CN105891352B - 一种新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，所述有关物质为2‑乙基己基酯，包括以下步骤：配制对照品溶液A和B；分别取对照品溶液A和供试品溶液B各20ul进样记录色谱图中多库酯钠的峰面积，按照外标法，以无水多库酯钠来计算HPLC含量；配制杂质对照品溶液C和供试品溶液D；分别取杂质对照品溶液C和供试品溶液D各20ul进样记录色谱图中多库酯钠和2‑乙基己基酯的峰面积，再按照外标法计算多库酯钠样品中多库酯钠的含量以及有关物质2‑乙基己基酯和其它总杂的限度。本发明能在等度液相色谱条件下有效的分离和准确定量检测多库酯钠含量和DK10等有关物质限度的方法。检测成本低和检测效率高。

Description

一种新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法

技术领域

本发明涉及一种新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法。

背景技术

多库酯钠是一种临床上用于治疗慢性功能性便秘的药物，同时在美国和欧洲作为食品添加剂使用。多库酯钠化学名为2-乙基已酯钠盐，已被收录于欧洲药典、美国药典等各国药典。慢性功能性便秘是临床上较为常见的消化道疾患之一，是由结、直肠及肛门功能异常所致大便次数减少或粪便干燥难解。局部和全身不适慢性便秘可引起局部和全身症状，如口苦、口中发黏，上腹胀满、两胁胀痛、嗳气，部分病人还可出现食欲不振，精神萎靡、头晕乏力、全身不适、头痛、失眠等，便秘可造成机体局部的危害，直接引发肛肠疾病，若不及时治疗，将严重危害患者的生活质量。因此，保持粪便水分，增加粪便容量是治疗老年便秘的较好方法。临床所采用的容积性泄药如聚乙二醇4000和润滑性泄药如液体石蜡等的口感差、作用弱，且可导致维生素A、D、K及钙、磷的吸收障碍；而长期使用刺激性泄药如中药大黄或类似成份，可造成患者对药物的依赖性，又会损害肠壁神经，导致结肠黑变病，进而可能引发结肠癌，不适合长期服用。

现有的文献和发明关于高效液相测定多库酯钠的含量和其中有关物质大小主要有以下三个文献和发明。

1：“山梨醇含量测定及多库酯钠有关物质测定方法的研究”(赵勇、咎丽霞、孙文基；《药物分析杂志》，2006，26(1),127)。

2：“美国药典委员会.(usp 35),DOCUSATE SODIUM Docusate 2959。

3：“欧洲药典委员会.(EP 7.0),DOCUSATE SODIUM 01/2008:1418。

现有大部分多库酯钠生产工艺都是以顺丁烯二酸酐为原料，经过酯化反应合成中间体2-乙基己基酯DK10，再以中间体DK10经磺化反应生成多库酯钠成品。现有的检测方法大部分是通过滴定的方法来检测多库酯钠的含量，如美国药典和欧洲药典收录的多库酯钠原料药含量的滴定方法。而其中收录对于有关物质DK10测定方法通过反相离子对高效液相色谱法来检测，在流动相中加入离子对试剂如四丁基磷酸氢铵，但该离子对色谱法无法分离检测其中其它的有关物质，如磺化反应产生的单酯。而且四丁基磷酸氢铵这类离子对试剂价格比较昂贵，因此检测成本非常高。现有的文献中检测多库酯钠含量和有关物质的液相方法，大多都是通过高压梯度方法。而高压梯度的液相检测方法相对于等度的液相检测方法，存在重现性差，易被流动相中的鬼峰干挠，检测成本高等缺点。因此对于工业化生产多库酯钠的中间产品控制以及多库酯钠成品检测，存在非常大的不便，不能有效，准确的监控多库酯钠生产过程中各种有关物质的残留限度以及多库酯钠最终成品的质量情况。

故此，现有多库酯钠含量以及有关物质的检测方法有待于进一步完善。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种能在等度液相色谱条件下有效的分离和准确定量检测多库酯钠含量和DK10等有关物质限度的方法。本方法通过反相高效液相色谱法，未加入离子对试剂，利用等度的条件，通过C8色谱柱来有效的分离和检测多库酯钠的含量和有关物质的限度，大大减低了检测成本和提高检测效率。

为了达到上述目的，本发明采用以下方案：

一种新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，所述有关物质为2-乙基己基酯，其特征在于包括以下步骤：

A、取多库酯钠USP化学对照品为已知对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.2mg/ml的对照品溶液A，取多库酯钠样品用稀释剂溶解为浓度为0.2mg/ml的供试品溶液B；

