CN108362799B - 一种中心切割二维液相色谱-质谱分离分析系统及其在药物杂质鉴定中的应用方法 - Google Patents

一种中心切割二维液相色谱-质谱分离分析系统及其在药物杂质鉴定中的应用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种中心切割二维液相色谱质谱分离分析系统及杂质鉴定方法，包括一维馏分收集、难挥发性盐去除、药物杂质洗脱和色谱柱再生四个阶段，其特征在于，包括液相色谱泵、自动进样器、转换阀、液相色谱柱、捕集柱、紫外检测器、质谱检测器、废液接收装置；所述液相色谱泵包括第一液相色谱泵和第二液相色谱泵。该方法适用于酸性离子对试剂和缓冲盐的脱除，用于药物及其杂质结构的在线鉴定。本方法即不改变药典记录的药物杂质分离方法，又避免了离线收集馏分和除盐的复杂程序，实现了药物杂质的在线鉴定，为用难挥发性流动相分离药物杂质的药物品种提供了杂质鉴定的新途径。

Description

一种中心切割二维液相色谱-质谱分离分析系统及其在药物 杂质鉴定中的应用方法
技术领域
本发明具体涉及一种中心切割二维液相色谱-质谱系统及其在药物杂质鉴定中的应用方法。属于制药行业技术领域。
背景技术
碱性化合物占活性化合物和药物的80％以上。为了实现碱性药物的质量控制，其杂质定性分析尤为重要。2012年，国家相关法规规定所有仿制药均需分批次进行一致性评价。在首批需完成一致性评价的280余种药物中，有大量品种为碱性药物。碱性药物容易出现色谱峰拖尾和展宽的现象。为了改善碱性药物峰型、改善药物主体与杂质的分离度，常常在碱性药物有关物质分离的流动相中添加难挥发性缓冲盐。还有部分药物有关物质的分离仅仅依靠添加难挥发性缓冲盐仍然不能获得良好的峰型和分离度，还需加入离子对试剂。由于难挥发性缓冲盐和离子对试剂与质谱检测器不兼容，造成药物有关物质分析的液相方法不能直接用于药物有关物质的质谱定性分析。为了实现这些药物有关物质的质谱定性分析，部分学者用质谱兼容的流动相代替药典中质谱不兼容的流动相。但改变流动相的组成有可能改变药物及有关物质的分离选择性甚至难以实现药物主体与有关物质的分离。此外，对于部分缺乏对照品、需用相对保留时间鉴定有关物质种类的药物，改变流动相组成将造成有关物质难以识别等问题。离线二维方法也被报道用于药物馏分除盐(含离子对试剂)。该方法仍采用药典记录的方法分离药物有关物质，通过收集该方法分离所得药物杂质馏分，再以离线固相萃取等方法实现药物杂质与难挥发性盐、离子对试剂的分离，最后用挥发性流动相洗脱药物杂质，收集洗脱液、浓缩、重溶、再次进样和质谱检测，从而实现既不改变药典方法又实现药物杂质质谱定性的目的。这种方法在一定程度上解决了药物杂质脱盐的问题，但它自动化程度低，且涉及大量离线步骤，如馏分收集、浓缩、重溶等，容易导致组分变化甚至丢失。近年来，在线二维液相色谱质谱方法逐渐用于碱性药物杂质的鉴定，如反相-反相二维色谱/质谱。该方法以药典记录的药物有关物质分析方法为一维分离方法，将含有药物杂质的馏分收集到定量环中或被捕集柱捕集，随后通过阀切换，用质谱兼容的二维流动相将定量环中或捕集柱上的药物杂质馏分冲洗到二维色谱柱中，利用药物杂质在二维色谱柱上的保留强于难挥发性缓冲盐的性质实现药物杂质与难挥发性缓冲盐的分离，待难挥发性缓冲盐洗脱后，再加大流动相洗脱强度，将药物杂质洗脱到质谱检测器中，并最终实现药物杂质的质谱定性分析。已报道的在线二维色谱技术可实现难挥发性缓冲盐，如磷酸盐的去除，但难以实现离子对试剂的完整去除。因此，不适合从含有离子对试剂的流动相中鉴定药物杂质。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种中心切割二维液相色谱质谱系统，用于在线去除难挥发性缓冲盐和离子对试剂，并最终实现从含有难挥发性缓冲盐和离子对试剂的流动相馏分中鉴定药物杂质。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
一种中心切割二维液相色谱质谱分离分析系统，本分离系统包括一维馏分收集、强阴离子化合物(含离子对试剂)去除、药物杂质鉴定和捕集柱再生四个阶段，包括液相色谱泵、自动进样器、转换阀、液相色谱柱、捕集柱、紫外检测器、质谱检测器、废液接收装置；所述液相色谱泵包括第一液相色谱泵和第二液相色谱泵；所述转换阀包括转换阀Ⅰ、转换阀Ⅱ和转换阀Ⅲ；所述液相色谱柱包括第一液相色谱柱和第二液相色谱柱；所述废液接收装置包括第一废液接收装置、第二废液接收装置和第三废液接收装置；所述第一液相色谱泵与自动进样器进口连接，所述进样器出口与第一色谱柱进口连接，所述第一色谱柱出口与紫外检测器进口连接，所述紫外检测器出口与转换阀Ⅰ连接，所述转换阀Ⅰ连接有定量环，所述转换阀Ⅰ还连接第二液相色谱泵和捕集柱，所述捕集柱的出口与转换阀Ⅱ连接，所述转换阀Ⅱ与第二液相色谱柱连接，所述第二液相色谱柱的出口与转换阀Ⅲ相连接，所述转换阀Ⅲ连接质谱检测器。
