CN108341857B - 一种与水稻产量相关蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于基因遗传工程领域，涉及水稻OsAGO2,Os04g0615700基因在提高水稻产量中的应用。本发明通过构建OsAGO2,Os04g0615700基因过表达的载体，转化到水稻中，可从百粒重、主穗粒数、粒长等多方面增加水稻的产量，在生产实践中具有重要的意义。

Description

一种与水稻产量相关蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于基因遗传工程领域，涉及水稻OsAGO2,Os04g0615700基因在提高水稻产量中的应用。

背景技术

水稻是世界重要的粮食作物，作为全世界一半人口的主粮，同时也是单子叶植物研究的模式植物。提高水稻产量是维持世界经济稳定和促进人类社会的发展的重要途径之一(HaoW and Lin H X.,2010)。有效穗数、每穗粒数和千粒重构成的农艺性状是决定水稻产量的三大要素，也是水稻育种改良的重点方向。现阶段，人口增加，耕地面积减少，提高水稻产量仍然是今后迫切需要解决的问题(Zuo J R and Li J Y.,2014)。

高产育种是满足增加的人口所需粮食供应的关键，而水稻产量性状是各个复杂的数量性状(quantitative traitlocus,QTLs)的综合体,包括有效穗数、穗粒数、粒质量、抽穗期、株高等之间的互作关系，对产量的贡献具有重大作用。现阶段提高产量的策略仍然是传统的杂交选育。其杂种优势通常表现在F1代，要从两个亲本的杂交分离群体筛选出理想的重组单株进行产量评估效果并不尽如人意和具有一定的风险。随着水稻产量相关QTL和基因的不断发现，其分子机制逐渐被阐明(Bai et al.,2012)。目前来看改良水稻产量最理想的策略是聚合大量已经精细定位和克隆的产量相关基因，确定最佳的基因型组合。因此，通过挖掘并操控重要的与水稻高产相关基因，对水稻进行相关的遗传改良，开展水稻高产基因的设计育种，有可能成为实现水稻产量第三次飞跃的技术突破口，为未来水稻育种提供强有力的技术支撑。

粒型是水稻产量相关性状之一，合理的粒型对培育高产、优质水稻具有非常重要的作用。目前为止，已报道了31个粒型相关基因和QTL。而Li等利用染色体片段代换系来检测水稻粒型QTL，共鉴定了分布于8条染色体上22个粒型QTLs，7个控制粒长，6个控制粒宽，5个控制长宽比，4个控制粒厚(Li et al.,2011； Song et al.,2007；Wei et al.,2008)。

Song等报道了一个新的控制水稻粒宽和粒质量的QTL，GW2，发现GW2 编码一个带有RING结构域的E3泛素连接酶，GW2的功能缺失增加了细胞数，导致了更大(更宽)的颖壳，积累了谷粒充实率，从而增加了粒宽、粒重和产量； GW5编码一个144氨基酸的新的核酸蛋白，GW 5与聚泛素双酵母杂交互作， GW5可能在种子发育过程中通过蛋白酶途径调节细胞分化。Fan等确定GS3是谷粒大小的负调控因子，该位点是粒宽和粒厚的次效QTL。这些早期克隆的GS3、 GW2和qsW5粒形基因均与粒形呈负相关，Li等从天然突变体中克隆和特征化了一个正向调控谷粒大小和水稻产量的GS5基因，GS5通过调控粒宽、谷粒充实度、千粒质量来综合控制谷粒大小(Zhang et al.,2011)。

单株穗数和穗粒数被认为是水稻产量相关的重要农艺性状，直接影响着水稻产量。目前已发现的DEP1可以通过引起磷脂酰乙醇胺蛋白连接域蛋白切断发生功能突变，该等位基因的效应可增加分生组织活性，减少节间花原基的长度，增加单穗粒数从而增加谷粒产量。Miura等报道了富农穗WFP的QTL编码的 OsSPL14(穗启动结合蛋白14，也叫做IPA1)可促进水稻穗分枝、提高谷粒产量(Huang et al.,2009；Miura Ket al.,2010)。因此，挖掘更多的与提高水稻单株谷粒产量的基因，对于水稻的高产提高具有重大的意义。

