CN108367003B - 乳腺癌脑转移的治疗 - Google Patents

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CN108367003B CN201580075191.0A CN201580075191A CN108367003B CN 108367003 B CN108367003 B CN 108367003B CN 201580075191 A CN201580075191 A CN 201580075191A CN 108367003 B CN108367003 B CN 108367003B
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Abstract

本发明涉及用于同时、分开或顺次施用以治疗乳腺癌脑转移的药物组合，其包含(a)磷脂酰肌醇3激酶抑制剂或其可药用盐，和(b)Her3拮抗剂；治疗患有乳腺癌脑转移的个体的方法，其包括对有需要的个体施用该组合；这种组合在治疗乳腺癌脑转移中的用途；及包含这种组合的商业包装。

Description

乳腺癌脑转移的治疗
技术领域
本发明涉及用于同时、分开或顺次施用以治疗脑中转移性乳腺癌(本文中称为乳腺癌脑转移)的药物组合，其包含(a)磷脂酰肌醇3激酶抑制剂或其可药用盐和(b)Her3拮抗剂。
背景技术
开发和优化用于乳腺癌的HER2靶向治疗已取得重大进展。FDA批准的对转移性疾病具有显著临床功效的药物的实例包括抗HER2抗体曲妥珠单抗(trastuzumab)、双重EGFR-HER2激酶抑制剂拉帕替尼(lapatinib)、抗HER2-HER3二聚化抑制剂帕妥珠单抗(pertuzumab)和抗体-药物缀合物T-DM1(Krop,I.E.等Lancet Oncol(2014)；Slamon,D.J.等The New England journal of medicine 344,783-792(2001))。临床数据揭示曲妥珠单抗辅助治疗后脑转移(BM)发生率提高(Olson,E.M.等Annals of oncology:officialjournal of the European Society for Medical Oncology/ESMO 24,1526-1533(2013))。晚期疾病患者中此发生率高达50％。已建立的BM通常对曲妥珠单抗显示抗性，这种现象在大多数情况下归因于抗体渗透通过血脑屏障(BBB)不足(Lampson,L.A.mAbs 3,153-160(2011))。但是，虽然具有充分药物递送，但小分子对BM的功效也非常有限，仅可通过加入其他治疗方式略微提高(Lin,N.U.等Journal of clinical oncology 26,1993-1999(2008)；Lin,N.U.等Clinical cancer research:an official journal of theAmerican Association for Cancer Research 15,1452-1459(2009)；Bachelot,T.等Thelancet oncology 14,64-71(2013))。脑转移是乳腺癌的毁灭性进展。治疗选择有限，系统减慢生长的同一抗HER2治疗通常不能控制脑转移。因此，存在鉴定可用于治疗乳腺癌脑转移的药物的需要。
发明概述
乳腺癌脑转移是脑中转移性乳腺癌的结果。本发明基于磷脂酰肌醇3激酶抑制剂和Her3拮抗剂的组合可用于治疗乳腺癌脑转移的惊人发现。
在一方面，本发明涉及用于同时、分开或顺次施用以治疗乳腺癌脑转移的药物组合，其包含：(a)选自式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰肌醇3激酶抑制剂
Figure BDA0001366885800000021
其中
其中W是CRw或N，其中
Rw选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)卤素
(4)甲基；
(5)三氟甲基；
(6)氨磺酰基；
R1选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)取代和未取代烷基；
(6)取代和未取代链烯基；
(7)取代和未取代炔基；
(8)取代和未取代芳基；
(9)取代和未取代杂芳基；
(10)取代和未取代杂环；
(11)取代和未取代环烷基；
(12)-COR1a；
(13)-CO2R1a；
(14)-CONR1aR1b；
(15)-NR1aR1b；
(16)-NR1aCOR1b；
(17)-NR1aSO2R1b；
(18)-OCOR1a；
(19)-OR1a；
(20)-SR1a；
(21)-SOR1a；
(23)-SO2NRlaR1b；其中
R1a和R1b独立地选自：
(a)氢；
(b)取代或未取代烷基；
(c)取代和未取代芳基；
(d)取代和未取代杂芳基；
(e)取代和未取代杂环；和
(f)取代和未取代环烷基；
R2选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)羟基；
(6)氨基；
(7)取代和未取代烷基；
(8)-COR2a；和
(9)-NR2aCOR2b；其中
R2a和R2b独立地选自：
(a)氢；和
(b)取代或未取代烷基；
R3选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)取代和未取代烷基；
(6)取代和未取代链烯基；
(7)取代和未取代炔基；
(8)取代和未取代芳基；
(9)取代和未取代杂芳基；
(10)取代和未取代杂环；
(11)取代和未取代环烷基；
(12)-COR3a；
(14)-NR3aR3b；
(13)-NR3aCOR3b；
(15)-NR3aSO2R3b；
(16)-OR3a；
(17)-SR3a；
(18)-SOR3a；
(19)-SO2R3a；其中
R3a和R3b独立地选自：
(a)氢；
(b)取代或未取代烷基；
(c)取代和未取代芳基；
(d)取代和未取代杂芳基；
(e)取代和未取代杂环；和
(f)取代和未取代环烷基；和
R4选自：
(1)氢；和
(2)卤素；
和(b)Her3拮抗剂，如Her3抗体或其片段，其中该抗体或片段识别HER3受体的构象表位，该构象表位包含SEQ ID NO:1的HER3受体的结构域2内的氨基酸残基265-277和315及结构域4内的氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602和609-615，其中该抗体或其片段阻断依赖配体和不依赖配体的信号转导二者。
在一个实施方案中，式(I)的化合物是5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其盐酸盐。
在另一实施方案中，该Her3抗体或片段包含下文表1中所示的重链可变区和轻链可变区。在另一实施方案中，该Her3抗体或片段包含SEQ ID NO:128的重链可变区CDR1、SEQID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3，及SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:132的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:133的轻链可变区CDR3。在另一实例中，该HER3拮抗剂可以是MOR10703，其序列显示在下文表1中。
在另一实施方案中，本发明的药物组合包含5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其盐酸盐和识别HER3受体的构象表位的抗体或其片段，该构象表位包含SEQ ID NO:1的HER3受体的的结构域2内的氨基酸残基265-277和315及结构域4内的氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602和609-615，其中该抗体或其片段阻断依赖配体和不依赖配体的信号转导二者。
在另一实施方案中，本发明的药物组合包含5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其盐酸盐和Her3抗体或片段，该Her3抗体或片段包含SEQ IDNO:128的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3，及SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:132的轻链可变区CDR2和SEQ IDNO:133的轻链可变区CDR3。
在另一方面，本发明涉及包含(a)选自式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰肌醇3激酶和(b)Her3拮抗剂如Her3抗体或其片段的药物组合在治疗乳腺癌脑转移中和/或在制备用于治疗乳腺癌脑转移的药物中的用途。
在一个实施方案中，该乳腺癌脑转移是HER2阳性乳腺癌脑转移。
在另一方面，本发明涉及治疗乳腺癌脑转移的方法，其包括施用：(a)选自式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰肌醇3激酶抑制剂
Figure BDA0001366885800000061
其中
其中W是CRw或N，其中
Rw选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)卤素
(4)甲基；
(5)三氟甲基；
(6)氨磺酰基；
R1选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)取代和未取代烷基；
(6)取代和未取代链烯基；
(7)取代和未取代炔基；
(8)取代和未取代芳基；
(9)取代和未取代杂芳基；
(10)取代和未取代杂环；
(11)取代和未取代环烷基；
(12)-COR1a；
(13)-CO2R1a；
(14)-CONR1aR1b；
(15)-NR1aR1b；
(16)-NR1aCOR1b；
(17)-NR1aSO2R1b；
(18)-OCOR1a；
(19)-OR1a；
(20)-SR1a；
(21)-SOR1a；
(23)-SO2NRlaR1b；其中
R1a和R1b独立地选自：
(a)氢；
(b)取代或未取代烷基；
(c)取代和未取代芳基；
(d)取代和未取代杂芳基；
(e)取代和未取代杂环；和
(f)取代和未取代环烷基；
R2选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)羟基；
(6)氨基；
(7)取代和未取代烷基；
(8)-COR2a；和
(9)-NR2aCOR2b；其中
R2a和R2b独立地选自：
(a)氢；和
(b)取代或未取代烷基；
R3选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)取代和未取代烷基；
(6)取代和未取代链烯基；
(7)取代和未取代炔基；
(8)取代和未取代芳基；
(9)取代和未取代杂芳基；
(10)取代和未取代杂环；
(11)取代和未取代环烷基；
(12)-COR3a；
(14)-NR3aR3b；
(13)-NR3aCOR3b；
(15)-NR3aSO2R3b；
(16)-OR3a；
(17)-SR3a；
(18)-SOR3a；
(19)-SO2R3a；其中
R3a和R3b独立地选自：
(a)氢；
(b)取代或未取代烷基；
(c)取代和未取代芳基；
(d)取代和未取代杂芳基；
(e)取代和未取代杂环；和
(f)取代和未取代环烷基；和
R4选自：
(1)氢；和
(2)卤素；
和(b)Her3抗体或其片段，其中该抗体或片段识别HER3受体的构象表位，该构象表位包含SEQ ID NO:1的HER3受体的结构域2内的氨基酸残基265-277和315及结构域4内的氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602和609-615，其中该抗体或其片段阻断依赖配体和不依赖配体的信号转导二者。在一个实施方案中，该磷脂酰肌醇3激酶抑制剂是5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其盐酸盐，该Her3抗体或片段包含SEQID NO:128的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3，及SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:132的轻链可变区CDR2和SEQID NO:133的轻链可变区CDR3。在另一实例中，该HER3抗体可以是表1中所示的任意抗体，如MOR10703，其序列显示在下文表1中。该组合可以同时、分开或顺次施用。
还在另一方面，本发明涉及治疗乳腺癌脑转移的方法，其包括施用：(a)磷脂酰肌醇3激酶抑制剂5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其可药用盐；和(b)Her3抗体或其片段，其中该抗体或片段识别HER3受体的构象表位，该构象表位包含SEQ ID NO:1的HER3受体的结构域2内的氨基酸残基265-277和315及结构域4内的氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602和609-615，其中该抗体或其片段阻断依赖配体和不依赖配体的信号转导二者。在一个实施方案中，该磷脂酰肌醇3激酶抑制剂是5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其盐酸盐，该Her3抗体或片段包含SEQID NO:128的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3，及SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:132的轻链可变区CDR2和SEQID NO:133的轻链可变区CDR3。在另一实例中，该HER3抗体是MOR10703，其序列显示在下文表1中。
在另一方面，本发明提供商业包装，其包含(a)选自式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰激酶3抑制剂和(b)Her3拮抗剂如抗体或其片段作为治疗剂，连同在乳腺癌脑转移的治疗中同时、分开或顺次施用该治疗剂的说明书。用于本发明的HER3拮抗剂可以是识别HER3受体的构象表位的抗体或其片段，该构象表位包含SEQ ID NO:1的HER3受体的结构域2内的氨基酸残基265-277和315及结构域4内的氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602和609-615，其中该抗体或其片段阻断依赖配体和不依赖配体的信号转导二者。在一个实例中，该HER3拮抗剂包含SEQ ID NO:128的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3，及SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:132的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:133的轻链可变区CDR3。在另一实例中，该HER3拮抗剂是MOR10703，其序列显示在下文表1中。
附图简述
图1显示MFP中生长的BT474-Gluc肿瘤(图1A)和脑中生长的BT474-Gluc肿瘤(图1B)的差异应答，虽然具有相似的靶标抑制和药物渗透。
