CN108398504A - 一种检测草酸聚乙二醇纳洛酮中草酸含量的高效液相方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测草酸聚乙二醇纳洛酮中草酸含量的高效液相方法,本方法可以准确测定草酸聚乙二醇纳洛酮中草酸含量,理论塔板数高,拖尾因子合适,峰形对称,且完全不受空白溶剂的干扰;可有效检测草酸含量,控制聚乙二醇草酸质量,以合成质量合格的草酸聚乙二醇纳洛酮。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,适用于草酸含量的检测。
技术背景
聚乙二醇-纳洛酮是一种聚乙二醇化的纳洛酮,是对纳洛酮的改良,纳洛酮作为临床常用的阿片受体拮抗剂,可以缓解阿片类药物引起的便秘,然而,纳洛酮极易通过血脑屏障,在缓解阿片样物质引起的便秘的同时,会完全抵消掉阿片类药物的镇痛和麻醉作用,使阿片类药物的主疗效丧失。且纳洛酮口服生物利用率低,只能注射使用,患者依顺性差。而聚乙二醇-纳洛酮中由于聚乙二醇链段的存在,聚乙二醇-纳洛酮成为选择性的阿片受体拮抗剂,血脑屏障透过率极低,仅作用于外周神经系统的阿片受体,不影响阿片类药物在中枢系统的镇痛和麻醉作用,可以有效地预防和治疗阿片类药物引起的便秘;而且聚乙二醇-纳洛酮口服生物利用度很高,可以制成各种形式的口服制剂,患者使用的依顺性大大提高。
聚乙二醇-纳洛酮,化学名称:(5α,6α)-17-烯丙基-6-(2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷-22-基氧基)-4,5-环氧基吗啡喃-3,14-二醇草酸盐,分子式为C34H53NO11.C2H2O4,分子量为742,化学结构式如下:
草酸草酸聚乙二醇纳洛酮是一种草酸盐。草酸,又名乙二酸,分子式C2H204,通常含有二分子结晶水,无色透明单斜晶体。在草酸草酸聚乙二醇纳洛酮中的合成过程中,需要加入草酸,以使游离的草酸聚乙二醇纳洛酮成盐,生成稳定的形式,理论上是1:1。作为口服固体制剂,为了能准确的控制草酸草酸聚乙二醇纳洛酮的质量,需要控制原料药的中草酸含量在98-101%。另草酸广泛存在于我们的生活冲,食物医药等处处可见。然而,草酸在人体内不容易被氧化分解掉,经代谢作用后形成的产物,属于酸性物质,可导致人体内酸碱度失去平衡,吃得过多还会中毒。生活中很多食物及药物中都含有草酸,因此开发此检测方法十分必要。
发明内容
本发明提供了一种用于草酸含量检测的高效液相检测方法,该方法通过高效液相测定一些药品(以草酸聚乙二醇纳洛酮为例进行讲解)中的草酸含量,该方法简单、准确,专属性好,适用于医药中草酸含量的检测。
本发明的目的是这样实现的:1、建立草酸含量检测的高效液相色谱检测方法,其步骤如下:
(1)色谱条件
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱
柱温:25--35℃
检测波长:210nm
流动相:磷酸氢二钾缓冲液:甲醇80:20(v:v)
磷酸氢二钾缓冲液:0.01mol磷酸氢二钾,加四丁基氢氧化铵(10%)4ml,水定容至1000ml,用磷酸调节pH为7.0即为所需缓冲盐溶液。
(2)供试品溶液及对照品溶液的制备
供试品溶液及对照品溶液的浓度均为0.16mg/ml。精密称取草酸聚乙二醇纳洛酮供试品12.35mg置10ml容量瓶,加流动相溶解定容;领取草酸对照品16mg,精密称定,置100ml容量瓶,加流动相溶剂定容既得供试品溶液及对照品溶液。
(3)草酸含量的计算
分别精密称量配制供试品溶液及对照品溶液,将供试品溶液及对照品溶液分别注入高效液相色谱仪,记录色谱图,按照外标法及峰面积计算(供试品溶液及对照品溶液主成分的保留时间一致),计算公式为
CX为供试品的含量;
CR为对照品的纯度;
AX为供试品的峰面积;
AR为对照品的峰面积;