Argonaute蛋白(AGO蛋白)最初是在拟南芥突变株ago1中发现的，突变株 ago1外观很像一种小乌贼，因此发现者Bohmer等将这一系列突变株称为 argonaute。Argonaute蛋白是一个高度保守的蛋白家族,它们与许多生物的许多 RNA沉默现象相关。现阶段的研究表明，AGO蛋白不仅参与了植物生长发育调控，还涉及到蛋白质的合成调控，mRNA的稳定性，以及小非编码RNA产物的形成(Hutvagner and Simard,2008)。水稻中有19个AGO家族成员，它们可以分成六类：MEL1、AGO1、AGO4、AGO7、AGO17和AGO18(Wu et al，2009)。其中功能被研究得较多的是MEL1、AGO1和AGO4。

已由研究对水稻中DCL基因家族、AGO基因家族和RDR基因家族从基因结构、在染色体上的定位、各基因家族成员之间的系统进化关系等做了初步的生物信息学分析，又通过对生殖生长阶段的表达分析和对低温、高盐浓度、干旱等非生物胁迫的响应分析发现这些基因可能参与生殖生长阶段特异表达基因的调控机制(Kapoor et al，2008)。水稻OsAGO2是位于水稻第四染色体上的一个 Argonaute蛋白，属于水稻AGO7亚类，与拟南芥的ZIPPY/AGO7处于同一个进化分支。Kapoor等人(2008)从基因结构、染色体定位、各基因家族成员之间的系统进化关系等方面对水稻的AGO基因家族做了初步的生物信息学分析，发现OsAGO2在低温、高盐、干旱等非生物胁迫的情况下表达上调，推测OsAGO2 可能存在抗逆功能(Kapoor et al,2008)，但是目前未有其在提高水稻产量相关方面功能的研究。

参考文献：

Hao W,Lin H X.Toward understanding genetic mechanisms of complextraits in rice [J].Genet Genomics,2010,37(10):653-666.

Zuo J R,Li J Y.Molecular dissection of complex agronomic traits ofrice:a tream effort by Chinese scientists in recent years[J].National ScienceReview,2014,1(2): 253-276.

Huang X Z,Qian Q,Liu Z B,et al.Natural variation at the DEP1locusenhances grains yield in rice[J].Nature Genetics,2009,41(4):494-497.

Miura K,Ikeda M,Matsubara A,et al.OsSPL14promotes panicles branchingand higher grain productivity in rice[J].Nature Genetics,2010,42(6):545-549.

Hutvagner G,Simard M J.Argonaute proteins:key players in RNAsilencing[J]. Nature Reviews Molecular Cell Biology,2008,9(1):22-32.

Wu L,Zhang Q,Zhou H,et al.Rice MicroRNA effector complexes andtargets[J]. The Plant Cell,2009,21(11):3421-3435.

Kapoor M,Arora R,Lama T.Genome-wide identification,organization andphylogenetic analysis of Dicer-like,Argonaute and RNA-dependent RNAPolymerase gene families and their expression analysis during reproductivedevelopment and stress in rice[J].BMC Genomics,2008,9:451-471.

发明内容

本发明的目的在于提高水稻产量。

本发明采用以下技术方案实现上述目的：

一方面，本发明提供了水稻的AGO蛋白家族的基因：OsAGO2, Os04g0615700在提高水稻产量中的应用。

本发明中OsAGO2基因不仅可以提高水稻的每穗粒数，还可以提高粒长和百粒重等，从而提高水稻产量。

该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，该基因的核苷酸序列如 SEQ IDNO：2所示。考虑到密码子的简并性，在不改变氨基酸序列的前提下，对上述编码基因的核苷酸序列进行添加、取代、插入和缺失一个或多个核苷酸所生成的衍生物等，也属于本发明的保护范围内。