优选的，在一维馏分收集阶段。第一液相色谱泵输出端与自动进样器进口连接，自动进样器出口与第一液相色谱柱连接，第一液相色谱柱与紫外检测器相连，所述紫外检测器通过转换阀Ⅰ与定量环进口连接，定量环出口通过转换阀I与第一废液接收装置连接；第二液相色谱泵通过转换阀Ⅰ与捕集柱进口连接，捕集柱出口通过转换阀Ⅱ与第二液相色谱柱进口连接，第二液相色谱柱出口通过转换阀Ⅲ与第三废液接收装置连接；第二液相色谱泵的流动相通过转换阀Ⅰ流向捕集柱和第二液相色谱柱，实现捕集柱和第二液相色谱柱的同时平衡。
优选的，强阴离子化合物(含离子对试剂)去除阶段。当目标组分全部收集到定量环中时，通过转换阀Ⅰ将定量环与紫外检测器和第一废液收集装置断开，使紫外检测器通过转换阀Ⅰ与第一废液回收装置连接；第二液相色谱泵通过转换阀Ⅰ与定量环进口连接；定量环出口通过转换阀Ⅰ与捕集柱进口连接，捕集柱通过转换阀Ⅱ与第二液相色谱柱连接；第二液相色谱柱通过转换阀Ⅲ与第三废液回收装置连接；第二液相色谱泵的流动相流经定量环，将定量环中收集的目标组分冲洗到捕集柱，强阴离子化合物(含离子对试剂)吸附到捕集柱上，目标化合物和阳离子随第二液相色谱泵的流动相流向第二液相色谱柱，阳离子于死时间从第二液相色谱柱洗脱。
优选的，在药物杂质鉴定阶段，第二液相色谱泵通过转换阀Ⅰ与捕集柱进口连接，捕集柱出口通过转换阀Ⅱ与第二液相色谱柱连接，第二液相色谱柱通过转换阀Ⅲ与质谱检测器连接；第二液相色谱泵的流动相流经捕集柱和第二液相色谱柱，将目标化合物洗脱到质谱检测装置，进行目标化合物的质谱信息采集。
优选的，在捕集柱再生阶段，捕集柱的出口通过转换阀Ⅱ的与第二废液回收装置连接，用挥发性碱性溶液做流动相将捕集柱吸附的强阴离子化合物(含离子对试剂)洗脱，洗脱液通过转换阀Ⅱ流向废液收集装置，强阴离子化合物(含离子对试剂)从捕集柱洗脱后，用挥发性酸性溶液做流动相，置换捕集柱中的挥发性碱性溶液并平衡捕集柱，待捕集柱中的挥发性碱性溶液被完全置换后，系统切换到一维馏分收集阶段。
优选的，所述第一液相色谱柱为键合碳十八烷基或碳八烷基的反相作用色谱固定相，包括固定相1和固定相2，其结构式如下：
Figure GDA0001677646800000031
捕集柱为键合丙基氨基的弱阴离子交换固定相，包括固定相3和固定相4，其结构式如下；
Figure GDA0001677646800000041
第二液相色谱柱为键合碳十八烷基、碳八烷基和氯丙基共聚的碳十八烷基反相作用色谱固定相，包括固定相1、固定相2和固定相5，固定相5的结构式如下：
Figure GDA0001677646800000042
其中R1为聚苯乙烯，R2为杂化硅胶。
优选的，所述质谱检测器为离子肼-飞行时间质谱检测器。
优选的，所述强阴离子化合物(含离子对试剂)为单独使用或者混合使用的含磷酸盐、硫酸盐、辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠；
优选的，所述阳离子为钾离子、钠离子或铵离子；
优选的，所述挥发性碱性溶液为含体积分数为0.1％-5％氨水的有机溶剂溶液；
挥发性酸性溶液为含体积分数为0.1％-5％甲酸、乙酸、甲酸铵或乙酸铵的水溶液；
进一步优选的，所述有机溶剂溶液为含乙腈、甲醇或乙醇体积分数为0％-100％的水溶液；死时间为尿嘧啶在捕集柱和第二液相色谱柱的保留时间。
优选的，所述第一液相色谱泵为单元、二元、三元或者四元高效液相色谱泵，所述第二液相色谱泵为三元或四元高效液相色谱泵。
优选的，所述第一液相色谱泵的流动相A通道为有机溶剂溶液或有机溶剂与强阴离子化合物(含离子对试剂)的混合溶液；B通道为强阴离子化合物(含离子对试剂)溶液。
优选的，所述第二液相色谱泵的C1通道和C2通道均为有机溶剂溶液和挥发性酸性溶液的混合溶液；C3通道为挥发性碱性溶液与有机溶剂溶液的混合溶液。
优选的，二位六通阀I的切阀起始时间为化合物保留时间减去0.01-0.1min，切阀的结束时间为化合物保留时间加上0.01-0.1min；二位六通阀II的切阀起始时间为化合物在质谱检测器的出峰时间加上0.5-2min，二位六通阀II切阀结束时间为二位六通阀II切阀起始时间加上5-15min；二位六通阀III的切阀起始时间为二位六通阀I切阀结束时间加上1-5min，二位六通阀III的切阀结束时间为二位六通阀III切阀起始时间加上1-5min。
本发明还提供了利用上述系统进行的药物杂质鉴定方法，包括以下步骤：
将药物研磨成粉末，加入到甲醇水溶液中，超声，取上清液过0.22μm聚四氟乙烯膜，利用上述分离系统进行分离分析，根据质谱图推断杂质成分。
所述甲醇水溶液为甲醇与水体积比从0:100到100:0的混合溶液。
本发明的有益效果：本发明提供了一种中心切割二维液相色谱-质谱系统，用于在线去除难挥发性缓冲盐和离子对试剂，并最终实现从含有难挥发性缓冲盐和离子对试剂的流动相馏分中鉴定药物杂质。与传统二维液相色谱系统相比，本中心切割二维液相系统具有基于定量环接口切阀压力小的优势，又具有基于捕集柱接口去除杂质的优势，并且避免了基于停留模式需中断流速的问题。与传统捕集柱二维系统干扰物质不保留、吸附目标化合物的模式不同，本文发展的中心切割二维系统的捕集柱吸附干扰物质、不保留目标化合物，具有目标化合物洗脱快、除干扰物质能力强等优势。
