CN108329326A - 吲哚咔唑类生物碱衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了吲哚咔唑类生物碱Streptocarbazole衍生物及其制备方法和应用，该化合物的结构如式Ⅰ、Ⅱ所示，该化合物具有抗肿瘤活性以及蛋白激酶抑制活性，可用于制备蛋白激酶抑制剂类药物和抗肿瘤药物。吲哚咔唑类生物碱Streptocarbazole衍生物的制备方法，由放线菌经固体发酵培养产生，可通过对发酵产物进行乙酸乙酯萃取后，再用凝胶色谱和反相色谱分离纯化得到，易于操作和实施。

Description

吲哚咔唑类生物碱衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及放线菌培养制备化合物技术领域，具体涉及吲哚咔唑类生物碱(Streptocarbazole)衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
癌症是现今世界上人类死亡的第二大诱因。从全球情况看，近六分之一的死亡由癌症造成。因此，推进和加强抗肿瘤药物的研发具有重大意义。由于耐药性的产生，新药的开发阻力越来越大。为寻找结构新颖、生物活性和作用机制独特的新天然产物作为新药，海洋微生物成为了新的研究热点。研发人员已从海洋微生物发现许多活性较优的天然产物。其中星孢菌素是从放线菌的培养基中分离出来的一种吲哚咔唑类生物碱，其具有多种药理活性如抗肿瘤活性、抗菌作用、抑制血小板聚集等。最重要的是其具有广谱的蛋白激酶抑制活性，如对蛋白激酶C(PKC)、酪氨酸激酶(TPK)，细胞周期依赖性激酶蛋白等。该类衍生物也有部分进入临床试验如星孢菌素半合成得到的吲哚咔唑类衍生物Midostaurin则在治疗FTL3突变急性髓性白血病(AML)临床研究取得了重大突破,于2017年获得FDA批准上市，并且有相关实验表明其具有一定的抗HIV-1潜伏的作用，促进潜伏的病获得毒激活，配合其他药物对艾滋病进行治疗。从已经进入临床试验的吲哚咔唑类衍生物来看，该类化合物仍然具有进一步开发的前景，筛选出结构较为新颖且选择性较优的蛋白激酶抑制剂对于抗肿瘤如急性髓系白血病、结肠癌、非小细胞肺癌、肝癌等以及激酶相关的免疫性疾病如系统性红斑狼疮，T细胞功能缺失，慢性病的排斥治疗和神经疾病相关的阿尔兹海默病的治疗都具有一定的研究意义。
发明内容
本发明提供了吲哚咔唑类生物碱(Streptocarbazole)衍生物及其制备方法和应用，用大米发酵方法从放线菌Streptomyces sp.CICC 11026的发酵产物中制备得到，该化合物具有抗肿瘤活性和蛋白激酶抑制活性，可作为蛋白激酶小分子抑制剂，可用于制备蛋白激酶抑制剂类药物和抗肿瘤药物。
吲哚咔唑类生物碱(Streptocarbazole)衍生物，为式Ⅰ或/和式Ⅱ结构：
其中，式Ⅰ中R1为OH、NH2、OCH3、OCH2CH3、F、Br或Cl；
式Ⅱ中R2为OH、NH2、OCH3、OCH2CH3、F、Br或Cl。
本发明提供式Ⅰ、Ⅱ结构的具有抗肿瘤活性的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，由放线菌Streptomyces sp.CICC 11026经大米发酵产生，再通过分离纯化得到，易于操作和实施。
一种吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，包括以下步骤：
1)将放线菌为Streptomyces sp.CICC 11026接种于高氏一号液体培养基中，摇床培养，得到接种有放线菌的发酵培养基；
2)取步骤1)中接种有放线菌的发酵培养基，接种于大米发酵培养基中，静置培养，得到固体发酵产物；
3)将发酵产物分离纯化得到吲哚咔唑类生物碱衍生物。
步骤1)中，放线菌Streptomyces sp.CICC 11026采用中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)市售菌种，编号为11026，选购网址：http://www.china-cicc.org/。
所述的摇床培养的条件为：20～35℃、100rpm～300rpm摇床培养2～5天；进一步，所述的摇床培养的条件为：25～30℃、150rpm～210rpm摇床培养3～4天。
步骤2)中，所述的大米发酵培养基由大米、水和海盐组成，所述的大米、水与海盐之比为：40g：40mL～80mL：0.5g～3g。
所述的静置培养的条件为：23～33℃静置培养60～80天；进一步，所述的静置培养的条件为：25～30℃静置培养68～73天。
步骤3)中，所述的分离纯化包括：将固体发酵产物用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后常压凝胶色谱粗分离，得到混合组分；将混合组分通过高效制备液相色谱分离，高效制备液相色谱分离纯化，得到本发明式Ⅰ、Ⅱ结构的化合物。
