CN108329376A - 一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物技术领域，具体涉及一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法。本发明公开了一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，步骤如下：1)亚麻籽的前处理；2)含疏水性亚麻环肽的亚麻籽油的提取；3)疏水性亚麻环肽的脱色；4)疏水性亚麻环肽的纯化。本发明所述从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法简单、高效、快速，可作为制备疏水性环肽的一般工艺进行推广；本发明可同时得到多种疏水性亚麻环肽，为不同种类亚麻环肽的制备提供了方便且有效的方法。
Description
技术领域
本发明属于药物技术领域，具体涉及一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法。
背景技术
亚麻是一种很重要的油料经济作物，中国是世界亚麻主产国之一，面积仅次于加拿大和印度，位居第三位，总产量位居第二位。我国的亚麻以油用为主，主要分布在华北、西北地区。亚麻的种子亚麻籽中含有丰富的营养物质，通常被归类于功能性食品或生物活性食品。据报道，亚麻籽的营养功能主要在于它具有抗动脉粥样硬化、抗癌抗炎、减少更年期症状和减少骨质疏松症状等作用。亚麻中的功能性成分有多不饱和脂肪酸、木酚素、天然植物胶和环肽等。目前国内涉及到有关亚麻籽的研究主要是亚麻籽胶、多不饱和脂肪酸(亚麻酸)和木酚素，而对亚麻籽蛋白或是亚麻籽环肽的研究甚少。
环肽(cyclolinopeptide)是20世纪90年代中期发现的一类大环寡肽类化合物，是指由数个或者数十个氨基酸残基通过酰胺键首尾连接形成的环肽类基因产物。环肽在自然界中广泛分布，动物、植物、真菌、细菌及海洋生物中都含有特殊结构的环肽。天然环肽中常含有非常见氨基酸，如D‐氨基酸、β‐氨基酸及α、β‐二脱氢氨基酸等。
由于环肽的环状结构具有一定的构象约束作用，其构象相对线型肽有一定的稳定性，其抗酶解能力比线型肽强，这一特点使环肽具有更多的功能作用，近年来对多肽研究的热点已转移到环肽的生物评价和应用价值上。环肽具有多种生理功能和医药价值的环状多肽，在形成荷尔蒙、抗生素、离子载体系统、抗真菌素、癌制剂以及毒素等方面展现出丰富多样的生物活性，具有重大的应用价值。
目前公开的与植物环肽提取相关的专利有：中国专利申请公布号CN104193808A、CN102174083B等。国内关于环肽提取的植物来源主要是茜草科类植物以及菊科类植物，从亚麻籽中提取环肽的相关报道十分少见。国际专利申请公布号为CN101945888A的专利申请报道了从植物材料分离和回收单种环肽的方法，截至目前，国内关于从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法鲜有报道。
发明内容
为解决现有技术的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种具有免疫调节活性和抗氧化活性的疏水性环肽的制备方法。本发明的另一个目的在于提供上述制备方法获得的具有免疫调节活性和抗氧化活性的疏水性环肽。本发明的再一个目的在于提供上述具有免疫调节活性和抗氧化活性的疏水性环肽的性质及应用。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，包括以下步骤：
1)亚麻籽的前处理：将粗筛选处理的亚麻籽，经粉碎机粉碎后，过60-80目筛，将过筛后的亚麻籽粉置于烘箱中，40-60℃干燥12-36h，得干燥的亚麻籽粉；
2)含疏水性亚麻环肽的亚麻籽油的提取：取适量的步骤1)获得的干燥亚麻籽粉，采用固液萃取法，丙酮提取3-8h，得到含有疏水性亚麻肽的亚麻籽油，减压浓缩，并用惰性气体对所得亚麻籽油进行抗氧化保护；
3)疏水性亚麻环肽的脱色：将步骤2)所得亚麻籽油与正己烷按体积比1：4-6混合，采用活性炭吸附脱色，至混合液变为无色，滤去活性炭，滤液减压浓缩，收集浓缩液；
4)疏水性亚麻环肽的纯化：将步骤3)获得的浓缩液与正己烷按体积比1：2-4混合，用层析柱纯化，纯化过程采用薄层色谱进行初步监测，反相高效液相色谱进行鉴定；洗脱后的流分分段收集，合并收集目标相同物质的接样管，减压浓缩，低温真空干燥，得到目标疏水性环肽。
如上所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，步骤1)所述的粗筛选处理是指对亚麻籽中的一些土渣、杂草碎片等杂物人工或者利用机器进行去除。