本发明的分离系统与现有技术相比，具有结构简单、容易维护、系统运行可用商品化色谱质谱软件支持、容易推广等优势；且本系统使用氨基柱做捕集柱，具有吸附强阴离子化合物(含离子对试剂)的功能，从而实现去除强阴离子化合物(含离子对试剂)的作用。
附图说明
图1一维馏分收集系统连接图；
图2难挥发性流动相去除系统连接图；
图3目标化合物洗脱系统连接图；
图4色谱柱再生系统连接图；
图5舒必利药物中化合物1和2的一维分离及馏分切割图；
图6a舒必利化合物1的质谱TIC图；
图6b舒必利化合物2的质谱TIC图；
图7舒必利药物中化合物3和4的一维分离及馏分切割图；
图8a舒必利化合物3的质谱TIC图；
图8b舒必利化合物4的质谱TIC图；
图9舒必利化合物3结构图；
图10舒必利药物中化合物5和6的一维分离及馏分切割图；
图11a舒必利化合物5的质谱TIC图；
图11b舒必利化合物6的质谱TIC图；
图12舒必利化合物5结构图；
图13舒必利药物中化合物7的一维分离及馏分切割图；
图14舒必利化合物7质谱TIC图；
图15舒必利化合物7结构图；
图16盐酸多巴酚丁胺及其杂质一维分离及馏分切割图；
图17a盐酸多巴酚丁胺二维谱图；
图17b盐酸多巴酚丁胺杂质一级质谱图；
图17c盐酸多巴酚丁胺杂质二级质谱图；
图18阿米替林一维分离谱及馏分切割图；
图19a为阿米替林的一级质谱图；
图19b为阿米替林的二级质谱图；
图20盐酸倍他司汀及其杂质一维分离及馏分切割图；
图21a盐酸倍他司汀未知杂质一级谱图；
图21b盐酸倍他司汀未知杂质二级谱图1；
图21c盐酸倍他司汀未知杂质二级谱图2；
图21d盐酸倍他司汀未知杂质二级谱图3；
图22盐酸倍他司汀未知杂质可能的结构图。
附图标记：1～6为二位六通阀Ⅰ(即转换阀I)的1～6号接口；7～12为二位六通阀II(即转换阀II)的7～12号接口；13～18为二位六通阀III(即转换阀III)的13～18号接口；19第一液相色谱泵；20-自动进样器；21-第一液相色谱柱；22-紫外检测器；23-第一废液接收装置；24-捕集柱；25-第二液相色谱泵；26第二液相色谱柱；27-第三废液接收装置；28-定量环；29-第二废液接收装置；30-质谱检测器。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
如图1～图4所示，为本发明中心切割二维高效液相色谱分离系统的一个具体实施方式。本分离系统包括一维馏分收集、难挥发性盐去除、药物杂质洗脱和色谱柱再生四个阶段，包括液相色谱泵、自动进样器20、二位六通阀、液相色谱柱、紫外检测器22、质谱检测器30和捕集柱24、废液接收装置；所述液相色谱泵包括第一液相色谱泵19和第二液相色谱泵25；所述二位六通阀包括二位六通阀Ⅰ、二位六通阀Ⅱ和二位六通阀Ⅲ，所述液相色谱柱包括第一液相色谱柱21和第二液相色谱柱26；所述废液接收装置包括第一废液瓶23、第二废液瓶29和第三废液瓶27；所述第一液相色谱柱21与自动进样器20进口连接，所述进样器出口与第一色谱柱进口连接，所述第一色谱柱出口与紫外检测器22进口连接，所述紫外检测器22出口与二位六通阀Ⅰ连接，所述二位六通阀Ⅰ连接有定量环28，所述二位六通阀Ⅰ还连接第二液相色谱泵25和捕集柱24，所述捕集柱24的出口与二位六通阀Ⅱ连接，所述二位六通阀Ⅱ与第二液相色谱柱26连接，所述第二液相色谱柱26的出口与二位六通阀Ⅲ相连接，所述二位六通阀Ⅲ连接质谱检测器30。
在一维馏分收集阶段，如附图1所示，作为第一维液相泵的第一液相色谱泵19输出端流经自动进样器20，将自动进样器20中的样品带到作为第一维色谱柱的第一液相色谱柱21上，第一液相色谱柱21的输出端与紫外检测器22相连。紫外检测器22与二位六通阀I的3号接口相连。作为第二维液相泵的第二液相色谱泵25的输出端与二位六通阀I的5号接口相连。当二位六通阀I的4号接口与3号接口相连收集馏分时，二位六通阀I的5号接口与6号接口相连，二位六通阀I的6号接口与作为第二维色谱柱的捕集柱24相连，捕集柱24与二位六通阀II的7号接口相连，二位六通阀II的7号接口与12号接口相连，二位六通阀II的12号接口与第二液相色谱柱26相连，第二液相色谱柱26再与二位六通阀III的13号接口相连，二位六通阀III的13号接口与18号接口相连，二位六通阀III的18号接口通向第三废液瓶27，2、8、18号接口分别连接有第一废液瓶23、第二废液瓶29和第三废液瓶27。当目标组分开始从紫外检测器22流出，二位六通阀I的3号接口与4号接口相连，直到目标组分全部收集到定量环28中，二位六通阀I的3号接口切换到与2号接口相连。与此同时，二位六通阀I的5号接口与二位六通阀I的6号接口相连，第二液相色谱泵25的流动相通过二位六通阀I流向捕集柱24和第二液相色谱柱26，实现捕集柱24和第二液相色谱柱26的同时平衡。