所述的常压凝胶色谱的条件：采用的填料为羟丙基葡聚糖凝胶(LH-20)，采用的洗脱剂为体积百分数20％-100％的甲醇-水体系，体积百分数20％甲醇-水体系是指甲醇和水的体积比为20：80，体积百分数100％甲醇-水体系是指甲醇和水的体积比为100：0；
所述的高效制备液相色谱分离的条件：采用的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，采用的流动相为体积百分数40％-100％的甲醇-水溶液，体积百分数40％的甲醇-水溶液是指甲醇和水的体积比为40：60，体积百分数100％的甲醇-水溶液是指甲醇和水的体积比为100：0；
所述的高效制备液相色谱分离纯化的条件：采用的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，采用的流动相为体积百分数30％-40％的乙腈-水溶液，体积百分数30％的乙腈-水溶液是指乙腈和水的体积比为30：70，体积百分数40％的乙腈-水溶液是指乙腈和水的体积比为40：60。
对本发明式Ⅰ、Ⅱ结构采用人前列腺癌细胞株PC3细胞进行活性评价试验，显示出良好的抑制活性。蛋白激酶的抑制活性评价试验，表明具有蛋白激酶抑制活性，说明本发明式Ⅰ、Ⅱ结构的化合物具有抗肿瘤活性和蛋白激酶抑制活性，可作为蛋白激酶小分子抑制剂，可用于制备蛋白激酶抑制剂类药物和抗肿瘤药物。本发明提供的化合物可用于制备治疗与细胞增殖过度或异常相关的如血癌、乳腺癌以及结肠癌等疾病的药物，本发明提供的化合物在激酶相关的免疫性疾病如系统性红斑狼疮，T细胞功能缺失，慢性病的排斥治疗以及神经类疾病如阿尔兹海默，老年痴呆等都具有一定的研究意义。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明式Ⅰ、Ⅱ结构较为新颖，该类化合物在糖环发生异构化并且据文献报道该类化合物仅为两个，可以为针对糖环异构化的结构类型的药理活性研究提供基础，在对其进行活性实验时发现其具有良好的抗肿瘤活性，可在抗肿瘤方面有很要的应用价值，如治疗急性髓系白血病、肾癌、甲状腺癌、皮肤癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌。同样也可应用于蛋白激酶相关的免疫性疾病如系统性红斑狼疮，T细胞功能缺失，慢性病的排斥治疗以及神经类疾病如阿尔兹海默，老年痴呆等的治疗。
具体实施方式
实施例1
一、化合物的发酵
放线菌采用中国工业微生物菌种保藏管理中心出售的链霉菌Streptomycessp.CICC 11026；
1)将放线菌Streptomyces sp.CICC 11026接种于500mL锥形瓶中，每瓶含250mL高氏一号液体培养基，培养条件为28℃、180rpm的摇床中培养3天，获得可发酵培养的种子液；
2)将步骤1)所得的种子液接种至大米培养基(大米培养基，由以下组分制成：大米40g，水60mL，海盐1.5g)，接种体积为12mL，培养条件为28℃下恒温静置培养70天，得到含有本发明具有抗肿瘤活性的化合物的固体发酵产物。
二、化合物的制备及鉴定
将含有本发明具有抗肿瘤活性的化合物的固体发酵产物用乙酸乙酯浸泡萃取3次，溶剂回收浓缩，将所得乙酸乙酯部位进行常压凝胶色谱(采用的填料为羟丙基葡聚糖凝胶LH-20)粗分离，洗脱剂为体积百分数20％-100％的甲醇-水体系梯度洗脱，每1/4柱体积为一个馏分，TLC分析合并含有目标化合物的馏分。对目标组分采用中压制备色谱分离(Sepax Amethyst C-18(10μm,30×400mm)色谱柱，检测波长295nm)，流动相为体积百分数40％-100％的甲醇-水溶液以10mL/min梯度洗脱，TLC分析合并含该化合物的馏分。
所得含该化合物的馏分采用高效制备液相色谱分离(Agilent PursuitC-18(10μm,21.2×250mm)色谱柱，检测波长292nm)，采用的流动相为体积百分数30％-40％(40min)乙腈/水体系以10mL/min梯度洗脱，收集18-19min的色谱峰，回收溶剂，得到化合物A61-34B，其结构如下所示，为式Ⅰ结构。分子式根据高分辨质谱HR-ESI-MS计算为C26H21N3O5(m/z＝[M+H]+456.1558,calculated 456.1559)，核磁数据表1所示，绝对构型为(1′R,3′S,4′S,5′S)命名为Streptocarbazoles D，编号为A61-34B,结构如下：
