CN108368114A

CN108368114A - 作为mnk抑制剂的吡咯并嘧啶化合物

Info

Publication number: CN108368114A
Application number: CN201680067666.6A
Authority: CN
Inventors: 乔恩·詹姆斯·温特-霍尔特; 爱德华·贾尔斯·麦基弗; 史蒂芬·里维斯; 乔安妮·奥萨波尼
Original assignee: Life Arc Co
Current assignee: Life Arc Co
Priority date: 2015-11-20
Filing date: 2016-11-16
Publication date: 2018-08-03
Anticipated expiration: 2036-11-16
Also published as: EP3792264B1; EP3377494A1; ES2872775T3; EP3377494B1; EP3792264A1; JP2018534316A; US10604524B2; HK1253576A1; CN108368114B; CA3003554C; WO2017085483A1; US20180346469A1; JP6946290B2; CA3003554A1; GB201520499D0; AU2016355103B2; AU2016355103A1

Abstract

本发明涉及由式I表示的化合物，或者其可药用的盐或酯，其中：R₁选自H和CO‑NR₈R₉，其中R₈和R₉各自独立地选自H、烷基、环烷基和单环或双环的杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R₁₂基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个选自R₁₀和R₁₂的基团取代；或R₈和R₉连同它们所连接的氮连接在一起，以形成任选地包含一个或多个其他杂原子的杂环烷基，并且R₈和R₉任选地被一个或多个选自R₁₀和(CH₂)_mR₁₂的基团取代；R₂选自H和烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R₁₂基团取代；R₃选自烷基、环烷基和杂环烷基，它们各自可以任选地被卤素、OH或烷氧基取代；Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C；R₄、R₅、R₆和R₇各自独立地选自H、烷基、CN、NO₂、OH、烷氧基、NHCO‑烷基、卤素和卤代烷基；或Z₁、Z₃和Z₄均为C，Z₂为N，R₅不存在，并且R₄、R₆和R₇如上文所定义；或Z₂、Z₃和Z₄均为C，Z₁为N，R₄不存在，并且R₅、R₆和R₇如上文所定义；各R₁₀和R₁₁独立地为烷基；各R₁₂独立地选自CO₂R₁₀、COOH、OH、烷氧基、卤代烷基、NH₂、NHR₁₀、NR₁₀R₁₁、杂芳基和杂环烷基；R₁₃为H或卤素。本发明的其他方面涉及所述化合物在治疗以下疾病中的药物组合物和治疗用途：不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答、不适宜的细胞炎症应答或神经变性病症，优选tau蛋白病，甚至更优选阿尔茨海默病。

Description

作为MNK抑制剂的吡咯并嘧啶化合物

技术领域

本发明涉及稠合吡咯并嘧啶化合物，其能够抑制一种或多种激酶，尤其是MAP激酶相互作用的丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶(MNKs)。该化合物在多种病症的治疗中具有潜在的医疗应用，所述病症包括增生性病症和神经变性疾病，如阿尔茨海默病。

背景技术

本发明涉及抑制MAP激酶相互作用的丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶(MNKs)的酶活性的化学化合物。MNK蛋白由两个基因MKNK1和MKNK2编码，这两个基因产生MNK 1和MNK 2。这两种蛋白都有由选择性剪接产生的两种亚型。较短的亚型被称为MNK 1b/2b，其缺少导致低基础活性的MAP激酶结合结构域(Buxade等，Front Biosci 2008，5359-5373)。Mnk1a通过ERK和p38来激活，但不是JNK结合，而MNK 2a似乎只被ERK激活。

MNK 1和MNK 2的催化结构域非常相似。然而，这些结构域与其他激酶非常不同，因为这些结构域在ATP结合位点显示DFD基序而不是典型的DFG基序，这表明确认存在改变的活化环(Jauch等，EMBO J 2006，4020-4032)。MNK 1/2普遍用磷酸化真核起始因子4E(eIF4E)、胞质磷脂酶A2(cPLA2)异源核RNA-结合蛋白A1(hnRNP A1)、多聚嘧啶串结合蛋白相关剪接因子(PSF)和Sprouty 2(hSPRY2)来表达(Buxade等，Front Biosci 2008，5359-5373)。

MNKs通过eIF4E的磷酸化而与癌症相关联。eIF4E是在癌症中扩增并且单独地由MNKs磷酸化的致癌基因(Konicek等，Cell Cycle 2008，2466-2471)。eIF4E过表达诱导动物模型中的肿瘤形成。在许多实体瘤和淋巴结转移中已经观察到eIF4E磷酸化的增加，该增加与预后不良有关。eIF4E是帽依赖性翻译中的限速因子，在该翻译过程中，eIF4F将核糖体直接导向游离mRNA的帽结构或作为eIF4F预起始复合物的一部分。几乎所有的蛋白质都需要eIF4E进行翻译。eIF4E的磷酸化导致细胞存活、血管生成和癌症转移中涉及的mRNA的优选翻译，这些mRNA例如为细胞周期蛋白D1、Myc、Mc1-1、Bc1-2和VEGF的mRNA。由于5′UTR是长而复杂的，因此，这些mRNA通常翻译效率较低。eIF4的磷酸化不影响总体翻译速率，但已经表明有助于多核糖体形成，这促进了更有效的翻译。

许多MNK 1/MNK 2抑制剂是本领域已知的。例如，US 8,754,079和US 8,853,193(均以Boehringer Ingelheim International GMBH的名义)公开了能够抑制MNK 1和/或MNK 2的噻吩并嘧啶化合物。同样地，WO 2014/135480(Bayer PharmaAktiengesellschaft)公开了由吲唑基或2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑基基团取代的噻唑并嘧啶。WO 2014/118226(Bayer Pharma Aktiengesellschaft)公开了能够抑制MNK 1和/或MNK 2的取代的吡唑基并嘧啶基氨基-吲唑。

本发明旨在提供能够干扰MNK的活性及其途径的替代化合物。此类化合物在多种病症的治疗中具有潜在的医疗应用，这些病症包括增生性病症和神经变性疾病。

发明概述

本发明的第一个方面涉及一种式(I)的化合物，或其可药用的盐或酯，

其中

R₁选自：

H；

CO-NR₈R₉，其中R₈和R₉各自独立地选自H、烷基、环烷基和单环或双环的杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R₁₂基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个选自R₁₀和R₁₂的基团取代；或R₈和R₉连同它们所连接的氮连接在一起，以形成任选地包含一个或多个其他杂原子的杂环烷基，并且任选地被一个或多个选自R₁₀和(CH₂)_mR₁₂的基团取代；

R₂选自H和烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R₁₂基团取代；

R₃选自烷基、环烷基和杂环烷基，它们各自可以任选地被一个或多个选自卤素、OH或烷氧基的基团取代；

Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C；

R₄、R₅、R₆和R₇各自独立地选自H、烷基、CN、NO₂、OH、烷氧基、NHCO-烷基、卤素和卤代烷基；或

Z₁、Z₃和Z₄均为C，Z₂为N，R₅不存在，并且R₄、R₆和R₇如上文所定义；或

Z₂、Z₃和Z₄均为C，Z₁为N，R₄不存在，并且R₅、R₆和R₇如上文所定义；

各R₁₀和R₁₁独立地为烷基；

各R₁₂独立地选自CO₂R₁₀、COOH、OH、烷氧基、卤代烷基、NH₂、NHR₁₀、NR₁₀R₁₁、杂芳基和杂环烷基；其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R₁₀基团取代；

R₁₃为H或卤素。

有利地，本发明要求保护的化合物能够抑制MNK 1和/或MNK 2。此外，在一个实施方案中，当与本领域已知的化合物比较时，本发明要求保护的化合物有利地显示出与其他激酶相比，对MNK 1和/或MNK 2更高的选择性。

本发明的第二个方面涉及一种药物组合物，其包含至少一种如上所述的化合物，以及可药用的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明的第三个方面涉及一种用于医疗的如上所述的化合物。

本发明的第四个方面涉及一种用于治疗增生性病症的如上所述的化合物。

本发明的第五个方面涉及一种用于治疗诸如阿尔茨海默病之类的神经变性疾病的如上所述的化合物。

本发明的第六个方面涉及如上所述的化合物在制备用于治疗或预防增生性病症或神经变性疾病的药物中的用途。

本发明的第七个方面涉及如上所述的化合物在制备用于预防或治疗病症的药物中的用途，所述病症由任意的异常的激酶活性引发、与任意的异常的激酶活性有关或伴随有任意的异常的激酶活性，其中所述激酶优选为MNK。

本发明的第八个方面涉及一种治疗处于病态的哺乳动物的方法，该病态通过抑制激酶(优选为MNK)而减轻，其中所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的如上所述的化合物。

本发明的第九个方面涉及如上所述的化合物在检测方面的用途，所述检测用于鉴定其他能够抑制激酶(优选为MNK)的候选化合物。

发明详述

本发明涉及稠合吡咯并嘧啶化合物，其能够抑制一种或多种激酶，尤其是MNK。

“烷基”在本文中定义为直链或支链的烷基，优选C_1-20烷基，更优选C_1-12烷基，甚至更优选C_1-10烷基或C_1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基。

“环烷基”在本文中定义为单环烷基环，优选C_3-7-环烷基，更优选C_3-6-环烷基。优选的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；或稠合的双环体系，如降莰烷。

“卤素”在本文中定义为氯、氟、溴或者碘。

如本文所用，术语“芳基”是指C_6-12芳香族基团，其可以是苯并缩合的，例如苯基或者萘基。

“杂芳基”在本文中定义为包含一个或多个(可以相同或者不同)杂原子(例如氧、氮或硫)的单环或双环C_2-12芳香环。合适的杂芳基的例子包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等，以及它们的苯并衍生物，如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基等；或者吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，如喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基等。

“杂环烷基”是指包含一个或多个选自氮、氧和硫中的杂原子的单环或双环脂肪族基团，它们任选地在环中夹杂有一个或多个-(CO)-基团和/或它们任选地在环中包含一个或多个双键。优选的是，所述杂环烷基基团为C_3-7-杂环烷基，更优选为C_3-6-杂环烷基。或者，所述杂环烷基基团为C_4-7-杂环烷基，更优选为C_4-6-杂环烷基。优选的杂环烷基基团包括(但不限于)哌嗪基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基和四氢吡喃基。

在一个优选实施方案中，各R₁₂独立地选自OH、烷氧基、卤代烷基、NH₂、NHR₁₀、NR₁₀R₁₁和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R₁₀基团取代。

在一个优选实施方案中：

Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C；并且

R₄、R₅、R₆和R₇各自独立地选自H、烷基、烷氧基和卤素。

在一个优选实施方案中：

Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C；

R₄、R₅、R₆和R₇均为H；或

R₄、R₆和R₇均为H，并且R₅为卤素。

在一个优选实施方案中，Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C，R₄、R₆和R₇均为H，并且R₅为氟。

在一个优选实施方案中：

Z₁为N，并且Z₂、Z₃和Z₄均为C；

R₄不存在，并且R₅、R₆和R₇均为H或卤素。

在一个优选实施方案中，R₃选自烷基、环丙基、环丁基、环戊基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，它们各自可以任选地被一个或多个选自卤素、OH或甲氧基的基团取代。

在一个优选实施方案中，R₃为烷基，更优选为异丙基。

在一个高度优选的实施方案中，Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C，R₄、R₆和R₇均为H，R₅为氟，并且R₃为异丙基。

在一个高度优选的实施方案中，R₁为H。

在一个优选实施方案中，R₁为CO-NR₈R₉，其中R₈和R₉各自独立地选自H、烷基、环烷基和单环或双环的杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R₁₂基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个选自R₁₀和R₁₂的基团取代。

在一个更优选的实施方案中，R₁为CO-NR₈R₉，其中R₈和R₉中的一者为H，并且另一者为任选地被一个或多个选自NR₁₀R₁₁和杂环烷基中的基团所取代的烷基，其中所述杂环烷基任选地被一个或多个R₁₀基团取代。优选的是，所述杂环烷基为哌啶基或哌嗪基，它们各自任选地被一个或多个R₁₀基团取代。

在一个高度优选的实施方案中，R₁为CO-NR₈R₉，其中R₈和R₉中的一者为H，并且另一者为任选地被NMe₂取代的烷基。

在一个优选实施方案中，R₂选自H和烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自OH和烷氧基的基团取代。

在一个更优选的实施方案中，R₂选自H、甲基、乙基、异丙基、羟乙基和甲氧基乙基。

在一个更优选的实施方案中，R₁₃为H或Cl，更优选为H。

在一个实施方案中，本发明的化合物选自以下物质：

以及它们的可药用的盐。

治疗应用

本发明的另一方面涉及用于医疗的如上所述的化合物。

本发明的另一个方面涉及用于治疗增生性病症的如上所述的化合物。

在一个优选的方面中，本发明的化合物用于治疗不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎症应答的疾病，特别是其中由MKNK-1途径介导的不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎症应答。

在一个优选实施方案中，不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎症应答的疾病为血液肿瘤、实体瘤和/或上述肿瘤的转移。

更优选地，所述化合物用于治疗选自以下的病症：白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、包括脑肿瘤和脑转移瘤的头颈部肿瘤、包括非小细胞肿瘤和小细胞肺肿瘤的胸部肿瘤、胃肠肿瘤、内分泌肿瘤、乳房和其他妇科肿瘤、包括肾、膀胱和前列腺肿瘤的泌尿系肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤，和/或上述肿瘤的转移。