图2显示未治疗或用化合物A、MOR10703或化合物A和MOR10703治疗的BT474-Gluc脑肿瘤的肿瘤生长曲线(2A)和存活分析(2B)。
图3显示未治疗或用化合物A、MOR10703或化合物A和MOR10703治疗的MDA-MB-361-Gluc脑肿瘤的肿瘤生长曲线(3A)和存活分析(3B)。
发明详述
脑转移是乳腺癌的毁灭性进展。目前，治疗选择有限。本发明基于这样的发现，脑中缺乏对HER2途径抑制的反应不是由于药物递送和暴露受损，而是由于脑微环境过度激活HER3，治疗性靶向此途径克服了HER2阳性乳腺癌脑转移对PI3K抑制的抗性，显著改善存活。
本发明涉及同时、分开或顺次施用的用于治疗乳腺癌脑转移的药物组合，其包含：(a)例如含有式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰肌醇3激酶；和(b)HER3拮抗剂。在一个实施方案中，来自乳腺癌的脑转移可以是来自Her2阳性乳腺癌。在另一实施方案中，来自乳腺癌的脑转移可以是来自还已确定例如在外显子1、2、5、7、9或20中具有一个或多个PIK3CA突变(例如外显子9中的E545K或外显子20中的H1047R)的Her2阳性乳腺癌。HER3拮抗剂可以是识别HER3受体的构象表位的抗体或其片段，该构象表位包含SEQ ID NO:1的HER3受体的结构域2内的氨基酸残基265-277和315及结构域4内的氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602和609-615，其中该抗体或其片段阻断依赖配体和不依赖配体的信号转导二者。具体而言，该HER3拮抗剂包含SEQ ID NO:128的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3，及SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ IDNO:132的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:133的轻链可变区CDR3。在一个实例中，该HER3拮抗剂可以是MOR10703，其序列显示在下文表1中。
除非另有明确说明，本文所用的一般术语定义为以下含义：
除非另有说明，术语“包含”和“包括”在本文中以其开放性和非限制性含义使用。
除非文中另有说明或上下文清楚地否认，描述本发明的上下文中的术语“一”、“一个”和“该”及类似的指代解释为涵盖单数和复数二者。在将复数形式用于化合物、盐等时，这还用来指单种化合物、盐等。
术语“组合”或“药物组合”在本文中定义为指用于组合施用的一个剂量单位形式中的固定组合、非固定组合或成套部分，其中磷脂酰肌醇3激酶抑制剂和Her3拮抗剂可以在同一时间独立施用或在允许治疗剂显示协作(例如协同)效应的时间间隔内分开施用。
术语“非固定组合”是指，将治疗剂(例如磷脂酰肌醇3激酶抑制剂和Her3拮抗剂或其可药用盐)作为分开的实体或剂型同时、并行或顺次对患者施用而无具体时间限制，其中这种施用在有需要的个体(例如哺乳动物或人)的身体中提供治疗有效水平的化合物。例如，在一个实施方案中，PI3K抑制剂每天施用，Her3拮抗剂每周施用。
术语“成套部分”指上文定义的治疗剂(a)和(b)，其独立地或通过使用含不同量的治疗剂(a)和(b)的不同固定组合(即同时或在不同时间点)给药。成套部分的部分然后可以例如同时或按时间顺序交叉施用，即成套部分的任意部分在不同时间点和具有相等或不同的时间间隔。在组合制备物中施用的治疗剂(a)与治疗剂(b)的总量的比例可以变动，例如以应对要治疗的患者亚群的需要或单个患者的需要。
术语“磷脂酰肌醇3激酶抑制剂”或“PI3K抑制剂”在本文中定义为指靶向、减少或抑制磷脂酰肌醇3激酶的化合物。已显示磷脂酰肌醇3激酶活性响应许多激素和生长因子刺激(包括胰岛素、血小板衍生生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、集落刺激因子和肝细胞生长因子)而提高，并将其与涉及细胞生长和转化的过程相联系。
术语“Her3拮抗剂”在本文中定义为指靶向、减少或抑制Her3活性的抑制剂。
本文所用的也称为“ErbB3”的术语“HER3”或“HER3受体”指哺乳动物HER3蛋白质，且指哺乳动物HER3基因。优选的HER3蛋白质是存在于细胞的细胞膜中的人HER3蛋白质。人HER3基因描述于美国专利号5,480,968和Plowman等,(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:4905-4909中。人HER3众所周知，定义在检索号NP_001973(人)中，下文中表示为SEQ ID NO:1。
本文所用的“HER3配体”指结合并激活HER3的多肽。HER3配体的实例包括但不限于神经调节蛋白1(NRG)和神经调节蛋白2、β动物纤维素、肝素结合表皮生长因子和上皮调节蛋白(epiregulin)。该术语包括天然存在的多肽的生物学活性片段和/或变体。
本文所用的短语“HER3活性”或“HER3激活”指寡聚化(例如含HER3复合物的增加)、HER3磷酸化、构象重排(例如配体诱导的构象重排)和HER3介导的下游信号发放的增加。
本文所用的术语“依赖配体的信号发放”指经配体激活HER(例如HER3)。HER3激活显示为寡聚化(例如异二聚化)和/或HER3磷酸化增加，使得下游信号传导途径(例如PI3K)激活。如用实施例中所述的测定测量，相对于未处理的(对照)细胞，抗体或其片段可统计学上显著地减少暴露于抗原结合蛋白质(例如抗体)的受刺激细胞中磷酸化HER3的量。表达HER3的细胞可以是天然存在的细胞系(例如MCF7)或可以通过将编码HER3蛋白质的核酸引入宿主细胞来重组产生的细胞系。细胞刺激可通过外源加入激活性HER3配体或通过内源表达激活性配体而发生。
本文所用的术语“不依赖配体的信号发放”指无需配体结合情况下的细胞HER3活性(例如磷酸化)。例如，不依赖配体的HER3激活可以是HER2过量表达或HER3异二聚体配偶体(如EGFR和HER2)中激活性突变的结果。相对于未处理的(对照)细胞，抗体或其片段可统计学上显著地减少暴露于抗原结合蛋白质(例如抗体)的细胞中磷酸化HER3的量。表达HER3的细胞可以是天然存在的细胞系(例如SK-Br-3)或可以通过将编码HER3蛋白质的核酸引入宿主细胞来重组产生的细胞系。
本文所用的术语“阻断”指阻止或防止相互作用或过程，例如阻止依赖配体或不依赖配体的信号发放。
本文所用的术语“抗体”指与HER3表位相互作用(例如，通过结合、空间位阻、稳定化/去稳定化、空间分布)并抑制信号转导的全抗体。天然存在的“抗体”是包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白。每条重链包含重链可变区(缩写为VH)和重链恒定区。重链恒定区包含CH1、CH2和CH3三个结构域。每条轻链包含轻链可变区(缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含CL一个结构域。VH和VL可以进一步划分为称为互补决定区(CDR)的高变区，中间散布更保守的称为构架区(FR)的区域。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，从氨基端至羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的多种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一成分(C1q))结合。术语“抗体”包括例如单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼源化抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)、二硫键连接Fv(sdFv)、Fab片段、F(ab')片段和抗特应型(抗Id)抗体(包括例如抗本发明的抗体的抗Id抗体)，及以上任一种的表位结合片段。该抗体可以属于任意同种型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、种类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
轻链和重链都可以划分为具有结构和功能同源性的区域。术语“恒定的”和“可变的”在功能上使用。在这方面，应理解，轻链(VL)和重链(VH)二者的可变结构域部分决定抗原识别和特异性。相反，轻链(CL)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定结构域赋予重要的生物学特性，如分泌、经胎盘移动、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随着它们变得更远离抗体的抗原结合部位或氨基端而增大。N端是可变区，C端是恒定区；CH3和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基端。
本文所用的短语“抗体片段”指抗体的保留与HER3表位特异性相互作用(例如，通过结合、空间位阻、稳定化/去稳定化、空间分布)并抑制信号转导的能力的一个或多个部分。结合片段的实例包括但不限于：Fab片段，其是包含VL、VH、CL和CH1结构域的单价片段；F(ab)2片段，其是包含两个在铰链区通过二硫键连接的Fab片段的二价片段；包含VH和CH1结构域的Fd片段；包含抗体单臂的VL和VH结构域的Fv片段；dAb片段(Ward等,(1989)Nature341:544-546)，其包含VH结构域；及分离的互补决定区(CDR)。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但它们可通过合成接头用重组方法连接，该合成接头使得它们能够作为单条蛋白质链产生，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等,(1988)Science 242:423-426；和Huston等,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883)。这类单链抗体也旨在包含在术语“抗体片段”之内。可用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式针对用途筛选该片段。
短语与抗体(例如HER3结合抗体)“特异性(或选择性)结合”指决定关联抗原(例如人HER3)在蛋白质和其他生物制品的异质群体中的存在的结合反应。除上述平衡常数(KA)外，本发明的HER3结合抗体通常还具有小于5x10-2M、小于10-2M、小于5x10-3M、小于10-3M、小于5x10-4M、小于10-4M、小于5x10-5M、小于10-5M、小于5x10-6M、小于10-6M、小于5x10-7M、小于10-7M、小于5x10-8M、小于10-8M、小于5x10-9M、小于10-9M、小于5x10-10M、小于10-10M、小于5x10-11M、小于10-11M、小于5x10-12M、小于10-12M、小于5x10-13M、小于10-13M、小于5x10-14M、小于10-14M、小于5x10-15M、或小于10-15M或更低的解离速率常数(KD)，并以比其与非特异性抗原(例如HSA)结合的亲和力高至少两倍的亲和力结合HER3。在一个实施方案中，如用本文所述或本领域技术人员已知的方法(例如BIAcore测定、ELISA、FACS、SET)(BiacoreInternational AB,Uppsala,瑞典)评估，该抗体或其片段具有小于3000pM、小于2500pM、小于2000pM、小于1500pM、小于1000pM、小于750pM、小于500pM、小于250pM、小于200pM、小于150pM、小于100pM、小于75pM、小于10pM、小于1pM的解离常数(Kd)。本文所用的术语“Kassoc”或“Ka”指具体抗体-抗原相互作用的结合速率，而本文所用的术语“Kdis”或“Kd”指具体抗体-抗原相互作用的解离速率。本文所用的术语“KD”指解离常数，其从Kd与Ka的比值(即Kd/Ka)获得，并表示为摩尔浓度(M)。抗体的KD值可以用本领域完善的方法测定。用于测定抗体KD的方法是通过使用表面等离振子共振，或使用生物传感系统，如
Figure BDA0001366885800000161
系统。
本文所用的短语“拮抗剂”指抗体，该抗体与HER3结合，并中和HER3信号发放的生物学活性，例如，在例如磷酸-HER3或磷酸-Akt测定中降低、减少和/或抑制HER3诱导的信号发放活性。因此，如按照本领域已知和本文所述的方法测定，“抑制”一种或多种这些HER3功能特性(例如，生物化学、免疫化学、细胞、生理学或其他生物学活性等)的抗体将理解为涉及具体活性相对于在缺乏抗体的情况下(例如，或在存在具有不相关特异性的对照抗体时)观察到的活性的统计上显著的减少。抑制HER3活性的抗体使所测量的参数统计上显著地减少至少10％、减少至少50％、80％或90％，在某些实施方案中，如细胞HER3磷酸化水平的降低所显示，本发明的抗体可以抑制超过95％、98％或99％的HER3功能活性。HER3拮抗剂的非限制性实例包括结合HER3受体的构象表位的抗体或其片段，该构象表位包含HER3的结构域2和结构域4内的氨基酸残基。该抗体或其片段与结构域2和结构域4的这种结合使HER3受体稳定在无活性或封闭的构象中，使得HER3激活受抑制。这类抗体阻断依赖配体(例如神经调节蛋白)和不依赖配体的HER3信号传导途径二者。
短语“分离的抗体”指基本不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合HER3的分离的抗体基本不含特异性结合HER3之外的抗原的抗体)。但是，特异性结合HER3的分离的抗体可以对其他抗原具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本不含其他细胞物质和/或化学品。
术语“药物组合物”在本文中定义为指混合物或溶液，其包含至少一种待对个体(例如哺乳动物或人)施用以治疗影响该个体的具体疾病或病症的治疗剂。
术语“可药用”在本文中定义为指这样的化合物、材料、组合物和/或剂型，其在可靠的医学判断的范围之内适合用于与个体(例如哺乳动物或人)的组织接触，不存在与合理的收益/风险比相当的过度毒性、刺激性过敏反应和其他问题并发症。
本文所用的术语“治疗”包括缓解、减轻或缓和个体中的至少一种症状或实现疾病进展的延迟的治疗。例如，治疗可以是减弱障碍的一种或几种症状或彻底消除障碍，如癌症。在本发明的含义内，术语“治疗”还指阻断、延迟发作(即疾病的临床表现之前的时期)和/或降低发展疾病或疾病恶化的风险。
本文所用的术语“具有联合治疗活性的”或“联合治疗作用”指治疗剂可以按这样的时间间隔分开给药(以按时间顺序交叉的方式，尤其是顺序特异的方式)，使得它们优选在待治疗的温血动物尤其是人中仍显示(优选协同)相互作用(联合治疗作用)。可以通过跟踪显示两种治疗剂至少在某些时间间隔期间存在于待治疗的人的血液中的血液水平来确定是否如此。
术语治疗剂的药物组合的“治疗有效量”或“临床有效量”是这样的量，相对于基线时临床上可观察到的用该组合治疗的乳腺癌脑转移的病征和症状，该量足以提供的可观察到的改善。
