CN108338999A - 一种三七叶总皂苷的制备方法 - Google Patents

一种三七叶总皂苷的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种三七叶总皂苷的制备方法，该方法采用水提取三七叶总皂苷，过滤、浓缩后得到含总皂苷提取物，该提取物经大孔吸附树脂吸附后，用氢氧化钠溶液洗涤大孔吸附树脂柱，再经强碱型阴离子树脂脱色，最后浓缩、喷雾干燥制备得到三七叶总皂苷。本发明采用氢氧化钠溶液对上样后的大孔吸附树脂柱洗涤，不但能提高三七叶总皂苷含量，还能减轻树脂污染，延长树脂寿命。

Description

一种三七叶总皂苷的制备方法
技术领域
本发明涉及天然药物提取技术领域，特别是涉及一种三七叶总皂苷的制备方法。
背景技术
三七为五加科植物三七的块根，具有活血化瘀、消肿止痛的作用，且能滋补强身。其主要活性成分为三七总皂苷。近年来的研究表明三七的茎叶亦可供药用，且毒副作用小。《本草纲目》称之“治折伤、跌扑出血，敷之即止，青肿经夜即散，余功同根”。三七叶与块根有相似的药理作用，其主要活性成分亦为三七总皂苷，以人参皂苷Rb1、Rg1、Re和三七皂苷R1为主要成分。
目前三七叶总皂苷提取方法主要包括乙醇提取法、乙醇提取-大孔树脂法或水提醇沉-大孔树脂法。中国专利CN1412162A公开了三七叶中总皂苷提取物的制备方法，其将三七叶加水煎煮后，滤液合并浓缩，将浓缩液调节pH值至8-14，取上清液分别过D21大孔吸附树脂以及ZTC大孔脱色树脂以纯化脱色，脱色液回收乙醇、浓缩干燥，得干粉，干粉以水精制得三七叶总皂苷提取物。当三七叶总皂苷水提浓缩液调pH至碱性时，浓缩液会出现沉淀，pH高时甚至呈糊状，不易过滤，上样时甚至会出现堵塞，造成流速过慢，给后续生产带来很大困扰，延长生产周期。
中国专利CN103948659A公开了三七叶总皂苷的制备方法，其将三七叶粉碎后加70％-80％乙醇超声波逆流连续提取，滤液浓缩成清膏后加澄清剂离心，澄清液醇沉，醇沉澄清液经回收乙醇浓缩后稀释，经脱糖树脂柱纯化，用不同浓度乙醇洗脱，脱糖后在经阴离子交换树脂脱色，最后经浓缩，微波干燥制备得三七叶总皂苷。该方法使用了有机溶剂进行提取，不环保且成本高。另外超声波逆流提取设备要求高，滤液需澄清，然后离心、醇沉，且使用不同浓度乙醇洗脱，过程繁琐、耗费大、不利于工业化生产。
发明内容
基于此，有必要针对上述问题，提供一种三七叶总皂苷的制备方法。
一种三七叶总皂苷的制备方法，包括以下步骤：
A、提取物制备：三七叶粉碎，加水浸提、过滤，浓缩得含总皂苷的提取物；
B、纯化：将含总皂苷的提取物过大孔吸附树脂，循环上样1-2次，然后以氢氧化钠溶液洗涤，弃去流出液，用纯水洗至中性，待用；
C、洗脱：以乙醇为洗脱剂，洗脱，初期洗脱液直接排出，待洗脱液颜色由无色变为棕色时，收集洗脱液，到洗脱液几乎无色即停止洗脱；
D、脱色：将洗脱液过强碱型阴离子树脂，然后以乙醇洗涤树脂柱，收集过柱液和洗柱液，合并得脱色液；
E、浓缩及干燥：脱色液回收乙醇，浓缩、过滤出膏，喷雾干燥得三七叶总皂苷。
在其中一个实施例中，步骤B中所述氢氧化钠溶液质量浓度为0.4％-0.6％。
在其中一个实施例中，步骤B中所述氢氧化钠溶液为2-4倍树脂体积的质量浓度0.4-0.6％氢氧化钠。
在其中一个实施例中，步骤D所述的强碱性阴离子树脂为HYA-506A树脂，树脂预处理后，用质量浓度0.4％-0.6％氢氧化钠溶液以1-3BV/h流速进行前处理，待树脂吸附饱和后，用质量浓度为9％-11％NaCl和0.8％-1.2％NaOH的混合溶液洗脱，再经水洗脱至接近中性。
在其中一个实施例中，步骤C中所述洗脱剂的用量为4-5BV。
在其中一个实施例中，步骤C中所述洗脱剂以1-2BV/h的流速洗脱。
在其中一个实施例中，步骤A中将三七叶皂苷提取液浓缩至1.5-2波美度，该波美度为在60℃时测定。
在其中一个实施例中，步骤B中所述含总皂苷提取物以1-3BV/h流速过D101大孔吸附树脂。
在其中一个实施例中，步骤B中所述氢氧化钠溶液以1-3BV/h的流速洗涤。