由于已知MNKs是使eIF4E磷酸化的唯一激酶，所以预期通过抑制MNKs来抑制eIF4E的磷酸化会负面地影响这些途径，由此干扰癌症和转移瘤的进展。令人惊讶的是，MNK 1/2双敲除的小鼠没有表现出明显的表型，这对于eIF4E的核心作用而言是出乎意料的。尽管如此，由于组成型活性MNK 1而不是激酶失活型MNK 1的过表达已经显示出能够加速小鼠胚胎成纤维细胞中的肿瘤形成，因而认为丝氨酸209上的eIF4E的MNK磷酸化对于eIF4E的致癌活性是重要的(Chrestensen等，Genes Cells 2007，1133-1140)。在造血干细胞的Eμ-Myc转基因模型中，组成型活性MNK 1而不是激酶失活型MNK 1也显示出能够促进肿瘤生长。反之亦然，发现MNKs(双敲除)的缺陷使由PTEN的损失诱发的淋巴瘤模型中的肿瘤的发展延迟(Ueda等，Proc Natl Acad Sci U S A 2010，13984-13990)。这与使用突变型eIF4E得到的结果一致。eIF4E S209D模拟磷酸化变体eIF4E，并且eIF4E S209A不能被磷酸化。用表达S209A突变体的细胞重建的小鼠在促进肿瘤发生方面是有缺陷的。相比之下，用表达模拟磷酸化的S209D突变体的细胞重建的小鼠显示出加速的肿瘤发作(Wendel等，Genes Dev2007，3232-3237)。

在正常小鼠组织和异种移植肿瘤中，口服施用后30分钟内，使用抗真菌剂尾孢酰胺(cercosporamide)对MNK进行药理学抑制显示出对eIF4E磷酸化的有效阻断，从而减慢了HCT 116异种移植模型中的肿瘤生长，并且抑制了B16黑素瘤肺转移的自然发展。总的来说，这些数据证实了这样的观点：阻断Mnk功能和eIF4E磷酸化可能是有吸引力的抗癌策略(Konicek等，Cancer Res 2011，1849-1857)。通过在白血病细胞模型中使用更具体的MNK抑制性化合物，已经使这一观点得到进一步支持，其中MNK抑制剂显示出具有抗增生性的效果(Teo等，Mol Pharmacol 2015，380-389，Teo等，Cancer Lett 2015，612-623)。

除了癌症之外，MNKs是抗炎治疗的有希望的靶标。MNK显示出在转录后水平上参与调节TNF-产生。通过其mRNA的3′UTR中的富含AU的元件来控制TNF表达。抑制MNK或敲除MNK1显示出抑制Jurkat细胞中的TNF产生，而TNF的3′UTR的过表达增强了报道构建体的表达(Buxade等，Immunity 2005，177-189)。在用不同的TLR激动剂刺激的巨噬细胞系RAW264.7中，在MNK抑制剂存在下，LPS或CpG DNA减少了TNF的产生，这与TNF mRNA衰减的增加相关(Rowlett等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2008，G452-459)。在从克罗恩病样回肠炎(Crohn’s disease-like ileitis)的自发小鼠模型中分离的BMDM中，用MNK抑制剂的处理抑制了TNF和IL-6的产生。对单核细胞系THP-1的研究表明，由志贺毒素诱导的IL-1β和IL-8的释放能够被MNK抑制剂CGP57380阻断73-96％(Cherla等，JLeukoc Biol2006，397-407)。在中性粒细胞中，研究显示MNK在响应LPS和TNF刺激的中性粒细胞的激活中起作用。MNK抑制不仅影响中性粒细胞的细胞因子产生，还抑制TNF和LPS对中性粒细胞的抗凋亡作用。

另一项研究显示，在MNK抑制剂CGP57380的存在下，角质形成细胞中TNF-产生减少，同时IL-1β和IL-6表达降低，由此表明MNK调节炎症性皮肤病中的促炎细胞因子的表达(Kjellerup等，Exp Dermatol 2008，498-504)。白细胞介素17是与TNF和IL-1β协同作用的促炎细胞因子。在存在MNK抑制剂的情况下，Th17条件下活化的鼠类CD4 T细胞中，检测到对eIF-4E磷酸化的阻断，从而导致IL-17产生减少而不影响IL-17mRNA(Noubade等，Blood2011，3290-3300)。RANTES是一种参与T细胞终末分化的趋化因子，据发现MNK通过其主要的转录调节因子RFLAT1间接调控RANTES。研究显示对MNK的抑制减少了RFLAT 1产生(Nikolcheva等，J Clin Invest 2002，119-126)。

本发明的另一个方面涉及用于治疗神经变性病症，更优选tau蛋白病(tauopathy)的如上所述的化合物。

Tau蛋白病是一类与人脑中tau蛋白的病理聚集有关的神经变性疾病。这些疾病中最有名的是阿尔茨海默病(AD)，其中tau蛋白以神经原纤维缠结(NFTs)的形式沉积在神经元内。通过被称为tau的微管相关蛋白的超磷酸化来形成缠结，使其以不溶形式聚集。这些超磷酸化的tau蛋白的聚集体也被称为PHF或“成对螺旋丝”。

在本发明的一个优选实施方案中，tau蛋白病为阿尔茨海默病。

另一个方面涉及如上所述的化合物在制备用于治疗或预防神经变性病症的药物中的用途。优选地，所述神经变性病症为阿尔茨海默病。

另一个方面涉及如上所述的化合物在制备用于治疗或预防增生性病症，优选癌症或白血病的药物中的用途。

优选地，以足够抑制一种或多种激酶的量施用所述化合物，所述激酶优选为MNK 1和/或MNK 2。

在一个优选实施方案中，以抑制MNK 1的量施用所述化合物。

在一个优选实施方案中，以抑制MNK 2的量施用所述化合物。

又一个方面涉及本发明的化合物在制备用于预防或治疗病症的药物中的用途，所述病症由对生物靶标的任何异常活性引起、与对生物靶标的任何异常活性有关或伴随有对生物靶标的任何异常活性，其中所述靶标为激酶，更优选为MNK。

本发明的另一个方面涉及治疗蛋白激酶相关的疾病或病症的方法。如下文所详述，根据本发明这一方面的方法通过对需要治疗的受试者施用治疗有效量的如上文所述的本发明化合物(化合物本身，或者更加优选的是，作为药物组合物的一部分与(例如)可药用载体混合)来实现。

本发明的又一个方面涉及治疗处于病态的哺乳动物的方法，所述病态通过抑制蛋白激酶而减轻，其中所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物。

优选地，所述病态通过抑制蛋白激酶MNK而减轻。

优选地，所述哺乳动物为人类。

术语“方法”是指用于完成给定的任务的方式、手段、技术和过程，其包括(但不限于)那些已知的方式、手段、技术和过程，或者易于被化学、药学、生物学、生物化学和医学领域的技术人员由已知的方式、手段、技术和过程开发出的方式、手段、技术和过程。

本文所使用的术语“施用”是指通过以下方式使本发明的化合物与蛋白激酶联系到一起的方法，所述方式为：使所述化合物能够直接影响蛋白激酶的酶活性，即与蛋白激酶本身相互作用；或者间接影响蛋白激酶的酶活性，即与蛋白激酶的催化活性所依赖的另外一种分子相互作用。如本文所使用，可以在体外(即在试管中)完成施药，或者在体内(即在活体细胞或组织中)完成施药。

在本文中，术语“治疗”包括消除、基本抑制、减缓、或者逆转疾病或病症的发展，基本上改善疾病或病症的临床症状，或者基本上预防疾病或病症的临床症状的出现。

在本文中，术语“预防”是指起初防止生物体产生病症或疾病的方法。

术语“治疗有效量”是指所施用的化合物的量在一定程度上减轻所治疗的疾病或病症的一种或多种症状。

对在本发明中所使用的任何化合物而言，治疗有效量在本文中还指有效治疗剂量，其可以通过细胞培养试验来初步估计。例如，可以对动物模型施用一定剂量以达到循环浓度范围，其包括通过细胞培养而确定的IC₅₀或IC₁₀₀。这些信息可以用来更加准确地确定用于人类的有用剂量。初始剂量还可以通过体内数据来估计。利用这些初步的指导，本领域的普通技术人员就能够确定用于人类的有效剂量。

此外，通过在细胞培养物或者实验动物中所进行的标准药学技术(例如通过确定LD₅₀和ED₅₀)可以确定本文所描述的化合物的毒性和疗效。毒性和疗效之间的剂量比为治疗指数，并且可以表示为LD₅₀与ED₅₀之间的比值。表现出高治疗指数的化合物是优选的。从这些细胞培养试验和动物研究中所获得的数据可以用于确定对于人类中使用不产生毒性的剂量范围。所述化合物的剂量优选在只有少量毒性或者没有毒性的循环浓度(包括ED₅₀)的范围之内。剂量可以根据所使用的剂型和所使用的给药途经而在该范围内变化。准确的剂型、给药途经和剂量可以由各位医生根据患者的情况来选择(见(例如)Fingl et al，1975，In：The Pharmacological Basis of Therapeutics，chapterl，pagel(治疗学的药理基础(1975)，第一章，第一页))。

可以单独调整剂量和间隔，从而提供足够保持疗效的活性化合物的血浆水平。用于经口施用的普通患者剂量为大约50-2000mg/kg/天，通常是大约100-1000mg/kg/天，优选为大约150-700mg/kg/天，最优选为大约250-500mg/kg/天。优选的是，通过每天施用多次剂量来达到有效治疗的血清水平。在局部施用或者选择性吸收的情况中，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。本领域的技术人员无需进行过度的试验就能够优化治疗有效的局部剂量。

如本文所使用，“激酶相关的疾病或病症”是指，本文所定义的以不适宜的激酶活性或者激酶的活性过度为特征的疾病或病症。不适宜的活性指：(i)在正常情况下不表达所述激酶的细胞中表达了该激酶；(ii)激酶表达的增加导致了不期望的细胞增殖、分化和/或生长；或者(iii)激酶表达的降低导致了不期望的细胞增殖、分化和/或生长的减少。激酶的活性过度指，编码特定激酶的基因的扩增，或者激酶活性水平的产生，它们与细胞增殖、分化和/生长的紊乱有关(即，随着激酶水平的增加，一种或多种细胞紊乱症状的严重性增加)。活性过度也可以是由于突变而导致的非配体依赖性或者组成性激活的结果，所述突变例如为负责结合配体的激酶片段的缺失。

本文所描述的化合物能够有效预防的优选疾病或病症包括诸如阿尔茨海默病之类的神经变性病症和诸如癌症之类的增生性病症。

因此，本发明还提供了本文所定义的化合物在制备用于治疗其中期望抑制MNK的疾病的药物中的用途。如上所述，这样的疾病包括增生性病症和神经变性病症(如阿尔茨海默病)。

药物组合物

关于本发明的用途，可以将本文所描述的化合物，或者其可药用的盐、酯或其他有生理功能的衍生物制备成药物制剂，其包含所述化合物，或者其可药用的盐、酯或其他生理功能的衍生物以及一种或多种可药用载体和任选的其他治疗和/或预防成分。载体必须能够与制剂的其他成分相容，并且对其接受者无害。该药物组合物可以在人类医学和兽医学中用于人类和动物使用。

本文所描述的用于各种不同形式的药物组合物的合适的赋形剂的例子可以参考Handbook of Pharmaceutical Excipients，2^ndEdition，(1994)，Edited by A Wade andPJ Weller(由A Wade和PJ Weller编辑的“药物赋形剂手册”，第二版(1994))。

能够用于治疗用途的可接受载体或稀释剂在制药领域中是公知的，并且在(例如)Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985(雷明顿药物科学，Mack Publishing公司出版，A.R.Gennaro编辑，1985)中进行了描述。

合适的载体的例子包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、山梨醇等。合适的稀释剂的例子包括乙醇、甘油和水。

可以根据所需的给药途经和标准的制药操作来选择药用载体、赋形剂或稀释剂。除载体、赋形剂或稀释剂以外，所述药物组合物可以包含任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂、缓冲液、增香剂、表面活性剂、增稠剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等，以及为了使该制剂与期望接受者的血液等渗而包含的物质。

合适的粘合剂的例子包括淀粉、明胶、天然糖类(例如葡萄糖、无水乳糖、自由流动乳糖、β-乳糖、玉米增味剂)、天然和合成树胶(例如阿拉伯树胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素和聚乙二醇。

合适的润滑剂的例子包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。

可以将防腐剂、稳定剂、染料、甚至增香剂提供于药物组合物中。防腐剂的例子包括苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸的酯。还可以使用抗氧化剂和悬浮剂。

药物制剂包括适合经口施用、局部施用(包括经皮肤、口腔和舌下施用)、经直肠或胃肠外施用(包括经皮下、皮内、肌内和静脉施用)、经鼻腔和肺部施用(例如通过吸入施用)的那些。在适当情况下，所述制剂可方便地以离散剂量单位的形式提供，并且可由药学领域中已知的任意技术制备。所有的方法包括将活性化合物与液体载体和/或细碎的固体载体结合的步骤，然后如有必要，将产品成形成为所需制剂。

适合于经口施用的药物制剂(其中载体为固体)最优选以单位剂量制剂的形式(如含预定量活性剂的丸药、胶囊或片剂)提供。片剂可通过任选地与一种或多种附加成分一起压缩或模压制得。压缩片可通过如下方式制备：在合适的机器中将自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性剂可任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂混合后压缩。模压片可通过将活性剂与惰性液体稀释剂模压得到。可以任选地将片剂包衣，并且如果没有包衣的话，可任选地将其刻痕。胶囊可通过下列方法制备：将活性剂单独或与一种或多种附加成分的混合物填入胶囊壳中，然后以通常方式将其密封。扁囊剂类似于胶囊，其中活性剂以及任意附加成分密封在米纸套中。活性剂也可配制为分散性颗粒，其(例如)可在施用前悬浮在水中，或洒在食物中。胶囊可被封装在(例如)小袋中。其中载体为液体的适合于经口施用的制剂可以在水或非水液体中的溶液或悬浮液的形式，或以水包油型乳液的形式提供。