本文所用的术语“协同效应”指两种治疗剂(例如，(a)式(I)的化合物或其可药用盐和Her3拮抗剂)的作用，该治疗剂产生例如减慢乳腺癌脑转移或其症状的症状进展的效应，该效应大于单独施用每种治疗剂的效应的简单相加。协同效应可以例如用适宜的方法计算，如Sigmoid-Emax方程(Holford,N.H.G.和Scheiner,L.B.,Clin.Pharmacokinet.6:429-453(1981))、Loewe相加方程(Loewe,S.和Muischnek,H.,Arch.Exp.PatholPharmacol.114:313-326(1926))和平均效应方程(Chou,T.C.和Talalay,P.,Adv.EnzymeRegul.22:27-55(1984))。上文提到的每个方程可以应用于实验数据，以产生相应的图表来辅助评估药物组合的效应。与上文提到的方程相关的相应图表分别是浓度-效应曲线、等效曲线和组合指数曲线。
本文所用的术语“个体”或“患者”包括能够患有或患上乳腺癌脑转移的动物。个体的实例包括哺乳动物，例如人、狗、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人动物。在优选实施方案中，该个体是人，例如患有乳腺癌脑转移、处于患上乳腺癌脑转移的风险或可能能够患上乳腺癌脑转移的人。
术语“约”或“大约”应具有给定值或范围的10％之内、更优选5％之内的含义。
HER3拮抗剂
可以使用任何HER3拮抗剂。在一个实施方案中，本发明包括WO2012022814中所述的抗体或其片段，该公开在此以其整体引入本申请作为参考。在一个实例中，用于本文公开的方法中的治疗的HER3拮抗剂包括抗体或其片段，其识别HER3的特异性构象状态，使得该抗体或其片段阻止HER3与共同受体(包括但不限于HER1、HER2和HER4)相互作用。在一些实施方案中，抗体或其片段通过使HER3受体稳定在无活性或闭合状态下，来阻止HER3与共受体相互作用。在一个实施方案中，抗体或其片段通过结合HER3的结构域2和结构域4内的氨基酸残基来稳定HER3受体。在这种无活性状态下，位于结构域2内的二聚化环不暴露，因此不能与其他共受体(包括但不限于HER1，HER2和HER4)二聚化。在一个实例中，该抗体识别HER3受体的构象表位，其中该构象表位包含HER3受体的结构域2和结构域4内的氨基酸残基，其中该抗体或其片段阻断依赖配体和不依赖配体的信号转导二者。该构象表位包含(结构域2的)氨基酸残基265-277、315、(结构域4的)氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615，或其亚组。在一个实例中，该抗体或其片段的VH结合至少一个以下HER3残基：Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597。在另一实例中，该抗体或其片段的VL结合至少一个以下HER3残基：Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615。该分离的抗体或其片段可以是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和合成抗体。
在另一实例中，该分离的抗体或其片段可以识别HER3受体的构象表位，其中该构象表位包含HER3受体的结构域2和结构域4内的氨基酸残基，其中如通过依赖HER3配体的磷酸化测定(例如，使用在神经调节蛋白(NRG)存在下刺激的MCF7细胞的测定)评估，该抗体或其片段抑制HER3的磷酸化。在此实例中，抗HER3受体的抗体或其片段可以具有至少1x107M-1、108M-1、109M-1、1010M-1、1011M-1、1012M-1或1013M-1的解离(KO)。
在另一实例中，该分离的抗体或其片段可以与表1中所述抗体结合相同的构象表位。
在一些实施方案中，该抗体或其片段结合具有这样的构象表位的人HER3蛋白质，该构象表位包含SEQ ID NO:1的(i)HER3氨基酸残基265-277和315(结构域2)及(ii)HER3氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615(结构域4)，或其亚组。在一些实施方案中，该抗体或其片段结合SEQ ID NO:1的氨基酸残基265-277和315(结构域2)及(ii)HER3氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615(结构域4)之内或与之重叠的氨基酸。在一些实施方案中，该抗体或其片段结合SEQ ID NO:1的氨基酸265-277和315(结构域2)及(ii)HER3氨基酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615(结构域4)(和/或由其组成的氨基酸序列)之内的氨基酸，或其亚组。在一些实施方案中，该抗体或其片段结合构象表位，使得它限制结构域2和结构域4的移动性，将它稳定在无活性或封闭的构象中。未能形成活性构象导致未能激活信号转导。在一些实施方案中，该抗体或其片段结合构象表位，使得它堵塞结构域2内的二聚化环，从而使它不能用于受体-受体相互作用。未能形成同二聚体或异二聚体导致未能激活信号转导。本发明可以利用HER3抗体，该HER3抗体识别HER3的构象表位，使得它们阻断依赖配体和不依赖配体的HER3信号转导途径二者。这类抗体在表1中公开。
本发明提供特异性结合HER3蛋白质(例如人和/或食蟹猴HER3)的抗体，该抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:15、33、51、69、87、105、123、141、159、177、195、213、231、249、267、285、303、321、339、357和375的VH结构域。本发明提供特异性结合HER3蛋白质(例如人和/或食蟹猴HER3)的抗体，该抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:14、32、50、68、86、104、122、140、158、176、194、212、230、248、266、284、302、320、338、356和374的VL结构域。本发明还提供特异性结合HER3蛋白质(例如人和/或食蟹猴HER3)的抗体，该抗体包含具有下文表1中所列VH CDR中的任一个的氨基酸序列的VH CDR。具体而言，本发明提供特异性结合HER3蛋白质(例如人和/或食蟹猴HER3)的抗体，该抗体包含(或备选地，由其组成)具有下文表1中所列任意VH CDR的氨基酸序列的一个、两个、三个、四个、五个或更多个VH CDR。
本发明的其他抗体包含已突变但在CDR区中与表1中所述序列所示的CDR区具有至少60％、70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸。在一些实施方案中，它包含突变氨基酸序列，其中与表1中所述序列所示的CDR区相比，在CDR区中突变了不超过1、2、3、4或5个氨基酸，同时仍保持其对原抗体的表位的特异性。
本发明的其他抗体包含已突变但在构架区中与表1中所述序列所示的构架区具有至少60％、70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸。在一些实施方案中，它包含突变氨基酸序列，其中与表1中所述序列所示的构架区相比，在构架区中突变了不超过1、2、3、4、5、6或7个氨基酸，同时仍保持其对原抗体的表位的特异性。本发明还提供编码特异性结合HER3蛋白质(例如人和/或食蟹猴HER3)的抗体的VH、VL、全长重链和全长轻链的核酸序列。
用于本发明方法的本发明的HER3抗体可以结合HER3的构象表位，该构象表位包含来自HER3的结构域2和结构域4的氨基酸残基。
表1：用于本发明方法的HER3抗体的实例
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本发明的其他抗体包括其中氨基酸或编码氨基酸的核酸已突变，但与表1中所述序列具有至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％和99％同一性的抗体。在一些实施方案中，它包含突变氨基酸序列，其中与表1中所述序列所示的可变区相比，在可变区中突变了不超过1、2、3、4或5个氨基酸，同时保持基本相同的治疗活性。
由于这些抗体或其片段中的每一种可以结合HER3，可以“混合和匹配”VH、VL、全长轻链和全长重链序列(氨基酸序列和编码氨基酸序列的核苷酸序列)，以产生本发明的其他HER3结合抗体。这类“混合和匹配”的HER3结合抗体可以用本领域已知的结合测定(例如，ELISA和WO2012022814中所述的其他测定，该公开在此以其整体引入作为参考)测试。在混合和匹配这些链时，应用结构上相似的VH序列替换来自具体VH/VL配对的VH序列。同样，应用结构上相似的全长重链序列替换来自具体全长重链/全长轻链配对的全长重链序列。同样，应用结构上相似的VL序列替换来自具体VH/VL配对的VL序列。同样，应用结构上相似的全长轻链序列替换来自具体全长重链/全长轻链配对的全长轻链序列。因此，在一方面，本发明提供分离的单克隆抗体或其片段，其具有：包含选自SEQ ID NO:15、33、51、69、87、105、123、141、159、177、195、213、231、249、267、285、303、321、339、357和375的氨基酸序列的重链可变区；包含选自SEQ ID NO:14、32、50、68、86、104、122、140、158、176、194、212、230、248、266、284、302、320、338、356和374的氨基酸序列的轻链可变区；其中该抗体特异性结合HER3(例如人和/或食蟹猴)。
在另一方面，本发明提供包含表1中所述重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3或其组合的HER3结合抗体。SEQ ID NO:2、8、20、26、38、44、56、62、74、80、92、98、110、116、128、134、146、152、164、170、182、188、200、206、218、224、236、242、254、260、272、278、290、296、308、314、326、332、344、350、362和368中显示抗体VH CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:3、9、21、27、39、45、57、63、75、81、93、99、111、117、129、135、147、153、165、171、183、189、201、207、219、225、237、243、255、261、273、279、291、297、309、315、327、333、345、351、363和369中显示抗体VHCDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:4、10、22、28、40、46、58、64、76、82、94、100、112、118、130、136、148、154、166、172、184、190、202、208、220、226、238、244、256、262、274、280、292、298、310、316、328、334、346、352、364和370中显示抗体VH CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:5、11、23、29、41、47、59、65、77、83、95、101、113、119、131、137、149、155、167、173、185、191、203、209、221、227、239、245、257、263、275、281、293、299、311、317、329、335、347、353、365和371中显示抗体VL CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:6、12、24、30、42、48、60、66、78、84、96、102、114、120、132、138、150、156、168、174、186、192、204、210、222、228、240、246、258、264、276、282、294、300、312、318、330、336、348、354、366和372中显示抗体VL CDR2的氨基酸序列。SEQID NO:7、13、25、31、43、49、61、67、79、85、97、103、115、121、133、139、151、157、169、175、187、193、205、211、223、229、241、247、259、265、277、283、295、301、313、319、331、337、349、355、367和373中显示抗体VL CDR3的氨基酸序列。CDR区用Kabat系统(Kabat等,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH Publication No.91-3242；Chothia等,(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia et al.,(1989)Nature 342:877-883；和Al-Lazikani等,(1997)J.Mol.Biol.273,927-948)描绘。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1、SEQ IDNO:3的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:5的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR1、SEQID NO:21的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:22的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:23的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:25的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:38的重链可变区CDR1、SEQID NO:39的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:40的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:41的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:42的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:43的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:56的重链可变区CDR1、SEQID NO:57的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:58的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:59的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:60的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:61的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:74的重链可变区CDR1、SEQID