上述的应用，其是利用玉米泛素基因(Ubiquitin)启动子(Ubi启动子构建的过表达水稻转化载体，把OsAGO2的全长cDNA序列克隆到过表达载体的Ubi 启动子下游的SpeI和SmaI酶切位点之间，由此构建成过表达载体。作为优选的实施方式，所述的过表达载体pCambia1300。另一方面，本发明还提供了用于扩增OsAGO2基因的引物对，其正向引物F具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，反向引物R具有SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

另一方面，本发明还提供了上述的引物对在提高水稻的每穗粒数，粒长和百粒重等提高水稻产量中的应用。

本发明以水稻品种ZH11(中花11)幼苗的叶片为材料，提取其总RNA，再进行逆转录成cDNA。以该逆转录产物为模板设计过表达片段扩增引物进行 PCR扩增，获得约3105bp的片段。采用琼脂糖凝胶电泳回收片段。该目标片段和载体pCambia1300用SpeI内切酶单酶切，37℃酶切2小时，酶切后连接，再转入大肠杆菌DH5α中，挑取阳性白色克隆，提取质粒，酶切鉴定并测序分析。该序列全长3476个碱基，包含一个开放阅读框，为3105个碱基，其序列如所示；其编码蛋白具有1034个氨基酸残基，其序列如SEQ ID NO：1所示。由此构建Os04g0615700的过表达载体，采用农杆菌EHA105介导的遗传转化方法，把过表达载体导入正常粳稻品种中花11愈伤经过筛选分化生根最后产生转基因植株。转基因植株经PCR及荧光定量PCR鉴定，证明目标基因已经转化入水稻中，并且实现目标基因的表达量提高。

本发明的有益效果如下：

1、本发明首次发现了一个水稻的AGO蛋白基因能够提高水稻产量，本发发明的AGO蛋白基因不仅可以改善水稻籽粒性状，如提高粒长和百粒重，且相比于现有的有助于提高水稻产量的基因，其还可以提高每穗粒重，从多个方面提高水稻产量-。

2、本发明提供了利用玉米泛素基因(Ubiquitin)启动子构建的过表达AGO2 的技术能应用于水稻的基因遗传工程育种中，并能够应用于生产实践中，改良水稻的产量性状，从而保障目前日益增长的人口与粮食需求之间的平衡。其中，玉米泛素基因(Ubiquitin)启动子是组成型强启动子，可以使目的基因超表达。

3、本发明转化过表达OsAGO2基因实验结果表明，过表达OsAGO2基因植株表现为百粒重增加，种子饱满，粒长增加，穗粒数增加，其蛋白质和编码基因对水稻产量，如水稻产量提高的调控具有重要的实际意义，在实际应用中可以将 OsAGO2基因转入不同的水稻品种中，以培育更加理想的水稻栽培品种。 OsAGO2蛋白及其编码基因在农业领域具有广阔的应用前景。

4.相比于CN102816243A中公开了的改良水稻粒型的转录因子Os6g08400，本发明的水稻基因OsAGO2与其所处的染色体不同，没有同源性，过表达以后除了改良粒型，还能提高每穗粒数，延缓叶片衰老等，对于水稻产量的提高更具应用价值。

附图说明

图1显示了AGO2片段PCR扩增电泳图；

图2显示了本发明采用的载体；

图3显示了转基因植株的鉴定电泳图；

图4显示了OsAGO2在OsAGO2过表达植株与对照中的表达量检测；

图5a显示了OsAGO2过表达植株与对照的小穗图；

图5b显示了OsAGO2过表达植株与对照的主穗穗粒数统计；

图5c显示了OsAGO2过表达植株与对照的谷粒图；

图5d显示了OsAGO2过表达植株与对照的种子粒长统计结果；

图5e显示了OsAGO2过表达植株与对照的种子的百粒重统计结果；

图6显示了2株转OsAGO2基因和1株对照植株。

具体实施方式

以下实验的实施例是对本发明的进一步阐述说明，不是对本发明的限制。下列实施例中未注明具体实验条件和方法，所采用的技术手段通常为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1OsAGO2基因的克隆，过表达载体的构建