B、分别取对照品溶液A和供试品溶液B各20ul进样记录色谱图中多库酯钠的峰面积，按照外标法，以无水多库酯钠来计算HPLC含量，不小于99％；

C、取USP化学对照品2-乙基己基酯，再用稀释剂溶解浓度为8ug/ml的杂质对照品溶液C，取多库酯钠样品用稀释剂溶解为浓度为2mg/ml的供试品溶液D；

D、分别取杂质对照品溶液C和供试品溶液D各20ul进样记录色谱图中多库酯钠和2-乙基己基酯的峰面积，再按照外标法计算多库酯钠样品中多库酯钠的含量以及有关物质2-乙基己基酯和其它总杂的限度，2-乙基己基酯不超过0.2％，其它总杂不超过0.5％。

如上所述新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，其特征在于流动相按以下方法制得：按乙腈：水的体积比＝4:1混合，得混合溶液，再按每500ml混合溶液加入1ml三乙胺的比例向混合溶液中添加三乙胺，最后再用磷酸调节混合溶液的pH为7.00。

如上所述新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，其特征在于所述的液相色谱仪中采用C8色谱柱，流速：1.0ml/min，柱温：40℃，检测器采用紫外检测器，检测波长：214nm。

如上所述新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，其特征在于所述的稀释剂为浓度为80％的乙腈水溶液。

如上所述新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，其特征在于还包括有系统适应性测定：

分别取多库酯钠USP化学对照品以及2-乙基己基酯USP化学对照品各10mg，用稀释剂溶解，摇匀并定容到50ml，取20ul进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数，分离度的大小要不小于1.5，理论踏板数不小于1500。

综上所述，本发明的有益效果：

一、本发明方法能够快速准确的测定多库酯钠的含量以及其中2-乙基己基酯DK10和其他有关物质的含量，包括多库酯钠单酯类杂质。

二、相对现有的一些应用双泵高压梯度的液相检测方法来说，本发明方法应用普通的UV检测器，单泵等度液相检测方法，从而使得检测成本大大降低，非常有利于工业化生产。

三、现有的HPLC检测方法中，无法在一个液相条件下分离多库酯钠中多库脂钠单脂以及多库脂钠和2-乙基己基酯这三种物质，即无法同时分离和检测多库酯钠中极性非常接近以及极性差异非常大的物质，而本方法解决了这个问题，在同一色谱条件情况下，同时分离和定量了多库酯钠中的难分离的三种物质。

四、本方法通过反相高效液相色谱法，未加入离子对试剂，利用等度的条件，通过C8色谱柱来有效的分离和检测多库酯钠的含量和有关物质的限度，大大减低了检测成本和提高检测效率。

五、本发明稀释剂溶液pH值在中性条件下，多库酯钠及其有关物质在液相色谱条件下出峰非常稳定，主峰以及所有有关物质峰的对称性非常好，无拖尾现象。而且主峰与有关物质杂质峰的分离度也合格,分离度大于2.0。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步描述：

本发明新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法中所述有关物质为2-乙基己基酯，其中所述2-乙基己基酯有市售化学对照品。

1、本发明所采用的色谱条件：

1.1色谱柱：C8色谱柱

1.2流动相：按乙腈：水＝8:2混合，再按每500ml混合溶液加入1ml三乙胺，最后再用磷酸调节混合溶液的PH为7.00。

1.3稀释剂：80％乙腈-水溶液

1.4流速：1.0ml/min柱温：40℃进样体积：20ul

1.5检测器：UV检测器

1.6检测波长：214nm

2：HPLC多库酯钠有关物质以及含量测定的方法

2.1取多库酯钠USP化学对照品为已知对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.2mg/ml的对照品溶液A，取多库酯钠样品用稀释剂溶解为浓度为0.2mg/ml的供试品溶液B。分别取对照品溶液A和供试品溶液B各20ul进样记录色谱图中多库酯钠的峰面积，按照外标法，以无水多库酯钠来计算HPLC含量，不小于99％。

2.2取USP化学对照品2-乙基己基酯DK10，再用稀释剂溶解浓度为8ug/ml的杂质对照品溶液C，取多库酯钠样品用稀释剂溶解为浓度为2mg/ml的供试品溶液D。分别取杂质对照品溶液C和供试品溶液D各20ul进样记录色谱图中多库酯钠和2-乙基己基酯的峰面积，再按照外标法计算多库酯钠样品中多库酯钠的含量以及有关物质2-乙基己基酯(DK10)和其它总杂的限度，2-乙基己基酯(DK10)不超过0.2％，其它总杂不超过0.5％。

为了验证本发明方法的系统适应性，进行了以下试验：

分别取多库酯钠(DK20)USP化学对照品以及2-乙基己基酯(DK10)USP化学对照品)各10mg，用稀释剂溶解，摇匀并定容到50ml。取20ul进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数，分离度的大小要不小于1.5，理论踏板数不小于1500。