用于经口施用的制剂包括控释剂型(例如片剂)，其中活性化合物被配制在适当的控释基质中，或包被有合适的控释膜。这种制剂可特别便于预防性应用。

适合经直肠施用的药物制剂(其中载体为固体)最优选以单位剂量栓剂的形式提供。合适的载体包括本领域常用的可可脂和其他材料。栓剂可以方便地通过混合活性化合物与软化或熔化的载体，然后冷却并且在模具中成型来制备。适合经胃肠外施用的药物制剂包括活性化合物在水性或油质载体中的无菌溶液或悬浮液。

注射制剂可适合于弹丸注射或连续输注。该类制剂方便地提供于单位剂量或多剂量容器中，该容器在导入制剂后直到使用时均被密封。或者，活性化合物可为粉末形式，其在使用前用合适的载体(如无菌的、无热原水)重构。

活性化合物也可制备为长效储存型制剂(long-acting depot preparation)，其可通过肌内注射或植入(例如经皮下或肌肉植入)来施用。长效制剂可包括(例如)合适的聚合物或疏水性材料、或离子交换树脂。这种长效制剂特别便于预防性使用。

适合于通过颊间隙经肺部施用的制剂被提供为使得包含活性化合物的颗粒(直径为0.5微米至7微米)被递送到接受者的支气管树中。

所述制剂的一种可能是精细磨碎的粉末形式，其可便于提供在用在吸入装置中的可穿孔胶囊(例如，明胶的胶囊)内，或者以自推进(self-propelling)制剂的形式提供，其中所述制剂包含活性化合物、合适的液态或气态推进剂和可选的其他成分(如表面活性剂和/或固体稀释剂)。适当的液体推进剂包括丙烷和含氯氟烃，并且合适的气体推进剂包括二氧化碳。也可采用这样的自推进制剂，其中活性化合物以液滴的形式悬浮在溶液或悬浮液中。

这种自推进制剂类似于本领域已知的那些，并且可通过既定程序制备。合适的是，它们提供于容器中，该容器设置有具有所需的喷雾特性的可手动操作或自动运转的阀门；有利的是，所述阀门为计量型，从而在每次操作后输送固定的体积，例如25微升至100微升。

另一种可能是，活性化合物可为用在喷雾器或雾化器中的溶液或悬浮液形式，由此采用加速气流或超声波搅拌以产生用于吸入的细液滴雾。

适合经鼻腔施用的制剂包括制备大体上类似于上述肺部施用的制剂。当分配所述制剂时，其粒径应当有利地在10微米到200微米的范围内，以使其能够在鼻腔中停留；这可通过适当地采用合适粒径的粉末或合适的阀门选择来实现。其他合适的制剂包括：粒径在20微米至500微米范围内的粗颗粒，以从靠近鼻子的容器通过鼻孔快速吸入施用；以及滴鼻剂，其包含0.2％w/v至5％w/v的在水性或油性溶液或悬浮液中的活性剂。

可药用的载体是本领域技术人员公知的，包括(但不限于)：0.1M、优选0.05M的磷酸盐缓冲液或0.8％生理盐水。此外，可药用的载体可以为水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的例子为丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)以及可注射有机酯(如油酸乙酯)。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸钠林格氏注射液或固定油。也可存在防腐剂和其它添加剂，例如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。

适合局部施用的制剂可以(例如)凝胶、乳膏或软膏的形式提供。上述制剂可施加于(例如)伤口或溃疡，其直接涂抹在伤口或溃疡的表面或承载在合适的支持物(如绷带、纱布、网等)上然后施加覆盖在待处理的区域。

也可提供液体或粉末制剂，其可被直接喷洒或撒到待处理的位置，如伤口或溃疡。或者，可将制剂喷洒或撒在诸如绷带、纱布、网等载体上，然后施加到待处理的位置。

根据本发明的另一方面，提供了制备上述的药物组合物或兽药组合物的方法，所述方法包括将活性化合物与载体结合，例如通过混合来结合。

一般情况下，通过下列方法制备上述制剂：将活性剂与液体载体和/或细碎的固体载体均一且密切的结合，然后如有必要将产品成形。本发明扩展到制备药物组合物的方法，其包括将通式(I)的化合物与药物可接受或兽药可接受的载体或赋形剂结合。

盐/酯

本发明的化合物可以以盐或酯的形式存在，特别是以可药用或可兽医用的盐或酯的形式存在。

本发明的化合物的可药用盐包括其合适的酸加成盐或碱式盐。对合适的药用盐的综述可以参考Berge et al，J Pharm Sci，66，1-19(1977)。盐是用(例如)下列酸形成的：强无机酸，如矿物酸(mineral aeid)：例如氢卤酸(例如氢氯酸、氢溴酸和氢碘酸)、硫酸、磷酸、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐和磺酸；强有机羧酸：例如具有1至4个碳原子的未取代或取代(例如被卤素取代)的烷烃羧酸(例如乙酸)；饱和或不饱和二羧酸：例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或四邻苯二甲酸；羟基羧酸：例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、或柠檬酸；氨基酸：例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸：例如未取代或取代(例如被卤素取代)(C₁-C₄)-烷基-磺酸、或芳基-磺酸(例如甲磺酸或对甲苯磺酸)。非可药用或者非兽医用的盐作为中间体仍然可以是有价值的。

优选的盐包括(例如)乙酸盐、三氟乙酸盐、乳酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐、洒石酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、泛酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、丁酸盐、二葡糖酸盐、环戊酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、草酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、烟酸盐、扑酸盐(palmoate)、果胶酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、乳糖醛酸盐、特戊酸盐(pivolate)、樟脑酸盐、十一酸盐和琥珀酸盐；有机磺酸盐，例如甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟乙磺酸盐、樟脑磺酸盐、2-萘磺酸盐、苯磺酸盐、对氯苯磺酸盐、和对甲苯磺酸盐；以及无机酸盐，例如氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐、磷酸盐和磺酸盐。

基于酯化的官能团，通过使用有机酸或者醇/氢氧化物形成酯。有机酸包括羧酸，例如具有1至12个碳原子的未取代或取代的(例如被卤素取代)烷烃羧酸(例如乙酸)；饱和或不饱和的二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或四邻苯二甲酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、或柠檬酸；氨基酸、例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸，例如未取代或取代的(例如被卤素取代)(C₁-C₄)-烷基-磺酸或芳基-磺酸，例如甲磺酸、或对甲苯磺酸。合适的氢氧化物包括无机氢氧化物，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝。醇包括具有1至12个碳原子的未取代或取代(例如被卤素取代)的烷烃醇。

对映体/互变体

在本发明前面所讨论的所有方面中，本发明(适当地)包括本发明的化合物的所有对映异构体、非对映异构体和互变异构体。本领域的技术人员将会识别具有旋光性(一个或多个手性碳原子)或互变性的化合物。相应的对映体和/互变异构体可以通过本领域已知的方法加以分离/制备。

对映体的特征在于其手性中心的绝对构型，并且按照Cahn、lngold和Prelog的R-和S-排序规则来表示。该惯例在本领域中是公知的(例如，见’Advanced OrganicChemistry’，3^rd edition，ed.March，J.，John Wiley and Sons，New York，1985)。

本发明的包含手性中心的化合物可以用作外消旋混合物、富含对映异构体的混合物而使用，或者可以利用公知的技术将外消旋混合物分离，从而可以单独使用单独的对映异构体。

立体异构体和几何异构体

本发明的某些化合物可以立体异构体和/或几何异构体的形式存在，例如，它们可能具有一个或更多个不对称中心和/或几何中心，因此可以两个或更多个立体异构和/或几何异构的形式存在。本发明涵盖那些化合物的所有单独的立体异构体和几何异构体，以及它们的混合物的用途。权利要求中所使用的术语包括这些形式，条件是所述形式保持了合适的功能活性(虽然不必具有相同程度)。

本发明还包括化合物或其可药用盐的所有合适的同位素变型。本发明的化合物或其可药用盐的同位素变型被定义为这样的情况：至少一个原子被具有相同原子序数但原子量与通常在自然界中所发现的原子量不同的原子替代。能够引入药剂及其可药用盐的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，例如它们分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²p、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。药剂及其可药用盐的某些同位素变型在药物和/或基底组织分布研究中是有用的，例如那些引入放射性同位素(例如³H或¹⁴C)的同位素变型。对于容易制备和检测而言，氚(即³H)和碳-14(即¹⁴C)同位素是特别优选的。此外，利用同位素(例如氘，即²H)进行置换可以提供一定程度的治疗优势，这归因于其具有更大的代谢稳定性，例如体内半衰期的延长或剂量需求的减少，因此其在某些情况下可能是优选的。例如，本发明包括所有氢原子都被氘原子取代的由通式(I)表示的化合物。通常，可以通过常规方法采用合适药剂的适当同位素变型来制备本发明药剂和其可药用盐的同位素变型。

前体药物

本发明还包括前体药物形式的本发明化合物，即，在体内释放的由通式(I)表示的活性母体药物的共价键结合的化合物。这种前体药物通常是其中一个或多个合适的基团被修饰，使得该修饰在施用给人或哺乳动物受试者之后能够被逆转的本发明的化合物。逆转通常是通过天然存在于受试者体内的酶进行的，但也有这样的可能：与这种前体药物一起施用第二试剂，以在体内进行逆转。这种修饰的例子包括酯(例如任何上文所描述的那些酯)，其中，可以通过酯酶等进行逆转。其他这样的体系对本领域的技术人员来说是公知的。

溶剂化物

本发明还包括溶剂化物形式的本发明的化合物。权利要求中所使用的术语包括这些形式。

多晶型体

本发明还涉及多种结晶形式、多晶型形式和(无水)水合形式的本发明的化合物。制药领域中已经很好地建立起这样的方法：通过稍微改变用于合成制备所述化合物的纯化方法和/或溶剂的分离形式，可以分离处于任何所述形式的化合物。

施用方式

本发明的药物组合物可适合于经直肠施用、经鼻施用、经支气管施用、经局部施用(包括经口腔和舌下施用)、经阴道或胃肠外施用(包括经皮下、肌内、静脉内、动脉内和皮内施用)、经腹腔或鞘内施用。优选的制剂为经口服施用的制剂。制剂可方便地以单位剂型(即包含单位剂量的离散部分的形式)提供，或者以多单位或亚单位的单位剂量提供。作为例子，制剂可为片剂和缓释胶囊的形式，并且可通过药学领域中公知的任意方法制备。

本发明的经口施用的制剂可以下列形式提供：含预定量活性剂的离散单位，如胶囊、药丸(gellule)、滴剂、扁囊剂、丸剂或片剂；粉末或颗粒；活性剂在水性液体或非水性液体中的溶液、乳液或悬浮液；或水包油型乳液或油包水型乳液；或丸药等。优选地，组合物每剂量包含1mg至250mg活性成分，更优选为10mg至100mg活性成分。

对于经口施用的组合物(例如，片剂或胶囊)，术语“可接受的载体”包括赋形剂，如常见赋形剂，例如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填料和载体，例如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠和海藻酸；以及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸钠和其他金属硬脂酸盐、甘油硬脂酸酯硬脂酸、硅酮油，滑石蜡、油和胶体二氧化硅。也可使用调味剂，如薄荷、冬青油、樱桃调味剂等。可能有利的是，添加着色剂使所述剂型易于识别。也可采用本领域已知方法对片剂包衣。

片剂可通过任选地与一种或多种附加成分压缩或模压制得。压缩片可通过如下方式制备：在合适的机器中将自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性剂，可选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合后压缩。模压片可通过在合适的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物模压制得。片剂可任选地被包衣或刻痕，并且其可被配制为缓释或控释活性剂。

其他适合经口施用的制剂包括：锭剂，其包含在调味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中的活性剂；软锭剂，其包含在惰性基质(如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性剂；以及漱口剂，其包含在合适的液体载体中的活性剂。

其他的施用形式包括可经静脉内、动脉内、鞘内、皮下、皮内、腹腔或肌内注射的溶液或乳剂，其由无菌或可消毒溶液制备。注射形式通常每剂量含10mg至1000mg、优选为10mg至250mg的活性成分。

本发明的药物组合物也可为栓剂、阴道栓剂、混悬剂、乳剂、洗剂、软膏、乳膏、凝胶剂、喷雾剂、溶液或粉剂的形式。

透皮施用的替代方法是通过使用皮肤贴剂。例如，可将活性成分掺入到由聚乙二醇或液体石蜡的水性乳液组成的乳膏中。活性成分也可以1重量％和10重量％之间的浓度掺入由白蜡或白色软石蜡基质组成的软膏中，可根据需要加入稳定剂和防腐剂。

剂量

本领域普通技术人员可以很容易地确定本发明的组合物之一对受试者施用的合适的剂量，而无需过度的试验。通常情况下，医生可确定最适合个别患者的实际用量，而这取决于多种因素，包括采用的具体化合物的活性、所述化合物的代谢稳定性和作用长短、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率，药物组合、特定病情的严重程度以及接受治疗的个体。本文所披露的剂量是平均情况的示例。当然可以有个别例子，其中应该使用更高或更低的剂量，这些剂量在本发明的范围中。