NO:75的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:76的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:77的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:78的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:79的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:92的重链可变区CDR1、SEQID NO:93的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:94的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:95的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:96的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:97的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:110的重链可变区CDR1、SEQID NO:111的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:112的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:113的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:114的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:115的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:128的重链可变区CDR1、SEQID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:132的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:133的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:146的重链可变区CDR1、SEQID NO:147的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:148的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:149的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:150的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:151的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:164的重链可变区CDR1、SEQID NO:165的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:166的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:167的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:168的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:169的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:182的重链可变区CDR1、SEQID NO:183的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:184的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:185的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:186的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:187的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:200的重链可变区CDR1、SEQID NO:201的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:202的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:203的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:204的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:205的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:218的重链可变区CDR1、SEQID NO:219的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:220的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:221的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:222的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:223的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:236的重链可变区CDR1、SEQID NO:237的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:238的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:239的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:240的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:241的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:254的重链可变区CDR1、SEQID NO:255的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:256的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:257的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:258的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:259的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:272的重链可变区CDR1、SEQID NO:273的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:274的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:275的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:276的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:277的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:290的重链可变区CDR1、SEQID NO:291的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:292的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:293的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:294的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:295的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:308的重链可变区CDR1、SEQID NO:309的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:310的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:311的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:312的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:313的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:326的重链可变区CDR1、SEQID NO:327的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:328的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:329的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:330的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:331的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:344的重链可变区CDR1、SEQID NO:345的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:346的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:347的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:348的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:349的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:362的重链可变区CDR1、SEQID NO:363的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:364的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:365的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:366的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:367的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:15的VH和SEQ ID NO:14的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:33的VH和SEQ ID NO:32的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:51的VH和SEQ ID NO:50的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:69的VH和SEQ ID NO:68的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:87的VH和SEQ ID NO:86的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:105的VH和SEQ ID NO:104的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:123的VH和SEQ ID NO:122的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:141的VH和SEQ ID NO:140的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:159的VH和SEQ ID NO:158的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQID NO:177的VH和SEQ ID NO:176的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ IDNO:195的VH和SEQ ID NO:194的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:213的VH和SEQ ID NO:212的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:231的VH和SEQ ID NO:230的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:249的VH和SEQ ID NO:248的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:267的VH和SEQID NO:266的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:285的VH和SEQ IDNO:284的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:303的VH和SEQ ID NO:302的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:321的VH和SEQ ID NO:320的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:339的VH和SEQ ID NO:338的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:357的VH和SEQ ID NO:356的VL。在具体实施方案中，结合HER3的抗体包含SEQ ID NO:375的VH和SEQ ID NO:374的VL。
