CN109020957B - 作为mnk抑制剂的杂环化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一类杂环化合物、含有其的药物组合物、以及它们的制备方法,和其作为丝裂原活化蛋白激酶相互作用激酶1和2‑MNK1/MNK2抑制剂的用途。该抑制剂为式(I)所示的杂环化合物，或其药学上可接受的盐、前药、溶剂化合物、多晶型体、异构体、稳定同位素衍生物或含有其的药物组合物。本发明涉及的化合物可用于治疗或预防由MNK介导的相关疾病，如癌症。

Description

作为MNK抑制剂的杂环化合物
技术领域
本发明涉及一类杂环化合物、含有其的药物组合物以及它们的制备方法，和其作为成MNK抑制剂的用途。本发明还涉及应用所述化合物治疗或预防由MNK介导的相关疾病(例如癌症)的方法。
背景技术
有丝分裂原激活的蛋白激酶作用激酶(MNK，MAP kinase-interacting kinase)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，作为细胞外调节蛋白激酶(ERK)底物或者结合因子于1997年被首次发现(WaskiewiczA.et al.EMBO J.,1997,16(8),1909-1920&1921-1933)。
人类MNK蛋白由MKNK1和MKNK2两组基因编码，每组基因再通过选择性剪切作用分别翻译成2种亚型，即:MNK1a、MNK1b和MNK2a、MNK2b。从蛋白序列上分析，这4种亚型在N端都含有细胞核定位信号序列(nuclear localization signal，NLS)，同时还有一个与eIF4G结合的序列，这使得MNK激酶可以进入细胞核发挥作用；中间是一个序列同源性较高的激酶结构域，负责激酶的催化功能，该激酶结构域属于Ca+/钙调蛋白-调节蛋白激酶(CaMK)家族，该结构域不受选择性剪切作用的影响，4种亚型之间具有高度的保守性。结构上的主要差别在于C端，MNK1a和MNK2a在C端含有一个MAPK结构域，负责接受上游ERK及p38的激活作用，而在另外两种亚型中该结构域缺失，不能被上游激酶磷酸化激活，具有不同的基础活性；MNK1a的C端含有一个细胞核转出信号序列(nuclear export signal，NES)，使得MNK1a亚型可以更广泛地分布在细胞质中，而其他3种亚型多数都存在于细胞核中(DiabS.et.al.Chem.Biol.2014,21(4),441-452.)。
eIF4E是目前发现的底物中研究最早也最全面的蛋白，通过N端的eIF4E结合域，MNK1/2可以结合到eIF4E上，继而磷酸化其209位的丝氨酸，从而调控相关蛋白的翻译过程，这些蛋白在肿瘤细胞促存活、抗凋亡、促转移和耐药性机制中发挥着重要作用。在前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、胶质瘤、白血病等多种肿瘤细胞中都能够检测到以p-eIF4E水平上调为标志的MNK过度激活(Lim S.et.al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2013,110(20),2298-2307；Grzmil.M.et al.J.Clin.Invest.,2014,124(2),742-754；YoshizawaA.et.al.Clin.Cancer Res.2010,16(1),204-248；Adesso L.et.al.Oncogene,2012,32(23),2848-2857等)。MNK是MAPK通路下游的作用激酶，其促存活作用主要依靠提升肿瘤相关蛋白的翻译进程。研究证实MNK可以促进相关mRNA的翻译，促进肿瘤血管生成和细胞增殖，抑制凋亡。近期的研究表明，MNK在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中可维持肿瘤细胞的存活，抑制MNK不仅能够阻断eIF4E1的磷酸化，同时还可提升eIF4E3的表达水平(LandonA.et.al.Nat.Commun.2014,5,5413.)。
分子机制研究表明，MNK介导的eIF4E磷酸化水平的上调可以促进Snail和MMP-3蛋白的翻译，诱导上皮-间质转化(EMT)，从而促进肿瘤的转移，抑制MNK及其介导的eIF4E磷酸化有望成为解决肿瘤转移的有效途径(Robichaud N.et.al.Oncogene,2014,34(16),2032-2042)。
研究证实MNK激酶在多种药物引起的代偿通路中发挥作用，最终导致耐药性的产生。mTOR抑制剂雷帕霉素及其类似物产生的耐药现象与MNK相关，MNK抑制剂与雷帕霉素联合应用可以克服该耐药通路，产生协同作用，有效地阻断相关蛋白质的翻译水平，进而抑制肿瘤细胞的增殖，达到更佳的抗肿瘤效果。研究表明，其他一些化疗药物，如:伊马替尼、阿糖胞苷、吉西他滨等产生的耐药性均与MNK及eIF4E磷酸化水平相关。将这些药物与MNK抑制剂联合应用时可以有效地逆转其产生的耐药性。因此将MNK抑制剂与一些临床上标准的治疗药物联合使用是一种有效的治疗策略(Adesso L.et.al.Oncogene,2012,32(23),2848-2857；Lim S.et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2013,110(20),2298-2307；AltmanJ.K.et.al.Mol.Pharmacol.2010,78(4),778-784)。
因此本发明提供新的MNK抑制剂化合物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种如式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0001319436680000021
其中：
R1、R2、R3各自独立选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-C(O)R4、羧基、烯基、炔基、-OR4、-NR5R6,-OC(O)NR5R6、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-NR5C(O)R4、-NR4C(O)NR5R6、-S(O)mR4、-NR5S(O)mR4、-SR4、-S(O)mNR5R6、-NR4S(O)mNR5R6,其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、-OR7、-OC(O)NR8R9、-C(O)OR7、-C(O)NR8R9、-C(O)R7、-NR8R9、-NR8C(O)R7、-NR7C(O)NR8R9、-S(O)mR7、-NR8S(O)mR7、-SR7、-S(O)mNR8R9、-NR7S(O)mNR8R9的取代基所取代；
其中环Ar各自独立选自取代或未取代的芳基和杂芳基，当Ar被取代时，可被一个或多个取代基取代在任意位置，所述的取代基独立选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-C(O)R4、羧基、烯基、炔基、-OR4、-NR5R6,-NR5C(O)R4、-NR4C(O)NR5R6、-S(O)mR4、-NR5S(O)mR4、-SR4、-S(O)mNR5R6、-NR4S(O)mNR5R6,其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、-OR7、-OC(O)NR8R9、-C(O)OR7、-C(O)NR8R9、-C(O)R7、-NR8R9、-NR8C(O)R7、-NR7C(O)NR8R9、-S(O)mR7、-NR8S(O)mR7、-SR7、-S(O)mNR8R9、-NR7S(O)mNR8R9的取代基所取代。
R1和R2可与其连接的碳原子一起形成5～8元杂环基；
R4、R5、R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、C1-C8烷基、杂烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基或单环芳基、烯基、炔基，其中所述的R5和R6、R8和R9可以形成3-7元的杂环基；且m为1或2。
在本发明的一个实施方案中，一种通式(I)所述的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，其具有下式II结构；
Figure BDA0001319436680000031
其中：
R1、R2、R3、R10、R11、R13、R14、R15各自独立地选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-C(O)R4、羧基、烯基、炔基、-OR4、-NR5R6、-NR5C(O)R4、-NR4C(O)NR5R6、-S(O)mR4、-NR5S(O)mR4、-SR4、-S(O)mNR5R6、-NR4S(O)mNR5R6,其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、-OR7、-OC(O)NR8R9、-C(O)OR7、-C(O)NR8R9、-C(O)R7、-NR8R9、-NR8C(O)R7、-NR7C(O)NR8R9、-S(O)mR7、-NR8S(O)mR7、-SR7、-S(O)mNR8R9、-NR7S(O)mNR8R9的取代基所取代；
R12选自H、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基或单环芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、-OR7、-OC(O)NR8R9、-C(O)OR7、-C(O)NR8R9、-C(O)R7、-NR8R9、-NR8C(O)R7、-NR7C(O)NR8R9、-S(O)mR7、-NR8S(O)mR7、-SR7、-S(O)mNR8R9、-NR7S(O)mNR8R9的取代基所取代；
R16、R17各自独立地选自H、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基或单环芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、-OR7、-OC(O)NR8R9、-C(O)OR7、-C(O)NR8R9、-C(O)R7、-NR8R9、-NR8C(O)R7、-NR7C(O)NR8R9、-S(O)mR7、-NR8S(O)mR7、-SR7、-S(O)mNR8R9、-NR7S(O)mNR8R9的取代基所取代。
R1和R2可与其连接的原子一起形成5～8元杂环基；
R10和R11可与其连接的原子一起形成5～8元杂环基；
R16和R17可与其连接的原子一起形成3～8元杂环基；
R4-9定义如上所述；且m为1或2。
在本发明的另一个实施方案中，一种通式(I)或(II)所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，其具有下式(III)a-e结构：
Figure BDA0001319436680000051
在式(III)a-e中：
R2选自氢、氟、氰基、C1-C3烷基、C5-C6环基、5-6元杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、羧基、-OR4、-NR5R6,其中所述环基、杂环基任选被一个选自-C(O)OR7、-C(O)NR8R9的取代基所取代；R12选自H、烷氧羰基、烷基羰基，环烷基羰基；R18选自H、C1-C5烷基、C3-C6环烷基、芳基、5-6元杂芳基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基；R19选自C1-C4烷基；R20选自C1-C5烷基、C1-C5氧杂烷基、-CH2CH2NR5R6、苯基；
R2和R18可与其连接的碳原子和氮原子一起形成含有氮原子的5～8元环；
R4、R5、R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、C1-C5烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基或单环芳基、烯基、炔基，其中所述的R5和R6、R8和R9可与它们所连接的N原子一起形成3-7元的杂环基。
在本发明的另一个实施方案中，一种通式(I)或(II)所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，其具有下式(III)f-g结构：
Figure BDA0001319436680000052
在式IIIf-g中：
R2选自氢、氟、氰基、C1-C3烷基、C5-C6环基、5-6元杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、羧基、-OR4、-NR5R6,其中所述环基、杂环基任选被一个选自-C(O)OR7、-C(O)NR8R9、的取代基所取代；R12选自C1-C6烷基、C5-C6环基。R16、R17各自独立的选自C1-C5烷基；R18选自H、C1-C5烷基、C3-C6环烷基、芳基、5-6元杂芳基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基；R19选自C1-C4烷基；R20选自C1-C5烷基、C1-C5氧杂烷基、-CH2CH2NR5R6；
R2和R18可与其连接的原子一起形成5～8元杂环基；
R16和R17可与其连接的原子一起形成含有杂原子的4～6元环；
R4、R5、R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、C1-C5烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基或单环芳基、烯基、炔基，其中所述的R5和R6、R8和R9可与它们所连接的N原子一起形成3-7元的杂环基。
本发明的典型化合物包括，但并不限于：
Figure BDA0001319436680000061
Figure BDA0001319436680000071
Figure BDA0001319436680000081
Figure BDA0001319436680000091
Figure BDA0001319436680000101
Figure BDA0001319436680000111
Figure BDA0001319436680000121
Figure BDA0001319436680000131
Figure BDA0001319436680000141
Figure BDA0001319436680000151
Figure BDA0001319436680000161
Figure BDA0001319436680000171
Figure BDA0001319436680000181
Figure BDA0001319436680000191
Figure BDA0001319436680000201
Figure BDA0001319436680000211
以及它们的异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐。
本发明进一步涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明化合物或其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂。
本发明另一方面涉及通式(I)所示的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐、或所述的药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗或者预防MNK介导的疾病，例如肿瘤、尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
本发明的另一方面涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，或所述药物组合物在制备治疗和/或预防肿瘤和炎症等疾病的药物中的用途。
根据本发明，所述药物可以是任何药物剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、溶液剂、冻干制剂、注射剂。
本发明的药物制剂可以以每剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位形式给药。这种单位可根据治疗的病症、给药方法和患者的年龄、体重和状况包含例如0.5毫克至1克，优选1毫克至700毫克，特别优选5毫克至300毫克的本发明的化合物，或药物制剂可以以每剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位形式给药。优选剂量单位制剂是包含如上指示的日剂量或分剂量或其相应分数的活性成分的那些。此外，可以使用制药领域中公知的方法制备这种类型的药物制剂。
本发明药物制剂可适于通过任何所需的合适方法给药，例如通过经口(包括口腔或舌下)、直肠、经鼻、局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道或肠道外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)方法给药。可以使用制药领域中已知的所有方法通过例如将活性成分与一种或多种赋形剂或一种或多种辅助剂合并来制备这样的制剂。
本发明还涉及一种治疗或者预防MNK介导的疾病(例如肿瘤、尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤)的方法，其包括给予有需要的患者治疗有效量的所述的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐、或所述的药物组合物。
本发明的另一方面涉及通式(I)所示的化合物、或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐、或药物组合物，其用于治疗或者预防MNK介导的疾病，例如肿瘤、尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
本发明的另一方面涉及作为治疗和/或预防肿瘤等疾病的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐。
制备流程
本发明还提供制备所述化合物的方法。
流程1
Figure BDA0001319436680000231
其中R1-R2、R12、R18-19定义同前。
第一步：
X1，X2为Cl,Br,I等卤素或OTf，OTs，OMs等离去基团，Buchwald反应在1,4-二氧六环，N,N-二甲基乙酰胺等中进行，同时作为碱加入碳酸铯或叔丁醇钠等，使用的催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯或醋酸钯；使用的配体为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽或2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯等；反应在110～150℃微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(II)；
第二步：
X2为Cl,Br,I等卤素或OTf，OTs，OMs等离去基团，PG为叔丁氧酰基,三甲基甲硅烷基乙氧基甲基等胺基保护基,Y为CH或者N,Y与PG在反应前后不变，Buchwald反应在1,4-二氧六环，N,N-二甲基乙酰胺等中进行，同时加入碳酸铯或叔丁醇钠等作碱，使用的催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯或醋酸钯；使用的配体为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽或2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯等；反应在110～150℃微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(III)；
第三步：
Y在反应前后不变，脱保护使用三氟乙酸二氯甲烷溶液，盐酸二氧六环溶液等，强酸性条件下在室温或加热反应，PG保护基脱去变为质子(IV)；
第四步：
使用相应的酰氯或卤代物，Y在反应前后不发生变化，使用四氢呋喃，N,N-二甲基甲酰胺做溶剂，钠氢，碳酸铯等作碱，室温或加热条件下反应，反应得到化合物(V)。
流程2
Figure BDA0001319436680000241
其中R1-R2、R12、R18-19定义同前。
第一步：
X1为Cl,Br,I或OTf，OTs，OMs等离去基团，Buchwald反应在1,4-二氧六环，N,N-二甲基乙酰胺等中进行，同时加入碳酸铯或叔丁醇钠等作碱，使用的催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯或醋酸钯；使用的配体为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽或2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯等；反应在110～150℃微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(VII)；
第二步：
X2为Cl,Br,I或OTf，OTs，OMs等离去基团，PG为叔丁氧酰基,三甲基甲硅烷基乙氧基甲基等,Y为CH或者N,Y与PG在反应前后不变，Buchwald反应在1,4-二氧六环，N,N-二甲基乙酰胺等中进行，同时加入碳酸铯或叔丁醇钠等作碱，使用的催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯或醋酸钯；使用的配体为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽或2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯等；反应在110～150℃微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(III)；
第三步：
Y在反应前后不变，脱保护使用三氟乙酸二氯甲烷溶液，盐酸二氧六环溶液等，强酸性条件下在室温或加热反应，PG保护基脱去变为质子(IV)；
第四步：
使用相应的酰氯或卤代物，Y在反应前后不发生变化，使用四氢呋喃，N,N-二甲基甲酰胺做溶剂，钠氢，碳酸铯等作碱，室温或加热条件下反应，反应得到化合物(V)。
流程3
Figure BDA0001319436680000251
其中R12、R19-R20定义同前。
第一步：
X1为Cl,Br,I或OTf，OTs，OMs等离去基团，L为O或NH，反应在N,N-二甲基甲酰胺等中进行，同时加入氢氧化锂等作碱，反应在60℃加热条件下进行；反应得到化合物(IX)；
第二步：
X2为Cl,Br,I或OTf，OTs，OMs等离去基团，L为O或NH，PG为叔丁氧酰基,三甲基甲硅烷基乙氧基甲基等,L,PG在反应前后不变，Buchwald反应在1,4-二氧六环，N,N-二甲基乙酰胺等中进行，同时加入碳酸铯或叔丁醇钠等作碱，使用的催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯或醋酸钯；使用的配体为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽或2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯等；反应在110～150℃微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(X)；
第三步：
L为O或NH，脱保护使用三氟乙酸二氯甲烷溶液，盐酸二氧六环溶液等，L在反应前后不发生变化，强酸性条件下在室温或加热反应，PG保护基脱去变为质子(XI)；
第四步：
L为O或NH，使用相应的酰氯或卤代物，L在反应前后不发生变化，使用四氢呋喃，N,N-二甲基甲酰胺做溶剂，钠氢，碳酸铯等作为碱，室温或加热条件下反应，反应得到化合物(XII)。
流程4
Figure BDA0001319436680000261
其中R2、R12、R16-R18定义同前。
第一步：
X1为Cl,Br,I等卤素或OTf，OTs，OMs等离去基团，Buchwald反应在1,4-二氧六环，N,N-二甲基乙酰胺等中进行，同时加入碳酸铯或叔丁醇钠等作碱，使用的催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯或醋酸钯；使用的配体为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽或2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯等；反应在80～110℃微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(XIII)；
X1为Cl时，取代反应在盐酸1,4-二氧六环溶液中封管中100℃加热；反应得到化合物(XIII)。
流程5
Figure BDA0001319436680000262
其中R2、R12、R16-R18定义同前。
第一步：
X1为Cl,Br,I或OTf，OTs，OMs等离去基团，Buchwald反应在1,4-二氧六环，N,N-二甲基乙酰胺等中进行，同时加入碳酸铯或叔丁醇钠等作碱，使用的催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯或醋酸钯；使用的配体为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽或2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯等；反应在80～110℃微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(XIII)。
流程6
Figure BDA0001319436680000271
其中R12、R16-R17、R20定义同前。
第一步：
X1为Cl,Br,I或OTf，OTs，OMs等离去基团，L为O或NH，Buchwald反应在1,4-二氧六环，N,N-二甲基乙酰胺等中进行，同时加入碳酸铯或叔丁醇钠等作碱，使用的催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯或醋酸钯；使用的配体为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽或2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯等；反应在110～150℃微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(XIV)。
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
在本文中使用的表示方式“Cx-Cy”表示碳原子数的范围，其中x和y均为整数，例如C3-C8环基表示具有3-8个碳原子的环基，-C0-C2烷基表示具有0-2个碳原子的烷基，其中-C0烷基是指化学单键。
“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团，例如可以是1至18个碳原子、1至12个碳原子、1至8个碳原子、1至6个碳原子或1至4个碳原子的直链和支链基团。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、及其各种支链异构体等。烷基可以是任选取代的或未取代的。
“环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃基，其包括3至12个环原子，例如可以是3至12个、3至10个、3至8个或3至6个环原子，或者可以是3、4、5、6元环。单环环基的非限制性实例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。环基可以是任选取代的或未取代的。
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃基，其包括3至20个环原子，例如可以是3至16个、3至12个、3至10个、3至8个或3至6个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包括3至12个环原子，其中1～4个是杂原子，更优选杂环基环包含3至10个环原子、更优选包括3至8个环原子，最优选5元环或6元环，其中1～4个是杂原子，更优选1～3个是杂原子，最优选1～2个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
“螺杂环基”指5至20元，单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共扼的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺环基和双螺环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环基。螺环基的非限制性实例包含
Figure BDA0001319436680000281
“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共扼的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包含
Figure BDA0001319436680000282
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实例包含:
Figure BDA0001319436680000283
等。杂环基可以是任选取代的或未取代的。
“芳基”指6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共扼的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基，最优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实例包含:
Figure BDA0001319436680000291
芳基可以是取代的或未取代的。