在强阴离子化合物(含离子对试剂)去除阶段，如附图2所示，二位六通阀I的4号接口与二位六通阀I的5号接口相连，第二液相色谱泵25的流动相流经定量环28，将定量环28中收集的目标组分冲洗到捕集柱24。强阴离子化合物(含离子对试剂)吸附到捕集柱24上，目标化合物和阳离子随第二液相色谱泵25的流动相流向第二液相色谱柱26，难挥发的阳离子无法在第二液相色谱柱26上保留，于死时间从第二液相色谱柱26洗脱。
待阳离子从第二液相色谱柱26洗脱后，系统切换到药物杂质鉴定阶段，如附图3所示，紫外检测器22与二位六通阀I的3号接口相连，二位六通阀I的3号接口与二位六通阀I的4号接口相连，二位六通阀I的4号接口和1号接口与定量环28相连，二位六通阀I的2号接口通向第一废液瓶，第二液相色谱泵25与二位六通阀I的5号接口相连，并通过二位六通阀I的6号接口与捕集柱24相连。捕集柱24与二位六通阀II的7号接口相连，二位六通阀II的7号接口与12号接口相连并通过二位六通阀II的12号接口与捕集柱24相连。捕集柱24与二位六通阀III的13号接口相连，二位六通阀III的13号接口切换到与二位六通阀III的14号接口相连，二位六通阀III的14号接口与IT-TOF质谱相连。第二液相色谱泵25的流动相流经捕集柱24和第二液相色谱柱26，将目标化合物洗脱到IT-TOF质谱，进行目标化合物的质谱信息采集。
待目标化合物鉴定结束后，系统切换到捕集柱再生阶段，如附图4所示，即二位六通阀II的7号接口切换到与二位六通阀II的12号接口相连，用挥发性碱性溶液做流动相将捕集柱吸附的强阴离子化合物(含离子对试剂)洗脱，洗脱液通过二位六通阀II的12号接口流向第二废液瓶29。强阴离子化合物(含离子对试剂)从捕集柱洗脱后，用挥发性酸性溶液做流动相，置换捕集柱中的挥发性碱性溶液并平衡捕集柱。待捕集柱中的碱性溶液被完全置换后，系统切换到一维馏分收集阶段，如附图1所示。
9、10、11、15、16、17号接口不用，用塞子堵死。
实施例1
1、实验仪器与设备：
第一液相色谱泵：LC-20AD高压二元泵；第二液相色谱泵：带低压梯度比例阀的LC-20AD泵；自动进样器：SIL-20AC；柱温箱：LC-20CTO；色谱工作站：LCSolution。
2、样品：
将1片舒必利片研磨成粉末，全部转移至5ml试管中，加入2ml体积分数为50％的甲醇水溶液，超声30min，取上清液过0.22μm聚四氟乙烯膜，进样分析。
3、检测条件：
色谱柱：第一液相色谱柱为键合碳十八烷基的反相色谱柱；捕集柱为键合丙基氨基的弱阴离子交换固定相；第二液相色谱柱为键合碳十八烷基和氯丙基的反相色谱柱；
流动相：第一液相色谱泵的A通道为含有体积分数为20％乙腈的离子对水溶液。离子对水溶液为1升水中含1克辛烷磺酸钠和6.8克磷酸二氢钾的溶液，用磷酸调节溶液pH为6.8；第二液相色谱泵的C1通道为甲酸：水(1:100，v/v)溶液；第二液相色谱泵的C2通道为甲酸：乙腈：水(1:95:5，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C3通道为氨水：乙腈：水(1:95:5，v/v/v)溶液；
梯度和流速见表1；阀切换条件见表2；进样体积：10μL；柱温：30摄氏度；检测波长：240nm。
表1舒必利片化合物1和化合物2的鉴定梯度条件
Figure GDA0001677646800000091
表2阀切换时间
Figure GDA0001677646800000092
Figure GDA0001677646800000101
4、质谱条件：
离子源：ES+模式；质谱仪：岛津IT-TOF质谱仪；雾化器流速：3L/min；加热器流速：10L/min；接口温度：200℃；DL温度：230℃；加热模块温度：400℃；干燥气流速：10L/min；接口电压：1.7kV。
5、化合物鉴定：
按上述条件分离舒必利及其杂质，得色谱图如附图5所示。附图5中，虚线方框标识的范围为定量环收集的范围。化合物1和2分别被定量环收集并经捕集柱和第二液相色谱柱脱盐后，IT-TOF鉴定的质谱图如附图6a和图6b所示。根据1级质谱图和2级质谱图，推断化合物1和化合物2分别为2-甲氧基-5-磺胺基苯甲酰胺和舒必利。
实施例2
实验仪器与设备、样品、色谱柱和质谱条件同实施案例1
1、样品：
将1片舒必利片研磨成粉末，全部转移至5ml试管中，加入2ml体积分数为50％的甲醇水溶液，超声30min，取上清液过0.22μm聚四氟乙烯膜，进样分析。
2、检测条件：
色谱柱：第一液相色谱柱为键合碳十八烷基的反相色谱柱；捕集柱为键合丙基氨基的弱阴离子交换固定相；第二液相色谱柱位键合碳十八烷基和氯丙基的反相色谱柱；