在其中一个实施例中，步骤D中所述洗脱液以1-3BV/h流速过HYA-506A树脂。
在其中一个实施例中，步骤D中用2-3倍树脂体积的60％乙醇以1-3BV/h流速洗涤HYA-506A树脂，根据相应产品要求，待脱色液颜色不符合制剂要求时，用4％NaOH溶液进行树脂再生处理，再用水冲洗至中性，再进行下一轮使用。
在其中一个实施例中，步骤B中所述树脂与提取物质量比为1-2:1。
在其中一个实施例中，步骤D中所述树脂与洗脱液质量比为1-2:4。
在其中一个实施例中，步骤E中所述脱色液浓缩至6-12波美度后，过滤，出膏，再喷雾干燥，所述波美度于60℃时测定。
在其中一个实施例中，步骤E中所述喷雾干燥参数为：进风温度为175℃±10℃，出风温度为85±10℃，喷头电机频率为40Hz±5Hz，所得产品水分≤4.5％，水分含量于105℃、25min条件下测定。
本发明采用水提取三七叶总皂苷，过滤、浓缩后得到含总皂苷提取物，该提取物经大孔吸附树脂吸附后，用氢氧化钠溶液洗涤大孔吸附树脂柱，再经强碱型阴离子树脂脱色，最后浓缩、喷雾干燥制备得到三七叶总皂苷。本发明采用大孔吸附树脂吸附含总皂苷提取物后，经氢氧化钠溶液处理后的树脂柱洗脱后，树脂颜色显白，且所得产品三七叶总皂苷含量高于未经氢氧化钠溶液处理；而未经氢氧化钠溶液洗涤的树脂柱经洗脱后，树脂颜色深，树脂柱使用乙醇冲洗后，呈现灰白色；故采用氢氧化钠溶液对上样后的树脂柱洗涤，不但能提高三七叶总皂苷含量，还能减轻树脂污染，延长树脂寿命。
进一步的，本发明采用HYA-506A树脂脱色，该树脂有效用于皂苷类的脱色，能有效去除洗脱液中存在的色素杂质，所得产品呈淡黄色，适合用于一般制剂。更进一步的，本发明采用HYA-506A树脂于预处理后，用质量浓度为0.4％-0.6％氢氧化钠溶液以1-3BV/h流速处理，待树脂吸附饱和后用质量浓度为9％-11％NaCl和0.8％-1.2％NaOH混合溶液洗脱，再经水洗脱至接近中性，然后对洗脱液进行脱色，转移率可高达90％以上。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步的详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明，并不限定本发明的保护范围。
实施例1
一种三七叶总皂苷的制备方法，包括以下步骤：
A、提取物制备：取70kg三七叶，粉碎加水提取两次，第一次为10倍量，第二次为8倍量，每次3小时，提取液过40目，合并提取液，浓缩至2波美度(60℃测)，得含总皂苷提取物450kg；
B、纯化：将含总皂苷提取物以1BV/h的速度上D101树脂柱，树脂与提取物质量比为1:1，循环上样一次，用3倍树脂体积0.5％氢氧化钠溶液，以2BV/h的流速处理，流出液弃去，再用纯化水冲洗至中性，待用；
C、洗脱：用5BV的70％乙醇进行洗脱，洗脱速度为2BV/h，洗脱初期的流出液直接排出，待流出液颜色由无色变为棕色时即开始收集洗脱液，到流出液几乎无色即停止洗脱，D101柱用水冲洗至流出液无醇味时，再进行下一轮使用；
D、脱色：洗脱液以3BV/h的速度过HYA-506A树脂柱，树脂与洗脱液质量比为1:4，过柱完成后用2倍树脂体积的60％乙醇以3BV/h的流速洗柱，收集过柱液和洗柱液，合并得脱色液，其中，所述HYA-506A树脂柱为树脂预处理后，用0.5％氢氧化钠溶液以2BV/h流速进行前处理，待树脂吸附饱和后用质量浓度为10％NaCl和1％NaOH混合溶液洗脱，再经水洗脱至接近中性；
E、浓缩及干燥：脱色液回收乙醇，并浓缩至6波美度，过滤100目，出膏，再喷雾干燥，所述喷雾干燥参数：进风温度为175℃±10℃，出风温度为85±10℃，喷头电机频率为40Hz±5Hz。
浓缩过滤后得浸膏14.12kg，喷雾干燥后得干膏粉4.07kg，水分要求≤4.5％(105℃，25min)，得率5.8％，三七叶总皂苷(以人参皂苷Rb3计算)含量15％。
实施例2
一种三七叶总皂苷的制备方法，包括以下步骤：