“杂芳基”指包含1至4个杂原子，5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。优选为5至10元。更优选杂芳基是5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基等，所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实例包含:
Figure BDA0001319436680000292
杂芳基可以是任选取代的或未取代的。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氰基”指-CN。
“烯基”指含有至少1个碳碳双键的直链、支链烃基，其可包括2至20个碳原子，例如可以是2至18个碳原子、2至12个碳原子、2至8个碳原子、2至6个碳原子或2至4个碳原子的直链和支链基团。其中可以存在1-3个碳碳双键，优选存在1个碳碳双键。术语“C2-4烯基”是指具有2-4个碳原子的烯基。包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基。所述的烯基可以被取代。
“炔基”是指含有至少1个碳碳三键的直链、支链烃基，其可包括2至20个碳原子，例如可以是2至18个碳原子、2至12个碳原子、2至8个碳原子、2至6个碳原子或2至4个碳原子的直链和支链基团。其中可以存在1-3个碳碳三键，优选存在1个碳碳三键。术语“C2-4炔基”是指具有2-4个碳原子的炔基。非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基和3-甲基丁炔基。
“杂烷基”是指稳定的直链或者支链烷基，或者环基，或者它们的组合，由指定数目的碳原子和至少一个选自氧，氮，硫的杂原子组成，其中氮，硫原子可以选择任意的氧化，氮原子可以选择任意的季胺化，杂原子氧，氮，硫可置于杂烷基的任意内部位置，也可以置于烷基与分子余下部分相连的位置，两个或两个以上的杂原子可以是独立的，也可以是连续的。
“烷氧基”指通过氧桥连接的所述烷基，包含烷基氧基、环烷基氧基和杂环烷基氧基。由此，“烷氧基”包含上述烷基、杂环烷基和环烷基的定义。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
所述取代基包括但不限于所述烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤素、羟基、氨基、氰基和巯基。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明所述“室温”是指15-30℃。
本发明所述，“稳定的同位素衍生物”包括：式I中任意的氢原子被1-5个氘原子取代得到的同位素取代衍生物、式I中任意的碳原子被1-3个碳14原子取代得到的同位素取代衍生物或式I中任意的氧原子被1-3个氧18原子取代得到的同位素取代衍生物。
本发明所述的“药学上可接受的盐”在Berge，et al.，“Pharmaceuticallyacceptable salts”，J.Pharm.Sci.,66,1-19(1977)中有讨论，并对药物化学家来说是显而易见，所述的盐是基本上无毒性的，并能提供所需的药代动力学性质、适口性、吸收、分布、代谢或排泄等。
本发明药学上可接受的盐可通过一般的化学方法合成。
一般情况下，盐的制备可以通过游离碱或酸与等化学当量或者过量酸(无机酸或有机酸)或碱在合适的溶剂或溶剂组合物中反应制得。
本发明所述的“前药”是指化合物在体内代谢后转换成原始活性化合物。代表性地讲，前药为非活性物质，或者比活性母体化合物活性小，但可以提供方便的操作、给药或者改善代谢特性。
本发明所述“异构体”是指本发明的式(I)化合物可以有不对称中心和外消旋体、外消旋混合物和单个非对映异构体，所有这些异构体，包括立体异构体、几何异构体均包含在本发明中。所述几何异构体包括顺反异构体。
本发明包括所述化合物或其盐的任何多晶型物以及任何水合物或其它溶剂合物。
实施例
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
本发明所有化合物的结构可通过核磁共振(1H NMR)和/或质谱检测(MS)鉴定。
1H NMR化学位移(δ)以PPM记录(单位：10-6PPM)。NMR通过Bruker AVANCE-400光谱仪进行。合适的溶剂是氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，氘代二甲亚砜(DMSO-d6)，四甲基硅烷作为内标(TMS)。
低分辨率质谱(MS)由Agilent 1260HPLC/6120质谱仪测定，使用Agilent ZORBAXXDB-C18，4.6×50mm，3.5μm，梯度洗脱条件一：0:95％溶剂A1和5％溶剂B1,1-2:5％溶剂A1和95％溶剂B1；2.01-2.50:95％溶剂A1和5％溶剂B1。百分数为某一溶剂占总溶剂体积的体积百分数。溶剂A1：0.01％甲酸水溶液；溶剂B1：0.01％甲酸的乙腈溶液；百分数为溶质占溶液的体积百分数。
薄层硅胶板是烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板。柱层析一般使用烟台黄海100-200或200-300目硅胶作为载体。
制备液相色谱(prep-HPLC)使用Waters SQD2质谱导向高压液相色谱分离仪,XBridge-C18；30X150mm制备柱，5um；方法一：乙腈-水(0.2％甲酸),流速25mL/分钟；方法二：乙腈-水(0.8％碳酸氢铵),流速25mL/分钟；
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)、上海毕得医药、上海阿拉丁化学、上海迈瑞尔化学、百灵威化学、安耐及化学等公司。
实施例中如无特殊说明，反应所用溶剂均为无水溶剂，其中无水四氢呋喃使用市售四氢呋喃，以钠块为除水剂，以二苯甲酮作为指示剂，氩气保护下回流至溶液呈蓝紫色，蒸馏收集，氩气保护下室温储存，其他无水溶剂购自安耐及化学及百灵威化学，所有无水溶剂的转移和使用如无特殊说明，均需在氩气保护下进行。
实施例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或氩气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温，温度范围是15℃-30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有A：二氯甲烷和甲醇体系；B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂的体系包括A：二氯甲烷和甲醇体系；B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等进行调节。
实施例1
1-叔丁氧酰基-5-(6-乙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000321
第一步
1-叔丁基氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑
将化合物5-溴-6-甲氧基-1H-吲唑1a(4g，17.6mmol)、三乙胺(5.3g，52.8mmol)、二碳酸二叔丁酯(7.7g，35.2mmol)、4-二甲氨基吡啶(7.7g，35.2mmol)和四氢呋喃(40mL)混合，，氩气保护下室温反应1小时。此混合物减压脱溶得粗品，色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4:1)得到目标产物1-叔丁基氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑1b(2.8g，8.59mmol，黄色固体)。产率：49％。
MS m/z(ESI)：327&329[M+1]；
第二步
1-叔丁氧酰基-5-(6-乙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑1b(24.0mg，0.08mmol)、N-(6-氨基嘧啶-4-基)乙酰胺(12.0mg，0.08mmol)和1，4-二氧六环(2.0mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(8.0mg，0.008mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(10.0mg，0.016mmol)和碳酸铯(52.0mg，0.16mmol)，氩气保护下微波110℃条件下反应1h。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20:1)得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-(6-乙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑1(10.0mg，0.025mmol，黄色固体)。产率：31％。
MS m/z(ESI)：399[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(s,1H),8.42(s,1H),8.39(s,1H),8.03(s,1H),7.69(s,1H),7.55(s,1H),7.38(s,1H),3.98(s,3H),2.15(s,3H),1.66(s,9H)。
实施例2
5-(6-乙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000331
将化合物1-叔丁氧酰基-5-(6-乙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑2a(10mg，0.025mmol)和二氯甲烷(2.0mL)、三氟乙酸(1.0mL)混合，室温搅拌3小时。此混合物用5mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,5mL二氯甲烷稀释，分出有机相，水相用二氯甲烷(10mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(20mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)得到目标产物5-(6-乙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑2(5mg，0.017mmol，黄色固体)。产率：68％。
MS m/z(ESI)：299[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.83(s,1H),10.34(s,1H),8.73(s,1H),8.26(s,1H),7.94(s,1H),7.93(s,1H),7.35(s,1H),7.03(s,1H),3.85(s,3H),3.17(s,3H)。
实施例3
1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000341
合成步骤参照实施例1。用N-(6-氨基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺替代N-(6-氨基嘧啶-4-基)乙酰胺可以得目标产物1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑3(1.0g，2.4mmol，黄色固体)。产率：80％。
MS m/z(ESI)：425[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),8.70(s,1H),8.51(s,1H),8.11(s,1H),7.75(s,1H),7.62(s,1H),7.46(s,1H),4.03(s,3H)1.73(s,9H),1.60-1.52(m,1H),0.95-0.93(m,4H)。
实施例4
5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000342
合成步骤参照实施例2。用1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑替代1-叔丁氧酰基-5-(6-乙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑可以得目标产物5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑4(5.0mg，0.017mmol，黄色固体)。产率：68％。
MS m/z(ESI)：325[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.83(s,1H),10.34(s,1H),8.73(s,1H),8.26(s,1H),7.94(s,1H),7.93(s,1H),7.35(s,1H),7.03(s,1H),3.85(s,3H),1.98-1.96(m,1H),0.78-0.76(m,4H)。
实施例5
5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基1-甲基吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000343
第一步
5-溴-6-甲氧基-1-甲基吲唑
将化合物5-溴-6-甲氧基-1H-吲唑5a(113.0mg，0.5mmol)碳酸铯(326.0mg，1.0mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)混合，室温下加入碘甲烷(84.0mg，0.6mmol)，室温条件下反应15h。混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩物用制备硅胶板纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)得到目标产物5-溴-6-甲氧基-1-甲基吲唑5b(15mg，0.062mmol，黄色固体)。产率：12％。
MS m/z(ESI)：241&243[M+1]；
第二步
5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧-1-甲基吲唑
将化合物5-溴-6-甲氧基-1-甲基-1H-吲唑5b(15.0mg，0.062mmol)、N-(6-氨基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺(12.0mg，0.08mmol)和1，4-二氧六环(2mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(5.0mg，0.005mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(6.0mg，0.01mmol)和碳酸铯(98.0mg，0.3mmol)，氩气保护下微波110℃条件下反应1小时，冷却室温。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备液相纯化(水(0.2％甲酸)，10％～40％乙腈，15分钟)得到目标产物5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基1-甲基吲唑甲酸盐5(6.0mg，0.018mmol，黄色固体)。产率：29％。
MS m/z(ESI)：339[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),8.71(s,1H),8.29(s,1H),8.27(s,1H),7.91(s,1H),7.90(s,1H),7.30(s,1H),7.21(s,1H),4.02(s,3H),3.88(s,3H),2.01-1.92(m,1H),0.80-0.77(m,4H)。
实施例6
5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-乙氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000361
第一步
5-溴-1H-吲唑-6-酚
将化合物5-溴-6-甲氧基-1H-吲唑6a(450.0mg，2.0mmol)和氢溴酸水溶液(10mL)混合，100℃条件下反应15小时，冷却室温。混合物用20mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩物用制备硅胶板纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)得到目标产物5-溴-1H-吲唑-6-酚6b(200.0mg，1.2mmol，黄色固体)。产率：61％。
MS m/z(ESI)：213&215[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.70(s,1H),10.35(s,1H),7.91(s,1H),7.87(s,1H),6.99(s,1H)。
第二步
5-溴-6-乙氧基-1H-吲唑
将化合物5-溴-1H-吲唑-6-酚6b(42.0mg，0.2mmol),碳酸钾(138.0mg，1.0mmol)和丙酮(5.0mL)混合，室温下加入碘乙烷(50.0mg，0.3mmol)，室温条件下反应3小时。混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩物用制备硅胶板纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)得到目标产物5-溴-6-乙氧基-1H-吲唑6c(10.0mg，0.041mmol，白色固体)。产率：21％。
MS m/z(ESI)：241&243[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.14(s,1H),7.86(s,1H),7.85(s,1H)，6.81(s,1H),4.08-4.02(m,2H)，1.46(t,J＝7.6Hz,3H)。
第三步
1-叔丁氧酰基-5-溴-6-乙氧基吲唑
将化合物5-溴-6-乙氧基-1H-吲唑6c(10.0mg，0.04mmol)，三乙胺(10.0mg，0.1mmol)和四氢呋喃(2.0mL)混合，室温下加入二碳酸二叔丁酯(8.0mg，0.04mmol)，室温条件下反应3小时。混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩物用制备硅胶板纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-溴-6-乙氧基吲唑6d(10.0mg，0.03mmol，白色固体)。产率：75％。
MS m/z(ESI)：341&343[M+1]；
第四步
1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-乙氧基吲唑
将化合物1-叔丁氧酰基-5-溴-6-乙氧基吲唑6d(10.0mg，0.03mmol)、N-(6-氨基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺(5.0mg，0.03mmol)和1，4-二氧六环(1.0mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(3.0mg，0.003mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(6.0mg，0.006mmol)和碳酸铯(32.0mg，0.1mmol)，氩气保护下微波110℃条件下反应1小时，冷却室温。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20:1)得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-乙氧基吲唑6e(4.5mg，0.01mmol，白色固体)。产率：33％。
MS m/z(ESI)：439[M+1]；
第五步
5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-乙氧基-1H-吲唑
将化合物1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-乙氧基吲唑6e(4.5mg，0.01mmol)和二氯甲烷(1.0mL)、三氟乙酸(1.0mL)混合，室温搅拌3小时。此混合物用5mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,5mL二氯甲烷稀释，分出有机相，水相用二氯甲烷(10mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(20mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化得到目标产物5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-乙氧基-1H-吲唑6(2.0mg，0.06mmol，白色固体)。产率：60％。
MS m/z(ESI)：339[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),8.62(s,1H),8.27(s,1H),8.23(s,1H),7.93(s,1H),7.88(s,1H),7.30(s,1H),7.01(s,1H),4.12-4.07(m,2H),2.01-1.92(m,1H),1.32-1.28(d，J＝4.8Hz，3H),0.80-0.78(m,4H)。
实施例7
5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-异丙氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000381
参照实施实例6，将碘乙烷换为2-溴丙烷可以得到目标化合物5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-异丙氧基-1H-吲唑甲酸盐(1.3mg，0.004mmol，白色固体)。产率：40％。制备液相条件(水(0.2％甲酸)，15％～35％乙腈，15分钟)
MS m/z(ESI)：352[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.77(s,1H),10.65(s,1H),8.54(s,1H),8.28(s,1H),8.24(s,1H),7.93(s,1H),7.89(s,1H),7.30(s,1H),7.02(s,1H),4.68-4.62(m,1H),1.99-1.96(m,1H),1.25(d，J＝5.6Hz，6H),0.77-0.75(m,4H)。
实施例8
1-环己酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000382
将化合物5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑8a(10.0mg，0.03mmol)、钠氢(矿物油分散60％，3.0mg，0.1mmol)和四氢呋喃(2.0mL)混合，室温下加入氯化环己羰基(6.0mg，0.03mmol)，室温条件下反应10分钟。混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩物用制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)得到目标产物1-环己酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑8(2.0mg，0.005mmol，黄色固体)。产率：15％。
MS m/z(ESI)：435[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),9.16(s,1H),8.54(s,1H),8.12(s,1H),7.97(s,1H),7.06(s,1H),6.65(s,1H),3.88(s,3H),2.84-2.81(m,1H),2.03-2.00(m,2H),1.89-1.86(m,2H),1.80-1.77(m,3H),1.73-1.71(m，1H),1.46-1.42(m，2H),0.97-0.94(m，4H),0.88-0.84(m,1H)。
实施例9
5-(6-氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000391
将化合物1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑9a(50.0mg，0.15mmol)、4，6-二氨基嘧啶(22.0mg，0.2mmol)和1，4-二氧六环(2.0mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(14.0mg，0.015mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(17.0mg，0.03mmol)和碳酸铯(98.0mg，0.3mmol)，微波125℃条件下反应1小时，冷却室温。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)得到目标产物5-(6-氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑9(2.0mg，0.01mmol，白色固体)。产率：7％。
MS m/z(ESI)：257[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),7.96(s,1H),7.92(s,1H),7.87(s,1H),7.84(s,1H),7.02(s,1H),6.17(s,2H),5.58(s,1H),3.86(s,3H)。
实施例10
5-(6-苯甲酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000392
合成步骤同实施例1。用N-(6-氨基嘧啶-4-基)苯甲酰胺替代N-(6-氨基嘧啶-4-基)乙酰胺得到目标产物5-(6-苯甲酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑。产率：42％。
MS m/z(ESI)：361[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),10.69(s，1H),8.86(s,1H),8.35(s,1H),8.11-7.89(m,4H),7.70-7.35(m,4H),7.05(s,1H),3.87(s,3H)。
实施例11
5-(6-(2-吡啶)甲酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000401
第一步
5-溴-6-甲氧基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑
将化合物5-溴-6-甲氧基-1H-吲唑11a(320mg，1.4mmol)、N,N-二异丙基乙胺(903mg，7mmol)、2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(500mg，3.0mmol)和二氯甲烷(10mL)混合，，氩气保护下室温反应3小时。此混合物减压脱溶得粗品，色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4:1)得到目标产物5-溴-6-甲氧基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑11b(320mg，0.9mmol，黄色固体)。产率：64％。
MS m/z(ESI)：357&359[M+1]；
第二步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(2-吡啶)甲酰氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将5-溴-6-甲氧基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑11b(18.0mg，0.05mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(38.0mg，0.10mmol)和N,N-二异丙基乙胺(13.0mg，0.10mmol)溶于四氢呋喃(1.0mL)中，室温搅拌15分钟后，加入2-吡啶甲酸(12.0mg，0.10mmol)，于室温下搅拌反应12小时。反应液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，30％～70％乙腈，15分钟)得1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(2-吡啶)甲酰氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑11c(6.0mg,0.012mmol,白色固体)，产率：24％。
MS m/z(ESI)：492[M+1]；
第三步
5-(6-(2-吡啶)甲酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(2-吡啶)甲酰氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑11c(6.0mg,0.012mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)中，加入三氟乙酸(1.0mL),于室温下搅拌反应1.5小时。反应液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，30％～70％乙腈，15分钟)得5-(6-(2-吡啶)甲酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑11(3.0mg,0.008mmol,白色固体)，产率：67％。
MS m/z(ESI)：362[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.93(brs,1H),10.19(s,1H),9.03(s,1H),8.76(s,1H),8.35(s,1H),8.31(s,1H),8.18-8.09(m,2H),7.97(s,1H),7.76-7.72(m,1H),7.52(s,1H),7.07(s,1H),3.87(s,3H).
