CN108401902A - 一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,它属于植物的人工栽培技术领域。本发明包括种子消毒、发芽培养、再生培养、生根培养,再生培养含激素的MS培养基,蔗糖25~30g/L,琼脂7~8g/L,pH 5.7~5.9,培养温度为23~25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数20~30天;生根培养含激素的MS培养基或含激素的1/2MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养时间为20天。本发明利用茎尖组织培养快速繁殖得到再生植株,实验周期短。
Description
技术领域
本发明属于植物的人工栽培技术领域;具体涉及一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法。
背景技术
大麻(Cannabis Sativa L.),是大麻科(Cannabinaceae)大麻属(Cannabis)一年生草本植物。大麻是世界也是中国最古老、历史最悠久的栽培作物之一,大麻浑身是宝,可从农业种植延伸到纺织、服装、造纸、军需、化工、新型建材、生物能源、食品保健、医药、饲料等十几个产业链。
由于大麻中含有一种致幻成瘾的活性成分—四氢大麻酚(THC),易被不法分子用来非法生产毒品,造成社会危害,许多国家把大麻也一并列为禁种作物,导致许多珍贵的种质资源遗失,对大麻的研究远远落后于其他经济作物。大麻有雌雄异株和雌雄同株之分,但由于同一群体内不同个体间表现多样性,种质杂合度高,遗传背景非常复杂且遗传学与分子生物学的基础研究也比较少,通过引种、系选、杂交、杂种优势、诱变等方法存在周期长、田间选择难度大、抗源不足等问题。为了加速育种工作,许多研究者也利用温室进行育种,但由于光照不足、苗期温度过高等条件的影响,导致大麻幼苗徒长而出现倒伏死亡现象的发生,这也会给育种工作带来困难。生物技术是解决这些问题的有效途径,即可加速种质资源改良进程,稳定优良性状,又可解决温室育种的弊端。
在以往大麻再生体系的研究中,整个再生过程周期较长。申请号为200610088353.7的中国专利,将种子消毒后接种于发芽培养基,30天后才将茎尖接种到侧芽培养基中,40天后获得侧芽,生根培养需要60天,培养周期长。选用种子消毒后接种培养基产生的无菌苗的下胚轴为外植体,从种子接种到生根获得新的植株需要100多天的时间,影响实验周期的紧密性。
发明内容
本发明目的是提供一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法。
本发明通过以下技术方案实现:
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:
步骤1、种子消毒:挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子,先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗,再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡,然后用无菌水冲洗,再用0.1%的升汞溶液浸泡,然后用无菌水冲洗至水体澄清,用无菌滤纸吸干种子表面水分,得到消毒后的大麻种子;
步骤2、发芽培养:将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中,MS培养基,蔗糖25~30g/L,琼脂7~8g/L,pH 5.7~5.9,培养温度为23~25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数8~10天,得到大麻无菌苗茎尖;
步骤3、再生培养:将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中:含激素的MS培养基,蔗糖25~30g/L,琼脂7~8g/L,pH 5.7~5.9,培养温度为23~25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数15~20天,得到大麻茎尖再生植株;
步骤4、生根培养:将步骤3得到的茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中,含激素的MS培养基或含激素的1/2MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养时间为20~30天,得到生根的植株。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤1中乙醇浸泡的时间为2~3min,无菌水冲洗次数3~4次,升汞溶液浸泡处理时间6~7min。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1500~1650mg/L的NH4NO3、120~170mg/L的KH2PO4、1200~1500mg/L的KNO3、350~400mg/L的CaCl2·2H2O、300~350mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90~95mg/L的肌醇、1.0~3.0mg/L的甘氨酸、0.1~0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5~1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5~1.0mg/L的烟酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1600mg/L的NH4NO3、150mg/L的KH2PO4、1300mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、320mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括92mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1500~1650mg/L的NH4NO3、120~170mg/L的KH2PO4、1200~1500mg/L的KNO3、350~400mg/L的CaCl2·2H2O、300~350mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90~95mg/L的肌醇、1.0~3.0mg/L的甘氨酸、0.1~0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5~1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5~1.0mg/L的烟酸,激素为1.0~2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0~2.0mg/L激动素。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH4NO3、130mg/L的KH2PO4、1250mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、330mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸,激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH4NO3、130mg/L的KH2PO4、1250mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、330mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸,激素为2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/L激动素。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括700~800mg/L的NH4NO3、60~80mg/L的KH2PO4、600~750mg/L的KNO3、175~200mg/L的CaCl2·2H2O、150~175mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90~95mg/L的肌醇、1.0~3.0mg/L的甘氨酸、0.1~0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5~1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5~1.0mg/L的烟酸,激素为0.1~0.15mg/L吲哚丁酸、0.05~0.1mg/Lα-萘乙酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括750mg/L的NH4NO3、70mg/L的KH2PO4、700mg/L的KNO3、180mg/L的CaCl2·2H2O、160mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为0.1mg/L吲哚丁酸、0.05mg/Lα-萘乙酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括750mg/L的NH4NO3、70mg/L的KH2PO4、700mg/L的KNO3、180mg/L的CaCl2·2H2O、160mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为0.15mg/L吲哚丁酸、0.1mg/Lα-萘乙酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括750mg/L的NH4NO3、70mg/L的KH2PO4、700mg/L的KNO3、180mg/L的CaCl2·2H2O、160mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为0.1mg/L吲哚丁酸、0.075mg/Lα-萘乙酸。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,所述的“大麻”包括雌雄异株和雌雄同株的工业大麻。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,利用茎尖组织培养快速繁殖得到再生植株,实验周期短,整个周期只需43~60天,生根效果好,根系变粗且长势较好,提高移栽成活率,
