CN108338361B - 用于抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品、口腔清洁以及医药组合物 - Google Patents
用于抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品、口腔清洁以及医药组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及用于抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品、口腔清洁以及医药组合物。一种选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F‑1菌株、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP‑32菌株、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL‑104菌株、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL‑156菌株、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE‑78菌株、鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT‑53菌株及副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET‑66菌株。上述乳酸菌菌株具有抑制口腔病原菌的作用，且以食品、口腔清洁或医药组合物的形式存在。
Description
技术领域
本发明是有关一种食品组合物、口腔清洁组合物以及医药组合物，特别是一种包含抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品组合物、口腔清洁组合物以及医药组合物。
背景技术
幼儿的乳齿保健将会影响到未来的恒久齿，因此，从婴儿时期开始，口腔清洁即十分重要。若口腔有细菌滋生，细菌容易附着于牙龈表面，待乳齿长出后会直接附着于婴儿的乳齿上造成龋齿。乳齿是一切牙齿的基础，乳齿可维系适当的空间及距离以提供未来恒久齿的生长。若乳齿没有照顾好，放任乳齿产生龋齿，龋齿会导致空间严重丧失，且将来恒久齿在发育时，恒久齿的周围都是细菌与脓包，导致新长出来的牙齿也比较容易形成龋齿，甚至影响成年及老年后的牙周病发生率。
因此，中国台湾从公元1991年投入大量经费推动幼儿免费涂氟策略，政策的实施略有改善龋齿盛行率，下降约15个百分比，龋齿颗数减少约2颗。但中国台湾的龋齿防御率，依旧排名在亚洲地区的末位(倒数第二)。世界卫生组织(WHO)预计在2010年时，所有会员国家将达到「90％五岁以下幼童全口无龋齿、12岁儿童的龋齿数不超过2颗」的目标。中国台湾目前为20％左右没有龋齿，12岁儿童的龋齿数超过3颗，距离WHO的定义差距甚远，值得我们加强重视。
一般食用含乳酸菌(LAB)的产品仅具有调整肠道健康的效果。虽然有数以万计的乳酸菌菌株存在自然界，但目前仅发现少数乳酸菌菌株可能具有维护口腔健康及美白牙齿的潜在性附属特质。这些菌株所具有的抑制口腔病原菌的能力、吸附口腔黏膜表皮细胞的能力、在洁牙产品中是否尚能维持抑制病原菌及产生过氧化氢的能力等特性，是激发菌株在口腔展现功能，控制口腔中的微生态平衡、筛选有维护口腔健康及美白牙齿功能性菌株时的重要依据。
文献指出益生菌可以与病原菌竞争贴附的生存区域及营养需求，促进病原菌产生聚集特性，并分泌抑菌物质使得病原菌较虚弱或甚至杀死病原菌，来达到减少口腔病原菌数量并维持口腔健康的功效，以及分泌过氧化氢去除口腔气味及美白牙齿的目的。
时至今日，仅有少数菌株经实验过程发现具备有维持口腔健康及美白牙齿的活性效果的乳酸菌菌株被确认。而乳酸菌对身体健康的功能在于菌株(strain)的特异性而非菌种(species)，此种对于人的身体健康有特殊功效的菌株称为功能性益生菌(Guidelinesfor the evaluation of probiotics in food；Report of joint FAO/WHO workinggroup on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food；LondonOntario,Canada April 30and May 1,2002：1-7)。
综上所述，开发具有抑制口腔病原菌的活性效果的功能性益生菌是目前需努力的目标。
发明内容
本发明提供一种含乳酸菌菌株的食品组合物、口腔清洁组合物以及医药组合物，其可抑制口腔病原菌的生长，以维持口腔健康。
本发明一实施例的含乳酸菌菌株的食品组合物包含具有抑制口腔病原菌的活性效果的乳酸菌菌株，该乳酸菌菌株选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F-1菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011124、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011127、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，保藏编号CCTCC NO:M209138、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株，保藏编号CCTCC NO:M2014590、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE-78菌株，保藏编号CGMCCNo.13513、鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT-53菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011129、以及副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-66菌株，保藏编号CGMCCNo.13514，上述菌株分别保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及生理上可接受的赋形剂或稀释剂。