A、提取物制备：取4800kg三七叶，粉碎加水提取两次，第一次为10倍量，第二次为8倍量，每次3小时，提取液过40目，合并提取液，浓缩至1.5波美度(60℃测)，得含总皂苷提取物3785kg；
B、纯化：将含总皂苷提取物以3BV/h的速度上D101树脂柱，树脂与洗脱液质量比为1.5:1，循环上样一次，用4倍树脂体积0.5％氢氧化钠溶液，以3BV/h的流速处理，流出液弃去，再用纯化水冲洗至中性，待用；
C、洗脱：用4BV的70％乙醇进行洗脱，洗脱速度为1.5BV/h，洗脱初期的流出液直接排出，待流出液颜色由无色变为棕色时即开始收集洗脱液，到流出液几乎无色即停止洗脱，D101柱用水冲洗至流出液无醇味时，再进行下一轮使用；
D、脱色：洗脱液以2BV/h的速度过HYA-506A树脂柱，树脂与洗脱液质量比为1.5:4，过柱完成后用2倍树脂体积的60％乙醇以1.5BV/h的流速洗柱，收集过柱液和洗柱液，合并得脱色液，所述HYA-506A树脂柱为树脂预处理后，用0.5％氢氧化钠溶液以2BV/h流速进行前处理，待树脂吸附饱和后，用质量浓度为10％NaCl和1％NaOH混合溶液洗脱，再经水洗脱至接近中性；
E、浓缩及干燥：脱色液回收乙醇，并浓缩至10波美度，过滤100目，出膏，再喷雾干燥，所述喷雾干燥参数：进风温度为175℃±10℃，出风温度为85±10℃，喷头电机频率为40Hz±5Hz。
浓缩过滤后得浸膏904kg，喷雾干燥后得干膏粉305.70kg，水分要求≤4.5％(105℃，25min)，得率6.4％，三七叶总皂苷(以人参皂苷Rb3计算)含量12％。
实施例3
一种三七叶总皂苷的制备方法，包括以下步骤：
A、提取物制备：取4800kg三七叶，粉碎加水提取两次，第一次为10倍量，第二次为8倍量，每次3小时，提取液过40目，合并提取液，浓缩至1.8波美度(60℃测)，得含总皂苷提取物2910kg；
B、纯化：将含总皂苷提取物以2BV/h的速度上D101树脂柱，树脂与提取物质量比为2:1，循环上样一次，用2倍树脂体积0.5％氢氧化钠溶液，以1BV/h的流速处理，流出液弃去，再用纯化水冲洗至中性，待用；
C、洗脱：用4BV的70％乙醇进行洗脱，洗脱速度为1BV/h，洗脱初期的流出液直接排出，待流出液颜色由无色变为棕色时即开始收集洗脱液，到流出液几乎无色即停止洗脱，D101柱用水冲洗至流出液无醇味时，再进行下一轮使用；
D、脱色：洗脱液以1BV/h的速度过HYA-506A树脂柱，树脂与洗脱液质量比为2:4，过柱完成后用3倍树脂体积的60％乙醇以1BV/h的流速洗柱，收集过柱液和洗柱液，合并得脱色液；所述HYA-506A树脂柱为树脂预处理后，用0.5％氢氧化钠溶液以2BV/h流速进行前处理，待树脂吸附饱和后用质量浓度为10％NaCl和1％NaOH混合溶液洗脱，再经水洗脱至接近中性；
E、浓缩及干燥：脱色液回收乙醇，并浓缩至12波美度，过滤100目，出膏，再喷雾干燥，所述喷雾干燥参数：进风温度为175℃±10℃，出风温度为85±10℃，喷头电机频率为40Hz±5Hz。
浓缩过滤后得浸膏759.0kg，喷雾干燥后得干膏粉260.2kg，水分要求≤4.5％(105℃，25min)，得率5.4％，三七叶总皂苷(以人参皂苷Rb3计算)含量13％。
对比例1
一种三七叶总皂苷的制备方法，包括以下步骤：
A、提取物制备：同实施例1；
B、纯化：将含总皂苷提取物以1BV/h的速度上D101树脂柱，树脂与提取物质量比为1:1，循环上样一次，待用；
C、洗脱：同实施例1；
D、脱色：同实施例1；
E、浓缩及干燥：同实施例1。
浓缩过滤后得浸膏17.1kg，喷雾干燥后得干膏粉5.54kg，水分要求≤4.5％(105℃，25min)，得率7.9％，三七叶总皂苷(以人参皂苷Rb3计算)含量8.8％。
对比例2
一种三七叶总皂苷的制备方法，包括以下步骤：
A、提取物制备：同实施例1；
B、纯化：同实施例1；
C、洗脱：同实施例1；
D、脱色：HYA-506A树脂经预处理后，洗脱液以3BV/h的速度直接过HYA-506A树脂柱，树脂与洗脱液质量比为1:4，过柱完成后用2倍树脂体积的60％乙醇以3BV/h的流速洗柱，收集过柱液和洗柱液，合并得脱色液；