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,观察根系生长情况,用尺测量十个根的粗度,并记录;所得到的生根植株按照常规方法进行移栽,统计移栽成活率,得到的结果生根的植株生根率为85.67±1.53%,根粗为9.67±0.42mm,移栽成活率为86.67%。
本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,能够加速种质资源改良进程,稳定优良性状,又可解决温室育种的弊端。
附图说明
图1为具体实施方式一方法制备的大麻无菌苗照片;
图2为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖苗照片;
图3为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖再生植株照片;
图4为具体实施方式一方法制备的大麻生根植株根部照片;
图5为具体实施方式二方法制备的大麻生根植株根部照片;
图6为具体实施方式三方法制备的大麻生根植株根部照片;
图7为具体实施方式四方法制备的大麻生根植株根部照片;
图8为具体实施方式五方法制备的大麻生根植株根部照片。
具体实施方式
具体实施方式一:
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:
步骤1、种子消毒:挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子,先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗,再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡,然后用无菌水冲洗,再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡,然后用无菌水冲洗至水体澄清,用无菌滤纸吸干种子表面水分,得到消毒后的大麻种子;
步骤2、发芽培养:将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中,MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数10天,得到大麻无菌苗茎尖;
步骤3、再生培养:将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中:含激素的MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数20天,得到大麻茎尖再生植株;
步骤4、生根培养:将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中,含激素的1/2MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养时间为30天,得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤1中乙醇浸泡的时间为3min,无菌水冲洗次数4次,升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1600mg/L的NH4NO3、150mg/L的KH2PO4、1300mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、320mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括92mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH4NO3、130mg/L的KH2PO4、1250mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、330mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸,激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括750mg/L的NH4NO3、70mg/L的KH2PO4、700mg/L的KNO3、180mg/L的CaCl2·2H2O、160mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为0.1mg/L吲哚丁酸、0.05mg/Lα-萘乙酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,图1为具体实施方式一方法制备的大麻无菌苗照片,图2为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖苗照片,图3为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖再生植株照片。从图1中能够看出种子培养10天后,无菌苗的生理状态很好,叶片舒展,挺拔;从图2中能够看出生长较好的茎尖,中心叶片再生良好,没有死亡;从图3中能够看出茎尖再生分化出三对真叶,且长势良好。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,图4为具体实施方式一方法制备的大麻生根植株根部照片,从图4中观察根系生长情况,用尺测量十个根的粗度,并记录;所得到的生根植株按照常规方法进行移栽,统计移栽成活率,得到的结果如表1所示:本实施方式生根的植株生根率为62.00±4.00%,根粗为5.53±0.15mm,移栽成活率为43.33%。
表1具体实施方式一生根率、根粗和移栽成活率记录表
具体实施方式二:
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:
步骤1、种子消毒:挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子,先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗,再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡,然后用无菌水冲洗,再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡,然后用无菌水冲洗至水体澄清,用无菌滤纸吸干种子表面水分,得到消毒后的大麻种子;
步骤2、发芽培养:将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中,MS培养基,蔗糖25g/L,琼脂7g/L,pH 5.7,培养温度为23~25℃,光照强度1800lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数10天,得到大麻无菌苗茎尖;
步骤3、再生培养:将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中:含激素的MS培养基,蔗糖25g/L,琼脂7g/L,pH 5.7,培养温度为23~25℃,光照强度1800lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数20天,得到大麻茎尖再生植株;
步骤4、生根培养:将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中,含激素的1/2MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养时间为25天,得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤1中乙醇浸泡的时间为3min,无菌水冲洗次数4次,升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1500mg/L的NH4NO3、120mg/L的KH2PO4、1200mg/L的KNO3、350mg/L的CaCl2·2H2O、300mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90~95mg/L的肌醇、1.0~3.0mg/L的甘氨酸、0.1~0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1500mg/L的NH4NO3、120mg/L的KH2PO4、1200mg/L的KNO3、350mg/L的CaCl2·2H2O、300mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括700mg/L的NH4NO3、60mg/L的KH2PO4、600mg/L的KNO3、175mg/L的CaCl2·2H2O、150mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为0.15mg/L吲哚丁酸、0.1mg/Lα-萘乙酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,图5为具体实施方式二方法制备的大麻生根植株根部照片,观察根系生长情况,用尺测量十个根的粗度,并记录;所得到的生根植株按照常规方法进行移栽,统计移栽成活率,得到的结果生根的植株生根率为75.00±3.00%,根粗为7.33±1.26mm,移栽成活率为63.33%。
表2具体实施方式二生根率、根粗和移栽成活率记录表
具体实施方式三:
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:
步骤1、种子消毒:挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子,先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗,再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡,然后用无菌水冲洗,再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡,然后用无菌水冲洗至水体澄清,用无菌滤纸吸干种子表面水分,得到消毒后的大麻种子;
步骤2、发芽培养:将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中,MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.9,培养温度为25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数8天,得到大麻无菌苗茎尖;
步骤3、再生培养:将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中:含激素的MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.9,培养温度为25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数15天,得到大麻茎尖再生植株;
步骤4、生根培养:将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中,含激素的MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养时间为30天,得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤1中乙醇浸泡的时间为2min,无菌水冲洗次数4次,升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1650mg/L的NH4NO3、170mg/L的KH2PO4、1500mg/L的KNO3、400mg/L的CaCl2·2H2O、350mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括95mg/L的肌醇、3.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、1.0mg/L的盐酸吡哆醇、1.0mg/L的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1650mg/L的NH4NO3、170mg/L的KH2PO4、1500mg/L的KNO3、400mg/L的CaCl2·2H2O、350mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括95mg/L的肌醇、3mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、1.0mg/L的盐酸吡哆醇、1.0mg/L的烟酸,激素为2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/L激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1650mg/L的NH4NO3、170mg/L的KH2PO4、1500mg/L的KNO3、400mg/L的CaCl2·2H2O、350mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括95mg/L的肌醇、3.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、1.0mg/L的盐酸吡哆醇、1.0mg/L的烟酸,激素为2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/L激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,图6为具体实施方式三方法制备的大麻生根植株根部照片,观察根系生长情况,用尺测量十个根的粗度,并记录;所得到的生根植株按照常规方法进行移栽,统计移栽成活率,得到的结果生根的植株生根率为78.00±3.00%,根粗为7.67±0.21mm,移栽成活率为70.00%。
表3具体实施方式三生根率、根粗和移栽成活率记录表
具体实施方式四:
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:
步骤1、种子消毒:挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子,先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗,再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡,然后用无菌水冲洗,再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡,然后用无菌水冲洗至水体澄清,用无菌滤纸吸干种子表面水分,得到消毒后的大麻种子;
步骤2、发芽培养:将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中,MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数8天,得到大麻无菌苗茎尖;
步骤3、再生培养:将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中:含激素的MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数15天,得到大麻茎尖再生植株;
步骤4、生根培养:将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中,含激素的1/2MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养时间为25天,得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤1中乙醇浸泡的时间为2min,无菌水冲洗次数4次,升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1600mg/L的NH4NO3、150mg/L的KH2PO4、1300mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、320mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括92mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH4NO3、130mg/L的KH2PO4、1250mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、330mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸,激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括750mg/L的NH4NO3、70mg/L的KH2PO4、700mg/L的KNO3、180mg/L的CaCl2·2H2O、160mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为0.1mg/L吲哚丁酸、0.075mg/Lα-萘乙酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,图7为具体实施方式四方法制备的大麻生根植株根部照片,从图7中观察根系生长情况,用尺测量十个根的粗度,并记录;所得到的生根植株按照常规方法进行移栽,统计移栽成活率,得到的结果如表4所示:本实施方式生根的植株生根率为83.00±2.00%,根粗为9.00±1.32mm,移栽成活率为83.33%。
表4具体实施方式四生根率、根粗和移栽成活率记录表
具体实施方式五:
一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:
步骤1、种子消毒:挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子,先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗,再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡,然后用无菌水冲洗,再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡,然后用无菌水冲洗至水体澄清,用无菌滤纸吸干种子表面水分,得到消毒后的大麻种子;
步骤2、发芽培养:将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中,MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数8天,得到大麻无菌苗茎尖;
步骤3、再生培养:将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中:含激素的MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数15天,得到大麻茎尖再生植株;