所得含该化合物的馏分采用高效制备液相色谱分离(Agilent Pursuit C-18(10μm,21.2×250mm)色谱柱，检测波长292nm)，采用的流动相为体积百分数30％-40％(40min)乙腈/水体系以10mL/min梯度洗脱，收集19-20min的色谱峰，回收溶剂，得到化合物A61-34C，其结构如下所示，为式Ⅱ结构。分子式根据高分辨质谱HR-ESI-MS计算为C26H21N3O5(m/z＝[M+H]+456.1558,calculated 456.1559)，核磁数据见表1，绝对构型为(1′R,3′S,4′R,5′R)命名为Streptocarbazoles E，编号为A61-34C,结构如下：
表1 1H 600MHz,13C 125MHz
三、抗肿瘤活性实验
人前列腺癌细胞株PC3细胞测定IC50实验。采用SBR细胞实验，取对数生长期的细胞，1×105个/mL铺96孔板，CO2培养箱中培养24小时，取出培养板后于每孔中加入不同浓度的待测样品，加药完成后，培养板于微孔板振荡器上振荡混匀，置于CO2培养箱中继续培养48小时。取出培养板，在培养液表面每孔轻轻加入50μl预冷的50％的三氯醋酸(TCA)固定，静置5分钟后，再将培养板移至4℃放置1小时。倒掉固定液，每孔用去离子水洗5遍，甩干，空气干燥。每孔加入100μl SRB液，在室温25℃放置10分钟，去上清液，用体积百分数1％醋酸洗涤5次，空气干燥，结合的SRB用150μl 10mmol/L非缓冲Tris碱液(pH10.5)振荡溶解。置于酶标仪中测定各孔光吸收，测定波长为540nm。根据各孔OD值计算药物对细胞增殖抑制率，根据各浓度抑制率，采用Logit法计算半数抑制浓度IC50，结果如表2所示。
表2
化合物 IC50(μM)
A61-34B 39
A61-34C 5.6
四、蛋白激酶的抑制活性
采用KinEASETM-TK assay kit(Cisbio)，以星孢菌素(STU)阳性药测定所得不同浓度化合物对蛋白激酶(PKC-α,ROCK2)的抑制活性。HRFT值通过测定蛋白激酶在经340nm紫外光激发后665nm和620nm的荧光比值获得，即HTRF值T＝[F665nm/F620nm]×104。蛋白激酶抑制％＝((T待测)-(Tmin))/((Tmax)-(Tmin))×100，Tmax为反应液的HTRF值，Tmin为没有蛋白激酶的空白反应液HTRF值。最终根据各浓度抑制率计算半数抑制浓度IC50如表3所示：
表3
从表2可以看出，采用人前列腺癌细胞株PC3细胞进行活性评价试验，显示出良好的抑制活性。从表3可以看出，对本发明式Ⅰ、Ⅱ结构的具有显示出良好的蛋白激酶抑制活性。说明本发明式Ⅰ、Ⅱ结构的化合物在抗肿瘤、抗神经性疾病如老年痴呆以及免疫性疾病如系统性红斑狼疮，T细胞功能缺失治疗具有巨大的应用潜力，可应用于制备蛋白激酶相关的小分子抑制剂类药物和抗肿瘤药物。
五、其余单体化合物结构确证
其余单体化合物结构如表4所示，经过分离纯化最后得到表4中的各种单体化合物。
表4
化合物编号 式Ⅰ中R1 化合物编号 式Ⅱ中R2
A61-35A NH2 A61-35G NH2
A61-35B OCH3 A61-35H OCH3
A61-35C OCH2CH3 A61-35I OCH2CH3
A61-35D F A61-35J F
A61-35E Br A61-35K Br
A61-35F Cl A61-35L Cl
A61-35A:HR-ESI-MS计算为C26H23N4O4(m/z＝[M+H]+455.1714,calculated455.1719)1H 600MHz in CD3OD,7.51(d,8.4,H-1),7.01(dd,8.4,2.2,H-2),8.71(d,2.2,H-4),5.00(s),8.03(d,7.7,H-8),7.31(m,H-9),7.34(m,H-10),7.62(d,7.5,H-11),6.5(d,6.1,H-1′),3.09(s,H-2′),3.08(d,6.1,H-3′),3.9(d,9.9,H-4′),3.52(dd,9.9,6.2,H-5′),1.13(d,6.2)13C 125MHz(inCD3OD),110.3(C-1),114.3(C-2),142.4(C-3),111.2(C-4),125.5(C-4a),114.8(C-4b),119.9(C-4c),175.3(C-5),47.1(C-7),133.9(C-7a),117.3(C-7b),126.7(C-7c),122.2(C-8),121.7(C-9),123.9(C-10),113.2(C-11),141.7(C-11a),131.2(C-12a),128.4(C-12b),138.9(C-13a),78.8(C-1′),44.2(C-2′),89.7(C-3′),81.5(C-4′),69.1(C-5′),18.3(-CH3)。