流动相：第一液相色谱泵的A通道为含有体积分数为20％乙腈的离子对水溶液。离子对水溶液为1升水中含1克辛烷磺酸钠和6.8克磷酸二氢钾的溶液，用磷酸调节溶液pH为6.8；第二液相色谱泵的C1通道为乙酸：水(1:100，v/v)溶液；第二液相色谱泵的C2通道为乙酸：甲醇：水(1:95:5，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C3通道为氨水：甲醇：水(1:95:5，v/v/v)溶液；
梯度和流速见表3；阀切换条件见表4；进样体积：10μL；柱温：30oC；检测波长：240nm。
表3舒必利片化合物3和化合物4的鉴定梯度条件
Figure GDA0001677646800000102
Figure GDA0001677646800000111
表4阀切换时间
Figure GDA0001677646800000112
3、化合物鉴定：
按上述条件分离舒必利及其杂质，得色谱图如附图7所示。附图7中，虚线方框标识的范围为定量环收集的范围。化合物3和4分别被定量环收集并经捕集柱和第二液相色谱柱脱盐后，IT-TOF鉴定的质谱图如附图8a和8b所示。根据1级质谱图和2级质谱图，推断化合物4为1-乙基-2-[[(2-甲氧基-5-苯甲酰胺磺胺基)氨基酸]甲基]吡咯烷1-氧化物，即杂质F。化合物3为含299.0806和180.9029两种二级碎片的多氨基舒必利类物质，见图9。
实施案例3
实验仪器与设备、样品、色谱柱和质谱条件同实施案例1
1、样品：
将1片舒必利片研磨成粉末，全部转移至5ml试管中，加入2ml体积分数为50％的甲醇水溶液，超声30min，取上清液过0.22μm聚四氟乙烯膜，进样分析。
2、检测条件：
色谱柱：第一液相色谱柱为键合碳十八烷基的反相色谱柱；捕集柱为键合丙基氨基的弱阴离子交换固定相；第二液相色谱柱位键合碳十八烷基和氯丙基的反相色谱柱；
流动相：第一液相色谱泵的A通道为含有体积分数为20％乙腈的离子对水溶液。离子对水溶液为1升水中含1克辛烷磺酸钠和6.8克磷酸二氢钾的溶液，用磷酸调节溶液pH为6.8；第二液相色谱泵C1通道为甲酸：水(1:100，v/v)溶液；第二液相色谱泵的C2通道为甲酸：乙醇：水(1:95:5，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C3通道为氨水：乙腈：水(1:95:5，v/v/v)溶液；
梯度和流速见表5；阀切换条件见表6；进样体积：10μL；柱温：30oC；检测波长：240nm。
表5舒必利片化合物5和化合物6的鉴定梯度条件
Figure GDA0001677646800000121
表6阀切换时间
Figure GDA0001677646800000122
Figure GDA0001677646800000131
3、化合物鉴定：
按上述条件分离舒必利及其杂质，得色谱图如附图10所示。附图10中，虚线方框标识的范围为定量环收集的范围。化合物5和6分别被定量环收集并经捕集柱和第二液相色谱柱脱盐后，IT-TOF鉴定的质谱图如附图11a和图11b所示。根据1级质谱图和2级质谱图，推断化合物6为N-[(1-乙基吡咯烷-2-yl)甲基]-2-羟基-5-磺胺基苯甲酰胺，即杂质G。化合物5为含有与舒必利相同碎片214.0155的未知杂质，如图12。
实施案例4
实验仪器与设备、样品、色谱柱和质谱条件同实施案例1
1、检测条件：
流动相：第一液相色谱泵的A通道为含有体积分数为20％乙腈的离子对水溶液。离子对水溶液为1升水中含1克辛烷磺酸钠和6.8克磷酸二氢钾的溶液，用磷酸调节溶液pH为6.8；第二液相色谱泵的B通道为甲酸：水(1:100，v/v)溶液；第二液相色谱泵的C1通道为甲酸：乙腈：水(1:5:95，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C2通道为甲酸：乙腈：水(1:95:5，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C3通道为氨水：甲醇：水(1:95:5，v/v/v)溶液；
梯度和流速见表7；阀切换条件见表8；进样体积：10μL；柱温：30oC；检测波长：240nm。
表7舒必利片化合物7的鉴定梯度条件
Figure GDA0001677646800000132
表8阀切换时间
Figure GDA0001677646800000141
2、化合物鉴定：
按上述条件分离舒必利及其杂质，得色谱图如附图13所示。附图13中，虚线方框标识的范围为定量环收集的范围。化合物7分别被定量环收集并经捕集柱和第二液相色谱柱脱盐后，IT-TOF鉴定的质谱图如附图14所示。根据1级质谱图和2级质谱图，推断化合物7为含有与舒必利相同二级碎片112.118的未知杂质，如图15。
实施案例5
1、实验仪器与设备：
第一液相色谱泵：LC-20AD高压二元泵；第二液相色谱泵：带低压梯度比例阀的LC-20AD泵；自动进样器：SIL-20AC；柱温箱：LC-20CTO。色谱工作站：LCSolution
2、样品：
将1片盐酸多巴酚丁胺研磨成粉末，全部转移至5ml试管中，加入2ml体积分数为50％的甲醇水溶液，超声30min，取上清液过0.22μm聚四氟乙烯膜，进样分析。