取水稻品种ZH11的幼苗叶片部位，用TriZolReagent(Invitrogen公司，其货号为：15596026)提取叶片总RNA，采用紫外分光光度计检测所提取的总RNA 的纯度及浓度，取1μg的总RNA做起始逆转录反应，所采用的逆转录酶为 AMV(TAKARA公司)，逆转录反应的步骤参考该逆转录酶的使用说明。以逆转录产物为模板，根据NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)提供的关于该基因的 cDNA序列设计引物，引物序列如下：(3-3475bp)

SEQ ID NO：3

AGO2F:aaaaACTAGTaatcgaaacgtcgttctgatcg

SEQ ID NO：4

AGO2R:aaaaACTAGTgctgtcgtcagatgaagaac

利用该对引物进行PCR扩增，PCR反应使用的聚合酶是KOD FX(Toyobo 公司)。反应体系为50uL，按照KOD FX的说明书配制PCR反应体系。反应条件为：94℃3min；94℃30sec，62℃30sec，68℃140sec，35个循环；68℃7min。 PCR扩增获得约3.4kb的片段(电泳如图1所示)。

采用琼脂糖凝胶电泳回收该片段后，用SpeI对片段和pCambia1300载体(载体图，图2)分别进行单酶切，酶切后分别回收目标片段和载体片段，用T4连接酶(NEB公司)16℃连接2小时，连接体系为：T4连接酶0.5uL，10Xbuffer 1uL，Os04g0615700基因片段6ul(200ng)，pCambia1300载体2uL(50ng)。取10uL连接产物，用热击转化法转化到大肠杆菌DH5α中，转化产物涂布卡那霉素抗性的LB固体培养基。37℃培养过夜，挑10个单克隆进行提取质粒，酶切鉴定。选择两个阳性克隆进行测序检测。测序引物为：

SEQ ID NO：5

AGO2TF:5’-gcgtgagctttgatacg-3’

SEQ ID NO：6

R2:5’-cgatctagtaacatagatgacac-3’

实施例2采用农杆菌EHA105介导的遗传转化方法将AGO2过表达载体转入正常粳稻品种中花11愈伤中。

转化方法如下述文献描述：周玲艳，姜大刚，吴豪等，基于TAC载体的水稻转化系统的建立.遗传学报，2005，32：514-518。经过筛选、预分化，分化，得到5株T0代转化植株，T0代通过PCR及定量PCR检测，从DNA水平和RNA 水平鉴定阳性转化植株。

图3，经过PCR鉴定，全部为阳性，PCR引物序列如下：

SEQ ID NO：7

引物1：5’-GACAGCGTCTCCGACCTGAT-3'；

SEQ ID NO：8

引物2：5’-CATCGCCTCGCTCCAGTCAAT-3’；

PCR扩增条件为：94℃2min；94℃20sec，58℃20sec，72℃30sec，30个循环；72℃5min。反应结束，对扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，检测结果如图3所示，阳性植株可以扩增得到约600bp的条带。

阳性植株自交得到转基因1代(T1代)株系，每个株系选择10株经PCR 检测为阳性的植株繁种，得到T2代植株，T2代株系再进行PCR检测，找到来源于不同T0代植株的T2代纯合株系3个(OsAGO2-1,OsAGO2-2,OsAGO2-3)。对3个株系的扬花期剑叶抽提总RNA并将逆转录得到的cDNA进行荧光定量 PCR，检测目标基因OsAGO2的表达量，以野生型(WT)结果为对照(如图4 所示)。由图4可知，目标基因OsAGO2在转基因后的纯合株系中高表达，而在野生型株系中则较少表达。