如上所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，步骤2)所述的固液萃取法具体为：称取一定量的步骤1)所得的亚麻籽粉，用滤纸包裹，置于玻璃抽提器中，将亚麻籽粉和丙酮按质量比1：10-20混合，提取3-8h，将丙酮提取液于45℃下进行旋转蒸发浓缩。
如上所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，步骤3)所述的脱色过程是采用粉末活性炭震荡吸附脱色法，活性炭添加量为油脂和正己烷混合液质量的1％，脱色温度控制为50-55℃，脱色2-3次，每次脱色时间1.5h。
如上所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，步骤3)所述的过滤是采用双圈定性滤纸进行抽滤。
如上所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，步骤4)所述的纯化所用的层析柱是用硅胶与石英砂混合装填而成的，洗脱过程采用不同比例的己烷、甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷混合液为洗脱剂进行洗脱。
如上所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，步骤4)所述的鉴定用色谱柱为Diamonsil C18分析柱。
上述制备方法获得了多种具有免疫调节活性和抗氧化活性的疏水性环肽，所述疏水性环肽组分均一，具有氧化还原性质，可与锌、铅、镉等金属离子形成稳定的络合物。
所述疏水性环肽中部分具有可以抑制胆酸摄入肝细胞，潜在地保护肝脏免受毒害的功能。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明从亚麻籽中提取疏水性环肽，提供了一种有别于传统来源的环肽制备的新途径。
(2)本发明可同时得到多种疏水性亚麻环肽，为不同种类亚麻环肽的制备提供了方便且有效的方法。
(3)本发明亚麻籽原料来源广泛，且方法可靠，为更近一步研究亚麻籽疏水性环肽性质及应用奠定了基础。
具体实施方式
以下通过具体实施例进一步描述本发明，但所述发明并不以任何方式限定本发明专利保护的范围。
实施例1
一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，包括以下步骤：
1)亚麻籽的前处理：将亚麻籽中的一些土渣、杂草碎片等杂物人工或者利用机器进行去除。将粗筛选处理的亚麻籽，经粉碎机粉碎后，过60目筛，将过筛后的亚麻籽粉置于烘箱中，40℃干燥36h，得干燥的亚麻籽粉；
2)含疏水性亚麻环肽的亚麻籽油的提取：称取一定量的步骤1)所得的亚麻籽粉，用滤纸包裹，置于玻璃抽提器中，将亚麻籽粉和丙酮按质量比1：10混合，提取3h，将丙酮提取液于45℃下进行旋转蒸发浓缩，并用惰性气体对所得亚麻籽油进行抗氧化保护；
3)疏水性亚麻环肽的脱色：将步骤2)所得亚麻籽油与正己烷按体积比1：4混合，采用活性炭吸附脱色，活性炭添加量为油脂和正己烷混合液质量的1％，脱色温度为50℃，脱色2次，每次脱色时间1.5h，滤去活性炭，过滤是采用双圈定性滤纸进行抽滤，滤液减压浓缩，收集浓缩液；
4)疏水性亚麻环肽的纯化：将步骤3)获得的浓缩液与正己烷按体积比1：2混合，用层析柱纯化，层析柱是用硅胶与石英砂混合装填而成的，洗脱过程采用己烷：乙酸乙酯：二氯甲烷＝20:20:1(v/v/v)为洗脱剂进行洗脱，纯化过程采用薄层色谱进行初步监测，反相高效液相色谱进行鉴定，鉴定用色谱柱为DiamonsilC18分析柱；洗脱后的流分分段收集，合并收集目标相同物质的接样管，减压浓缩，低温真空干燥，得到目标疏水性环肽。
实施例2
一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，包括以下步骤：
1)亚麻籽的前处理：将亚麻籽中的一些土渣、杂草碎片等杂物人工或者利用机器进行去除。将粗筛选处理的亚麻籽，经粉碎机粉碎后，过80目筛，将过筛后的亚麻籽粉置于烘箱中，60℃干燥12h，得干燥的亚麻籽粉；
2)含疏水性亚麻环肽的亚麻籽油的提取：称取一定量的步骤1)所得的亚麻籽粉，用滤纸包裹，置于玻璃抽提器中，将亚麻籽粉和丙酮按质量比1：20混合，提取8h，将丙酮提取液于45℃下进行旋转蒸发浓缩，并用惰性气体对所得亚麻籽油进行抗氧化保护；
3)疏水性亚麻环肽的脱色：将步骤2)所得亚麻籽油与正己烷按体积比1：6混合，采用活性炭吸附脱色，活性炭添加量为油脂和正己烷混合液质量的1％，脱色温度为55℃，脱色3次，每次脱色时间1.5h，滤去活性炭，过滤是采用双圈定性滤纸进行抽滤，滤液减压浓缩，收集浓缩液；