实施例12
5-(6-特戊酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000411
第一步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-特戊酰氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑12a(100.0mg，0.26mmol)和三乙胺(55.0mg，0.52mmol)溶于无水二氯甲烷(4.0mL)中，加入2，2-二甲基乙酰氯(50.0mg，0.39mmol)，于室温下搅拌反应30分钟。反应液以饱和碳酸氢钠溶液(0.5mL)淬灭，反应液减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)得1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-特戊酰氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑12b(100.0mg，0.21mmol，黄色固体)，产率81％。
MS m/z(ESI)：471[M+1]；
第二步
5-(6-特戊酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-特戊酰氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑12b(50.0mg，0.10mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)中，加入三氟乙酸(1.0mL),于室温下搅拌反应30分钟。反应液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱(水(0.2％甲酸)，30％～70％乙腈，15分钟)得5-(6-特戊酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑12(20.0mg,0.06mmol,白色固体)，产率：60％。
MS m/z(ESI)：341[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52-8.43(m,3H),8.21(brs,1H),8.01(s,1H),7.68(s,1H),7.44(s,1H),6.92(s,1H),3.95(s,3H),1.29(s,9H).
实施例13
1-异丁酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000421
第一步
5-溴-6-甲氧基-1-异丁酰基吲唑
将化合物5-溴-6-甲氧基-1H-吲唑13a(113.0mg，0.5mmol)、三乙胺(101.0mg，1.0mmol)和二氯甲烷(10mL)混合，室温下加入异丁酰氯(84.0mg，0.6mmol)，室温条件下反应1小时。混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩物用制备硅胶板纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)得到目标产物5-溴-6-甲氧基-1-异丁酰基吲唑13b(41mg，0.14mmol，黄色固体)。产率：28％
MS m/z(ESI)：297&299[M+1]；
第二步
1-异丁酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物5-溴-6-甲氧基-1-异丁酰基吲唑13b(15.0mg，0.050mmol)、N-(6-氨基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺(11.0mg，0.060mmol)和1，4-二氧六环(2mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(5.0mg，0.005mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(6.0mg，0.010mmol)和碳酸铯(49.0mg，0.150mmol)，氩气保护微波110℃条件下反应1小时，冷却室温。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20:1)得到目标产物1-异丁酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑13(7.0mg，0.018mmol，黄色固体)。产率：36％。
MS m/z(ESI)：395[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.69(s,1H),8.50(s,1H),8.08(s,1H),8.01(s,1H),7.63(s,1H),7.46(s,1H),4.01(s,3H),4.01-3.94(m,1H),2.06-1.98(m,1H),1.36(d,J＝7.2Hz,6H),1.16-1.08(m,2H),0.99-0.89(m,2H)。
实施例14
1-环丙酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000431
合成步骤同实施例13。用环丙甲酰氯替代异丁酰氯得到目标产物1-环丙酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑14(3.0mg，0.008mmol，白色固体)。产率：27％。
MS m/z(ESI)：393[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),8.51(s,1H),8.17(s,1H),8.13(s,1H),7.97(s,1H),7.61(s,1H),7.43(s,1H),4.01(s,3H),1.33-1.30(m,2H),1.16-1.10(m,4H),0.97-0.85(m,4H).
实施例15
2-环丙甲酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000432
将化合物5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑15a(50.0mg，0.15mmol)，N,N-二异丙基乙胺(60.0mg，0.45mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(4.0mL)混合，室温下加入环丙甲酰氯(48.0mg，0.45mmol)，室温条件下反应12小时混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)稀释淬灭,用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备液相纯化(水(0.2％甲酸)，30％～70％乙腈，15分钟)得到目标产物2-环丙甲酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑15(15.0mg，0.04mmol，白色固体)。产率：25％
MS m/z(ESI)：393[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.82(s,1H),8.90(s,1H),8.80(s,1H),8.43(s,1H),8.33(s,1H),7.70(s,1H),7.06(s,1H),3.93(s,3H),3.30-3.28(m,1H),2.03-2.02(m,1H),1.24-1.21(m,4H),0.86-0.84(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3)δ173.89,162.40,157.91,157.08,154.83,149.33,129.57,121.81,118.45,110.82,95.20,94.32,56.45,14.76,12.73,11.94,8.53.
实施例16
1-乙酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000441
参照实施实例13，将异丁酰氯换为乙酸酐可以得到目标产物1-乙酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑16(6.0mg，0.016mmol，黄色固体)。产率：32％。
MS m/z(ESI)：367[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,1H),8.50(s,1H),8.17(s,1H),8.08(s,1H),7.96(s,1H),7.61(s,1H),7.42(s,1H),4.03(s,3H),2.79(s,3H),2.06-1.97(m,1H),1.15-1.09(m,2H),0.99-0.92(m,2H)。
实施例17
1-甲氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000442
参照实施实例13，将异丁酰氯换为氯甲酸甲酯可以得到目标产物1-甲氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑17(2.0mg，0.005mmol，黄色固体)。产率：10％。
MS m/z(ESI)：383[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),8.50(s,1H),8.14(s,1H),8.12(s,1H),7.77(s,1H),7.61(s,1H),7.40(s,1H),4.13(s,3H),4.03(s,3H),2.06-1.99(m,1H),1.16-1.08(m,2H),0.99-0.91(m,2H)。
实施例18
1-乙氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000451
参照实施实例13，将异丁酰氯换为氯甲酸乙酯可以得到目标产物1-乙氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑18(5.0mg，0.013mmol，黄色固体)。产率：26％。
MS m/z(ESI)：397[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),8.50(s,1H),8.16(s,1H),8.13(s,1H),7.78(s,1H),7.61(s,1H),7.40(s,1H),4.83(q,J＝7.2HZ,2H),4.03(s,3H),2.06-1.99(m,1H),1.54(t，J＝7.2HZ,3H)，1.16-1.08(m,2H),0.99-0.91(m,2H)。
实施例19
N-(6-((6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)异丁酰胺
Figure BDA0001319436680000452
第一步
N-(6-氯嘧啶-4-基)异丁酰胺
将化合物4，6-而氨基嘧啶19a(550mg，5.0mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，室温下加入)异丁酰氯(1.07g，10.0mmol)，碳酸钾(2.07g，15.0mmol)，室温下反应过夜。减压得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝1:0-10:1)得到目标产物N-(6-氨基嘧啶-4-基)异丁酰胺19b(80.6mg，0.4mmol，白色固体)，产率：9％。
MS m/z(ESI)：181[M+1]；
第二步
N-(6-((6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)异丁酰胺
将化合物N-(6-氨基嘧啶-4-基)异丁酰胺19b(3.6mg，0.02mmol)，5-溴-6-甲氧基-1H-吲唑(6mg，0.02mmol)，碳酸铯(20mg，0.06mmol)溶于1，4-二氧六环(1mL)中，氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(2.2mg，0.002mmol)和2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-异丙基-1,1'-联苯(2.2mg,0.004mmol),于110℃油浴反应一小时。反应液冷却至室温，以甲醇(5.0mL)稀释，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化得N-(6-((6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-4-基)环丙甲酰胺19(2.0mg，0.006mmol，白色固体)，产率：30％。
MS m/z(ESI)：327[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.87(s,1H),10.32(s,1H),8.73(s,1H),8.26(s,1H),7.95-7.91(m,2H),7.34(s,1H),7.03(s,1H),3.83(s,3H),2.05-1.90(m,1H),1.03(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例20
5-(6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000461
第一步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物4,6-二氨基嘧啶20a(11.0mg，0.1mmol)、5-溴-6-甲氧基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(36.0mg，0.05mmol)和1，4-二氧六环(2.0mL)混合，室温氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg,0.01mmol)、碳酸铯(65.0mg,0.2mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg,0.02mmol),120℃下搅拌16小时，冷却室温。此混合物用10mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备板(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑20b(22.0mg，0.057mmol，黄色固体)。产率：57％。
MS m/z(ESI)：387[M+1]；；
第二步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑20b(11.0mg，0.03mmol)、2-溴吡啶(5.0mg，0.03mmol)和1，4-二氧六环(1.0mL)混合，室温氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg,0.01mmol)、碳酸铯(65.0mg,0.2mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg,0.02mmol),120℃氩气保护下微波反应1小时，冷却室温。此混合物用10mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备板(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑20c(6.0mg，0.013mmol，黄色油状液体)。产率：46％。
MS m/z(ESI)：464[M+1]；
第三步
5-(6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑20c(6.0mg，0.013mmol)、三氟乙酸(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)混合，室温下搅拌3小时。此混合物用10mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，10％～40％乙腈，15分钟)得到目标产物5-(6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐20(2.0mg，0.006mmol，白色固体)。产率：46％。
MS m/z(ESI)：334[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.83(s,1H),9.65(s,1H),8.42(s,1H),8.20(s,1H,),8.17(d,J＝7.2Hz,1H),8.14(s,1H),7.96(s,1H),7.94(s,1H),7.68-7.64(m,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.17(s,1H),7.04(s,1H),6.90-6.85(m,1H),3.87(s,3H)。
实施实例21
5-(6-((4-氯吡啶-2-基)胺基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000481
第一步
4-(4-氯吡啶-2-基)胺基-6-氨基嘧啶
将化合物4,6-二氨基嘧啶21a(70.0mg，0.6mmol)、4-氯-2-氟吡啶(65.0mg，0.5mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(5.0mL)混合，室温下加入碳酸铯(327.0mg,1mmol),110℃下搅拌3小时。此混合物用20mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板(二氯甲烷/甲醇＝10:1)纯化得到目标产物4-(4-氯吡啶-2-基)胺基-6-氨基嘧啶21b(18.0mg，0.08mmol，黄色固体)。产率：16％。
MS m/z(ESI)：222&224[M+1]；
第二步
1-叔丁氧羰基-5-(6-((4-氯吡啶-2-基)胺基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物4-(4-氯吡啶-2-基)胺基-6-氨基嘧啶21b(18.0mg，0.08mmol)、1-叔丁氧羰基-5-溴-6-甲氧基吲唑(33.0mg，0.1mmol)和1，4-二氧六环(2.0mL)混合，室温氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg,0.01mmol)、碳酸铯(65.0mg,0.2mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(11.0mg,0.02mmol),130℃氩气保护下微波反应1小时。此混合物用10mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶色谱板(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化得到目标产物1-叔丁氧羰基-5-(6-((4-氯吡啶-2-基)胺基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑21c(20.0mg，0.043mmol，黄色固体)。产率：54％。
MS m/z(ESI)：468&470[M+1]；
第三步
5-(6-((4-氯吡啶-2-基)胺基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物1-叔丁氧羰基-5-(6-((4-氯吡啶-2-基)胺基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑21c(20.0mg，0.043mmol)、三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(1mL)混合，室温下搅拌3小时。此混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶色谱板(二氯甲烷/甲醇＝10:1)纯化得到目标产物5-(6-((4-氯吡啶-2-基)胺基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑21(3.0mg，0.008mmol，白色固体)。产率：19％。
MS m/z(ESI)：368&370[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),9.91(s,1H),8.56(s,1H),8.27(s,1H),8.18(d,J＝5.2Hz，1H),7.95(d,J＝5.2Hz，1H),7.93(s,1H),7.83(s,1H),7.04(s,1H),7.02(s,1H),6.98(s,1H),3.87(s,3H)。
实施实例22
5-(6-(嘧啶-4-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000491
第一步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(嘧啶-4-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑22a(15.0mg，0.04mmol)、4-氯嘧啶(6.0mg，0.04mmol)和1，4-二氧六环(1.0mL)混合，室温氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(3.0mg,0.004mmol)、叔丁醇钠(20.0mg,0.2mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(4.0mg,0.008mmol),90℃氩气保护下微波反应1小时。此混合物用10mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶色谱板(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(嘧啶-4-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑22b(10.0mg，0.021mmol，黄色固体)。产率：54％。
MS m/z(ESI)：465[M+1]；
第二步
5-(6-(嘧啶-4-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-(嘧啶-4-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑22b(10.0mg，0.021mmol)、三氟乙酸(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)混合，室温下搅拌3小时。此混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，10％～40％乙腈，15分钟)得到目标产物5-(6-(嘧啶-4-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐22(3.0mg，0.009mmol，白色固体)。产率：46％。
MS m/z(ESI)：335[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),10.15(s,1H),8.67(s,2H),8.44(d,J＝6.0Hz，1H),8.29(s,1H),8.17(s,1H),7.96(s,1H),7.94(s,1H),7.66(d,J＝6.0Hz,1H),7.08(s,1H),7.05(s,1H),3.87(s,3H)。
实施例23
5-(6-((6-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000501
参照实施实例22，用2,4-二氯吡啶替代4-氯嘧啶可以得到目标产物得5-(6-((6-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑23(4.0mg，0.011mmol，白色固体)，产率：79％。
MS m/z(ESI)：368[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),9.91(s,1H),8.53(s,1H),8.24(s,1H),7.94(s,1H),7.82(s,1H),7.70-7.68(m,1H),7.58(d,J＝8.2Hz,1H),7.06(s,1H),6.94(d,J＝7.5Hz,1H),6.91(s,1H),3.86(s,3H)。
实施例24
5-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000511
第一步
N-(5-氯吡啶-2-基)嘧啶-4,6-二胺
将化合物4,6-二氨基嘧啶24a(110.0mg，1.0mmol)、钠氢(矿物油分散60％,120.0mg，5.0mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(10mL)混合，室温下加入2,5-二氯吡啶(150.0mg，1.0mmol)，70℃条件下反应2小时。冷却到室温，混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩物通过快速柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1)，得目标产物N-(5-氯吡啶-2-基)嘧啶-4,6-二胺24b(45.0mg，0.20mmol，白色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：222&224[M+1]；
第二步
1-叔丁氧羰基-5-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物N-(5-氯吡啶-2-基)嘧啶-4,6-二胺24b(22.0mg，0.10mmol)、1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑(32.0mg，0.10mmol)和1，4-二氧六环(2.0mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg，0.01mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg，0.02mmol)、碳酸铯(98.0mg，0.3mmol)，氩气保护微波110℃条件下反应1小时。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)得到目标产物1-叔丁氧羰基-5-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑24c(10.0mg，0.02mmol，白色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：468&470[M+1]；
第三步
5-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
将化合物1-叔丁氧羰基-5-(6-((5-氯吡啶-2-基)胺基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑24c(10.0mg，0.02mmol)、二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(1mL)混合，室温条件下反应3小时。此混合物用5mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,5mL二氯甲烷稀释，分出有机相，水相用二氯甲烷(10mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，浓缩物用HPLC纯化得目标产物5-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐24(5.0mg，0.014mmol，白色固体)，产率：70％。
MS m/z(ESI)：368&370[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.85(s,1H),9.85(s,1H),8.50(s,1H),8.24(s,2H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.94(s,1H),7.77(s,1H),7.68(s,1H),7.04(d,J＝9.2Hz,1H),6.98(d,J＝9.2Hz,1H),3.87(s,3H)。
实施例25
5-(6-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000521
第一步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑25a(15.0mg，0.039mmol)，2-氯-4-(三氟甲基)吡啶(10.7mg，0.059mmol)和1,4-二氧六环(1mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(3.6mg，0.004mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(2.3mg，0.004mmol)和叔丁醇钠(7.5mg，0.078mmol)，氩气保护下微波80℃条件反应1小时。冷却至室温，此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，粗品由制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，40％～60％乙腈，15分钟)，得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑25b(5.5mg，0.01mmol，白色固体)，产率：26％。
MS m/z(ESI)：532[M+1]；
第二步
5-(6-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑25b(5.5mg，0.010mmol)溶于二氯甲烷(1mL)，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，减压脱溶，粗品溶于二甲亚砜(1mL)，滴加1滴饱和氢氧化钠溶液至pH呈碱性，由制备液相色谱纯化备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，30％～70％乙腈，15分钟)得到目标产物5-(6-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑25(1.6mg，0.004mmol，白色固体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：402[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.85(s,1H),10.09(s,1H),8.58(s,1H),8.43(d,J＝5.2Hz,1H),8.28(s,1H),8.06(s,1H),8.02-7.88(m,2H),7.20(d,J＝5.2Hz,1H),7.04(s,1H),7.00(s,1H),3.87(s,3H)。
实施例26
5-(6-((5-氯嘧啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000531
参照实施实例22，将2,5-二氯吡啶换为2,5-二氯嘧啶可以得目标产物5-(6-((5-氯嘧啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑26(4.0mg,0.01mmol，白色固体)，产率：50％。