3、检测条件：
色谱柱：第一液相色谱柱为键合碳十八烷基的反相色谱柱；捕集柱为键合丙基氨基的弱阴离子交换固定相；第二液相色谱柱位键合碳八烷基的反相色谱柱；
流动相：第一液相色谱泵的A通道为离子对试剂溶液。该离子对试剂溶液用辛烷磺酸钠2.6g，加水1000l使溶解后配置，并加三乙胺3ml，摇匀，用磷酸调节p H值至2.5；第一液相色谱泵的A通道为乙腈-甲醇(18:82)溶液；第二液相色谱泵的B通道为甲酸：水(1:100，v/v)溶液；第二液相色谱泵的C1通道为甲酸：甲醇：水(1:5:95，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C2通道为甲酸铵：甲醇：水(1:95:5，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C3通道为氨水：甲醇：水(1:95:5，v/v/v)溶液；
梯度和流速见表9；阀切换条件见表10；进样体积：10μL；柱温：30摄氏度；检测波长：280nm。
表9盐酸多巴酚丁胺杂质鉴定梯度条件
Figure GDA0001677646800000151
表10阀切换时间
Figure GDA0001677646800000152
4、质谱条件：
离子源：ES+模式；质谱仪：岛津IT-TOF质谱仪；雾化器流速：3L/min；加热器流速：10L/min；接口温度：200℃；DL温度：230℃；加热模块温度：400℃；干燥气流速：10L/min；接口电压：1.7kV。
5、化合物鉴定：
按上述条件分离盐酸多巴酚丁胺及其杂质，得色谱图如附图16所示。附图16中，虚线方框标识的范围为定量环收集的范围。化合物8被定量环收集并经捕集柱和第二液相色谱柱脱盐后，IT-TOF鉴定的质谱图如附图17a～17c所示。根据1级质谱图和2级质谱图，推断化合物8为4-(4-羟苯基)-2-丁酮。
实施案例6
1、实验仪器与设备：
第一液相色谱泵：LC-20AD高压二元泵；第二液相色谱泵：带低压梯度比例阀的LC-20AD泵；自动进样器：SIL-20AC；柱温箱：LC-20CTO。色谱工作站：LCSolution
2、样品：
将1片盐酸阿米替林研磨成粉末，全部转移至5ml试管中，加入2ml体积分数为50％的甲醇水溶液，超声30min，取上清液过0.22μm聚四氟乙烯膜，进样分析。
3、检测条件：
色谱柱：第一液相色谱柱为键合碳八烷基的反相色谱柱；捕集柱为键合丙基氨基的弱阴离子交换固定相；第二液相色谱柱位键合碳十八烷基的反相色谱柱；
流动相：第一液相色谱泵的A通道为甲醇-水-三乙胺(60:40:0.3)(用磷酸调节p H值至3.1)为流动相；第二液相色谱泵的C1通道为甲酸：乙醇：水(1:5:95，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C2通道为乙酸铵：乙醇：水(1:95:5，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C3通道为氨水：乙腈：水(1:95:5，v/v/v)溶液；
梯度和流速见表11；阀切换条件见表12；进样体积：10μL；柱温：30oC；检测波长：280nm。
表11盐酸阿米替林鉴定梯度条件
Figure GDA0001677646800000161
表12阀切换时间
Figure GDA0001677646800000162
Figure GDA0001677646800000171
4、质谱条件：
离子源：ES+模式；质谱仪：岛津IT-TOF质谱仪；雾化器流速：3L/min；加热器流速：10L/min；接口温度：200℃；DL温度：230℃；加热模块温度：400℃；干燥气流速：10L/min；接口电压：1.7kV。
5、化合物鉴定：
按上述条件分离阿米替林及其杂质，得色谱图如附图18所示。附图18中，虚线方框标识的范围为定量环收集的范围。化合物8被定量环收集并经捕集柱和第二液相色谱柱脱盐后，IT-TOF鉴定的质谱图如附图19a和19b所示。根据1级质谱图和2级质谱图，推断主峰为阿米替林。
实施案例7
1、实验仪器与设备：
第一液相色谱泵：LC-20AD高压二元泵；第二液相色谱泵：带低压梯度比例阀的LC-20AD泵；自动进样器：SIL-20AC；柱温箱：LC-20CTO。色谱工作站：LCSolution
2、样品：
将1片盐酸倍他司汀药物杂质研磨成粉末，全部转移至5ml试管中，加入2ml体积分数为50％的甲醇水溶液，超声30min，取上清液过0.22μm聚四氟乙烯膜，进样分析。
3、检测条件：
色谱柱：第一液相色谱柱为键合碳十八烷基的反相色谱柱；捕集柱为键合丙基氨基的弱阴离子交换固定相；第二液相色谱柱位键合碳十八烷基的反相色谱柱；