本发明另一实施例的含乳酸菌菌株的医药组合物包含具有抑制口腔病原菌的活性效果的乳酸菌菌株，该乳酸菌菌株选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F-1菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011124、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011127、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，保藏编号CCTCC NO:M209138、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株，保藏编号CCTCC NO:M2014590、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE-78菌株，保藏编号CGMCCNo.13513、鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT-53菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011129、以及副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-66菌株，保藏编号CGMCCNo.13514，上述菌株分别保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及医药上可接受的赋形剂或稀释剂。
本发明再一实施例的含乳酸菌菌株的口腔清洁组合物包含具有抑制口腔病原菌的活性效果的乳酸菌菌株，该乳酸菌菌株选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F-1菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011124、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32菌株，保藏编号CCTCCNO:M2011127、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，保藏编号CCTCC NO:M209138、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株，保藏编号CCTCC NO:M2014590、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE-78菌株，保藏编号CGMCCNo.13513、鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT-53菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011129、以及副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-66菌株，保藏编号CGMCCNo.13514，上述菌株分别保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及生理上可接受的赋形剂或稀释剂。
以下藉由具体实施例配合所附的图式详加说明，当更容易了解本发明的目的、技术内容、特点及其所达成的功效。
附图说明
图1为本发明的乳酸菌菌株抑制变形链球菌(Streptococcus mutans)的试验结果。
图2为本发明的乳酸菌菌株抑制具核梭杆菌多型亚种(Fusobacterium nucleatumsubsp.polymorphum)的试验结果。
图3为本发明的乳酸菌菌株抑制放线共生放线杆菌(Aggregatibacteractinomycetemcomitans)的试验结果。
图4为本发明的乳酸菌菌株抑制牙龈卟啉单孢菌(Porphyromonas gingivalis17)的试验结果。
图5为本发明的乳酸菌菌株抑制牙龈卟啉单孢菌(Porphyromonas gingivalis18)的试验结果。
图6为本发明的乳酸菌菌株分泌过氧化氢的平板试验结果。
图7为本发明的乳酸菌菌株分泌过氧化氢的试纸试验结果。
具体实施方式
以下将详述本发明的各实施例，并配合图式作为例示。除了这些详细说明之外，本发明亦可广泛地施行于其它的实施例中，任何所述实施例的轻易替代、修改、等效变化都包含在本发明的范围内，并以申请专利范围为准。在说明书的描述中，为了使读者对本发明有较完整的了解，提供了许多特定细节；然而，本发明可能在省略部分或全部特定细节的前提下，仍可实施。此外，众所周知的步骤或组件并未描述于细节中，以避免对本发明形成不必要的限制。图式中相同或类似的组件将以相同或类似符号来表示。特别注意的是，图式仅为示意之用，并非代表组件实际的尺寸或数量，有些细节可能未完全绘出，以求图式的简洁。
本发明所述的乳酸菌菌株的冷冻干燥培养物已分别保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏的详细资料如表1所示：
表1乳酸菌菌株的保藏资料
如表1所列已保藏的七株乳酸菌中，嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株被发现具有抑制口腔病原菌的能力，例如龋齿菌、牙龈菌及口腔气味菌等。此外，唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株及鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株可以分泌过氧化氢，除了抑制口腔病原菌之外，还可以达到美白牙齿的功效。