A61-35B:HR-ESI-MS计算为C27H24N3O5(m/z＝[M+H]+470.1713,calculated470.1716)1H 600MHz in CD3OD,7.56(d,8.1,H-1),7.14(dd,8.1,2.7,H-2),8.70(d,2.7,H-4),5.02(s),8.03(d,7.4,H-8),7.33(m,H-9),7.34(m,H-10),7.68(d,7.7,H-11),6.46(d,6.0,H-1′),3.06(s,H-2′),3.04(d,6.1,H-3′),3.91(d,9.9,H-4′),3.53(dd,9.9,6.5,H-5′),1.12(d,6.5)13C 125MHz(inCD3OD),110.4(C-1),115.3(C-2),154.8(C-3),112.7(C-4),125.8(C-4a),114.4C-4b),119.9(C-4c),175.4(C-5),47.1(C-7),133.8(C-7a),117.2(C-7b),126.4(C-7c),121.8(C-8),122.5(C-9),126.4(C-10),113.2(C-11),141.6(C-11a),131.4(C-12a),128.4(C-12b),138.8(C-13a),56.1(-OCH3),78.9(C-1′),44.3(C-2′),89.6(C-3′),81.7(C-4′),69.3(C-5′),18.1(-CH3)。
A61-35C:HR-ESI-MS计算为C28H26N3O5(m/z＝[M+H]+484.1871,calculated484.1872)1H 600MHz in CD3OD,7.51(d,8.4,H-1),7.11(dd,8.4,2.9,H-2),8.72(d,2.9,H-4),5.00(s),8.06(d,7.7,H-8),7.34(m,H-9),7.37(m,H-10),7.66(d,7.5,H-11)，6.44(d,6.0,H-1′),3.04(s,H-2′),3.03(d,6.1,H-3′),3.95(d,9.9,H-4′),3.59(dd,9.9,6.5,H-5′),1.17(d,6.5)13C 125MHz(inCD3OD),110.6(C-1),116.3(C-2),154.4(C-3),112.2(C-4),125.3(C-4a),114.5(C-4b),119.5(C-4c),175.4(C-5),47.3(C-7),133.3(C-7a),117.7(C-7b),126.9(C-7c),121.3(C-8),122.4(C-9),126.9(C-10),113.7(C-11),141.2(C-11a),131.5(C-12a),128.8(C-12b),138.4(C-13a).78.8(C-1′),44.8(C-2′),89.8(C-3′),81.9(C-4′),69.6(C-5′),18.6(-CH3)，64.1(-OCH2CH3),19.8(-OCH2CH3)。
A61-35D:HR-ESI-MS计算为C26H21FN3O4(m/z＝[M+H]+458.1513,calculated458.1516)1H 600MHz in CD3OD,7.54(d,8.7,H-1),7.34(dd,8.7,2.9,H-2),8.92(d,2.9,H-4),5.01(s),8.04(d,7.7,H-8),7.37(m,H-9),7.38(m,H-10),7.69(d,7.5,H-11),6.41(d,6.0,H-1′),3.01(s,H-2′),3.04(d,6.1,H-3′),3.91(d,9.3,H-4′),3.51(dd,9.3,6.6,H-5′),1.17(d,6.6)13C 125MHz(inCD3OD),110.7(C-1),116.7(C-2),135.4(C-3),112.5(C-4),125.5(C-4a),114.4(C-4b),119.4(C-4c),175.3(C-5),47.3(C-7),133.8(C-7a),117.8(C-7b),126.7(C-7c),121.7(C-8),122.1(C-9),126.1(C-10),113.2(C-11),141.2(C-11a),131.3(C-12a),128.3(C-12b),138.6(C-13a),78.1(C-1′),44.1(C-2′),89.3(C-3′),81.3(C-4′),69.5(C-5′),18.2(-CH3)。
A61-35E:HR-ESI-MS计算为C27H24BrN3O5(m/z＝[M+H]+518.0714,calculated518.0715)1H 600MHz in CD3OD,7.51(d,8.5,H-1),7.32(dd,8.5,2.5,H-2),9.39(d,2.5,H-4),5.07(s),8.07(d,7.4,H-8),7.38(m,H-9),7.43(m,H-10),7.72(d,7.6,H-11),6.45(d,6.0,H-1′),3.04(s,H-2′),3.08(d,6.1,H-3′),3.96(d,9.6,H-4′),3.52(dd,9.6,6.6,H-5′)13C 125MHz(in CD3OD),111.1(C-1),116.4(C-2),126.4(C-3),113.4(C-4),125.1(C-4a),114.7(C-4b),119.1(C-4c),175.4(C-5),47.6(C-7),133.5(C-7a),117.6(C-7b),126.8(C-7c),121.9(C-8),122.3(C-9),126.3(C-10),113.4(C-11),141.5(C-11a),131.5(C-12a),128.1(C-12b),138.1(C-13a),78.2(C-1′),44.2(C-2′),89.5(C-3′),81.2(C-4′),69.2(C-5′),18.6(C-CH3)。