流动相：第一液相色谱泵的A通道为离子对试剂溶液:乙腈(600:400，v/v)。离子对试剂溶液为4.43g十二烷基硫酸钠和0.69g醋酸铵溶解于1000mL水中，用冰醋酸调pH到4.7；第二液相色谱泵的C1通道为甲酸：乙腈：水(1:5:95，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C2通道为甲酸：乙腈：水(1:95:5，v/v/v)溶液；第二液相色谱泵的C3通道为氨水：乙腈：水(1:95:5，v/v/v)溶液；
梯度和流速见表13；阀切换条件见表14；进样体积：10μL；柱温：30℃；检测波长：280nm。
表13盐酸倍他司汀药物未知杂质的鉴定梯度条件
Figure GDA0001677646800000181
表14阀切换时间
Figure GDA0001677646800000182
4、质谱条件：
离子源：ES+模式；质谱仪：岛津IT-TOF质谱仪；雾化器流速：3L/min；加热器流速：10L/min；接口温度：200℃；DL温度:230℃；加热模块温度：400℃；干燥气流速：10L/min；接口电压：1.7kV。
5、化合物鉴定：
按上述条件分离盐酸倍他司汀药物及其杂质，得色谱图如附图20所示。附图20中，虚线方框标识的范围为定量环收集的范围。未知化合物被定量环收集并经捕集柱和第二液相色谱柱脱盐后，IT-TOF鉴定的质谱图如附图21a～21d所示。根据1级质谱图和2级质谱图，推断未知杂质可能的分子式为C14H22N2O5，理论值[M+H]+＝299.1601，测试值与理论值质量数偏差为-4.01ppm。未知化合物具有碎片离子m/z＝137.1065，其二级质谱图与盐酸倍他司汀二级质谱图基本一致，从而推得其可能为含有倍他司汀结构的多羟基取代物，如图22所示。
上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。

Claims (8)

1.一种中心切割二维液相色谱质谱分离分析系统，包括一维馏分收集、难挥发性盐去除、药物杂质洗脱和色谱柱再生四个阶段，其特征在于，包括液相色谱泵、自动进样器、转换阀、液相色谱柱、捕集柱、紫外检测器、质谱检测器、废液接收装置；所述液相色谱泵包括第一液相色谱泵和第二液相色谱泵；所述转换阀包括转换阀Ⅰ、转换阀Ⅱ和转换阀Ⅲ；所述液相色谱柱包括第一液相色谱柱和第二液相色谱柱；所述废液接收装置包括第一废液接收装置、第二废液接收装置和第三废液接收装置；所述第一液相色谱泵与自动进样器进口连接，所述进样器出口与第一色谱柱进口连接，所述第一色谱柱出口与紫外检测器进口连接，所述紫外检测器出口与转换阀Ⅰ连接，所述转换阀Ⅰ连接有定量环，所述转换阀Ⅰ还连接第二液相色谱泵和捕集柱，所述捕集柱的出口与转换阀Ⅱ连接，所述转换阀Ⅱ与第二液相色谱柱连接，所述第二液相色谱柱的出口与转换阀Ⅲ相连接，所述转换阀Ⅲ连接质谱检测器；
在一维馏分收集阶段，第一液相色谱泵输出端与自动进样器进口连接，自动进样器出口与第一液相色谱柱连接，第一液相色谱柱与紫外检测器相连，所述紫外检测器通过转换阀Ⅰ与定量环进口连接，定量环出口连接第一废液接收装置；第二液相色谱泵通过转换阀Ⅰ与捕集柱进口连接，捕集柱出口通过转换阀Ⅱ与第二液相色谱柱进口连接，第二液相色谱柱出口通过转换阀Ⅲ与第三废液接收装置连接；当目标组分全部收集到定量环中时，通过转换阀Ⅰ将定量环与紫外检测器和第一废液收集装置断开，使紫外检测器通过转换阀Ⅰ与第一废液回收装置连接；第二液相色谱泵的流动相通过转换阀Ⅰ流向捕集柱和第二液相色谱柱，实现捕集柱和第二液相色谱柱的同时平衡；
在强阴离子化合物去除阶段，第二液相色谱泵通过转换阀Ⅰ与定量环进口连接；定量环出口通过转换阀Ⅰ与捕集柱进口连接，捕集柱通过转换阀Ⅱ与第二液相色谱柱连接；第二液相色谱柱通过转换阀Ⅲ与第三废液回收装置连接；第二液相色谱泵的流动相流经定量环，将定量环中收集的目标组分冲洗到捕集柱，强阴离子化合物吸附到捕集柱上，目标化合物和阳离子随第二液相色谱泵的流动相流向第二液相色谱柱，阳离子于死时间从第二液相色谱柱洗脱；
在药物杂质鉴定阶段，第二液相色谱泵通过转换阀Ⅰ与捕集柱进口连接，捕集柱出口通过转换阀Ⅱ与第二液相色谱柱连接，第二液相色谱柱通过转换阀Ⅲ与质谱检测器连接；第二液相色谱泵的流动相流经捕集柱和第二液相色谱柱，将目标化合物洗脱到质谱检测装置，进行目标化合物的质谱信息采集；
在捕集柱再生阶段，捕集柱的出口通过转换阀Ⅱ的与第二废液回收装置连接，用挥发性碱性溶液做流动相将捕集柱吸附的含离子对试剂的强阴离子化合物洗脱，洗脱液通过转换阀Ⅱ流向废液收集装置，含离子对试剂的强阴离子化合物从捕集柱洗脱后，用挥发性酸性溶液做流动相，置换捕集柱中的挥发性碱性溶液并平衡捕集柱，待捕集柱中的挥发性碱性溶液被完全置换后，系统切换到一维馏分收集阶段。
2.根据权利要求1所述的一种中心切割二维液相色谱质谱分离分析系统，其特征在于，所述第一液相色谱柱为键合碳十八烷基或碳八烷基的反相作用色谱固定相，包括固定相1和固定相2，其结构式如下：
Figure 280270DEST_PATH_IMAGE001
Figure 666252DEST_PATH_IMAGE002