本发明包含具有抑制口腔病原菌的活性效果的乳酸菌菌株，该乳酸菌菌株选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F-1菌株(保藏编号CCTCC NO:M2011124)、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivariussubsp.salicinius)AP-32菌株(保藏编号CCTCC NO:M2011127)、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株(保藏编号CCTCC NO:M209138)、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株(保藏编号CCTCC NO:M2014590)、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE-78菌株(保藏编号CGMCC No.13513)、鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT-53菌株(保藏编号CCTCC NO:M2011129)、以及副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-66菌株(保藏编号CGMCC No.13514)，上述菌株分别保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及生理上可接受的赋形剂、稀释剂或载体所组成的食品组合物或口腔清洁组合物，或医药上可接受的赋形剂或稀释剂所组成的医药组合物。其中乳酸菌菌株可为具有活性或去活性(inactivated)的菌株。
于食品组合物的实施例中，生理上可接受的赋形剂或稀释剂可为一食品，举例而言，食品可包含但不限于乳制饮品、茶、咖啡、口香糖及洁牙糖(例如口含片、咀嚼锭、软糖等)、宠物用肉干或以上的组合，其中乳制饮品可包含发酵乳、酸奶、奶酪或乳粉。于口腔清洁组合物的实施例中，赋形剂或稀释剂可为牙膏、洁牙粉、潄口水、口气清新喷雾、涂氟剂(例如涂抹于幼儿牙齿的氟剂)、假牙清洁剂、宠物用洁牙胶或宠物用化毛膏等；载体可为牙刷、牙间刷、牙线、口腔棉棒或宠物用洁牙骨等。医药组合物可包含口服剂型或外用剂型。举例而言，口服剂型可为锭剂、胶囊、溶液剂及粉剂等。
食品组合物或医药组合物中，乳酸菌菌株的数量为106CFU以上；较佳者，乳酸菌菌株的数量为1010CFU以上。
目前已知部份菌株对于抑制龋齿菌及牙周菌是有功效的，但文献指出，多数的研究都是针对个别菌株在口腔内的功效进行试验，且不是所有的试验结果皆证明乳酸菌对于口腔健康是有帮助的，还是有菌株功效上的个体差异(Anna Haukioja,European Journalof Dentistry 2010(4):348-355)。举例而言，Vuotto C等人(International Journal ofOral Science 2014(6):189-194)针对益生菌对于病原菌的抑制能力分析，提到任何一株益生菌都不会是相同的，即便是同种不同株的益生菌，试验的结果有时都会是相反的。这样的结果更加强调益生菌对于口腔病原菌的抑制及美白牙齿等功效确实是有菌株特异性的现象。
事实上，由本发明的下列试验结果可知，多数乳酸杆菌菌株并不具有抑制口腔病原菌及美白牙齿的作用。国内外目前针对益生菌在维护口腔健康相关功能研究的文献报导在近期才有陆续增加的趋势。早期认为益生菌之中的乳酸菌各属，由于产酸的特性有可能与口腔病原菌共存之外，还有可能促成腐蚀珐琅质，而造成龋齿。但实际上，由实验显示乳酸菌不但可以抑制龋齿菌及牙周菌之外，还能与之竞争口腔黏膜的生存空间及营养来源，并且造成口腔病原菌的凝集而易排除。但这些特性都必须透过实验才能确认，并非所有的菌株皆有相同的特性及实验结果。应说明的是，本发明所请求保护的菌株仅包含保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株(保藏编号CCTCC NO:M2011124)、唾液乳酸杆菌AP-32菌株(保藏编号CCTCCNO:M2011127)、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株(保藏编号CCTCC NO:M209138)、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株(保藏编号CCTCC NO:M2014590)、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株(保藏编号CGMCCNo.13513)、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株(保藏编号CCTCC NO:M2011129)以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株(保藏编号CGMCC No.13514)，并非广泛地包含以上所有相同菌种的乳酸菌。
实例1：维持口腔健康的乳酸菌的形态学以及一般性质
根据16S rDNA序列分析以及API细菌鉴定系统分析结果来确认菌株在分类学上的特征。上述菌株在形态学及一般性质上的特征详细列于表2：
表2乳酸菌菌株的形态学及一般性质特征
实例2：分析菌株产生过氧化氢的特性，以确认对于牙齿美白的功能
检视本发明的乳酸菌菌株－嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株产生过氧化氢的能力，藉此来验证本发明的乳酸菌菌株的美白牙齿的能力。实验步骤如下：
1.制备益生菌产过氧化氢筛选平板。
2.在平板内加入三甲基硼(Trimethyl borane TMB)0.25mg/ml与辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase HRP)0.01mg/ml。
3.在平板上以画四区方式培养目标菌株。
4.培养两天后，有产生过氧化氢的乳酸菌菌株，会呈现蓝色在菌落周围。
5.利用过氧化氢感测试纸，侦测乳酸菌菌体及二次代谢物含过氧化氢的浓度。
6.培养乳酸菌菌液并以4500rpm离心5分钟。
7.取菌体的部分溶于4.9毫升100mM的哌嗪-1,4-二乙磺酸(Piperazine-1,4-bisethanesulfonicacid PIPES)。