A61-35F:HR-ESI-MS计算为C27H24ClN3O5(m/z＝[M+H]+474.1220,calculated474.1221)1H 600MHz in CD3OD,7.51(d,8.2,H-1),7.34(dd,8.2,2.7,H-2),9.29(d,2.7,H-4),5.02(s),8.01(d,7.4,H-8),7.33(m,H-9),7.44(m,H-10),7.74(d,7.6,H-11),6.43(d,6.1,H-1′),3.03(s,H-2′),3.09(d,6.1,H-3′),3.91(d,9.6,H-4′),3.55(dd,9.6,6.6,H-5′)13C 125MHz(in CD3OD),111.2(C-1),116.1(C-2),126.1(C-3),113.8(C-4),125.3(C-4a),114.9(C-4b),119.4(C-4c),175.8(C-5),47.8(C-7),133.4(C-7a),117.4(C-7b),126.9(C-7c),121.7(C-8),122.8(C-9),126.8(C-10),113.7(C-11),140.5(C-11a),131.5(C-12a),128.5(C-12b),138.4(C-13a),78.5(C-1′),44.8(C-2′),89.3(C-3′),81.1(C-4′),69.7(C-5′),18.3(C-CH3)。
A61-35G:HR-ESI-MS计算为C26H23N4O4(m/z＝[M+H]+455.1714,calculated455.1719)1H 600MHz in CD3OD,7.50(d,8.4,H-1),7.04(dd,8.4,2.6,H-2),8.74(d,2.6,H-4),5.04(s),8.08(d,7.7,H-8),7.32(m,H-9),7.34(m,H-10),7.64(d,7.4,H-11),6.6(d,6.4,H-1′),3.28(m,H-2′),2.8(d,15.4,H-3′),4.03(s,H-4′),3.72(q,6.2,H-5′),1.13(d,6.2)13C 125MHz(in CD3OD),110.2(C-1),114.2(C-2),142.6(C-3),111.6(C-4),125.8(C-4a),114.7(C-4b),119.8(C-4c),175.1(C-5),47.5(C-7),133.7(C-7a),117.5(C-7b),126.5(C-7c),122.6(C-8),121.2(C-9),123.1(C-10),113.8(C-11),141.6(C-11a),131.5(C-12a),128.8(C-12b),137.9(C-13a),78.6(C-1′),37.9(C-2′),89.7(C-3′),73.4(C-4′),68.7(C-5′),17.7(-CH3)。
A61-35H:HR-ESI-MS计算为C27H24N3O5(m/z＝[M+H]+470.1713,calculated470.1716)1H 600MHz in CD3OD,7.56(d,8.1,H-1),7.14(dd,8.1,2.7,H-2),8.70(d,2.7,H-4),5.02(s),8.03(d,7.4,H-8),7.33(m,H-9),7.34(m,H-10),7.68(d,7.7,H-11),6.62(d,6.4,H-1′),3.22(m,H-2′),2.81(d,15.4,H-3′),4.01(s,H-4′),3.70(q,6.2,H-5′),1.16(d,6.2)13C 125MHz(in CD3OD),110.4(C-1),115.3(C-2),154.8(C-3),112.7(C-4),125.8(C-4a),114.4C-4b),119.9(C-4c),175.4(C-5),47.1(C-7),133.8(C-7a),117.2(C-7b),126.4(C-7c),121.8(C-8),122.5(C-9),126.4(C-10),113.2(C-11),141.6(C-11a),131.4(C-12a),128.4(C-12b),138.8(C-13a),56.2(-OCH3),78.5(C-1′),37.8(C-2′),89.7(C-3′),73.6(C-4′),68.9(C-5′),17.9(-CH3)。