MS m/z(ESI)：369&371[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.85(s,1H),10.29(s,1H),8.80(s,1H),8.64(s,2H),8.28(s,1H),8.00(s,1H),7.96(s,1H),7.47(s,1H),7.05(s,1H),3.87(s,3H)。
实施例27
5-(6-(嘧啶-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000532
合成步骤参照实施例20。用2-氯嘧啶替代2-溴吡啶可以得目标产物5-(6-(嘧啶-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑，产率：63％。
MS m/z(ESI)：335[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),11.25(s，1H),10.07(s,1H),8.70(s,1H),8.69(s,1H),8.51(s,1H),8.02(s,1H),7.82(s,1H),7.23(t,J＝5.2Hz,1H),7.13(s,1H),7.04(s,1H),3.88(s,3H)。
实施例28
5-(6-((3-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000541
合成步骤参照实施例24，用2,3-二氯吡啶替代2,5-二氯吡啶可以得目标产物5-(6-((3-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑，产率：76％。
MS m/z(ESI)：368&370[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.85(s,1H),8.65(s，1H),8.40(s,1H),8.30(s,1H),8.22(d,J＝6.4Hz，1H),8.01(s,1H),7.93(d,J＝10Hz,1H),7.38(s,1H),7.09-7.05(m,1H),7.03(s,1H),6.68(s,1H),3.87(s,3H)。
实施例29
5-(6-(吡嗪-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000542
参照实施实例20，将2-氯吡嗪替代2-氯吡啶可以得到目标产物5-(6-(吡嗪-2-基氨基)嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑29。产率：31％。
MS m/z(ESI)：335[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),10.02(s，1H),8.90(s,1H),8.61(s,1H),8.31(s,1H),8.27(s,1H),8.20(d,J＝2.4Hz,1H),8.10(d,J＝2.4Hz,1H),7.95(s,1H),7.07(s,1H),7.04(s,1H),3.87(s,3H)。
实施例30
5-(6-甲氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000551
第一步
1-叔丁氧羰基-5-(6-氯嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物4,6-二氯嘧啶30a(26.3mg，0.1mmol)，1-叔丁氧羰基-5-氨基-6-甲氧基-1H-吲唑(29.8mg，0.2mmol)，碳酸铯(97.8mg，0.3mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(1mL)混合。微波100℃反应1小时。此混合物加入10mL水稀释，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用薄层层析硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化，得到目标产物1-叔丁氧羰基-5-(6-氯嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑30b(10mg，0.027mmol，黄色固体)。产率：27％。
MS m/z(ESI)：376&378[M+1]；
第二步
5-(6-甲氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物1-叔丁氧羰基-5-(6-氯嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑30b(10mg，0.027mmol)和甲胺的醇溶液(4M，2mL)混合。加热到70℃搅拌5小时。此混合物减压脱溶后，残余物用制备液相色谱(水(0.2％甲酸)，20％～70％乙腈，15分钟)纯化，得到目标产物5-(6-甲氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑30(4mg，0.015mmol，白色固体)，产率：56％。
MS m/z(ESI)：271[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),8.02-7.91(m,4H),7.00(s,1H),6.67-6.61(m,1H),5.61(s,1H),3.87(s,3H),2.68-2.67(d,J＝4.4Hz，3H)。
实施例31
5-(6-环丙基氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000552
合成步骤参照实施例30，用环丙胺替代甲胺可以得目标产物5-(6-环丙基氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐。产率：37％，制备液相条件(水(0.2％甲酸)，20％～70％乙腈，15分钟)。
MS m/z(ESI)：297[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),8.09(s,1H),8.05(s,1H),8.00(s,1H),7.91(s,1H),7.01(s,1H),6.97(s,1H),6.07(s,1H),5.89(s,1H),3.88(s,3H),2.40-2.31(m,1H)，0.72-0.56(m,2H),0.44-0.38(m,2H)。
实施例32
5-((6-氨基-5-环己-3-烯-1-羧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑盐酸盐
Figure BDA0001319436680000561
第一步
4-(三氟甲基磺酰氧基)-3-环己烯甲酸乙酯
将吡啶(1.7g，21.18mmol)溶于无水甲苯(15.0mL)中,冰浴下向其中缓慢滴加三氟甲磺酸酸酐(5.9g，21.28mmol)，混合液室温搅拌30分钟。然后将溶于溶于无水甲苯(15.0mL)的环己酮甲酸乙酯32a(3.0g，17.65mmol)加入至混合液中，于50℃搅拌反应12小时。反应液以水(30mL)淬灭后，静置分层，向有机相中加入15g硅胶，过滤并以甲苯(20mL×3)洗涤。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压脱溶得4-(三氟甲基磺酰氧基)-3-环己烯甲酸乙酯32b(3g，9.93mmol，黄色油)，产率56％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.79-5.77(m,1H),4.16(q,J＝7.1Hz,2H),2.64-2.53(m,1H),2.48-2.38(m,4H),2.18-2.09(m,1H),1.99-1.86(m,1H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H)。
第二步
1-乙氧基羰基环己-3-烯-4-硼酸频哪醇酯
将4-(三氟甲基磺酰氧基)-3-环己烯甲酸乙酯32b(1.0g，3.31mmol)，联硼酸频那醇酯(1.2g，5.30mmol)和醋酸钾(0.7g，6.62mmol)溶于1，4-二氧六环(10.0mL)，并在氩气保护下加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(0.24g，0.16mmol)，氩气保护下加热到90℃搅拌12小时。反应液冷却至室温，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(正己烷/乙酸乙酯＝10：1)得1-乙氧基羰基环己-3-烯-4-硼酸频哪醇酯32c(0.20g，0.71mmol，无色油)，产率：21％。
MS m/z(ESI)：281[M+1]；
第三步
4,6-二氨基-5-碘嘧啶
将4,6-二氨基嘧啶32d(1.0g，9.10mmol)和碳酸钾(1.9g，13.70mmol)溶于水(20.0mL)和N,N-二甲基甲酰胺(10.0mL)的混合液里。向其中加入单质碘(2.6g，10.00mmol)，于45℃下搅拌18小时。反应液以饱和亚硫酸钠溶液(10mL)淬灭,然后过滤。滤饼以水(40mL)洗涤得4,6-二氨基-5-碘嘧啶32e(1.2g，5.08mmol，白色固体)，产率：56％。
MS m/z(ESI)：237[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(s,1H),6.35-6.25(brs,4H)。
第四步
(4,6-二氨基嘧啶-5-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯
将4,6-二氨基-5-碘嘧啶32e(80.0mg，0.34mmol)，1-乙氧基羰基环己-3-烯-4-硼酸频哪醇酯32c(120.0mg,0.44mmol)和碳酸铯(320.0mg，0.10mmol)溶于1，4-二氧六环(5.0mL)和水(1.0mL)中，氩气保护下加入醋酸钯(8.0mg，0.03mmol)和2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(28.0mg，0.06mol)，氩气保护下加热到50℃搅拌12小时。反应液冷却至室温，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝15：1)得(4,6-二氨基嘧啶-5-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯32f(15mg，0.19mmol，黄色固体)，产率：56％。
MS m/z(ESI)：263[M+1]；
第五步
5-((6-氨基-5-环己-3-烯-1-羧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑盐酸盐
将(4,6-二氨基嘧啶-5-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯32f(20mg，0.08mmol)，1-叔丁氧羰基-5-((6-乙酰氨基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑(25mg，0.08mmol)和叔丁醇钠(30mg，0.30mmol)溶于1，4-二氧六环(1.0mL)中，氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(7mg,0.008mmol),2-(二环己基膦)3,6-二甲氧基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯(9mg,0.015mmol)。氩气保护下加热到100℃搅拌12小时。反应液冷却至室温，以稀盐酸溶液(1M)调节pH＝5-6，减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～40％乙腈，15分钟)得5-((6-氨基-5-环己-3-烯-1-羧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑盐酸盐32(2mg，0.005mmol，白色固体)，产率：6％。
MS m/z(ESI)：381[M+1]；
实施例33
5-((6-氨基-5-环己-3-烯-1-基(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000581
将化合物5-((6-氨基-5-环己-3-烯-1-羧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑32(7.0mg，0.02mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(16.0mg，0.04mmol)、N,N-二异丙基乙胺(13.0mg，0.1mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)混合，室温条件下反应10分钟。再往混合液中加入N-甲基哌嗪(20.0mg，0.2mmol)，继续室温条件下反应24小时。加入水稀释，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物用制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，10％～40％乙腈，15分钟)得目标产物5-((6-氨基-5-环己-3-烯-1-基(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐33(2.0mg，0.005mmol，白色固体)，产率：25％。
MS m/z(ESI)：463[M+1]；
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.39(s,1H),8.25(s,1H),8.05(s,1H),8.01(s,1H),7.95(s,1H),7.07(s,1H),6.02(s,1H),3.96(s,3H)，3.87-3.80(m,4H),3.65-3.60(m,1H),3.24-3.16(m,2H),2.95-2.88(m,4H),2.65(s,3H),2.52-3.40(m,3H),2.24-2.19(m,1H)。
实施例34
4-(4-氨基-6-((6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-5-基)-N，N-二甲基环己-3-烯-1-甲酰胺甲酸盐
Figure BDA0001319436680000591
将4-(4-氨基-6-((6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-5-基)环己-3-烯-1-甲酸32(7.0mg，0.02mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(11.0mg，0.03mmol)，二甲胺盐酸盐(5.0mg，0.06mmol)和二异丙基乙胺(10.0mg，0.07mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中，于室温下反应12小时。反应液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～50％乙腈，15分钟)。得4-(4-氨基-6-((6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-5-基)-N，N-二甲基环己-3-烯-1-甲酰胺甲酸盐34(2.5mg，0.006mmol，白色固体)，产率：31％。
MS m/z(ESI)：408[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.65(brs,2H),8.59(s,1H),8.07(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.42-7.32(m,1H),6.93(s,1H),6.03-5.95(m,2H),3.86(s,3H),3.05(s,3H),2.80(s,3H),2.32-2.04(m,4H),1.94-1.62(m,3H)。
实施例35
1-叔丁氧酰基-5-((6-氨基-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000601
第一步
4-氨基嘧啶-5-甲腈
室温下将化合物丙二腈35a(20.8g，200mmol)、醋酸甲脒(6.6g，100mmol)和甲醇(400mL)混合，向混合液中分批加入甲醇钠(13.5g，250mmol)，室温条件下反应48小时。将反应液过滤，滤饼用200mL冰水洗涤，干燥得到目标产物4-氨基嘧啶-5-甲腈35b(5.4g，45mmol，黄色固体)，产率：45％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.53(s,1H),7.91(s,2H)。
第二步
嘧啶并[4,5-d]嘧啶-4-胺
室温下将化合物4-氨基嘧啶-5-甲腈35b(2.4g，20mmol)、醋酸甲脒(3.1g，30mmol)和乙二醇乙醚(20mL)混合，氩气保护140℃条件下反应0.5小时。将反应液过滤，滤饼用50mL甲醇洗涤，干燥得到目标产物嘧啶并[4,5-d]嘧啶-4-胺35c(1.5g，10mmol，黄色固体)，产率：50％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.71(s,1H),9.34(s,1H),8.71-8.49(m,3H)。
第三步
4,6-二氨基嘧啶-5-甲醛
室温下将化合物嘧啶并[4,5-d]嘧啶-4-胺35c(1.0g，7mmol)和0.5M的盐酸水溶液(20mL)混合，100℃条件下反应2小时。加入1M的氢氧化钠水溶液淬灭，固体析出，过滤，滤饼用50mL水洗涤，干燥得到目标产物4,6-二氨基嘧啶-5-甲醛35d(450.0mg，3.4mmol，黄色固体)，产率：48％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),7.90(s,1H),7.74(s,4H)。
第四步
4,6-二氨基嘧啶-5-甲酸
室温下将化合物4,6-二氨基嘧啶-5-甲醛35d(0.4g，3.0mmol)、亚氯酸铵(0.14g，15mmol)、二氯甲烷(20mL)和水(20mL)混合，再向混合溶液中滴加磷酸(1.5mL)和二甲基亚砜(3mL)，室温条件下反应24小时。用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，过滤，滤饼用50mL水洗涤，干燥得到目标产物4,6-二氨基嘧啶-5-甲酸35e(0.3mg，1.8mmol，黄色固体)，产率：60％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.14(s,1H),8.70(s,4H),8.26(s,1H)。
第五步
4,6-二氨基嘧啶-5-甲酸乙酯
室温下将化合物4,6-二氨基嘧啶-5-甲酸35e(462.0mg，3mmol)和二氯甲烷(20mL)混合，向混合溶液中缓慢滴加N,N-二甲基甲酰胺(5滴)和草酰氯(1.5mL),搅拌0.5小时，再往反应液里滴加无水乙醇(5mL)，室温条件下反应半小时。用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，分出有机相，水相用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20：1)到目标产物4,6-二氨基嘧啶-5-甲酸乙酯35f(280.0mg，1.5mmol，白色固体)，产率：51％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.02(s,1H),7.66(s,2H),5.68(s,2H),4.39(q,J＝7.2Hz,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H)。
第六步
1-叔丁氧酰基-5-((6-氨基-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
室温下将化合物4,6-二氨基嘧啶-5-甲酸乙酯35f(18.0mg，0.1mmol)，1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑(32.0mg，0.10mmol)和1，4-二氧六环(2.0mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg，0.01mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg，0.02mmol)、碳酸铯(98.0mg，0.3mmol)，氩气保护微波110℃条件下反应1小时。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备硅胶板纯化(正己烷/乙酸乙酯＝1：1)，得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-((6-氨基-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑35(5mg，0.01mmol，白色固体)，产率：10％。
MS m/z(ESI)：429[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.76(s,1H),8.94(s,1H),8.24(s,1H),8.10(s,1H),7.75(s,1H),4.50(q,J＝7.2Hz,2H),4.07(s,3H),1.73(s,9H),1.49(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例36
5-((6-氨基-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑二甲酸盐
Figure BDA0001319436680000621
室温下向化合物1-叔丁氧酰基-5-((6-氨基-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑35(4.0mg，0.01mmol)、二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(1mL)混合，室温条件下反应3小时。此混合物用5mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,5mL二氯甲烷稀释，分出有机相，水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，30％～70％乙腈，15分钟)得目标产物5-((6-氨基-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑二分子甲酸盐36(1.3mg，0.004mmol，白色固体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：329[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H),10.69(s,1H),8.72(s,1H),8.09(s,1H),7.88(s,1H),7.53(s,2H),7.13(s,1H),6.98(s,1H),6.59(s,1H),4.35(q,J＝7.2Hz,2H),3.90(s,3H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例37
1-叔丁氧酰基-5-((6-(乙酰基氨基)-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
Figure BDA0001319436680000622
第一步
4-(乙酰基氨基)-6-氨基嘧啶-5-甲酸乙酯
室温下将化合物4,6-二氨基嘧啶-5-甲酸乙酯37a(128.0mg，0.7mmol)、乙酸酐(72.0mg，0.7mmol)和二氧六环(10mL)混合，80℃条件下反应6小时。冷却到室温,减压脱溶，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物用硅胶制备板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，得到目标产物4-(乙酰基氨基)-6-氨基嘧啶-5-甲酸乙酯37b(60.0mg，0.27mmol，白色固体)，产率：38％。
MS m/z(ESI)：225[M+1]；
第二步
1-叔丁氧酰基-5-((6-(乙酰基氨基)-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物4-(乙酰基氨基)-6-氨基嘧啶-5-甲酸乙酯37b(23.0mg，0.1mmol)1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑(32.0mg，0.10mmol)和1，4-二氧六环(2mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg，0.01mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg，0.02mmol)、碳酸铯(98mg，0.3mmol)，氩气保护微波110℃条件下反应1小时。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备硅胶板纯化(正己烷/乙酸乙酯＝1：1)，得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-((6-(乙酰基氨基)-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑37(6mg，0.015mmol，白色固体)，产率：15％。
MS m/z(ESI)：471[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.60(s,1H),10.56(s,1H),8.90(s,1H),8.56(s,1H),8.12(s,1H),7.78(s,1H),4.55(q,J＝7.2Hz,2H),4.07(s,3H),2.51(s,3H),1.74(s,9H),1.52(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例38
5-((6-(乙酰基氨基)-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000631
合成步骤参照实施例2。用1-叔丁氧酰基-5-((6-(乙酰基氨基)-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑替代1-叔丁氧酰基-5-(6-乙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基吲唑可以得目标产物5-((6-(乙酰基氨基)-5-乙氧羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑38(1.5mg，0.004mmol，白色固体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：371[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.57(s,1H),10.45(s,1H),8.76(s,1H),8.54(s,1H),8.03(s,1H),6.96(s,1H),4.54(q,J＝7.2Hz,2H),4.00(s,3H),2.51(s,3H),1.52(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例39
5-((6-氨基-5-羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000641
将化合物1-叔丁氧酰基-5-{[6-氨基-5-乙氧羰基嘧啶-4-基]氨基}-6-甲氧基吲唑35(20.0mg，0.05mmol)、1mol/L的氢氧化锂(1mL)和乙醇(5mL)混合，室温下搅拌1小时。减压脱溶，加入二氯甲烷稀释，用0.5mol/L盐酸水溶液调节pH值至5～6，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物用制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，10％～40％乙腈，15分钟)得目标产物5-((6-氨基-5-羰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐39(6.0mg，0.02mmol，白色固体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：301[M+1]；
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.71(s,1H),8.63(s,1H),8.37(s,1H),7.29(s,1H),4.10(s,3H)。
实施例40
5-((6-氨基-5-二甲胺基甲酮基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000642
合成步骤参照实施例34。用4-氨基-6-[(6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基]嘧啶-5-甲酸替代4-(4-氨基-6-((6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-5-基)环己-3-烯-1-甲酸得到目标产物5-((6-氨基-5-二甲胺基甲酮基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑40(1.7mg，0.005mmol，白色固体)，产率：25％。
MS m/z(ESI)：328[M+1]；
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.09(s,1H),8.00(s,1H),7.98(s,1H),7.19(s,1H),3.95(s,3H)，3.10(s,6H)。
实施例41
5-((6-胺基-5-(4-吗啉)甲酮基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000651
合成步骤参照实施例34。用4-氨基-6-[(6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基]嘧啶-5-甲酸替代4-(4-氨基-6-((6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-5-基)环己-3-烯-1-甲酸得到目标产物5-((6-胺基-5-(4-吗啉)甲酮基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑61(1.5mg，0.004mmol，白色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：370[M+1]；
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.10(s,1H),8.03(s,1H),7.95(s,1H),6.98(s,1H),3.85(s,3H),3.67-3.53(m,8H)。
实施例42
5-((6-氨基-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000652
第一步
5-((6-氨基-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物N-(5-溴-6-氯嘧啶-4-基)乙酰胺42a(84.0mg，0.4mmol)、1-叔丁氧酰基-5-氨基-6-甲氧基吲唑(105.0mg，0.4mmol)、碳酸铯(391.0mg,1.2mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(5mL)混合，120℃条件下反应24小时。冷却到室温,用二氯甲烷(30mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物用制备液相色谱(水(0.2％甲酸)，10％～50％乙腈，15分钟)纯化得到目标产物5-((6-氨基-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑42b(18.0mg，0.05mmol，白色固体)，产率：25％。