8.以37℃220rpm培养5小时，将菌体离心后取10微升(μL)上清液或沉降的菌体滴于过氧化氢检测试纸(Merck)反应10秒钟，观察颜色变化并与比色卡比对记录浓度。
实验结果如图6及图7所示。图6为嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株以及鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株在过氧化氢检测平板上培养后，在平板上显示分泌过氧化氢能力的结果。图7为嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株以及鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株的代谢产物或菌体在过氧化氢检测试纸上呈现过氧化氢分泌浓度的结果。
由图6的试验结果可知，培养两天后，菌株的生长过程中，本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株以及鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株皆能够分泌过氧化氢。另须说明的是，非本发明的相同菌种的乳酸菌菌株，例如嗜酸乳酸杆菌6菌株、唾液乳酸杆菌28菌株、罗伊氏乳酸杆菌23菌株、副干酪乳酸杆菌9菌株、瑞士乳酸杆菌76菌株、鼠李糖乳酸杆菌134菌株，则没有分泌过氧化氢的能力，如图6所示。
由图7的试验结果可知，嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株以及鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株的代谢产物中，以唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株能将分泌的过氧化氢扩散至液体中。而嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株将过氧化氢存留在菌体内，使菌体本身带有过氧化氢。无论是上清液或是菌体，副干酪乳酸杆菌GL-156菌株并未侦测到过氧化氢，显示副干酪乳酸杆菌GL-156菌株产生过氧化氢的代谢速度比其他菌株来得较为缓慢，而需要较长时间(因本实施例只进行5小时的代谢时间)。另外，嗜酸乳酸杆菌F-1菌株的菌体有侦测到微量过氧化氢，而在上清液尚未侦测到，显示5小时代谢时间对于嗜酸乳酸杆菌F-1菌株而言，才开始分泌过氧化氢，也是属于需要较长时间的菌株。
实例3：维持口腔健康的乳酸菌对于口腔病原菌的抑制能力
乳酸菌要发挥口腔保健功能，首重口腔病原菌的抵抗能力是否强大。口腔病原菌不仅仅只是大众比较熟知的变形链球菌(Streptococcus mutans)，还包含具核梭杆菌多型亚种(Fusobacterium nucleatum subsp.polymorphum)、放线共生放线杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)、牙龈卟啉单孢菌(Porphyromonasgingivalis)。各菌株所引起的症状分别是变形链球菌造成龋齿；具核梭杆菌多型亚种主要造成牙周病、口臭及结肠癌等问题；放线共生放线杆菌则是引起牙周炎、口腔发炎及肺炎的主要菌种；牙龈卟啉单孢菌则是成人型牙周炎致病菌及口臭的主因。此外，具核梭杆菌多型亚种、放线共生放线杆菌以及牙龈卟啉单孢菌皆会产生硫化物，因此对于口腔气味，除了牙龈卟啉单孢菌是引起口臭的主要菌种外，具核梭杆菌多型亚种以及放线共生放线杆菌也是影响口腔气味的菌种之一。
因此，本发明进行病原菌抑制试验，评估本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株抑制口腔病原菌的能力，进而达成维持口腔健康的效果。使用如下的实验步骤：
1.活化口腔病原菌。
2.将热致死乳酸菌调整菌数，依每毫升十亿菌体的比例与病原菌共同培养。
3.以厌氧方式、150rpm转速培养在37℃环境中2-4天。
4.计数病原菌的数量。
数据的统计分析如表3及图1至图5所示，图1为本发明的乳酸菌菌株抑制变形链球菌(Streptococcus mutans)的能力分析；图2为本发明的乳酸菌菌株抑制具核梭杆菌多型亚种(Fusobacterium nucleatum subsp.polymorphum)、图3为本发明的乳酸菌菌株抑制放线共生放线杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)、图4及图5为本发明的乳酸菌菌株抑制牙龈卟啉单孢菌(Porphyromonas gingivalis)的能力分析，数据皆以Mean±SD表示之，并与控制组比较。
如图1所示为本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株抑制变形链球菌(Streptococcus mutans)生存的结果，其中以鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株的抑制效果最为显著。
如图2所示为本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株抑制具核梭杆菌多型亚种(Fusobacteriumnucleatum subsp.polymorphum)生存的结果。由图2的试验结果可知，本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株皆具有显著的抑制效果。
如图3所示为本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株抑制放线共生放线杆菌(Aggregatibacteractinomycetemcomitans)生存的结果，其中以鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株的抑制效果较为显著。