如本文所使用，如果人抗体的可变区或全长链获自使用人种系免疫球蛋白基因的系统，则该抗体包含是具体种系序列的“产物”或“源自”具体种系序列的重链或轻链可变区或全长重链或轻链。这类系统包括用目的抗原免疫携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠或用目的抗原筛选展示在噬菌体上的人免疫球蛋白基因文库。是人种系免疫球蛋白序列的“产物”或“源自”人种系免疫球蛋白序列的人抗体可以这样鉴定：将人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列相比较，选择序列最接近(例如，最大％同一性)于人抗体序列的人种系免疫球蛋白序列。由于例如天然存在的体细胞突变或有意引入的位点定向突变，与种系序列相比，是具体人种系免疫球蛋白序列的“产物”或“源自”具体人种系免疫球蛋白序列的人抗体可以包含氨基酸差异。但是，在VH或VL构架区中，所选择的人抗体通常在氨基酸序列上与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少90％同一，且包含在与其他物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如鼠种系序列)相比时将该人抗体鉴定为人抗体的氨基酸残基。在某些情况下，人抗体可以在氨基酸序列上与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少60％、70％、80％、90％、或至少95％、或甚至至少96％、97％、98％或99％同一。通常，重组人抗体在VH或VL构架区中显示不超过10个氨基酸不同于人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列。在某些情况下，人抗体可以显示不超过5个、或甚至不超过4、3、2或1个氨基酸不同于种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列。WO2012022814中显示用于代表性数目的HER3抗体的使用VH和VL种系序列的不同种系化形式，该公开在此以其整体引入作为参考。
本文公开的抗体可以是单链抗体、双抗体、结构域抗体、纳米抗体和unibody的衍生物。还在另一实施方案中，本发明提供抗体或其片段，其包含与表1中所述序列同源的氨基酸序列，且该抗体结合HER3蛋白质(例如人和/或食蟹猴HER3)，并保留希望得到的表1中所述那些抗体的功能特性。
例如，本发明提供分离的单克隆抗体(或其功能片段)，其包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包含与选自SEQ ID NO:15、33、51、69、87、105、123、141、159、177、195、213、231、249、267、285、303、321、339、357和375的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％同一的氨基酸序列，轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:14、32、50、68、86、104、122、140、158、176、194、212、230、248、266、284、302、320、338、356和374的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％同一的氨基酸序列，该抗体结合HER3(例如人和/或食蟹猴HER3)，并中和HER3的信号发放活性，该信号发放活性可在磷酸化测定或HER信号发放的其他测量(例如WO2012022814中所述的磷酸-HER3测定、磷酸-Akt测定、细胞增殖和配体阻断测定)中测量。可变重链和轻链亲本核苷酸序列及优化用于哺乳动物细胞中表达的全长重链和轻链序列也包括在本发明的范围之内。本发明的其他抗体包括已突变但与上述序列尚具有至少60％、70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸或核酸。在一些实施方案中，它包括突变氨基酸序列，其中与上述序列中所示的可变区相比，通过可变区中的氨基酸缺失、插入或取代突变了不超过1、2、3、4或5个氨基酸。
在其他实施方案中，VH和/或VL氨基酸序列可以与表1中所示序列至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一。在其他实施方案中，除不超过1、2、3、4或5个氨基酸位置中的氨基酸取代外，VH和/或VL氨基酸序列可以是同一的。通过诱变(例如定位或PCR介导诱变)，然后用本文所述功能测定针对所保留的功能测试所编码的改变的抗体，可以获得具有与表1中所述抗体的VH和VL区具有高度(即80％或更高)同一性的VH和VL区的抗体。
在其他实施方案中，重链和/或轻链核苷酸序列的可变区可以与上文所示序列60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一。
在某些实施方案中，本发明的抗体具有包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区及包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一个或多个具有基于本文所述抗体的指定氨基酸序列或其保守修饰，其中该抗体保留希望得到的本发明的HER3结合抗体的功能特性。
因此，本发明提供分离的HER3单克隆抗体或其片段，其包含含有CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区及含有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中：重链可变区CDR1氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、8、20、26、38、44、56、62、74、80、92、98、110、116、128、134、146、152、164、170、182、188、200、206、218、224、236、242、254、260、272、278、290、296、308、314、326、332、344、350、362和368及其保守修饰；重链可变区CDR2氨基酸序列选自SEQ ID NO:3、9、21、27、39、45、57、63、75、81、93、99、111、117、129、135、147、153、165、171、183、189、201、207、219、225、237、243、255、261、273、279、291、297、309、315、327、333、345、351、363和369及其保守修饰；重链可变区CDR3氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、10、22、28、40、46、58、64、76、82、94、100、112、118、130、136、148、154、166、172、184、190、202、208、220、226、238、244、256、262、274、280、292、298、310、316、328、334、346、352、364和370及其保守修饰；轻链可变区CDR1氨基酸序列选自SEQ ID NO:5、11、23、29、41、47、59、65、77、83、95、101、113、119、131、137、149、155、167、173、185、191、203、209、221、227、239、245、257、263、275、281、293、299、311、317、329、335、347、353、365和371及其保守修饰；轻链可变区CDR2氨基酸序列选自SEQ ID NO:6、12、24、30、42、48、60、66、78、84、96、102、114、120、132、138、150、156、168、174、186、192、204、210、222、228、240、246、258、264、276、282、294、300、312、318、330、336、348、354、366和372及其保守修饰；轻链可变区CDR3氨基酸序列选自SEQ ID NO:7、13、25、31、43、49、61、67、79、85、97、103、115、121、133、139、151、157、169、175、187、193、205、211、223、229、241、247、259、265、277、283、295、301、313、319、331、337、349、355、367和373及其保守修饰；该抗体或其片段特异性结合HER3，并通过抑制HER信号传导途径来中和HER3活性，其可在磷酸化测定或HER信号发放的其他测量(例如WO2012022814中所述的磷酸-HER3测定、磷酸-Akt测定、细胞增殖和配体阻断测定)中测量。
在另一实例中，该分离的抗体或其片段与表1中所述抗体交叉竞争。该抗体可以包含：选自SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:87、SEQID NO:105、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:177、SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:267、SEQ ID NO:285、SEQID NO:303、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:339、SEQ ID NO:357和SEQ ID NO:375的VH；及选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:176、SEQ ID NO:194、SEQID NO:212、SEQ ID NO:230、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:266、SEQ ID NO:284、SEQ ID NO:302、SEQ ID NO:320、SEQ ID NO:338、SEQ ID NO:356和SEQ ID NO:374或其具有97-99％序列同一性的氨基酸序列的VL。
在另一实例中，该分离的抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:2、20、38、56、74、92、110、128、146、164、182、200、218、236、254、272、290、308、326、344和362的重链可变区CDR1；选自SEQ ID NO:3、21、39、57、75、93、111、129、147、165、183、201、219、237、255、273、291、309、327、345和363的重链可变区CDR2；选自SEQ ID NO:4、22、40、58、76、94、112、130、148、166、184、202、220、238、256、274、292、310、328、346和364的重链可变区CDR3；选自SEQ IDNO:5、23、41、59、77、95、113、131、149、167、185、203、221、239、257、275、293、311、329、347和365的轻链可变区CDR1；选自SEQ ID NO:6、24、42、60、78、96、114、132、150、166、186、204、222、240、258、276、294、312、330、348和366的轻链可变区CDR2；及选自SEQ ID NO:7、25、43、61、79、97、115、133、151、169、187、205、223、241、259、277、295、313、331、349和367的轻链可变区CDR3。
在具体实施方案中，该分离的抗体或其片段包含SEQ ID NO:128的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3、SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:132的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:133的轻链可变区CDR3。
用于本发明的抗体可以是结合HER3的抗体的片段，其选自Fab、F(ab2)'、F(ab)2'、scFv、VHH、VH、VL、dAb。
本发明还包括相互作用(例如通过结合、空间位阻、稳定化/去稳定化、空间分布)表位与表1中所述HER3结合抗体的相互作用表位相同的抗体。
本发明提供特异性结合HER3蛋白质(例如人和/或食蟹猴/小鼠/大鼠HER3)的全人抗体。与嵌合或人源化抗体相比，本发明的人HER3结合抗体在对人个体施用时免疫原性进一步降低。
人HER3结合抗体可以用本领域已知的方法产生。例如，用于将非人抗体转化为改造的人抗体的人源化改造技术(humaneering technology)。美国专利公开号20050008625描述了用于在抗体中用人可变区替换非人抗体可变区同时与该非人抗体相比保持相同结合特征或提供更好结合特征的体内方法。
在另一方面，本发明涉及包含本发明的HER3结合抗体或其片段的biparatopic、双特异性或多特异性分子。本发明的抗体或其片段可以衍生或与另一功能分子(例如另一肽或蛋白质(例如另一抗体或受体的配体))连接，以产生结合至少两个不同结合部位或靶分子的双特异性分子。本发明的抗体实际上可以衍生或与一个以上其他功能分子连接，以产生结合两个以上不同结合部位和/或靶分子的biparatopic或多特异性分子；这类biparatopic或多特异性分子。为了产生本发明的双特异性分子，可将本发明的抗体与一个或多个其他结合分子(如另一抗体、抗体片段、肽或结合模拟物)功能性连接(例如通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他方式)，使得产生双特异性分子。
PI3K抑制剂
PI3激酶抑制剂可以包括但不限于：4-[2-(1H-吲哚-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉(也称为GDC 0941，描述于PCT公开号WO09/036082和WO 09/055730中)、2-甲基-2-[4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氢咪唑[4,5-c]喹啉-1-基]苯基]丙腈(也称为BEZ 235或NVP-BEZ 235，描述于PCT公开号WO06/122806中)、BKM120和(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(也称为BYL719)。
在一个实例中，本发明的组合包括选自式(I)的化合物或其可药用盐的PI3K抑制剂，
Figure BDA0001366885800000541
其中
其中W是CRw或N，其中
Rw选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)卤素
(4)甲基；
(5)三氟甲基；
(6)氨磺酰基；
R1选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)取代和未取代烷基；
(6)取代和未取代链烯基；
(7)取代和未取代炔基；
(8)取代和未取代芳基；
(9)取代和未取代杂芳基；
(10)取代和未取代杂环；
(11)取代和未取代环烷基；
(12)-COR1a；
(13)-CO2R1a；
(14)-CONR1aR1b；
(15)-NR1aR1b；
(16)-NR1aCOR1b；
(17)-NR1aSO2R1b；
(18)-OCOR1a；
(19)-OR1a；
(20)-SR1a；
(21)-SOR1a；
(23)-SO2NRlaR1b；其中
R1a和R1b独立地选自：
(a)氢；
(b)取代或未取代烷基；
(c)取代和未取代芳基；
(d)取代和未取代杂芳基；
(e)取代和未取代杂环；和
(f)取代和未取代环烷基；
R2选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)羟基；
(6)氨基；
(7)取代和未取代烷基；
(8)-COR2a；和
(9)-NR2aCOR2b；其中
R2a和R2b独立地选自：