MS m/z(ESI)：335&337[M+1]；
第二步
5-((6-氨基-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物5-((6-氨基-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑42b(10.0mg,0.03mmol)、氰化锌(7.0mg，0.06mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(1mL)混合，氩气保护条件下加入碘化亚铜(5.0mg,0.03mmol)和四(三苯基膦)钯(4.0mg,0.003mmol)，氩气保护微波150℃条件下反应1小时。冷却到室温，过滤，滤液浓缩，残余物用制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～60％乙腈，15分钟)，得到目标产物5-((6-氨基-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑42(3.0mg，0.01mmol，灰黄色固体)，产率：36％。
MS m/z(ESI)：282[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(s,1H),8.25(s,1H),8.07(s,1H),6.94(s,1H),4.98(s,2H),3.90(s,3H)。
实施例43，44
1-叔丁氧酰基-5-((6-氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶-4-基)氨基-6-甲氧基吲唑
5-((6-氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶-4-基)氨基-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000661
Figure BDA0001319436680000671
第一步
4,6-二氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)嘧啶
将化合物4,6-二氨基-5-碘嘧啶43a(125.0mg，0.5mmol)、频哪醇硼酸酯(127.0mg，0.5mmol)和1，4-二氧六环(5.0mL)混合，室温氩气保护下加入醋酸钯(11.0mg,0.05mmol)、碳酸铯(500.0mg,1.5mmol)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(41.0mg,0.1mmol),氩气保护下60℃搅拌16小时。此混合物用10mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得118.0mg粗品4,6-二氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)嘧啶43b，该粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：237[M+1]；
第二步
4,6-二氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶
将上一步粗品化合物4,6-二氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)嘧啶43b(118.0mg，0.5mmol)、2-溴吡啶(30.0mg，0.2mmol)和1，4-二氧六环(5.0mL)混合，室温氩气保护下加入醋酸钯(9.0mg,0.01mmol)、醋酸钾(98.0mg,1mmol)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(8.0mg,0.02mmol),氩气保护100℃下搅拌16小时。此混合物用10mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，0％～10％乙腈，15分钟)得到目标产物4,6-二氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶43c(10.0mg，0.05mmol，黄色固体)。产率：10％。
MS m/z(ESI)：188[M+1]；
第三步
1-叔丁氧酰基-5-((6-氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶-4-基)氨基-6-甲氧基吲唑
5-((6-氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶-4-基)氨基-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物4,6-二氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶43c(10.0mg，0.05mmol)、1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑(16.0mg，0.05mmol)和1，4-二氧六环(5mL)混合，室温氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(5mg,0.005mmol)、碳酸铯(32mg,0.1mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(6mg,0.01mmol),120℃氩气保护下搅拌16小时。此混合物用10mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水,0.8％碳酸氢铵，20％～70％乙腈，15分钟)得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-((6-氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶-4-基)氨基-6-甲氧基吲唑43(1.0mg，0.02mmol，白色固体)，产率：4％和再次通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～70％乙腈，15分钟)5-((6-氨基-5-(吡啶-2-基)嘧啶-4-基)氨基-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐44(1.0mg，0.003mmol，白色固体)。产率：6％。
MS m/z(ESI)：434[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.58(s,1H),8.98(s,1H),8.56(d,J＝4.4Hz,1H),8.31(s,1H),8.22(s,2H),7.95-7.93(m,1H),7.82(d,J＝8.4Hz，1H),7.58(s,1H),7.43-7.39(m,1H),6.59(s,1H),4.00(s,3H),2.09(s,9H)。
MS m/z(ESI)：334[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.78(s,1H),10.29(s,1H),8.81(s,1H),8.28(s,1H),8.17(s,2H),7.94-7.91(m,2H),7.80-7.78(d,J＝7.2Hz，1H),7.40-7.38(d,J＝5.6Hz，1H),6.96(s,1H),6.49(s,2H),3.91(s,3H)。
实施例45
5-((6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000681
第一步
5-氟嘧啶-4-胺
室温下将化合物4,6-二氯-5-氟嘧啶45a(0.5g，3.0mmol)、氨水(3mL)和正丁醇(2mL)混合，90℃条件下反应3小时。冷却到室温，白色固体析出，过滤，滤饼用50mL乙腈洗涤，干燥得目标产物5-氟嘧啶-4-胺45b(0.2g，0.14mmol，白色固体)，产率：48％。
MS m/z(ESI)：148&150[M+1]；
第二步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-((6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物5-氟嘧啶-4-胺45b(30.0mg，0.2mmol)、6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-胺(32.0mg，0.1mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(2mL)混合，氩气保护条件下加入三(双亚苄基丙酮)双钯(9.0mg，0.01mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg，0.02mmol)和碳酸铯(98.0mg，0.3mmol)，氩气保护微波125℃条件下反应1小时。冷却到室温,用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，10％～50％乙腈，15分钟)，得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-((6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑45c(6.0mg，0.015mmol，白色固体)，产率：15％。
MS m/z(ESI)：405[M+1]；
第三步
5-((6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
室温下向化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-((6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑45c(6.0mg，0.015mmol)、二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(1mL)混合，室温条件下反应1小时。此混合物用5mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,5mL二氯甲烷稀释，分出有机相，水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，30％～70％乙腈，15分钟)得目标产物5-((6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑45(2.0mg，0.007mmol，白色固体)，产率：50％。
MS m/z(ESI)：275[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.83(s,1H),8.15(s,1H),7.94(s,1H),7.80(s,1H),7.77(s,1H),7.02(s,1H),6.63(s,2H),3.89(s,3H)。
实施实例46
5-((6-氨基-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000701
合成步骤参照实施例45，用6-氯-5-甲氧基嘧啶-4-胺替代5-氟嘧啶-4-胺可以得目标产物5-((6-氨基-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑46(2.0mg，0.007mmol，白色固体)。产率：27％，
MS m/z(ESI)：287[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.87(s,1H),8.56(s,1H),7.94(s,1H),7.89(s,1H),7.60(s,1H),7.04(s,1H),6.39(s,2H),3.96(s,3H),3.69(s,3H)。
实施例47
5-((6-氨基-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000702
合成步骤参照实施例45，用6-氯-5-甲基嘧啶-4-胺替代5-氟嘧啶-4-胺可以得到目标产物5-((6-氨基-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑47(1.0mg，0.004mmol，白色固体)，产率：36％。
MS m/z(ESI)：271[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),8.32(s,1H),8.00-7.81(m,2H),7.27(s,1H),7.00(s,1H),6.15(s,2H),3.91(s,3H),1.96(s,3H)。
实施例48
5-((6-(环丙酰氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000703
第一步
N-(6-氯-5-甲基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺
室温下将化合物6-氯-5-甲基嘧啶-4-胺48a(100mg，0.700mmol)，环丙基甲酰氯(87mg，0.839mmol),吡啶(3mL)和四氢呋喃(3mL)混合。此混合物加热到60℃搅拌16小时。此混合物用20ml水稀释,用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(20mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物通过制备硅胶板(石油醚/乙酸乙酯＝4：1)纯化，得到目标产物N-(6-氯-5-甲基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺48b(40mg，0.190mmol，白色固体)。产率：27％。
MS m/z(ESI)：212&214[M+1]；
第二步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-((6-(环丙酰氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物N-(6-氯-5-甲基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺48b(10mg，0.047mmol)，6-甲氧基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-胺(20mg，0.071mmol)，碳酸铯(46mg，0.142mmol)溶于1mL 1，4-二氧六环,在氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(4mg，0.005mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(5mg，0.009mmol)，微波110℃反应1小时。加入10mL水稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用制备硅胶板(石油醚/乙酸乙酯＝1.5:1)纯化，得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-((6-(环丙酰氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑48c(10mg，0.021mmol，浅黄色固体)，产率：46％。
MS m/z(ESI)：469[M+1]；
第三步
5-((6-(环丙酰氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-((6-(环丙酰氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑48c(10mg，0.021mmol)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(0.5mL)混合，室温搅拌一个小时。混合物用10mL水稀释,用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用制备液相色谱(水,0.8％碳酸氢铵，40％～60％乙腈，15分钟)纯化，得到目标产物5-((6-(环丙酰氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑48(3mg，0.009mmol，白色固体)，产率：42％。
MS m/z(ESI)：339[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.85(s,1H),10.29(s,1H),8.21(s,1H),8.04(s,1H),7.99(s,1H),7.96(s,1H),7.04(s,1H),3.86(s,3H),1.96(s,3H),1.95-1.92(m,1H),0.83-0.81(m,4H)。
实施例49
5-((6-(环丙磺酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000721
第一步
1-叔丁氧酰基-5-((6-(环丙磺酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物N-(6-氨基嘧啶-4-基)环丙磺酰胺49a(21.0mg，0.1mmol)、1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑(33.0mg，0.1mmol)和1，4-二氧六环(2.0mL)混合，室温氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg,0.01mmol)、碳酸铯(65.0mg,0.2mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg,0.02mmol),110℃氩气保护下反应15小时。此混合物用10mL水淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶色谱板(二氯甲烷/甲醇＝20:1)纯化得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-((6-(环丙磺酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑49b(20.0mg，0.043mmol，黄色固体)。产率：43％。
MS m/z(ESI)：461[M+1]；
第二步
5-((6-(环丙磺酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物1-叔丁氧酰基-5-((6-(环丙磺酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑49b(20.0mg，0.043mmol)、三氟乙酸(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)混合，室温下搅拌3小时。此混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶色谱板(二氯甲烷/甲醇＝10:1)纯化得到目标产物5-((6-(环丙磺酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑49(2.0mg，0.006mmol，白色固体)。产率：14％。
MS m/z(ESI)：361[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(s,1H),8.98(s,1H),8.32(s,1H),8.16(s,1H),7.95(s,1H),7.80(s,1H),7.04(s,1H),6.15(s,1H),3.78(s,3H),2.67-2.56(m,1H),0.90-0.88(m,4H)。
实施例50
5-(6-(乙酰胺基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶甲酸盐
Figure BDA0001319436680000731
第一步
6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶
室温下向化合物2,6-二氯尼古丁醛50a(4.0g，22.86mmol)的正丁醇(100mL)溶液中加入水合肼(3.3mL，68.57mmol)。加热到120℃搅拌8小时。此混合物减压脱溶后用100mL水稀释,用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(100mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100:0-7:1)得到目标产物6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶50b(0.75g，4.90mmol，黄色固体)。产率：21％。
MS m/z(ESI)：154&156[M+1]；
第二步
1-苯甲基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶
将化合物6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶50b(0.6g，3.92mmol),苄溴(738mg，4.31mmol)，碳酸铯(1.4g，4.31mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(8mL)混合。室温下搅拌2小时。用硫代硫酸钠溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相用水(50mL×3)以及饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100:0-100:2)得到目标产物1-苯甲基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶50c(0.75g，3.09mmol，黄色固体)，产率：79％。
MS m/z(ESI)：244&246[M+1]；
第三步
1-苯甲基-1,7-二氢-6H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮
向化合物1-苯甲基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶50c(0.75g，3.09mmol)的水(8mL)和二甲基亚砜(8mL)混合溶液中加入氢氧化钠(1.2g,30.86mmol)，加热到100℃搅拌16小时。冷却至室温，用浓盐酸调节pH＝8左右，用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(50mL×3),合并有机相用水(50mL×3)以及饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得到粗产品1-苯甲基-1,7-二氢-6H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮50d(0.6g，2.67mmol，黄色固体)，产率：86％。
MS m/z(ESI)：226[M+1]；
第四步
1-苯甲基-5-溴-1,7-二氢-6H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮
向化合物1-苯甲基-1,7-二氢-6H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮50d(0.38g，1.69mmol)的水(6mL)和乙腈(6mL)的混合溶液中加入氢氧化锂(81mg，3.38mol)和N-溴代丁二酰亚胺(0.60g，3.38mol),室温下搅拌2小时。此混合物用硫代硫酸钠溶液(20mL)淬灭,用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(20mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3:1-2:3)，得到目标产物1-苯甲基-5-溴-1,7-二氢-6H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮50e(0.23g，0.76mmol,浅黄色固体)，产率：45％。
MS m/z(ESI)：304&306[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),7.76(s,1H),7.52-7.29(m,5H),5.61(s,2H)。
第五步
1-苯甲基-5-溴-6-甲氧基吡唑并[3,4-b]吡啶
将化合物1-苯甲基-5-溴-1,7-二氢-6H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮50e(0.23g，0.76mmol)，碳酸钾(0.21g，1.52mmol)，碘甲烷(0.22g，1.518mmol)溶于4ml N,N-二甲基甲酰胺。室温搅拌2小时。此混合物用20mL水稀释,用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相用水(20mL×3)以及饱和食盐水(20mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:0-25:1)，得到目标产物1-苯甲基-5-溴-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶50f(95mg，0.30mmol，浅黄色固体)，产率：39％。
MS m/z(ESI)：318&320[M+1]；
第六步
N-(6-((1-苯甲基-6-甲氧基吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-4-基)乙酰胺
将化合物1-苯甲基-5-溴-6-甲氧基吡唑并[3,4-b]吡啶50f(20mg，0.063mmol)，N-(6-氨基嘧啶-4-基)乙酰胺(19mg，0.126mmol)，碳酸铯(62mg，0.189mmol)溶于1，4-二氧六环(1mL),在氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(6mg，0.006mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(7mg，0.013mmol)，微波100℃反应1小时。加入10mL水稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用制备硅胶板纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化，得到目标产物N-(6-((1-苯甲基-6-甲氧基吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-4-基)乙酰胺50g(10mg，0.026mmol，浅黄色固体)，产率：41％。
MS m/z(ESI)：390[M+1]；
第七步
5-(6-(乙酰胺基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶甲酸盐
将化合物N-(6-((1-苯甲基-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-4-基)乙酰胺50g(10mg，0.026mmol)溶于四氢呋喃(2mL)，氩气保护下滴加甲基锂(2M,0.16mL,0.257mmol)，室温搅拌20分钟。混合物用10mL水淬灭,用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用制备液相色谱(水(0.2％甲酸)，10％～60％乙腈，15分钟)纯化，得到目标产物5-(6-(乙酰胺基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶甲酸盐50(1.1mg，0.003mmol，白色固体)，产率：13％。
MS m/z(ESI)：300[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.27(s,1H),10.38(s,1H),8.91(s,1H),8.43(s,1H),8.40(s,1H),8.27(s,1H),7.98(s,1H),7.46(s,1H),3.87(s,3H),2.07(s,3H)。
实施例51
5-(6-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000761
第一步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-氨基-6-甲氧基吲唑51a(30.0mg，0.10mmol)，4-氯-6-甲氧基嘧啶(14.4mg，0.10mmol)和1,4-二氧六环(1mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.2mg，0.01mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(5.8mg，0.01mmol)和碳酸铯(65.2mg，0.20mmol)，氩气保护下微波120℃条件反应1小时。冷却至室温，此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，粗品由制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，60％～80％乙腈，15分钟)得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑51b(4.6mg，0.011mmol，白色固体)，产率：12％。
MS m/z(ESI)：402[M+1]；
第二步
5-(6-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(6-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑51b(4.6mg，0.011mmol)溶于二氯甲烷(1mL)，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，减压脱溶，粗品溶于二甲亚砜(1mL)，滴加1滴饱和氢氧化钠溶液至pH呈8～9，由制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，10％～40％乙腈，15分钟)得到目标产物5-(6-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐51(1.5mg，0.006mmol，白色固体)，产率：55％。
MS m/z(ESI)：272[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(s,1H),8.61(s,1H),8.28(s,1H),8.24(s,1H),8.02(s,1H),7.94(s,1H),7.03(s,1H),5.97(s,1H),3.87(s,3H),3.80(s,3H)。
实施实例52
5-(5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000771
合成步骤参照实施例49，用5-甲氧基嘧啶-4-胺替代N-(6-氨基嘧啶-4-基)环丙磺酰胺可以得目标产物得到目标产物5-(5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑52(9.0mg，0.003mmol，白色固体)。产率：47％.