A61-35I:HR-ESI-MS计算为C28H26N3O5(m/z＝[M+H]+484.1871,calculated484.1872)1H 600MHz in CD3OD,7.55(d,8.1,H-1),7.15(dd,8.1,2.9,H-2),8.72(d,2.9,H-4),5.06(s),8.04(d,7.7,H-8),7.36(m,H-9),7.34(m,H-10),7.66(d,7.5,H-11)，6.64(d,6.4,H-1′),3.26(m,H-2′),2.84(d,15.1,H-3′),4.08(s,H-4′),3.71(q,6.1,H-5′),1.18(d,6.1)13C 125MHz(in CD3OD),110.4(C-1),116.6(C-2),154.4(C-3),112.6(C-4),125.4(C-4a),114.6(C-4b),119.6(C-4c),175.4(C-5),47.6(C-7),133.4(C-7a),117.6(C-7b),126.6(C-7c),121.6(C-8),122.4(C-9),126.4(C-10),113.6(C-11),141.4(C-11a),131.6(C-12a),128.4(C-12b),138.6(C-13a).78.7(C-1′),37.6(C-2′),88.7(C-3′),73.4(C-4′),68.9(C-5′),17.5(-CH3),63.7(-OCH2CH3),19.2(-OCH2CH3)。
A61-35J:HR-ESI-MS计算为C26H21FN3O4(m/z＝[M+H]+458.1513,calculated458.1516)1H 600MHz in CD3OD,7.51(d,8.7,H-1),7.32(dd,8.7,2.4,H-2),8.90(d,2.4,H-4),5.04(s),8.04(d,7.7,H-8),7.32(m,H-9),7.39(m,H-10),7.62(d,7.2,H-11),6.61(d,6.4,H-1′),3.23(m,H-2′),2.86(d,15.1,H-3′),4.04(s,H-4′),3.78(q,6.6,H-5′),1.17(d,6.6)13C 125MHz(in CD3OD),110.5(C-1),116.7(C-2),135.7(C-3),112.7(C-4),125.7(C-4a),114.5(C-4b),119.7(C-4c),175.6(C-5),47.5(C-7),133.7(C-7a),117.5(C-7b),126.5(C-7c),121.5(C-8),122.6(C-9),126.7(C-10),113.5(C-11),141.5(C-11a),131.6(C-12a),128.5(C-12b),137.6(C-13a),78.6(C-1′),37.7(C-2′),88.5(C-3′),73.7(C-4′),68.7(C-5′),17.6(-CH3)。
A61-35K:HR-ESI-MS计算为C27H24BrN3O5(m/z＝[M+H]+518.0714,calculated518.0715)1H 600MHz in CD3OD,7.55(d,8.5,H-1),7.36(dd,8.5,2.5,H-2),9.39(d,2.5,H-4),5.05(s),8.05(d,7.4,H-8),7.37(m,H-9),7.42(m,H-10),7.71(d,7.5,H-11),6.60(d,6.4,H-1′),3.21(m,H-2′),2.83(d,15.5,H-3′),4.06(s,H-4′),3.78(q,6.4,H-5′),1.17(d,6.4),13C 125MHz(in CD3OD),111.4(C-1),116.7(C-2),126.8(C-3),113.5(C-4),125.3(C-4a),114.8(C-4b),119.3(C-4c),175.6(C-5),47.7(C-7),133.4(C-7a),117.4(C-7b),126.9(C-7c),121.7(C-8),122.5(C-9),125.9(C-10),113.6(C-11),140.9(C-11a),131.4(C-12a),127.8(C-12b),138.4(C-13a),78.5(C-1′),37.9(C-2′),88.4(C-3′),73.9(C-4′),68.5(C-5′),17.9(-CH3)。