(a)氢；和
(b)取代或未取代烷基；
R3选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)硝基；
(4)卤素；
(5)取代和未取代烷基；
(6)取代和未取代链烯基；
(7)取代和未取代炔基；
(8)取代和未取代芳基；
(9)取代和未取代杂芳基；
(10)取代和未取代杂环；
(11)取代和未取代环烷基；
(12)-COR3a；
(14)-NR3aR3b；
(13)-NR3aCOR3b；
(15)-NR3aSO2R3b；
(16)-OR3a；
(17)-SR3a；
(18)-SOR3a；
(19)-SO2R3a；其中
R3a和R3b独立地选自：
(a)氢；
(b)取代或未取代烷基；
(c)取代和未取代芳基；
(d)取代和未取代杂芳基；
(e)取代和未取代杂环；和
(f)取代和未取代环烷基；和
R4选自：
(1)氢；和
(2)卤素。
式(I)的化合物的定义中所用的基团和符号具有WO07/084786中公开的含义，该公开在此以其整体引入作为本申请的参考。
式(I)的PI3K抑制剂化合物可以以自由碱或其可药用盐的形式存在于该组合中。式(I)的化合物的适宜的盐包括但不限于以下：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、环戊丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、延胡索酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐和十一酸盐。另外，碱性含淡基团可以用诸如以下的试剂季铵化：烷基卤，如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；长链卤，如奎酰、月桂酰、肉豆蔻酰和硬脂酰氯、溴和碘；芳烷基卤，如苄基和苯乙基溴。
式(I)的化合物的适宜的盐包括但不限于基于碱金属和碱土金属的阳离子，如钠、锂、钾、钙、镁、铝盐等，以及无毒性的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。用于形成碱加成盐的其他代表性有机胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、吡啶、甲基吡啶、三乙醇胺等，及碱性氨基酸，如精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸。
用于本发明的组合的优选的式(I)的化合物是PI3K抑制剂5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺(也称为BKM120)或其盐酸盐。此化合物的合成作为实施例10描述于WO 2007/084786中，其内容在此引入作为参考。
组合的用途和施用
根据本发明，通过对有需要的个体施用包含(a)有效量的例如选自式(I)的化合物的磷脂酰肌醇3激酶和(b)有效量的Her3拮抗剂的药物组合，HER3拮抗剂和PI3K抑制剂的组合可以用于在该个体中治疗乳腺癌脑转移。优选地，这些治疗剂按治疗有效剂量施用，与某个单一治疗相比，在组合时，例如就延迟乳腺癌脑转移的进展而言或就肿瘤体积的变化而言，该治疗有效剂量提供联合有益作用，例如协同作用或改善的抗增生作用。施用可以是分开、同时或顺次施用。在一个实施方案中，该乳腺癌为Her2阳性，且测定为在外显子1、2、5、7、9或20中具有一个以上PIK3CA突变(例如外显子9中的E545K或外显子20中的H1047R)。
在一方面，本发明涉及用于治疗乳腺癌脑转移的方法，其包括按对治疗乳腺癌脑转移有效的量对有需要的个体施用：(a)选自式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰肌醇3激酶；和(b)上文所述Her3抗体或其片段。在一个实施方案中，该乳腺癌为Her2阳性。在另一实施方案中，该乳腺癌为Her2阳性，且测定为例如在外显子1、2、5、7、9或20中具有一个以上PIK3CA突变(例如外显子9中的E545K或外显子20中的H1047R)。
在一方面，本发明涉及(a)选自式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰肌醇3激酶和(b)上文所述Her3抗体或其片段的组合在制备用于治疗乳腺癌脑转移的药物中的用途。在一个实施方案中，该乳腺癌为Her2阳性。在另一实施方案中，该乳腺癌为Her2阳性，且测定为例如在外显子1、2、5、7、9或20中具有一个以上PIK3CA突变(例如外显子9中的E545K或外显子20中的H1047R)。
患有乳腺癌脑转移的患者可以按照本发明分开、同时或顺次施用包含(a)选自式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰肌醇3激酶抑制剂和(b)本文所述Her3拮抗剂的组合来治疗该乳腺癌脑转移。
例如就改善、延迟进展或抑制症状而言，与该组合中的单种治疗剂的单一治疗相比，磷脂酰肌醇3激酶抑制剂和Her3拮抗剂的施用可以产生有益作用，例如治疗作用，例如协同治疗作用，另外，与仅应用本发明的组合中所用的药物治疗剂之一的单一治疗相比，还产生其他惊人的有益作用，例如副作用更少、生活质量改善或死亡率降低。在一个实施方案中，脑转移的进展减轻。
另一个益处是可以使用更低剂量的治疗剂磷脂酰肌醇3激酶抑制剂和Her3拮抗剂，例如不仅剂量需要通常更小，而且应用频率更低，或者可以为了降低就治疗剂之一观察到的副作用的发生率而使用。这符合待治疗的患者的希望和需要。
已建立的测试模型可以显示，磷脂酰肌醇3激酶抑制剂和Her3拮抗剂产生前文所述的有益作用。本领域技术人员完全能够选择相关测试模型来证明这类有益作用。可以在基本上如后文所述的临床研究中或体外测试方法中证明磷脂酰肌醇3激酶抑制剂和Her3拮抗剂的药理学活性。
用于治疗乳腺癌脑转移的每种治疗剂的最适剂量可以凭经验用已知方法针对每一个体确定，且将取决于多种因素，包括但不限于：疾病进展程度；个体的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；给药时间和途径；及个体正在接受的其他药物。最适剂量可以用本领域公知的常规测试和方法来确定。
可以与载体材料组合来产生单个剂量形式的每种治疗剂的量将取决于所治疗的个体和具体施用方式而变。在一些实施方案中，包含本文所述药物的组合的单位剂量形式将包含该组合的每种药物在该药物单独施用时通常所施用的量。
剂量频率可以取决于所使用的化合物和所治疗的具体病症而变。通常，优选使用足以提供有效治疗的最小剂量。通常可以用本领域技术人员熟悉的适合用于所治疗的病症的测定针对治疗有效性监测患者。
产生功效而无毒性的最适比例、单剂量和组合剂量及药物化合物的浓度基于治疗剂对靶位点的可及性，并用本领域技术人员已知的方法测定。
可以通过与生理可接受载体、赋形剂或稳定剂混合，以例如冻干粉、软膏、水溶液、洗剂或悬液的形式制备治疗剂和诊断剂的制剂(参见例如Hardman等,(2001)Goodman andGilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,McGraw-Hill,New York,N.Y.；Gennaro(2000)Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Lippincott,Williams和Wilkins,New York,N.Y.；Avis等(编辑)(1993)Pharmaceutical DosageForms:Parenteral Medications,Marcel Dekker,NY；Lieberman等(编辑)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets,Marcel Dekker,NY；Lieberman等(编辑)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms:Disperse Systems,Marcel Dekker,NY；Weiner和Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.)。
治疗剂施用方案的选择取决于若干因素，包括实体的血清或组织周转率、症状水平、实体的免疫原性、及靶细胞在生物基质中的可及性。在某些实施方案中，与可接受的副作用水平一致，施用方案最大化递送至患者的治疗剂的量。因此，所递送的生物制品的量部分取决于具体实体和所治疗病症的严重度。选择抗体、细胞因子和小分子的适当剂量的指南可得(参见例如Wawrzynczak(1996)Antibody Therapy,Bios Scientific Pub.Ltd,Oxfordshire,UK；Kresina(编辑)(1991)Monoclonal Antibodies,Cytokines andArthritis,Marcel Dekker,New York,N.Y.；Bach(编辑)(1993)Monoclonal Antibodiesand Peptide Therapy in Autoimmune Diseases,Marcel Dekker,New York,N.Y.；Baert等,(2003)New Engl.J.Med.348:601-608；Milgrom等,(1999)New Engl.J.Med.341:1966-1973；Slamon等,(2001)New Engl.J.Med.344:783-792；Beniaminovitz等,(2000)NewEngl.J.Med.342:613-619；Ghosh等,(2003)New Engl.J.Med.348:24-32；Lipsky等,(2000)New Engl.J.Med.343:1594-1602)。
包含本发明的Her3抗体或其片段的组合可与PI3K抑制剂分开提供或同时提供，包含该抗体的组合物可以通过连续输注、或通过按例如1天、1周的间隔或每周7次给药来提供。剂量可以静脉内、皮下、局部、口服、通过鼻、通过直肠、肌内、脑内或通过吸入提供。具体剂量方案是避免显著的不希望得到的副作用的最大剂量或剂量频率。总周剂量可以是至少0.05μg/kg体重、至少0.2μg/kg、至少0.5μg/kg、至少1μg/kg、至少10μg/kg、至少100μg/kg、至少0.2mg/kg、至少1.0mg/kg、至少2.0mg/kg、至少10mg/kg、至少25mg/kg或至少50mg/kg(参见例如Yang等,(2003)New Engl.J.Med.349:427-434；Herold等,(2002)NewEngl.J.Med.346:1692-1698；Liu等,(1999)J.Neurol.Neurosurg.Psych.67:451-456；Portielji等,(2003)Cancer Immunol.Immunother.52:133-144)。所希望的抗体或其片段的剂量与以摩尔/kg体重为基础的抗体或多肽的剂量大致相同。所希望的抗体或其片段的血浆浓度以摩尔/kg体重为基础。剂量可以是至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg或至少100μg。对个体施用的剂量数可以是至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12、或更多个。
对于本发明的抗体或其片段，对患者施用的剂量可以是0.0001mg/kg至100mg/kg患者体重。剂量可以在0.0001mg/kg和20mg/kg、0.0001mg/kg和10mg/kg、0.0001mg/kg和5mg/kg、0.0001和2mg/kg、0.0001和1mg/kg、0.0001mg/kg和0.75mg/kg、0.0001mg/kg和0.5mg/kg、0.0001mg/kg至0.25mg/kg、0.0001至0.15mg/kg、0.0001至0.10mg/kg、0.001至0.5mg/kg、0.01至0.25mg/kg、或0.01至0.10mg/kg患者体重之间。在一个实例中，剂量可以基于体重递送，例如3mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40、mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg，或作为固定剂量递送，例如75mg、150mg、300mg、500mg、700mg、1000mg。
本发明的抗体或其片段的单位剂量可以是0.1mg至20mg、0.1mg至15mg、0.1mg至12mg、0.1mg至10mg、0.1mg至8mg、0.1mg至7mg、0.1mg至5mg、0.1至2.5mg、0.25mg至20mg、0.25至15mg、0.25至12mg、0.25至10mg、0.25至8mg、0.25mg至7m g、0.25mg至5mg、0.5mg至2.5mg、1mg至20mg、1mg至15mg、1mg至12mg、1mg至10mg、1mg至8mg、1mg至7mg、1mg至5mg、或1mg至2.5mg。
本发明的抗体或其片段的剂量可以在个体中达到至少0.1g/ml、至少0.5μg/ml、至少1μg/ml、至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少175μg/ml、至少200μg/ml、至少225μg/ml、至少250μg/ml、至少275μg/ml、至少300μg/ml、至少325μg/ml、至少350μg/ml、至少375μg/ml或至少400μg/ml的血清效价。备选地，本发明的抗体或其片段的剂量可以在个体中达到至少0.1μg/ml、至少0.5μg/ml、至少1μg/ml、至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20.mu.g/ml、至少25μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少175μg/ml、至少200μg/ml、至少225μg/ml、至少250μg/ml、至少275μg/ml、至少300μg/ml、至少325μg/ml、至少350μg/ml、至少375μg/ml或至少400μg/ml的血清效价。
本发明的抗体或其片段的剂量可以是重复，施用可以相隔至少1天、2天、3天、5天、7天、10天、15天、21天、30天、45天、2个月、75天、3个月、或至少6个月。
在一个实施方案中，该组合的Her3拮抗剂按20mg/ml-40mg/ml之间的剂量每5-14天施用。在一个实施方案中，该组合的Her3拮抗剂MOR10703按20mg/ml的剂量每7天施用。在一个实施方案中，该组合的Her3拮抗剂MOR10703按20mg/ml+/-10mg/ml的剂量每7天施用。在一个实施方案中，该组合的Her3拮抗剂MOR10703按20mg/ml+/-10mg/ml的剂量每14天施用。在一个实施方案中，该组合的Her3拮抗剂MOR10703按20mg/ml+/-10mg/ml的剂量每21天施用。