MS m/z(ESI)：272[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.84(s,1H),8.71(s,1H),8.33(s,1H),8.08(s,1H),8.05(s,1H),7.99(s,1H),7.08(s,1H),3.98(s,3H),3.96(s,3H)。
实施例53
5-(5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑
Figure BDA0001319436680000772
第一步
4-氨基-5-羟基嘧啶
将4-氨基-5-甲氧基嘧啶53a(500.0mg，4.0mmol)和甲醇钠(432.0mg，8.0mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(6.0mL)中，向其中加入十二硫醇(1.61g，8.00mmol)，于120℃搅拌12小时。反应液冷却至室温，减压脱溶得粗品。以水(5.0mL)和醋酸(0.5mL)调节pH至5-6。水相以乙酸乙酯(10mL×5)洗涤，减压脱溶得4-氨基-5-羟基嘧啶53b(400.0mg，3.60mmol，灰白色固体)，产率90％。
MS m/z(ESI)：112[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.64(brs,1H),7.91(s,1H),7.63(s,1H),6.42(brs,2H)。
第二步
5-(2-甲氧基乙氧基)-4-胺基嘧啶
将4-氨基-5-羟基嘧啶53b(100.0mg，0.9mmol)和无水氢氧化锂(65.0mg，2.7mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，搅拌30分钟后，加入1-溴-2-甲氧基乙烷(125.0mg，0.9mmol)，于60℃下搅拌反应5小时。反应液冷却至室温，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1)得5-(2-甲氧基乙氧基)-4-胺基嘧啶53c(60.0mg，0.36mmol，无色油状液体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：170[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),7.79(s,1H),5.52(brs,2H),4.10-4.12(m,2H),3.67-3.69(m,2H),3.37(s,3H)。
第三步
1-叔丁氧酰基-5-(5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将5-(2-甲氧基乙氧基)-4-胺基嘧啶53c(30.0mg，0.17mmol)，1-叔丁氧酰基-5-氨基-6-甲氧基吲唑(110.0mg，0.34mmol)和碳酸铯(180.0mg，0.51mmol)溶于1，4-二氧六环(2.0mL)中，氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(15.0mg，0.016mmol)和4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(18.0mg，0.032mmol)，于微波条件下120℃反应1小时。反应液冷却至室温，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)得1-叔丁氧酰基-5-(5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑53d(13.0mg，0.031mmol，白色固体)，产率：18％。
MS m/z(ESI)：416[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.08(s,1H),8.49(s,1H),8.18(s,1H),8.13(s,1H),7.98(s,1H),7.76(s,1H),4.08-4.05(m,2H),3.96(s,3H),3.86-3.83(m,2H),3.49(s,3H),1.73(s,9H)。
第四步
5-(5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将得1-叔丁氧酰基-5-(5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑53d(13.0mg，0.031mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)中，加入氯化氢/二氧六环溶液(4M，1.0mL),于常温下搅拌反应12小时。反应液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～40％乙腈，15分钟)得5-(5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑53(6.0mg，0.019mmol，白色固体)，产率：61％。
MS m/z(ESI)：316[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.87(brs,1H),8.77(s,1H),8.36(s,1H),8.15(s,1H),8.11(s,1H),7.99(s,1H),7.09(s,1H),4.33-4.30(m,2H),3.96(s,3H),3.78-3.75(m,2H),3.40(s,3H)。
实施例54
5-(5-(2-羟基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000791
合成步骤参照实施例53，用(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷代替1-溴-2-甲氧基乙烷可以得目标产物5-(5-(2-羟基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐50(1mg，0.003mmol，白色固体)，产率：28％。制备液相条件(水(0.2％甲酸)，10％～60％乙腈，15分钟)。
MS m/z(ESI)：302[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),8.55(s,1H),8.28-8.23(m,3H),8.07(s,1H),7.99(s,1H),7.08(s,1H),5.32(br,1H),4.21-4.19(m,2H),3.94(s,3H),3.82-3.79(m,2H)。
实施例55
5-(5-(2-(4-吗啉)乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000792
合成步骤参照实施例53。用4-(2-氯乙基)吗啉替代1-溴-2-甲氧基乙烷得到目标产物5-(5-(2-(4-吗啉)乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐，产率：25％。制备液相条件(水(0.2％甲酸)，10％～40％乙腈，15分钟)。
MS m/z(ESI)：371[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),8.79(s，1H),8.36(s,1H),8.17(s，1H),8.11(s,1H),7.99(s,1H),7.09(s,1H),4.33-4.24(m,2H),3.97(s,3H),3.59-3.52(m,4H),3.18-3.10(m,4H),2.92-2.61(m,2H)。
实施例56
5-(5-乙氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000801
合成步骤同实施例53。用碘乙烷替代1-溴-2-甲氧基乙烷得到目标产物5-(5-乙氧基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐，产率25％。制备液相条件(水(0.2％甲酸)，10％～50％乙腈，15分钟)。
MS m/z(ESI)：286[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.91(brs,1H),8.73(s，1H),8.33(s,1H),8.21(s，1H),8.11(s,1H),8.07(s,1H),7.99(s,1H),7.09(s,1H),4.28-4.21(m,2H),3.97(s,3H),1.44(t,J＝6.4,3H)。
实施例57
5-(5-苯胺基基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000802
第一步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(5-溴嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将化合物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-氨基-6-甲氧基吲唑57a(200mg，0.68mmol)、5-溴-4-氯嘧啶(164mg，0.9mmol)、碳酸铯(445mg，1.4mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)混合，微波150℃条件下反应1小时。此混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(5-溴嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑57b(102.0mg，0.23mmol，黄色油状液体)，产率：34％。
MS m/z(ESI)：450&452[M+1]；
第二步
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(5-苯胺基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑
将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(5-溴嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑57b(30.0mg，0.067mmol)，苯胺(9.3mg，0.10mmol)和1，4-二氧六环(1.0mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(6.1mg，0.007mmol)，2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-异丙基-1,1'-联苯(7.2mg,0.013mmol)和碳酸铯(87.4mg，0.27mmol)，氩气保护下微波90℃条件反应1小时。冷却至室温，此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，30％～80％乙腈，15分钟)。得到目标产物1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(5-苯胺基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑57c(1.7mg，0.0033mmol，白色固体)，产率：5％。
MS m/z(ESI)：463[M+1]；
第三步
5-(5-苯胺基基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(5-苯胺基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基吲唑57c(1.7mg，0.0033mmol)溶于盐酸甲醇(2M，3.0mL)，80℃下搅拌反应0.5小时。反应液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～40％乙腈，15分钟)。得到目标产物5-(5-苯胺基基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐57(1.0mg，0.0026mmol，白色固体)，产率：80％。
MS m/z(ESI)：333[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.92(s,1H),8.65(s,1H),8.50(s,1H),8.21(s,1H),8.02(s,1H),7.98(s,1H),7.86(s,1H),7.27-7.19(m,2H),7.02(s,1H),6.86-6.78(m,3H),6.68(s,1H),3.76(s,3H)。
实施例58
N-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)-7H-嘌呤-6-胺
Figure BDA0001319436680000821
第一步
N-(6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-基)-7H-嘌呤-6-胺
室温下将化合物6-氯-7H-嘌呤58a(154.0mg，1.0mmol)、6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-胺(293.0mg，1.0mmol)和乙酸(2mL)混合，70℃条件下反应1小时。减压脱溶，加入20mL二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8～10，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物通过快速柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝40：1)，得目标产物N-(6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-基)-7H-嘌呤-6-胺58b(50.0mg，0.12mmol，白色固体)，产率：12％。
MS m/z(ESI)：412[M+1]；
第二步
N-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)-7H-嘌呤-6-胺
室温下向化合物N-(6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-基)-7H-嘌呤-6-胺58b(50.0mg，0.12mmol)、二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(1mL)混合，室温条件下反应3小时。此混合物用5mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,5mL二氯甲烷稀释，分出有机相，水相用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～50％乙腈，15分钟)。得目标产物N-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)-7H-嘌呤-6-胺58(30.0mg，0.11mmol，白色固体)，产率：80％。
MS m/z(ESI)：282[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.08(s,1H),8.70(s,1H),8.55(s,1H),8.06(s,1H),7.98(s,1H),7.16(s,1H),3.87(s,3H)。
实施例59
N-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺
Figure BDA0001319436680000831
第一步
6-氯-9-甲基-9H-嘌呤
室温下向化合物6-氯-7H-嘌呤59a(154.0mg，1.0mmol)、钠氢(矿物油分散60％,120.0mg，5.0mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(10mL)混合，往反应液中加入碘甲烷(426.0mg，3.0mmol)，室温下条件下反应24小时。加入5mL水淬灭反应，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物用通过快速柱层析纯化得目标产物6-氯-9-甲基-9H-嘌呤59b(80.0mg，0.48mmol，白色固体)，产率：48％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,1H),8.68(s,1H),3.90(s,3H)。
第二步
N-(6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺
将室温下化合物6-氯-9-甲基-9H-嘌呤59b(17.0mg，0.1mmol)、6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-胺(29.0mg，0.1mmol)和乙酸(2mL)混合，90℃条件下反应1小时。减压脱溶，加入二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8～10，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物用硅胶制备板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，得目标产物N-(6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺59c(13.0mg，0.03mmol)，产率：30％。
MS m/z(ESI)：426[M+1]；
第三步
N-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺
室温下向化合物N-(6-甲氧基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-5-基)-7H-嘌呤-6-胺59c(13.0mg，0.03mmol)、二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(1mL)混合，室温条件下反应3小时。此混合物用5mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,5mL二氯甲烷稀释，分出有机相，水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，残余物用制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～50％乙腈，15分钟)。得目标产物N-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺59(6.0mg，0.02mmol，白色固体)，产率：66％。
MS m/z(ESI)：296[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),8.69(s,1H),8.49(s,1H),8.44(s,1H),8.26(s,1H),7.99(s,1H),7.09(s,1H),4.05(s,3H),3.94(s,3H)。
实施例60&61
1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基苯并咪唑
3-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基苯并咪唑
Figure BDA0001319436680000841
第一步
4-溴-5-甲氧基-2-硝基苯胺
将化合物5-甲氧基-2-硝基苯胺60a(2.0g，11.9mmol)和乙腈(30.0mL)混合，室温下加入N-溴代琥珀酰亚胺(2.3g，13.1mmol)，室温条件下搅拌反应3小时。反应液以饱和亚硫酸钠溶液(60mL)淬灭，以水(100mL)稀释至有大量固体析出。过滤，滤饼以乙酸乙酯(100mL)溶解，以无水硫酸钠干燥，过滤脱溶得目标产物4-溴-5-甲氧基-2-硝基苯胺60b(2.5g，10.1mmol，黄色固体)，产率85％。
MS m/z(ESI)：247&249[M+1]；
第二步
4-溴-5-甲氧基苯-1,2-二胺
将化合物4-溴-5-甲氧基-2-硝基苯胺60b(0.5g，2.0mmol)和二氯甲烷(10.0mL),甲醇(10.0mL)以及饱和氯化铵溶液(20.0mL)混合，室温下加入锌粉(1.3g，20.0mmol)，室温条件下搅拌反应2小时。反应液过滤，滤液以二氯甲烷(100mL)稀释，并以无水硫酸钠干燥，过滤脱溶得目标产物4-溴-5-甲氧基苯-1,2-二胺60c(450.0mg，2.0mmol，褐色固体)，产率100％。
MS m/z(ESI)：217&219[M+1]；
第三步
5-溴-6-甲氧基-1H-苯并咪唑
将化合物4-溴-5-甲氧基苯-1,2-二胺60c(450.0mg,2.0mmol)和原甲酸三乙酯(10.0mL)混合,室温下加入甲酸(0.5mL),90℃反应3小时。反应液冷却至室温，旋蒸除去过量原甲酸三乙酯得粗品，以乙酸乙酯(50mL)稀释,依次以饱和碳酸氢钠和食盐水洗涤。有机相以无水硫酸钠干燥，过滤脱溶得目标产物5-溴-6-甲氧基-1H-苯并咪唑60d(430.0mg，1.9mmol，棕色固体)，产率95％。
MS m/z(ESI)：227&229[M+1]；
第四步
1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基-苯并咪唑
3-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基-苯并咪唑
将化合物5-溴-6-甲氧基-1H-苯并咪唑60d(430.0mg，1.9mmol)，三乙胺(383.0mg，3.8mmol)和4-二甲氨基吡啶(23.0mg，0.2mmol)与四氢呋喃(15.0mL)混合,室温下加入二碳酸二叔丁酯(585.0mg，2.9mmol)，45℃反应12小时。反应液以二氯甲烷(100mL)稀释,以饱和食盐水(20mL×3)洗涤。有机相以无水硫酸钠干燥，过滤脱溶得混合产物1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基-苯并咪唑60e和3-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基-苯并咪唑61e(450.0mg，1.4mmol，白色固体)，产率73％。
MS m/z(ESI)：327&329[M+1]；
第五步
1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基苯并咪唑
3-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基苯并咪唑
将混合物1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基-苯并咪唑60e和3-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基-苯并咪唑61e(200.0mg，0.61mmol)，N-(6-氨基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺(145.0mg，0.81mmol)和碳酸铯(480.0mg，1.47mmol)和1，4-二氧六环(4.0mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(67.0mg，0.07mmol)和2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(79.0mg，0.15mmol)，氩气保护下100℃条件反应1.5小时。此混合物用二氯甲烷(20mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板(二氯甲烷/甲醇＝25:1)纯化得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基苯并咪唑60(40.0mg，0.094mmol，白色固体)和3-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基苯并咪唑61(60.0mg，0.142mmol，白色固体)，产率38％。
1-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基苯并咪唑60:
MS m/z(ESI)：425[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.72(s,1H),8.68(brs,1H),8.45(s,1H),8.31(s,1H),7.58(s,2H),7.36(s,1H),3.94(s,3H),1.72(s,9H),1.60-1.55(m,1H),1.11-1.07(m,2H),0.94-0.87(m,2H)。
3-叔丁氧酰基-5-(6-环丙酰氨基嘧啶-4-基氨基)-6-甲氧基苯并咪唑61:
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.91(s,1H),8.95(s,1H),8.46(s,1H),8.42(s,1H),7.71(s,1H),7.65(s,1H),7.28(s,1H),3.98(s,3H),1.71(s,9H),1.69-1.64(m,1H),1.14-1.10(m,2H),0.94-0.88(m,2H)。
实施例62
5-(5-甲氨基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐
Figure BDA0001319436680000861
合成步骤参照实施例55。用4-氯-5-甲胺基嘧啶替代4-氯-6-甲氧基嘧啶得到
目标产物5-(5-甲氨基嘧啶-4-基)氨基)-6-甲氧基-1H-吲唑甲酸盐62(1.4mg，0.005mmol，白色固体)，产率：21％。
MS m/z(ESI)：271[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.97(s,1H),9.13(s,1H),8.20(s,1H),7.98(s,1H),7.95(s,1H),7.56(s,1H),7.08(s,1H),6.28(s,1H),3.86(s,3H),2.82(d,J＝3.6Hz,3H)。
实施例63
N-(6-((6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-4-基)环丙甲酰胺
Figure BDA0001319436680000871
第一步
3-甲氧基吡啶N-氧化物
将化合物3-甲氧基吡啶63a(1.1g，10.0mmol)溶于醋酸(20mL)中，室温下加入双氧水(2.0mL，30％，20.0mmol),80℃下搅拌5小时。将混合物浓缩，加入到NaOH(4M)水溶液中至PH值大于8，用二氯甲烷(3×10mL)萃取,用100mL水洗，无水硫酸钠干燥，过滤并且浓缩得到纯净的产品3-甲氧基吡啶N-氧化物63b(0.42g,3.4mmol，白色固体)，产率：34％。
MS m/z(ESI)：126[M+1]；
第二步
3-甲氧基-4-硝基吡啶N-氧化物
将化合物3-甲氧基吡啶N-氧化物63b(0.42g,3.4mmol)溶于浓硫酸(1.25mL，98％)中，冰浴下慢慢加入硝酸(1.0mL，68％),85℃下搅拌六小时。将混合物加到冰水中并用NaOH水溶液(4M)调节pH值大于7，乙酸乙酯(3×10mL萃取),无水硫酸钠干燥，减压得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝1:0-10:1)得到目标产物3-甲氧基-4-硝基吡啶N-氧化物63c(0.37g，2.2mmol，黄色固体)，产率：65％。
MS m/z(ESI)：172[M+1]；
第三步
3-甲氧基-4-氨基吡啶
将化合物3-甲氧基-4-硝基吡啶N-氧化物63c(0.37g，2.2mmol)溶于甲醇(100mL)中，室温下加入雷尼镍(100mg)，在氢气氛围下搅拌一个半小时。用硅藻土滤掉雷尼镍，减压得到粗品3-甲氧基-4-氨基吡啶63d(0.14g，1.1mmol,淡黄色液体)，产率：50％。
MS m/z(ESI)：125[M+1]；
第四步
1-叔丁氧酰基-3-甲氧基-4-氨基吡啶
将化合物3-甲氧基-4-氨基吡啶63d(0.14g，1.1mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺(173mg，1.3mmol)，二碳酸二叔丁酯(366mg，1.7mmol),室温下搅拌过夜。减压得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝1:0-10:1)得到目标产物1-叔丁氧酰基-3-甲氧基-4-氨基吡啶63e(220mg，1.0mmol，白色固体)，产率：91％。
MS m/z(ESI)：225[M+1]；
第五步2,4-二硝基苯酚负离子，1-氨基-4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基吡啶-1-正离子盐
将化合物1-叔丁氧酰基-3-甲氧基-4-氨基吡啶63e(220mg，1.0mmol)溶于乙腈(30mL)中，室温下加入2，4-二硝基酚胺(225mg，1.1mmol)。40℃下搅拌过夜。浓缩得到目标产物2,4-二硝基苯酚负离子，1-氨基-4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基吡啶-1-正离子盐63f(450mg，1.0mmol，淡黄色液体)，产率：100％。
MS m/z(ESI)：240[M+1]；
第六步
5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸酯
将化合物2,4-二硝基苯酚负离子，1-氨基-4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基吡啶-1-正离子盐63f(450mg，1.0mmol)，丙炔酸乙酯(108mg，1.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，冰浴下加入碳酸钾(193mg，1.4mmol)，室温下搅拌过夜。用水淬灭反应，乙酸乙酯(3×10mL)萃取，无水硫酸钠干燥，减压得到粗品，通过快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:0-5:1)得到目标产物5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸酯63g(150mg，0.45mmol，黄色固体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：336[M+1]；