实施例3.OsAGO2,Os04g0615700过表达转基因植株产量性状鉴定

将经过PCR鉴定为阳性的转基因植株培养至成熟，观察不同时期的植株形态，结果如图5a-5e所示，所得到的3个纯合株系(OsAGO2-1,OsAGO2-2, OsAGO2-3)转基因植株皆表现出穗粒数明显增多的表型。转化植株与对照植株相比，在以下四个产量性状有明显变化：百粒重增加；主穗粒数增加；粒长增加(图 5d)；单株产量增加。图6显示的是2株转OsAGO2基因和1株对照植株。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 一种与水稻产量相关蛋白及其编码基因与应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3105

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 1

atggagcacg agcgcggtgg cggtggccgc ggccgcggga ggggtcgcgg tggcgggcgt 60

ggcggcggtg gcggcgatgg tcgcggaggc ggttatggtg gtgctggtgg tggtggtgtc 120

ggcgggcgcg gtgggcgtgg gcctcctggt ggtggtggtg gacgcgggta cgagcccggc 180

ggcgggcgtg ggtacggtgg cggcggcggc ggtggtggac gtgggtatgg cggcggaggc 240

ggcggtggtg ggtacgagtc cggcggtggg cgtgggtatg gcggcggtgg acgtgggtat 300

gaatccggcg gtgggcgtgg acctggcggc ggcggccgtg ggcacgagtc cggcggtggc 360

ggtggccgcg gcgggaacgt gtgggcgcag ccggggagag ggcgcggagg agcccccgcc 420

ccggcgccgg cgccagcacc agcagcgagg aggatccagg acgagggggc cgcgaggtcg 480

tcgggtaccg ttgagcgcat tgcttctact gaggttgtaa gagtacaacc acctgcaccc 540

ccagttgctg tgtctcgtag tggcacgcgt gtgccaatgc gaagacctga tggtggaggc 600

tcagtatcga aagccaaggt caaattgttg gtgaaccatt ttatagttaa gtaccgacag 660

gcatcaactg tttttcacta tgacatagac atcaagcttg atataagttc ccccaaggct 720

tcagacaagg agctatccaa gggagatttt cttactgtca aggacgagct cttcaaggat 780

gagagctttc ggcggctttc atcagctgtt gcttatgatg gaaaaagaaa tttatttact 840

tgtgctgagc taccagatgg tttgtttcgt gtcaaagtcc gttcacggac ttacattgta 900

tctgtggagt tcaagaagaa gcttcctttg agccaactct cggaactgcc tgtgcccaga 960

gaggtcttgc aggggcttga tgtcattgtg cgtgaggcct ctagctggcg caagattatc 1020

attggtcagg gattttactc gcagggccgc agtgtgccca ttgggccgga tgttgtagct 1080

ctcaaaggaa cccagcagac cctgaaatgc actcagaaag gactgatcct ttgtgtggac 1140

tattcggtta tgccgtttcg caaagctgga cctgtgttgg atcttgttca gaagtctgtg 1200

agataccttg actacaggac aacactaaac aaacaccaat tggacacttt gaagaatgaa 1260

ctcaaaggcc agcgtgtcac tgtaaatcat aggaggacaa agcagaagta cattgttaaa 1320

ggtttgactg ataaacctgc aagtcagata acttttgtag attctgaatc aggacagacc 1380

aagaagcttc ttgattacta ttcgcagcag tatggcaagg ttattgagta tcaaatgctt 1440

ccatgcttgg atttgagcaa gagcaaggac aagcaaaact atgtgccgat tgaattgtgt 1500

gatcttcttg aagggcagag atacccaaaa gcaagcttaa ataggaattc tgataaaaca 1560

ctgaaagaaa tggctttgat ccctgcctca agtaggaagg aggagattct ggagttggtg 1620

aatgctgacg atgggccttg caggggtgaa attgctcagc agttcgggat ttctttggat 1680

gtacaaatga tggaagtcac tggtaggacc cttcctcctc ccagcctaaa acttggcacc 1740

tccagtggcc aaccccccaa attcaatatt gatcagccta actgccagtg gaaccttacg 1800