WX为供试品的称样量,单位为mg;
WR为对照品的称样量,单位为mg。
与现有技术相比,本品的优点在于:建立一种测定药品中草酸含量的高效液相方法。本检测方法可以准确检测草酸,不受干扰,专属性强,灵敏度高;可有效检测草酸的含量。
附图说明
图1为紫外扫描草酸的最大吸收波长,图2-9为实例中草酸含量检测所采集图谱。
具体实施方式
下面讲通过实例对发明作进一步详细说明
但下书实例仅仅是本发明其中的例子而已,并不代表本发明所限定的全力保护范围,本发明的权利保护范围以权利要求说明书为准。
实例1
1、色谱条件的选择
1.1检测波长的选择
取草酸适量,加乙腈水(50:50,v:v)溶解并稀释成0.01mg/ml溶液。由附图1中紫外波长扫描图谱显示,草酸为末端吸收,故选择检测波长为210nm。
1.2流动相的选择
1.2.1缓冲盐浓度的选择
缓冲盐采用0.1mol/l、0.2mol/l、0.3mol/l,分别用磷酸调节pH为7.0(以防pH偏高,毁坏色谱柱),然后分别配制成缓冲盐:甲醇80:20(v:v),色谱柱为Waters Sunfire C18(4.6×250mm,5um),流动相作溶剂,分别进行试验,具体保留行为见表1。
磷酸二氢钾浓度mol/l | 保留时间 | 理论塔板数 | 拖尾因子 |
0.3 | 3.445min | 3849 | 1.412 |
0.2 | 3.462min | 3917 | 1.472 |
0.1 | 3.877min | 3988 | 1.436 |
表1
综合三种缓冲盐浓度的试验结果,缓冲盐浓度并未有太大的影响,故选用浓度较低的0.1mol/l的磷酸氢二钾进行试验。
1.2.2缓冲盐浓度pH
0.1mol/l磷酸氢二钾,分别用磷酸调节pH为5.0、6.0、7.0,三种pH的缓冲盐:甲醇80:20(v:v)配制三份流动相,色谱柱为Waters Sunfire C18(4.6×250mm,5um),流动相作溶剂,分别进行试验,具体保留行为见表2。
磷酸二氢钾pH | 保留时间 | 理论塔板数 | 拖尾因子 |
5.0 | 3.025min | 3542 | 1.502 |
6.0 | 3.122min | 3677 | 1.489 |
7.0 | 3.877min | 3988 | 1.436 |
表2
综合三种不同pH的缓冲盐试验结果,pH越高,保留时间会越晚,且溶剂峰的干扰会越小,故选用磷酸氢二钾pH选为7.0。
1.2.3四丁基氢氧化铵
四份1000ml0.1mol/l磷酸氢二钾,分别加四丁基氢氧化铵(10%)1ml、2ml、4ml、6ml,用磷酸调节pH为7.0,三种缓冲盐分别与甲醇配制成80:20(v:v)的流动相,色谱柱为Waters Sunfire C18(4.6×250mm,5um),流动相作溶剂,分别进行试验,具体保留行为见表3。
四丁基氢氧化铵(10%)ml | 保留时间 | 理论塔板数 | 拖尾因子 |
1.0ml | 8.705min | 6908 | 0.840 |
2.0ml | 5.689min | 9230 | 0.968 |
4.0ml | 6.958min | 12361 | 1.073 |
6.0ml | 3.877min | 3312 | 1.379 |
表3
综合四种含有不同四丁基氢氧化铵(10%)的的流动相,试验结果1000ml缓冲盐溶液中,含有四丁基氢氧化铵(10%)4.0ml时,理论塔板数高,峰型好,出峰时间合适,拖尾因子良好,故选定四丁基氢氧化铵(10%)的量为4ml/1000ml。
综合流动相筛选的过程,确定流动相为缓冲盐溶液(0.1mol磷酸氢二钾+4ml四丁基氢氧化铵(10%)加水至1000m);甲醇(v:v)80:20。
1.3色谱柱的选择
在十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱及八烷基硅烷键合硅胶两种色谱柱之间进行选择。流动相为上述选定流动相,具体保留行为见表4。