步骤4、生根培养:将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中,含激素的MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养时间为20天,得到生根的植株。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤1中乙醇浸泡的时间为2min,无菌水冲洗次数4次,升汞溶液浸泡处理时间7min。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1600mg/L的NH4NO3、150mg/L的KH2PO4、1300mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、320mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括92mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH4NO3、130mg/L的KH2PO4、1250mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、330mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸,激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,步骤4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH4NO3、130mg/L的KH2PO4、1250mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、330mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸,激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。
表5具体实施方式五生根率、根粗和移栽成活率记录表
本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,图8为具体实施方式五方法制备的大麻生根植株根部照片,从图8中观察根系生长情况,用尺测量十个根的粗度,并记录;所得到的生根植株按照常规方法进行移栽,统计移栽成活率,得到的结果如表5所示:本实施方式生根的植株生根率为85.67±1.53%,根粗为9.67±0.42mm,移栽成活率为86.67%。
Claims (10)
1.一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤1、种子消毒:挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子,先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗,再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡,然后用无菌水冲洗,再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡,然后用无菌水冲洗至水体澄清,用无菌滤纸吸干种子表面水分,得到消毒后的大麻种子;
步骤2、发芽培养:将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中,MS培养基,蔗糖25~30g/L,琼脂7~8g/L,pH 5.7~5.9,培养温度为23~25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数8~10天,得到大麻无菌苗茎尖;
步骤3、再生培养:将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中:含激素的MS培养基,蔗糖25~30g/L,琼脂7~8g/L,pH 5.7~5.9,培养温度为23~25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养天数15~20天,得到大麻茎尖再生植株;
步骤4、生根培养:将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中,含激素的MS培养基或含激素的1/2MS培养基,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH 5.8,培养温度为23~25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养,培养时间为20~30天,得到生根的植株。
2.根据权利要求1所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤1中乙醇浸泡的时间为2~3min,无菌水冲洗次数3~4次,升汞溶液浸泡处理时间6~7min。
3.根据权利要求1所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1500~1650mg/L的NH4NO3、120~170mg/L的KH2PO4、1200~1500mg/L的KNO3、350~400mg/L的CaCl2·2H2O、300~350mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90~95mg/L的肌醇、1.0~3.0mg/L的甘氨酸、0.1~0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5~1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5~1.0mg/L的烟酸。
4.根据权利要求3所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成,其中所述的大量元素包括1600mg/L的NH4NO3、150mg/L的KH2PO4、1300mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、320mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括92mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。
5.根据权利要求1所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1500~1650mg/L的NH4NO3、120~170mg/L的KH2PO4、1200~1500mg/L的KNO3、350~400mg/L的CaCl2·2H2O、300~350mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90~95mg/L的肌醇、1.0~3.0mg/L的甘氨酸、0.1~0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5~1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5~1.0mg/L的烟酸,激素为1.0~2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0~2.0mg/L激动素。
6.根据权利要求5所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH4NO3、130mg/L的KH2PO4、1250mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、330mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸,激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。
7.根据权利要求5所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH4NO3、130mg/L的KH2PO4、1250mg/L的KNO3、370mg/L的CaCl2·2H2O、330mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸,激素为2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/L激动素。
8.根据权利要求1所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括700~800mg/L的NH4NO3、60~80mg/L的KH2PO4、600~750mg/L的KNO3、175~200mg/L的CaCl2·2H2O、150~175mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90~95mg/L的肌醇、1.0~3.0mg/L的甘氨酸、0.1~0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5~1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5~1.0mg/L的烟酸,激素为0.1~0.15mg/L吲哚丁酸、0.05~0.1mg/Lα-萘乙酸。
9.根据权利要求7所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括750mg/L的NH4NO3、70mg/L的KH2PO4、700mg/L的KNO3、180mg/L的CaCl2·2H2O、160mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为0.15mg/L吲哚丁酸、0.1mg/Lα-萘乙酸。
10.根据权利要求7所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法,其特征在于:步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成,其中所述的大量元素包括750mg/L的NH4NO3、70mg/L的KH2PO4、700mg/L的KNO3、180mg/L的CaCl2·2H2O、160mg/L的MgSO4·7H2O,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO4·4H2O、6.2mg/L的H3BO3、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O和0.025mg/L的CoCl2·6H2O,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸,激素为0.1mg/L吲哚丁酸、0.075mg/Lα-萘乙酸。
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