4)疏水性亚麻环肽的纯化：将步骤3)获得的浓缩液与正己烷按体积比1：4混合，用层析柱纯化，层析柱是用硅胶与石英砂混合装填而成的，洗脱过程采用甲醇：乙酸乙酯：二氯甲烷＝15:15:1(v/v/v)为洗脱剂进行洗脱，纯化过程采用薄层色谱进行初步监测，反相高效液相色谱进行鉴定，鉴定用色谱柱为Diamonsil C18分析柱；洗脱后的流分分段收集，合并收集目标相同物质的接样管，减压浓缩，低温真空干燥，得到目标疏水性环肽。
实施例3
一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，包括以下步骤：
1)亚麻籽的前处理：将亚麻籽中的一些土渣、杂草碎片等杂物人工或者利用机器进行去除。将粗筛选处理的亚麻籽，经粉碎机粉碎后，过70目筛，将过筛后的亚麻籽粉置于烘箱中，50℃干燥24h，得干燥的亚麻籽粉；
2)含疏水性亚麻环肽的亚麻籽油的提取：称取一定量的步骤1)所得的亚麻籽粉，用滤纸包裹，置于玻璃抽提器中，将亚麻籽粉和丙酮按质量比1：15混合，提取5h，将丙酮提取液于45℃下进行旋转蒸发浓缩，并用惰性气体对所得亚麻籽油进行抗氧化保护；
3)疏水性亚麻环肽的脱色：将步骤2)所得亚麻籽油与正己烷按体积比1：5混合，采用活性炭吸附脱色，活性炭添加量为油脂和正己烷混合液质量的1％，脱色温度为52℃，脱色2次，每次脱色时间1.5h，滤去活性炭，过滤是采用双圈定性滤纸进行抽滤，滤液减压浓缩，收集浓缩液；
4)疏水性亚麻环肽的纯化：将步骤3)获得的浓缩液与正己烷按体积比1：3混合，用层析柱纯化，层析柱是用硅胶与石英砂混合装填而成的，洗脱过程采用己烷：甲醇：乙酸乙酯＝15:15:3(v/v/v)为洗脱剂进行洗脱，纯化过程采用薄层色谱进行初步监测，反相高效液相色谱进行鉴定，鉴定用色谱柱为DiamonsilC18分析柱；洗脱后的流分分段收集，合并收集目标相同物质的接样管，减压浓缩，低温真空干燥，得到目标疏水性环肽。
Claims (7)
1.一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)亚麻籽的前处理：将粗筛选处理的亚麻籽，经粉碎机粉碎后，过60-80目筛，将过筛后的亚麻籽粉置于烘箱中，40-60℃干燥12-36h，得干燥的亚麻籽粉；
2)含疏水性亚麻环肽的亚麻籽油的提取：取步骤1)获得的干燥亚麻籽粉，采用固液萃取法，丙酮提取3-8h，得含有疏水性亚麻环肽的亚麻籽油，减压浓缩，并用惰性气体对所得亚麻籽油进行抗氧化保护；
3)疏水性亚麻环肽的脱色：将步骤2)所得亚麻籽油与正己烷按体积比1：4-6混合，采用活性炭吸附脱色，至混合液变为无色，滤去活性炭，滤液减压浓缩，收集浓缩液；
4)疏水性亚麻环肽的纯化：将步骤3)获得的浓缩液与正己烷按体积比1：2-4混合，用层析柱纯化，纯化过程采用薄层色谱进行初步监测，反相高效液相色谱进行鉴定；洗脱后的流分分段收集，合并收集目标相同物质的接样管，减压浓缩，低温真空干燥，得到疏水性环肽。
2.根据权利要求1所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，其特征在于：步骤1)所述的粗筛选处理是指对亚麻籽中的一些土渣、杂草碎片等杂物人工或者利用机器进行去除。
3.根据权利要求1所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，其特征在于：步骤2)所述的固液萃取法具体为：称取一定量的步骤1)所得的亚麻籽粉，用滤纸包裹，置于玻璃抽提器中，将亚麻籽粉和丙酮按质量比1：10-20混合，提取3-8h，将丙酮提取液于45℃下进行旋转蒸发浓缩。
4.根据权利要求1所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，其特征在于：步骤3)所述的脱色过程是采用粉末活性炭震荡吸附脱色法，活性炭添加量为油脂和正己烷混合液质量的1％，脱色温度控制为50-55℃，脱色2-3次，每次脱色时间1.5h。
5.根据权利要求1所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，其特征在于：步骤3)所述的过滤是采用双圈定性滤纸进行抽滤。
6.根据权利要求1所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，其特征在于：步骤4)所述的纯化所用的层析柱是用硅胶与石英砂混合装填而成的，洗脱过程采用不同比例的甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷混合液为洗脱剂进行洗脱。
7.根据权利要求1所述的一种从亚麻籽油中回收疏水性环肽的方法，其特征在于：步骤4)所述的鉴定用色谱柱为Diamonsil C18分析柱。
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