表4
结果表明,Waters Sunfire C18(4.6×250mm,5um)更适用于该方法的检测。
1.4柱温的选择
对不同的柱温进行考察,流动相及色谱柱为上述选定流动相和色谱柱,具体保留行为见表5。
色谱柱 | 保留时间 | 理论塔板数 | 拖尾因子 |
25℃ | 7.111min | 12023 | 1.068 |
30℃ | 7.012min | 11978 | 1.071 |
35℃ | 6.896min | 11933 | 1.076 |
表5
结果表明,25℃至35℃,柱温对保留时间、理论塔板数、拖尾因子均无太大的影响,不干扰草酸含量的检测。故柱温在25℃至35℃,均可达到检测效果。
实例2
1.草酸含量的测定
1.1溶液的配制
取草酸对照品15.72mg、16.08mg分别至100ml容量瓶,流动相定容至刻度,超声溶解,即为所需对照品溶液。
取草酸供试品15.96mg、15.58mg分别至100ml容量瓶,流动相定容至刻度,超声溶解,即为所需供试品溶液。注入高效液相色谱仪进行数据采集,所采集图谱见附图.2-5、实验结果见表6。
1.2草酸含量的计算
CX为供试品的含量;
CR为对照品的纯度;
AX为供试品的峰面积;
AR为对照品的峰面积;
WX为供试品的称样量,单位为mg;
WR为对照品的称样量,单位为mg。
表6
该草酸供试品标示的草酸含量为99.50%,故该方法可以准确测定草酸含量。
2.药品中草酸含量的测定
2.1溶液的配制
取草酸对照品15.76mg、16.03mg分别至100ml容量瓶,流动相定容至刻度,超声溶解,即为所需对照品溶液。
取草酸聚乙二醇纳洛酮13.22mg、12.58mg分别至10ml容量瓶,流动相定容至刻度,超声溶解,即为所需供试品溶液。注入高效液相色谱仪进行数据采集,所采集图谱见附图.6-9。实验结果见表7。
2.1草酸含量的计算
CX为供试品的含量;
CR为对照品的纯度;
AX为供试品的峰面积;
AR为对照品的峰面积;
WX为供试品的称样量,单位为mg;
WR为对照品的称样量,单位为mg。
表7
根据草酸聚乙二醇纳洛酮分子式可知草酸含量为12.05%,故该方法可以准确测定草酸聚乙二醇纳洛酮中草酸的含量。
Claims (2)
1.检测草酸含量的高效液相色谱法,其主要内容如下:
(1)色谱条件
等度程序:10min
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱
柱温:25--35℃
检测波长:210nm
流动相:缓冲盐溶液:甲醇80:20(v:v)
缓冲盐溶液:0.01mol磷酸氢二钾,加四丁基氢氧化铵(10%)4ml,水定容至1000ml,用磷酸调节pH为7.0即为所需缓冲盐溶液;
(2)供试品溶液及对照品溶液的制备
供试品溶液及对照品溶液的浓度均为0.16mg/ml;精密称取供试品16mg置100ml容量瓶,加流动相溶解定容,即得供试品溶液;另取草酸对照品16mg,精密称定,置100ml容量瓶,加流动相溶剂定容即得对照品溶液;
(3)草酸含量的计算
将供试品溶液及对照品溶液分别注入高效液相色谱仪,记录色谱图,按照外标法及峰面积计算,计算公式为
CX为供试品的含量;
CR为对照品的纯度;
AX为供试品的峰面积;
AR为对照品的峰面积;
WX为供试品的称样量,单位为mg;
WR为供试品的称样量,单位为mg。
2.根据权利要求书1所述,准备好各种仪器及所用试剂;
(1)仪器设备:高效液相、pH计,电子天平,C18色谱柱
(2)所需试剂及药品:磷酸氢二钾、四丁基氢氧化铵、磷酸、水,甲醇
(3)要求:四丁基氢氧化铵(10%)需要准确定量。
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