体全部转移到与种子等量体积的脱色培养基中，在30-45℃条件下降解脱色培养4-24小时，测定降解脱色率。
发明目的四：本发明提供了一种粪产碱杆菌在偶氮染料降解脱色中的应用方法，其特征在于，所述步骤(1)中的斜面培养基包括蛋白胨10克/升，酵母提取物5克/升，NaCl10克/升，琼脂20克/升，pH7.0-7.2；步骤(2)中种子培养基蛋白胨10克/升，酵母提取物5克/升，NaCl 10克/升，pH7.0-7.2；所述步骤(3)中的脱色培养基包括糊精1.0克/升，酵母粉3.0克/升，Na2HPO4 3.5克/升，KH2PO4 3.0克/升，MgSO4 0.5克/升，偶氮染料100-1000毫克/升，pH 6.0-9.0。
进一步的，所述降解脱色率的测定步骤如下：①取脱色培养液于4000转/分钟条件下离心10分钟，取上清液，②用分光光度计在偶氮染料的最大吸收峰处测定上清液中剩余偶氮染料的浓度，并以条件相同的不接种的脱色培养基作为对照组来测定染料的降解脱色率，③每组实验三个平行，脱色率的计算公式如下：
其中Ac为对照组在最大吸收峰处的吸光值，As为样品在最大吸收峰处的吸光值。
发明目的五：本发明提供了一种粪产碱杆菌的筛选分离方法，其特征在于，包括如下步骤：①从生物处理池取1克污泥到含有10粒小玻璃珠的250毫升灭菌三角瓶中，加入100毫升无菌生理盐水，在30℃摇床上150转/分钟振荡培养30分钟，静置2小时；②取菌悬液，将其稀释10-5、10-6、10-7倍三个浓度，每个浓度的菌悬液分别取100微升涂布在LB培养基平板且每个浓度重复操作三次，7℃培养48小时，挑选透明圈较大的单个菌落多次纯化，将纯化后的菌株接种到斜面培养基上，37℃培养48小时后放于4℃冰箱保存待用；③将4℃冰箱保存待用的菌株接种到种子培养基中，37℃培养24小时后，取10毫升种子离心收集全部菌体，将全部菌体转接入100毫升脱色培养基中，测定培养过程中菌株对偶氮染料的降解脱色率，从中筛选出一株降解脱色能力最强的菌株，定名为WZ-010。
进一步的，所述LB培养基包括蛋白胨10克/升、酵母提取物5克/升、NaCl10克/升、琼脂20克/升，pH＝7.0。
本发明首次获得对偶氮染料具有广谱降解脱色作用的粪产碱杆菌(Alcaligenesfaecalis)WZ-010，并对其脱色工艺进行了优化，该粪产碱杆菌(Alcaligenesfaecalis)WZ-010对偶氮染料(酸性大红3R、酸性大红GR、酸性红88、甲基橙、氨基黑10B、活性艳红X-3B、苋菜红、天狼猩红)进行降解脱色4-24小时，脱色率达92.62％-99.17％，该粪产碱杆菌对偶氮染料的可降解浓度高达1000毫克/升；本发明对于染料污染的治理以及人类健康的保障都有重要意义。
下面结合附图对本发明作进一步描述。
附图说明
附图1为本发明菌株CGMCC No.14108的个体形态；
附图2为本发明16S DNA PCR的凝胶电泳结果；其中1为Marker；2为CGMCCNo.14108的16S DNA PCR产物；
附图3为本发明采用MEGA7.0软件，邻位连接法显示菌株CGMCC No.14108与GeneBank数据库中相关种的16S rDNA序列系统发育树；
附图4为本发明偶氮染料(100毫克/升)经菌株CGMCC No.14108降解脱色前后的颜色变化；其中1为酸性大红3R；2为酸性大红GR；3为酸性红88；4为甲基橙；5为氨基黑10B；6为活性艳红X-3B；7为苋菜红；8为天狼猩红。
具体实施方式
本发明的包含范围不局限于下列具体实施方式，本领域一般技术人员根据本发明公开的内容，可以采用其他多种具体实施方式实施本发明的，或者凡是采用本发明的设计结构和思路，做简单变化或更改的，都落入本发明的保护范围。
以下实施例中所用的菌种培养基如下：
斜面培养基(g/L)：蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl 10，琼脂20，pH7.0-7.2；
种子培养基(g/L)：蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl 10，pH7.0-7.2；
脱色培养基(g/L)：糊精1.0，酵母粉3.0，Na2HPO4 3.5，KH2PO4 3.0，MgSO4 0.5，pH6.0-9.0。
实施例1粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010的筛选分离与鉴定
一、粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010是从温州市鹿城印染厂的生物处理池取得的污泥中分离而来的。取1克污泥到含有10粒小玻璃珠的250毫升灭菌三角瓶中，加入100毫升无菌生理盐水，在30℃摇床上150转/分钟振荡培养30分钟，静置2小时；取上述菌悬液，将其稀释10-5，10-6，10-7倍，取100微升涂布在LB培养基平板(LB培养基组成，单位克/升：蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl 10，琼脂20，pH7.0，121℃灭菌15分钟)，每个浓度重复三次，37℃培养48小时，挑选透明圈较大的单个菌落多次纯化，将纯化后的菌株接种到斜面培养基上，37℃培养48小时后放于4℃冰箱保存待用。
将4℃冰箱保存待用的菌株接种到种子培养基中，37℃培养24小时后，取10毫升种子离心收集全部菌体，将全部菌体转接入100毫升脱色培养基中，测定培养过程中菌株对染料的降解脱色率，从中筛选出一株具有高效降解脱色能力的菌株，定名为WZ-010。
二、粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010的鉴定
(1)形态特征
在斜面培养基上培养48小时后其菌落直径约为1mm，圆形、浅棕色、边缘规整、光滑湿润、易挑取，菌株生长快速；在种子培养中，菌株生长24小时达到对数期；37℃下生长情况最好。
(2)生理生化鉴定