E、浓缩及干燥：同实施例1。
浓缩过滤后得浸膏11.31kg，喷雾干燥后得干膏粉2.23kg，水分要求≤4.5％(105℃，25min)，得率3.2％，三七叶总皂苷(以人参皂苷Rb3计算)含量12％，但转移率仅为32.5％。
从实施例1至3可知，利用本发明方法制备三七叶总皂苷，总皂苷得率高达6.4％，含量(以人参皂苷Rb3计算)高达15％。通过实施例1和对比例1比较可知，含总皂苷提取物过大孔吸附树脂后，经氢氧化钠溶液洗涤，所得总皂苷含量为15％，而未经氢氧化钠溶液洗涤所得总皂苷含量仅为8.8％，说明纯化过程中，树脂经氢氧化钠溶液洗涤能提高产品总皂苷含量。通过实施例1和对比例2比较可知，HYA-506A树脂柱预处理后，直接用于三七叶总皂苷脱色，得率为3.2％，转移率仅为32.5％，而该树脂用0.5％氢氧化钠溶液以2BV/h流速进行前处理，待树脂吸附饱和后用质量浓度为10％NaCl和1％NaOH溶液洗脱，再经水洗脱至接近中性后，得率为5.8％，转移率高达90％以上。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、提取物制备：三七叶粉碎，加水浸提、过滤，浓缩得含总皂苷的提取物；
B、纯化：将含总皂苷的提取物过大孔吸附树脂，循环上样1-2次，然后以氢氧化钠溶液洗涤，弃去流出液，用纯水洗至中性，待用；
C、洗脱：以乙醇为洗脱剂，洗脱，初期洗脱液直接排出，待洗脱液颜色由无色变为棕色时，收集洗脱液，到洗脱液几乎无色即停止洗脱；
D、脱色：将洗脱液过强碱型阴离子树脂，然后以乙醇洗涤树脂柱，收集过柱液和洗柱液，合并得脱色液；
E、浓缩及干燥：脱色液回收乙醇，浓缩、过滤出膏，喷雾干燥得三七叶总皂苷。
2.根据权利要求1所述的三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤B中所述氢氧化钠溶液质量浓度为0.4％-0.6％。
3.根据权利要求2所述的三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤B中所述氢氧化钠溶液用量为树脂体积的2-4倍。
4.根据权利要求1-3任一项所述的三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，所述强碱型阴离子树脂是HYA-506A树脂。
5.根据权利要求4所述的三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，HYA-506A树脂预处理后，用质量浓度为0.4％-0.6％氢氧化钠溶液以1-3BV/h流速进行前处理，待树脂吸附饱和后，用质量浓度为9％-11％NaCl和0.8％-1.2％NaOH的混合溶液洗脱，再经水洗脱至接近中性。
6.根据权利要求1所述的三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，所述步骤A中，将三七叶皂苷提取液过滤后，浓缩至1.5-2波美度，所述波美度在60℃时测定。
7.根据权利要求6所述的三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤B中所述含总皂苷提取物以1-3BV/h流速过D101大孔吸附树脂。
8.根据权利要求1所述的三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤C中所述洗脱剂的用量为4-5BV。
9.根据权利要求1所述的三七叶总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤E中将脱色液浓缩至6-12波美度，过滤，出膏，再喷雾干燥，所述波美度于60℃时测定。
10.根据权利要求1-9任一项所述的三七叶总皂苷的制备方法所得三七叶总皂苷。
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