该组合的PI3K抑制剂优选按从约每天0.001至1000mg/kg体重、更优选1.0至30mg/kg体重范围内的剂量每天施用。在一个实施方案中，式I的化合物的剂量在每人每天约10mg至约2000mg的范围内。在一个实例中，1.0至30mg/kg体重。在一个优选实施方案中，式(I)的化合物的剂量在约60mg/天至约120mg/天的范围内，尤其是在该温血动物是成人时。优选地，对于成人，式(I)的化合物的剂量在约60mg/天至约100mg/天的范围内。式(I)的化合物可以按适宜剂量每天一次连续(每天)或间歇(例如7天中有5天)对成人口服施用。例如，磷脂酰肌醇3激酶抑制剂5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其盐酸盐按60mg/天至约120mg/天之间(例如100mg.ml)施用，MOR10703的剂量按20mg/ml-40mg/ml之间的剂量每5-14天施用。在另一实例中，磷脂酰肌醇3激酶抑制剂5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其盐酸盐按60mg/天至约120mg/天之间(例如100mg.ml)施用，MOR10703的剂量按20mg/ml-40mg/ml之间的剂量每14-30天(例如21-28天)施用。在另一实例中，磷脂酰肌醇3激酶抑制剂5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺或其盐酸盐按60mg/天至约120mg/天之间(例如100mg.ml)施用，MOR10703的剂量按20mg/ml-40mg/ml之间的剂量每7-28天(例如每21天)施用。
具体患者的有效量可取决于诸如所治疗的病症、患者的总体健康、施用的方法途径和剂量及副作用的严重度而变(参见例如Maynard等,(1996)A Handbook of SOPs forGood Clinical Practice,Interpharm Press,Boca Raton,Fla.；Dent(2001)GoodLaboratory and Good Clinical Practice,Urch Publ.,London,UK)。
该组合的PI3K和/或Her3拮抗剂的给药途径可以是例如局部或皮肤应用，静脉内、腹腔内、脑内、肌内、眼内、动脉内、脑脊髓内、病灶内注射或输注，或通过缓释系统或植入物(参见例如Sidman等,(1983)Biopolymers 22:547-556；Langer等,(1981)J.Biomed.Mater.Res.15:167-277；Langer(1982)Chem.Tech.12:98-105；Epstein等,(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:3688-3692；Hwang等,(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4030-4034；美国专利号6,350,466和6,316,024)。必要时，该组合还可以包含增溶剂和局部麻醉剂如利卡多因(lidocaine)，以缓解注射部位疼痛。此外，还可以利用肺部施用，例如，通过使用吸入器或喷雾器，并用雾化剂配制。参见例如美国专利号6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078，及PCT公开号WO 92/19244、WO 97/32572、WO 97/44013、WO 98/31346和WO 99/66903，每个专利在此以其整体引入作为参考。
本发明的组合物还可以用本领域已知的多种方法中的一种或多种经一种或多种给药途径施用。例如可通过注射或输注来使用胃肠外给药途径。胃肠外给药途径可代表肠和局部施用之外的施用方式，通常通过注射，且非限制性地包括静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹腔内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊髓内、硬膜上和胸骨内注射和输注。备选地，本发明的组合物可以经非胃肠外途径施用，例如局部、表皮或黏膜给药途径，例如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部。
用诸如式(I)的化合物的PI3K激酶抑制剂共同施用或治疗的方法为本领域已知(参见例如Hardman等,(编辑)(2001)Goodman and Gilman's The Pharmacological Basisof Therapeutics,第10版,McGraw-Hill,New York,N.Y.；Poole和Peterson(编辑)(2001)Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach,Lippincott,Williams&Wilkins,Phila.,Pa.；Chabner和Longo(编辑)(2001)Cancer Chemotherapy andBiotherapy,Lippincott,Williams&Wilkins,Phila.,Pa.)。
PI3K抑制剂可以与本文所述的抗体或其片段组合施用，且可以与本发明的抗体或其片段相隔不到5分钟、相隔不到30分钟、相隔1小时、相隔约1小时、相隔约1小时至约2小时、相隔约2小时至约3小时、相隔约3小时至约4小时、相隔约4小时至约5小时、相隔约5小时至约6小时、相隔约6小时至约7小时、相隔约7小时至约8小时、相隔约8小时至约9小时、相隔约9小时至约10小时、相隔约10小时至约11小时、相隔约11小时至约12小时、相隔约12小时至约18小时、相隔18小时至24小时、相隔24小时至36小时、相隔36小时至48小时、相隔48小时至52小时、相隔52小时至60小时、相隔60小时至72小时、相隔72小时至84小时、相隔84小时至96小时、或相隔96小时至120小时施用。可以在同一次患者就诊内施用两种或多种治疗。
HER3拮抗剂和PI3K抑制剂可以循环施用。循环治疗涉及施用第一种治疗(例如第一预防或治疗剂)一段时间，然后施用第二种治疗(例如第二预防或治疗剂)一段时间，可选地，然后施用第三种治疗(例如预防或治疗剂)一段时间，依此类推，并重复此顺次施用(即循环)，以减少发展对治疗之一的抗性，避免或减少治疗之一的副作用，和/或改善治疗功效。
在某些实施方案中，可以配制本发明的抗体或其片段以确保正确的体内分布。例如，血脑屏障(BBB)排除了许多高亲水性化合物。为了确保本发明的治疗化合物跨过BBB(如果希望)，可将它们配制在例如脂质体中。制备脂质体的方法参见例如美国专利号4,522,811、5,374,548和5,399,331。脂质体可以包含选择性转运入特定细胞或器官的一个或多个部分，从而增强靶向药物递送(参见例如Ranade,(1989)J.Clin.Pharmacol.29:685)。示例性靶向部分包括叶酸或生物素(参见例如Low等的美国专利号5,416,016)；甘露糖苷(Umezawa等,(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038)；抗体(Bloeman等,(1995)FEBS Lett.357:140；Owais等,(1995)Antimicrob.Agents Chemother.39:180)；表面活性蛋白A受体(Briscoe等,(1995)Am.J.Physiol.1233:134)；p 120(Schreier等,(1994)J.Biol.Chem.269:9090)；还参见K.Keinanen；M.L.Laukkanen(1994)FEBS Lett.346:123；J.J.Killion；I.J.Fidler(1994)Immunomethods 4:273。
本发明提供与PI3K抑制剂组合施用HER3拮抗剂。本发明的联合治疗的治疗可以同时或顺次对个体施用。本发明的联合治疗的治疗还可以循环施用。循环治疗涉及施用第一种治疗(例如第一预防或治疗剂)一段时间，然后施用第二种治疗(例如第二预防或治疗剂)一段时间，并重复此顺次施用(即循环)，以减少发展对治疗(例如药物)之一的抗性，避免或减少治疗(例如药物)之一的副作用，和/或改善治疗功效。
HER3拮抗剂与PI3K抑制剂的联合治疗可以同时对个体施用。术语“同时”不限于在完全相同的时间施用治疗(例如预防或治疗剂)，而是意指按某种顺序和在某个时间间隔内对个体施用施用包含本发明的抗体或其片段的药物组合物，使得本发明的抗体可以与PI3K抑制剂一起发挥作用来提供比以其他方式施用它们时提高的益处。例如，可以在同一时间或在不同时间点以任意顺序顺次对个体施用每种治疗；但是，如果不在同一时间施用，则它们应在时间上足够靠近，以提供希望得到的治疗或预防作用。可以任意适当的形式和通过任意适宜的途径分开对个体施用每种治疗。在多种实施方案中，治疗(例如预防或治疗剂)相隔不到15分钟、不到30分钟、不到1小时、相隔约1小时、相隔约1小时至约2小时、相隔约2小时至约3小时、相隔约3小时至约4小时、相隔约4小时至约5小时、相隔约5小时至约6小时、相隔约6小时至约7小时、相隔约7小时至约8小时、相隔约8小时至约9小时、相隔约9小时至约10小时、相隔约10小时至约11小时、相隔约11小时至约12小时、相隔24小时、相隔48小时、相隔72小时、或相隔1周施用。在其他实施方案中，在同一次患者就诊内施用两种或多种治疗(例如预防或治疗剂)。
联合治疗可以以同一药物组合物对个体施用。备选地，联合治疗可以以分开的药物组合物同时对个体施用。治疗剂可以通过相同或不同的给药途径对个体施用。
本发明已得到充分描述，通过以下实施例和权利要求书进一步阐述本发明，该实施例和权利要求书是说明性的，并非意在进一步限制。
实施例
实施例1：HER2阳性乳腺癌在MFP或脑中生长时对PI3K抑制的差异反应
5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺(本文中称为“化合物A”)是有效和特异的广谱I类PI3K抑制剂，对携带HER2扩增以及致癌PI3K催化亚基α(PIK3CA)突变的乳腺癌细胞具有活性。我们比较了化合物A对在裸鼠MFP中或脑实质中生长的相同的人HER2阳性乳腺癌细胞的功效。所检查的三个乳腺癌细胞系包括HER2扩增BT474、HER2扩增和PIK3CA突变(E545K)MDA-MB-361、及PIK3CA突变(H1047R)T-47D细胞系。虽然化合物A导致在MFP中生长的HER2或PI3K驱动乳腺肿瘤的消退，但已建立的脑转移病灶对治疗有抗性(图1A和1B)。与MFP肿瘤相比，化合物A的最后一个剂量后2小时收集的肿瘤组织显示BM中相当的p-AKT抑制水平。除抑制水平外，我们在短期化合物A处理后在BM或MFP肿瘤中观察到相似的p-AKT抑制时程。此外，化合物A在两个部位处生长的肿瘤中以及在这些小鼠的血浆中的浓度相同。总结起来，这些数据表明对PI3K抑制的生长敏感性的显著差异不是简单由于化合物A在脑肿瘤中的药代动力学/药效学特征受损。
实施例2：HER2阳性乳腺癌细胞的抗性需要来自脑微环境的持续影响
通过询问乳腺癌细胞是否需要来自脑微环境的持续影响，我们使我们的研究进入到乳腺癌BM对PI3K抑制的抗性。我们在解离脑转移肿瘤后分离了乳腺癌细胞(称为BT474-Gluc-BR)。体外培养一周后，通过GFP鉴定，绝大多数活细胞为癌细胞。这些“脑微环境暴露”的乳腺癌细胞在体外与亲本细胞类似地对化合物A敏感。此数据表明，脑微环境未诱导乳腺癌细胞的永久性改变，也不存在化合物A抗性克隆在脑中的优先生长。相反，乳腺癌细胞必须接受来自脑微环境的持续支持，以维持抗性。
实施例3：MFP和脑肿瘤具有等同的生长速率
我们首先假定脑微环境诱导乳腺癌细胞增殖性更强，从而降低用靶向药物减慢其生长的能力。虽然与MFP相比在脑实质中用更少的乳腺癌细胞形成肿瘤，但一旦肿瘤建立，则癌细胞在两种环境内的生长速率相同。
实施例4：ErbB家族成员在脑实质(与MFP相比)中生长的乳腺肿瘤中及在人脑转移中高度磷酸化和过量表达
我们假定来自宿主脑实质的分泌因子可激活癌细胞表面受体，以介导对PI3K抑制的抗性。因此，我们进行了磷酸化受体蛋白质阵列分析来考察许多生长因子受体的磷酸化状态在MFP和脑肿瘤之间的差异。阵列分析显示ErbB家族成员EGFR和HER3在BT474-Gluc脑肿瘤中明显过度激活。Western印迹确认，与其MFP副本相比，BT474-Gluc和T-47D-Gluc脑肿瘤二者中的磷酸化HER3和总HER3都提高。与MFP肿瘤相比，虽然BT474-Gluc脑肿瘤显示磷酸化EGFR和总EGFR提高，但T-47D-Gluc脑肿瘤显示少得多。MDA-MB-361-Gluc脑肿瘤显示提高的总EGFR，检测不到的磷酸化蛋白质水平，以及略微提高的总HER3而不是磷酸化HER3。我们的发现引导我们集中在HER3作为我们的乳腺癌BM模型中的抗性的调节物上。与HER3蛋白质的提高一致，人HER3mRNA的表达在脑中生长的BT474-Gluc肿瘤中更高。最后，匹配的人原发性乳腺癌和BM的免疫组织化学分析显示，与原发性癌症的13％(1/8)相比，63％(5/8)脑转移病灶中的HER3蛋白质提高。
实施例5：神经调节蛋白诱导乳腺癌细胞对PI3K抑制的抗性且与MFP相比在鼠脑中表达更多
在220种生长因子的无偏分析中，NRG-1和-2在所测试的三个HER2阳性乳腺癌细胞系中是对化合物A的抗性的最有效诱导物。
由于HER3是NRG的主要受体，我们假定NRG通过HER3发放信号来诱导抗性。因此，我们在体外测试了HER3抑制克服NRG诱导的PI3K或HER2抑制的能力。为了靶向HER3，我们利用了MOR10375，MOR10375是诱导构象变化并将HER3锁定于失活状态的抗体。NRG1诱导的乳腺癌PI3K抑制剂抗性通过加入MOR10375而得到克服。这些数据显示，在化合物A抗性乳腺癌BM中高度活化的NRG-HER3轴在体外驱动乳腺癌细胞对PI3K抑制的抗性。总结起来，这些发现表明，脑微环境组成性产生的NRG通过HER3激活来诱导HER2阳性乳腺癌脑转移对PI3K抑制的抗性。
实施例6：HER3抑制克服脑微环境介导的乳腺肿瘤对PI3K或HER2抑制的抗性
我们测试了HER3抑制剂MOR10703单独或与化合物A组合来减慢BT474-Gluc脑肿瘤BM的生长的能力(图2A-2B)。MOR10703单一治疗未显著减慢脑实质中乳腺癌的生长。但是，HER3抑制与化合物A的组合显著减慢乳腺癌BM的生长。与化合物A单一治疗组相比，联合治疗的肿瘤生长延迟导致BT474-Gluc或MDA-MB-361-Gluc脑肿瘤中的存活分别提高2.5或2倍(3A-B)。
结论：我们的发现显示，已知介导颅外HER2阳性疾病抗性的途径在脑微环境中推理高度活化，并导致从头抗性。在此报道之前，迄今没有关于NRG-1在乳腺癌脑转移中可能的作用的公开数据。虽然已将NRG-1描述为体外生长的乳腺癌细胞中PI3K抑制剂抗性的介导物，但我们描述了其在表达水平天然存在的体内器官内的作用。我们揭示了NRG-1在促进乳腺癌BM的治疗抗性中的转化证据，此外，提出了通过使用诸如本文中所述Her3拮抗剂来克服NRG-1活性和改善脑微环境中的治疗功效的治疗选择。本发明的治疗现在可以用于脑中转移性乳腺癌。
实施例7：方法摘要
细胞系、感染和培养。使用慢病毒载体，用由内部核糖体进入位点分开的编码Gluc和GFP的表达盒转导BT474、MDA-MB-361和T-47D细胞。用FACSAria细胞分选仪(BDBiosciences)分选GFP阳性细胞。BT474-Gluc和T-47D-Gluc细胞维持在补充10％(vol/vol)FBS(Atlanta Biologics)的RPMI 1640中。MDA-MB-361-Gluc维持在补充10％(vol/vol)FBS的DMEM/F12中。