如图4所示为本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株抑制牙龈卟啉单孢菌(Porphyromonasgingivalis 17)生存的结果。由图4的试验结果可知，本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株皆具有显著的抑制效果。
如图5所示为本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、瑞士乳酸杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株抑制牙龈卟啉单孢菌(Porphyromonasgingivalis 18)生存的结果。除了瑞士乳酸杆菌RE-78菌株以外，本发明的嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、唾液乳酸杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌GL-156菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株皆具有显著的抑制效果。
表3所示为本发明的乳酸菌菌株对于口腔病原菌抑制率百分比分析。对于五株病原菌皆有抑制能力的菌株为嗜酸乳酸杆菌F-1菌株、鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株以及副干酪乳酸杆菌ET-66菌株，其中，鼠李糖乳酸杆菌CT-53菌株对于变形链球菌(Streptococcusmutans)抑制效果最好；而罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株以及副干酪乳酸杆菌GL-156菌株则可以抑制四株口腔病原菌，对于变形链球菌(Streptococcus mutans)并无抑制能力；唾液乳酸杆菌AP-32菌株以及瑞士乳酸杆菌RE-78菌株则能抑制三株口腔病原菌，对于变形链球菌(Streptococcus mutans)以及放线共生放线杆菌(Aggregatibacteractinomycetemcomitans)并无抑制能力，其中唾液乳酸杆菌AP-32菌株对于能够抑制的三株病原菌，抑制能力皆高达90％以上，且这三株口腔病原菌皆与产生口臭的原因息息相关，因此唾液乳酸杆菌AP-32菌株拥有在口气清新相关产品应用上的能力。
表3七株乳酸菌菌株抑制口腔病原菌的抑制率
综合以上试验结果，本发明的含乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物可抑制口腔病原菌的生长，可作为降低人体龋齿、牙周病及口气异味等应用。较佳者，可分泌过氧化氢的乳酸菌菌株对于牙齿的美白亦有作用能力。本发明找出对人体无副作用且有益健康的维持口腔健康乳酸菌作为维持口腔健康的新选择。
以上所述的实施例仅是为说明本发明的技术思想及特点，其目的在使本领域技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，当不能以之限定本发明的专利范围，即大凡依本发明所揭示的精神所作的均等变化或修饰，仍应涵盖在本发明的专利范围内。
【生物材料保藏】
【1】中国典型培养物保藏中心、2011年04月10日、保藏编号CCTCC NO:M2011124
【2】中国典型培养物保藏中心、2011年04月10日、保藏编号CCTCC NO:M2011127
【3】中国典型培养物保藏中心、2009年08月07日、保藏编号CCTCC NO:M209138
【4】中国典型培养物保藏中心、2014年11月24日、保藏编号CCTCC NO:M2014590
【5】中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、2016年12月29日、保藏编号CGMCC No.13513
【6】中国典型培养物保藏中心、2011年04月10日、保藏编号CCTCC NO:M2011129
【7】中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、2016年12月29日、保藏编号CGMCC No.13514。
Claims (16)
1.一种乳酸菌菌株供应用于制备一用于抑制口腔病原菌的食品组合物的用途，其特征在于，该乳酸菌菌株选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F-1菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011124、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011127、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，保藏编号CCTCC NO:M209138、以及鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT-53菌株，保藏编号CCTCCNO:M2011129，上述菌株保藏于中国典型培养物保藏中心。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，该食品组合物进一步包含有一种选自于下列群组中的乳酸菌菌株：副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株，保藏编号CCTCC NO:M2014590、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE-78菌株，保藏编号CGMCC No.13513、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-66菌株，保藏编号CGMCCNo.13514，以及它们的组合。
3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，该乳酸菌菌株为具有活性的菌株。
4.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，该乳酸菌菌株为去活性的菌株。