根据本发明，可以施用有效剂量的本发明的化合物，以抑制引起特定病情或疾病的激酶。当然，该剂量可进一步根据药剂的施用类型进行调整。例如，为了达到急性治疗的“有效剂量”，肠胃外施用由通式(I)表示的化合物是优选的。虽然肌内静推注射液是有用的，静脉输注在5％的葡萄糖水或生理盐水中的化合物，或具有合适的赋形剂的类似制剂是最有效的。通常情况下，肠胃外剂量为约0.01mg/kg至约100mg/kg；优选在0.1mg/kg至20mg/kg之间，其方式为维持药物在血浆中的能有效地抑制激酶的浓度。化合物以达到每日总剂量为约0.4mg/kg/天至约400mg/kg/天的水平每日施用1次至4次。本领域普通技术人员可通过比较药剂在血中的水平与具有治疗效果所需的浓度，容易地确定本发明化合物的治疗有效的精确剂量，以及所述化合物的最佳施用途径。

本发明的化合物也可以按照如下方式经口施用给患者，所述方式使得使药物浓度足以达到本文所述的一个或多个治疗指标。通常情况下，包含药剂的药物组合物的施用的口服剂量为约0.1mg/kg至约50mg/kg，施用方式需与患者的病情一致。优选的口服剂量为约0.5mg/kg至约20mg/kg。

当根据本发明施用本发明的化合物时，预期不会产生不可接受的毒性作用。可以利用生物检测技术之一检测可能具有良好生物利用度的本发明的化合物，从而确定需要达到给定药物效果的化合物的浓度。

组合

在特别优选的实施方案中，本发明的一种或多种化合物与一种或多种其他活性剂(例如已经市售可得的药物)进行组合而施用。在这种情况中，可以连续、同时或依序与一种或多种其他活性剂一起施用本发明的化合物。

当组合施用时，药物通常更有效。特别是，为了避免主要毒性、作用机制和耐药机制的重叠，组合治疗是有利的。此外，还期望以其最小的剂量时间间隔，在药物的最大耐受剂量下施用最多的药物。与化疗药物组合的主要优点是，通过生物化学相互作用，其可以促进加合效应或者可能的协同效应，并且还可以降低抗药性的出现。

通过研究所测化合物与已知或怀疑对治疗特定的疾病起重要作用的药剂的抑制活性，可以指示有利的组合。该方法还可以用于确定施用药剂的顺序，即之前、同时、或者之后施用。该时序安排可以是本文所描述的所有活性剂的特征。

在一个优选实施方案中，其他活性剂选自抗糖尿病剂、降脂剂、心血管剂、抗高血压剂、利尿剂、血小板聚集抑制剂、抗肿瘤剂和抗肥胖剂。

在一个优选实施方案中，其他活性剂选自组胺拮抗剂、缓激肽拮抗剂、血清素拮抗剂、白三烯、抗哮喘剂、NSAID、退热剂、皮质类固醇、抗菌剂、止痛剂、促尿酸排泄剂、化疗剂、抗痛风剂、支气管扩张剂、环加氧酶-2抑制剂、类固醇、5-脂肪氧合酶抑制剂、免疫抑制剂、白三烯拮抗剂、细胞抑制剂、抗肿瘤剂、Tor抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、针对细胞因子和细胞因子受体的可溶部分(片段)的抗体或其片段。

检测

本发明的又一个方面涉及上文所描述的化合物在检测方面的用途，所述检测用于鉴定能够抑制一种或多种激酶、更优选为MNK的其它候选化合物。

优选的是，所述检测为竞争性结合试验。

更优选的是，所述竞争性结合试验包括，使本发明的化合物与激酶(优选为MNK)和候选化合物接触，并且检测本发明的化合物与激酶之间的相互作用的任何改变。

优选的是，候选化合物是通过对本发明的化合物进行常规SAR修饰而产生的。

如本文所使用，术语“常规SAR修饰”是指本领域中公知的通过化学衍生化来改变给定化合物的标准方法。

因此，在一个方面，鉴定出的化合物可以作为开发其他化合物的模型(例如模板)。在这种测试中所使用的化合物可以游离在溶液中、附着于固体支持物上，负载于细胞表面，或者位于细胞内。可以测量化合物与待测试剂之间的活性的消除，或者结合复合体的形成。

本发明的检测可以是筛选，由此能够测试大量的药剂。在一方面中，本发明的检测方法为高通量筛选。

本发明还涵盖竞争性药物筛选试验的用途，其中，能够特异性结合某种化合物的中和抗体与待测化合物竞争结合该化合物。

另一种筛选技术提供了对底物具有合适的结合亲和性的试剂的高通量筛选(HTS)，其基于在WO 84/03564中进行详细描述的方法。

所希望的是，本发明的检测方法适于对待测化合物所进行的小规模和大规模筛选，以及定量检测。

优选的是，竞争性结合试验包括，在存在激酶的已知底物的情况下，使本发明的化合物与所述激酶接触，并且检测所述激酶与所述已知底物之间的相互作用的任何改变。

本发明的又一个方面在于，提供了一种检测配体与激酶的结合情况的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)在存在所述激酶的已知底物的情况下，使配体与激酶接触；

(ii)检测所述激酶与所述已知底物之间的相互作用的任何改变；

并且其中，所述配体是本发明的化合物。

本发明的一个方面涉及一种包括以下步骤的方法：

(a)进行上文所描述的检测方法；

(b)鉴定一种或多种能够结合到配体结合结构域的配体；以及

(c)制备一定量的所述的一种或多种配体。

本发明的另一个方面在于，提供了包括以下步骤的方法：

(a)进行上文所描述的检测方法；

(b)鉴定一种或多种能够结合到配体结合结构域的配体；以及

(c)制备包含所述一种或多种配体的药物组合物。

本发明的另一个方面在于提供了包括以下步骤的方法：

(a)进行上文所描述的检测方法；

(b)鉴定一种或多种能够结合到配体结合结构域的配体；

(c)修饰所述一种或多种能够结合到配体结合结构域的配体；

(d)进行上文所描述的检测方法；

(e)可选地制备包含所述一种或多种配体的药物组合物。

本发明还涉及通过上文所描述的方法而鉴定的配体。

本发明的另一个方面涉及包含通过上文所描述的方法而鉴定的配体的药物组合物。

本发明的另一个方面涉及通过上文所描述的方法而鉴定的配体在制备用于治疗一种或多种如上所述的病症的药物组合物中的用途。

上述方法可以用于筛选用作一种或多种激酶的抑制剂的配体。

本发明的化合物无论作为实验室工具还是作为治疗剂都是有效的。在实验室中，本发明的某些化合物在以下方面是有效的：确定已知的或新发现的激酶在疾病状态的确立或者发展过程中是否其有关键或至少是重要的生化功能，该过程通常被称为“靶标确认”

通过以下非限制性的实施例来进一步描述本发明。

实施例

化合物合成的总体程序

色谱

利用Agilent公司制造的仪器进行准备的高压液相色谱。该仪器被构造如下：利用多波长紫外线检测器(G 1365B，由Agilent公司制造)和串联的MM-ES+APCI质谱仪(G-1956A，由Agilent公司制造)监测色谱，并且如果达到合适的标准，样品则被自动馏分收集器(G1364B，由Agilent公司制造)收集。收集可以通过UV或者质谱仪的任意组合而启动，或者可以根据时间而启动。分离过程的典型条件如下：层析柱为Xbridge C-18(19x 100mm)；以40ml/min的流速进行梯度运行7分钟(起始梯度：10％的甲醇和90％的水，终止梯度：100％的甲醇和0％的水；作为缓冲液：将0.1％的甲酸、0.1％的氢氧化铵加入水中，或者将0.1％的三氟乙酸加入水中)。本领域的技术人员将会理解，可能需要或者有利的是调整各特定化合物的条件，例如，在开始或者结束时改变溶剂组成，调整溶剂或者缓冲液，改变运行时间，改变流速和/或层析柱。

急骤层析是指硅胶层析，并且其利用SP4或者lsolara 4 MPLC系统(由Biotage公司制造)进行；预包装硅胶柱(由Biotage公司提供)；或者利用常规的玻璃柱层析进行。

分析方法

除非另有说明，在大约室温下，利用ECX400光谱仪(由JEOL公司制造)，在指示溶剂中进行1H核磁共振(NMR)光谱。在所有情况中，NMR数据均与已提出的结构一致。以百万分之一份(parts-per-million)为单位给出特征化学位移(δ)，并且用常规缩写来命名主峰：例如，s：单峰；d：双峰；t：三峰；q：四峰；dd：双峰的双峰；br：宽峰。

通常使用具有C-18Xbridge柱(3.5μm，4.6×30mm，起始梯度：10％的有机相和90％的水，终止梯度：有机和0％的水；作为缓冲液：将0.1％的氢氧化铵加入水中，或者将0.1％的三氟乙酸加入水中)的Agilent HPLC仪器进行分析型LCMS。有机溶剂为乙腈或甲醇。使用3mL/min的流速，在254nm和210nm处进行UV检测。

利用MM-ES+APCI质谱仪(G-1956A，由Agilent公司生产)记录质谱。所使用的薄层色谱(TLC)是指利用硅胶MK6F 60A板的硅胶TLC，Rf为化合物迁移的距离除以溶剂在TLC板上迁移的距离。

化合物的制备

当未对起始物的制备进行说明时，这些起始物则是市售可得的、在文献中已知的、或者是本领域的技术人员通过标准方法容易获得的。当指出采用与前面的实施例或中间体类似的方法制备化合物时，本领域的技术人员将会理解，对各个特定的反应，可以调整反应时间、试剂的当量数、溶剂、浓度和温度，并且可能需要或者有利的是采用不同的系列分离净化试验(work-up)或者纯化技术。

当利用微波辐射进行反应时，所使用的微波为Biotage公司提供的Initiator 60。为了保持恒定的温度，在反应过程中改变所提供的实际功率(actual power)。

使用由ThalesNano制造的H-连续流动氢化反应器(Continuous-flowHydrogenation Reactor)进行一些氢化反应。催化剂由ThalesNano以“CatCarts”催化柱供应。在实验部分对压力、流速、温度和催化柱进行说明。按照制造商的操作程序使用设备。本领域技术人员将会理解，可能需要或者有利的是对反应混合物进行重复循环，并且在一些些情况下，在循环之间更换催化柱以提高反应产率。

缩写

以下示出了一些常用缩写的列表-其中所使用的其他未列出的缩写是本领域技术人员应当理解的。

DCM＝二氯甲烷

DMF＝N，N-二甲基甲酰胺

THF＝四氢呋喃

MeOH＝甲醇

TFA＝三氟乙酸

Xantphos＝4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基氧杂蒽

HATU＝N，N，N，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)脲鎓-六氟磷酸酯

EDCI＝1，3-丙烷二胺，N3-(乙基羰基亚氨基)-N1，N1-二甲基盐酸

DCC＝1，3-二环己基碳二亚胺

Pd2(dba)3＝三(二亚苄基丙酮)二钯(0)

TEA＝三乙胺

rm＝反应混合物

rt＝室温

AcOH＝乙酸

IPA＝异丙醇

DIPEA＝N，N-二异丙基乙胺

TB SMSCI＝叔丁基二甲基甲硅烷基氯

MeCN＝乙腈

NH3＝氨

EtOH＝乙醇

EtOAc＝乙酸乙酯

LCMS＝高压液相色谱-质谱联用技术

UV＝紫外线

SCX＝强阳离子交换

TPAP＝四丙基过钌酸铵

DMSO＝二甲基亚砜

BINAP＝2，2′-双(二苯基膦)-1，1′-联萘

TPAP＝四丙基过钌酸铵

DIAD＝偶氮二甲酸二异丙酯

NMO＝N-甲基吗啉N-氧化物

中间体1

4-氯-5甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶

在0℃下，将4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶(5g，32mmol)加入到氢化钠(60％的矿物油分散体)(1.625g，42mmol)的THF(75ml)溶液中并搅拌1小时。加入碘代甲烷(3.046ml，49mmol)并将混合物搅拌过夜。将混合物浓缩，溶于EtOAc中并用水洗涤。将有机层分离，干燥并浓缩成橙色固体(4.63g，85％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.07(s，3H)，6.66(d，J＝3.20Hz，1H)，7.94(d，J＝3.21Hz，1H)，8.56(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)168/170。

中间体2

4-氯-5-乙基-吡咯并[3，2-d]嘧啶

将溴乙烷(128mg，1.18mmol)加入到4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶(150mg，0.98mmol)和碳酸铯(637mg，1.96mmol)的DMF(5ml)溶液中并搅拌过夜。用EtOAc稀释混合物并用水洗涤(3次)。将有机相分离、干燥并浓缩，得到棕色固体(156mg，88％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.46(t，J＝7.3Hz，3H)，4.50(q，J＝6.9Hz，2H)，6.66(d，J＝3.2Hz，1H)，7.47(d，J＝3.2Hz，1H)，8.63(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)182/184。

中间体3

4-氯-5-丙基-吡咯并[3，2-d]嘧啶

类似于中间体2，用4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶和1-溴丙烷制备中间体3，得到4-氯-5-丙基-吡咯并[3，2-d]嘧啶(产率69％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.96(t，J＝7.3Hz，3H)，1.92(sxt，J＝7.3Hz，2H)，4.45(t，J＝7.3Hz，2H)，6.72(d，J＝3.2Hz，1H)，7.49(d，J＝3.2Hz，1H)，8.70(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)196/198。

中间体4

4-氯-5-异丙基-吡咯并[3，2-d]嘧啶

类似于中间体2，用4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶和2-溴丙烷制备中间体4，得到4-氯-5-异丙基-吡咯并[3，2-d]嘧啶(产率63％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.57(d，J＝6.0Hz，6H)，5.50(spt，J＝6.9Hz，1H)，6.72-6.78(m，1H)，7.69(d，J＝3.6Hz，1H)，8.70(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)196/198。