第七步
6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺
将化合物5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸酯1g(150mg，0.45mmol)，溶于浓硫酸(2mL，98％)和水(2mL)中，100℃下搅拌4小时。用氢氧化钠水溶液(6M)将反应体系调至pH值大于7，用二氯甲烷(3×10mL)萃取，无水硫酸钠干燥，减压得到粗品6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺63h(72mg，0.44mmol，淡黄色固体)，产率：99％。
MS m/z(ESI)：164[M+1]；
第八步
N-(6-((6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-4-基)环丙甲酰胺
将化合物N-(6-氯嘧啶-4-基)环丙甲酰胺63h(5mg，0.03mmol)，6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺(6mg，0.03mmol)，碳酸铯(30mg，0.09mmol)溶于1，4-二氧六环(1mL)中，氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(3.2mg，0.003mmol)和2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-异丙基-1,1'-联苯(3.6mg,0.006mmol),于110℃油浴反应一小时。反应液冷却至室温，以甲醇(5.0mL)稀释，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水,0.8％碳酸氢铵，10％～40％乙腈，15分钟)。得N-(6-((6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-4-基)环丙甲酰胺63(2.0mg，0.006mmol，白色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：325[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.83(s,1H),9.23(s,1H),8.43(d,J＝7.6Hz,1H),8.34(s,1H),7.94(s,1H),7.61(s,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),6.66(s,1H),3.90(s,3H),2.02-2.00(m,1H),0.85-0.75(m,4H)。
实施例64
6-甲氧基-N-(4-{1-甲基-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}嘧啶-5-基)-1H-吲唑-5-胺
Figure BDA0001319436680000891
第一步
1-叔丁氧酰基(2S)-4-(2-氟-3-硝基苯基)-2-甲基哌嗪
将化合物溴-2-氟-3-硝基苯64a(3.1g，14.0mmol)、1-叔丁氧酰基(2S)-2-甲基哌嗪(4.2g，21.0mmol)和二氧六环(50mL)混合，氩气保护下加入三(双亚苄基丙酮)双钯(0.6g，0.7mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.8g，1.4mmol)和碳酸铯(9.1g，28mmol)，氩气保护110℃条件下反应16小时。冷却到室温,用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物通过快速柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5：1)，得到目标产物1-叔丁氧酰基(2S)-4-(2-氟-3-硝基苯基)-2-甲基哌嗪64b(2.6g，7.7mmol，红色油状液体)，产率：55％。
MS m/z(ESI)：340[M+1]；
第二步
1-叔丁氧酰基(2S)-2-甲基-4-[2-(甲基氨基)-3-硝基苯基]哌嗪
室温下向化合物1-叔丁氧酰基(2S)-4-(2-氟-3-硝基苯基)-2-甲基哌嗪64b(2.4g，7.0mmol)、2mol/L甲胺四氢呋喃溶液(15mL)和N,N-二甲基甲酰胺(20mL)混合，130℃条件下反应16小时。冷却到室温,用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物通过快速柱层析纯化(正己烷/乙酸乙酯＝5：1)，得到目标产物1-叔丁氧酰基(2S)-2-甲基-4-[2-(甲基氨基)-3-硝基苯基]哌嗪64c(1.9g，5.4mmol，红色油状液体)，产率：78％。
MS m/z(ESI)：351[M+1]；
第三步
1-叔丁氧酰基(2S)-2-甲基-4-[2-(甲基氨基)-3-氨基苯基]哌嗪
室温下向化合物1-叔丁氧酰基(2S)-2-甲基-4-[2-(甲基氨基)-3-硝基苯基]哌嗪64c(0.7g，2.0mmol)、含水量55％的钯碳(0.1g)和甲醇(20mL)混合，室温氢气条件下反应2小时。过滤，减压脱溶，残余物通过快速柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2：1)，得到目标产物1-叔丁氧酰基(2S)-2-甲基-4-[2-(甲基氨基)-3-氨基苯基]哌嗪64d(0.4g，1.2mmol，黄色油状液体)，产率：60％。
MS m/z(ESI)：321[M+1]；
第四步
1-叔丁氧酰基(2S)-4-[2-(4-氨基嘧啶-5-基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-7-基]-2-甲基哌嗪
室温下向化合物1-叔丁氧酰基(2S)-2-甲基-4-[2-(甲基氨基)-3-硝基苯基]哌嗪64d(160.0mg，0.5mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(266.0mg，0.7mmol)、N,N-二异丙基乙胺(194.0mg，1.5mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，室温条件下反应10分钟。再往反应液中加入4-氨基嘧啶-5-甲酸(84.0mg，0.6mmol)，室温条件下继续反应2小时。加入水稀释，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物直接溶于10mL乙酸溶液，130℃条件下反应1小时。冷却到室温，减压脱溶，加入二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8～10，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物用制备硅胶板纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2：1)，得目标产物1-叔丁氧酰基(2S)-4-[2-(4-氨基嘧啶-5-基)-1-甲基苯并咪唑-7-基]-2-甲基哌嗪64e(85.0mg，0.2mmol，黄色固体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：424[M+1]；
第五步
1-叔丁氧酰基-5-[(5-{7-[(3S)-4-(叔-丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}嘧啶-4-基)氨基]-6-甲氧基吲唑
将化合物1-叔丁氧酰基(2S)-4-[2-(4-氨基嘧啶-5-基)-1-甲基苯并咪唑-7-基]-2-甲基哌嗪64e(42.0mg，0.1mmol)、1-叔丁氧酰基-5-溴-6-甲氧基吲唑(32.0mg，0.10mmol)和1,4-二氧六环(2mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg，0.01mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg，0.02mmol)和碳酸铯(98.0mg，0.3mmol)，氩气保护微波110℃条件下反应1小时。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，残余物用制备硅胶板纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1：3)，得到目标产物1-叔丁氧酰基-5-[(5-{7-[(3S)-4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}嘧啶-4-基)氨基]-6-甲氧基吲唑64f(14.0mg，0.02mmol，黄色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：670[M+1]；
第六步
6-甲氧基-N-(4-{1-甲基-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}嘧啶-5-基)-1H-吲唑-5-胺室温下向化合物1-叔丁氧酰基-5-[(5-{7-[(3S)-4-(叔-丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}嘧啶-4-基)氨基]-6-甲氧基吲唑64f(9.0mg，0.015mmol)、二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌1小时。减压脱溶，加入二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝8～10，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，残余物用制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝8：1)，得到目标产物6-甲氧基-N-(4-{1-甲基-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}嘧啶-5-基)-1H-吲唑-5-胺64(4.0mg，0.01mmol，黄色固体)，产率：60％。
MS m/z(ESI)：470[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.18(s,1H),8.99(s,1H),8.77(s,1H),8.56(s,1H),7.96(s,1H),7.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,1H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.86(s,1H),4.19(s,3H),3.95(s,3H),3.20-3.09(m,4H),2.59-2.49(m,2H),2.28-2.23(m,1H),1.13(d,J＝6.0Hz,3H)。
实施例65
N-[6-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-基]-6-甲氧基-1H-吲唑-5-胺甲酸盐
Figure BDA0001319436680000921
第一步
6-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-胺
将化合物6-氯嘧啶-4-胺65a(200mg，1.5mmol)，咪唑(116mg，1.7mmol)，碳酸铯(978mg，3.0mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)混合，120℃下反应8小时。冷却至室温，此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，粗品用水(50mL)洗涤干燥，得到目标产物6-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-胺65b(90mg，0.56mmol，白色固体)，产率：36％。
MS m/z(ESI)：162[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,1H),8.33(s,1H),7.82(s,1H),7.20(s,2H),7.12(s,1H),6.57(s,1H)。
第二步
N-[6-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-基]-6-甲氧基-1H-吲唑-5-胺甲酸盐
将化合物6-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-胺65b(30.0mg，0.18mmol)，叔丁基5-溴-6-甲氧基-1H-吲唑-1-甲酸酯(66.4mg，0.20mmol)和1,4-二氧六环(1mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(16.5mg，0.018mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(10.5mg，0.018mmol)和碳酸铯(117mg，0.36mmol)，氩气保护下微波140℃条件反应1小时。冷却至室温，此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，粗品由制备液相纯化(水(0.2％甲酸)，10％～30％乙腈，15分钟)。得到目标产物N-[6-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-基]-6-甲氧基-1H-吲唑-5-胺甲酸盐65(1.2mg，0.004mmol，白色固体，单甲酸盐)，产率：2％。
MS m/z(ESI)：308[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.85(s,1H),9.11(s,1H),8.62-8.41(m,2H),8.21-8.04(m,2H),7.97(s,1H),7.85(s,1H),7.17(s,1H),7.07(s,1H),6.92(s,1H),3.89(s,3H)。
实施例66
5-((6-氨基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮盐酸盐
Figure BDA0001319436680000931
第一步
3-羟基-2-甲基-4-硝基苯甲酸
将化合物3-羟基-2-甲基苯甲酸66a(20g，131.6mmol)溶于醋酸(160mL)中，0℃下慢慢加入硝酸(70％水溶液，19.6mL),室温下搅拌1小时。将混合物加入到冰水混合物(500mL)中,析出黄色固体,过滤得到纯净的产品3-羟基-2-甲基-4-硝基苯甲酸66b(10.4g,52.5mmol，黄色固体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：198[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.09(s,1H),8.04(d,J＝9.0Hz,1H),7.50(d,J＝9.0Hz,1H),2.60(s,3H)。
第二步
3-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯甲酸甲酯
将化合物3-羟基-2-甲基-4-硝基苯甲酸66b(10.3g，52.0mmol)溶于丙酮(240mL)中，室温下加入硫酸二甲酯(17.4g，140.5mmol),碳酸钾(31g，234.0mmol)，60℃下搅拌2小时。减压得到粗品，通过快速柱层析(正己烷/乙酸乙酯＝1:0-10:1)得到目标产物3-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯甲酸甲酯66c(11.2g，50.0mmol，黄色固体)，产率：94％。
MS m/z(ESI)：226[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(d,J＝8.5Hz,1H),3.94(s,3H),3.91(s,3H),2.55(s,3H)。
第三步
2-溴甲基-3-甲氧基-4-硝基苯甲酸甲酯
将化合物3-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯甲酸甲酯66c(5.6g，24.9mmol)溶于乙腈(100mL)
中，室温氩气保护加入N-溴代琥珀酰亚胺(5.4g，30.5mmol)，偶氮二异丁腈(82mg，0.5mmol)，80℃下搅拌过夜。此混合物用100mL水淬灭,用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，
减压得到粗品，通过快速柱层析(正己烷/乙酸乙酯＝1:0～5:1)得到目标产物2-溴甲基-3-甲氧基-4-硝基苯甲酸甲酯66d(7.5g，24.8mmol，黄色油状液体)，产率：99％。
MS m/z(ESI)：224[M-Br]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.83-7.75(m,2H),5.05(s,2H),4.05(s,3H),3.99(s,3H)。
第四步
4-甲氧基-5-硝基异二氢吲哚-1-酮
将化合物2-溴甲基-3-甲氧基-4-硝基苯甲酸甲酯66d(7.5g，24.8mmol)溶于甲醇(80mL)
中，室温下加入三乙胺(3.0g，30.0mmol),氨甲醇溶液(25mL，7M，175mmol)，70℃下搅拌四小时。减压得到粗品，在甲醇中重结晶得到目标产物4-甲氧基-5-硝基异二氢吲哚-1-酮66e(3.8g，18.3mmol，黄色固体)，产率：74％。
MS m/z(ESI)：209[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.07(s,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),4.75(s,2H),4.08(s,3H)。
第五步
5-氨基-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
将化合物4-甲氧基-5-硝基异二氢吲哚-1-酮66e(3.8g，18.3mmol)溶于甲醇(300mL)中，室温下加入钯碳(1.0g，26wt％，55％含水量),在氢气氛围中50℃下搅拌过夜。用硅藻土滤掉钯碳，减压得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝1:0-10:1)得到目标产物5-氨基-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮66f(3.2g，18.0mmol，淡黄色固体)，产率：98％。
MS m/z(ESI)：179[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(s,1H),7.12(t,J＝8.0Hz,1H),6.73(d,J＝8.0Hz,1H),5.43(s,2H),4.36(s,2H),3.86-3.70(m,3H)。
第六步
5-((6-氨基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮盐酸盐
将化合物5-氨基-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮66f(0.13g，0.73mmol)溶于二氧六环(10mL)中，室温下加入盐酸甲醇(3.5mL，1M，3.5mmol),封管130℃下反应过夜。减压得到粗品，通过高效液相色谱制备(水(0.2％甲酸)，10％～30％乙腈，15分钟)。得到目标产物5-((6-氨基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮盐酸盐66(5mg，0.018mmol，白色固体)，产率：2.5％。
MS m/z(ESI)：272[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,1H),8.38(s,1H),8.09(d,J＝8.2Hz,1H),8.05(s,1H),7.31(d,J＝8.2Hz,1H),6.39(s,2H),5.92(s,1H),4.52(s,2H),3.88(s,3H)。
实施例67
5-((6-环丙酰胺嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680000951
第一步
N-(6-氯嘧啶-4-基)环丙甲酰胺
将化合物6-氯嘧啶-4-胺67a(129mg，1.0mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，室温下加入环丙甲酰氯(208mg，2.0mmol)，碳酸钾(414mg，3.0mmol)，70℃下反应过夜。减压得到粗品，通过快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1:0-1:1)得到目标产物N-(6-氯嘧啶-4-基)环丙甲酰胺67b(88.6mg，0.3mmol，白色固体)，产率：45％。
MS m/z(ESI)：198&200[M+1]；
第二步
5-((6-环丙酰胺嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
将化合物N-(6-氯嘧啶-4-基)环丙甲酰胺67b(49mg，0.25mmol)溶于醋酸(5mL)中，室温下加入5-氨基-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮(45mg，0.25mmol)，110℃下反应过夜。减压得到粗品，通过高效液相色谱制备(水(0.2％甲酸)，10％～30％乙腈，15分钟)。得到目标产物5-((6-环丙酰胺嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮67(2.9mg，0.0085mmol，白色固体)，产率：3％。
MS m/z(ESI)：340[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.83(s,1H),9.10(s,1H),8.54(s,1H),8.37(s,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,1H),7.66(s,1H),7.34(d,J＝8.1Hz,1H),4.55(s,2H),3.89(s,3H),2.06-2.02(m,1H),0.88-0.80(m,4H)。
实施例68
5-((6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680000961
第一步
6-氯-N-(吡啶-2-基)嘧啶-4-胺
将化合物6-氯嘧啶-4-胺68a(129mg，1.0mmol)，2-溴吡啶(17.2mg，1.1mmol)，碳酸铯(978mg，3mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(92mg，0.1mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(116mg，0.2mmol)溶于1，4-二氧六环(5mL)中。氩气保护下，110℃下反应一小时。过滤，减压得到粗品，通过快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0:1-1:1)得到目标产物6-氯-N-(吡啶-2-基)嘧啶-4-胺68b(116mg，0.56mmol，白色固体)，产率：56％。
MS m/z(ESI)：207&209[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(s,1H),8.37(d,J＝4.7Hz,1H),7.96(s,1H),7.77-7.58(m,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,1H),7.06-6.99(m,1H)。
第二步
5-((6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
将化合物6-氯-N-(吡啶-2-基)嘧啶-4-胺68b(65mg，0.5mmol)溶于正丁醇(2mL)中，室温下加入5-氨基-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮(90mg，0.5mmol)，盐酸甲醇溶液(2mL，4M)。封管130℃下反应过夜。减压得到粗品，通过高效液相色谱制备(水(0.2％甲酸)，10％～30％乙腈，15分钟)。得到目标产物5-((6-(吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮68(4.4mg，0.0126mmol，白色固体)，产率：3％。
MS m/z(ESI)：349[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.83(s,1H),8.87(s,1H),8.50(s,1H),8.31(s,1H),8.27(d,J＝5.2Hz,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,1H),7.69(t,J＝7.8Hz,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,2H),7.34(d,J＝8.1Hz,1H),6.94(t,J＝5.2Hz,1H),4.56(s,2H),3.91(s,3H)。
实施例69
5-((6-(嘧啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680000971
第一步
N-(嘧啶-2-基)嘧啶-4,6-二胺
室温下向化合物4,6-二胺基嘧啶69a(110.0mg，1.0mmol)、钠氢(矿物油分散60％,120.0mg，5.0mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(10mL)混合，室温下加入2-氯嘧啶(114.0mg，1.0mmol)，70℃条件下反应2小时。冷却到室温，混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩物通过快速柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1)，得目标产物N-(嘧啶-2-基)嘧啶-4,6-二胺69b(47.0mg，0.20mmol，白色固体)，产率：25％。
MS m/z(ESI)：189[M+1]；
第二步
5-((6-(嘧啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
将化合物N-(嘧啶-2-基)嘧啶-4,6-二胺69b(19.0mg，0.10mmol)、5-溴-4-甲氧基-2,3-二氢-1H-异吲哚-1-酮(25.0mg，0.10mmol)和1，4-二氧六环(2mL)混合，氩气保护条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9.0mg，0.01mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12.0mg，0.02mmol)和碳酸铯(98.0mg，0.3mmol)，氩气保护微波110℃条件下反应1小时。此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，得目标产物5-((6-(嘧啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮69(7.0mg，0.02mmol，白色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：350[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H,),9.03(s,1H,),8.63(d,J＝4.4Hz,2H),8.53(s,1H),8.36(s,1H),8.16(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(s,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.05(t,J＝4.4Hz,1H),4.58(s,2H),3.93(s,3H)。
实施例70
5-((6-(嘧啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680000981
参照实施实例69，将2-氯嘧啶换为4-氯嘧啶可以得目标产物5-((6-(嘧啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮70(7mg，0.01mmol，白色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：350[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),9.10(s,1H),8.77(s,1H),8.54(s,1H),8.46(d,J＝6.0Hz,1H),8.38(s,1H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(d,J＝6.0Hz,1H),7.49(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),4.57(s,2H),3.92(s,3H)。
实施例71
5-((6-氨基-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680000982
5-((6-氨基-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
将化合物6-氯-5-甲氧基-4-氨基嘧啶71a(16.0mg，0.1mmol)、5-氨基-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮(18.0mg，0.1mmol)和1，4-二氧六环(1.0mL)混合，室温下加入盐酸-二氧六环(4M,0.1mL),100℃氩气保护下反应16小时。此混合物用10mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭,分出有机相，水相用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶色谱板(二氯甲烷/甲醇＝10:1)纯化得到目标产物5-((6-氨基-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮71(3.0mg，0.01mmol，黄色固体)。产率：10％.