5.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，该食品组合物包含乳制饮品、茶、咖啡、口香糖及洁牙糖、宠物用肉干或以上的组合。
6.一种乳酸菌菌株供应用于制备一用于抑制口腔病原菌的医药组合物的用途，其特征在于，该乳酸菌菌株选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F-1菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011124、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011127、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，保藏编号CCTCC NO:M209138、以及鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT-53菌株，保藏编号CCTCCNO:M2011129，上述菌株保藏于中国典型培养物保藏中心。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，该医药组合物进一步包含有一种选自于下列群组中的乳酸菌菌株：副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株，保藏编号CCTCC NO:M2014590、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE-78菌株，保藏编号CGMCC No.13513、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-66菌株，保藏编号CGMCCNo.13514，以及它们的组合。
8.如权利要求6或7所述的用途，其特征在于，该乳酸菌菌株为具有活性的菌株。
9.如权利要求6或7所述的用途，其特征在于，该乳酸菌菌株为去活性的菌株。
10.如权利要求6或7所述的用途，其特征在于，该医药组合物为口服剂型或外用剂型。
11.一种含乳酸菌菌株的口腔清洁组合物，包含：
具有抑制口腔病原菌的活性效果的乳酸菌菌株，该乳酸菌菌株选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F-1菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011124、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011127、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，保藏编号CCTCC NO:M209138、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株，保藏编号CCTCC NO:M2014590、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE-78菌株，保藏编号CGMCC No.13513、鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT-53菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011129、以及副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-66菌株，保藏编号CGMCC No.13514，上述菌株分别保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及
生理上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
12.如权利要求11所述的含乳酸菌菌株的口腔清洁组合物，其特征在于，该乳酸菌菌株为具有活性的菌株。
13.如权利要求11所述的含乳酸菌菌株的口腔清洁组合物，其特征在于，该乳酸菌菌株为去活性的菌株。
14.如权利要求11所述的含乳酸菌菌株的口腔清洁组合物，其特征在于，该赋形剂或稀释剂为牙膏、洁牙粉、潄口水、口气清新喷雾、涂氟剂、假牙清洁剂、宠物用洁牙胶或宠物用化毛膏。
15.如权利要求11所述的含乳酸菌菌株的口腔清洁组合物，其特征在于，该载体为牙刷、牙间刷、牙线、口腔棉棒或宠物用洁牙骨。
16.一种乳酸菌菌株供应用于制备一用于抑制口腔病原菌的口腔清洁组合物的用途，其特征在于，该乳酸菌菌株选自以下群组中的至少一经分离的乳酸菌菌株：嗜酸乳酸杆菌(Lactobacilus acidophilus)F-1菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011124、唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011127、罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，保藏编号CCTCC NO:M209138、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株，保藏编号CCTCC NO:M2014590、瑞士乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)RE-78菌株，保藏编号CGMCCNo.13513、鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CT-53菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011129、以及副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-66菌株，保藏编号CGMCCNo.13514，上述菌株分别保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
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