根据相关报道，对菌株WZ-010进行生理生化鉴定(见下表)，其生理生化特征与粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)相吻合。
表1菌株WZ-010生理生化特征
注：“+”表示阳性反应，“-”表示阴性反应
(3)16S rDNA测定
将目的菌株在斜面培养基上培养24小时，提取基因组DNA，利用PCR技术扩增该菌株的16S rDNA，所用引物，F27：5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’，和R1492：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’；
PCR反应体系组成如下表：
试剂 体积(μl)
模板(基因组DNA 20-50ng/μl) 0.5
10×Buffer(含Mg2+) 2.5
dNTP(2.5mM) 1.0
引物F27(10μM) 0.5
引物R1492(10μM) 0.5
Taq酶 0.2
双蒸水 19.8
PCR条件如下表所示：
PCR产物的琼脂凝胶电泳结果见图2。对PCR产物进行DNA测序，序列已提交GeneBank，序列登记号为MG574872，与GeneBank数据库中的16S rDNA进行同源性比对，结果见图3，发现与Alcaligenes faecalis Fa1.3(GenBank accession No.KF383272)的同源性最高，高达99％。
结合分子16S rDNA鉴定和传统生理生化鉴定，确定该菌株为粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)，已于2017年05月09日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.14108。
实施例2粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
(1)斜面培养：将粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010接种于斜面培养基上，在37℃下培养48小时。所用斜面培养基的组成为(单位克/升)：蛋白胨10，酵母提取物5，氯化钠10，琼脂20，pH值7.0，121℃灭菌15分钟。
(2)种子培养：将在斜面培养基上长好的菌种用接种环取一环接入种子培养基中，37℃静置培养24小时。种子培养所用种子培养基组成为(单位克/升)：蛋白胨10，酵母提取物5，氯化钠10，pH 7.0，每个250毫升三角瓶装100毫升种子培养基，121℃灭菌15分钟。
(3)降解脱色培养：取培养好的种子液10毫升，装在15毫升的无菌离心管中，8000转/分钟条件下离心10分钟，弃清液，收集全部菌体，将收集到的菌体全部转移到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含有酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为100毫克/升，脱色培养基pH 6.0；在37℃下静置培养24小时，降解脱色率达到98.54％。降解脱色率的测算具体按照以下方法进行：
取脱色培养液液于4000转/分钟条件下离心10分钟，取上清液。用分光光度计在染料的最大吸收峰处测定上清液中剩余染料的浓度，并以条件相同的不接种的脱色培养基作为对照组来测定染料的降解脱色率。每组实验三个平行，脱色率的计算公式如下：
其中Ac为对照组在最大吸收峰处的吸光值，As为样品在最大吸收峰处的吸光值。
实施例3粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在37℃下静置培养12小时，降解脱色率达到98.76％。
实施例4粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为100毫克/升，脱色培养基pH8.0，在37℃下静置培养8小时，降解脱色率达到97.49％。
实施例5粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为100毫克/升，脱色培养基pH9.0，在37℃下静置培养24小时，降解脱色率达到97.57％。
实施例6粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在30℃下静置培养12小时，降解脱色率达到97.97％。
实施例7粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在35℃下静置培养12小时，降解脱色率达到98.37％。
实施例8粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在40℃下静置培养12小时，降解脱色率达到98.26％。
实施例9粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在45℃下静置培养12小时，降解脱色率达到97.63％。
实施例10粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红3R
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红3R的脱色培养基，酸性大红3R浓度为1000毫克/升，脱色培养基pH8.0，在37℃下静置培养24小时，降解脱色率达到99.17％。
实施例11粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性大红GR
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性大红GR的脱色培养基，酸性大红GR浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在40℃下静置培养6小时，降解脱色率达到96.70％。
实施例12粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色酸性红88