aggaaaagac tagcagaggg cggggtgcta cagtgctggg gcgttgtgga cttcagtgca 1860

gattctgggc agtacgccct gaatgggaac atgtttattg acaagattgt caggaagtgc 1920

tgcgaccttg gcgtacagat gaaccgtaac ccatgcattg tgcaactgtt agatatggag 1980

gtgctatccg atccacatca gctcttcgag gagcttaaca aagctaagca ggcggcagcc 2040

agtaagaaac agaagctgca gctcctcttc tgcccaatgt ctgatcagca tcctgggtac 2100

aagacgctga agcttatctg cgagacgcag ctggggatcc agacccagtg cttcttgagc 2160

ttcctcgcga acaaacaaca gggacaggac cagtacatgt ccaaccttgc tctgaagatc 2220

aacggcaaga ttggaggaag caacatccaa ctgtttggtg aatcgctccc gcggatctcc 2280

ggcgcgccat acatgttcat cggcgccgac gtgaatcacc catcgccggg gaacgtcgag 2340

agcccgtcga ttgcagcagt ggtggcctcg gtggatcaag gcgccagcaa gtacgtgcca 2400

agaatccgcg ctcagcctca ccgctgcgag gtgatccagc acctcggcga catgtgcaag 2460

gagctcatcg gcgtgttcga gaagcggaac cgcgtgaagc cccagaggat catctacttc 2520

cgcgacggcg tcagcgacgg tcagttcgac atggtgctga acgaggagct ggcggacatg 2580

gagaaggcga tcaagaccaa ggactactcc ccgacgatca ccgtgatcgt ggccaagaag 2640

cggcaccaca ccaggctgtt ccccaaggac ctgaaccagc agcagaccaa gaacggcaac 2700

gtgctccccg gcacggtggt ggacaccggc gtggtcgacc cggcggcgta cgacttctac 2760

ctgtgcagcc acaacgggct gatcgggacg agccggccga cgcactacta cagccttctg 2820

gacgagcacg gcttcgcctc caacgacctg cagaagctgg tgtacaacct ctgcttcgtc 2880

ttcgcccgct gcaccaagcc ggtgtcgctg gccacgcccg tctactacgc cgacctcgcc 2940

gcctaccgcg gcaggctcta ctacgagggc atgatgatgt cgcagccgcc accgtcttcc 3000

gcggcgtcgg cgtcgtcggc atcctcctcc ggcgccggcg cttccgactt caggagcttc 3060

ccggcgctgc acgaggatct ggtggacaac atgttcttca tctga 3105

<210> 2

<211> 1034

<212> PRT

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 2

Met Glu His Glu Arg Gly Gly Gly Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg

1 5 10 15

Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly Gly Asp Gly Arg Gly Gly Gly Tyr

20 25 30

Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Val Gly Gly Arg Gly Gly Arg Gly Pro

35 40 45

Pro Gly Gly Gly Gly Gly Arg Gly Tyr Glu Pro Gly Gly Gly Arg Gly

50 55 60

Tyr Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg Gly Tyr Gly Gly Gly Gly

65 70 75 80

Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Ser Gly Gly Gly Arg Gly Tyr Gly Gly Gly

85 90 95

Gly Arg Gly Tyr Glu Ser Gly Gly Gly Arg Gly Pro Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Arg Gly His Glu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Asn Val Trp

115 120 125

Ala Gln Pro Gly Arg Gly Arg Gly Gly Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala

130 135 140

Pro Ala Pro Ala Ala Arg Arg Ile Gln Asp Glu Gly Ala Ala Arg Ser

145 150 155 160

Ser Gly Thr Val Glu Arg Ile Ala Ser Thr Glu Val Val Arg Val Gln

165 170 175

Pro Pro Ala Pro Pro Val Ala Val Ser Arg Ser Gly Thr Arg Val Pro

180 185 190

Met Arg Arg Pro Asp Gly Gly Gly Ser Val Ser Lys Ala Lys Val Lys

195 200 205

Leu Leu Val Asn His Phe Ile Val Lys Tyr Arg Gln Ala Ser Thr Val

210 215 220

Phe His Tyr Asp Ile Asp Ile Lys Leu Asp Ile Ser Ser Pro Lys Ala

225 230 235 240

Ser Asp Lys Glu Leu Ser Lys Gly Asp Phe Leu Thr Val Lys Asp Glu

245 250 255

Leu Phe Lys Asp Glu Ser Phe Arg Arg Leu Ser Ser Ala Val Ala Tyr

260 265 270

Asp Gly Lys Arg Asn Leu Phe Thr Cys Ala Glu Leu Pro Asp Gly Leu

275 280 285

Phe Arg Val Lys Val Arg Ser Arg Thr Tyr Ile Val Ser Val Glu Phe

290 295 300

Lys Lys Lys Leu Pro Leu Ser Gln Leu Ser Glu Leu Pro Val Pro Arg

305 310 315 320

Glu Val Leu Gln Gly Leu Asp Val Ile Val Arg Glu Ala Ser Ser Trp

325 330 335

Arg Lys Ile Ile Ile Gly Gln Gly Phe Tyr Ser Gln Gly Arg Ser Val

340 345 350

Pro Ile Gly Pro Asp Val Val Ala Leu Lys Gly Thr Gln Gln Thr Leu

355 360 365

Lys Cys Thr Gln Lys Gly Leu Ile Leu Cys Val Asp Tyr Ser Val Met

370 375 380

Pro Phe Arg Lys Ala Gly Pro Val Leu Asp Leu Val Gln Lys Ser Val

385 390 395 400

Arg Tyr Leu Asp Tyr Arg Thr Thr Leu Asn Lys His Gln Leu Asp Thr

405 410 415

Leu Lys Asn Glu Leu Lys Gly Gln Arg Val Thr Val Asn His Arg Arg

420 425 430

Thr Lys Gln Lys Tyr Ile Val Lys Gly Leu Thr Asp Lys Pro Ala Ser

435 440 445

Gln Ile Thr Phe Val Asp Ser Glu Ser Gly Gln Thr Lys Lys Leu Leu

450 455 460

Asp Tyr Tyr Ser Gln Gln Tyr Gly Lys Val Ile Glu Tyr Gln Met Leu

465 470 475 480

Pro Cys Leu Asp Leu Ser Lys Ser Lys Asp Lys Gln Asn Tyr Val Pro

485 490 495

Ile Glu Leu Cys Asp Leu Leu Glu Gly Gln Arg Tyr Pro Lys Ala Ser

500 505 510

Leu Asn Arg Asn Ser Asp Lys Thr Leu Lys Glu Met Ala Leu Ile Pro

515 520 525

Ala Ser Ser Arg Lys Glu Glu Ile Leu Glu Leu Val Asn Ala Asp Asp

530 535 540

Gly Pro Cys Arg Gly Glu Ile Ala Gln Gln Phe Gly Ile Ser Leu Asp

545 550 555 560

Val Gln Met Met Glu Val Thr Gly Arg Thr Leu Pro Pro Pro Ser Leu

565 570 575

Lys Leu Gly Thr Ser Ser Gly Gln Pro Pro Lys Phe Asn Ile Asp Gln

580 585 590

Pro Asn Cys Gln Trp Asn Leu Thr Arg Lys Arg Leu Ala Glu Gly Gly

595 600 605

Val Leu Gln Cys Trp Gly Val Val Asp Phe Ser Ala Asp Ser Gly Gln

610 615 620

Tyr Ala Leu Asn Gly Asn Met Phe Ile Asp Lys Ile Val Arg Lys Cys

625 630 635 640

Cys Asp Leu Gly Val Gln Met Asn Arg Asn Pro Cys Ile Val Gln Leu

645 650 655

Leu Asp Met Glu Val Leu Ser Asp Pro His Gln Leu Phe Glu Glu Leu

660 665 670

Asn Lys Ala Lys Gln Ala Ala Ala Ser Lys Lys Gln Lys Leu Gln Leu

675 680 685

Leu Phe Cys Pro Met Ser Asp Gln His Pro Gly Tyr Lys Thr Leu Lys