MS m/z(ESI)：302[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(d,J＝8.4Hz，1H),8.46(s,1H),7.93(s,1H),7.83(s,1H),7.35(d,J＝8.4Hz，1H),6.58(s,2H),4.59(s,2H),4.01(s,3H),3.71(s,3H)。
实施例72
5-((6-(环丙甲酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基-2-甲基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680000991
第一步
4-甲氧基-2-甲基-5-硝基异二氢吲哚-1-酮
将化合物2-溴甲基-3-甲氧基-4-硝基苯甲酸甲酯72a(0.3g，1.0mmol)溶于甲醇(10mL)中，室温下加入甲氨水溶液(1mL，10M，10.0mmol)，室温下搅拌一小时。减压得到粗品，在甲醇中重结晶得到目标产物4-甲氧基-2-甲基-5-硝基异二氢吲哚-1-酮72b(0.2g，0.9mmol，黄色固体)，产率：90％。
MS m/z(ESI)：223[M+1]；
第二步
5-氨基-4-甲氧基-2-甲基异二氢吲哚-1-酮
将化合物4-甲氧基-2-甲基-5-硝基异二氢吲哚-1-酮72b(0.2g，0.9mmol)溶于甲醇(50mL)中，室温下加入钯碳(50mg，26％wt，55％含水量),在氢气氛围中40℃下搅拌过夜。用硅藻土滤掉钯碳，减压得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝1:0-10:1)得到目标产物5-氨基-4-甲氧基-2-甲基异二氢吲哚-1-酮72c(0.15g，0.78mmol，淡黄色固体)，产率：87％。
MS m/z(ESI)：193[M+1]；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.09(d,J＝7.8Hz,1H),6.72(d,J＝7.8Hz,1H),5.47(s,2H),4.47(s,2H),3.80(s,3H),3.00(s,3H)。
第三步
5-((6-(环丙甲酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基-2-甲基异二氢吲哚-1-酮
将化合物N-(6-氯嘧啶-4-基)环丙甲酰胺72c(10mg，0.05mmol)，5-氨基-4-甲氧基-2-甲基异二氢吲哚-1-酮(10mg，0.05mmol)，碳酸铯(50mg，0.15mmol)溶于1，4-二氧六环(1mL)中，氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(4.2mg，0.005mmol)和2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-异丙基-1,1'-联苯(5.6mg,0.01mmol),于110℃油浴反应一小时。反应液冷却至室温，以甲醇(5.0mL)稀释，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，20％～60％乙腈，15分钟)。得5-((6-(环丙甲酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基-2-甲基异二氢吲哚-1-酮72(5.0mg，0.014mmol，白色固体)，产率：28％。
MS m/z(ESI)：354[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),9.09(s,1H),8.38(s,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,1H),7.66(s,1H),7.34(d,J＝8.1Hz,1H),4.72-4.66(m,2H),3.90(s,3H),3.10-3.06(m,3H),2.05-1.98(m,1H),0.96-0.78(m,4H)。
实施例73
5-((6-(环丙甲酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基-2,3,3-三甲基异吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001001
第一步
5-溴-4-甲氧基-2,3,3-三甲基异吲哚-1-酮
将5-溴-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮73a(30.0mg，0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中，于0℃下分批加入氢化钠(矿物油分散60％，40.0mg，0.96mmol)，于室温搅拌15分钟，滴加碘甲烷(106.0mg，0.72mmol)，于60℃下搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，水(30mL)淬灭后，以二氯甲烷(15mL×3)萃取。有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝30：1)得到目标产物5-溴-4-甲氧基-2,3,3-三甲基异吲哚-1-酮73b(20.0mg，0.071mmol，黄色油状液体)，产率：59％。
MS m/z(ESI)：284&286[M+1]；
第二步
5-((6-(环丙甲酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基-2,3,3-三甲基异吲哚-1-酮
将5-溴-4-甲氧基-2,3,3-三甲基异二氢吲哚-1-酮73b(20.0mg，0.07mmol)，N-(6-氨基嘧啶-4-基)环丙甲酰胺(19.0mg，0.11mmol)和碳酸铯(92.6mg，0.28mmol)溶于1，4-二氧六环(1.0mL)中，氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(6.1mg，0.007mmol)和2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2'，4'，6'-三异丙基-1,1'-联苯(7.8mg,0.014mmol),于80℃下反应3小时。冷却至室温，此混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并过滤，滤液减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝15：1)得到目标产物5-((6-(环丙甲酰氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基-2,3,3-三甲基异吲哚-1-酮73(10.0mg，0.026mmol，白色固体)，产率：37％。
MS m/z(ESI)：382[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),9.31(s,1H),8.34(s,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(s,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),3.74(s,3H),2.90(s,3H),2.09-1.91(m,1H),1.49(s,6H),7.65-7.63(m,4H)。
实施例74
5-((5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001011
将室温下化合物4-氯-5-甲氧基嘧啶74a(15.0mg，0.1mmol)、5-氨基-4-甲氧基-异二氢吲哚-1-酮(18.0mg，0.1mmol)和乙酸(2mL)混合，70℃条件下反应1小时。冷却到室温，白色固体析出，过滤，滤饼用20mL乙酸洗涤，干燥得目标产物5-((5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮74(8.0mg，0.03mmol，白色固体)，产率：30％。
MS m/z(ESI)：287[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),8.74(s,1H),8.59(s,1H),8.24(s,1H),7.80(d,J＝7.2Hz,1H),7.41(d,J＝7.2Hz,1H),4.66(s,2H),4.05(s,3H),3.94(s,3H)。
实施例75
5-((5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001021
第一步
5-溴-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
将5-氨基-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮75a(370.0mg，2.1mmol)和溴化亚铜(450.0mg，3.1mmol)溶于乙腈(10.0mL)中，加入亚硝酸叔丁酯(430.0mg，4.2mmol)，于50℃反应2小时。反应液冷却至室温，稀盐酸(1M,5.0mL)淬灭后，以二氯甲烷(50mL)稀释，混合液以饱和食盐水(20mL×3)洗涤。有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压脱溶得粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20：1)纯化得5-溴-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮75b(200mg，0.83mmol，黄色固体)，产率：40％。
MS m/z(ESI)：242&244[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(brs,1H),4.56(s,2H),3.98(s,3H)。
第二步
5-((5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
将5-溴-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮75b(28.0mg，0.12mmol)，5-(2-甲氧基乙氧基)-4-胺基嘧啶(20.0mg，0.12mmol)和碳酸铯(72.0mg，0.23mmol)溶于1，4-二氧六环(2mL)中，氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(11.0mg，0.012mmol)和4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(12.0mg，0.023mmol)。于微波条件下120℃反应1小时。反应液冷却至室温，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱纯化(水(0.2％甲酸)，0％～15％乙腈，15分钟)。得5-((5-(2-甲氧基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮75(4.0mg，0.012mmol，白色固体)，产率：10％。
MS m/z(ESI)：331[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(d,J＝8.2Hz,1H),8.55(s,1H),8.40(s,1H),8.32(s,1H),8.21(brs,1H),7.41(d,J＝8.2Hz,1H),4.63(s,2H),4.35-4.33(m,2H),4.03(s,3H),3.78–3.74(m,2H),3.39(s,3H)。
实施例76
5-((5-(2-(4-吗啉)乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮甲酸盐
Figure BDA0001319436680001031
参照实施例75，用4-(2-氯乙基)吗啉替代1-溴-2-甲氧基乙烷可以得目标产物5-((5-(2-(4-吗啉)乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮甲酸盐，产率：25％。
MS m/z(ESI)：386[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(d,J＝8.0Hz,1H),8.54(s,1H),8.40(s,1H),8.30(s,1H),8.21(s,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),4.64(s,2H),4.34-4.32(m,2H),4.04(s,3H),3.60-3.54(m,4H),3.37-3.32(m,4H),2.81-2.79(m,2H)。
实施例77
5-((5-(2-(二甲氨基)乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮二甲酸盐
Figure BDA0001319436680001041
第一步
5-(2-(二甲氨基)乙氧基)-4-胺基嘧啶
将4-氨基-5-羟基嘧啶77a(100.0mg，0.90mmol)和无水氢氧化锂(65.0mg，2.70mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，搅拌30分钟后，加入N,N-二甲基-3-氯乙胺(125.0mg，0.90mmol)，于60℃下搅拌反应5小时。反应液冷却至室温，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1)得5-(2-甲氧基乙氧基)-4-胺基嘧啶77b(60.0mg，0.36mmol，无色油状液体)，产率40％。
MS m/z(ESI)：183[M+1]；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),7.81(s,1H),5.93(brs,2H),4.23-4.18(m,2H),3.08-3.04(m,2H),2.60(s,6H)。
第二步
5-((5-(2-(二甲氨基)乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮二甲酸盐
将5-(2-甲氧基乙氧基)-4-胺基嘧啶77b(12.0mg，0.06mmol)，5-溴-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮(10.0mg，0.04mmol)和碳酸铯(40.0mg，0.12mmol)溶于1，4-二氧六环中，氩气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(4.0mg，0.004mmol)和4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(4.0mg，0.008mmol)。于微波条件下140℃反应1小时。反应液冷却至室温，过滤。滤液减压脱溶得粗品，通过制备液相色谱(水(0.2％甲酸)，0％～15％乙腈，15分钟)。纯化得5-((5-(2-(二甲氨基)乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮二甲酸盐77(2.0mg，0.006mmol，白色固体)，产率10％。
MS m/z(ESI)：344[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(d,J＝8.0Hz,1H),8.55(s,1H),8.42(s,1H),8.40(s,1H),8.26(s,1H),8.21(s,1H),7.96(s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),4.64(s,2H),4.30(t,J＝12.0Hz,2H),2.90(s,3H),2.78(t,J＝12.0Hz,2H),2.76(s,6H)。
实施例78
5-((5-(2-羟基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001051
合成步骤同实施例54。用5-溴-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮替代1-叔丁氧酰基-5-氨基-6-甲氧基吲唑得到目标产物5-((5-(2-羟基乙氧基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮78，产率25％。
MS m/z(ESI)：317[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),8.51(d,J＝8.0,1H),8.41(s,1H),8.35(s,1H),8.18(s,1H),7.41(d,J＝8.0,1H),5.32-4.79(brs,1H),4.62(s,2H),4.22-4.21(m,2H),3.80(s,3H),3.82-3.79(m,2H)。
实施例79
5-((7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001052
合成步骤同实施例74。用4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶替代4-氯-5-甲氧基嘧啶得到目标产物5-((7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮79(15.0mg，0.05mmol，红色固体)，产率：18％。
MS m/z(ESI)：296[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.80(brs,1H),8.78(brs,1H),8.56(s,1H),8.24(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(brd,1H),6.71(brd,1H),4.64(s,2H),3.93(s,3H)。
实施例80
5-((9H-嘌呤-6-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001061
将化合物5-氨基-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮80a(22mg，0.125mmol)溶于醋酸(3mL)中，室温下加入6-氯-9H-嘌呤(40mg，0.25mmol),封管100℃下反应一小时。减压得到粗品，通过高效液相色谱制备(水(0.2％甲酸)，10％～30％乙腈，15分钟)。得到目标产物5-((9H-嘌呤-6-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮80(2.2mg，0.0074mmol，白色固体)，产率：6％。
MS m/z(ESI)：297[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.62(s,1H),9.71(s,1H),8.66(s,1H),8.31(s,1H),8.12(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),4.62(s,2H),3.90(s,3H)。
实施例81
5-((1-H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001062
合成步骤同实施例74。用4-氯-1-H-吡唑并[3,4-d]嘧啶替代6-氯-9H-嘌呤得到目标产物5-((1-H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮81(6mg，0.02mmol，白色固体)，产率：16％。
MS m/z(ESI)：297[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.32(s,1H),8.68-8.84(m,2H),8.57(s,1H),8.46(s,1H),8.34(s,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),4.65(s,2H),4.05(s,3H)。
实施例82
5-((5-甲胺基嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮甲酸盐
Figure BDA0001319436680001071
将化合物4-氯-N-甲基嘧啶-5-胺82a(10mg，0.070mmol)，4-甲氧基-5-((5-(甲基氨基)嘧啶-4-基)氨基)异二氢吲哚-1-酮(15mg，0.084mmol)和氯化氢甲醇溶液(2M,0.5ml)及正丁醇(0.5ml)混合，此混合物加热到130℃搅拌2小时。混合物三乙胺调节pH＝7-8，减压脱溶得粗品，残余物用制备液相色谱(水(0.2％甲酸)，20％～60％乙腈，15分钟)纯化，得到目标产物4-甲氧基-5-((5-(甲基氨基)嘧啶-4-基)氨基)异二氢吲哚-1-酮甲酸盐82(2.0mg，0.007mmol，白色固体)，产率：10％。
MS m/z(ESI)：286[M+1]；
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.26(d,J＝8.4Hz,1H),8.17(s,1H),7.73(s,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),4.68(s,2H),4.01(s,3H),2.91(s,3H)。
实施例83
5-((6-((3-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001072
合成步骤同实施例78。用6-氯-N-(3-氯吡啶-2-基)嘧啶-4-胺替代6-氯-N-(吡啶-2-基)嘧啶-4-胺得到目标产物5-((6-((3-氯吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮，产率：17％。
MS m/z(ESI)：383&385[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.01(brs,1H),8.51(brs,1H),8.32(s,1H),8.31(d,J＝8.0Hz,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.12-7.09(m,1H),6.05(brs,1H),4.56(s,2H),3.91(s,3H)。
实施例84
5-((6-(吡嗪-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮甲酸盐
Figure BDA0001319436680001081
合成步骤同实施例69。用2-氯吡嗪替代2-氯嘧啶得到目标产物5-((6-(吡嗪-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮甲酸盐84，产率：4％。
MS m/z(ESI)：350[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.03(s,1H),8.85(s,1H),8.55(s,1H),8.35(s,1H),8.29(s,1H),8.23(s,1H),8.15(s,1H),8.11(d,J＝8.2Hz,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),4.57(s,2H),3.92(s,3H)。
实施例85
5-((6-(5-氯吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001082
合成步骤同实施例69。用2，5-二氯吡啶替代2-氯嘧啶得到目标产物5-((6-(5-氯吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮85，产率：9％。
MS m/z(ESI)：383&385[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),8.92(s,1H),8.51(s,1H),8.33(s,1H),8.28(s,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(d,J＝8.8Hz,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(s,1H),4.56(s,2H),3.91(s,3H)。
实施例86
5-((6-(6-氯吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001083
合成步骤同实施例69。用2，6-二氯吡啶替代2-氯嘧啶得到目标产物5-((6-(6-氯吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮86，产率：9％。
MS m/z(ESI)：383&385[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.54(s,1H),8.34(s,1H),7.90(d,J＝7.2Hz,1H),7.74(t,J＝8.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),7.00(d,J＝7.2Hz,1H),4.57(s,2H),3.91(s,3H)。
实施例87
5-((6-(4-氯吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮
Figure BDA0001319436680001091
合成步骤同实施例69。用2-氟-4-氯吡啶替代2-氯嘧啶得到目标产物5-((6-(4-氯吡啶-2-基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲氧基异二氢吲哚-1-酮87，产率：10％。
MS m/z(ESI)：383&385[M+1]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),8.89(s,1H),8.45(s,1H),8.29(s,1H),8.17(d,J＝5.6Hz,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(s,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(s,1H),6.98(d,J＝5.6Hz,1H),4.49(s,2H),3.84(s,3H)。
MNK1的活性抑制测试
使用体外激酶检测实验评估本发明的化合物对有丝分裂原激活的蛋白激酶作用激酶1(MNK1)活性的影响。
实验方法概述如下：
使用ADP-Glo激酶检测试剂盒，通过检测激酶反应中所产生的ADP水平来测定MNK1的体外活性。反应缓冲液包含以下组分:50mM HEPES，pH 7.5、10mM MgCl2、1mM EGTA、0.01％Brij35；人重组MNK1全长蛋白(Thermo，货号PR9138A)用反应缓冲液稀释成3.13ng/uL的激酶溶液；底物反应溶液包括用反应缓冲液稀释成0.75mg/ml的底物(GRSRSRSRSR，购自Scilight国内公司)和2250uM ATP，ADP-Glo试剂和激酶检测液来自Promega试剂盒(Promega,V9102)。
将化合物在100％DMSO中溶解稀释至100uM，然后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为0.0061uM，每个浓度点再使用反应缓冲液稀释20倍。如果化合物IC50值非常低，可以降低化合物的起始浓度。
向384孔检测板(Thermo，货号264706)中添加1uL化合物溶液和2uL的MNK1激酶溶液，混合均匀后室温孵育30分钟；随后加入2uL底物反应溶液，将反应混合物在室温孵育120分钟；随后加入与反应等体积的5uLADP-Glo溶液终止反应，同时将剩余的ATP完全消耗，混合均匀后室温放置60分钟后，加入10ul的激酶检测液，混合均匀后室温避光放置40分钟，检测液通过偶联的萤光素酶/萤光素将ADP转化为新的ATP，ATP又被Ultr-GloTM萤光素酶转化光信号，从而可用Envision检测。光信号强度与激酶反应中ADP产生量正相关，从而检测MNK1激酶的活性。该实验中，未加蛋白组作为阴性对照(100％抑制)，加蛋白但是未加化合物组作为阳性对照(0％抑制)。化合物对MNK1活性抑制百分比可以用以下公式计算：
抑制百分比＝100-100*(signal化合物-signal阴性对照)/(signal阳性对照-signal阴性对照)
化合物IC50值由10个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.,UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*slope factor))
其中Y为抑制百分比，Bottom为the bottom plateau of the curve(S型曲线的底部平台值)，Top为the top plateau of the curve(S型曲线的顶部平台值)，X为待测化合物浓度的对数值。
酶实验测试结果如下表1所示:
表1
Figure BDA0001319436680001111
Figure BDA0001319436680001121
n/a：表示未做实验。
MV-4-11细胞增殖抑制的测定：
使用发光细胞活力测试实验评估本发明的化合物对MV-4-11细胞增殖的影响。
实验方法概述如下：
使用CellTilter-Glo(CTG)检测试剂盒，通过采用一种独特的、稳定性荧光素酶检测有活力细胞代谢的指示剂ATP，试验中产生的发光信号和培养基中的有活力细胞数呈正比，从而检测MV-4-11的细胞增殖状况。
CellTilter-Glo试剂(Promega,G7572)由CellTilter-Glo冻干粉和ellTilter-Glo缓冲液组成，使用时将冻干粉溶解到缓冲液中即可。
MV-4-11细胞(ATCC#CRL-9591，购自南京科佰，货号CBP60522)培养在IMDM完全培养基(Thermofisher，12440053)中含10％FBS(GBICO,10099-141)和100units/ml青链霉素混合液(Thermofisher，15140122)，当细胞在培养容器中覆盖率达80-90％时，用0.25％胰酶(含EDTA)(Thermofisher,25200056)消化吹散后种植于白色384孔板(Thermofisher,164610),每孔400细胞(36μlDMEM完全培养基)，然后384孔板置于37℃,％CO2的培养箱中培养过夜(18-20小时)。将化合物在100％DMSO中溶解至10mM，然后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为0.61mM，每个浓度点再使用FBS-free的IMDM培养基稀释50倍。如果化合物IC50值非常低，可以降低化合物的起始浓度。每孔加入4μl IMDM稀释后的化合物，轻轻离心混匀。该实验中测定化合物的GI50(50％Growth Inhibition)，包括细胞增之前的T0组(含T0阳性和T0阴性对照组)，以及120小时细胞增殖后的T5组(含T5阳性和T5阴性对照组)。T0代表未加化合物之前即细胞增殖前的细胞数量，其中包括阳性对照：加细胞并加0.2％DMSO组作为阳性对照，未加细胞仅加培养基组作为阴性对照，T0组细胞在加化合物之前，将被用于CTG实验检测。另外，准备相同的阳性和阴性组，用于120小时之后细胞增殖后的对照组。该384孔板置于37℃,5％CO2的培养箱中继续培养，120小时后取出于室温放置30分钟，CTG试剂也取出平衡至室温，每孔加20μl CTG试剂，置于摇床上轻轻摇动5分钟以确保细胞裂解充分，放置10分钟使冷光信号稳定，然后用EnVision(Perkin Elmer)读取冷光信号。
化合物对MV-4-11细胞增殖抑制的用以下公式计算：
抑制百分比＝100-100*[(signal T5化合物-signal T5阴性)-(signal T0阳性-signal T0阴性)]/[(signal T5阳性对照-signal T5阴性对照)-(signal T0阳性-signalT0阴性)]
化合物IC50值由8个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.,UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogGI50-X)*slope factor))
其中Y为抑制百分比，Bottom为the bottom plateau of the curve(S型曲线的底部平台值)，Top为the top plateau of the curve(S型曲线的顶部平台值)，X为待测化合物浓度的对数值。
细胞实验测试表明本发明实施例化合物具有显著的抑制MV-4-11肿瘤细胞增殖的作用(IC50<500nM)，如下表2所示：
表2
Figure BDA0001319436680001131

Claims (6)

1.如式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003959084750000011
其具有下式(III)a-e的结构：
Figure FDA0003959084750000012
其中：
R2选自氢、氟、氰基、C1-C3烷基、C5-C6环基、具有选自N、O的杂原子的5-6元杂环基、6-10元芳基、具有选自N、O的杂原子的5-6元杂芳基、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-OR4、-NR5R6,其中所述环基任选被一个选自-C(O)OR7、-C(O)NR8R9的取代基所取代；
R12选自H、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷基氧基羰基、C3-C6环烷基羰基；
R18选自H、C1-C4烷基羰基、C3-C6环烷基羰基、6-10元芳基羰基、具有一个选自N或O的杂原子的5-6元杂芳基羰基；
R19选自C1-C4烷基；
R20选自C1-C5烷基、C1-C5氧杂烷基、-CH2CH2NR5R6、苯基；
R4、R5、R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、C1-C5烷基、C3-C8环基、具有选自N、O的杂原子的5-6元杂环基、6-10元芳基、具有选自N、O的杂原子的5-6元杂芳基。
2.选自下列的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003959084750000021
Figure FDA0003959084750000031
3.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1－2任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂。
4.根据权利要求1－2任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求3所述的药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗或者预防MNK介导的疾病。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述MNK介导的疾病是肿瘤。
6.根据权利要求5所述的用途，其中所述肿瘤选自恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
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