中间体5

2-(4-氯吡咯并[3，2-d]嘧啶-5-基)乙醇

类似于中间体2，用4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶和2-溴乙醇制备中间体5，得到2-(4-氯吡咯并[3，2-d]嘧啶-5-基)乙醇(产率37％)；¹H NMR(400MHz，溶剂)δppm 3.89(t，J＝5.5Hz，2H)，4.64(t，J＝5.5Hz，2H)，6.69(d，J＝3.2Hz，1H)，7.86(d，J＝3.2Hz，1H)，8.56(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)198/200。

中间体6

4-氯-5-(2-甲氧基乙基)吡咯并[3，2-d]嘧啶

类似于中间体2，用4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶和2-溴乙基甲醚制备中间体6，得到4-氯-5-(2-甲氧基乙基)吡咯并[3，2-d]嘧啶，将其用于下一步骤而不需要进一步纯化(MH⁺)212/214。

中间体7

3-异丙氧基-4-硝基苄腈

在0℃下，将LiHMDS(1M THF)(14.4ml，14.4mmol)加入到IPA(1.01ml，13.3mmol)的THF(150ml)溶液中并搅拌1小时。加入3-氟-4-硝基苄腈(2g，12.0mmol)并将混合物搅拌过夜。加入DCM和水，将有机层分离，干燥并浓缩，得到橙色固体(2.42g，98％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.43(d，J＝6.00Hz，6H)，4.71(spt，J＝6.03Hz，1H)，7.28-7.32(m，1H)，7.33-7.37(m，1H)，7.80(d，J＝8.20Hz，1H)。

中间体8

2-异丙基-4-甲基-1-硝基-苯

类似于中间体7，用2-氟-4-甲基-硝基苯制备中间体8，得到2-异丙氧基-4-甲基-1-硝基-苯；产率53％；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.40(d，J＝6.0Hz，6H)，2.40(s，3H)，4.66(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.75-6.81(m，1H)，6.87(s，1H)，7.72(d，J＝8.2Hz，1H)。

中间体9

2-异丙氧基-4-氯-1-硝基-苯

类似于中间体7，用2-氟-4-氯-硝基苯制备中间体9，得到2-异丙氧基-4-氯-1-硝基-苯；产率99％；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.41(d，J＝6.0Hz，6H)，4.66(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.93-7.00(m，1H)，7.03-7.09(m，1H)，7.72-7.81(m，1H)。

中间体10

2-异丙氧基-4-甲氧基-1-硝基-苯

类似于中间体7，用2-氟-4-甲氧基-硝基苯制备中间体10，得到2-异丙氧基-4-甲氧基-1-硝基-苯；产率98％；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.41(d，J＝6.0Hz，6H)，3.82-3.94(s，3H)，4.64(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.49(dd，J＝8.9，2.5Hz，1H)，6.53(m，J＝2.7Hz，1H)，7.94(d，J＝8.9Hz，1H)。

中间体11

3-异丙氧基-4-氨基苄腈

使中间体7(200mg，0.97mmol)的50：50EtOAc：MeOH(25ml)的溶液通过H-Cube(催化柱：10％Pd/C催化柱；流速：1ml/min；温度：30℃；压力：全H₂压力)。将最终溶液浓缩，得到淡黄色油状物(151mg，88％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.34(d，J＝5.95Hz，6H)，4.31(br.s.，2H)，4.51(spt，J＝6.03Hz，1H)，6.62-6.66(m，1H)，6.92-6.95(m，1H)，7.02-7.08(m，1H)。

中间体12

2-异丙氧基-4-甲基苯胺

类似于中间体11，由中间体8制备中间体12，得到2-异丙氧基-4-甲基苯胺；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.34(d，J＝6.0Hz，6H)，2.24(s，3H)，3.61(br.s.，2H)，4.50(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.56-6.59(m，1H)，6.61-6.64(m，2H)

中间体13

2-异丙氧基-4-甲氧基苯胺

类似于中间体11，用中间体10制备中间体13，得到2-异丙氧基-4-甲氧基苯胺；¹HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.35(d，J＝6.0Hz，6H)，3.73(s，3H)，4.49(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.31-6.37m，1H)，6.42-6.47(m，1H)，6.62-6.68(m，1H)。

中间体14

4-氯-2-异丙氧基-苯胺

将铁粉加入到中间体9(200mg，0.93mmol)和乙酸(5ml)的EtOH(30ml)溶液中并搅拌2小时。将化合物浓缩，将残留物溶于MeOH中，并通过SCX柱，将产物用2M NH₃的MeOH溶液洗脱，得到4-氯-2-异丙氧基-苯胺，将其用于下一步骤而不需要进一步纯化。

中间体15

(1R，2R)-2-(5-氟-2-硝基-苯氧基)环己醇

在室温下，将LiHMDS(8.6ml，8.6mmol，1M的THF溶液)缓慢地加入到1，2-环己二醇，(1R，2R)-(1g，8.6mmol)的THF(10ml)溶液中。另外加入(5ml)THF并将混合物搅拌5分钟，然后逐滴地加入2，4-二氟-1-硝基-苯(0.943ml，8.6mmol)。在室温下，将混合物搅拌过夜。用EtOAc和2M HCl(水溶液)稀释混合物，分离有机层并用2M NaOH(水溶液)洗涤，然后通过相分离器洗脱并浓缩。通过柱层析纯化，利用0至15％的EtOAc/石油醚洗脱，得到黄色固体(1.2g，55％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm0.97-1.44(m，4H)，1.48-1.65(m，2H)，1.69-1.85(m，1H)，1.87-2.10(m，1H)，3.41-3.68(m，1H)，4.12-4.41(m，1H)，4.92(br.s，1H)，6.76-7.02(m，1H)，7.39(dd，J＝11.45，2.75Hz，1H)，7.91(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)。

中间体16

(1R，2R)-2-(2-氨基-5-氟-苯氧基)环己醇

使中间体15(1.2g，4.7mmol)的5∶1EtOH∶EtOAc(120ml)的溶液通过H-Cube反应器(催化柱：10％Pd/C；流速：1ml/min；温度：室温；压力：1bar)。将溶液浓缩，得到棕色胶状物(1.05mg，99％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.16-1.37(m，4H)，1.51-1.64(m，2H)，1.78-1.88(m，1H)，1.95(s，1H)，3.44-3.56(m，1H)，3.69-3.81(m，1H)，4.66(br.s.，2H)，5.04(d，J＝4.58Hz，1H)，6.47(m，1H)，6.50-6.58(m，1H)，6.65-6.73(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)226.1。

中间体17

4-氟-2-[(1R，2R)-2-甲氧基环己氧基]-1-硝基-苯

在DCM(30ml)中，使中间体15(1.36g，5.33mmol)和三甲基氧鎓四氟硼酸盐(2.36g，16mmol)合并，并且在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释，分离有机层，用MgSO₄干燥并浓缩。通过柱层析纯化，用2-5％的EtOAc/石油醚洗脱，得到黄色油状物(1g，70％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.16-1.43(m，3H)，1.50-1.65(m，1H)，1.66-1.85(m，2H)，2.01-2.21(m，2H)，3.29-3.41(m，4H)，4.14-4.27(m，1H)，6.62-6.72(m，1H)，6.87-6.94(m，1H)，7.82-7.91(m，1H)。

中间体18

4-氟-2-[(1R，2R)-2-甲氧基环己氧基]苯胺

类似于中间体16，制备中间体18，得到金色油状物的4-氟-2-[(1R，2R)-2-甲氧基环己氧基]苯胺(0.84g，95％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.18-1.39(m，3H)，1.42-1.56(m，1H)，1.63-1.79(m，2H)，2.05-2.18(m，2H)，3.28-3.38(m，1H)，3.44(s，3H)，3.94(m，1H)，6.49-6.58(m，1H)，6.63-6.72(m，2H)；(MH⁺)240.2。

中间体19

(1S，2S)-2-(5-氟-2-硝基-苯氧基)环己醇

类似于中间体15，制备中间体19，得到黄色固体(1.9g，29％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.14-1.41(m，4H)，1.51-1.63(m，2H)，1.75-1.85(m，1H)，1.90-2.01(m，1H)，3.44-3.53(m，1H)，4.26-4.35(m，1H)，4.94(d，J＝5.04Hz，1H)，6.84-6.92(m，1H)，7.39(dd，J＝11.45，2.29Hz，1H)，7.91(dd，J＝9.16，5.95Hz，1H)。

中间体20

(1S，2S)-2-(2-氨基-5-氟-苯氧基)环己醇

按照类似于中间体16的方法，制备得到棕色胶状物(0.95g)，将其用于下一步骤而不需要进一步纯化。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.16-1.33(m，4H)，1.48-1.66(m，2H)，1.78-1.87(m，1H)，1.93-2.04(m，1Ｈ)，3.45-3.54(m，1H)，3.71-3.80(m，1H)，4.63(s，2H)，5.04(d，J＝4.58Hz，1H)，6.42-6.49(m，1H)，6.50-6.57(m，1H)，6.65-6.72(m，1H)；(MH⁺)226。

中间体21

4-氟-2-[(1S，2S)-2-甲氧基环己氧基]-1-硝基-苯

类似于中间体17，制备中间体21，得到黄色油状物(0.63g，66％)；¹HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.22-1.41(m，3H)，1.55(m，1H)，1.66-1.81(m，2H)，2.02-2.18(m，2H)，3.29-3.41(m，4H)，4.13-4.25(m，1H)，6.62-6.72(m，1H)，6.91(dd，J＝10.53，2.75Hz，1H)，7.82-7.91(m，1H)。

中间体22

4-氟-2-[(1S，2S)-2-甲氧基环己氧基]苯胺

类似于中间体16，制备中间体22，得到棕色油状物的4-氟-2-[(1S，2S)-2-甲氧基环己氧基]苯胺(0.54g，97％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.21-1.39(m，3H)，1.42-1.54(m，1H)，1.63-1.81(m，2H)，2.03-2.17(m，2H)，3.28-3.36(m，1H)，3.44(s，3H)，3.88-3.99(m，1H)，6.50-6.58(m，1H)，6.65-6.72(m，2H)；(MH⁺)240.2。

中间体23

4-(甲硫基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶(4-(Methylsulfanyl)-5H-pyrrolo[3，2-d]pyrimidine)

在DMF(75ml)中，将4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶(5.0g，32.5mmol)和甲硫醇钠(6.8g，97.4mmol)的混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用EtOAc和水稀释，将有机相用水(3次)和盐水(1次)洗涤。将最初的水相用DCM再萃取。将DCM层用水洗涤(2次)。将EtOAc和DCM萃取物合并、干燥并浓缩。将粗产物预吸附到硅胶上，并通过硅胶急骤层析纯化，用3∶1的EtOAc：石油醚，然后用EtOAc并且最后用5％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到浅黄色固体(2.97g，55％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm2.67(s，3H)，6.53-6.62(m，1H)，7.67-7.79(m，1H)，8.64(s，1H)，12.03(br.s.，1H)。

中间体24

5-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-(甲硫基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶

5-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-(甲硫基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

在-78℃下，将1.6M正丁基锂的己烷溶液(14.7ml，23.6mmol)滴加到中间体24(4.42g，13.9mmol)的THF(250ml)溶液中。将反应在-78℃下搅拌1.75小时。然后滴加氯甲酸乙酯(2.93ml，30.5mmol)，将反应混合物在-78℃下搅拌1小时，然后升温至0℃。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后用饱和NH₄Cl(水溶液)淬灭。将混合物用EtOAc(2次)萃取，将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥并浓缩。在2∶1的石油醚∶EtOAc中，通过硅胶急骤层析对粗产物进行纯化，得到橙色固体(2.87g，53％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.24(t，J＝7.33Hz，3H)，2.40(s，3H)，2.55(s，3H)，4.33(q，J＝6.87Hz，2H)，7.48(d，J＝8.24Hz，2H)，7.57(s，1H)，7.96(m，2H)，8.90(s，1H)。

中间体26

4-(甲硫基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

将乙醇钠的乙醇溶液(21％w/v，4.74ml)加入到冰冷却的中间体25(2.87g，7.34mmol)的乙醇(80ml)溶液中，并将混合物在0℃下搅拌2小时。然后加入1M HCl以将pH调节至6，并将混合物浓缩至干。将粗产物预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤层析纯化，用2∶1的EtOAc∶石油醚洗脱，然后用2％至50％的MeOH的EtOAc溶液梯度洗脱，得到浅棕色固体(1.43g，82％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.36(t，J＝7.10Hz，3H)，2.66(s，3H)，4.39(q，J＝7.33Hz，2H)，7.16-7.20(m，1H)，8.73(s，1H)。

中间体27

5-甲基-4-(甲硫基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

在DMF(40ml)中，将中间体26(1.03g，4.35mmol)、碳酸铯(3.07g，8.69mmol)和碘甲烷(271μl，4.35mmol)的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物用水稀释，并用EtOAc(2次)萃取。将合并的有机萃取物用水(3次)、盐水(1次)洗涤，干燥并浓缩。将粗产物预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤层析纯化，利用2∶1的石油醚∶EtOAc洗脱，得到淡粉色固体(574mg，53％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.35(t，J＝7.10Hz，3H)，2.69(s，3H)，4.32-4.41(m，5H)，7.22(s，1H)，8.71(s，1H)。

中间体28

4.7-二氯-5-甲是-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

将硫酰氯(756μl，9.32mmol)的DCM(30ml)溶液滴加到冰冷却的中间体27(468mg，1.86mmol)的乙腈(30ml)溶液中。将反应在0℃下搅拌1.5小时。加入饱和NaHCO₃(水溶液)以将pH调节至高于7。将水相用DCM再萃取。将合并的有机相用水洗涤，干燥并浓缩。将粗产物预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤层析纯化，利用3∶1的石油醚∶EtOAc洗脱，得到浅黄色固体(409mg，80％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.39(t，J＝7.10Hz，3H)，4.26(s，3H)，4.47(q，J＝7.33Hz，2H)，8.81(s，1H)。