固定相1 固定相2
捕集柱为键合丙基氨基的弱阴离子交换固定相，包括固定相3和固定相4，其结构式如下；
Figure 649251DEST_PATH_IMAGE003
Figure 762570DEST_PATH_IMAGE004
固定相3 固定相4
第二液相色谱柱为键合碳十八烷基、碳八烷基和氯丙基共聚的碳十八烷基反相作用色谱固定相，包括固定相1、固定相2和固定相5，固定相5的结构式如下：
Figure 780204DEST_PATH_IMAGE005
固定相5
其中R1为聚苯乙烯，R2为杂化硅胶。
3.根据权利要求1所述的一种中心切割二维液相色谱质谱分离分析系统，其特征在于，所述质谱检测器为离子阱-飞行时间质谱检测器。
4.根据权利要求1所述的一种中心切割二维液相色谱质谱分离分析系统，其特征在于，
所述强阴离子化合物为单独使用或者混合使用的磷酸盐、硫酸盐、辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠；所述挥发性碱性溶液为含体积分数为0.1%-5%氨水的有机溶剂溶液；所述挥发性酸性溶液为含体积分数为0.1%-5%甲酸、乙酸、甲酸铵或乙酸铵的水溶液；所述死时间为尿嘧啶在捕集柱和第二液相色谱柱的保留时间。
5.根据权利要求1所述的一种中心切割二维液相色谱质谱分离分析系统，其特征在于，
所述第一液相色谱泵为单元、二元、三元或者四元高效液相色谱泵，所述第一液相色谱泵的流动相A通道为有机溶剂溶液或有机溶剂溶液与强阴离子化合物的混合溶液；B通道为强阴离子化合物溶液；所述第二液相色谱泵为三元或四元高效液相色谱泵，所述第二液相色谱泵的C1通道和C2通道均为有机溶剂溶液和挥发性酸性溶液的混合溶液；C3通道为挥发性碱性溶液与有机溶剂溶液的混合溶液。
6.根据权利要求4或5所述的一种中心切割二维液相色谱质谱分离分析系统，其特征在于，所述有机溶剂溶液为含乙腈、甲醇或乙醇体积分数为0%-100%的水溶液。
7.利用权利要求1~6任一项所述分离分析系统进行药物杂质鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将药物研磨成粉末，加入到甲醇水溶液中，超声，取上清液过0.22 µm聚四氟乙烯膜，利用上述分离分析系统进行分离分析，根据质谱图推断杂质成分。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述甲醇水溶液为甲醇与水体积比从0:100到100:0的混合溶液。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115144510A (zh) * 2021-03-30 2022-10-04 上海润达榕嘉生物科技有限公司 临床质谱自动前处理装置
CN113504330B (zh) * 2021-06-18 2023-06-02 汇毓安莱博(苏州)医药技术有限公司 寡聚二甲硅油的纯化工艺及其装置
CN113341030B (zh) * 2021-07-16 2023-11-07 苏州创新通用色谱仪器有限公司 一种高通量液质联用系统及分离和分析方法
CN114965749A (zh) * 2022-04-28 2022-08-30 南京海纳医药科技股份有限公司 一种舒必利原料药中有关物质的检测方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104678041A (zh) * 2015-02-26 2015-06-03 华东理工大学 二维体系同时测定无机阴离子和苯胺类化合物的方法
CN106324162B (zh) * 2015-06-17 2018-04-27 深圳海王医药科技研究院有限公司 一种基于中心切割技术鉴定复方感冒药中降解产物的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法
CN105929033A (zh) * 2016-04-12 2016-09-07 海南大学 柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统及方法
CN106546671B (zh) * 2016-10-17 2019-05-14 浙江省食品药品检验研究院 基于三柱二维液质联用法测定肉制品中残留磺胺类药物的方法
CN106872596B (zh) * 2017-02-27 2023-10-13 天津海关动植物与食品检测中心 一种基于多阀切换的双通道离线和在线分析的离子色谱仪及其检测方法
CN107727772B (zh) * 2017-11-21 2020-04-10 匡海学 利用电喷雾质子化裂解-质谱多反应检测模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法

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