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含酸性红88的脱色培养基，酸性红88浓度为100毫克/升，脱色培养基pH 7.0，在40℃下静置培养6小时，降解脱色率达到94.65％。
实施例13粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色甲基橙
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含甲基橙的脱色培养基，甲基橙浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在40℃下静置培养6小时，降解脱色率达到95.51％。
实施例14粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色氨基黑10B
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含氨基黑10B的脱色培养基，氨基黑10B浓度为100毫克/升，脱色培养基pH 7.0，在40℃下静置培养12小时，降解脱色率达到92.62％。
实施例15粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色活性艳红X-3B
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含活性艳红X-3B的脱色培养基，活性艳红X-3B浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在40℃下静置培养8小时，降解脱色率达到93.89％。
实施例16粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色苋菜红
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含苋菜红的脱色培养基，苋菜红浓度为100毫克/升，脱色培养基pH7.0，在40℃下静置培养4小时，降解脱色率达到98.70％。
实施例17粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010降解脱色天狼猩红
取培养好的种子液10毫升，将收集到的菌体全部转接到250毫升三角瓶中，其中装有100毫升含天狼猩红的脱色培养基，天狼猩红浓度为100毫克/升，脱色培养基pH 7.0，在40℃下静置培养24小时，降解脱色率达到93.39％。
本发明提供了对偶氮类染料具有很好降解脱色效果的菌株(粪产碱杆菌CGMCCNo.14108)及相应的降解脱色工艺，具体地，对于1000毫克/升的酸性大红3R，经24小时的脱色培养，最佳降解脱色率可达到99.17％；对于100毫克/升的酸性大红GR，经6小时的脱色培养，最佳降解脱色率可达到96.70％；对于100毫克/升的酸性红88，经6小时的脱色培养，最佳降解脱色率可达到94.65％；对于100毫克/升的甲基橙，经6小时的脱色培养，最佳降解脱色率可达到95.51％；对于100毫克/升的氨基黑10B，经12小时的脱色培养，最佳降解脱色率可达到92.62％；对于100毫克/升的活性艳红X-3B，经8小时的脱色培养，最佳降解脱色率可达到93.89％；对于100毫克/升的苋菜红，经4小时的脱色培养，最佳降解脱色率可达到98.70％；对于100毫克/升的天狼猩红，经24小时的脱色培养，最佳降解脱色率可达到93.39％；这对于染料污染治理及人类健康都具有重要意义。
SEQUENCE LISTING
<110>温州大学
<120>一种粪产碱杆菌及其应用
<160>1
<170> PatentIn version 3.5
<210>1
<211>1377
<212>DNA
<213>粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010
<400>1
TCGAACGGCAGCACGAGAGAGCTTGCTCTCTTGGTGGCGAGTGGCGGACGGGTGAGTAAT 60
ATATCGGAACGTGCCCAGTAGCGGGGGATAACTACTCGAAAGAGTGGCTAATACCGCATA 120
CGCCCTACGGGGGAAAGGGGGGGATCGCAAGACCTCTCACTATTGGAGCGGCCGATATCG 180
GATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCTCACCAAGGCAACGATCCGTAGCTGGTTTGAGAG 240
GACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGG 300
GAATTTTGGACAATGGGGGAAACCCTGATCCAGCCATCCCGCGTGTATGATGAAGGCCTT 360
CGGGTTGTAAAGTACTTTTGGCAGAGAAGAAAAGGCATCCCCTAATACGGGATGCTGCTG 420
ACGGTATCTGCAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGG 480
GTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGTGTAGGCGGTTCGGAAAGAAAG 540
ATGTGAAATCCCAGGGCTCAACCTTGGAACTGCATTTTTAACTGCCGAGCTAGAGTATGT 600
CAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGATATGTGGAGGAATACCG 660
ATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGATAATACTGACGCTCAGACACGAAAGCGTGGGGAGCAA 720
ACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAACTAGCTGTTGGGGCCG 780
TTAGGCCTTAGTAGCGCAGCTAACGCGTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAG 840
ATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTC 900
GATGCAACGCGAAAAACCTTACCTACCCTTGACATGTCTGGAATGCCGAAGAGATTTGGC 960
AGTGCTCGCAAGAGAACCGGAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGA 1020
GATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCTACGCAAGAGCA 1080
CTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATG 1140
GCCCTTATGGGTAGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGGACAGAGGGTCGCCAACCCG 1200
CGAGGGGGAGCCAATCTCAGAAACCCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACT 1260
GCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGG 1320
GTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTTCACCAGAAGTAGGTAGC 1377

Claims (9)

1.一种粪产碱杆菌，其特征在于：命名为粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)WZ-010，于2017年05月09日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.14108。
2.根据权利要求1所述的粪产碱杆菌，其特征在于：所述粪产碱杆菌WZ-010，在偶氮染料降解脱色中的应用。
3.根据权利要求2所述的粪产碱杆菌，其特征在于：所述粪产碱杆菌WZ-010在酸性大红3R、酸性大红GR、酸性红88、甲基橙、氨基黑10B、活性艳红X-3B、苋菜红、天狼猩红染料降解脱色中的应用。
4.根据权利要求1或2或3所述的粪产碱杆菌在偶氮染料降解脱色中的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)斜面培养：将粪产碱杆菌接种到斜面培养基上，在30℃条件下培养48小时；
(2)种子培养：将斜面上长好的菌种接种到新鲜的种子培养基中，在30℃条件下静置培养24小时；
(3)降解脱色：取培养好的种子，离心收集菌体，将收集到的菌体全部转移到与种子等量体积的脱色培养基中，在30-45℃条件下降解脱色培养4-24小时，测定降解脱色率。
5.根据权利要求4所述的粪产碱杆菌在偶氮染料降解脱色中的应用方法，其特征在于，所述步骤(1)中的斜面培养基包括蛋白胨10克/升，酵母提取物5克/升，NaCl 10克/升，琼脂20克/升，pH7.0-7.2；步骤(2)中种子培养基蛋白胨10克/升，酵母提取物5克/升，NaCl 10克/升，pH7.0-7.2；所述步骤(3)中的脱色培养基包括糊精1.0克/升，酵母粉3.0克/升，Na2HPO4 3.5克/升，KH2PO4 3.0克/升，MgSO4 0.5克/升，偶氮染料100-1000毫克/升，pH 6.0-9.0。
6.根据权利要求4所述的粪产碱杆菌在偶氮染料降解脱色中的应用方法，其特征在于，所述降解脱色率的测定步骤如下：①取脱色培养液于4000转/分钟条件下离心10分钟，取上清液，②用分光光度计在偶氮染料的最大吸收峰处测定上清液中剩余偶氮染料的浓度，并以条件相同的不接种的脱色培养基作为对照组来测定染料的降解脱色率，③每组实验三个平行，脱色率的计算公式如下：
其中Ac为对照组在最大吸收峰处的吸光值，As为样品在最大吸收峰处的吸光值。
7.根据权利要求5所述的粪产碱杆菌在偶氮染料降解脱色中的应用方法，其特征在于，所述降解脱色率的测定步骤如下：①取脱色培养液于4000转/分钟条件下离心10分钟，取上清液，②用分光光度计在偶氮染料的最大吸收峰处测定上清液中剩余偶氮染料的浓度，并以条件相同的不接种的脱色培养基作为对照组来测定染料的降解脱色率，③每组实验三个平行，脱色率的计算公式如下：
其中Ac为对照组在最大吸收峰处的吸光值，As为样品在最大吸收峰处的吸光值。
8.根据权利要求1所述的粪产碱杆菌的筛选分离方法，其特征在于，包括如下步骤：①从生物处理池取1克污泥到含有10粒小玻璃珠的250毫升灭菌三角瓶中，加入100毫升无菌生理盐水，在30℃摇床上150转/分钟振荡培养30分钟，静置2小时；②取菌悬液，将其稀释10-5、10-6、10-7倍三个浓度，每个浓度的菌悬液分别取100微升涂布在LB培养基平板且每个浓度重复操作三次，7℃培养48小时，挑选透明圈较大的单个菌落多次纯化，将纯化后的菌株接种到斜面培养基上，37℃培养48小时后放于4℃冰箱保存待用；③将4℃冰箱保存待用的菌株接种到种子培养基中，37℃培养24小时后，取10毫升种子离心收集全部菌体，将全部菌体转接入100毫升脱色培养基中，测定培养过程中菌株对偶氮染料的降解脱色率，从中筛选出一株降解脱色能力最强的菌株，定名为WZ-010。
9.根据权利要求8所述的粪产碱杆菌的筛选分离方法，其特征在于：所述LB培养基包括蛋白胨10克/升、酵母提取物5克/升、NaCl 10克/升、琼脂20克/升，pH＝7.0。
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