690 695 700

Leu Ile Cys Glu Thr Gln Leu Gly Ile Gln Thr Gln Cys Phe Leu Ser

705 710 715 720

Phe Leu Ala Asn Lys Gln Gln Gly Gln Asp Gln Tyr Met Ser Asn Leu

725 730 735

Ala Leu Lys Ile Asn Gly Lys Ile Gly Gly Ser Asn Ile Gln Leu Phe

740 745 750

Gly Glu Ser Leu Pro Arg Ile Ser Gly Ala Pro Tyr Met Phe Ile Gly

755 760 765

Ala Asp Val Asn His Pro Ser Pro Gly Asn Val Glu Ser Pro Ser Ile

770 775 780

Ala Ala Val Val Ala Ser Val Asp Gln Gly Ala Ser Lys Tyr Val Pro

785 790 795 800

Arg Ile Arg Ala Gln Pro His Arg Cys Glu Val Ile Gln His Leu Gly

805 810 815

Asp Met Cys Lys Glu Leu Ile Gly Val Phe Glu Lys Arg Asn Arg Val

820 825 830

Lys Pro Gln Arg Ile Ile Tyr Phe Arg Asp Gly Val Ser Asp Gly Gln

835 840 845

Phe Asp Met Val Leu Asn Glu Glu Leu Ala Asp Met Glu Lys Ala Ile

850 855 860

Lys Thr Lys Asp Tyr Ser Pro Thr Ile Thr Val Ile Val Ala Lys Lys

865 870 875 880

Arg His His Thr Arg Leu Phe Pro Lys Asp Leu Asn Gln Gln Gln Thr

885 890 895

Lys Asn Gly Asn Val Leu Pro Gly Thr Val Val Asp Thr Gly Val Val

900 905 910

Asp Pro Ala Ala Tyr Asp Phe Tyr Leu Cys Ser His Asn Gly Leu Ile

915 920 925

Gly Thr Ser Arg Pro Thr His Tyr Tyr Ser Leu Leu Asp Glu His Gly

930 935 940

Phe Ala Ser Asn Asp Leu Gln Lys Leu Val Tyr Asn Leu Cys Phe Val

945 950 955 960

Phe Ala Arg Cys Thr Lys Pro Val Ser Leu Ala Thr Pro Val Tyr Tyr

965 970 975

Ala Asp Leu Ala Ala Tyr Arg Gly Arg Leu Tyr Tyr Glu Gly Met Met

980 985 990

Met Ser Gln Pro Pro Pro Ser Ser Ala Ala Ser Ala Ser Ser Ala Ser

995 1000 1005

Ser Ser Gly Ala Gly Ala Ser Asp Phe Arg Ser Phe Pro Ala Leu His

1010 1015 1020

Glu Asp Leu Val Asp Asn Met Phe Phe Ile

1025 1030

<210> 3

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aaaaactagt aatcgaaacg tcgttctgat cg 32

<210> 4

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

aaaaactagt gctgtcgtca gatgaagaac 30

<210> 5

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gcgtgagctt tgatacg 17

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

cgatctagta acatagatga cac 23

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gacagcgtct ccgacctgat 20

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

catcgcctcg ctccagtcaa t 21

Claims (6)

1.OsAGO2基因在提高水稻产量中的应用，其特征在于，所述的OsAGO2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的OsAGO2基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征是，将水稻的OsAGO2基因的cDNA序列通过载体构建到玉米泛素基因的启动子-Ubi启动子的下游，转化水稻，从而提高水稻产量。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的表达载体为pCambia1300。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，用于扩增OsAGO2基因的引物对，其正向引物F如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，反向引物R如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的提高水稻产量是通过提高水稻的每穗粒数、提高粒长和百粒重而实现产量提高。

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