乳腺脂肪垫和脑转移异种移植。在植入肿瘤细胞前一天，对雌性裸鼠(8–9周龄)进行卵巢切除，并植入0.36-mg或0.72-mg 17β-雌二醇药丸(Innovative Research ofAmerica)。在60或90天的失效日期替换药丸。对于乳腺脂肪垫模型，在注射前将5x106BT474-Gluc细胞悬浮在50-μL PBS和Matrigel Matrix High Concentration(BDBiosciences)的1:1混合物中。对于注射入脑，用立体定向仪固定小鼠头部，并通过皮肤切口暴露脑左半球上方的颅骨。使用尖端尺寸为0.5mm直径的高速空气涡轮钻(CH4201S；Champion Dental Products)，在方框(每侧～2.5mm长)的三侧钻穿颅骨，直至谷瓣变松。使用钝钳，将谷瓣拉回，暴露脑实质。将稀释在1μL PBS中的100,000个癌细胞立体定向注入小鼠左额叶。然后将骨瓣放回颅骨中的位置，用组织相容的氰基丙烯酸酯胶密封，缝合颅骨之上的皮肤。所用动物操作均按Public Health Service Policy on Human Care ofLaboratory Animals的指南进行，并遵循Institutional Animal Care and UseCommittee of Massachusetts General Hospital批准的流程。
颅窗、超声成像和肿瘤体积计算。将颅窗植入裸鼠。为了评估肿瘤体积，用小动物超声扫描设备(Vevo 2100,FujiFilm VisualSonics Inc.)通过颅窗进行体内成像。
肿瘤大小监测和存活分析。每周两次通过测量血液中的分泌型Gluc的活性来测量肿瘤体积。血Gluc的测量按之前所述进行53。简言之，从小鼠尾静脉中的轻微划痕采血。收集13μL血，并与3μL 50mM EDTA混合，然后保存在-80℃。将血液转移至不透明96孔板，用肠腔荧光素(CTZ；Nanolight)作为底物和平板发光检测仪(Centro XS LB960；BertholdTechnologies)测量Gluc活性。发光检测仪设为自动注入100μL含50μg/mL CTZ的PBS，获取光子计数1秒。对于存活分析，在小鼠体重减轻超过20％或显示长期抑郁或神经受损迹象时实施安乐死。
试剂和处理。化合物A按30或50mg/kg每天一次通过口服灌胃(p.o.)施用。MOR10703按25mg/kg每两天通过腹腔内注射(i.p.)施用。化合物A和MOR10703都获自Novartis。曲妥珠单抗(Trastuzumab)(Genentech)和帕妥珠单抗(pertuzumab，Genetech)按15mg/kg每周一次i.p.施用。曲妥珠单抗和帕妥珠单抗都获自麻省总医院药房。Neratinib按20mg/kg每天一次p.o.施用，购自LC laboratories。重组NRG1β获自R&DSystems。
化合物A浓度测量。收集肿瘤样品，称重，并按固定的重量/体积比在LysingMatrix D管(MP Biomedicals)中在RIPA缓冲液(Cell Signaling Technologies(CST))中裂解。样品在微型离心机中13,000转/分钟、4℃离心10分钟。从裂解物收集上清，并保存在-80℃。在Inventiv Health Clinical Lab,Inc.通过LC-MS/MS分析肿瘤裂解物中的化合物A浓度。然后通过肿瘤体积/裂解缓冲液比值归一化，产生肿瘤组织中的化合物A暴露(ng/mL)。
从脑转移肿瘤组织分离癌细胞。用剪刀和手术刀在RPMI培养基中切碎肿瘤组织，在37℃下在含1mg/mL胶原酶/分散酶混合物(Roche)的RPMI+10％FBS+1％青霉素/链霉素(P/S)中震荡孵育1小时，然后1500转/分钟离心组织5分钟，移去上清。将组织重新悬浮于RPMI+10％FBS+1％P/S中，充分吹吸解离团块。此外，在接种孔板之前通过70m滤器吹吸混合物。第二天更换培养基。
定量实时聚合酶链反应。使用厂家的包含可选的柱上DNA消化的流程，用RNEasyMini Kit(Qiagen)提取RNA。利用iScript Supermix RT系统(BioRad)合成cDNA。用以下引物进行RT-PCR反应：HER3正向GCCAAGGGCCCAATCTACAA(SEQ ID NO:380)和反向TGTCAGATGGGTTTTGCCGA(SEQ ID NO:381)；HER2正向AGCCGCGAGCACCCAAGT(SEQ ID NO:382)和反向TTGGTGGGCAGGTAGGTGAGTT(SEQ ID NO:383)；GFAP正向GAGAGAAAGGTTGAATCGCTGGA(SEQ ID NO:384)和反向CGGGACGCAGCGTCTGTG(SEQ ID NO:385)；Iba1正向GTCCTTGAAGCGAATGCTGG(SEQ ID NO:386)和反向CATTCTCAAGATGGCAGATC(SEQ ID NO:387)；肌动蛋白正向AGAAAATCTGGCACCACACC(SEQ ID NO:388)和反向CTCCTTAATGTCACGCACG(SEQID NO:389)；NRG-1正向GGTGATCGCTGCCAAAACTA(SEQ ID NO:390)和反向GAGTGATGGGCTGTGGAAGT(SEQ ID NO:391)；NRG-2正向GGTAATCCCCAGCCTTCCTA(SEQ ID NO:392)和反向GGTTGATGCCCTCGATGTAG(SEQ ID NO:393)。
分泌型生长因子的抗性分析。鉴定了一系列代表分泌型和单跨膜蛋白质的cDNA构建体(按之前所述56)，并从Invitrogen Ultimate ORF collection购买。(文库由DMPBioArchive维持)。pCDNA-DEST40(Invitrogen)是所有克隆的质粒载体，通过全测序确认所有克隆插入片段。对于此研究，用338个cDNA构建体的系列(代表220个独特的分泌型和单跨膜蛋白质)来在每种化合物处理存在下被挽救的配体——每个cDNA构建体用HEK293T/17反向转染。孵育3天后，然后将分泌型蛋白质转移至所研究的细胞系，然后加入化合物孵育96小时。然后用CellTiter-Glo测定来进行终点读数。三个重复的原始CTG读数的板对板归一化之后，用以下公式计算每种分泌型蛋白质的挽救％值：挽救％＝[Median(药物+supe)–Median(药物)]/[Median(DMSO)–Median(药物)]。还计算挽救％值的统计概率得分：p-值＝Chidist[Z(药物+supe)2,1],其中Z(药物+supe)＝[Median(药物+supe)–Median(药物)]/Std(药物+supe)，其中药物+supe代表用预期包含一种独特分泌型蛋白质的单种上清处理的单个样品。然后用SpotFire软件对数据点作图。在每个散点图中标记出挽救≥20％、P-值≤0.05的分泌型蛋白质。
体外细胞生长测定。用xCELLigence系统(Acea Biosciences Inc.)来评估T-47D、BT474和MDA-MB-361细胞的细胞指数。xCELLigence测量跨集成在组织培养E平板底部的微电极的电阻来提供关于细胞的生物学状态(包括细胞数目、形态和活率)的信息。加入药物前一天，将细胞按每孔6000-10000个细胞的密度接种在96孔E平板中的90μl生长培养基中。通过96孔E平板的集成传感电极阵列每15分钟监测细胞，持续至24小时。孵育24小时后，取出E平板，首先加入MOR10703(100nM)并孵育1小时，然后加入NRG1(10ng)和/或化合物A(1μM)。每种处理一式三份测试。加入药物后按1小时间隔测量电阻，直至实验结束。从电阻计算细胞指数值(其是作为所测量的电阻的相对变化推导来代表所附着的细胞数目的无量纲参数)，并用供应商提供的RTCA软件作图。实验结束时，通过按照厂家的流程用CellTiter-GloLuminescent Cell Viability Assay(Promega；Madison,WI)测量细胞ATP含量来测定细胞生长和/或活率。
统计学分析。除非另有说明，数据表示为平均值±SEM。基本统计检验是单因素方差分析，用Tukey事后检验来比较所有柱对。在分析中只存在两个变量时，使用t检验(不等方差双尾)。通过测定达到特定血Gluc活性所耗费的时间(按天计)来达到肿瘤生长的显著差异。用Kaplan–Meier法估计存活曲线，在确定统计学差异时使用中位存活天数。正文和图注中通篇定义统计显著性。用GraphPad Prism进行所有统计学分析。
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Claims (5)

1.药物组合的用途，用于制备治疗乳腺癌脑转移的药盒，所述药物组合包含：(a)选自式(I)的化合物或其可药用盐的磷脂酰肌醇3激酶抑制剂
Figure FDA0003220444730000011
其中式(I)的化合物是5-(2,6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺；和(b)Her3拮抗剂，其为HER3抗体或抗体片段，其中所述Her3拮抗剂包含SEQ ID NO:128的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:129的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:130的重链可变区CDR3，及SEQ ID NO:131的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:132的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:133的轻链可变区CDR3，且其中所述抗体或其片段阻断依赖配体和不依赖配体的信号转导二者，其中所述药物组合中的(a)和(b)的施用是同时的、分开的或顺次的。
2.根据权利要求1的药物组合的用途，其中所述可药用盐是盐酸盐。
3.根据权利要求1的药物组合的用途，其中所述HER3抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:141的重链可变区和SEQ ID NO:140的轻链可变区。
4.根据权利要求3所述的药物组合的用途，其中所述HER3抗体包含SEQ ID NO:145的重链和SEQ ID NO:144的轻链。
5.根据权利要求1－4中任一项所述的药物组合的用途，其中所述HER3抗体或抗体片段按20mg/ml-40mg/ml之间的剂量每7-28天施用，式(I)的化合物或其可药用盐按从约60mg/天至约120mg/天范围内的剂量每天施用。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110115758B (zh) * 2018-02-05 2021-05-11 中山大学 Pik3ip1蛋白在调节t细胞反应和制备抗肿瘤药物中的应用

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5183884A (en) 1989-12-01 1993-02-02 United States Of America Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor
JPH06507404A (ja) 1991-05-01 1994-08-25 ヘンリー　エム．ジャクソン　ファウンデイション　フォー　ザ　アドバンスメント　オブ　ミリタリー　メディスン 感染性の呼吸性疾患の治療方法
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US6132764A (en) 1994-08-05 2000-10-17 Targesome, Inc. Targeted polymerized liposome diagnostic and treatment agents
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
DK0885002T3 (da) 1996-03-04 2011-08-22 Penn State Res Found Materialer og fremgangsmåder til forøgelse af cellulær internalisering
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
WO1998031346A1 (en) 1997-01-16 1998-07-23 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
JP2002518432A (ja) 1998-06-24 2002-06-25 アドバンスト インハレーション リサーチ，インコーポレイテッド 吸入器から放出される大多孔性粒子
WO2004072266A2 (en) 2003-02-13 2004-08-26 Kalobios Inc. Antibody affinity engineering by serial epitope-guided complementarity replacement
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
JO2660B1 (en) * 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
MX338504B (es) 2007-09-12 2016-04-20 Genentech Inc Combinaciones de compuestos inhibidores de fosfoinosituro 3-cinasa y agentes quimioterapeuticos, y metodos de uso.
ES2439705T3 (es) 2007-10-25 2014-01-24 Genentech, Inc. Proceso para la preparación de compuestos de tienopirimidina
AU2009221164B2 (en) * 2008-03-05 2012-07-26 Novartis Ag Use of pyrimidine derivatives for the treatment of EGFR dependent diseases or diseases that have acquired resistance to agents that target EGFR family members
MX2013002046A (es) 2010-08-20 2013-04-03 Novartis Ag Anticuerpos para el receptor del factor de crecimiento epidermico 3 (her3).
ES2758433T3 (es) 2011-12-05 2020-05-05 Novartis Ag Anticuerpos contra el receptor 3 del factor de crecimiento epidérmico (HER3)
KR20210049187A (ko) 2012-08-16 2021-05-04 노파르티스 아게 Pi3k 억제제와 c-met 억제제의 조합물
WO2014177915A1 (en) * 2013-05-01 2014-11-06 Piramal Enterprises Limited Cancer combination therapy using imidazo[4,5-c]quinoline derivatives
ES2729202T3 (es) 2014-07-16 2019-10-30 Dana Farber Cancer Inst Inc Et Al Inhibición de HER3 en cánceres ováricos serosos de grado bajo

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