中间体29

7-氯-4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

在IPA(15ml)中，将中间体28(320mg，1.17mmol)、4-氟-2-异丙氧基苯胺(179μl，1.17mmol)和PTSA(22mg，0.117mmol)的混合物搅拌并在60℃下加热3小时。使反应物冷却至室温，然后浓缩至干。将残留物用DCM稀释并用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。将水相用DCM再萃取。将合并的有机相干燥并浓缩。将粗产物预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤层析纯化，利用40∶1的DCM∶IPA洗脱，得到浅米色固体(395mg，83％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)5ppm1.27(d，J＝5.95Hz，6H)，1.38(t，J＝7.10Hz，3H)，4.31(s，3H)，4.37-4.47(m，2H)，4.73(dt，J＝12.02，6.13Hz，1H)，6.77-6.86(m，1H)，7.07(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.27(dd，J＝8.70，6.41Hz，1H)，8.38(s，1H)，8.43(s，1H)。

中间体30

4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

将中间体29(230mg，0.565mmol)、甲酸铵(712mg，11.3mmol)和10％钯碳(116mg)的EtOAc(25ml)溶液搅拌并加热回流1小时。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤。将滤液用EtOAc稀释并用水和盐水洗涤，将有机相干燥并浓缩。通过硅胶急骤层析纯化粗产物，利用40∶1的DCM∶IPA洗脱，得到浅棕色固体(155mg，74％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.26-1.38(m，9H)，4.36(q，J＝7.33Hz，2H)，4.44(s，3H)，4.75(quin，1H)，6.81(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.07(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，7.12(s，1H)，8.30-8.42(m，3H)。

中间体31

4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸

在1∶1的THF∶MeOH(12ml)中，将中间体30(155mg，0.417mmol)和1N NaOH(1.25ml，1.25mmol)的混合物在室温下搅拌2小时。在冰浴中将反应冷却，并加入1M HCl至pH＝4/5。然后将混合物浓缩至干。将固体残留物分散在水中，将混合物过滤，得到浅米色固体(127mg，89％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.29(d，J＝5.95Hz，6H)，4.47(s，3H)，4.75(dt，J＝11.91，5.95Hz，1H)，6.81(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.03-7.11(m，2H)，8.26-8.48(m，3H)。

中间体32

4-({[(4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}.5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-基)羰基]氨基}甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

在DMF(5ml)中，将中间体31(75mg，0.218mmol)、1-Boc-4-(氨基甲基)哌啶(47mg，0.218mmol)和DIPEA(190μl，1.09mmol)的混合物在室温下搅拌10分钟。然后加入HATU(116mg，0.305mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物用水稀释并用EtOAc萃取，将有机相用水(3次)和盐水(1次)洗涤，干燥并浓缩。通过硅胶急骤层析纯化粗产物，利用40∶1至20∶1的DCM∶2M NH₃的MeOH溶液洗脱，得到灰白色固体(82mg，70％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 0.96-1.12(m，2H)，1.29(d，J＝5.95Hz，6H)，1.39(s，9H)，1.63-1.80(m，3H)，2.57-2.80(m，2H)，3.17(t，J＝6.18Hz，2H)，3.88-4.00(m，2H)，4.37(s，3H)，4.68-4.82(m，1H)，6.80(td，J＝8.82，2.98Hz，1H)，6.96(s，1H)，7.06(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.33(s，1H)，8.44(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)，8.75(t，J＝5.72Hz，1H)。m/z(ES+APCI)⁺：541[M+H]⁺。

中间体33

4-(2-{[(4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-基)羰基]氨基}乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

以与中间体32类似的方式制备中间体33，得到浅棕色固体(产率48％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.29(d，J＝5.95Hz，6H)，1.39(s，9H)，2.36-2.44(m，4H)，3.19-3.47(m，8H)，4.38(s，3H)，4.75(dt，J＝12.25，6.01Hz，1H)，6.80(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，6.92(s，1H)，7.06(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.32(s，1H)，8.44(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)，8.66(t，J＝5.72Hz，1H)。m/z(ES+APCI)⁺：556[M+H]⁺。

中间体34

7-氯-4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸

以类似于中间体31的方式制备中间体34，得到白色固体(产率93％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.27(d，J＝H.95Hz，6H)，4.34(s，3H)，4.73(dt，J＝11.91，5.95Hz，1H)，6.81(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.07(dd，J＝10.76，2.52Hz，1H)，8.21-8.49(m，3H)。m/z(ES+APCI)⁺：379/381[M+H]⁺。

实施例1

5-乙基-N-(4-氟-2-异丙氧基-苯基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

将2-异丙氧基-4-氟苯胺(55mg，0.33mmol)、中间体2(54mg，0.30mmol)、4M HCl的二氧六环溶液(0.1ml)和IPA(2ml)在微波中在140℃下加热20分钟。将混合物浓缩并通过准备的LCMS纯化，得到白色固体(41mg，44％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.43(d，J＝6.0Hz，6H)，1.61(t，J＝7.3Hz，3H)，4.45(q，J＝7.3Hz，2H)，4.68(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.60(d，J＝3.2Hz，1H)，6.69(dd，J＝10.0，2.7Hz，1H)，6.75(td，J＝8.7，2.7Hz，1H)，7.24(d，J＝3.2Hz，1H)，7.58(br.s，1H)，8.54(s，1H)，8.75(dd，J＝8.9，6.2Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)315.2。

实施例2

N-(4-氟-2-异丙氧基-苯基)-5-丙基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例1，用中间体3和2-异丙氧基-4-氟苯胺制备实施例2，得到N-(4-氟-2-异丙氧基-苯基)-5-丙基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺(5％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm0.99(t，J＝7.3Hz，3H)，1.43(d，J＝5.9Hz，6H)，2.01(sxt，J＝7.1Hz，2H)，4.42(t，J＝6.9Hz，2H)，4.70(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.69-6.80(m，2H)，6.88(d，J＝3.2Hz，1H)，7.40(d，J＝3.2Hz，1H)，8.13(br.s，1H)，8.51-8.58(m，1H)，8.66(s，1H)；LC-MS(ESI)；(MH⁺)329.2。

实施例3

N-(4-氟-2-异丙氧基-苯基)-5-异丙基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例1，用中间体4和2-异丙氧基-4-氟苯胺制备实施例3，得到产物(10％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.40-1.45(d，J＝6.0Hz，6H)，1.68(d，J＝6.9Hz，6H)，4.68(spt，J＝6.0Hz，1H)，4.96(spt，J＝6.9Hz，1H)，6.65(d，J＝3.2Hz，1H)，6.70(dd，J＝10.0，2.7Hz，1H)，6.75(td，J＝8.7，2.7Hz，1H)，7.45(d，J＝3.2Hz，1H)，7.61(br.s，1H)，8.55(s，1H)，8.65-8.73(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)329.2。

实施例4

2-[4-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-5-基]乙醇

类似于实施例1，用中间体5和2-异丙氧基-4-氟苯胺制备实施例4，得到2-[4-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-5-基]乙醇(7％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.47(d，J＝6.0Hz，6H)，4.09(t，J＝4.8Hz，2H)，4.38(t，J＝4.6Hz，2H)，4.67(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.07(d，J＝3.2Hz，1H)，6.13(br.s.，1H)，6.62-6.76(m，2H)，6.90(d，J＝3.2Hz，1H)，8.16(dd，J＝8.7，6.4Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.58(br.s.，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)331.2。

实施例5

N-(4-氟-2-异丙氧基-苯基)-5-(2-甲氧基乙基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例1，用中间体6和2-异丙氧基-4-氟苯胺制备实施例5，得到所需产物(56mg，46％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.40(d，J＝6.41Hz，6H)，3.34(s，3H)，3.79(t，J＝5.00Hz，2H)，4.55(t，J＝5.04Hz，2H)，4.62(spt，J＝6.03Hz，1H)，6.61(d，J＝3.21Hz，1H)，6.65-6.74(m，2H)，7.22(d，J＝3.20Hz，1H)，8.15(br.s，1H)，8.40-8.48(m，1H)，8.51(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)345.2。

实施例6

N-(6-氯-2-异丙氧基-3-吡啶基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

步骤1(6-氯-2-异丙氧基-3-氨基-吡啶)

在0℃下，向2-丙醇(344mg，5.7mmol)的甲苯溶液中加入作为60％矿物油分散液的氢化钠(250mg，6.25mmol)，并将混合物搅拌45分钟。然后加入2，6-二氯-3-硝基吡啶并继续搅拌过夜。将混合物浓缩，将残留物溶于EtOAc中，用水洗涤，干燥并浓缩，得到黄色固体6-氯-2-异丙氧基-3-硝基-吡啶。将黄色固体溶于乙酸(0.3ml)和乙醇(10ml)中，然后加入铁粉(520mg，9.26mmol)，并将混合物搅拌3小时。通过硅藻土塞，而后通过硅塞过滤混合物。用饱和NaHCO₃水溶液洗涤滤液，将有机层分离、干燥并浓缩，得到6-氯-2-异丙氧基-3-氨基-吡啶，将其用于下一步骤而不需要进一步纯化。

步骤2

将中间体1(50mg，0.3mmol)、6-氯-2-异丙氧基-3-氨基-吡啶(67mg，0.36mmol)、4MHCl的二氧六环溶液(0.1ml)和IPA(2ml)在微波中在140℃下加热20分钟。将混合物浓缩并进行HPLC纯化，得到N-(6-氯-2-异丙氧基-3-吡啶基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺，其白色固体(22mg，23％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.43(d，J＝6.20Hz，6H)，4.20(s，3H)，5.45(spt，J＝6.18Hz，1H)，6.56(d，J＝3.20Hz，1H)，6.96(d，J＝8.20Hz，1H)，7.17(d，J＝3.20Hz，1H)，7.70(br.s.，1H)，8.53(s，1H)，9.04(d，J＝8.20Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)318/320。

实施例7

3-异丙氧基-4-[(5-甲基吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基]苄腈

将中间体11(63mg，0.36mmol)、中间体1(50mg，0.30mmol)、4m HCl的二氧六环溶液(0.1m1)和IPA(2ml)在微波中在140℃下加热20分钟。将混合物浓缩并通过准备的LCMS纯化，得到白色固体(10.5mg，11％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.46(d，J＝6.00Hz，6H)，4.21(s，3H)，4.74(spt，J＝6.03Hz，1H)，6.59(d，J＝3.21Hz，1H)，7.13(d，J＝1.37Hz，1H)，7.20(d，J＝3.21Hz，1H)，7.36(dd，J＝8.24，1.83Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.59(s，1H)，8.96-9.05(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)308。

实施例8

N-(2-异丙氧基-4-甲基-苯基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例7，用中间体1和中间体12制备实施例8，得到N-(2-异丙氧基-4-甲基-苯基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺(产率22％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.40(d，J＝6.0Hz，6H)，2.35(s，3H)，4.20(s，3H)，4.69(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.53(d，J＝2.7Hz，1H)，6.75(d，J＝1.8Hz，1H)，6.84(dd，J＝8.2，0.9Hz，1H)，7.11(d，J＝3.2Hz，1H)，7.83(br.s，1H)，8.50(s，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)297.0。

实施例9

N-(4-氯-2-异丙氧基-苯基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例7，用中间体1和中间体14制备实施例9，得到N-(4-氯-2-异丙氧基-苯基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺(产率26％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.42(d，J＝6.0Hz，6H)，4.22(s，3H)，4.68(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.55(d，J＝3.2Hz，1H)，6.90(d，J＝2.3Hz，1H)，7.01(dd，J＝8.7，2.3Hz，1H)，7.14(d，J＝2.7Hz，1H)，7.84(s，1H)，8.52(br.s，1H)，8.78(d，J＝8.7Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)317.1。

实施例10

N-(2-异丙氧基-4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例7，用中间体1和中间体13制备实施例10，得到所需产物(产率34％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.41(d，J＝6.0Hz，6H)，3.83(s，3H)，4.18(s，3H)，4.65(spt，J＝6.0Hz，1H)，6.51(d，J＝3.2Hz，1H)，6.53-6.59(m，2H)，7.10(d，J＝2.7Hz，1H)，7.66(br.s，1H)，8.49(s，1H)，8.61(d，J＝8.7Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)313.2。

实施例11

N.[4.氟.2.[2.氟.1-(氟甲基)乙氧基]苯基]-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例7，用中间体1和4-氟-2-[2-氟-1-(氟甲基)乙氧基]苯胺制备实施例11，得到所需产物(7.3mg，7％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 4.15(s，3H)，4.68(q，J＝1.98Hz，3H)，4.77-4.84(m，2H)，6.50-6.56(m，1H)，6.79(dd，J＝9.62，2.75Hz，1H)，6.86(ddd，J＝9.16，8.24，2.75Hz，1H)，7.13(d，J＝3.21Hz，1H)，7.65(br.s，1H)，8.49(s，1H)，8.68-8.77(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)337。

实施例12

4-[5-氟-2-[(5-甲基吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基]苯氧基]环己醇

类似于实施例7，用中间体1和4-(2-氨基-5-氟-苯氧基)环己醇制备实施例12，得到所需产物(12.9mg，12％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.46-1.60(m，4H)，1.54(s，1H)，2.02-2.14(m，2H)，2.19-2.33(m，2H)，3.73-3.84(m，1H)，4.18(s，3H)，4.28-4.40(m，1H)，6.55(d，J＝2.75Hz，1H)，6.70(dd，J＝10.07，2.75Hz，1H)，6.75(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.14(d，J＝3.21Hz，1H)，7.61(s，1H)，8.50(s，1H)，8.63-8.70(m，1H)，8.67(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)357。