为了进一步验证本方法，进行了以下试验：

一、多库酯钠线性试验

取多库酯钠的化学对照品适量，用稀释剂分别配置为0.08mg/ml、0.16mg/ml、0.2mg/ml、0.24mg/ml、0.40mg/ml的供试品溶液。分别取20ul溶液，注入液相色谱仪中，记录色谱图，各浓度的峰面积见下表1。

表1 多库酯钠线性实验

以浓度对峰面积做线性回归，得线性方程相关系数r²＝0.9999。

结果表明：多库酯钠在0.08mg/ml～0.4mg/ml浓度范围内线性良好。

二、线性实验

取2-乙基己基酯(DK10)的化学对照品适量，用稀释剂分别配置为2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、9.6ug/ml、16ug/ml的供试品溶液。分别取20ul溶液，注入液相色谱仪中，记录色谱图，各浓度的峰面积见下表2。

表2 2-乙基己基酯DK10的线性实验

以浓度对峰面积做线性回归，得线性方程相关系数r²＝0.9999。

结果表明：2-乙基己基酯(DK10)在2.0ug/ml～16ug/ml浓度范围内线性良好。

三、多库酯钠准确度试验

对照品溶液的制备：精密称取多库酯钠对照品约25mg，置于50ml量瓶中，稀释剂适量，使溶解，并用稀释剂定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：分别精密称取多库酯钠对照品及供试品(含量为99％)约20mg和20mg，25mg和25mg、30mg和30mg，分别置于250ml、250ml、250ml容量瓶中，加稀释剂适量，使溶解，并用稀释剂定容至刻度，摇匀，即得80％、100％、120％的样品，每个浓度各配置三份。按含量测定项下分别测定回收率，结果如下表3：

表3 回收率测定结果

结果表明：本法测定准确度良好。

四、多库酯钠精密度试验

取上述准确度项下100％的供试品溶液，连续进样6次，记录主成分峰面积的精密度如下表。

表3 精密度试验结果

结果提示：方法的精密度良好。

3.4多库酯钠溶液稳定性考察

取上述准确度项下100％的供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、16、24小时，进样，记录主成分的峰面积变化，结果如下表4。

表4 溶液稳定性考察

结果表明，24小时内供试品溶液稳定性良好。

五、方法耐用性试验

取上述准确度项下为100％的供试品溶液，对色谱条件中的流动相的pH值、色谱柱温度等条件进行小范围改动，考察主成分的保留时间的影响及含量测定结果情况，流动相溶液PH值大概为3.2左右.考察结果见下表5。

表5 含量测定方法耐用性考察

取本品，分别用两根不同的品牌的色谱柱，按该方法测定多库酯钠的含量，结果如下表6：

表6 不同色谱柱间的耐用性

本发明方法应用UV检测器，反相高效液相色谱法，本方法灵敏度高、可靠性强，检测成本低，适用于多库酯钠生产中任何一步中间体的考察，也适用于多库酯钠本身的质量控制检测。

Claims (3)

1.一种新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，所述有关物质为2-乙基己基酯，其特征在于包括以下步骤：

a)取多库酯钠USP化学对照品为已知对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.2mg/ml的对照品溶液A，取多库酯钠样品用稀释剂溶解为浓度为0.2mg/ml的供试品溶液B；

b)分别取对照品溶液A和供试品溶液B各20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图中多库酯钠的峰面积，按照外标法，以无水多库酯钠来计算HPLC含量，不小于99%；

c)取USP化学对照品2-乙基己基酯，再用稀释剂溶解浓度为8ug/ml的杂质对照品溶液C，取多库酯钠样品用稀释剂溶解为浓度为2mg/ml的供试品溶液D；

d)分别取杂质对照品溶液C和供试品溶液D各20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图中多库酯钠和2-乙基己基酯的峰面积，再按照外标法计算多库酯钠样品中多库酯钠的含量以及有关物质2-乙基己基酯和其它总杂的限度，2-乙基己基酯不超过0.2%，其它总杂不超过0.5%；

流动相按以下方法制得：按乙腈：水的体积比=4:1混合，得混合溶液，再按每500ml混合溶液加入1ml三乙胺的比例向混合溶液中添加三乙胺，最后再用磷酸调节混合溶液的pH为7.00；

所述的液相色谱仪中采用C8色谱柱，流速：1.0ml/min， 柱温：40℃，检测器采用紫外检测器，检测波长：214nm。

2.根据权利要求1所述新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，其特征在于所述的稀释剂为浓度为80%的乙腈水溶液。

3.根据权利要求1所述新的多库酯钠含量以及有关物质的检测方法，其特征在于还包括有系统适应性测定：

分别取多库酯钠USP化学对照品以及2-乙基己基酯USP化学对照品各10mg，用稀释剂溶解，摇匀并定容到50ml，取20ul进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数，分离度的大小要不小于1.5，理论踏板数不小于1500。