A61-35L:HR-ESI-MS计算为C27H24ClN3O5(m/z＝[M+H]+474.1220,calculated474.1221)1H 600MHz in CD3OD,7.49(d,8.2,H-1),7.37(dd,8.2,2.7,H-2),9.28(d,2.7,H-4),5.08(s),8.03(d,7.3,H-8),7.31(m,H-9),7.43(m,H-10),7.70(d,7.6,H-11),6.67(d,6.5,H-1′),3.23(m,H-2′),2.83(d,15.3,H-3′),4.09(s,H-4′),3.70(q,6.3,H-5′),1.14(d,6.3)13C 125MHz(in CD3OD),111.0(C-1),116.3(C-2),125.8(C-3),113.5(C-4),124.9(C-4a),114.8(C-4b),119.7(C-4c),175.4(C-5),47.7(C-7),133.7(C-7a),116.9(C-7b),126.7(C-7c),121.6(C-8),122.9(C-9),126.6(C-10),114.8(C-11),141.1(C-11a),131.1(C-12a),128.1(C-12b),137.9(C-13a),78.1(C-1′),37.4(C-2′),87.9(C-3′),74.2(C-4′),68.3(C-5′),17.6(-CH3)。
表4中的各种单体化合物，采用人前列腺癌细胞株PC3细胞进行活性评价试验以及蛋白激酶的抑制活性评价试验，说明本发明表4中的各种单体化合物具有抗肿瘤活性和蛋白激酶抑制活性，可用于制备蛋白激酶抑制剂类药物和抗肿瘤药物。显示出良好的抑制活性。

Claims (10)

1.吲哚咔唑类生物碱衍生物，其特征在于，为式Ⅰ或/和式Ⅱ结构：
其中，式Ⅰ中R1为OH、NH2、OCH3、OCH2CH3、F、Br或Cl；
式Ⅱ中R2为OH、NH2、OCH3、OCH2CH3、F、Br或Cl。
2.根据权利要求1所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将放线菌为Streptomyces sp.CICC 11026接种于高氏一号液体培养基中，摇床培养，得到接种有放线菌的发酵培养基；
2)取步骤1)中接种有放线菌的发酵培养基，接种于大米发酵培养基中，静置培养，得到固体发酵产物；
3)将发酵产物分离纯化得到吲哚咔唑类生物碱衍生物。
3.根据权利要求2所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的摇床培养的条件为：20～35℃、100rpm～300rpm摇床培养2～5天。
4.根据权利要求3所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的摇床培养的条件为：25～30℃、150rpm～210rpm摇床培养3～4天。
5.根据权利要求2所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的大米发酵培养基由大米、水和海盐组成，所述的大米、水与海盐之比为：40g：40mL～80mL：0.5g～3g。
6.根据权利要求2所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的静置培养的条件为：23～33℃静置培养60～80天。
7.根据权利要求6所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的静置培养的条件为：25～30℃静置培养68～73天。
8.根据权利要求1所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述的分离纯化包括：将固体发酵产物用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后常压凝胶色谱粗分离，得到混合组分；将混合组分通过高效制备液相色谱分离，高效制备液相色谱分离纯化，得到本发明式Ⅰ、Ⅱ结构的化合物。
9.根据权利要求8所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物的制备方法，其特征在于，所述的常压凝胶色谱的条件：采用的填料为羟丙基葡聚糖凝胶，采用的洗脱剂为体积百分数20％-100％的甲醇-水体系；
所述的高效制备液相色谱分离的条件：采用的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，采用的流动相为体积百分数40％-100％的甲醇-水溶液；
所述的高效制备液相色谱分离纯化的条件：采用的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，采用的流动相为体积百分数30％-40％的乙腈-水溶液。
10.根据权利要求1所述的吲哚咔唑类生物碱衍生物在制备蛋白激酶抑制剂类药物和抗肿瘤药物中的应用。
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