实施例13

N-(4-氟-2-四氢吡喃-4-基氧基-苯基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例7，用中间体1和4-氟-2-四氢吡喃-4-基氧基-苯胺制备实施例13，得到所需产物(18.5mg，18％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.75(dtd，J＝13.51，9.50，9.50，4.12Hz，2H)，2.10-2.19(m，2H)，3.56(ddd，J＝12.14，10.07，2.52Hz，2H)，3.97-4.04(m，2H)，4.18(s，3H)，4.49-4.57(m，1H)，6.55(d，J＝3.21Hz，1H)，6.69(dd，J＝10.07，2.75Hz，1H)，6.75(ddd，J＝9.16，8.24，2.75Hz，1H)，7.11-7.16(m，1H)，7.58-7.69(m，1H)，8.50(s，1H)，8.67(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)343。

实施例14

N-(1H-吲唑-5-基)-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例7，用中间体1和5-氨基吲唑制备实施例14，得到所需产物(24mg，30％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm4.16(s，3H)，6.40(d，J＝3.21Hz，1H)，7.51(d，J＝0.92Hz，2H)，7.53(d，J＝3.21Hz，1H)，7.93-7.98(m，1H)，8.01-8.06(m，1H)，8.18(s，1H)，8.40(br.s.，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)357.2。

实施例15至24

类似于实施例7，由中间体1和适当的胺制备实施例15至24。

实施例25

N-[2-(环戊氧基)-4-氟苯基]-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

将4-氯-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶(60mg，0.36mmol)、p-TsOH.H₂O(6.8mg，0.04mmol)、2-(环戊氧基)-4-氟苯胺(70mg，0.36mmol)和IPA(1ml)置于微波反应器小瓶中。将该小瓶密封并在Biotage I-60微波反应器中在140℃下照射15分钟。将反应混合物浓缩，然后溶解于10％MeOH的DCM溶液中，并通过Isolute-NH₂柱洗脱。通过准备的HPLC纯化，得到白色固体(48mg，41％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.55-1.67(m，4H)，1.73-1.80(m，2H)，1.90-1.97(m，2H)，4.21(s，3H)，4.94-4.98(m，1H)，6.41(d，J＝2.7Hz，1H)，6.76-6.81(m，1H)，6.99(dd，J＝11.0，2.7Hz，1H)，7.54(d，J＝2.7Hz，1H)，7.95-7.97(m，1H)，8.27(s，1H)，8.43(dd，J＝9.2，6.4Hz，1H)；m/z(ES+APCI)⁺327[M+H]⁺。

实施例26至35

类似于实施例25，由中间体1和合适的胺制备实施例26至31。以与实施例25类似的方式进行实施例32至35，不同之处在于，使用常规的60℃加热而不是微波加热进行反应。

使用具有Xbridge C18柱(3.5μm粒度和4.6mm×30mm)和二极管阵列UV检测器的Agilent 6120四极LC-MS进行LCMS。流速：3ml/min；^a运行时间：3.2分钟；溶剂A：0.1％的三氟乙酸水溶液，溶剂B：乙腈；梯度-10％-100％乙腈；梯度时间：2.35分钟；^b运行时间：3.2分钟；溶剂A：0.1％的氢氧化铵水溶液，溶剂B：乙腈；梯度-10％-100％乙腈；梯度时间：2.35分钟。^c运行时间：3.2分钟；溶剂A：0.1％的氢氧化铵水溶液，溶剂B：甲醇；梯度-10％-100％甲醇；梯度时间：2.35分钟。

实施例36

(1S，2S)-2-[5-氟-2-[(5-甲基吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基]苯氧基]环己醇

将中间体20(81mg，0.36mmol)、4-氯-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶(60mg，0.36mmol)、pTsOH.H₂O(7mg，0.036mmol)和IPA(2ml)在密封的微波反应器小瓶中合并，并在Biotage微波反应器中在140℃下加热15分钟。将混合物蒸发并通过准备的LCMS纯化，得到白色固体(45mg，35％)；¹H NMR(400MHz，DM SO-d₆)δppm1.12-1.40(m，4H)，1.53-1.63(m，2H)，1.80-1.89(m，1H)，2.01-2.13(m，1H)，3.44-3.54(m，1H)，4.02-4.12(m，1H)，4.18(s，3H)，5.08(d，J＝4.58Hz，1H)，6.36-6.41(m，1H)，6.72-6.80(m，1H)，7.04-7.12(m，1H)，7.51-7.57(m，1H)，8.08-8.15(m，1H)，8.26(s，1H)，8.38-8.48(m，1H)；m/z(ES+APCI)^＋357.2。

实施例37

N-[4-氟-2-[(1S，2S)-2-甲氧基环己氧基]苯基]-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例36，由中间体29和4-氯-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶制备实施例37，得到白色固体(30mg，22％)；¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.09-1.40(m，4H)^-，1.47-1.64(m，2H)，1.92-2.09(m，2H)，3.18(s，3H)，3.20-3.27(m，1H)，4.17(s，3H)，4.24-4.39(m，1H)，6.34-6.41(m，1H)，6.70-6.80(m，1H)，7.02-7.13(m，1H)，7.49-7.54(m，1H)，7.88-7.99(m，1H)，8.19-8.25(m，1H)，8.27-8.35(m，1H)；(MH⁺)371。

实施例38

N-[4-氟-2-[(1R，2R)-2-甲氧基环己氧基]苯基]-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

类似于实施例36，由中间体18和4-氯-5-甲基-吡咯并[3，2-d]嘧啶制备实施例38，得到白色固体(48mg，36％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.11-1.41(m，4H)，1.47-1.64(m，2H)，1.98(t，J＝9.39Hz，2H)，3.18(s，3H)，3.20-3.26(m，1H)，4.17(s，3H)，4.26-4.37(m，1H)，6.34-6.40(m，1H)，6.72-6.80(m，1H)，7.04-7.11(m，1H)，7.52(d，J＝3.21Hz，1H)，7.96(s，1H)，8.23(s，1H)，8.26-8.35(m，1H)；(MH⁺)371。

实施例39

N-[3-(二甲基氨基)丙基]-4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1(4-氯-5-(对甲苯磺酰基)吡咯并[3，2-d]嘧啶)

在0℃下N₂中，将NaH(60％，溶于矿物油，0.17g，4.23mmol)分批加入搅拌着的4-氯-5H-吡咯并嘧啶(0.5g，3.26mmol)的DMF(20mL)溶液中。将溶液在0℃下搅拌10分钟，然后加入对甲苯磺酰氯(683mg，0.04mmol)，并在室温下搅拌反应4小时。在0℃下，将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用DCM萃取(3次)。将合并的有机物用水(3×30mL)、盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，然后在真空中除去溶剂，得到所需产物为白色固体(0.63g，48％)。

步骤2(4-氯-5-(对甲苯磺酰基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酸乙酯)

在-78℃下N₂中，将正丁基锂(1.6M的己烷溶液，1.38mL，2.21mmol)滴加到搅拌着的4-氯-5-(对甲苯磺酰基)吡咯并[3，2-d]嘧啶(0.4g，1.30mmol)的THF(25mL)溶液中。将溶液在-78℃下搅拌2小时，然后加入氯甲酸乙酯(0.27μL，2.87mmol)。将反应在-78℃下搅拌1小时，然后升温至0℃并搅拌1小时。用饱和氯化铵(水溶液)淬灭混合物，用EtOAc(2次)萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。通过急骤层析纯化，用10％至40％的EtOAc/石油醚洗脱，得到黄色油状物(0.34g，70％)。

步骤3(4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酸乙酯)

将4-氯-5-(对甲苯磺酰基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(200mg，0.53mmol)、5-氟吲哚啉(217mg，1.58mmol)、p-TsOH.H₂O(10mg，0.05mmol)和IPA(2mL)置于密封的微波反应器小瓶中，并将混合物在80℃下照射20分钟。将反应混合物加载到2gIsolute-NH₂柱上，用DCM∶MeOH(1∶1)洗脱，并浓缩滤液。通过急骤层析纯化，用0-5％的2M NH₃的MeOH/DCM溶液洗脱，得到黄色固体(160mg，93％)。

步骤4(4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯)

在0℃下N₂中，将NaH(60％，溶于矿物油，27mg，0.67mmol)分批加入到搅拌着的4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(137mg，0.42mmol)的DMF(5mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌45分钟，然后加入SEMCl(111μL，0.63mmol)，并将混合物在室温下搅拌18小时。用水淬灭反应混合物，得到黄色沉淀物。过滤固体，用水洗涤，然后通过与甲苯/MeCN共沸来干燥。将所需产物分离为带有杂质的黄色固体(230mg)。

步骤5(4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸)

向搅拌着的4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(230mg，0.50mmol)的EtOH(10mL)和THF(10mL)的溶液中加入1NNaOH(1.2mL，1.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后用2M HCl酸化并蒸发至干。将粗产物溶于水中，过滤并干燥，得到灰白色固体(216mg，100％)。

步骤6(N-[3-(二甲基氨基)丙基]-4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺)

在DCM(3mL)和DMF(3mL)中，将4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸(220mg，0.51mmol)、HATU(231mg，0.61mmol)、DIPEA(0.49mL，2.80mmol)和N，N-二甲基氨基丙胺(39μL，0.47mmol)合并，并在室温下搅拌18小时。将反应混合物用水稀释，分离各相，并用DCM(2次)萃取水相。蒸发后，将粗产物溶于EtOAc中，并用H₂O(2次)、盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并浓缩。通过急骤层析纯化，用10％至20％的2M NH₃的MeOH/DCM溶液洗脱，得到120mg、46％的产物，将其用于下一步骤中。

步骤7(N-[3-(二甲基氨基)丙基]-4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺实施例39)

向N-[3-(二甲基氨基)丙基]-4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺(70mg，0.14mmol)的THF(5ml)溶液中加入乙二胺(14μL，0.20mmol)和1M TBAF的THF溶液(0.17ml，0.16mmol)。将混合物回流2小时，冷却，浓缩并通过HPLC纯化，得到实施例39(8mg，15％)；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.79(quin，J＝5.7Hz，2H)，2.38(s，6H)，2.59(t，J＝5.50Hz，2H)，3.32(t，J＝8.24Hz，2H)，3.59(q，J＝5.50Hz，2H)，4.59(t，J＝8.47Hz，2H)，6.76(s，1H)，6.90-7.00(m，2H)，8.16(m，J＝8.70Hz，1H)，8.54-8.60(m，1H)，9.33(br.s.，1H)，9.43(br.t，J＝1.00Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH⁺)383.1。

实施例40

N-[3-(二甲基氨基)丙基]-4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺

将中间体31(30mg，0.087mmol)、3-(二甲基氨基)-1-丙胺(11μl，0.087mmol)和HOBt(12mg，0.087mmol)的DCM(2ml)溶液的混合物在室温下搅拌10分钟。加入EDC盐酸盐(17mg，0.087mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后使反应混合物通过用MeOH洗脱的SCX柱。将产物用2M NH₃的MeOH溶液洗脱，并将洗脱液浓缩至干。将残留物预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤层析纯化，用10∶1的DCM∶2M NH₃的MeOH溶液洗脱，得到黄色固体。在Et₂O中研磨以提供白色固体(15mg，40％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.29(d，J＝5.95Hz，6H)，1.67(quin，J＝7.10Hz，2H)，2.14(s，6H)，2.27(t，J＝7.10Hz，2H)，3.22-3.34(m，2H)，4.38(s，3H)，4.75(dt，J＝12.25，6.01Hz，1H)，6.80(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，6.93(s，1H)，7.06(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.32(s，1H)，8.45(dd，J＝8.70，6.41Hz，1H)，8.74(t，J＝5.72Hz，1H)。m/z(ES+APCI)⁺：429[M+H]⁺。

实施例41

4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-N-(哌啶-4-基甲基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺

将中间体32(78mg，0.144mmol)的TFA(2ml)和DCM(6ml)溶液在室温下搅拌2小时。然后将反应混合物浓缩至干。将残留物溶于MeOH并通过SCX柱。产物用2M NH₃的MeOH溶液洗脱，并且将洗脱液浓缩。将残留物预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤层析纯化，用3∶1的DCM∶2M NH₃的MeOH溶液洗脱，得到灰白色固体(42mg，66％)。¹H NMR(400M Hz，DMSO-d₆)δppm0.97-1.12(m，2H)，1.29(d，J＝5.95Hz，6H)，1.55-1.70(m，3H)，2.35-2.46(m，2H)，2.87-2.97(m，2H)，3.13(t，J＝6.18Hz，2H)，4.37(s，3H)，4.75(dt，J＝12.02，6.13Hz，1H)，6.80(td，J＝8.93，2.75Hz，1H)，6.95(s，1H)，7.06(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.32(s，1H)，8.45(dd，J＝8.93，6.64Hz，1H)，8.70(t，J＝5.72Hz，1H)。m/z(ES+APCI)⁺：441[M+H]⁺。

实施例42

4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-N-[2-(哌嗪-1-基)乙基]-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺

以与实施例41类似的方式制备实施例42，得到灰白色固体(产率47％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.29(d，J＝5.95Hz，6H)，2.26-2.48(m，6H)，2.69(t，J＝4.81Hz，4H)，3.27-3.44(m，2H)，4.38(s，3H)，4.75(dt，J＝12.02，6.13Hz，1H)，6.80(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，6.91(s，1H)，7.06(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.32(s，1H)，8.45(dd，J＝8.70，6.41Hz，1H)，8.63(t，J＝5.50Hz，1H)。m/z(ES+APCI)⁺：456[M+H]⁺。

实施例43

7-氯-N-[3-(二甲基氨基)丙基]-4-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-5-甲基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺

以与中间体32类似的方式，由中间体29制备实施例43，得到灰白色固体(产率43％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.22-1.31(m，6H)，1.70(quin，J＝6.98Hz，2H)，2.15(s，6H)，2.33(t，J＝7.10Hz，2H)，3.28-3.40(m，2H)，4.73(dt，J＝12.25，6.01Hz，1H)，6.81(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.06(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.31(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)，8.35(s，1H)，8.81-8.96(m，1H)。m/z(ES+APCI)⁺：463/465[M+H]⁺。

实施例44

N-[3-(二甲氨基)丙基]-4-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1(4-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯)

在Biotage I-60微波反应器中，将4-氯-5-(对甲苯磺酰基)吡咯并[3，2-d]嘧啶(400mg，1.06mmol)、4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯胺(184mg，1.11mmol)、pTsOH.H₂O(20mg，0.11mmol)和IPA(1mL)在100℃下照射20分钟。将反应混合物浓缩，溶于10％MeOH的DCM溶液中并通过Isolute-NH₂柱进行洗脱。通过急骤层析纯化，用0至50％的EtOAc/石油醚洗脱，得到黄色固体(195mg，52％)。

步骤2(4-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸)

向搅拌着的4-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(171mg，0.48mmol)的EtOH(5mL)和THF(5mL)溶液中加入1N NaOH(2.39mL，2.39mmol)。将反应混合物在70℃下加热1小时，冷却并浓缩。将粗物质溶于水中，用1M HCl中和并减压浓缩，得到固体(187mg)，将其用于下一步骤而不需要进一步纯化。

步骤3N-[3-(二甲基氨基)丙基]-4-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-甲酰胺

在DMF(5mL)中，将4-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-6-羧酸(158mg，0.47mmol)、HATU(196mg，0.52mmol)、DIPEA(0.38mL，2.21mmol)和N，N-二甲基氨基丙胺(46μL，0.37mmol)合并，并在室温下搅拌18小时。将反应混合物浓缩，溶于10％MeOH的DCM溶液中，并通过Isolute-NH₂柱进行洗脱。通过快急骤层析纯化，用0至15％1M NH₃的MeOH/DCM溶液洗脱，然后用准备的LCMS洗脱，得到白色固体(17mg，11％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm1.27-1.40(m，6H)，1.77-1.91(m，2H)，2.24-2.33(m，6H)，2.42-2.48(m，2H)，3.37-3.50(m，2H)，4.65(spt，J＝6.11Hz，1H)，6.61-7.08(m，3H)，7.75-8.16(m，1H)，8.23(s，1H)。m/z(ES+APCI)⁺：415[M+H]⁺。

实施例45

N-(4-氟-2-异丙氧基-苯基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺

在小瓶中，将4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺(75mg，0.49mmol)、4-氟-2-异丙氧基苯胺(99mg，0.59mmol)、异丙醇(2ml)和4M HCl的二氧六环(0.1ml)溶液合并，并且在140℃下在Biotage Initiator 60微波反应器中照射30分钟。将混合物浓缩并通过准备的HPLC纯化，得到灰白色固体(25mg，18％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 0.46(d，J＝6.41Hz，6H)，3.78-3.88(m，1H)，5.63(dd，J＝2.75，1.83Hz，1H)，5.92-5.98(m，1H)，6.20(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，6.80-6.82(m，1H)，7.21(dd，J＝8.93，6.64Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.38-7.40(m，1H)，10.78(br.s.，1H)；m/z(ES+APCI)⁺：287[M+H]⁺。

实施例46

4-(5-氟吲哚啉-1-基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶

类似于实施例45，通过使5-氟吲哚啉与4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-胺反应来制备，以得到浅棕色固体。m/z(ES+APCI)⁺¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 3.28-3.37(m，2H)，4.60(t，J＝8.70Hz，2H)，6.51(dd，J＝3.21，1.83Hz，1H)，6.97-7.04(m，1H)，7.11-7.16(m，1H)，7.62(t，J＝3.21Hz，1H)，8.34-8.42(m，2H)，11.42(br.s.，1H)：255[M+H]⁺。

MNK 1和MNK 2生物化学IC50试验

通过监测丝氨酸/苏氨酸激酶肽5FAM-RRRLS SLRA-NH2的磷酸化，从而在生物化学试验中测定化合物对MNK 1和MNK 2活性的作用。使用Caliper LabChip EZ Reader II利用Caliper迁移率变动试验(Caliper Mobility Shift Assay)来检测磷酸化的肽产物和未磷酸化的肽底物。

Caliper迁移率变动试验技术基于利用微流控芯片，从而通过电泳分离底物和产物并通过激光诱导荧光进行检测，来测量荧光性非磷酸化肽底物向磷酸化产物的转化。LabChip EZ Reader软件计算底物峰和产物峰的相对高度，并记录峰比率(产物峰(P)除以产物峰(P)和底物峰(S)之和)。以100×[(P/(P+S)]计算转化百分比。将所有试验均设定为以线性相运行，其中最大底物转化率为10％。

试剂

用于所有筛选活性的酶MNK 1和酶MNK 2来源于Carna Biosciences(产品编号分别为02-145和02-146)。这些酶是在杆状病毒表达系统中表达并通过谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化的N端GST融合蛋白。具体而言，这些构建体由全长人MNK 1[1-424(末端)氨基酸和登录号为BAA 19885.1的T344D]和全长人MNK 2[1-465(末端)氨基酸和登录号为NP_951009.1的T379D]组成。FAM标记的通用丝氨酸/苏氨酸激酶肽底物5-FAM-RRRLSSLRA-NH₂购自Anaspec用于Caliper-Labchip EZ reader 12-sipper(cat No.760404)的检测试剂、分离缓冲液和涂布试剂-8(CR-8)购自Perkin Elmer。所有其他试验试剂均来自Sigma。

MNK 1试验

在试验中，使化合物在DMSO中连续稀释以产生最终最高浓度为100μM的10-点半对数稀释曲线。在聚丙烯-384孔U形底板(Thermo Scientific 4340)中以30μL的总体积进行反应。将化合物与酶和肽在反应缓冲液中预培养30分钟，然后加入ATP以引发反应。最终试验浓度为3nM MNK 1、2μM肽底物、50μM ATP、50mM Hepes pH7.0、0.01％BSA、10mM MgCl₂、1mM二硫苏糖醇。将底板在室温下培养，并通过在已经实现大约10％底物转化的时间点下加入2体积(60μl)的50mM EDTA来停止反应。

根据所用的ATP的浓度调整试验培养时间。在低ATP(50μM)和高ATP(1mM)下进行试验。在标准试验的Km条件下选择低ATP值运行，从而允许在其他激酶之间比较相对效力。选定高ATP浓度作为细胞ATP浓度的代表，并且将其用于指示ATP竞争性，其中与Km条件相比，可以预期明显效力的显著变化(大于半对数)。所记录的所有IC50值均为至少两次独立实验的平均值。

MNK 2试验

在试验中，使用10nM MNK 2如上所述进行反应。标准试验包含50μM ATP，而高浓度ATP试验包含1mM ATP。改变了实现10％转化的时间。所有其他条件均相同。

MNK细胞活性磷酸化-eIF4E(Phospho-eIF4E)检测试验

通过监测细胞裂解物中ser209(已知的MNK 1/2的内源性底物)上的eIF4E的磷酸化来测量细胞中的MNK活性。使用放大发光邻近均相试验(Alphascreen Surefire p-eIF4E试剂盒，Perkin Elmer)，从而能够在384格式细胞试验中定量剂量依赖性响应。试验检测基于与供体珠和受体珠偶联的夹心抗体复合物的形成。当供体珠和受体珠通过与分析物(p-eIF4a-ser209)结合而紧密靠近时，在680nm处的激发引起供体珠和受体珠粒之间的单线态氧物质的转移，其导致在520nm至620nm处的光的发射。

研究了许多癌细胞系，并选择MV4.11细胞系(ATCC、CRL-9591)用于化合物的常规分析，该MV4.11细胞系为双表型B骨髓单核细胞性白血病细胞系。在IMDM-10％FBS培养基中制备化合物稀释液以产生从30μM的测试中的最终最高浓度开始的10点半对数系列稀释。使冷冻细胞以1.2×10⁶/ml的浓度悬浮于IMDM-10％FBS培养基中。将4μl(4800个细胞/孔)分配到384-组织培养Proxiplate板(Perkin Elmer 6008238)的各孔中，并将4μl化合物培养基稀释液加入至细胞中，并在37℃，5％CO₂下培养1.5小时。然后，根据制造商的建议将细胞裂解并进行Aphascreen Surefire方案。将8μl受体珠(在试剂盒活化缓冲液中以1∶50稀释)加入到裂解物中，以150rmp振荡2分钟并在室温下培养1.5小时。然后加入3μl供体珠(在试剂盒稀释缓冲液中以1∶20稀释)，以150rpm振荡2分钟并在室温下再培养1.5小时，然后用Alphascreen光学组件在Pherastar FS上读取板。

相对于未处理的仅有DMSO的对照组，对数据进行标准化，并且在实验中一式两份重复曲线。所记录的数据均为至少2次独立实验的平均值。

激酶选择性筛选

通过第三方激酶分析服务，如Eurofins KinaseProfiler^TM(参见www.eurofins.com/pharmadiscovery)或类似的此类服务的提供商，使用市售试剂和方案进行激酶筛选。

表2示出了实施例40的激酶选择性筛选结果。数据表示为在1μM化合物存在下，各特定激酶的抑制％。

在不背离本发明的范围和精神的情况下，本发明所描述的各个方面的多种修改和改变对本领域的技术人员来说是显而易见的。虽然结合具体的优选实施方案对本发明进行了描述，但应理解，所要求保护的本发明不应被过度地限制于这些具体的实施方案。实际上，期望所描述的实施本发明的方式对于本领域的技术人员而言显而易见的各种更改也包含在以下权利要求的范围之内。

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表1：本发明所选择的化合物的活性

表2：实施例40的激酶选择性数据。数据表示为在1μM化合物存在下，各特定激酶的抑制％。

Claims

1.一种由式(I)表示的化合物，或其可药用的盐或酯，

其中：

R₁选自：

H；

CO-NR₈R₉，其中R₈和R₉各自独立地选自H、烷基、环烷基和单环或双环的杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R₁₂基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个选自R₁₀和R₁₂的基团取代；或R₈和R₉连同它们所连接的氮连接在一起，以形成任选地包含一个或多个其他杂原子的杂环烷基，并且R₈和R₉任选地被一个或多个选自R₁₀和(CH₂)_mR₁₂的基团取代；

Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C；

各R₁₀和R₁₁独立地为烷基；

各R₁₂独立地选自CO₂R₁₀、COOH、OH、烷氧基、卤代烷基、NH₂、NHR₁₀、NR₁₀R₁₁、杂芳基和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R₁₀基团取代；

R₁₃为H或卤素。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中：

Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C；并且

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中：

Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C；

R₄、R₅、R₆和R₇均为H；或

R₄、R₆和R₇均为H，并且R₅为卤素。

4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Z₁、Z₂、Z₃和Z₄均为C，R₄、R₆和R₇均为H，并且R₅为氟。

5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₃选自烷基、环丙基、环丁基、环戊基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，它们各自可以任选地被一个或多个选自氟、OH和甲氧基的基团取代。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R₃为烷基，更优选为异丙基。

7.根据前述权利要求的化合物，其中R₁为H。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R₁为CO-NR₈R₉，并且R₈和R₉中的一者为H且另一者为任选地被一个或多个选自NR₁₀R₁₁和杂环烷基的基团取代的烷基，其中所述杂环烷基任选地被一个或多个R₁₀基团取代。

9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₂选自H和烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自OH和烷氧基的基团取代。

10.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₂选自H、甲基、乙基、异丙基、羟乙基和甲氧基乙基。

11.一种化合物，其选自以下物质：

以及它们的可药用的盐或酯。

12.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，以及可药用的载体、稀释剂或赋形剂。

13.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，该化合物用于医疗。

14.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗以下疾病：不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎症应答。

15.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗选自血液肿瘤、实体瘤和/或其转移的增生性病症，更优选用于治疗选自以下的增生性病症：白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、头颈部肿瘤、脑肿瘤和脑转移瘤、胸部肿瘤、非小细胞肿瘤和小细胞肺肿瘤、胃肠肿瘤、内分泌肿瘤、乳房和其他妇科肿瘤、泌尿系肿瘤、肾、膀胱和前列腺肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤，和/或上述肿瘤的转移。

16.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗或预防神经变性病症，优选tau蛋白病，甚至更优选阿尔茨海默病。

17.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗由异常的MNK活性引起的、与异常的MNK活性有关或伴随有异常的MNK活性的病症。

18.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎性应答，或用于治疗或预防神经变性病症，优选tau蛋白病，甚至更优选阿尔茨海默病。

19.一种治疗疾病的方法，所述疾病为不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎性应答，或为神经变性病症，优选tau蛋白病，甚至更优选阿尔茨海默病，在哺乳动物中，所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1至11中任一项所述的化合物。

20.一种治疗处于病态的哺乳动物的方法，所述病态通过抑制MNK而减轻，其中所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1至11中任一项所述的化合物。

21.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物在检测方面的用途，所述检测用于鉴定其他能够抑制MNK的候选化合物。

22.一种组合，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的化合物和其他治疗剂。

23.根据权利要求12所述的药物组合物，其还包含第二治疗剂。